JP2013106721A - 組織再生用部材、その形成方法、及びインク - Google Patents
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Abstract
【解決手段】サイトカインとリン酸カルシウムとを含有する生分解性樹脂膜を含む組織再生用部材であって、前記サイトカインと前記リン酸カルシウムとの比率が厚み方向で連続的に増加又は減少する傾斜構造を有する、組織再生用部材。
【選択図】 図1
Description
この遮蔽膜には、非吸収性遮断膜と吸収性遮断膜の2種類があるが、組織再生後の除去が不要な吸収性遮断膜の需要が高まっている。吸収性遮断膜には、一般的に、生分解性樹脂が用いられている。
また、特許文献2には、生体吸収性材料で補強されたゼラチンハイドロゲル層(遮断膜)と、薬物徐放機能を有するゼラチンハイドロゲル層(組織再生膜)との2層構造を有する歯科治療膜が記載されている。
特許文献2では、この問題を解決するために、遮断膜のゼラチンハイドロゲル層を生体吸収性材料で補強し、更に高架橋のゼラチンハイドロゲル層とすることで力学的強度を維持し、その内層として組織再生膜として設ける薬物放出機能を有する低架橋のゼラチンハイドロゲル層を設けている。特許文献2では、ゼラチンハイドロゲル層の架橋度の違いにより、遮断膜の生分解速度を6ヶ月程度とし、組織再生膜の生分解速度を2ヶ月程度とている。
しかしながら、特許文献2の2層構造の場合、その生分解性も段階的になり、2ヶ月後には遮断膜のみが残存し、組織再生が不十分な場合、目的とする医療が達成されない問題が発生する。また高架橋のゼラチンハイドロゲル膜と低架橋のゼラチンハイドロゲル膜では物性が大きく異なり、膜形成時に歪み等が残存し、強度的な問題が依然として残る。
サイトカインとリン酸カルシウムとを含有する生分解性樹脂膜を含む組織再生用部材であって、前記サイトカインと前記リン酸カルシウムとの比率が厚み方向で連続的に増加又は減少する傾斜構造を有する、組織再生用部材。
[2]
前記傾斜構造において、前記生分解性樹脂の架橋度が厚み方向で連続的に変化しており、前記サイトカインに対する前記リン酸カルシウムの比率が高い側で前記生分解性樹脂の架橋度が高く、前記サイトカインに対する前記リン酸カルシウムの比率が低い側で前記生分解性樹脂の架橋度が低い、[1]に記載の組織再生用部材。
[3]
前記リン酸カルシウムが、β−TCP、α−TCP、リン酸四カルシウム、及びハイドロキシアパタイトの少なくとも1種である、[1]又は[2]に記載の組織再生用部材。
[4]
前記サイトカインが、bFGF、VEGF、TGF−β、G−CSF、EPO、BMP−2、TGF−β1、血小板内細胞増殖因子、及びアンジオポエチンの少なくとも1種である、[1]〜[3]のいずれか一項に記載の組織再生用部材。
[5]
前記リン酸カルシウムが、平均粒径5nm以上10μm以下の粒子である、[1]〜[4]のいずれか一項に記載の組織再生用部材。
[6]
[1]〜[5]のいずれか一項に記載の組織再生用部材の形成方法であって、
生分解性樹脂とサイトカインとを含有する第1のインクと、生分解性樹脂とリン酸カルシウムとを含有する第2のインクをインクジェット法により基材上に吐出して、前記サイトカインと前記リン酸カルシウムとの比率が厚み方向で連続的に増加又は減少する傾斜構造を有する生分解性樹脂膜を前記基材上に形成する、組織再生用部材の形成方法。
[7]
前記インクジェット法が、少なくとも第1のインクジェットヘッドと第2のインクジェットヘッドを用いるものであり、
前記第1のインクを第1のインクジェットヘッドに供給する工程と、
前記第2のインクを第2のインクジェットヘッドに供給する工程と、
前記第1のインクジェットヘッドから吐出される第1のインクの量と前記第2のインクジェットヘッドから吐出される第2のインクの量との比率を決定する制御工程と、
前記決定された比率に従って、前記第1のインクジェットヘッド及び前記第2のインクジェットヘッドの少なくとも一方から前記第1のインク又は前記第2のインクを吐出させて1つの層を形成する形成工程と、
前記形成工程を繰り返して前記基材上に前記層を複数層積層して前記傾斜構造を有する生分解性樹脂膜を得る積層工程と、
を有し、
前記制御工程において、前記複数層の厚み方向において前記基材に近い層から遠い層に向かって又は前記基材に遠い層から近い層に向かって、前記第1のインクの比率が大きくなり、かつ前記第2のインクの比率が小さくなるように前記比率を決定する、[6]に記載の組織再生用部材の形成方法。
[8]
前記形成工程において、前記第1及び第2のインクジェットヘッドから吐出する液滴のインク量が0.3〜100pLである、[7]に記載の組織再生用部材の形成方法。
[9]
前記形成工程において、前記第1及び第2のインクジェットヘッドから吐出する液滴の液滴径が1〜300μmである、[7]又は[8]に記載の組織再生用部材の形成方法。
[10]
前記インクジェット法が、複数のインクジェットヘッドを用いるものであり、
前記第1の材料を含む第1のインクと前記第2の材料を含む第2のインクとが混合された混合インクであって、それぞれ異なる比率で混合された複数の混合インクを前記複数のインクジェットヘッドそれぞれに供給する工程と、
前記複数のインクジェットヘッドから1つのインクジェットヘッドを順に選択する選択工程であって、前記第1又は前記第2のインクの比率の高い混合インクが供給されるインクジェットヘッドから該比率の低い混合インクが供給されるインクジェットヘッドにかけて順に選択する選択工程と、
前記選択されたインクジェットヘッドから混合インクを吐出させて1つの層を形成する形成工程と、
前記形成工程を繰り返して前記基材上に前記層を複数層積層して前記傾斜構造を有する生分解性樹脂膜を得る積層工程により形成される、[6]に記載の組織再生用部材の形成方法。
[11]
前記形成工程において、前記第1及び第2のインクジェットヘッドから吐出する液滴のインク量が0.5〜150pLである、[10]に記載の組織再生用部材の形成方法。
[12]
前記形成工程において、前記第1及び第2のインクジェットヘッドから吐出する液滴の液滴径が2〜450μmである、[10]又は[11]に記載の組織再生用部材の形成方法。
[13]
