JP3014090B2 - バンコマイシン耐性菌の検出方法及び検出用培地 - Google Patents
バンコマイシン耐性菌の検出方法及び検出用培地Info
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、臨床分野で有用な
バンコマイシン耐性菌の検出方法及び検出用培地に関す
る。さらに詳しくは、本発明は、バンコマイシン耐性黄
色ブドウ球菌の検出方法及び検出用培地に関する。本発
明はまた、このような検出用培地を含むバンコマイシン
耐性黄色ブドウ球菌の検出用キットに関する。
バンコマイシン耐性菌の検出方法及び検出用培地に関す
る。さらに詳しくは、本発明は、バンコマイシン耐性黄
色ブドウ球菌の検出方法及び検出用培地に関する。本発
明はまた、このような検出用培地を含むバンコマイシン
耐性黄色ブドウ球菌の検出用キットに関する。
【０００２】
【従来の技術】過去数十年の間に、種々の構造をもつ多
数の抗生物質が開発されて細菌感染の治療に用いられて
きた。これらの抗生物質のうちで重要なものには、β−
ラクタム、グリコペプチド、マクロライド、キノロン、
テトラサイクリン及びアミノグリコシドが含まれる。
数の抗生物質が開発されて細菌感染の治療に用いられて
きた。これらの抗生物質のうちで重要なものには、β−
ラクタム、グリコペプチド、マクロライド、キノロン、
テトラサイクリン及びアミノグリコシドが含まれる。
【０００３】しかしながら、抗生物質の使用とともに、
抗生物質に対して耐性である細菌の突然変異株が出現す
る頻度も増加しており、近年、ＭＲＳＡ（メチシリン耐
性黄色ブドウ球菌：Methicillin-resistant Staphyloco
ccus aureus）感染症として大きな問題となっている。
これは、ペニシリンに耐性化した黄色ブドウ球菌に効力
を有する抗菌薬として最初に開発されたペニシリナーゼ
に加水分解されにくいペニシリンであるメチシリンの名
称を付けてこのように呼ばれている。しかしながら、Ｍ
ＲＳＡの本態は、メチシリンのみならず、β−ラクタム
剤と呼称される抗菌薬、すなわち、耐性ブドウ球菌用ペ
ニシリンをはじめとする全てのペニシリン系、第１、第
２、第３、第４世代と呼ばれる全てのセフェム系、ある
いはモノバクタム系、カルバペネム系といった、現在市
販されているほとんど全てのβ−ラクタム薬に耐性を示
す性質を有していることである。
抗生物質に対して耐性である細菌の突然変異株が出現す
る頻度も増加しており、近年、ＭＲＳＡ（メチシリン耐
性黄色ブドウ球菌：Methicillin-resistant Staphyloco
ccus aureus）感染症として大きな問題となっている。
これは、ペニシリンに耐性化した黄色ブドウ球菌に効力
を有する抗菌薬として最初に開発されたペニシリナーゼ
に加水分解されにくいペニシリンであるメチシリンの名
称を付けてこのように呼ばれている。しかしながら、Ｍ
ＲＳＡの本態は、メチシリンのみならず、β−ラクタム
剤と呼称される抗菌薬、すなわち、耐性ブドウ球菌用ペ
ニシリンをはじめとする全てのペニシリン系、第１、第
２、第３、第４世代と呼ばれる全てのセフェム系、ある
いはモノバクタム系、カルバペネム系といった、現在市
販されているほとんど全てのβ−ラクタム薬に耐性を示
す性質を有していることである。
【０００４】バンコマイシン（以下においてＶＣＭとい
うこともある）は、ストレプトミセス・オリエンタリス
（Streptomyces orientalis）の産生する環状グリコペ
プチド系抗生物質であり、２つの糖（グルコース、バン
コサミン）と７つのアミノ酸で構成されている。その分
子量の大きさから、外膜を通過しにくいためグラム陰性
菌には効果がないが、グラム陽性菌には強い効果をもっ
ている。
うこともある）は、ストレプトミセス・オリエンタリス
（Streptomyces orientalis）の産生する環状グリコペ
プチド系抗生物質であり、２つの糖（グルコース、バン
コサミン）と７つのアミノ酸で構成されている。その分
子量の大きさから、外膜を通過しにくいためグラム陰性
菌には効果がないが、グラム陽性菌には強い効果をもっ
ている。
【０００５】バンコマイシンは、細胞壁構成成分である
ムレインモノマー末端のD-Ala-D-Alaに結合し、ムレイ
ンモノマーが細胞壁に取り込まれる段階を阻害する（Ra
bindra K. Sinha et al., J. Bacteriol. 96:374-382,
1968; Nieto, M. et al., Biochem. J. 123: 773-787,
1971; Nieto, M. et al., Biochem. J. 123:789-803,19
71; Joel P. Mackay et al., J. Am. Chem. Soc. 116:3
481-4590, 1994））。その結果、細菌の細胞壁が泥弱化
し、細胞内内圧に抗しきれず死滅する。
ムレインモノマー末端のD-Ala-D-Alaに結合し、ムレイ
ンモノマーが細胞壁に取り込まれる段階を阻害する（Ra
bindra K. Sinha et al., J. Bacteriol. 96:374-382,
1968; Nieto, M. et al., Biochem. J. 123: 773-787,
1971; Nieto, M. et al., Biochem. J. 123:789-803,19
71; Joel P. Mackay et al., J. Am. Chem. Soc. 116:3
481-4590, 1994））。その結果、細菌の細胞壁が泥弱化
し、細胞内内圧に抗しきれず死滅する。
【０００６】バンコマイシンの臨床使用は古く、１９５
６年にペニシリン耐性黄色ブドウ球菌感染症治療に使用
されていたが、ペニシリナーゼに安定な半合成ペニシリ
ンが開発されたことと、バンコマイシン自体の腎毒性の
強さからあまり使用されなくなっていた。日本では、１
９８１年に骨髄移植時の消化管殺菌のみの適応で、経口
用塩酸バンコマイシンが承認された。その後、ＭＲＳＡ
感染症の拡大により、１９９１年にバンコマイシン静注
剤が承認された。
６年にペニシリン耐性黄色ブドウ球菌感染症治療に使用
されていたが、ペニシリナーゼに安定な半合成ペニシリ
ンが開発されたことと、バンコマイシン自体の腎毒性の
強さからあまり使用されなくなっていた。日本では、１
９８１年に骨髄移植時の消化管殺菌のみの適応で、経口
用塩酸バンコマイシンが承認された。その後、ＭＲＳＡ
感染症の拡大により、１９９１年にバンコマイシン静注
剤が承認された。
【０００７】バンコマイシンは３０年間臨床使用されて
きたにもかかわらず、耐性菌が出現せず、そのためＭＲ
ＳＡの出現後はその特効薬として広く使用されてきた。
しかしながら、同系統のアボパルシンが家畜に大量投与
されたことによってアボパルシン耐性腸球菌が出現し
た。この菌はバンコマイシンに対しても交差耐性を示す
バンコマイシン耐性腸球菌（Vancomycin-resistant Ent
erococcus:VRE）であった。これは、抗菌薬には必ず耐
性菌が出現することの証明でもあった。
きたにもかかわらず、耐性菌が出現せず、そのためＭＲ
ＳＡの出現後はその特効薬として広く使用されてきた。
しかしながら、同系統のアボパルシンが家畜に大量投与
されたことによってアボパルシン耐性腸球菌が出現し
た。この菌はバンコマイシンに対しても交差耐性を示す
バンコマイシン耐性腸球菌（Vancomycin-resistant Ent
erococcus:VRE）であった。これは、抗菌薬には必ず耐
性菌が出現することの証明でもあった。
【０００８】現在までのところ、臨床から分離されたバ
ンコマイシン耐性菌は、上記の腸球菌（Enterococcus
属）とCNSの表皮ブドウ球菌(Staphylococcus epidermid
es)(Sanyal, D. et al., J. Antimicrob. Chemother. 3
2:267-278, 1993)とS. haemolyticus(Veach, LA. et a
l., J. Clin. Microbiol. 28:2064-2068, 1990; Auber
t,G. et al., J. Antimicrob. Chemother. 25:491-493,
1990)で報告されているが、黄色ブドウ球菌では報告さ
れていなかった。
ンコマイシン耐性菌は、上記の腸球菌（Enterococcus
属）とCNSの表皮ブドウ球菌(Staphylococcus epidermid
es)(Sanyal, D. et al., J. Antimicrob. Chemother. 3
2:267-278, 1993)とS. haemolyticus(Veach, LA. et a
l., J. Clin. Microbiol. 28:2064-2068, 1990; Auber
t,G. et al., J. Antimicrob. Chemother. 25:491-493,
1990)で報告されているが、黄色ブドウ球菌では報告さ
れていなかった。
【０００９】本発明者らは、約１ヶ月にわたってバンコ
マイシン投与を受けたにもかかわらず、症状の改善が認
められないばかりか、徐々に悪化傾向にあった生後４ヶ
月の肺動脈閉鎖症男児の心臓手術正中切開部に生じたＭ
ＲＳＡ創感染部位から、バンコマイシンに対して耐性を
示す黄色ブドウ球菌株であるMu50を検出し、純培養的に
分離した(Hiramatsu, K. et al., J. Antimicrob. Chem
