JP2011504111A - ポリヌクレオチドワクチンを哺乳類の皮膚に送達するための方法及び装置 - Google Patents
ポリヌクレオチドワクチンを哺乳類の皮膚に送達するための方法及び装置 Download PDFInfo
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Abstract
Description
米国特許第6,010,613号;
米国特許第6,603,998号;
米国特許第6,713,291号;
「皮内エレクトロポレーションによる前立腺癌DNAワクチンに対する細胞性免疫応答の強化(Enhancement of Cellular Immune Response to a Prostate Cancer DNA Vaccine by Intradermal Electroporation)」Roosら著、Molecular Therapy、第13巻、第2号、2006年2月、320〜327頁(以下、Roosらと称する);
「電気化学療法において可能な適用による、インビトロでの電気的に透過性にした細胞中への取り込みに対するパルス繰り返し周波数の効果(The effect of pulse repetition frequency on the uptake into electropermeabilized cells in vitro with possible applications in electrochemotherapy)」、Puciharら著、Bioelectrochemistry57(2002年)167〜172頁(以下、Puciharらと称する)。
Vernhes MC、Cabanes PA、Tessie J.局所的な電気的ストレスに対するチャイニーズハムスター卵巣細胞感受性(Chinease hamster ovary cells sensitivity to localized electrical stress)。Bioelectrochemistry and Bioenergetics。1999年、48:17〜25;
Daskalov I、Mudrov N、Peycheva E.新しい機器の検討(Exploring new instrumentation)。電気化学療法のためのパラメータ(Parameters for electrochemotherapy)。単一パルスの代わりに2相パルスのバーストを用いた腫瘍攻撃(Attacking tumors with bursts of biphasic pulses instead of single pulses)。1999年、IEEE Eng.Med.Biol62〜66;
Chang DC、振動電界を使用した細胞穿孔及び細胞融合(Cell poration and cell fusion using an oscillating electric field)。1989年Biophys J.56:641〜652;及び
Tekle E、Astumian RD、Chock PB.両極性振動電界の使用によるエレクトロポレーション:NIH3T3細胞のDNAトランスフェクションのための改良法(Electroporation by using bipolar oscillating electric field:An improved method for DNA transfection of NIH 3T3 cells)。1991年Proc.Natl.Acad.Sci.88:4230〜4234。
(a.)ポリヌクレオチドワクチンを投与部位の皮膚中に投与する段階と、
(b.)投与部位周辺の皮膚に針電極を当てる段階と、
(c.)100ミリ秒未満のパルス間隔を有する、一連の少なくとも3個の単一の、オペレータ制御され、独立してプログラムされた、狭間隔電気波形を印加して、ポリヌクレオチドワクチンをエレクトロポレーションによって皮膚細胞中に送達する段階と
を含む。この一連の少なくとも3個の波形は、以下の特徴:(1)少なくとも3個の波形のうち少なくとも2個の波形振幅が互いに異なること;(2)少なくとも3個の波形のうち少なくとも2個の波形幅が互いに異なること;及び(3)少なくとも3個の波形のうち2個の第1の組の第1の波形間隔が、少なくとも3個の波形のうち2個の第2の組の第2の波形間隔と異なることのうちの1つ、2つ、又は3つを有する。
DERMA VAX仕様
操作
モード1−熟練した医療専門家によるワクチン送達
タッチスクリーン
パラメータ入力のための開始画面
患者ID入力
ワクチンID入力
電極ID入力