前記第1及び第2のインクが、前記生分解性樹脂と前記サイトカイン又は前記リン酸カルシウムと含有するインクであり、該インクの粘度が2〜50mPaで、表面張力が15〜40mN/mである、[6]〜[12]のいずれか一項に記載の組織再生用部材の形成方法。
[14]
生分解性樹脂と、サイトカイン又はリン酸カルシウムとを含有するインクであり、該インクの粘度が2〜50mPaで、表面張力が15〜40mN/mである、インク。
生分解性樹脂膜を力学的に補強するリン酸カルシウムと、生分解性樹脂の生分解に応じて徐放されるサイトカインとの比率が、厚み方向で連続的に増加又は傾斜するように変化しているため、膜の力学的強度を維持しつつ最適な組織再生能の発揮が可能であり、高い成功確率での再生治療が実現できる。
本発明の組織再生用部材は、骨や歯などの硬組織再生用部材として好適に用いることができる。
図1に、本発明に係る傾斜構造を有する生分解性樹脂膜からなる組織再生部材の断面を模式的に示す。
本発明に係る組織再生部材1は、前記サイトカインと前記リン酸カルシウムとの比率が厚み方向(図1中、A側からB側に向かう矢印の方向)で連続的に変化する生分解性樹脂膜2を有する。ここで、「厚み方向」とは生分解性樹脂膜2の「膜厚方向」を意味する。また、「サイトカインとリン酸カルシウムとの比率が連続的に変化する」とは、厚み方向に生分解性樹脂膜をある厚み(例えば、1〜5μm)の領域毎に区切り、各領域でのサイトカインとリン酸カルシウムとの比率をみたときに、隣接する領域間の該比率の差(隣接する領域での各比率をR1、R2としたときに、|R2−R1|)が30%以下、好ましくは10%以下、より好ましくは7%以下、更に好ましくは5%以下であることを意味する。なお、ある2つの隣接する領域間の生リン酸カルシウムとサイトカインとの比率の差が0となる領域があってもよい。
生分解性樹脂膜2において、厚み方向の一方の側の面の近傍のサイトカインとリン酸カルシウムとの比率(例えば、図1のAから厚み1〜20μmまでの領域におけるサイトカインとリン酸カルシウムとの比率)は、サイトカイン:リン酸カルシウム(質量比)で1:500〜1:10000であることが好ましく、1:750〜1:7500であることがより好ましく、1:1000〜1:5000であることが更に好ましい。また、反対側の面の近傍のサイトカインとリン酸カルシウムとの比率(例えば、図1のBから1〜20μmまでの領域におけるサイトカインとリン酸カルシウムとの比率)は、サイトカイン:リン酸カルシウム(質量比)で1:25000〜1:250000であることが好ましく、1:50000〜1:200000であることがより好ましく、1:100000〜1:150000であることが更に好ましい。
各領域におけるサイトカインとリン酸カルシウムとの比率は、例えば、高感度質量分析装置とXPSを併用することにより求めることができる。
図2に示す組織再生部材1aは、生分解性樹脂膜2を有し、該生分解性樹脂膜2はサイトカインとリン酸カルシウムとの比率の異なる複数の層2−1、2−2、2−3、2−4、2−5を有する。層2−1、2−2、2−3、2−4、2−5は、厚み方向の一方の側Aの層2−5から反対側Bの層2−1に向かって(即ち、図2中の矢印の方向に)、サイトカインとリン酸カルシウムとの比率(サイトカインに対するリン酸カルシウムの比率)が連続的に大きくなっている。
良好な膜の力学的強度及び組織再生能を得る上で、層2−1、2−2、2−3、2−4、2−5のうち、隣り合う2層のサイトカインとリン酸カルシウムとの比率の差(隣接する領域での各比率をR1、R2としたときに、|R2−R1|)が30%以下、好ましくは10%以下、より好ましくは7%以下、更に好ましくは5%以下である。また、A側の層2−5のサイトカインとリン酸カルシウムとの比率は1:500〜1:10000であることが好ましく、1:750〜1:7500であることがより好ましく、1:1000〜1:5000であることが更に好ましい。B側の層2−1のサイトカインとリン酸カルシウムとの比率は1:25000〜1:250000であることが好ましく、1:50000〜1:200000であることがより好ましく、1:100000〜1:150000であることが更に好ましい。
図2では、層2−1、2−2、2−3、2−4、2−5の5層を積層して生分解性樹脂膜2を形成しているが、積層する層の数は特に限定されない。好ましくは3〜10層であり、より好ましくは3〜7層である。また、各層の厚みは10〜30μmが好ましく、15〜25μmがより好ましい。各層の厚みは実質的に等しい(厚みの誤差が±5μmの範囲)ことが好ましい。
なお、層間の界面が明確でない場合には、生分解性樹脂膜2の厚み方向において厚み1〜10μmで区切った領域を「層」とみなしてもよい。
各領域におけるサイトカインとリン酸カルシウムとの比率は、例えば、高感度質量分析装置とXPSを併用することにより求めることができる。
ここで、生分解性樹脂は、一般に、架橋度が低い方が生分解速度が速い。そのため、サイトカインの徐放速度を制御するために、本発明の生分解性樹脂膜においては厚み方向において生分解性樹脂の架橋度の変化させることが好ましい。
即ち、本発明の生分解性樹脂膜においては、生分解性樹脂の架橋度が厚み方向で連続的に増加又は減少することが好ましい。ここで、「生分解性樹脂の架橋度が厚み方向で連続的に増加又は減少する」とは、厚み方向に生分解性樹脂膜をある厚み(例えば、1〜5μm)の領域毎に区切り、各領域での生分解性樹脂の架橋度をみたときに、隣接する領域間の生分解性樹脂の架橋度の差が30%以下、好ましくは10%以下、より好ましくは7%以下、更に好ましくは5%以下であり、かつ厚み方向に沿って隣接する領域間の生分解性樹脂の架橋度が単調に増加又は減少していることを意味する。隣接する領域間の生分解性樹脂の架橋度の差が10%より大きくなると、架橋度の変化が段階的となってしまい、隣接する領域間での歪みが大きくなり膜全体で高い力学的強度が得ることができない場合や、適切な生分解性樹脂の生分解速度が得られないことがある。なお、ある2つの隣接する領域間の生分解性樹脂の架橋度の差が0となる領域があってもよいが、1%以上であることが好ましい。
各領域における生分解性樹脂の架橋度は、乾燥膜の膨潤度もしくは給水量の測定から換算し見積もることができる。