other. 40:135-136, 1997）。バンコマイシン投与で治
療できないことから、バンコマイシンのMu50に対する抗
菌力をしらべたところ、この株のNCCLS（National Comm
ittee for Clinical Laboratory Standards）法に従っ
たMIC（最小発育阻止濃度：完全に増殖を阻止する抗菌
剤の最小濃度である）は８μｇ／ｍｌであった。この値
はＮＣＣＬＳの基準によればバンコマイシン軽度耐性に
分類される（National Committee for Clinical Labora
tory Standards villanova.Pa. 1993）。この菌は、VRE
で認められるvanA, vanB, vanC遺伝子群は検出されず、
全く新しい耐性機構をもつものであった。
マイシン投与を受けたにもかかわらず、症状の改善が認
められないばかりか、徐々に悪化傾向にあった生後４ヶ
月の肺動脈閉鎖症男児の心臓手術正中切開部に生じたＭ
ＲＳＡ創感染部位から、バンコマイシンに対して耐性を
示す黄色ブドウ球菌株であるMu50を検出し、純培養的に
分離した(Hiramatsu, K. et al., J. Antimicrob. Chem
other. 40:135-136, 1997）。バンコマイシン投与で治
療できないことから、バンコマイシンのMu50に対する抗
菌力をしらべたところ、この株のNCCLS（National Comm
ittee for Clinical Laboratory Standards）法に従っ
たMIC（最小発育阻止濃度：完全に増殖を阻止する抗菌
剤の最小濃度である）は８μｇ／ｍｌであった。この値
はＮＣＣＬＳの基準によればバンコマイシン軽度耐性に
分類される（National Committee for Clinical Labora
tory Standards villanova.Pa. 1993）。この菌は、VRE
で認められるvanA, vanB, vanC遺伝子群は検出されず、
全く新しい耐性機構をもつものであった。
【００１０】この８μｇ／ｍｌのMIC値をもつMu50株
は、バンコマイシン濃度と生存細胞数から得られるポピ
ュレーションカーブから、バンコマイシンに対して均一
に高い耐性を有する菌株であると考えられた。
は、バンコマイシン濃度と生存細胞数から得られるポピ
ュレーションカーブから、バンコマイシンに対して均一
に高い耐性を有する菌株であると考えられた。
【００１１】
【発明が解決すべき課題】今回本発明者らは、バンコマ
イシンに対するMIC値が８μｇ／ｍｌより低いＭＲＳＡ
でも、バンコマイシン治療失敗例が存在することを発見
した。バンコマイシン治療の奏功しなかったMRSA肺炎の
症例から分離したこの株（Mu3株）のMIC値は２μｇ／ｍ
ｌであり、ＮＣＣＬＳの基準では感受性菌に分類され
る。しかし、この株は、約１０-6以上の頻度でバンコマ
イシン耐性黄色ブドウ球菌（VRSA:MIC値が８μｇ／ｍ
ｌ）を生み出すことが確認された。
イシンに対するMIC値が８μｇ／ｍｌより低いＭＲＳＡ
でも、バンコマイシン治療失敗例が存在することを発見
した。バンコマイシン治療の奏功しなかったMRSA肺炎の
症例から分離したこの株（Mu3株）のMIC値は２μｇ／ｍ
ｌであり、ＮＣＣＬＳの基準では感受性菌に分類され
る。しかし、この株は、約１０-6以上の頻度でバンコマ
イシン耐性黄色ブドウ球菌（VRSA:MIC値が８μｇ／ｍ
ｌ）を生み出すことが確認された。
【００１２】Mu3株はポピュレーションカーブから種々
の耐性度をもつ不均一な集団であることが示唆され（図
１）、本発明らはこれをヘテロVRSAと命名した（Hirama
tsuet al., Lancet, in Press）。
の耐性度をもつ不均一な集団であることが示唆され（図
１）、本発明らはこれをヘテロVRSAと命名した（Hirama
tsuet al., Lancet, in Press）。
【００１３】この株は上述したように、増殖するとMIC
値が８μｇ／ｍｌのVRSAを生じ、バンコマイシン無効の
感染症を引き起こすことから、早期の段階で検出するこ
とが極めて重要である。しかしながら、ヘテロVRSAはMI
C値が低く、通常の検出方法では検出することができな
い。そこで、簡便、迅速で、かつ確実にこのようなバン
コマイシン軽度耐性黄色ブドウ球菌を検出する方法が求
められている。
値が８μｇ／ｍｌのVRSAを生じ、バンコマイシン無効の
感染症を引き起こすことから、早期の段階で検出するこ
とが極めて重要である。しかしながら、ヘテロVRSAはMI
C値が低く、通常の検出方法では検出することができな
い。そこで、簡便、迅速で、かつ確実にこのようなバン
コマイシン軽度耐性黄色ブドウ球菌を検出する方法が求
められている。
【００１４】
【課題を解決するための手段】バンコマイシンは上述し
たように、ＭＲＳＡ感染症の治療にβ−ラクタム剤と組
み合わせて使用されてきた。これは、バンコマイシンと
β−ラクタム剤とがＭＲＳＡ感染症に対して相乗的効果
を有すると考えられていたからである。
たように、ＭＲＳＡ感染症の治療にβ−ラクタム剤と組
み合わせて使用されてきた。これは、バンコマイシンと
β−ラクタム剤とがＭＲＳＡ感染症に対して相乗的効果
を有すると考えられていたからである。
【００１５】しかしながら、ヘテロVRSAであるMu3株に
おいては、驚くべきことにバンコマイシンとβ−ラクタ
ム剤とが拮抗することを本発明者らは見いだした。この
知見は従来の医学界の常識を全く覆すものである。
おいては、驚くべきことにバンコマイシンとβ−ラクタ
ム剤とが拮抗することを本発明者らは見いだした。この
知見は従来の医学界の常識を全く覆すものである。
【００１６】本発明はこのような新規知見に基づいて、
ヘテロ型バンコマイシン耐性黄色ブドウ球菌を簡便、迅
速、確実に検出する方法、培地及びキットを提供するも
のである。
ヘテロ型バンコマイシン耐性黄色ブドウ球菌を簡便、迅
速、確実に検出する方法、培地及びキットを提供するも
のである。
【００１７】即ち、本発明はバンコマイシンとβ−ラク
タム剤との拮抗反応を利用したヘテロ型バンコマイシン
耐性黄色ブドウ球菌の検出方法、検出培地及び検出用キ
ットを提供する。
タム剤との拮抗反応を利用したヘテロ型バンコマイシン
耐性黄色ブドウ球菌の検出方法、検出培地及び検出用キ
ットを提供する。
【００１８】
【発明の実施の形態】本発明の検出方法は種々の態様で
実施することが可能である。液体培養法及び寒天平板培
養法を含む。
実施することが可能である。液体培養法及び寒天平板培
養法を含む。
【００１９】液体培養法で行う第１の態様では、例えば
本発明は、以下の工程： ａ）バンコマイシン及びβ−ラクタム剤を含有するグラ
ム陽性菌が生育する液体培地中に試験菌液を入れる、 ｂ）バンコマイシン耐性菌の生育に十分な時間培養す
る、そして ｄ）液体培地中におけるバンコマイシン耐性菌の生育を
観察する、ことからなる。
本発明は、以下の工程： ａ）バンコマイシン及びβ−ラクタム剤を含有するグラ
ム陽性菌が生育する液体培地中に試験菌液を入れる、 ｂ）バンコマイシン耐性菌の生育に十分な時間培養す
る、そして ｄ）液体培地中におけるバンコマイシン耐性菌の生育を
観察する、ことからなる。
【００２０】寒天平板培養法で行う第２の態様では、例
えば本発明は、以下の工程： ａ）バンコマイシン及びβ−ラクタム剤を含有するグラ
ム陽性菌が生育する寒天平板培地上に試験菌液を塗抹す
る、 ｂ）バンコマイシン耐性菌の生育に十分な時間培養す
る、そして ｄ）寒天平板上におけるバンコマイシン耐性菌の生育を
観察する、ことからなる。
えば本発明は、以下の工程： ａ）バンコマイシン及びβ−ラクタム剤を含有するグラ
ム陽性菌が生育する寒天平板培地上に試験菌液を塗抹す
る、 ｂ）バンコマイシン耐性菌の生育に十分な時間培養す
る、そして ｄ）寒天平板上におけるバンコマイシン耐性菌の生育を
観察する、ことからなる。
【００２１】寒天平板培養法で行う第３の態様における
本発明の検出方法は、例えば以下の工程： ａ）バンコマイシンを含有するグラム陽性菌が生育する
寒天培地上に試験菌液を塗抹する、 ｂ）β−ラクタム剤含有ディスクをａ）で調製した培地
上に置く、 ｃ）バンコマイシン耐性菌の生育に十分な時間培養す
る、そして ｄ）ディスク周辺におけるバンコマイシン耐性菌の生育
を観察する、ことからなる。
本発明の検出方法は、例えば以下の工程： ａ）バンコマイシンを含有するグラム陽性菌が生育する
寒天培地上に試験菌液を塗抹する、 ｂ）β−ラクタム剤含有ディスクをａ）で調製した培地
上に置く、 ｃ）バンコマイシン耐性菌の生育に十分な時間培養す
る、そして ｄ）ディスク周辺におけるバンコマイシン耐性菌の生育
を観察する、ことからなる。
【００２２】ディスク周辺におけるバンコマイシン耐性
菌の生育を目視で観察できて判定が容易であること、試
験法が簡単であること及び均一な結果が得られることな
どからβ−ラクタム剤ディスクを用いる寒天平板培養法
による簡易検出法が好ましい。この簡易検出法はディス
ク周囲にβ−ラクタム剤の濃度のグラジエントが形成さ
れるため、広い濃度範囲において耐性菌の検出を行うこ
とが可能となり、従って新しいタイプの耐性菌が出現し
たときにも容易にこれを検出することができる。
菌の生育を目視で観察できて判定が容易であること、試
験法が簡単であること及び均一な結果が得られることな
どからβ−ラクタム剤ディスクを用いる寒天平板培養法
による簡易検出法が好ましい。この簡易検出法はディス
ク周囲にβ−ラクタム剤の濃度のグラジエントが形成さ