ワクチン接種画面
SKIN−皮膚抵抗を毎秒測定及び表示
READY−高圧電源をオンにする
STRAT−パルス発生を開始
DONE−ワクチン接種完了
モード2−熟練したIT専門家による設定
パルスパラメータ
データファイルをダウンロード
送達電極
ワクチン送達量−−
2個の水疱×各25μlのIDA−4−6
2個の水疱×各50μlのIDA−6−6
送達標的−−皮膚/真皮
電極
ハンドル−−アルコール洗浄により再使用可能
先端−−
滅菌
単一包装
使い捨て
パルス発生
皮膚抵抗パルス発生−−毎秒5ボルトで4μs
パルスプロトコールパラメータ
グループ内パラメータ
パルス幅 50μs〜1ms 50〜1000ボルト
50μs〜10ms 50〜300ボルト
パルス電流トリップ 26アンペア
負荷範囲 15〜1500オーム
パルス数 1〜10
最大デューティサイクル 50%
間隔 200μs〜1秒(パルス開始からパルス開始)
グループ数 3
パルス測定
内部デジタイザ
レベル 12ビット
サンプル パルス幅/8 最小100μs
データは内部及び外部USBキーに保存される
データタイプ
未加工データ:DV<Date>.xml
ログデータ DV<Date>.txt
CSVデータ DV<Date>.csv
全データは内部メモリに自動的に保存され、外部USBキーにダウンロードすることができる
保存され、内部フラッシュメモリから回収可能な最大データログ>20,000
前面パネル
コンピュータ
オペレーティングシステム Windows(登録商標)(商標)Mobile6.0
インターフェース タッチスクリーン
照明付き回線/幹線スイッチ
緊急停止ボタン(コンピュータをレディ状態にリセット)
タッチスクリーン
USBポート 2
電極コネクター Fischer Series 4032
背面パネル
電源入力 IEC320
イーサネット(登録商標)RJ45
電気及び機械
ハンドル付きCCEP−40Aキャビネット
32mm幅×20mm高さ×40mm長さ
幅12.6×高さ7.9×長さ15.7
重量 25ポンド、11.3kg
使用温度 10〜40℃
幹線電圧 100〜250vac
ヒューズ 5Aスローブロー、5mm×20mm
予備電源 停電後、>5分間
目的及び範囲
本実験の目的は、(Cyto Pulse「Derma Vax」システムを使用した)高速PulseAgile電気波形を、(Cyto Pulse PA−4000システムを使用した)低速PulseAgile電気波形と比較することである。新しいDerma Vaxシステムは、PA−4000よりも速やかにパルスを供給することができる。
Anna−Karin Roos博士は、マウスの皮膚において良好なルシフェラーゼ発現を誘導する少なくとも2個の波形を発表した。使用されたシステムはPA−4000であり、低速PulseAgile電気波形が使用された。新しい性能が、「CCEP−40Waveform Generator」を利用するDerma Vaxシステムに巧みに設計された。1つの顕著な違いは、Derma Vaxシステムがより短いパルス間隔でパルスを供給できる点である。すなわち、「Derma Vax」システムによって、100ミリ秒未満のパルス間隔が提供できる。本実験は、高速PulseAgile電気波形を使用して、インビボのルシフェラーゼ発現に対する効果を評価する。
使用したプラスミド:5mg/mlのAldeveronのgWizLuciferaseを滅菌PBS中に0.5mg/mlまで希釈した。
システム:Derma Vax#F2LQ2608851
電極:皮内アレイ(ギャップ4mm、1列につき6個の針、2列)並列電極。
注射:マウスを、通気孔を有するように変更した50mlコニカルチューブを使用して拘束した。マウスはまず頭をチューブに入れさせた。尾を本発明者の左手人指し指に掛けた。小さいハサミを使用して尾の基部の小区画の毛を除去した。ツベルクリンシリンジにつけた27ゲージ、0.5インチの針を使用して、尾の基部及び仙骨の右側に20マイクロリットルの皮内注射を行った。部位にシャープペンを使用して印をつけた。電極ギャップを左から右を向かせて針の列を注射部位の周辺に挿入し、それによって列を頭側及び尾側に一列に並べた。選択したエレクトロポレーションプロトコールを開始し、針を除去した。このプロセスを仙骨の左側において繰り返した。
目的及び範囲