この場合、生分解性樹脂膜2において、厚み方向の一方の側の面の近傍の生分解性樹脂の架橋度(例えば、図1のAから厚み1〜50μmまでの領域における生分解性樹脂の架橋度)は、0〜10%であることが好ましく、0〜5%であることがより好ましく、実質的に0(0〜1%)であることが更に好ましい。また、反対側の面の近傍の生分解性樹脂の架橋度(例えば、図1のBから1〜50μmまでの領域における生分解性樹脂の架橋度)は、50〜100%であることが好ましく、70〜100%であることがより好ましく、実質的に100%(99〜100%)であることが更に好ましい。
例えば、図2に示す組織再生部材1aにおいて、層2−1、2−2、2−3、2−4、2−5が、厚み方向の一方の側Aの層2−5から反対側Bの層3−1に向かって(即ち、図2中の矢印の方向に)、生分解性樹脂の架橋度が0〜100%の範囲内で連続的に大きくなっている構成が挙げられる。この場合、良好な膜の力学的強度を維持し、適切な生分解速度を得て所望の組織再生能を得る上で、層2−1、2−2、2−3、2−4、2−5のうち、隣り合う2層の生分解性樹脂の架橋度の差は30%以下であり、好ましくは10%以下であり、より好ましくは7%以下であり、更に好ましくは5%以下である。また、A側の層2−5の生分解性樹脂の架橋度は0〜10%であることが好ましく、0〜5%であることがより好ましく、0〜1%であることが更に好ましい。B側の層2−1の生分解性樹脂の架橋度は50〜100%であることが好ましく、70〜100%であることがより好ましく、90〜100%であることが更に好ましい。
各層における生分解性樹脂の架橋度は、乾燥膜の膨潤度もしくは給水量の測定から換算し見積もることができる。
本発明に用いる生分解性樹脂は、特に限定されるものではなく、例えばL−乳酸、D−乳酸、DL−乳酸、グリコール酸、ε−カプロラクトン、N−メチルピロリドン、炭酸トリメチレン、パラジオキサノン、1,5−ジオキセパン−2−オン、水酸化酪酸、水酸化吉草酸、酸無水物(セバシン酸無水物、マレイン酸無水物、ジオレイン酸無水物等)、グリシン、アラニン、フェニルアラニン、チロシン、アスパラギン、グルタミン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リシン、ヒドロキシリシン、アルギニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、トレオニン、システイン、メチオニン、トリプトファン、ヒスチジン、プロリン、ヒドロキシプロリン等のアミノ酸(L体、D体、L体D体混合物)などのホモポリマー、コポリマー又はこれらポリマーの混合物、ポリエステル、ポリカーボネート、ポリ(α−シアノアクリレート)等のポリアクリル酸類、ポリフォスフェート、アミノ酸高分子化合物、ポリ酸無水物、タンパク質(ゼラチン等)、ポリグリコシド(キチン、キトサン、デンプン等)、多糖類(アルギン酸、カラギーナン等)などが挙げられる。生体分解性樹脂の質量平均分子量は2000〜2000000が好ましく、20000〜500000がより好ましい。
生分解性樹脂としては、中でも、汎用性、安全性の観点から、DL−乳酸、グリコール酸、タンパク質、多糖類(アルギン酸、カラギーナン等)が好ましく、多糖類、タンパク質がより好ましく、ゼラチンが更に好ましい。
また、ゼラチンを修飾したゼラチン誘導体を用いることもできる。ゼラチン誘導体としては、ゼラチンニアジニル基、チオール基、アミノ基、カルボキシル基、硫酸基、リン酸基などの化学官能性基、またはアルキル基、アシル基、フェニル基、ベンジル基などの疎水性の残基、およびこれらの残基をもつ化合物などを化学的に導入したもの、あるいは、乳酸、グリコール酸などからなる生体吸収性のオリゴマー、高分子、共重合体など、またはポリエチレングリコール、そのプロピレングリコールとの共重合体などの水溶性のオリゴマー、高分子などを化学的に導入したものなどが挙げられる。
本発明に用いるゼラチンとして好ましいものは、コラーゲンのアルカリ処理によって得られたその等電点が酸性領域にある酸性ゼラチン、又はコラーゲンの酸処理によって得られたその等電点がアルカリ性領域にある塩基性ゼラチンである。酸性ゼラチン及び塩基性ゼラチンとしては、新田ゼラチン(株)製や(株)ニッピ製のものが挙げられる。
本発明に用いるリン酸カルシウムとしては、生分解性樹脂膜を力学的に補強でき、生体吸収性材料であれば特に制限されず、β−TCP、α−TCP、リン酸四カルシウム、ハイドロキシアパタイト等が挙げられる。中でも、骨への再生誘導適性及び生態適合性が良好の理由から、β−TCP、ハイドロキシアパタイト、が好ましく、β−TCPがより好ましい。
本発明に用いるサイトカインは、生分解性樹脂の生分解に伴い徐放され、血管新生能を持つものが好ましい。血管新生により、栄養や酸素の補給が順調に行われ、よって短期間での骨再生、歯周組織の再生が可能となる。これらは天然から得られる物質でも合成により製造される物質でもよい。例えば、bFGF、VEGF、TGF−β、G−CSF、EPO、BMP−2、TGF−β1、血小板内細胞増殖因子、アンジオポエチン、これらの誘導体、及びこれらの混合物などが挙げられる。中でも、硬組織(骨、歯等)の再生誘導適性の理由から、bFGF、VEGF、BMP−2であり、より好ましくはbFGF、VEGFであり、更に好ましくはbFGFである。
本発明に係る生分解性樹脂膜の膜厚は、20μm以上が好ましく、20〜500μmがより好ましく、50〜300μmが更に好ましい。この範囲であれば、再生誘導に必要な空間確保及びハンドリング適性からである。
本発明に係る生分解性樹脂膜の生分解速度は、厚み方向の架橋度の変化に応じて変化し、架橋度に応じてその速度を調整することができる。
架橋度が高い側(図1及び2のB側)は膜の力学的強度を維持するために、生分解速度は長い方が好ましいが、組織再生後には速やかに生分解されることが好ましい。架橋度が高い側(図1及び2のB側)の生分解速度は、好ましくは4〜8ヶ月であり、より好ましくは5〜6ヶ月である。
一方、架橋度が低い側(図1及び2のA側)はサイトカイン等を徐放し、組織再生を誘導するためには、生分解速度は速い方が好ましく、好ましくは0.5〜3ヶ月であり、1〜2ヶ月である。
