JP2012029687A - 大腸菌群の検出方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】大腸菌群の検出対象となる試料を、大腸菌群を培養することができる培地(BGLB培地など)に接種する(ステップS1)。試料が接種された培地を30℃以上40℃以下の温度にて、3.5時間以上5時間以下で培養する(ステップS2)。培養された培地に界面活性剤を添加するとともに、界面活性剤が添加された培地を40℃〜50℃程度に加温する。加温された培地を、フィルタにより濾過する(ステップS3)。フィルタ上に残留した残留物を液体中に分散させることにより残留物の浮遊液を調製し、浮遊液に含まれる菌体数をフローサイトメータにより計測する(ステップS4)。計測した菌体数に基づいて、試料中の大腸菌群が陰性であるか否かを判定する(ステップS5)。
【選択図】図1
Description
Green Lactose Bile)培地などを用いた大腸菌群の検出方法に関する。
以下、上記実施の形態に係る大腸菌群の検出方法の実施例を説明する。
本実施例では、大腸菌群として、(1)〜(4)に示す4種の菌株を用いた。カッコ内の記載は、整理番号を示す。
(1)Enterobacter aerogenes(NBRC 13534T)
(2)Klebsiella oxytoca(JCM 1665)
(3)Citrobacter freundii(JCM 1657)
(4)Escherichia coli(NBRC 3972)
(5)Bacillus cereus(JCM 2152)
(6)Staphylococcus aureus subsp. aureus(JCM 2151)
(7)Lactococcus lactis subsp. lactis(NBRC 12007)
(8)Microbacterium lauticum(NBRC14135)
(9)Acinetobacter calcoaceticus(NBRC12552)
(10)Pseudomonas fluorescens(NBRC 3507)
寄託機関名:独立行政法人理化学研究所バイオリソースセンター 微生物材料開発室
連絡先:郵便番号351−0198 埼玉県和光市広沢2−1、電話番号048−467−9560
寄託機関名:独立行政法人製品評価技術基盤機構 バイオテクノロジー本部 生物遺伝資源部門
連絡先:郵便番号292−0818、千葉県木更津市かずさ鎌足2−5−8、電話番号0438−20−5763
実験手順について説明する。まず、上記(1)〜(10)の菌株がそれぞれ接種された試料を調製した。具体的には、上記(1)〜(9)の菌株を、TSB(Trypcase Soy Broth)培地を用いて35℃にて一晩培養した。(10)の菌株のみ、TSB培地を用いて30℃にて一晩培養した。
図3に、(1)〜(4)の試料における、浮遊液1mlあたりの菌体数と、SMA培養法で計測したコロニー数との計測結果を示す。図3において、「菌体カウント法」の欄に示す数値は、浮遊液1mlあたりの菌体数を示す。以下、フローサイトメータを用いた本実施例の手順に基づく計測を、「菌体カウント法」と呼ぶ。
S=AVE+5σ≒37
図5に、(5)〜(10)の試料における、菌体カウント法により得られた浮遊液1mlあたりの菌体数と、SMA培養法によるコロニー数との計測結果を示す。図5に示すように、(5)〜(8)の試料において、培養後の菌体数が、培養前の菌体数よりも減少している。(9)および(10)の試料では、培養後の菌体数が、試料に接種された菌体数よりも減少する試料と、培養後の菌体数が試料に接種された菌体数よりも増加する試料が存在する。しかし、(9)および(10)の試料における菌体の増加率は、(1)〜(4)の試料における菌体の増加率に比べて著しく低い。つまり、大腸菌群に属さない菌株は、BGLB培地を用いて35℃にて4時間で培養しても、大腸菌群に属する菌株に比べて大量に増殖しないことが明らかとなった。この結果から、大腸菌群に属さない菌株は、培養時間が3.5時間であっても、大量に増殖しないと考えられる。
本実施例では、BGLB法を基準とした、本実施の形態に係る大腸菌群の検出方法の精度を検討した。大腸菌群の汚染濃度が、0.1(CFU/ml)レベル、1(CFU/ml)レベル、および10(CFU/ml)レベルの試料を準備した。つまり、未殺菌の生乳を牛乳で希釈して、試料を調製した。試料の総数は、65である。各試料中の大腸菌群が陰性であるか否かを、下記の3種類の検出方法を用いて判定した。
Claims (6)
- 大腸菌群の検出方法であって、
試料を、大腸菌群を培養することができる培地に接種する工程と、
前記試料が接種された前記培地を30℃以上40℃以下の温度にて、3.5時間以上5時間以下で培養する培養工程と、
培養された前記培地を、フィルタにより濾過する濾過工程と、
前記フィルタに残留した残留物の浮遊液を調製し、前記浮遊液に含まれる菌体数を、フローサイトメータにより計測する計測工程と、
計測した前記菌体数に基づいて前記試料中の大腸菌群の有無を判定する判定工程と、
を備える大腸菌群の検出方法。 - 請求項1に記載の大腸菌群の検出方法において、
前記培地は、BGLB(Brilliant Green Lactose Bile)培地、EC(Escherichia coli)培地、及びラウリル硫酸トリプトースブイヨンのいずれかである大腸菌群の検出方法。 - 請求項1または請求項2に記載の大腸菌群の検出方法において、
前記培養工程は、前記試料が接種された前記培地を34.5℃以上35.5℃以下にて培養する大腸菌群の検出方法。 - 請求項1ないし請求項3のいずれかに記載の大腸菌群の検出方法において、
前記培養工程は、前記試料が接種された前記培地を4時間以上5時間以下で培養する大腸菌群の検出方法。 - 請求項1ないし請求項4のいずれかに記載の大腸菌群の検出方法において、
前記濾過工程は、前記培養された前記培地に界面活性剤を添加し、前記界面活性剤が添加された前記培地を濾過する大腸菌群の検出方法。 - 請求項5に記載の大腸菌群の検出方法において、
前記濾過工程は、前記界面活性剤が添加された前記培地を濾過する前に、前記界面活性剤が添加された前記培地を40℃以上47℃以下の温度にて加温する大腸菌群の検出方法。
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