JP2013074885A - メタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の判別方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】分離培養した細菌をβ−ラクタム薬および金属−EDTAキレート錯体とともに培養することにより、金属−EDTAキレート錯体の存在下と非存在下での被検菌の発育状況を比較して、発育に対する金属−EDTAキレート錯体による影響の有無を調べることにより、被検菌がメタロ−β−ラクタマーゼを産生しているかどうかを判別することが可能となる。
【選択図】図1
Description
(1)β−ラクタム薬と金属−EDTAキレート錯体を用いることによるメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の判別方法。
(2)平板培地に被検菌を接種し、該培地上にβ−ラクタム薬を含浸したディスクおよび金属−EDTAキレート錯体を含浸したディスクを並べて置き、培養後の阻止円の形状を観察することによる(1)記載のメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の判別方法。
(3)平板培地に被検菌を接種し、該培地上にβ−ラクタム薬を含浸したディスク並びにβ−ラクタム薬および金属−EDTAキレート錯体を含浸したディスクを並べて置き、培養後の阻止円の形状を観察することによる(1)記載のメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の判別方法。
(4)β−ラクタム薬含有平板培地に被検菌を接種し、該培地上に金属−EDTAキレート錯体を含浸したディスクを置き、培養後の阻止円の大きさを観察することによる(1)記載のメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の判別方法。
(5)金属−EDTAキレート錯体含有平板培地に被検菌を接種し、該培地上にβ−ラクタム薬を含浸したディスクを置き、培養後の阻止円の大きさを観察することによる(1)記載のメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の判別方法。
(6)β−ラクタム薬含有液体培地と金属−EDTAキレート錯体含有液体培地とを組み合わせて被検菌を接種し、培養後の被験菌の増殖の有無を観察することによる(1)記載のメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の判別方法。
(7)前記β−ラクタム薬がカルバペネム系薬剤、セファマイシン系薬剤、およびセファロスポリン系薬剤から選ばれる1以上の薬剤である(1)〜(6)記載のメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の判別方法。
(8)前記カルバペネム系薬剤がイミペネム、パニペネム、メロペネム、ビアペネム、ドリペネム、およびテビペネムから選ばれる少なくとも1以上の薬剤である(1)〜(7)記載のメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の判別方法。
(9)前記セファマイシン系薬剤がセフォキシチン、セフメタゾール、セフブペラゾン、およびセフミノクスから選ばれる少なくとも1以上の薬剤である(1)〜(7)記載のメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の判別方法。
(10)前記セファロスポリン系薬剤がセフタジジム、セフェピム、セフトリアキソン、およびセフォタキシムから選ばれる少なくとも1以上の薬剤である(1)〜(7)記載のメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の判別方法。
(11)前記金属−EDTAキレート錯体がMg−EDTA、Cu−EDTA、Ca−EDTA、Co−EDTA、Mn−EDTA、およびFe−EDTAから選ばれる少なくとも1以上の化合物である(1)〜(10)記載のメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の判別方法。
(12)金属−EDTAキレート錯体にさらに有機チオール化合物を添加する(1)〜(11)記載のメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の判別方法。
(13)前記有機チオール化合物がメルカプト酢酸ナトリウムである(1)〜(12)記載のメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の判別方法。
(14)β−ラクタム薬と金属−EDTAキレート錯体を含む、(1)〜(11)記載のメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の判別方法に用いるキット。
(15)β−ラクタム薬と金属−EDTAキレート錯体および有機チオール化合物を含む、(12)〜(13)記載のメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の判別方法に用いるキット。
[実施例1]金属−EDTAキレート錯体によるメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の確認試験