本発明に係る組織再生用部材の形成方法としては、生分解性樹脂の架橋度が厚み方向で連続的に増加又は減少する傾斜構造を有する膜を形成できれば特に制限されないが、組織再生部材を適用すべき患部に応じた傾斜構造の作製が容易にできる、組織再生部材の形状や厚みがオンデマンドで任意に制御できる観点からインクジェット方式が好ましい。
インクジェット方式を用いた組織再生用部材の形成方法について、以下説明する。
本発明に係る組織再生用部材の形成方法は、生分解性樹脂とサイトカインとを含有する第1のインクと、生分解性樹脂とリン酸カルシウムとを含有する第2のインクをインクジェット法により基材上に吐出して、前記サイトカインと前記リン酸カルシウムとの比率が厚み方向で連続的に増加又は減少する傾斜構造を有する生分解性樹脂膜を前記基材上に形成する。この場合、同時に、前記傾斜構造を前記生分解性樹脂の架橋度が厚み方向で連続的に増加又は減少させる構造とすることもできる。
本発明に係るインク(インク組成物)は、生分解性樹脂と、サイトカイン又はリン酸カルシウムを含有する。
本発明に係る組織再生用部材の形成方法では、生分解性樹脂とサイトカインとを含有する第1のインクと、生分解性樹脂とリン酸カルシウムとを含有する第2のインクとを使用する。第1のインクと第2のインクとをそれぞれ独立して使用してもよいし、両者を混合して混合インクとして使用してもよい。
これらのインクは、生分解性樹脂、サイトカイン、リン酸カルシウム以外に、溶媒、その他の添加剤を含んでもよい。
第1のインクにおける生分解性樹脂の含有量(溶媒を除いた全成分の合計量に対する含有量)は、90質量%〜99.9995質量%であることが好ましく、95質量%〜99.999質量%であることがより好ましく、98質量%〜99.999質量%であることが更に好ましい。
第1のインクにおけるサイトカインの含有量(溶媒を除いた全成分の合計量に対する含有量)は、0.0005質量%〜0.01質量%であることが好ましく、0.001質量%〜0.007質量%であることがより好ましく、0.001質量%〜0.005質量%であることが更に好ましい。
第2のインクにおける生分解性樹脂の含有量(溶媒を除いた全成分の合計量に対する含有量)は、20質量%〜80質量%であることが好ましく、30質量%〜70質量%であることがより好ましく、40質量%〜60質量%であることが更に好ましい。
第2のインクにおけるリン酸カルシウムの含有量(溶媒を除いた全成分の合計量に対する含有量)は、20質量%〜80質量%であることが好ましく、30質量%〜70質量%であることがより好ましく、40質量%〜60質量%であることが更に好ましい。
第1のインク又は第2のインクには、生分解性樹脂の架橋のために、架橋剤を用いることができる。本発明に係るインクジェット方式により生分解性樹脂の架橋度が厚み方向で連続的に増加又は減少する傾斜構造を形成する上では、第2のインクに架橋剤を用いることが好ましい。
架橋剤としては、例えば、グルタルアルデヒド;炭酸カルシウム;EDC等の水溶性カルボジイミド;プロピレンオキサイド、ジエポキシ化合物、水酸基、カルボキシル基、アミノ基、チオール基、イミダゾール基などの間に化学結合を作る縮合剤等を用いることができる。好ましいものは、グルタルアルデヒドである。
第1のインクにおける架橋剤の含有量は、0質量%〜10質量%であることが好ましく、0質量%〜5質量%であることがより好ましく、0質量%〜2質量%であることが更に好ましい。
第2のインクにおける架橋剤の含有量は、3質量%〜30質量%であることが好ましく、5質量%〜20質量%であることがより好ましく、7質量%〜15質量%であることが更に好ましい。
一般に、生分解性樹脂及び架橋剤の濃度、架橋処理時間が増大するとともに生分解性樹脂の架橋度は増加し、生体吸収性は低くなる。したがって、これらの条件を調整することで所望の架橋度を得ることができる。
また、熱脱水処理、紫外線、ガンマ線、電子線照射によっても生分解性樹脂を架橋することもでき、これらの架橋処理を組み合わせて用いることもできる。
本発明において、第1のインク及び第2のインクは、生分解性樹脂と、サイトカイン又はリン酸カルシウムとを溶媒と混合して調製することが好ましい。
溶媒としては、水、有機溶媒から適宜選択して用いることができ、沸点が50℃以上の液体であることが好ましく、沸点が60℃〜300℃の範囲の有機溶媒であることがより好ましい。
溶媒は、インク中の固形分濃度が1〜50質量%となる割合で用いることが好ましい。更には、5〜40質量%が好ましい。この範囲において、得られるインクは作業性良好な粘度の範囲となる。
これらの溶媒は、それぞれ単独で又は2種以上を混合して使用することができる。好ましい溶媒としては、水、トルエン、キシレン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、シクロヘキサノン、メタノール、イソプロパノール、ブタノール等が挙げられる。
本発明に係る第1のインク及び第2のインクには、表面張力調整剤、防汚剤、耐水性付与剤、耐薬品性付与剤等の他の添加剤を含むことができる。特に、表面張力調整剤を含むことが好ましい。
表面張力調整剤としては、アセチレンジオール系界面活性剤を用いるのが好ましく、具体的には、サーフィノール465、サーフィノール104(以上、エアプロダクツ社製、商品名)、オルフィンSTG、オルフィンE1010、オルフィンPD002W(以上、日信化学工業(株)製、商品名)等が挙げられる。本発明に係る第1のインク及び第2のインクにおける表面張力調整剤の含有量は、0.1質量%〜3質量%であることが好ましく、0.2質量%〜2質量%であることがより好ましく、0.3質量%〜1質量%であることが更に好ましい。
本発明に係る第1のインク及び第2のインクの粘度は、成膜時の均一性、インクジェット吐出時の安定性、インクの保存安定性の観点から、2〜50mPaが好ましく、2〜40mPaがより好ましく、3〜30mPaが更に好ましい。
また、表面張力は、成膜時の均一性、インクジェット吐出時の安定性、インクの保存安定性の観点から、15〜40mN/mが好ましく、20〜40mN/mがより好ましく、25〜35mN/mが更に好ましい。
本発明の組織再生部材の形成方法においては、基材上にインクジェット法により前記傾斜構造を有する生分解性樹脂膜を形成する。膜形成後に、通常、生分解性樹脂膜は基材より剥離して用いる。
