JP2012249578A - 豆乳発酵物及びその製造方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】β−グルカン産生能を有する乳酸菌を用いて豆乳を発酵させる工程を含む、豆乳発酵物の製造方法。
【選択図】なし
Description
・乳清の分離がほとんどなく、粘稠で糸引き性を示す。
・口に入れたときに崩れにくく、飲み込むまで口中でなめらかさが維持される。
本発明の豆乳発酵物の製造方法は、β−グルカン産生能を有する乳酸菌を用いて豆乳を発酵させる工程を含む方法である。
上記製造方法により豆乳発酵物を得ることができる。本発明の豆乳発酵物は、乳酸菌由来のβ−グルカンを含有し、独自の性状・食感を有する。
粘度測定の条件:
ロータ回転速度:60rpm
ロータサイズ:2.7cm(直径)×4.5cm
外筒サイズ:4.8cm(直径)×6.5cm
上記豆乳発酵物は食品ないし食品素材として使用することができる。例えば、デザートないしその素材として、また、乳化調味料(マヨネーズ、ドレッシング等)の素材として使用可能である。
サッポロビール社が保有する乳酸菌83株(ラクトバチラス(Lactobacillus)属:76株;ストレプトコッカス(Streptococcus)属:5株;ペディオコッカス(Pediococcus)属:2株)から、以下のようにβ−グルカン産生乳酸菌を探索した。
MRS液体培地(4mL)に各乳酸菌を植菌し、30℃、嫌気ボックス下で2〜3日間培養を行った。なお、ラクトバチラス・ブレビス(Lactobacillus brevis)SBC8027の培養液は粘稠で糸引き性を示した。
培養液0.5mLをエッペンドルフチューブに入れ、10000rpmで5分間遠心分離して菌体を回収した。得られた菌体を0.1mLのDNA抽出液(PrepMan Ultra)に懸濁後、99℃で15分間加温し、さらに10000rpmで5分間遠心分離した。上清を回収してゲノムDNA溶液を得た。
β−グルカン合成遺伝子(gtf遺伝子)上の異なる領域(gtfプライマー領域及びmGTFプライマー領域)に対応する2種のプライマーセット(下記)を用い、各乳酸菌のゲノムDNAを鋳型として下記条件でPCRを行った。ラクトバチラス・ブレビスSBC8027についてのみ、2種のDNA断片の増幅が観察された。
・gtfプライマー領域:
フォワードプライマー:5’−AACGCCTGCAGACTGGCACC−3’(配列番号1)
リバースプライマー:5’−ACCAGCCACCTTCAACGCTTCG−3’(配列番号2)
・mGTFプライマー領域:
フォワードプライマー:5’−CGGTAATGAAGCGTTTCCTG−3’(配列番号3)
リバースプライマー:5’−GCTAGTACGGTAGACTTG−3’(配列番号4)
・PCR条件:
反応液:Lithos qPCRTM HotStart Master Mix−2mM(Eurogentec)
反応温度:変性(95℃、10分)→[変性(95℃、15秒)→アニーリング(55℃、5秒)→伸長(72℃、20秒)]×40サイクル
ラクトバチラス・ブレビスSBC8027については、2種のDNA断片の塩基配列を決定し、これをラクトバチラス・スエビカス(Lactobacillus suebicus)CUPV221のgtf遺伝子配列(アクセッション番号:GU174474(GU174474.1))と比較した。遺伝子解析には、MicroSeq ver.1.4.3(Applied Biosystems)を使用した。
ラクトバチラス・ブレビスSBC8027については、MRS寒天プレート上で生育した菌体をスライドガラス上でストレプトコッカス・ニューモニエ(Streptococcus pneumoniae)タイプ37特異的抗血清(Statens Serum Institut)で処理した。ストレプトコッカス・ニューモニエ タイプ37特異的抗血清は、乳酸菌β−グルカンと反応することが知られている。光学顕微鏡で凝集の有無を観察したところ、凝集が観察された(図3)。図3において、(a)は抗体処理前、(b)は抗体処理後の顕微鏡写真である。(b)において、凝集は丸枠内に認められる。
MRS液体培地(4L)にラクトバチラス・ブレビスSBC8027のグリセロール凍結保存液を植菌し、30℃で40〜60時間培養した。培養後、湯浴(60℃)中で20分間加熱処理し、冷却後、8000rpmで30分間遠心分離して菌体及び熱変性物を除去した。得られた液に1N塩酸を加えてpHを3.0まで低下させた後、これを、純水で平衡化したホクエツHS樹脂(味の素ファインテクノ)(カラムサイズ:2.6×50cm)に通液し、非吸着画分を回収した。これを約1Lまで減圧濃縮した後、2倍量のアセトンを加え、デカンテーションにより上清を除去して淡褐色の沈殿を得た。沈殿を純水に溶解後、これを、純水で平衡化したダイヤイオンPA308(三菱化学)(カラムサイズ:2.6×50cm)に通液し、非吸着画分を回収した。次いで、これを、純水で平衡化したダイヤイオンPK208(三菱化学)(カラムサイズ:2.6×50cm)に通液し、非吸着画分を回収した。そして、これを、純水で平衡化したダイヤイオンPA308(三菱化学)(カラムサイズ:2.6×50cm)に再度通液し、非吸着画分を回収した。これを約500mLまで減圧濃縮した後、2倍量のアセトンを加え、デカンテーションにより上清を除去して乳白色の沈殿を得た。沈殿を純水に溶解後、これにアセトンを加えて沈殿を形成させた。得られた沈殿を再度純水に溶解後、減圧濃縮によりアセトンを除去し、凍結乾燥して白色綿状の標品(菌体外多糖)を得た。