れるため、広い濃度範囲において耐性菌の検出を行うこ
とが可能となり、従って新しいタイプの耐性菌が出現し
たときにも容易にこれを検出することができる。
【００２３】本発明は、上記検出方法に使用する、グラ
ム陽性菌が生育する培地中に、バンコマイシン、及び場
合によりβ−ラクタム剤を含むバンコマイシン耐性黄色
ブドウ球菌の検出用培地も提供する。上述した第１及び
第２の態様では、培地にβ−ラクタム剤を含むが、β−
ラクタム剤ディスクを用いて行う第３の態様では、培地
にβ−ラクタム剤を含まない。
ム陽性菌が生育する培地中に、バンコマイシン、及び場
合によりβ−ラクタム剤を含むバンコマイシン耐性黄色
ブドウ球菌の検出用培地も提供する。上述した第１及び
第２の態様では、培地にβ−ラクタム剤を含むが、β−
ラクタム剤ディスクを用いて行う第３の態様では、培地
にβ−ラクタム剤を含まない。
【００２４】本発明のバンコマイシン耐性黄色ブドウ球
菌検出方法に使用するグラム陽性菌が生育する培地と
は、特に限定されないが、例えば、TSB（Tripticase So
y Broth）、TSA（Tripticase Soy Agar）、MHB（Muller
Hinton Broth）、MHA（MullerHinton Agar）、コロン
ビア寒天培地、MSA（Mannitol Salt Agar）等を使用す
ることができる。特に好ましいのはHI（Heart Infusio
n）培地、HIA（Heart Infusion Agar）培地、BHI（Brai
n Heart Infusion）培地、BHIA （Brain Heart Infusio
n Agar）培地である。
菌検出方法に使用するグラム陽性菌が生育する培地と
は、特に限定されないが、例えば、TSB（Tripticase So
y Broth）、TSA（Tripticase Soy Agar）、MHB（Muller
Hinton Broth）、MHA（MullerHinton Agar）、コロン
ビア寒天培地、MSA（Mannitol Salt Agar）等を使用す
ることができる。特に好ましいのはHI（Heart Infusio
n）培地、HIA（Heart Infusion Agar）培地、BHI（Brai
n Heart Infusion）培地、BHIA （Brain Heart Infusio
n Agar）培地である。
【００２５】培地中のバンコマイシン濃度は３〜６μｇ
／ｍｌであることが好ましく、４μｇ／ｍｌであること
が最も好ましい。
／ｍｌであることが好ましく、４μｇ／ｍｌであること
が最も好ましい。
【００２６】また、培地のｐＨは６．０〜８．０である
ことが好ましく、６．５〜７．５であることがより好ま
しく、ｐＨ７．０であることが最も好ましい。ｐＨの調
整はリン酸ナトリウム−リン酸系などの緩衝液を用いて
行うことができる。
ことが好ましく、６．５〜７．５であることがより好ま
しく、ｐＨ７．０であることが最も好ましい。ｐＨの調
整はリン酸ナトリウム−リン酸系などの緩衝液を用いて
行うことができる。
【００２７】本発明のさらに好ましい態様では、培地に
は１以上の細胞壁合成系をサポートする物質をさらに含
む。細胞壁合成系をサポートする物質はアミノ酸、糖、
ペプチド、ムレインモノマー前駆体、無機塩、ビタミン
類、核酸構成成分、ＡＴＰからなる群より選択されるこ
とが好ましい。アミノ酸としては例えばリジン、グルタ
ミン酸、グリシン、アラニン、グルタミンなどが好まし
く、アミノ酸はＤ体、Ｌ体又はＤＬ体のいずれであって
もよい。糖としては例えばグルコース、グルコサミン、
ムラミン酸などが好ましく、ペプチドとしては例えばAl
a-Glu、Ala-Glu-Lys、Ala-Glu-Lys-Ala-Ala、Ala-Alaな
どが好ましく、無機塩としては例えばMnCl2、MgCl2、Fe
Cl2などが好ましく、ビタミン類としては例えばチアミ
ン、ニコチンアミドなどが好ましく、核酸構成成分とし
ては例えばウラシル、ウリジン、ウリジンモノホスフェ
ートなどが好ましい。
は１以上の細胞壁合成系をサポートする物質をさらに含
む。細胞壁合成系をサポートする物質はアミノ酸、糖、
ペプチド、ムレインモノマー前駆体、無機塩、ビタミン
類、核酸構成成分、ＡＴＰからなる群より選択されるこ
とが好ましい。アミノ酸としては例えばリジン、グルタ
ミン酸、グリシン、アラニン、グルタミンなどが好まし
く、アミノ酸はＤ体、Ｌ体又はＤＬ体のいずれであって
もよい。糖としては例えばグルコース、グルコサミン、
ムラミン酸などが好ましく、ペプチドとしては例えばAl
a-Glu、Ala-Glu-Lys、Ala-Glu-Lys-Ala-Ala、Ala-Alaな
どが好ましく、無機塩としては例えばMnCl2、MgCl2、Fe
Cl2などが好ましく、ビタミン類としては例えばチアミ
ン、ニコチンアミドなどが好ましく、核酸構成成分とし
ては例えばウラシル、ウリジン、ウリジンモノホスフェ
ートなどが好ましい。
【００２８】細胞壁合成系をサポートする物質の添加量
は培地全体中の濃度として、例えばアミノ酸では０．０
０１〜１０％が好ましく、０．０１〜１％がより好まし
い。糖の添加量は０．１〜２０％が好ましく、１〜１０
％がより好ましい。ペプチドの添加量は０．００１〜１
０％が好ましく、０．０１〜１％がより好ましい。無機
塩の添加量は０．００００１〜１．０％が好ましく、
０．０００１〜０．１％がより好ましい。ビタミン類の
添加量は０．００００１〜０．１％が好ましく、０．０
００１〜０．０１％がより好ましい。核酸構成成分の添
加量は０．００１〜１．０％が好ましく、０．０１〜
０．１％がより好ましい。ムレインモノマー前駆体の添
加量は０．００１〜１０％が好ましく、０．０１〜１％
がより好ましい。ＡＴＰの添加量は０．００００１〜
１．０％が好ましく、０．００１〜０．１％がより好ま
しい。
は培地全体中の濃度として、例えばアミノ酸では０．０
０１〜１０％が好ましく、０．０１〜１％がより好まし
い。糖の添加量は０．１〜２０％が好ましく、１〜１０
％がより好ましい。ペプチドの添加量は０．００１〜１
０％が好ましく、０．０１〜１％がより好ましい。無機
塩の添加量は０．００００１〜１．０％が好ましく、
０．０００１〜０．１％がより好ましい。ビタミン類の
添加量は０．００００１〜０．１％が好ましく、０．０
００１〜０．０１％がより好ましい。核酸構成成分の添
加量は０．００１〜１．０％が好ましく、０．０１〜
０．１％がより好ましい。ムレインモノマー前駆体の添
加量は０．００１〜１０％が好ましく、０．０１〜１％
がより好ましい。ＡＴＰの添加量は０．００００１〜
１．０％が好ましく、０．００１〜０．１％がより好ま
しい。
【００２９】これらの細胞壁合成系をサポートする物質
を適宜組み合わせて、追加成分溶液を調製しておき、本
発明のヘテロVRSA検出用培地に添加することができる。
好ましい追加成分溶液の一例を実施例に示すが、これに
限定されず、種々の組み合わせが可能である。
を適宜組み合わせて、追加成分溶液を調製しておき、本
発明のヘテロVRSA検出用培地に添加することができる。
好ましい追加成分溶液の一例を実施例に示すが、これに
限定されず、種々の組み合わせが可能である。
【００３０】本発明の検出方法に使用するβ−ラクタム
剤はペニシリン系、セフェム系、モノバクタム系及びカ
ルバペネム系などの抗菌剤を含み、ペニシリン系抗菌剤
としては例えば、ＭＺＰＣ（メズロシリン）、ＴＩＰＣ
（チカルシリン）、ＭＣＩ−ＰＣ（クロキサシリン）、
ＡＭＰＣ／ＣＶＡ（オーグメンチン）、ＡＭＰＣ（アモ
キシシリン）、ＡＢＰＣ／ＳＢＴ（スルタミシン）、Ｔ
ＩＰＣ／ＣＶＡ（チカルシリン／クラブラン酸）、ＰＣ
−Ｇ（ペニシリン）、ＡＢＰＣ（アンピシリン）、ＣＢ
ＰＣ（カルベニシリン）、ＳＢＰＣ（スルベニシリ
ン）、ＰＩＰＣ（ピペラシリン）、ＭＰＩ−ＰＣ（オキ
サシリン）が挙げられ、セフェム系抗菌剤としては例え
ば、ＣＰＺ（セフォペラゾン）、ＣＺＸ（セフチゾキシ
ム）、ＣＸＭ（セフロキシム）、ＬＭＯＸ（モクサラク
タム）、ＣＣＬ（セファクロル）、ＣＦＰＭ（セフェピ
ム）、ＣＡＺ（セフタジジム）、ＣＴＴ（セフォテタ
ン）、ＣＴＲＸ（セフトリアキソン）、ＣＰＲ（セフピ
ロム）、ＣＤＺＭ（セフォジジム）、ＦＭＯＸ（フロモ
キセフ）、ＣＦＩＸ（セフィキシム）、ＣＢＰＺ（セフ
ブペラゾン）、ＣＦＴＭ（セフテラム）、ＣＭＮＸ（セ
フミノクス）、ＣＰＭ（セフピラミド）、ＣＰＺ／ＳＢ
Ｔ（セフォペラゾン／スルバクタム）、ＣＰＤＸ（セフ
ポドキシム）、ＣＥＴＢ（セフチブテン）、ＣＦＤＮ
（セフジニル）、ＣＥＭＴ（セフェタメト）、ＣＥＴ
（セファロチン）、ＣＥＺ（セファゾリン）、ＣＥＸ
（セファレキシン）、ＣＭＺ（セフメタゾール）、ＣＴ
Ｍ（セフォチアム）、ＣＦＳ（セフスロジン）、ＣＭＸ
（セフメノキシム）、ＣＦＸ（セフォキシチン）、ＣＴ
Ｘ（セフォタキシム）、ＣＭＤ（セファマンドール）が
挙げられ、モノバクタム系抗菌剤としては例えばＣＲＭ
Ｎ（カルモナム）、ＡＺＴ（アズトレオナム）、が挙げ
られ、カルバペネム系抗菌剤としては例えばＩＰＭ／Ｃ
Ｓ（イミペネム／シラスタチン）、ＰＡＰＭ／ＢＰ（カ
ルベニン）、ＭＥＰＭ（メロペネム）、ＢＩＰＭ（ビア
ペネム）が挙げられる。後述の実施例で示すように、本
発明の方法はこれらのいずれの系統のβ−ラクタム剤を
用いても検出が可能であった。これらのβ−ラクタム剤
の複数を用いて検出を確実にすることが好ましい。
剤はペニシリン系、セフェム系、モノバクタム系及びカ
ルバペネム系などの抗菌剤を含み、ペニシリン系抗菌剤