そのため、基材としては、有機、無機又は金属製のあらゆる基材を用いることができるが、成膜後の生分解性樹脂膜を容易に剥離できるものが好ましい。
具体的には、石英ガラス、無アルカリ板ガラス等や、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリ塩化ビニル、ポリスチレン、ポリ酢酸ビニル、アクリル樹脂、ポリアミド、ポリアセタール、ポリカーボネート、変性ポリフェニレンエーテル、ポリブチレンフタレート、ポリエチレンテレフタレート製等の合成樹脂が挙げられる。
基材の表面は平滑であることが好ましく、平均粗さRaの値が1μm以下であることが好ましく、0.8μm以下であることが好ましく、0.7μm以下であることが更に好ましい。
以下、本発明のインクジェット法による生分解性樹脂膜の形成について説明する。
本発明においては、本発明では、生分解性樹脂とサイトカインとを含有する第1のインクと、生分解性樹脂とリン酸カルシウムとを含有する第2のインクとをそれぞれ独立した2種以上のインクとしてインクジェット法により基材上に吐出するか、前記第1のインクと、前記第2のインクとを混合してなる混合インクをインクジェット法により基材上に吐出する。
インクの液滴の制御は主にプリントヘッドにより行われる。例えばサーマルインクジェット方式の場合、プリントヘッドの構造で打滴量を制御することが可能である。すなわち、インク室、加熱部、ノズルの大きさを変えることにより、所望のサイズで打滴することができる。またサーマルインクジェット方式であっても、加熱部やノズルの大きさが異なる複数のプリントヘッドを持たせることで、複数サイズの打滴を実現することも可能である。ピエゾ素子を用いたドロップオンデマンド方式の場合、サーマルインクジェット方式と同様にプリントヘッドの構造上打滴量を変えることも可能であるが、ピエゾ素子を駆動する駆動信号の波形を制御することによっても、同じ構造のプリントヘッドで複数のサイズの打滴を行うことができる。
後述する描画混合法に用いられる、生分解性樹脂とサイトカインとを含有する第1のインクと、生分解性樹脂とリン酸カルシウムとを含有する第2のインクの調製について説明する。
前記各インクは、各インクの材料を混合することで調製することができる。各材料を混合する際には攪拌機により攪拌してもよい。攪拌時間は特に限定されないが、通常30分〜60分であり、30分〜40分が好ましい。また混合する際の温度は、通常10℃〜40℃であり、20℃〜35℃が好ましい。
後述するインク混合法においては、上述のように調製したインクを混合して用いることができる。
前記描画混合法においては、生分解性樹脂とサイトカインとを含有する第1のインクと、生分解性樹脂とリン酸カルシウムとを含有する第2のインクをインクジェット法により基材上に吐出して、前記サイトカインと前記リン酸カルシウムとの比率が厚み方向で連続的に増加又は減少する傾斜構造を有する生分解性樹脂膜を前記基材上に形成する方法であって、
前記第1のインクを第1のインクジェットヘッドに供給する工程と、
前記第2のインクを第2のインクジェットヘッドに供給する工程と、
前記第1のインクジェットヘッドから吐出される第1のインクの量と前記第2のインクジェットヘッドから吐出される第2のインクの量との比率を決定する制御工程と、
前記決定された比率に従って、前記第1のインクジェットヘッド及び前記第2のインクジェットヘッドの少なくとも一方から前記第1のインク又は前記第2のインクを吐出させて1つの層を形成する形成工程と、
前記形成工程を繰り返して前記基材上に前記層を複数層積層して前記傾斜構造を有する生分解性樹脂膜を得る積層工程と、
を有し、
前記制御工程において、前記複数層の厚み方向において前記基材に近い層から遠い層に向かって又は前記基材に遠い層から近い層に向かって、前記第1のインクの比率が大きくなり、かつ前記第2のインクの比率が小さくなるように前記比率を決定する、
方法が好ましい。
図3は、描画混合法に係る、前記傾斜構造を有する生分解性樹脂膜の作製装置100の全体構成図であり、図4は、作製装置100の描画部10の概略図である。これらの図に示すように、作製装置100は、描画部10を含んで構成され、描画部10は、フラットベッドタイプのインクジェット描画装置が用いられている。詳細には、描画部10は、基材である基材が載置されるステージ30、ステージ30に載置された基材を吸着保持するための吸着チャンバー40、基材20に向けて各インクを吐出するインクジェットヘッド50A(以下、インクジェットヘッド1)及びインクジェットヘッド50B(以下、インクジェットヘッド2)を含み構成されている。
このように構成された作製装置100を用いた、サイトカインと前記リン酸カルシウムとの比率及び生分解性樹脂の架橋度が厚み方向で連続的に増加又は減少する傾斜構造を有する生分解性樹脂膜の形成について、図5を用いて説明する。
本発明においては、上記のとおり、前記形成工程において吐出された層を半乾燥させる工程を有することが好ましく、半乾燥させるためには、例えば、インク吐出終了後、40〜120℃の環境温度に一定時間保持することが好ましく、50〜100℃の環境温度に一定時間保持することが好ましい。該保持する時間としては、10〜120秒が好ましく、20〜90秒がより好ましい。
すなわち、前記形成工程において、吐出された前記第1のインクと前記第2のインクを拡散混合させる工程を有することが好ましい。拡散混合させる方法としては、加熱による対流を利用する方法や超音波を利用する方法などが挙げられる。
各層の形成工程において、第1のインクジェットヘッド及び第2のインクジェットヘッドから吐出するインク滴の液滴径は膜厚制御及び細線形成性の観点から、1〜300μmとすることが好ましく、5〜250μmがより好ましく、10〜200μmが更に好ましい。
更に、各層の形成工程において、第1のインクと第2のインクのうち吐出量の比率が小さい方のインクについて、インクジェットヘッドから吐出するインク滴の液適量及び液滴径の少なくとも一方を前記比率が大きなインクより小さくすることが好ましい。例えば、前記比率が小さなインクのインク滴が0.3〜60pLであり、前記比率が大きなインクのインク滴が1〜100pLであることが好ましい。これにより、拡散混合する時間を短くしたり、混合の均一性を向上することができる。
