JP2012532195A - 乳オリゴ糖による炎症の阻害 - Google Patents
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Abstract
Description
この出願は、2009年6月6日に出願された、米国仮出願第61/223,145号(この内容は、その全体が参考として本明細書に援用される)の利益を主張する。
人乳オリゴ糖の調製
Chaturvediら、Anal.Biochem.251(1):89−97、1997において記載された方法に従って、人乳からオリゴ糖画分を単離した。簡単には、プールした人乳をまず脱脂し、そして次いでエタノールを加えてタンパク質を沈殿させた。できた溶液を、オリゴ糖を吸着するカーボンカラムにかけた。そのカラムを5%エタノールで洗浄し、そして吸着したオリゴ糖を、60%エタノールで溶出して、人乳オリゴ糖(「HMOS」)を含む画分を産生した。
新生児の上皮の炎症を研究するために日常的に使用されるT84細胞を、24穴Falcon器官培養皿において、37℃において95%O2および5%CO2で、FBS(5%)、Hepes緩衝剤、NaOH、ペニシリンおよびストレプトマイシンを補充したDMEM/F12培地中で培養した。これらの細胞を、(i)ネガティブコントロールとして生理食塩水、(ii)ポジティブコントロールとしてTNF−α(10ng/mL)、(iii)HMOS(5g/L)、および(iv)TNF−α(10ng/mL)およびHMOS(5g/L)で処理した。16時間後、各培養上清中のIL−8の濃度を、ELISAによって測定した。そうして得られた結果を、細胞数に対して標準化した(すなわち、対応する細胞培養の全細胞タンパク質含有量によって割る)。
14週流産児からのヒト小腸腸管粘膜サンプルを、24穴Falcon器官培養皿において、FBS(5%)、グルコース(5g/L)、トリシン緩衝剤(20mM、pH7.4)、ヘミコハク酸ヒドロコルチゾン(0.5μg/L)、酢酸β−レチニル(1mg/L)、ペニシリンおよびストレプトマイシンを補充したCMRL1066培地と、5%CO2中で、37℃でインキュベートした。その粘膜サンプルを、(i)ネガティブコントロールとして生理食塩水、(ii)ポジティブコントロールとしてTNF−α(10ng/mL)、(iii)HMOS(5g/L)、および(iv)TNF−α(10ng/mL)およびHMOS(5g/L)で処理した。16時間後、炎症促進性ケモカインであるMCP−1の濃度を、各培養上清においてELISAによって測定した。そのように得た結果を、上記で記載したように細胞数に対して正規化した。
22週流産児からのヒト小腸腸管サンプルを、24穴プレートで、上記で記載した修飾CMRL培地と、5%CO2において37℃でインキュベートした。そのサンプルを、5mg/mLのHMOSの非存在下または存在下で18時間、IL−1β(10ng/mL)、フラジェリン(1mg/mL)、ポリイノシン−ポリシチジン酸2本鎖RNA(PIC;10ng/mL)、またはPBS(ネガティブ(netative)コントロールとして)で処理した。培養上清中のIL−8分泌のレベルを、ELISAキット(R&D Systems)を用いて二連で測定し、versa maxプレートリーダー(Molecular Devices、CA、USA)で450nmにおいて検出した。各OD450の値を、対応する器官培養の全タンパク質量に対して標準化した。
本明細書中で開示された全ての特徴を、あらゆる組み合わせで組み合わせ得る。本明細書中で開示された各特徴を、同じ、等価の、または同様の目的のための代替の特徴によって置換し得る。従って、他に明確に述べなければ、開示された各特徴は、一般的な一連の等価または同様の特徴の単なる例である。
Claims (31)
- 炎症を阻害する方法であって、該方法は、炎症の阻害を必要とする被験体に、少なくとも1つの乳由来のオリゴ糖、または該オリゴ糖を含む複合糖質を含む、有効量の組成物を投与する工程を包含し、該オリゴ糖は、第1の糖単位および第2の糖単位を含み、ここで、第1の非還元末端に位置する該第1の糖単位は、フコース、ガラクトース、マンノースまたはシアル酸であり、かつ該第1の糖単位に連結した該第2の糖単位はガラクトース、グルコース、マンノースまたはN−アセチルグルコサミンである、方法。
- 前記第1の糖単位がフコースである、請求項1に記載の方法。
- 前記オリゴ糖が、2’−フコシルラクトース、ラクト−N−フコペンタオースI、または前記還元末端がグルコースの代わりにN−アセチルグルコサミンであること以外は該オリゴ糖と同一である、その改変体である、請求項2に記載の方法。