としては例えば、ＭＺＰＣ（メズロシリン）、ＴＩＰＣ
（チカルシリン）、ＭＣＩ−ＰＣ（クロキサシリン）、
ＡＭＰＣ／ＣＶＡ（オーグメンチン）、ＡＭＰＣ（アモ
キシシリン）、ＡＢＰＣ／ＳＢＴ（スルタミシン）、Ｔ
ＩＰＣ／ＣＶＡ（チカルシリン／クラブラン酸）、ＰＣ
−Ｇ（ペニシリン）、ＡＢＰＣ（アンピシリン）、ＣＢ
ＰＣ（カルベニシリン）、ＳＢＰＣ（スルベニシリ
ン）、ＰＩＰＣ（ピペラシリン）、ＭＰＩ−ＰＣ（オキ
サシリン）が挙げられ、セフェム系抗菌剤としては例え
ば、ＣＰＺ（セフォペラゾン）、ＣＺＸ（セフチゾキシ
ム）、ＣＸＭ（セフロキシム）、ＬＭＯＸ（モクサラク
タム）、ＣＣＬ（セファクロル）、ＣＦＰＭ（セフェピ
ム）、ＣＡＺ（セフタジジム）、ＣＴＴ（セフォテタ
ン）、ＣＴＲＸ（セフトリアキソン）、ＣＰＲ（セフピ
ロム）、ＣＤＺＭ（セフォジジム）、ＦＭＯＸ（フロモ
キセフ）、ＣＦＩＸ（セフィキシム）、ＣＢＰＺ（セフ
ブペラゾン）、ＣＦＴＭ（セフテラム）、ＣＭＮＸ（セ
フミノクス）、ＣＰＭ（セフピラミド）、ＣＰＺ／ＳＢ
Ｔ（セフォペラゾン／スルバクタム）、ＣＰＤＸ（セフ
ポドキシム）、ＣＥＴＢ（セフチブテン）、ＣＦＤＮ
（セフジニル）、ＣＥＭＴ（セフェタメト）、ＣＥＴ
（セファロチン）、ＣＥＺ（セファゾリン）、ＣＥＸ
（セファレキシン）、ＣＭＺ（セフメタゾール）、ＣＴ
Ｍ（セフォチアム）、ＣＦＳ（セフスロジン）、ＣＭＸ
（セフメノキシム）、ＣＦＸ（セフォキシチン）、ＣＴ
Ｘ（セフォタキシム）、ＣＭＤ（セファマンドール）が
挙げられ、モノバクタム系抗菌剤としては例えばＣＲＭ
Ｎ（カルモナム）、ＡＺＴ（アズトレオナム）、が挙げ
られ、カルバペネム系抗菌剤としては例えばＩＰＭ／Ｃ
Ｓ（イミペネム／シラスタチン）、ＰＡＰＭ／ＢＰ（カ
ルベニン）、ＭＥＰＭ（メロペネム）、ＢＩＰＭ（ビア
ペネム）が挙げられる。後述の実施例で示すように、本
発明の方法はこれらのいずれの系統のβ−ラクタム剤を
用いても検出が可能であった。これらのβ−ラクタム剤
の複数を用いて検出を確実にすることが好ましい。
【００３１】ディスク中のβ−ラクタム剤の濃度は菌の
種類により、またβ−ラクタム剤の種類によっても異な
り、当業者は検出に用いるそれぞれのβ−ラクタム剤の
至適濃度をディスクを用いる簡単な予備試験により容易
に定めることができる。また後述するように、感受性試
験用ディスクとして市販されている種々のβ−ラクタム
剤ディスクを本発明の方法に用いることができることも
明らかになった。
種類により、またβ−ラクタム剤の種類によっても異な
り、当業者は検出に用いるそれぞれのβ−ラクタム剤の
至適濃度をディスクを用いる簡単な予備試験により容易
に定めることができる。また後述するように、感受性試
験用ディスクとして市販されている種々のβ−ラクタム
剤ディスクを本発明の方法に用いることができることも
明らかになった。
【００３２】例えば、ＣＮＸ３０（ＣＭＮＸを３０μｇ
／ディスク含むディスク略号）、ＣＦＭ５（ＣＦＩＸを
５μｇ／ディスク含むディスク略号）及びＡＴＭ３０
（ＡＺＴを５μｇ／ディスク含むディスク略号）などの
市販のディスクを組み合わせて実施できる。
／ディスク含むディスク略号）、ＣＦＭ５（ＣＦＩＸを
５μｇ／ディスク含むディスク略号）及びＡＴＭ３０
（ＡＺＴを５μｇ／ディスク含むディスク略号）などの
市販のディスクを組み合わせて実施できる。
【００３３】本発明の好ましいヘテロVRSAの検出方法は
以下の工程を含む： （１）試験菌をTripto soy broth(TSB)一夜培養液に、
もしくは単一のコロニーを新鮮ＴＳＢに懸濁し、生理食
塩水にてＯＤ５７８ｎｍで０．３（マックファーランド
＃１）の菌液を作成する、（２）直ちにバンコマイシン
耐性試験用培地に滅菌綿棒を用いて塗末する（このとき
最低２方向から塗末することが好ましい）、（３）β−
ラクタム剤のディスクを置き、ピンセットを用いてディ
スクを軽く押さえる、（４）３５〜３７℃で、２４時間
〜４８時間培養する、（５）ディスク周囲の菌の発育の
有無を観察する。
以下の工程を含む： （１）試験菌をTripto soy broth(TSB)一夜培養液に、
もしくは単一のコロニーを新鮮ＴＳＢに懸濁し、生理食
塩水にてＯＤ５７８ｎｍで０．３（マックファーランド
＃１）の菌液を作成する、（２）直ちにバンコマイシン
耐性試験用培地に滅菌綿棒を用いて塗末する（このとき
最低２方向から塗末することが好ましい）、（３）β−
ラクタム剤のディスクを置き、ピンセットを用いてディ
スクを軽く押さえる、（４）３５〜３７℃で、２４時間
〜４８時間培養する、（５）ディスク周囲の菌の発育の
有無を観察する。
【００３４】上記試験で、ディスクの周囲に発育を認め
る場合にはヘテロVRSAと判定する。ディスク周囲のみな
らず、培地全面に発育を認める場合にはホモVRSA と判
定する。また、培地に全く発育を認めない場合には感受
性菌と判定する。
る場合にはヘテロVRSAと判定する。ディスク周囲のみな
らず、培地全面に発育を認める場合にはホモVRSA と判
定する。また、培地に全く発育を認めない場合には感受
性菌と判定する。
【００３５】本発明は、上述のバンコマイシン耐性黄色
ブドウ球菌の検出方法及び検出培地に加えて、バンコマ
イシン耐性黄色ブドウ球菌の検出用キットを提供するも
のである。該検出用キットには、本発明のバンコマイシ
ン耐性黄色ブドウ球菌の検出用培地を少なくとも含み、
この検出用培地はあらゆるフォーマットのものでありう
る。キットには、その他に１以上の種類のβ−ラクタム
剤含有ディスク、塗抹用綿棒、標準菌液、使用説明書な
どを含めてもよい。
ブドウ球菌の検出方法及び検出培地に加えて、バンコマ
イシン耐性黄色ブドウ球菌の検出用キットを提供するも
のである。該検出用キットには、本発明のバンコマイシ
ン耐性黄色ブドウ球菌の検出用培地を少なくとも含み、
この検出用培地はあらゆるフォーマットのものでありう
る。キットには、その他に１以上の種類のβ−ラクタム
剤含有ディスク、塗抹用綿棒、標準菌液、使用説明書な
どを含めてもよい。
【００３６】このヘテロVRSAであるMu3株は、約１０-6
以上の頻度でホモVRSA（MIC値が８μｇ／ｍｌ）を生み
出すことが確認された。また、ヘテロVRSAは日本の大学
病院で検出されるMRSAの約１０％に見いだされ、多くの
バンコマイシン治療無効症例に関与している可能性があ
る。
以上の頻度でホモVRSA（MIC値が８μｇ／ｍｌ）を生み
出すことが確認された。また、ヘテロVRSAは日本の大学
病院で検出されるMRSAの約１０％に見いだされ、多くの
バンコマイシン治療無効症例に関与している可能性があ
る。
【００３７】バンコマイシンはMRSA感染に対する優れた
治療薬である。しかしながら、今回、本発明者らが見い
だしたように、ヘテロVRSAではバンコマイシンとβ−ラ
クタム剤が拮抗作用を示す。従って、ヘテロVRSAが検出
された場合には、バンコマイシンとβ−ラクタム剤との
併用を避けるべきであり、バンコマイシンの乱用をこの
まま継続すれば、間違いなくバンコマイシン耐性菌は増
加するであろう。
治療薬である。しかしながら、今回、本発明者らが見い
だしたように、ヘテロVRSAではバンコマイシンとβ−ラ
クタム剤が拮抗作用を示す。従って、ヘテロVRSAが検出
された場合には、バンコマイシンとβ−ラクタム剤との
併用を避けるべきであり、バンコマイシンの乱用をこの
まま継続すれば、間違いなくバンコマイシン耐性菌は増
加するであろう。
【００３８】よって、ヘテロVRSAの早期における簡便で
確実な検出が非常に重要であり、これによってMRSAの治
療薬を決定することができる。新規知見に基づく本発明
の臨床的な意味は極めて重大である。
確実な検出が非常に重要であり、これによってMRSAの治
療薬を決定することができる。新規知見に基づく本発明
の臨床的な意味は極めて重大である。
【００３９】以下の実施例において本発明をさらに詳し
く説明するが、本発明の範囲はこれに限定されない。本
明細書の記載に基づき、種々の変更、修飾が当業者には
可能であり、これらも本発明の範囲に含まれる。
く説明するが、本発明の範囲はこれに限定されない。本
明細書の記載に基づき、種々の変更、修飾が当業者には
可能であり、これらも本発明の範囲に含まれる。
【００４０】
【実施例】実施例１：ヘテロVRSAの単離と性状決定Mu3株の分離 肺癌手術後にMRSA肺炎に感染した患者（６４才、日本人
男性）からMu3株を臨床的に分離した。この患者はバン
コマイシン（４２ｍｇ／ｋｇ／日）で１２日間治療した
が無効であり、バンコマイシン治療の最後の４日間は肺
炎が悪化していた。次いで、この患者をアンピシリン／
スルバクタムとアルベカシンの組み合わせによって１０
日間治療することに成功した。組み合わせ治療の終了直
前にこの患者の膿痰からMu3を分離した。
男性）からMu3株を臨床的に分離した。この患者はバン
コマイシン（４２ｍｇ／ｋｇ／日）で１２日間治療した
が無効であり、バンコマイシン治療の最後の４日間は肺
炎が悪化していた。次いで、この患者をアンピシリン／
スルバクタムとアルベカシンの組み合わせによって１０
日間治療することに成功した。組み合わせ治療の終了直
前にこの患者の膿痰からMu3を分離した。
【００４１】比較に用いたその他の菌株の由来 バンコマイシンのMIC値が８μｇ／ｍｌのMRSA株（Mu5
0）は、本発明者らが、肺動脈閉鎖症４ヶ月男児の心臓
手術正中切開部に生じたMRSA創感染部位から分離した、
（Hiramatsu, K. et al., J. Antimicrob. Chemother.