なお、インク滴の「液滴径」とは、液滴直径の長さを意味し、インクジェット吐出時の飛翔状態写真から測定することができる。
上記B側又はA側にけるインク2又はインク1の比率は、得ようとする生分解性樹脂膜2の密着性や生分解速度等の特性により、適宜調節することが可能である。
このように吐出することにより、混合層24−2を形成する際の拡散混合の時間を短縮することができる。
前記インク混合法においては、生分解性樹脂とサイトカインとを含有する第1のインクと、生分解性樹脂とリン酸カルシウムとを含有する第2のインクをインクジェット法により基材上に吐出して、前記サイトカインと前記リン酸カルシウムとの比率が厚み方向で連続的に増加又は減少する傾斜構造を有する生分解性樹脂膜を前記基材上に形成する方法であって、
前記第1の材料を含む第1のインクと前記第2の材料を含む第2のインクとが混合された混合インクであって、それぞれ異なる比率で混合された複数の混合インクを前記複数のインクジェットヘッドそれぞれに供給する工程と、
前記複数のインクジェットヘッドから1つのインクジェットヘッドを順に選択する選択工程であって、前記第1又は前記第2のインクの比率の高い混合インクが供給されるインクジェットヘッドから該比率の低い混合インクが供給されるインクジェットヘッドにかけて順に選択する選択工程と、
前記選択されたインクジェットヘッドから混合インクを吐出させて1つの層を形成する形成工程と、
前記形成工程を繰り返して前記基材上に前記層を複数層積層して前記傾斜構造を有する生分解性樹脂膜を得る積層工程により形成される、
が好ましい。
図7は、第2の実施形態に係る生分解性樹脂膜の作製装置101の全体構成図である。同図に示すように、本実施形態に係る生分解性樹脂膜の作製装置101は描画部11を備え、描画部11は、5種類のインクを貯蔵するインクタンク60−1〜60−5と、各インクタンクからインクが供給されるインクジェットヘッド50−1〜50−5を備えている。各インクジェットヘッド50−1〜50−5は、各インクタンク60−1〜60−5から供給されるインクを基材20に対して吐出する。
描画混合法による実施形態と同様に、ステージ30上に基材20を載置し、吸着及び加熱を行う。
インク混合法においても、前記形成工程において吐出された層を半乾燥させる工程を有することが好ましく、半乾燥させるためには、例えば、インク吐出終了後、40〜120℃の環境温度に一定時間保持することが好ましく、50〜100℃の環境温度に一定時間保持することが好ましい。該保持する時間としては、10〜120秒が好ましく、20〜90秒がより好ましい。
各層の形成工程において、インクジェットヘッドから吐出するインク滴の液滴径は良好な膜形成性の観点から、2〜450μmとすることが好ましく、5〜350μmがより好ましく、10〜250μmが更に好ましい。
上記組成成分比は、得ようとする傾斜構造を有する生分解性樹脂膜の生分解速度等の特性により適宜調節することが可能である。
(組織遮断層形成インクの作成)
〜遮断インクA1〜
酸性ゼラチン(新田ゼラチン(株)製)10質量%水溶液 25g
リン酸カルシウム:β−TCP(ナノキューブジャパン(株)製) 2.5g
グルタルアルデヒド(ナカライテスク(株)製:25質量%水溶液) 0.5g
オルフィンE1010(日信化学工業(株)製) 1g
イオン交換水 200g
〜再生誘導インクB1〜
酸性ゼラチン(新田ゼラチン(株)製)10質量%水溶液 55g
サイトカイン:bFGF(和光純薬(株)製) 0.001g
オルフィンE1010(日信化学工業(株)製) 1g
イオン交換水 200g
図3に示すようなインクタンク1、インクタンク2に再生誘導インクB1、遮断インクA1をそれぞれ充填した。インクジェットヘッド1、インクジェットヘッド2に供給されるインクは、それぞれ再生誘導インクB1、遮断インクA1である。
はじめに、インクジェットヘッド2からの吐出されるインク滴の液適量を10pL、液滴径が30μmとなるように制御し、窒素ガス雰囲気中でインクジェットヘッド2から遮断インクA1を吐出させた。ここで、インクジェットヘッド1からは再生誘導インクB1を吐出させないで(即ち、インクジェットヘッド2から吐出するインクの吐出量とインクジェットヘッド1から吐出するインクの吐出量の比(質量%)が100:0)としてインク層1を形成し、80℃30秒間乾燥し、半硬化させた。
続いて、インクジェットヘッド2から吐出するインクの吐出量と、インクジェットヘッド1から吐出するインクの吐出量の比(質量%)を75:25(インク層2)、50:50(インク層3)、25:75(インク層4)、0:100(インク層5)と変化させて積層と半硬化を繰り返し、最終的に80℃5分間乾燥して全硬化させ、サイトカインに対するリン酸カルシウムの比率及び生分解性樹脂(酸性ゼラチン)の架橋度が厚み方向で層1側から層5側にかけて連続的に減少する傾斜構造を有する生分解性樹脂膜を形成した。
ここで、インク層2形成時のインクジェットヘッド1から吐出させる再生誘導B1のインク滴の液適量は5pL、液滴径を20μmとし、インクジェットヘッド2から吐出させる遮断インクA1のインク滴の液適量は10pL、液滴径を30μmとした。インク層3形成時には、再生誘導B1のインク滴の液適量は10pL、液滴径を30μmとし、遮断インクA1のインク滴の液適量は10pL、液滴径を30μmとした。インク層4形成時には、再生誘導B1のインク滴の液適量は10pL、液滴径を30μmとし、遮断インクA1のインク滴の液適量は5pL、液滴径を20μmとした。インク層5形成時には、再生誘導B1のインク滴の液適量は10pL、液滴径を30μmとした。
全硬化後のインク層1〜5の膜厚はそれぞれ20μmとなるようにした。
なお、各層におけるサイトカインに対するリン酸カルシウムの比率は高感度質量分析装置とXPSを併用することにより確認した。また、各層における生分解性樹脂(酸性ゼラチン)の架橋度は、各層の膨潤度を膨潤膜厚測定できる膨潤度計により求めて確認した。その結果、上記傾斜構造であることを確認した。
その後、石英ガラス基板から剥離単離して組織再生用部材としての生分解性樹脂膜を得た。得られた生分解性樹脂膜の生分解性、膜強度を以下のようにして評価した。また、用いた遮断インクA1及び再生誘導インクB1のインクジェット適性を以下のようにして評価した。
