JP2012519860A - 関節炎状態を特徴づけるための組成物および方法 - Google Patents
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Abstract
Description
1つの態様では、本発明は、14−3−3に対する自己抗体を含む疾患および病状を診断するための方法を提供する。一般に、関節炎状態の存在の有無、または患者予後は、(a)哺乳類対象から入手した生体試料を少なくとも1つの14−3−3タンパク質またはその断片と接触させ;(b)試料中の14−3−3タンパク質またはその断片に特異的に結合した自己抗体のレベルを決定し;(c)そのような抗体のレベルを適当な対照と比較することにより決定し得る。
組換え14−3−3ηタンパク質(Augurex,North Vancouver,BC,Canada)をSDS−PAGEゲルにかけ、ニトロセルロース膜に転写させた。関節リウマチと診断されていない対象(Biochemed,Winchester,VA)由来または関節リウマチと診断された対象(Biochemed,Suffolk County,NY)由来のヒト血清を膜と共にインキュベートし、血清中の14−3−3ηに対する自己抗体を検出し、特性決定した。自己抗体をHRPにコンジュゲートさせた抗ヒト二次抗体(Jackson ImmunoResearch Laboratories,West Grove,PA)を用いて検出し、化学ルミネセンスにより可視化した。
自己抗体により最も良く認識されている14−3−3エピトープをマッピングするために、14−3−3ηペプチドの全配列を表す、重複15−残基ペプチドを、スポット合成を使用してセルロース紙上で直接合成する。システインの存在により引き起こされる化学的な問題を減少させるために、システイン残基をセリンで置き換える。ポリエチレングリコールおよびFmoc−保護アミノ酸で修飾されたセルロース膜をAbimed(Lagenfeld,Germany)から購入する。β−アラニンスペーサをカップリングすることにより膜上でアレイを作製し、既に記載されるように(Molina等(1996),Peptide Research 9:151−155;Frank等(1992),Tetrahedron 48:9217−9232)、標準DIC(ジイソプロピルカルボジイミド)/HOBt(ヒドロキシベンゾトリアゾール)カップリング化学を用いてペプチドを合成する。
Claims (26)
- a)関節炎状態を有する疑いのある対象由来の試料を準備すること;b)前記試料において、少なくとも1つの14−3−3タンパク質もしくはその断片に対する自己抗体または少なくとも1つの14−3−3タンパク質もしくはその断片との免疫複合体の存在を検出することを含み、前記自己抗体または免疫複合体の存在が、前記対象における関節炎状態を示す、対象における関節炎状態を評価するための方法。
- 前記検出工程がさらに、前記自己抗体または免疫複合体の量を測定すること、およびそれを正常な対照試料、関節炎対照試料、または同じ対象由来の以前の試料中の自己抗体または免疫複合体の量と比較することを含む、請求項1記載の方法。
- 前記検出工程が、前記生体試料を少なくとも1つの14−3−3タンパク質またはその断片と接触させることを含む、請求項1記載の方法。
- 前記14−3−3タンパク質が、14−3−3ηもしくは14−3−3γまたはその断片である、請求項3記載の方法。
- 前記14−3−3タンパク質が、少なくとも1つの14−3−3ηエピトープを含む、請求項1記載の方法。
- 前記少なくとも1つの14−3−3ηエピトープが、少なくとも1つの他の14−3−3タンパク質アイソフォームと共有される、請求項5記載の方法。
- 前記他の14−3−3タンパク質アイソフォームが14−3−3γである、請求項5記載の方法。
- 前記14−3−3ηエピトープが14−3−3ηに特有である、請求項5記載の方法。
- 前記生体試料が血液、滑液、血漿、血清または組織からなる群より選択される、請求項1〜8のいずれか1項に記載の方法。
- 前記14−3−3タンパク質またはその断片が、放射性標識、ルミネセンス標識および蛍光標識ならびに酵素からなる群より選択される標識で検出可能に標識される、請求項1〜9のいずれか1項に記載の方法。
- 前記14−3−3タンパク質またはその断片が固体支持体に結合される、請求項1〜10のいずれか1項に記載の方法。
- 前記自己抗体がELISAアッセイにより検出される、請求項1〜11のいずれか1項に記載の方法。
- 前記検出が化学ルミネセンスにより起こる、請求項1〜12のいずれか1項に記載の方法。
- 前記試料中の少なくとも1つの14−3−3タンパク質もしくはその断片に対する自己抗体または少なくとも1つの14−3−3タンパク質もしくはその断片との免疫複合体のレベルの、正常な対照試料と比較した増加が、前記対象における関節炎の診断指標となる、請求項2記載の方法。
- 前記試料中の少なくとも1つの14−3−3タンパク質もしくはその断片に対する自己抗体または少なくとも1つの14−3−3タンパク質もしくはその断片との免疫複合体の、関節炎対照試料と比較した相対レベルが、前記対象における関節炎の予後指標となる、請求項2記載の方法。
- 前記試料中の少なくとも1つの14−3−3タンパク質もしくはその断片に対する自己抗体または少なくとも1つの14−3−3タンパク質もしくはその断片との免疫複合体の、同じ対象由来の以前の試料と比較した相対レベルが、治療計画の有効性を示す、請求項2記載の方法。
- 少なくとも1つの14−3−3タンパク質またはその断片および第2の試薬を含む、試料中の少なくとも1つの14−3−3タンパク質またはその断片に対する自己抗体の存在を検出するためのキット。
- 前記少なくとも1つの14−3−3タンパク質またはその断片が固体支持体に結合される、請求項17記載のキット。
- 前記少なくとも1つの14−3−3タンパク質が、14−3−3γもしくは14−3−3ηまたはその断片である、請求項17記載のキット。
- 前記14−3−3タンパク質またはその断片が、少なくとも1つの14−3−3ηエピトープを含む、請求項17記載のキット。
- 前記少なくとも1つの14−3−3ηエピトープが、少なくとも1つの他の14−3−3タンパク質アイソフォームと共有される、請求項20記載のキット。
- 前記他の14−3−3タンパク質アイソフォームが14−3−3γである、請求項21記載のキット。
- 前記14−3−3ηエピトープが14−3−3ηに特有である、請求項21記載のキット。
- (a)関節炎状態を有する疑いのある対象由来の第1の試料を準備すること;(b)前記試料において、少なくとも1つの14−3−3タンパク質もしくはその断片に対する自己抗体または少なくとも1つの14−3−3タンパク質もしくはその断片との免疫複合体の存在を検出すること;(c)前記自己抗体または免疫複合体の量を測定し、それを、関節炎のサブタイプが知られている、および/または前に確立されている第2の対象由来の第2の生体試料中の、14−3−3に対する自己抗体または14−3−3との免疫複合体の量と比較することを含み、前記比較が、第1の対象に対する関節炎のサブタイプを決定する、患者の関節炎のサブタイプを決定する方法。
- 前記第1の試料と第2の試料との間の前記自己抗体または免疫複合体の類似する量が、前記第1の対象が前記第2の対象と同じサブタイプの関節炎を有することを示す、請求項24記載の方法。
- 前記第1の試料と第2の試料との間の前記自己抗体または免疫複合体の異なる量が、前記第1の対象が前記第2の対象とは異なるサブタイプの関節炎を有することを示す、請求項24記載の方法。
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