40:135-136, 1997）。
0）は、本発明者らが、肺動脈閉鎖症４ヶ月男児の心臓
手術正中切開部に生じたMRSA創感染部位から分離した、
（Hiramatsu, K. et al., J. Antimicrob. Chemother.
40:135-136, 1997）。
【００４２】MRSA H1株は、MRSA肺炎患者（８６才、日
本人男性）の膿痰から分離した。この患者は突発性慢性
腎不全（Ccr=11.5ml／分）にかかっており、肺炎は２１
日間にわたるバンコマイシン（４〜５日ごとに０．５又
は１．０ｇ）で治療に成功した。
本人男性）の膿痰から分離した。この患者は突発性慢性
腎不全（Ccr=11.5ml／分）にかかっており、肺炎は２１
日間にわたるバンコマイシン（４〜５日ごとに０．５又
は１．０ｇ）で治療に成功した。
【００４３】黄色ブドウ球菌の菌株であるFDA209P(ATCC
6538P)は、国立予防衛生研究所から購入した。
6538P)は、国立予防衛生研究所から購入した。
【００４４】感受性試験 MIC値はBHI寒天平板を用いて測定した。３７℃で１６時
間インキュベーションした後の５ｘ１０4ＣＦＵ／ｓｐ
ｏｔの増殖を阻害する抗生物質の最小発育阻止濃度をMI
C値とした。この方法で測定したMu3株のMIC値は２μｇ
／ｍｌであり、NCCLSの基準では感受性菌に分類され
る。
間インキュベーションした後の５ｘ１０4ＣＦＵ／ｓｐ
ｏｔの増殖を阻害する抗生物質の最小発育阻止濃度をMI
C値とした。この方法で測定したMu3株のMIC値は２μｇ
／ｍｌであり、NCCLSの基準では感受性菌に分類され
る。
【００４５】ポピュレーション分析 細菌の耐性サブポピュレーション分析（ポピュレーショ
ン分析）は、細胞懸濁液（578nmにおいてOD 0.3まで培
養した一夜培養液を希釈して調製）及びその連続希釈液
５０μｌを種々の濃度のバンコマイシンを含有するBHI
寒天平板に塗抹することによって実施した。平板は３７
℃で４８時間インキュベートし、成熟コロニー数を計数
した。細胞懸濁液５０μｌ中に理論上含まれる耐性細胞
数を計算し、両対数グラフにプロットした。
ン分析）は、細胞懸濁液（578nmにおいてOD 0.3まで培
養した一夜培養液を希釈して調製）及びその連続希釈液
５０μｌを種々の濃度のバンコマイシンを含有するBHI
寒天平板に塗抹することによって実施した。平板は３７
℃で４８時間インキュベートし、成熟コロニー数を計数
した。細胞懸濁液５０μｌ中に理論上含まれる耐性細胞
数を計算し、両対数グラフにプロットした。
【００４６】バンコマイシン耐性黄色ブドウ球菌である
Mu50、Mu3のポピュレーション分析をバンコマイシン感
受性のMRSA H1及びFDA209Pのポピュレーション分析と比
較した結果を図１に示す。Mu50細胞は４μｇ／ｍｌバン
コマイシン中で１００％生育でき、１０μｇ／ｍｌバン
コマイシンでも約０．００１％の細胞が生育できた。
Mu50、Mu3のポピュレーション分析をバンコマイシン感
受性のMRSA H1及びFDA209Pのポピュレーション分析と比
較した結果を図１に示す。Mu50細胞は４μｇ／ｍｌバン
コマイシン中で１００％生育でき、１０μｇ／ｍｌバン
コマイシンでも約０．００１％の細胞が生育できた。
【００４７】これに対して、Mu3は、４μｇ／ｍｌバン
コマイシンでほぼ９９．９９％の細胞が阻害されたの
で、Mu50よりもバンコマイシンに感受性であると考えら
れた。しかしながら、Mu3はMu50と同様に、５〜９μｇ
／ｍｌバンコマイシンの存在下でも生育できる耐性サブ
ポピュレーションを含んでいた。
コマイシンでほぼ９９．９９％の細胞が阻害されたの
で、Mu50よりもバンコマイシンに感受性であると考えら
れた。しかしながら、Mu3はMu50と同様に、５〜９μｇ
／ｍｌバンコマイシンの存在下でも生育できる耐性サブ
ポピュレーションを含んでいた。
【００４８】一方、バンコマイシン感受性のMRSA H1及
びFDA209Pの細胞は、その１００％が４μｇ／ｍｌで完
全に生育阻害された。
びFDA209Pの細胞は、その１００％が４μｇ／ｍｌで完
全に生育阻害された。
【００４９】従って、Mu50株は、バンコマイシン濃度と
生存細胞数から得られるポピュレーションカーブから、
バンコマイシンに対して均一に高い耐性を有する菌株で
あると考えられ、本発明者らはこれをホモVRSA（vancom
ycin-resistant Stapylococcus aureus） と命名し、一
方Mu3株はポピュレーションカーブから種々の耐性度の
細胞を含む不均一な集団であることが確認され、本発明
らはバンコマイシン感受性株と区別するために、これを
ヘテロVRSAと命名した。
生存細胞数から得られるポピュレーションカーブから、
バンコマイシンに対して均一に高い耐性を有する菌株で
あると考えられ、本発明者らはこれをホモVRSA（vancom
ycin-resistant Stapylococcus aureus） と命名し、一
方Mu3株はポピュレーションカーブから種々の耐性度の
細胞を含む不均一な集団であることが確認され、本発明
らはバンコマイシン感受性株と区別するために、これを
ヘテロVRSAと命名した。
【００５０】実施例２：ヘテロVRSA株Mu3からのホモVRS
Aの出現 Mu3株中に含まれる耐性細胞がMu50のようなホモVRSAを
生じうるかを検討した。種々の濃度のバンコマイシンに
Mu3をさらすことによって、Mu3のサブクローンを得た。
Aの出現 Mu3株中に含まれる耐性細胞がMu50のようなホモVRSAを
生じうるかを検討した。種々の濃度のバンコマイシンに
Mu3をさらすことによって、Mu3のサブクローンを得た。
【００５１】その結果、合計８２の耐性サブクローン
（１〜８μｇ／ｍｌのバンコマイシン選択濃度でそれぞ
れ１０サブクローン、また９μｇ／ｍｌのバンコマイシ
ン選択濃度で２サブクローン）を得て、そのMIC値を決
定した。表１は耐性サブクローンの出現頻度及びMICの
分布を示す。
（１〜８μｇ／ｍｌのバンコマイシン選択濃度でそれぞ
れ１０サブクローン、また９μｇ／ｍｌのバンコマイシ
ン選択濃度で２サブクローン）を得て、そのMIC値を決
定した。表１は耐性サブクローンの出現頻度及びMICの
分布を示す。
【００５２】
【表１】
【００５３】選択に用いたバンコマイシン濃度が上昇す
るにつれて、サブクローンのMIC値範囲も上昇した。し
かしながら、Mu50のバンコマイシン耐性レベル（MICが
８μｇ／ｍｌ）を達成したサブクローンが得られたの
は、選択に用いたバンコマイシン濃度が８及び９μｇ／
ｍｌの場合のみであった。
るにつれて、サブクローンのMIC値範囲も上昇した。し
かしながら、Mu50のバンコマイシン耐性レベル（MICが
８μｇ／ｍｌ）を達成したサブクローンが得られたの
は、選択に用いたバンコマイシン濃度が８及び９μｇ／
ｍｌの場合のみであった。
【００５４】さらに、表１を解析することにより、Mu3
からホモVRSAが約１０-6以上の頻度で出現することを確
認した。
からホモVRSAが約１０-6以上の頻度で出現することを確
認した。
【００５５】実施例３：ホモVRSA及びヘテロVRSAのスク
リーニング 日本の大学病院７施設から入手した合計１２９のMRSA株
と、日本の非大学病院１９５施設から入手した合計９７
０のMRSA株を試験した。試験は簡易法ポピュレーション
分析により行った。すなわち、一夜培養した菌液をOD 5
78nmで０．３に調整し、その菌液を４μｇ／ｍｌバンコ
マイシンを含むBHI寒天平板上にスポットした。平板を
３７℃で４８時間インキュベートし、２４時間後及び４
８時間後に細胞の生育を観察した。４８時間で細胞の生
育が全く観察されない場合には、バンコマイシンに対し
て感受性と考えられる。２４時間以内にコンフルエント
な生育が観察される場合には、この株はホモVRSAと疑わ
れる。４８時間以内に計数しうる数（１〜３０）のコロ
ニーが観察される場合には、この株はヘテロVRSAと疑わ
れる。バンコマイシン８μｇ／ｍｌで選択したときに、
バンコマイシン８μｇ／ｍｌ又はそれ以上のMICを有
し、かつその耐性レベルが薬剤不含培地中で９日間培養
した後にも安定に維持されるようなサブクローンを生じ
たときに、ホモVRSAであると最終的に判定した。
リーニング 日本の大学病院７施設から入手した合計１２９のMRSA株
と、日本の非大学病院１９５施設から入手した合計９７
０のMRSA株を試験した。試験は簡易法ポピュレーション
分析により行った。すなわち、一夜培養した菌液をOD 5
78nmで０．３に調整し、その菌液を４μｇ／ｍｌバンコ
マイシンを含むBHI寒天平板上にスポットした。平板を