被検菌を滅菌生理食塩水にMcFarland標準濁度0.5と同じ濁度に調製し、滅菌綿棒を用いてミュラーヒントン寒天培地上に均一に接種した。
メタロ−β−ラクタマーゼとは異なるβ−ラクタマーゼを産生していると確認しているKlebsiella pneumoniae(EKN9491)、Escherichia coli(EKN6663)、およびPseudomonas aeruginosa(EKN7149)を用いて、その他の条件を[実施例1]と同様に試験を実施した。
被検菌として、Klebsiella pneumoniae(ATCC BAA−2146)、Klebsiella pneumoniae(EKN4635)、Acinetobacter baumannii(EKN7170)、およびAcinetobacter baumannii(EKN7171)を用い、イミペネム(IPM:10μg力価/ディスク)およびセフタジジム(CAZ:30μg力価/ディスク)含浸ディスクと10mg/ディスク、8mg/ディスク、および6mg/ディスクのMg−EDTA含浸ディスクの組合せを用いて、その他の条件を[実施例1]と同様に試験を実施した。
被検菌として、Klebsiella pneumoniae(ATCC BAA−2146)を用い、メロペネム(MEPM:10μg力価/ディスク)、テビペネム(TBPM:10μg力価/ディスク)、ドリペネム(DRPM:10μg力価/ディスク)、およびパニペネム(PAPM:10μg力価/ディスク)含浸ディスクと60μg/ディスク、30μg/ディスク、10μg/ディスク、および5μg/ディスクのMg−EDTA含浸ディスクの組合せを用いて、その他の条件を[実施例1]と同様に試験を実施した。
被検菌として、Escherichia coli(EKN9981)、Klebsiella pneumoniae(ATCC BAA−2146)、Klebsiella pneumoniae(EKN4635)、およびAcinetobacter baumannii(EKN7170)を用い、イミペネム(IPM:10μg力価/ディスク)、メロペネム(MEPM:10μg力価/ディスク)、およびセフタジジム(CAZ:30μg力価/ディスク)含浸ディスクと9mg/ディスクおよび10mg/ディスクのMg−EDTA含浸ディスクの組合せを用いて、ディスクの中心間の距離を2.0cm、1.5cm、および1.0cmとし、加えてディスク同士を接触させた試験を実施した。なお、その他の条件は[実施例1]と同様に試験を実施した。
被検菌として、Escherichia coli(EKN9981)、Klebsiella pneumoniae(ATCC BAA−2146)、Klebsiella pneumoniae(EKN4635)、Enterobacter cloacae(EKN7173)、およびPseudomonas aeruginosa(EKN7102)を用い、イミペネム(IPM:10μg力価/ディスク)、メロペネム(MEPM:10μg力価/ディスク)、ドリペネム(DRPM:10μg力価/ディスク)、テビペネム(TBPM:10μg力価/ディスク)、ビアペネム(BIPM:10μg力価/ディスク)、パニペネム(PAPM:10μg力価/ディスク)、セフブペラゾン(CBPZ:75μg力価/ディスク)、セフメタゾール(CMZ:30μg力価/ディスク)、セフミノクス(CMNX:30μg力価/ディスク)、セフォキシチン(CFX:30μg力価/ディスク)、セフタジジム(CAZ:30μg力価/ディスク)、セフトリアキソン(CTRX:30μg力価/ディスク)、セフォタキシム(CTX:30μg力価/ディスク)、およびセフェピム(CFPM:30μg力価/ディスク)含浸ディスクと12mg/ディスクのMg−EDTA含浸ディスクの組合せを用いて、その他の条件を[実施例1]と同様に試験を実施した。
[実施例6]β−ラクタム薬および金属−EDTAキレート錯体含浸ディスクによるメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の確認試験
被検菌を滅菌生理食塩水にMcFarland標準濁度0.5と同じ濁度に調製し、滅菌綿棒を用いてミュラーヒントン寒天培地上に均一に接種した。
[実施例7]金属−EDTAキレート錯体および/またはメルカプト酢酸ナトリウム(SMA)含浸ディスクによるメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の確認試験
被検菌を滅菌生理食塩水にMcFarland標準濁度0.5と同じ濁度に調製し、滅菌綿棒を用いてミュラーヒントン寒天培地上に均一に接種した。
[実施例8]金属−EDTAキレート錯体含浸ディスクによるメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の確認試験
被検菌を滅菌生理食塩水にMcFarland標準濁度0.5と同じ濁度に調製し、滅菌綿棒を用いてミュラーヒントン寒天培地およびイミペネム(IPM:50μg力価/mL)含有ミュラーヒントン寒天培地上に均一に接種した。
次に、各々の平板培地上に金属−EDTAキレート錯体としてMg−EDTA(10μg/ディスク)含浸ディスクを置いた。
[実施例9]β−ラクタム薬含浸ディスクによるメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の確認試験
被検菌を滅菌生理食塩水にMcFarland標準濁度0.5と同じ濁度に調製し、滅菌綿棒を用いてミュラーヒントン寒天培地および金属−EDTAキレート錯体としてMg−EDTA(100μg/mL)含有ミュラーヒントン寒天培地上に均一に接種した。