標品(菌体外多糖)30mgを純水5mLに溶解後、これを、0.25M NaCl水溶液で平衡化したTOYOPEARL HW−65カラム(東ソー)(カラムサイズ:2.6×60cm)に通液し、溶出画分を12mLずつ回収した。各画分について、フェノール硫酸法により全糖量(グルコース換算)を測定し、得られた全糖量を0.9倍して多糖量とした。結果(クロマトグラム)は図4のとおりであった。図4において、横軸の数字は画分の番号(溶出順に1〜20)を表す。
画分5〜7を画分A、画分8〜9を画分B、画分10〜11を画分C、画分12〜14を画分Dとして合わせた後、透析により脱塩し、減圧乾固した。これを4M トリフルオロ酢酸(TFA)2mLに溶解してねじ栓付試験管に移した後、オイルバス(100℃)中に3時間静置した。反応液を減圧乾固し、純水を加えた後、再度減圧乾固して十分にTFAを除去した。最終液量が5mLになるように純水に溶解し、これを分析用試料液とした。試料液を還元糖分析HPLCシステム(ポストカラム法)(島津)に供した。結果は図5のとおりであった。画分Aの多糖は、構成単糖のほとんどがグルコースであり、また、分子量(プルラン換算)が数十万Daであったことから、β−グルカンと推定された。
画分Aについて1H−NMRスペクトルを測定した。1H−NMRスペクトルの測定は、溶媒としてD2Oを使用し、JNM−ECA500(日本電子)により行った。結果(スペクトル)は図6のとおりであった。また、4.5〜5.0ppmに観測されたシグナルは下記のとおりであった。これらの結果により、画分Aの多糖がβ−グルカンであることが確認された。
δ(ppm):4.53(d,J=5.5Hz),4.95(d,J=6.5Hz).
下記組成の豆乳45mLを80mL容ジャム瓶に入れ、80℃で1時間加熱殺菌した。室温まで冷却後、ラクトバチラス・ブレビスSBC8027のグリセロール凍結保存液を2.6×106cfu/mLになるように添加し、30℃で17時間又は24時間静置培養して豆乳発酵物を得た。
豆乳の組成:
無調整豆乳(マルサンアイ社):83mL
モルトエキス(MALTAX10):5g
ガムシロップ(上島コーヒー社):5g
スクロース:7g
ヨーグルトフレーバー(高砂香料社):0.2mL
下記組成の豆乳45mLを80mL容ジャム瓶に入れ、80℃で1時間加熱殺菌した。室温まで冷却後、ラクトバチラス・ブレビスSBC8027のグリセロール凍結保存液を2.6×106cfu/mLになるように添加し、30℃で24時間静置培養して豆乳発酵物を得た。
豆乳の組成:
無調整豆乳(マルサンアイ社):83mL
モルトエキス(MALTAX10):5g
ガムシロップ(上島コーヒー社):5g
スクロース:7g
ヨーグルトフレーバー(高砂香料社):0.2mL
粘度測定の条件:
ロータ回転速度:60rpm
ロータサイズ:2.7cm(直径)×4.5cm
外筒サイズ:4.8cm(直径)×6.5cm
粘度測定の条件:
サンプル量:2g
測定モード:一定速度モード
測定温度:25℃±0.2℃
MSジオメトリー:コーン型40mm−4°
せん断速度(s−1):1.00E+01〜8.00E+01
せん断速度上昇タイプ:リニア上昇
ディレイタイム:10秒
積算時間:10秒
測定点数:15点
レギュレータ強度:40%
ラクトバチラス・ブレビスSBC8027を用いて、実施例3と同様に豆乳発酵物を製造した。また、ラクトバチラス・ブレビスSBC8027の代わりにラクトバチラス・ブレビスに属するβ−グルカン非産生乳酸菌(以下、本実施例において「乳酸菌X」という。)を用いて、実施例3と同様に豆乳発酵物を製造した。
粘度測定の条件:
ロータ回転速度:60rpm
ロータサイズ:2.7cm(直径)×4.5cm
外筒サイズ:4.8cm(直径)×6.5cm
ラクトバチラス・ブレビスSBC8027を用いて実施例3と同様に豆乳発酵物を製造した。発酵前の豆乳及び発酵後の豆乳発酵物について、3種の遊離アミノ酸(アルギニン(Arg)、オルニチン(Orn)及びシトルリン(Cit))量を測定した。
豆乳にアルギニン塩酸塩を0.1%添加した後、この豆乳を用いて実施例5と同様に豆乳発酵物を製造した。発酵前の豆乳及び発酵後の豆乳発酵物について、3種の遊離アミノ酸(アルギニン(Arg)、オルニチン(Orn)及びシトルリン(Cit))量を測定した。
Claims (7)
- β−グルカン産生能を有する乳酸菌を用いて豆乳を発酵させる工程を含む、豆乳発酵物の製造方法。
- 前記乳酸菌は、アルギニンをオルニチン及び/又はシトルリンに変換する能力を有する、請求項1に記載の豆乳発酵物の製造方法。
- 前記乳酸菌はラクトバチラス・ブレビスSBC8027(受託番号:FERM BP−10630)である、請求項1又は2に記載の豆乳発酵物の製造方法。
- 請求項1〜3のいずれか一項に記載の方法により得ることのできる豆乳発酵物。
- 回転円筒式粘度計により25℃で測定される粘度が4000〜10000mPa・sである、請求項4に記載の豆乳発酵物。
- η50/η10[η10、η50はそれぞれ、25℃で測定されるせん断速度10s−1、50s−1での粘度を表す。]が0.3以上である、請求項4又は5に記載の豆乳発酵物。
- 請求項4〜6のいずれか一項に記載の豆乳発酵物を含有する食品。
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