３７℃で４８時間インキュベートし、２４時間後及び４
８時間後に細胞の生育を観察した。４８時間で細胞の生
育が全く観察されない場合には、バンコマイシンに対し
て感受性と考えられる。２４時間以内にコンフルエント
な生育が観察される場合には、この株はホモVRSAと疑わ
れる。４８時間以内に計数しうる数（１〜３０）のコロ
ニーが観察される場合には、この株はヘテロVRSAと疑わ
れる。バンコマイシン８μｇ／ｍｌで選択したときに、
バンコマイシン８μｇ／ｍｌ又はそれ以上のMICを有
し、かつその耐性レベルが薬剤不含培地中で９日間培養
した後にも安定に維持されるようなサブクローンを生じ
たときに、ホモVRSAであると最終的に判定した。
【００５６】その結果、ホモVRSAであると判定されたの
は大学病院由来の１検体のみであり、その他の日本の病
院からは検出されなかった。一方、ヘテロVRSAは大学病
院で９．３％（１２／１２９）、非大学病院で１．３％
（１３／９７０）であった。
は大学病院由来の１検体のみであり、その他の日本の病
院からは検出されなかった。一方、ヘテロVRSAは大学病
院で９．３％（１２／１２９）、非大学病院で１．３％
（１３／９７０）であった。
【００５７】実施例４：ヘテロVRSA検出用培地の検討 （１）Agar dilution法における培地の検討を以下のよ
うにして行った。
うにして行った。
【００５８】ＭＨＡ（Muller Hinton Agar）、ウマ血清
添加ＭＨＡ、ＢＨＩＡ及びＨＩＡの各培地を用いてMIC
値を求めた。得られた結果を図２に示す。ＭＨＡでは、
FDA209P株、MRSA H1株は０．５μｇ／ｍｌ、Mu3株は１
μｇ／ｍｌ、Mu50株は４μｇ／ｍｌを示した。ウマ血清
添加ＭＨＡではいずれも２倍近い値を示した。Mu3株を
バンコマイシン８μｇ／ｍｌで選択して得られたMu3-8R
株とMu50株は８μｇ／ｍｌであった。このMIC値と同様
のMICを示した培地はＢＨＩＡとＨＩＡであった。
添加ＭＨＡ、ＢＨＩＡ及びＨＩＡの各培地を用いてMIC
値を求めた。得られた結果を図２に示す。ＭＨＡでは、
FDA209P株、MRSA H1株は０．５μｇ／ｍｌ、Mu3株は１
μｇ／ｍｌ、Mu50株は４μｇ／ｍｌを示した。ウマ血清
添加ＭＨＡではいずれも２倍近い値を示した。Mu3株を
バンコマイシン８μｇ／ｍｌで選択して得られたMu3-8R
株とMu50株は８μｇ／ｍｌであった。このMIC値と同様
のMICを示した培地はＢＨＩＡとＨＩＡであった。
【００５９】（２）NCCLS法に従ったmircobroth diluti
on法でMICを測定して（１）の結果と比較した。図３に
示すように、FDA209P株は０．５μｇ／ｍｌ、MRSA H1株
は１μｇ／ｍｌ、Mu3株は２μｇ／ｍｌ、Mu50株は８μ
ｇ／ｍｌを示した。ＢＨＩＡ、ＨＩＡにおけるagar dil
ution法のMIC値はこれらの結果を反映しており、ＢＨＩ
Ａ及びＨＩＡがＶＲＳＡ検出培地として適していること
が示唆された。
on法でMICを測定して（１）の結果と比較した。図３に
示すように、FDA209P株は０．５μｇ／ｍｌ、MRSA H1株
は１μｇ／ｍｌ、Mu3株は２μｇ／ｍｌ、Mu50株は８μ
ｇ／ｍｌを示した。ＢＨＩＡ、ＨＩＡにおけるagar dil
ution法のMIC値はこれらの結果を反映しており、ＢＨＩ
Ａ及びＨＩＡがＶＲＳＡ検出培地として適していること
が示唆された。
【００６０】（３）ＳＴＡ、ＭＨＡ、ＴＳＡ、ＨＩＡ及
びＢＨＩＡの各培地を用いてMu3株のポピュレーション
分析を行い、さらに培地を検討した。図４に示すよう
に、ＳＴＡ（Sensitivity Test Agar）、ＭＨＡ、ＴＳ
Ａと比べて、ＨＩＡ及びＢＨＩＡではバンコマイシン濃
度の約２倍高濃度側にシフトしたポピュレーションカー
ブを示し、耐性株の検出に適していると考えられた。
びＢＨＩＡの各培地を用いてMu3株のポピュレーション
分析を行い、さらに培地を検討した。図４に示すよう
に、ＳＴＡ（Sensitivity Test Agar）、ＭＨＡ、ＴＳ
Ａと比べて、ＨＩＡ及びＢＨＩＡではバンコマイシン濃
度の約２倍高濃度側にシフトしたポピュレーションカー
ブを示し、耐性株の検出に適していると考えられた。
【００６１】実施例５：ヘテロVRSAにおけるバンコマイ
シンとβ−ラクタム剤の併用効果 バンコマイシンとβ−ラクタム剤との併用効果を寒天平
板希釈法によるChecker board法によって行い、下記の
式よりminimal fractional inhibitory concentration
index（min. FIC index）を算出し、下記に示す基準で
相乗効果、相加効果、不完及び拮抗作用を判定した。得
られた結果を表２に示す。
シンとβ−ラクタム剤の併用効果 バンコマイシンとβ−ラクタム剤との併用効果を寒天平
板希釈法によるChecker board法によって行い、下記の
式よりminimal fractional inhibitory concentration
index（min. FIC index）を算出し、下記に示す基準で
相乗効果、相加効果、不完及び拮抗作用を判定した。得
られた結果を表２に示す。
【００６２】
【表２】
【００６３】なお、Mu6, Mu7, Mu13, Mu20, Mu22, Mu2
6, Mu46, Mu49は、本発明者らが臨床材料から分離したM
RSA株である。
6, Mu46, Mu49は、本発明者らが臨床材料から分離したM
RSA株である。
【００６４】表２から明らかなように、Mu3株は全ての
β−ラクタム剤でバンコマイシンとの拮抗作用が観察さ
れた。
β−ラクタム剤でバンコマイシンとの拮抗作用が観察さ
れた。
【００６５】実施例６：バンコマイシンとβ−ラクタム
剤の拮抗作用 バンコマイシンとβ−ラクタム剤（ＳＢＴ／ＡＢＰＣ）
との拮抗作用を、バンコマイシン１μｇ／ｍｌ含有培地
を用いたポピュレーション解析により確認した。
剤の拮抗作用 バンコマイシンとβ−ラクタム剤（ＳＢＴ／ＡＢＰＣ）
との拮抗作用を、バンコマイシン１μｇ／ｍｌ含有培地
を用いたポピュレーション解析により確認した。
【００６６】１μｇ／ｍｌ含有ＨＩＡ培地に図５に示す
種々の濃度のＳＢＴ／ＡＢＰＣを添加した培地上におけ
るMu3株の生育を調べた。図５に示すように、バンコマ
イシン１μｇ／ｍｌ単独を含む培地での残存生存率は１
０3ＣＦＵ／ｍｌであるが、ＳＢＴ／ＡＢＰＣを添加し
た場合、０．１２５〜８μｇ／ｍｌの範囲で残存生存率
の増加が確認された。これはＳＢＴ／ＡＢＰＣとバンコ
マイシンの明確な拮抗現象を示すものである。
種々の濃度のＳＢＴ／ＡＢＰＣを添加した培地上におけ
るMu3株の生育を調べた。図５に示すように、バンコマ
イシン１μｇ／ｍｌ単独を含む培地での残存生存率は１
０3ＣＦＵ／ｍｌであるが、ＳＢＴ／ＡＢＰＣを添加し
た場合、０．１２５〜８μｇ／ｍｌの範囲で残存生存率
の増加が確認された。これはＳＢＴ／ＡＢＰＣとバンコ
マイシンの明確な拮抗現象を示すものである。
【００６７】実施例７：β−ラクタム剤によるバンコマ
イシン耐性の誘導 β−ラクタム剤の存在の有無によるヘテロVRSAであるMu
3株のバンコマイシン耐性の変化を検討した。バンコマ
イシン０〜４μｇ／ｍｌの濃度勾配を有するＢＨＩＡ培
地のグラジエントゲルを作成して検討した。このグラジ
エントゲルの一方にはβ−ラクタム剤を含まず、他方に
はβ−ラクタム剤であるＣＺＸを０．１μｇ／ｍｌ添加
した。
イシン耐性の誘導 β−ラクタム剤の存在の有無によるヘテロVRSAであるMu
3株のバンコマイシン耐性の変化を検討した。バンコマ
イシン０〜４μｇ／ｍｌの濃度勾配を有するＢＨＩＡ培
地のグラジエントゲルを作成して検討した。このグラジ
エントゲルの一方にはβ−ラクタム剤を含まず、他方に
はβ−ラクタム剤であるＣＺＸを０．１μｇ／ｍｌ添加
した。
【００６８】感受性菌株のFDA209P株（ATCC6538P）、MR
SA H1株及びホモVRSAのMu50を対照として用いた。
SA H1株及びホモVRSAのMu50を対照として用いた。
【００６９】得られた結果を図６に示す。FDA209P株（A
TCC6538P）、MRSA H1株ではＣＺＸ添加の有無にかかわ
らず、低いMIC値を示し、またMu50株ではＣＺＸ添加の
有無にかかわらず、高いMIC値を示した。ところが、Mu3
株ではＣＺＸ無添加培地に比べて、ＣＺＸ添加培地では
より高いMIC値にシフトすることが観察された。これは
β−ラクタム剤の添加によってバンコマイシン耐性が誘
導されたことを示す。
TCC6538P）、MRSA H1株ではＣＺＸ添加の有無にかかわ
らず、低いMIC値を示し、またMu50株ではＣＺＸ添加の