次に、各々の平板培地上にイミペネム(IPM:10μg力価/ディスク)およびセフタジジム(CAZ:30μg力価/ディスク)含浸ディスクを置いた。
[実施例10]金属−EDTAキレート錯体含有液体培地によるメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の確認試験
ミュラーヒントンブロス培地並びに金属−EDTAキレート錯体としてMg−EDTA(500μg/mL)およびCa−EDTA(500μg/mL)含有ミュラーヒントンブロス培地を用いてイミペネム(IPM)の希釈系列を作製した。
次に、各々の希釈系列のウェルに最終接種菌液量が約5×104CFU/ウェルとなるように被検菌を接種した。
Claims (15)
- β−ラクタム薬と金属−EDTAキレート錯体を用いることによるメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の判別方法。
- 平板培地に被検菌を接種し、該培地上にβ−ラクタム薬を含浸したディスクおよび金属−EDTAキレート錯体を含浸したディスクを並べて置き、培養後の阻止円の形状を観察することによる請求項1記載のメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の判別方法。
- 平板培地に被検菌を接種し、該培地上にβ−ラクタム薬を含浸したディスク並びにβ−ラクタム薬および金属−EDTAキレート錯体を含浸したディスクを並べて置き、培養後の阻止円の形状を観察することによる請求項1記載のメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の判別方法。
- β−ラクタム薬含有平板培地に被検菌を接種し、該培地上に金属−EDTAキレート錯体を含浸したディスクを置き、培養後の阻止円の大きさを観察することによる請求項1記載のメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の判別方法。
- 金属−EDTAキレート錯体含有平板培地に被検菌を接種し、該培地上にβ−ラクタム薬を含浸したディスクを置き、培養後の阻止円の大きさを観察することによる請求項1記載のメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の判別方法。
- β−ラクタム薬含有液体培地と金属−EDTAキレート錯体含有液体培地とを組み合わせて被検菌を接種し、培養後の被験菌の増殖の有無を観察することによる請求項1記載のメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の判別方法。
- 前記β−ラクタム薬がカルバペネム系薬剤、セファマイシン系薬剤、およびセファロスポリン系薬剤から選ばれる1以上の薬剤である請求項1〜6記載のメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の判別方法。
- 前記カルバペネム系薬剤がイミペネム、パニペネム、メロペネム、ビアペネム、ドリペネム、およびテビペネムから選ばれる少なくとも1以上の薬剤である請求項1〜7記載のメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の判別方法。
- 前記セファマイシン系薬剤がセフォキシチン、セフメタゾール、セフブペラゾン、およびセフミノクスから選ばれる少なくとも1以上の薬剤である請求項1〜7記載のメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の判別方法。
- 前記セファロスポリン系薬剤がセフタジジム、セフェピム、セフトリアキソン、およびセフォタキシムから選ばれる少なくとも1以上の薬剤である請求項1〜7記載のメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の判別方法。
- 前記金属−EDTAキレート錯体がMg−EDTA、Cu−EDTA、Ca−EDTA、Co−EDTA、Mn−EDTA、およびFe−EDTAから選ばれる少なくとも1以上の化合物である請求項1〜10記載のメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の判別方法。
- 金属−EDTAキレート錯体にさらに有機チオール化合物を添加する請求項1〜11記載のメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の判別方法。
- 前記有機チオール化合物がメルカプト酢酸ナトリウムである請求項1〜12記載のメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の判別方法。
- β−ラクタム薬と金属−EDTAキレート錯体を含む、請求項1〜請求項11記載のメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の判別方法に用いるキット。
- β−ラクタム薬と金属−EDTAキレート錯体および有機チオール化合物を含む、請求項12〜請求項13記載のメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の判別方法に用いるキット。
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