- 前記オリゴ糖が、第2の非還元末端を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記第2の非還元末端における前記糖単位がフコースである、請求項4に記載の方法。
- 前記オリゴ糖が、ラクト−N−ジフコヘキサオースI、ラクトジフコテトラオース、または前記還元末端がグルコースの代わりにN−アセチルグルコサミンであること以外は該オリゴ糖と同一である、その改変体である、請求項5に記載の方法。
- 前記第2の非還元末端における前記糖単位がガラクトースである、請求項4に記載の方法。
- 前記オリゴ糖が、ラクト−N−フコペンタオースII、3’−フコシルラクトース、ラクト−N−フコペンタオースIII、または前記還元末端がグルコースの代わりにN−アセチルグルコサミンであること以外は該オリゴ糖と同一である、その改変体である、請求項7に記載の方法。
- 前記第2の非還元末端における前記糖単位がシアル酸である、請求項4に記載の方法。
- 前記オリゴ糖が、3’−シアリル−3−フコシルラクトース、ジシアロモノフコシルラクト−N−ネオヘキサオース、モノフコシルモノシアリルラクト−N−オクタオース、シアリルラクト−N−フコヘキサオースII、ジシアリルラクト−N−フコペントースII、モノフコシルジシアリルラクト−N−テトラオース、または前記還元末端がグルコースの代わりにN−アセチルグルコサミンであること以外は該オリゴ糖と同一である、その改変体である、請求項9に記載の方法。
- 前記第1の糖単位がシアル酸である、請求項1に記載の方法。
- 前記オリゴ糖が、3’−シアリルラクトース、6’−シアリルラクトース、シアリルラクト−N−ネオテトラオースc、シアリルラクト−N−テトラオースa、または前記還元末端がグルコースの代わりにN−アセチルグルコサミンであること以外は該オリゴ糖と同一である、その改変体である、請求項11に記載の方法。
- 前記オリゴ糖が第2の非還元末端を含む、請求項11に記載の方法。
- 前記第2の非還元末端における前記糖単位がガラクトースである、請求項13に記載の方法。
- 前記オリゴ糖が、モノシアリルラクト−N−ヘキサオース、モノシアリルラクト−N−ネオヘキサオースI、モノシアリルラクト−N−ネオヘキサオースII、シアリルラクト−N−テトラオースb、または前記還元末端がグルコースの代わりにN−アセチルグルコサミンであること以外は該オリゴ糖と同一である、その改変体である、請求項14に記載の方法。
- 前記第2の非還元末端における前記糖単位がシアル酸である、請求項13に記載の方法。
- 前記オリゴ糖が、ジシアリルラクト−N−ヘキサオースI、ジシアリルラクト−N−ネオヘキサオース、ジシアリルラクト−N−テトラオース、ジシアリルラクト−N−ヘキサオースII、ジシアリルラクト−N−ヘキサオースI、または前記還元末端がグルコースの代わりにN−アセチルグルコサミンであること以外は該オリゴ糖と同一である、その改変体である、請求項16に記載の方法。
- 前記複合糖質において、前記オリゴ糖が、炭水化物、脂質またはペプチドと結合体化している、請求項1に記載の方法。
- 前記被験体が、消化管の炎症性疾患に罹患しているか、またはそのリスクを有する、請求項1に記載の方法。
- 前記消化管の炎症性疾患が、食道炎、胃腸炎、大腸炎、胆管炎および虫垂炎からなる群より選択される、請求項19に記載の方法。
- 前記消化管の炎症性疾患が、潰瘍性大腸炎、クローン病または過敏性腸症候群である、請求項20に記載の方法。
- 前記被験体がヒト乳児である、請求項1に記載の方法。
- 炎症を阻害する方法であって、該方法は、炎症の阻害を必要とする被験体に、乳から単離されたオリゴ糖を含む、有効量の組成物を投与する工程を包含する、方法。
- 前記乳が人乳である、請求項23に記載の方法。
- 前記乳が、ウシ科の動物の乳、ウマの乳またはラクダの乳である、請求項23に記載の方法。
- 前記ウシ科の動物の乳が、ウシの乳、ヤギの乳またはヒツジの乳である、請求項25に記載の方法。
- 前記オリゴ糖が、以下:
乳を提供する工程、
前記乳から脂肪およびタンパク質を除去する工程、ならびに
該脂肪および該タンパク質を除去した後に、該乳からオリゴ糖を単離する工程
を含むプロセスによって調製される、請求項23に記載の方法。 - 前記単離する工程が、前記乳をカーボンカラムに入れ、アルコール溶液で該カラムから前記オリゴ糖を溶出することによって実行される、請求項27に記載の方法。
- 前記乳が人乳である、請求項25に記載の方法。
- 前記乳が、ウシ科の動物の乳、ウマの乳またはラクダの乳である、請求項25に記載の方法。
- 前記ウシ科の動物の乳が、ウシの乳、ヤギの乳またはヒツジの乳である、請求項30に記載の方法。
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