有無にかかわらず、高いMIC値を示した。ところが、Mu3
株ではＣＺＸ無添加培地に比べて、ＣＺＸ添加培地では
より高いMIC値にシフトすることが観察された。これは
β−ラクタム剤の添加によってバンコマイシン耐性が誘
導されたことを示す。
【００７０】実施例８：種々のβ−ラクタム剤ディスク
によるバンコマイシン耐性の誘導 β−ラクタム剤によるバンコマイシン耐性の誘導をβ−
ラクタム剤のディスクを用いて試験した。
によるバンコマイシン耐性の誘導 β−ラクタム剤によるバンコマイシン耐性の誘導をβ−
ラクタム剤のディスクを用いて試験した。
【００７１】ＴＳＢ培地中、３７℃で一夜前培養したMu
3株を試験菌として用いた。
3株を試験菌として用いた。
【００７２】バンコマイシン３μｇ／ｍｌ含有のＢＨＩ
Ａ培地に、マクファーランド１．０に合わせたMu3株を
塗抹し、種々のβ−ラクタム剤ディスク（ＰＣＧ １０
μｇ／ｍｌ、ＣＥＺ １０μｇ／ｍｌ、ＣＺＸ １０μ
ｇ／ｍｌ、ＬＭＯＸ １００μｇ／ｍｌ）をのせて、３
７℃で２０時間インキュベートした。
Ａ培地に、マクファーランド１．０に合わせたMu3株を
塗抹し、種々のβ−ラクタム剤ディスク（ＰＣＧ １０
μｇ／ｍｌ、ＣＥＺ １０μｇ／ｍｌ、ＣＺＸ １０μ
ｇ／ｍｌ、ＬＭＯＸ １００μｇ／ｍｌ）をのせて、３
７℃で２０時間インキュベートした。
【００７３】得られた結果を図７に示す。いずれのβ−
ラクタム剤でもディスク周囲に生育円が観察され、β−
ラクタム剤によってバンコマイシン耐性が誘導されるこ
とが確認された。
ラクタム剤でもディスク周囲に生育円が観察され、β−
ラクタム剤によってバンコマイシン耐性が誘導されるこ
とが確認された。
【００７４】結果は示していないが、ホモVRSAであるMu
50株では、平板の全面に菌が生育した。
50株では、平板の全面に菌が生育した。
【００７５】実施例９：β−ラクタム剤の至適誘導濃度 ヘテロVRSAの簡易検出法におけるβ−ラクタム剤ディス
クの至適誘導濃度を検討した。
クの至適誘導濃度を検討した。
【００７６】ＴＳＢ培地中、３７℃で一夜前培養したMu
3株を試験菌として用いた。
3株を試験菌として用いた。
【００７７】バンコマイシン３μｇ／ｍｌ含有のＢＨＩ
Ａ培地に、マクファーランド１．０に合わせたMu3株を
塗抹し、濃度の異なるβ−ラクタム剤ディスク（ＣＭＺ
１０μｇ／ｍｌ及び３０μｇ／ｍｌディスク）をのせ
て、３７℃で２０時間インキュベートした。
Ａ培地に、マクファーランド１．０に合わせたMu3株を
塗抹し、濃度の異なるβ−ラクタム剤ディスク（ＣＭＺ
１０μｇ／ｍｌ及び３０μｇ／ｍｌディスク）をのせ
て、３７℃で２０時間インキュベートした。
【００７８】得られた結果を図８に示す。１０μｇ／ｍ
ｌではディスク周囲に均一な生育が観察され、３０μｇ
／ｍｌではディスク周囲に一定の距離をおいてリング状
に生育が観察された。この試験から、ヘテロVRSA検出に
おいては、β−ラクタム剤に至適誘導濃度が存在するこ
とがわかる。
ｌではディスク周囲に均一な生育が観察され、３０μｇ
／ｍｌではディスク周囲に一定の距離をおいてリング状
に生育が観察された。この試験から、ヘテロVRSA検出に
おいては、β−ラクタム剤に至適誘導濃度が存在するこ
とがわかる。
【００７９】実施例１０：培地への追加成分の効果 培地に細胞壁合成系をサポートする物質を追加すること
が検出に及ぼす効果を試験した。
が検出に及ぼす効果を試験した。
【００８０】以下の成分： リン酸ナトリウム ６９．６ｇ グルコース ２５．７ｇ Ｌ−リジン ０．１８ｇ Ｌ−グルタミン酸 ０．７４ｇ Ｌ−グリシン ０．３８ｇ アラニン ０．２２ｇ ＭｎＣｌ2 ０．５０ｇ ウラシル ０．１０ｇ チアミン ０．００４ｇ ニコチンアミド ０．００５ｇ を滅菌蒸留水５００ｍｌに溶解し、０．１Ｎリン酸にて
ｐＨ７．０に調整し、滅菌濾過することによって追加成
分溶液を調製した。
ｐＨ７．０に調整し、滅菌濾過することによって追加成
分溶液を調製した。
【００８１】バンコマイシン３μｇ／ｍｌ及び４μｇ／
ｍｌ含有のＨＩＡ培地、並びに同じ培地に上記の追加成
分溶液を添加した培地を調製した（実際には、上記の追
加成分溶液中にＨＩＡ培地の成分を加えることによって
調製）。両方の培地全面にヘテロVRSA（Mu3株）を塗抹
した。β−ラクタム剤としてＣＺＸ １０μｇ／ｍｌ、
及び３０μｇ／ｍｌを用いて、ヘテロVRSA（Mu3株）の
検出を比較した。
ｍｌ含有のＨＩＡ培地、並びに同じ培地に上記の追加成
分溶液を添加した培地を調製した（実際には、上記の追
加成分溶液中にＨＩＡ培地の成分を加えることによって
調製）。両方の培地全面にヘテロVRSA（Mu3株）を塗抹
した。β−ラクタム剤としてＣＺＸ １０μｇ／ｍｌ、
及び３０μｇ／ｍｌを用いて、ヘテロVRSA（Mu3株）の
検出を比較した。
【００８２】図９は、バンコマイシン３μｇ／ｍｌを用
いたときの結果である（左側が追加成分溶液を添加しな
い場合、右側が添加した場合である）。ＨＩＡ培地のみ
でも検出が可能であるが、追加成分溶液を添加した方が
より明確に検出できることがわかる。
いたときの結果である（左側が追加成分溶液を添加しな
い場合、右側が添加した場合である）。ＨＩＡ培地のみ
でも検出が可能であるが、追加成分溶液を添加した方が
より明確に検出できることがわかる。
【００８３】図１０は、バンコマイシン４μｇ／ｍｌを
用いたときの結果である（左側が追加成分溶液を添加し
ない場合、右側が添加した場合である）。ＨＩＡ培地の
みでは検出されず、追加成分溶液を添加すると、非常に
明確に検出できることがわかる。
用いたときの結果である（左側が追加成分溶液を添加し
ない場合、右側が添加した場合である）。ＨＩＡ培地の
みでは検出されず、追加成分溶液を添加すると、非常に
明確に検出できることがわかる。
【００８４】実施例１１：各種β−ラクタム剤を用いた
測定結果 ペニシリン系、セフェム系、その他のβ−ラクタム剤デ
ィスクを用いて、Mu3株及び本発明者が別途分離したヘ
テロVRSAであるJ4-9株の検出を行った。バンコマイシン
４μｇ／ｍｌを含むＢＨＩＡ培地（実施例９に記載の追
加成分溶液を含む）で、３５℃でインキュベートし、２
４時間後及び４８時間後に結果を判定した。
測定結果 ペニシリン系、セフェム系、その他のβ−ラクタム剤デ
ィスクを用いて、Mu3株及び本発明者が別途分離したヘ
テロVRSAであるJ4-9株の検出を行った。バンコマイシン
４μｇ／ｍｌを含むＢＨＩＡ培地（実施例９に記載の追
加成分溶液を含む）で、３５℃でインキュベートし、２
４時間後及び４８時間後に結果を判定した。
【００８５】得られた結果を表３〜４に示す。
【００８６】
【表３】
【００８７】
【表４】
【００８８】表中、”out”はディスクから離れてコロ
ニーができたことを示し、”in”はディスクとくっつい
てコロニーができたことを示す。また、生育の大きさを
目視で判定し、１＋〜３＋で評価した。また、星印は２
４時間後には観察されなかったが、４８時間後に観察さ
れたことを示す。
ニーができたことを示し、”in”はディスクとくっつい
てコロニーができたことを示す。また、生育の大きさを
目視で判定し、１＋〜３＋で評価した。また、星印は２
４時間後には観察されなかったが、４８時間後に観察さ
れたことを示す。
【００８９】いずれの系統のβ−ラクタム剤を用いても
ヘテロVRSAの検出が可能であることが判明した。
ヘテロVRSAの検出が可能であることが判明した。
【００９０】
【発明の効果】本発明を用いると、簡単かつ確実に従来
の方法では検出不可能なヘテロVRSAの検出を行うことが
できる。ヘテロVRSAはホモVRSAの前駆体であると考えら
れ、これを早期に検出することが、適切な治療薬を選択
するうえで重要である。本発明の方法では、β−ラクタ
ム剤ディスク周囲に濃度グラジエントが形成されるた
め、現在までに発見されたヘテロVRSA株の検出のみでな
く、新規に出現するヘテロVRSA株であっても、グラジエ
ント濃度のいずれかの部位で検出できる可能性が高い。
本発明の臨床分野における利用は極めて大きい。
の方法では検出不可能なヘテロVRSAの検出を行うことが
できる。ヘテロVRSAはホモVRSAの前駆体であると考えら
れ、これを早期に検出することが、適切な治療薬を選択
するうえで重要である。本発明の方法では、β−ラクタ
ム剤ディスク周囲に濃度グラジエントが形成されるた
め、現在までに発見されたヘテロVRSA株の検出のみでな
く、新規に出現するヘテロVRSA株であっても、グラジエ
ント濃度のいずれかの部位で検出できる可能性が高い。
本発明の臨床分野における利用は極めて大きい。
【図１】ホモVRSAであるMu50、ヘテロVRSAであるMu3、