<生分解性>
形成した生分解性樹脂膜を、5mm×5mmの正方形に加工し、クロラミン−T法によりゼラチン分子のチロシン残基に125Iを放射ラベルし、マウス背部皮下に埋込したのち、経時的にゲル及び周辺組織を摘出し、残存放射カウントを測定して、3ヶ月後及び6ヶ月後の残存率を算出し、以下の基準で評価した。
(3ヵ月後)
○:残存率 40%以上
△:残存率 40%未満20%以上
×:残存率 20%未満
(6ヵ月後)
○:残存率 5%未満
△:残存率 5%以上10%未満
×:残存率 10%以上
形成した生分解性樹脂膜を、10mm×5mmの長方形に加工し、島津製作所(株)製小型卓上ひっぱり試験機EZ Test EZ-Sタイフ゜を用いて、試験速度20mm/minで上下に引っ張り、サンプルの強度試験を行い、以下の基準で評価した。
○:伸び量10mm以上
△:伸び量10mm未満5mm以上
×:伸び量5mm未満
作成した遮断インクA1及び再生誘導インクB1をそれぞれ、「マテリアルプリンター DMP-2831」(富士フイルム(株)製)に投入し、10plヘッドを用い、全16ノズルで30分連続吐出させ、30分後の不吐出ノズル数を検出することで各インクのインクジェット適性(吐出信頼性)を以下の基準で評価した。
○:不吐出ノズル数0〜1
△:不吐出ノズル数2〜5
×:不吐出ノズル数6以上
実施例1で用いた遮断インクA1及び再生誘導インクB1を混合したインクG1(混合比(質量%)A1:B1=75:25)、G2(混合比(質量%)A1:B1=50:50)、G3(混合比(質量%)A1:B1=25:75)を作製し、A1及びB1を含めた5種のインクをそれぞれ計5個のプリントヘッドを用い、石英ガラス基材上にA1(最下層)、G1、G2、G3、B1(最上層)の順にて、下記のインクジェット描画法Bにより15mm×15mmの正方形で、厚み100μmの生分解性樹脂膜を形成した。
図7に示すようなインクタンク60−1〜60−5にインクA1、G1、G2、G3、B1をそれぞれ充填した。インクジェットヘッド50−1〜50−5に供給されるインクは、それぞれインクA1、G1、G2、G3、B1である。
はじめにインクジェットヘッド50−1よりインクA1を、インクジェットヘッドから吐出されるインク滴の液滴量を10pL、液滴径が30μmとなるように制御しながら、窒素ガス雰囲気中で吐出させた。
このように形成したインクA1層を80℃30秒間乾燥し、半硬化させた。
次に、インクジェットヘッド50−22から同様にインクG1を吐出し、インクG1層を積層、半硬化させた。これを、インクG2、G3、B1についても繰り返し、積層と半硬化を繰り返し、最終的に80℃5分間乾燥して全硬化させ、サイトカインに対するリン酸カルシウムの比率及び生分解性樹脂(酸性ゼラチン)の架橋度が厚み方向で層A1側から層B1側にかけて連続的に減少する傾斜構造を有する生分解性樹脂膜を形成した。
なお、全硬化後のインク層A1、G1、G2、G3、B1の膜厚はそれぞれ20μmとなるようにした。
各層におけるサイトカインに対するリン酸カルシウムの比率は高感度質量分析装置とXPSを併用することにより確認した。また、各層における生分解性樹脂(酸性ゼラチン)の架橋度は、各層の膨潤度を膨潤膜厚測定できる膨潤度計により求めて確認した。その結果、上記傾斜構造であることを確認した。
その後、石英ガラス基板から剥離単離して組織再生用部材としての生分解性樹脂膜を得た。得られた生分解性樹脂膜の生分解性、膜強度、及び各インクのインクジェット適性を以下のようにして評価した。評価結果を下記表1に示す。
遮断インク及び再生誘導インクが含有する生分解性樹脂、リン酸カルシウム、及びサイトカインを下記表1及び表2に記載のものに置き換え、その他は実施例1と同様な方法で遮断インクA2〜A8、再生誘導インクB2〜B5を作成した。
作成した遮断インクA2〜A8、再生誘導インクB2〜B5を下記表1及び表2に記載の組み合わせで用いて、実施例1と同様な方法で生分解性樹脂膜を形成した。得られた生分解性樹脂膜の生分解性、膜強度、及び各インクのインクジェット適性を実施例1と同様に評価した。評価結果を下記表1及び表2に示す。
実施例1で用いた再生誘導インクB1のみを用いて、石英ガラス基材上に、1層のみから構成される15mm×15mmの正方形で、厚み100μmの生分解性樹脂膜をインクジェット描画により形成し、その後、実施例1と同様に処理して生分解性樹脂膜を得た。得られた生分解性樹脂膜の生分解性、膜強度、及びインクのインクジェット適性を実施例1と同様に評価した。評価結果を下記表2に示す。
実施例1で用いた遮断インクA1及び再生誘導インクB1を用いた。遮断インクA1を石英ガラス基材上にインクジェット描画し、15mm×15mmの正方形で、厚み100μmの膜をインクジェット描画により形成し、約1分室温で自然乾燥させた後、再生誘導インクB1をインクジェット描画により15mm×15mmの正方形で、厚み100μmの膜を作成した(2層積層膜)。その後、実施例1と同様に処理して生分解性樹脂膜を得た。得られた生分解性樹脂膜の生分解性、膜強度、及びインクのインクジェット適性を実施例1と同様に評価した。評価結果を下記表2に示す。
実施例1において、遮断インクA1のβ−TCP(ナノキューブジャパン(株)製)を平均粒子径12μmのβ−TCP(太平化学産業(株)製)に置き換えた以外は実施例1と同様な方法で遮断インクA9を作成した。得られた遮断インクA9を用いて、実施例1と同様に膜形成を試みたが、インク液が全ノズルから吐出せず、膜形成はできなかった。
実施例1において、遮断インクA1及び再生誘導インクB1のオルフィンE1010の添加量を1gから0.2gに変更した以外は実施例1と同様な方法で遮断インクA1及び再生誘導インクB6を作成した。得られた遮断インクA10及び再生誘導インクB6を用いて、実施例1と同様に膜形成を試みたが、インク液が着弾したところとしないところがムラ状となり膜形成はできなかった。
実施例1において、遮断インクA1及び再生誘導インクB1の酸性ゼラチン10質量%水溶液の添加量をそれぞれ250gに変更し、イオン交換水を使用しなかった以外は実施例1と同様な方法で遮断インクA11及び再生誘導インクB7を作成した。得られた遮断インクA11及び再生誘導インクB7を用いて、実施例1と同様に膜形成を試みたが、インク液が着弾したところとしないところがムラ状となり膜形成はできなかった。