及びバンコマイシン感受性のMRSA H1とFDA209Pのポピュ
レーションカーブを示す。
及びバンコマイシン感受性のMRSA H1とFDA209Pのポピュ
レーションカーブを示す。
【図２】MHA、ウマ血清添加MHA、BHIA及びHIAの各培地
を用いて種々の菌のMIC値を求めた結果を示す。
を用いて種々の菌のMIC値を求めた結果を示す。
【図３】NCCLS法に従ったmicrobroth dilution法でMIC
を測定し、HIA及びBHIA培地による寒天平板希釈法で測
定したMICと比較した結果を示す。
を測定し、HIA及びBHIA培地による寒天平板希釈法で測
定したMICと比較した結果を示す。
【図４】ＳＴＡ、ＭＨＡ、ＴＳＡ、ＨＩＡ及びＢＨＩＡ
の各培地を用いてMu3株のポピュレーション分析を行っ
た結果を示す。
の各培地を用いてMu3株のポピュレーション分析を行っ
た結果を示す。
【図５】バンコマイシンとβ−ラクタム剤との拮抗作用
を示すポピュレーション解析の結果を示す。
を示すポピュレーション解析の結果を示す。
【図６】β−ラクタム剤の存在の有無によるMu3株のバ
ンコマイシン耐性の変化をグラジエントゲル培地を用い
て試験した結果を示す。
ンコマイシン耐性の変化をグラジエントゲル培地を用い
て試験した結果を示す。
【図７】種々のβ−ラクタム剤ディスクを用いて行った
によるバンコマイシン耐性の誘導試験の結果を示す。
によるバンコマイシン耐性の誘導試験の結果を示す。
【図８】β−ラクタム剤ディスク中に含まれるβ−ラク
タム剤濃度と得られるコロニーの一例を示す。
タム剤濃度と得られるコロニーの一例を示す。
【図９】バンコマイシン３μｇ／ｍｌ含有培地におけ
る、追加成分の添加の効果を示す。
る、追加成分の添加の効果を示す。
【図１０】バンコマイシン４μｇ／ｍｌ含有培地におけ
る、追加成分の添加の効果を示す。
る、追加成分の添加の効果を示す。
フロントページの続き (73)特許権者 595117091 １ ＢＥＣＴＯＮ ＤＲＩＶＥ， ＦＲ ＡＮＫＬＩＮ ＬＡＫＥＳ， ＮＥＷ ＪＥＲＳＥＹ 07417−1880， ＵＮＩ ＴＥＤ ＳＴＡＴＥＳ ＯＦ ＡＭＥＲ ＩＣＡ (56)参考文献 特開 平６−253892（ＪＰ，Ａ) 日本化学療法学会雑誌，（５月．1997 年）Ｖｏｌ．45 ｓｕｐｐｌ．Ａ，ｐ. 138 Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ Ｃｈｅｍｏ ｔｈｅｒａｐｙ，（９．1997）Ｖｏｌ. １，Ｎｏ．３，ｐ．５ (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12Q 1/00 - 1/20 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (6)
- 【請求項１】ＨＩＡ培地又はＢＨＩＡ培地中に、以下の
成分： １）バンコマイシン３〜６μｇ／ｍｌ、及び ２）リン酸ナトリウム，グルコース、リジン、グルタミ
ン酸、グリシン、アラニン、MnCl2、ウラシル、チアミ
ン、ニコチンアミドのうちの１以上を含む追加成分、 を含むバンコマイシン耐性黄色ブドウ球菌の検出用培
地。 - 【請求項２】以下の工程： ａ）ＨＩＡ培地又はＢＨＩＡ培地中に、以下の成分： １）バンコマイシン３〜６μｇ／ｍｌ、及び ２）リン酸ナトリウム，グルコース、リジン、グルタミ
ン酸、グリシン、アラニン、MnCl2、ウラシル、チアミ
ン、ニコチンアミドのうちの１以上を含む追加成分、 を含むバンコマイシン耐性黄色ブドウ球菌の検出用培地
上に試験菌液を塗抹する、 ｂ）β−ラクタム剤含有ディスクをａ）で調製した培地
上に置く、 ｃ）バンコマイシン耐性菌の生育に十分な時間培養す
る、そして ｄ）ディスク周辺におけるバンコマイシン耐性菌の生育
を観察する、 ことからなる、バンコマイシン耐性黄色ブドウ球菌の検
出方法。 - 【請求項３】β−ラクタム剤がペニシリン系抗菌剤、セ
フェム系抗菌剤、モノバクタム系抗菌剤、カルバペネム
系抗菌剤及びβ−ラクタマーゼ阻害剤からなる群より選
択される請求項２記載の検出方法。 - 【請求項４】複数のβ−ラクタム剤を組み合わせて検出
する請求項２又は３記載の検出方法。 - 【請求項５】請求項１記載のバンコマイシン耐性黄色ブ
ドウ球菌の検出用培地を少なくとも含むバンコマイシン
耐性黄色ブドウ球菌の検出用キット。 - 【請求項６】１以上の種類のβ−ラクタム剤含有ディス
クをさらに含む請求項５記載の検出用キット。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP30882097A JP3014090B2 (ja) | 1997-11-11 | 1997-11-11 | バンコマイシン耐性菌の検出方法及び検出用培地 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP30882097A JP3014090B2 (ja) | 1997-11-11 | 1997-11-11 | バンコマイシン耐性菌の検出方法及び検出用培地 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11169197A JPH11169197A (ja) | 1999-06-29 |
| JP3014090B2 true JP3014090B2 (ja) | 2000-02-28 |
Family
ID=17985711
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP30882097A Expired - Lifetime JP3014090B2 (ja) | 1997-11-11 | 1997-11-11 | バンコマイシン耐性菌の検出方法及び検出用培地 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3014090B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP7089800B2 (ja) | 2020-06-08 | 2022-06-23 | 株式会社米澤物産 | ウエーブ形成可能のフラットカーテン装置 |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2166721B1 (es) * | 2000-07-11 | 2003-12-01 | Dentaid S L | Medio de cultivo selectivo para actinobacillus actinomycetemcomitans. |
| JP4583559B2 (ja) * | 2000-07-24 | 2010-11-17 | 栄研化学株式会社 | Ｍｒｓａスクリーニング用培地 |
| FR2935002B1 (fr) * | 2008-08-13 | 2014-09-05 | Biomerieux Sa | Milieu de culture permettant de differencier staphylococcus aureus des staphylococcus a coagulase negative |
| JP2016034264A (ja) * | 2014-08-05 | 2016-03-17 | 株式会社テクノスルガ・ラボ | 試薬、培地成分、添加物、色や味などの成分の濃度勾配をつける培地の作製方法と調整方法およびこの方法を用いて得られる培地とこの培地を用いた微生物分離、培養ないしスクリーニング方法、ならびに濃度勾配をつける技術を用いた食品製造方法とその方法により製造された食品 |
-
1997
- 1997-11-11 JP JP30882097A patent/JP3014090B2/ja not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，（９．１９９７）Ｖｏｌ．１，Ｎｏ．３，ｐ．５ |
| 日本化学療法学会雑誌，（５月．１９９７年）Ｖｏｌ．４５ ｓｕｐｐｌ．Ａ，ｐ．１３８ |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP7089800B2 (ja) | 2020-06-08 | 2022-06-23 | 株式会社米澤物産 | ウエーブ形成可能のフラットカーテン装置 |
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH11169197A (ja) | 1999-06-29 |
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