粘度の測定は、E形粘度計(東機産業株式会社製)で行った。
表面張力の測定は、ウイルフェルミンプレート浸漬型表面張力計(協和界面科学株式社製)で行った。
一方、比較例1のように、本発明に用いた再生誘導インクのみを用い通常のインクジェット描画により膜を形成した場合、生分解速度が速く、骨再生に必要な時間を確保することが難しい。
また、比較例2では遮断インクと再生誘導インクをそのまま積層しているため、2種インクの界面で歪みが残存し、膜の強度が不足し、さらには組織遮断膜が長期間残存することで、組織再生後も異物による炎症等の発生が懸念される。
更に、比較例3〜5ではインクジェットインクとして、リン酸カルシウム類の平均粒子径が10μm、インク表面張力が40mN/m、インク粘度が50mPaをそれぞれ超えると、インクジェットで安定吐出させることが困難となり、インクジェット適正に問題が生じる。
2 生分解性樹脂膜
10 描画部
100 生分解性樹脂膜作製装置
Claims (14)
- サイトカインとリン酸カルシウムとを含有する生分解性樹脂膜を含む組織再生用部材であって、前記サイトカインと前記リン酸カルシウムとの比率が厚み方向で連続的に増加又は減少する傾斜構造を有する、組織再生用部材。
- 前記傾斜構造において、前記生分解性樹脂の架橋度が厚み方向で連続的に変化しており、前記サイトカインに対する前記リン酸カルシウムの比率が高い側で前記生分解性樹脂の架橋度が高く、前記サイトカインに対する前記リン酸カルシウムの比率が低い側で前記生分解性樹脂の架橋度が低い、請求項1に記載の組織再生用部材。
- 前記リン酸カルシウムが、β−TCP、α−TCP、リン酸四カルシウム、及びハイドロキシアパタイトの少なくとも1種である、請求項1又は2に記載の組織再生用部材。
- 前記サイトカインが、bFGF、VEGF、TGF−β、G−CSF、EPO、BMP−2、TGF−β1、血小板内細胞増殖因子、及びアンジオポエチンの少なくとも1種である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の組織再生用部材。
- 前記リン酸カルシウムが、平均粒径5nm以上10μm以下の粒子である、請求項1〜4のいずれか一項に記載の組織再生用部材。
- 請求項1〜5のいずれか一項に記載の組織再生用部材の形成方法であって、
生分解性樹脂とサイトカインとを含有する第1のインクと、生分解性樹脂とリン酸カルシウムとを含有する第2のインクをインクジェット法により基材上に吐出して、前記サイトカインと前記リン酸カルシウムとの比率が厚み方向で連続的に増加又は減少する傾斜構造を有する生分解性樹脂膜を前記基材上に形成する、組織再生用部材の形成方法。 - 前記インクジェット法が、少なくとも第1のインクジェットヘッドと第2のインクジェットヘッドを用いるものであり、
前記第1のインクを第1のインクジェットヘッドに供給する工程と、
前記第2のインクを第2のインクジェットヘッドに供給する工程と、
前記第1のインクジェットヘッドから吐出される第1のインクの量と前記第2のインクジェットヘッドから吐出される第2のインクの量との比率を決定する制御工程と、
前記決定された比率に従って、前記第1のインクジェットヘッド及び前記第2のインクジェットヘッドの少なくとも一方から前記第1のインク又は前記第2のインクを吐出させて1つの層を形成する形成工程と、
前記形成工程を繰り返して前記基材上に前記層を複数層積層して前記傾斜構造を有する生分解性樹脂膜を得る積層工程と、
を有し、
前記制御工程において、前記複数層の厚み方向において前記基材に近い層から遠い層に向かって又は前記基材に遠い層から近い層に向かって、前記第1のインクの比率が大きくなり、かつ前記第2のインクの比率が小さくなるように前記比率を決定する、請求項6に記載の組織再生用部材の形成方法。 - 前記形成工程において、前記第1及び第2のインクジェットヘッドから吐出する液滴のインク量が0.3〜100pLである、請求項7に記載の組織再生用部材の形成方法。
- 前記形成工程において、前記第1及び第2のインクジェットヘッドから吐出する液滴の液滴径が1〜300μmである、請求項7又は8に記載の組織再生用部材の形成方法。
- 前記インクジェット法が、複数のインクジェットヘッドを用いるものであり、
前記第1の材料を含む第1のインクと前記第2の材料を含む第2のインクとが混合された混合インクであって、それぞれ異なる比率で混合された複数の混合インクを前記複数のインクジェットヘッドそれぞれに供給する工程と、
前記複数のインクジェットヘッドから1つのインクジェットヘッドを順に選択する選択工程であって、前記第1又は前記第2のインクの比率の高い混合インクが供給されるインクジェットヘッドから該比率の低い混合インクが供給されるインクジェットヘッドにかけて順に選択する選択工程と、
前記選択されたインクジェットヘッドから混合インクを吐出させて1つの層を形成する形成工程と、
前記形成工程を繰り返して前記基材上に前記層を複数層積層して前記傾斜構造を有する生分解性樹脂膜を得る積層工程により形成される、請求項6に記載の組織再生用部材の形成方法。 - 前記形成工程において、前記第1及び第2のインクジェットヘッドから吐出する液滴のインク量が0.5〜150pLである、請求項10に記載の組織再生用部材の形成方法。
- 前記形成工程において、前記第1及び第2のインクジェットヘッドから吐出する液滴の液滴径が2〜450μmである、請求項10又は11に記載の組織再生用部材の形成方法。
- 前記第1及び第2のインクが、前記生分解性樹脂と前記サイトカイン又は前記リン酸カルシウムと含有するインクであり、該インクの粘度が2〜50mPaで、表面張力が15〜40mN/mである、請求項6〜12のいずれか一項に記載の組織再生用部材の形成方法。
- 生分解性樹脂と、サイトカイン又はリン酸カルシウムとを含有するインクであり、該インクの粘度が2〜50mPaで、表面張力が15〜40mN/mである、インク。
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