本実験の目的は、(Cyto Pulse PA−4000システムを使用した)低速PulseAgile電気波形に対して(Cyto Pulse「Derma Vax」システムを使用した)高速PulseAgile電気波形を使用したDNA免疫化によって誘導されるT細胞応答を、比較することである。新しいDerma Vaxシステムは、PA−4000よりも速やかにパルスを供給することができる。より具体的には、本研究の目的は、prM−E及びNS1−NS3を発現するDengue1プラスミドを用いるPulseAgile Derma Vax送達を使用したDNA免疫化によって誘導されるT細胞応答を比較することである。
Anna−Karin Roos博士は、マウスの皮膚において良好なルシフェラーゼ発現を誘導する少なくとも2個の波形を発表した。使用されたシステムはPA−4000であり、低速PulseAgile電気波形が使用された。新しい性能が、「CCEP−40Waveform Generator」を利用するDerma Vaxシステムに巧みに設計された。1つの顕著な違いは、Derma Vaxシステムがより短いパルス間隔でパルスを供給できる点である。すなわち、「Derma Vax」システムによって、100ミリ秒未満のパルス間隔が提供できる。本実験は、高速PulseAgile電気波形を使用して、インビボのT細胞応答に対する効果を評価する。
使用したプラスミド:5mg/mlのDengue1prM−E及びDengue1NS1−NS3を同じ滅菌PBS中に0.5mg/mlまでそれぞれ希釈した。
システム:Derma Vax#07−0215DV
電極:皮内アレイ(ギャップ4mm、1列につき6個の針、2列)並列電極。
注射:マウスを、通気孔を有するように変更した50mlコニカルチューブを使用して拘束した。マウスはまず頭をチューブに入れさせた。尾を本発明者の左手人指し指に掛けた。小さいハサミを使用して尾の基部の小区画の毛を除去した。ツベルクリンシリンジにつけた27ゲージ、0.5インチの針を使用して、尾及び仙骨の基部の右側に20μlの皮内注射を行った。電極ギャップを左から右を向かせて針の列を注射部位の周辺に挿入し、それによって列を頭側及び尾側に一列に並べた。選択したエレクトロポレーションプロトコールを開始し、針を除去した。このプロセスを仙骨の左側において繰り返した。
下記に示す結果は、γインターフェロン陽性のCD8陽性細胞のパーセントである。
「Derma Vax」システムによる高速PulseAgile電気波形によって誘導されるT細胞応答は、インビボエレクトロポレーションによって「Derma Vax」システムによる低速PulseAgile電気波形によって誘導されるT細胞応答と等価である。
Claims (8)
- ポリヌクレオチドワクチンを哺乳類の皮膚細胞中に送達するための方法であって、
(a.)ポリヌクレオチドワクチンを投与部位の皮膚中に投与する段階と、
(b.)投与部位周辺の皮膚に針電極を当てる段階と、
(c.)100ミリ秒未満のパルス間隔を有する、一連の少なくとも3個の単一の、オペレータ制御され、独立してプログラムされた、狭間隔電気波形を印加して、ポリヌクレオチドワクチンをエレクトロポレーションによって皮膚細胞中に送達する段階と
を含み、
前記一連の少なくとも3個の波形が、以下の特徴:(1)前記少なくとも3個の波形のうち少なくとも2個の波形振幅が互いに異なること;(2)前記少なくとも3個の波形のうち少なくとも2個の波形幅が互いに異なること;及び(3)前記少なくとも3個の波形のうち2個の第1の組の第1の波形間隔が、前記少なくとも3個の波形のうち2個の第2の組の第2の波形間隔と異なることのうちの1つ、2つ、又は3つを有する、
上記方法。 - 段階(a.)及び段階(b.)が連続的に実施される、請求項1に記載の方法。
- 段階(a.)及び段階(b.)が、ポリヌクレオチドワクチンでプレコーティングされた電極を使用して同時に実施される、請求項1に記載の方法。
- ポリヌクレオチドワクチンを哺乳類の皮膚細胞中に送達するための装置であって、
100ミリ秒未満のパルス間隔を有する、一連の少なくとも3個の単一の、オペレータ制御され、独立してプログラムされた、狭間隔電気波形を印加できる狭間隔電気波形発生装置であって、前記一連の少なくとも3個の波形が、以下の特徴:(1)前記少なくとも3個の波形のうち少なくとも2個の波形振幅が互いに異なること;(2)前記少なくとも3個の波形のうち少なくとも2個の波形幅が互いに異なること;及び(3)前記少なくとも3個の波形のうち2個の第1の組の第1の波形間隔が、前記少なくとも3個の波形のうち2個の第2の組の第2の波形間隔と異なることのうちの1つ、2つ、又は3つを有する装置と、
前記狭間隔電気波形発生装置に接続された、ポリヌクレオチドワクチンが適用された皮膚に接触するように適合されている電極と
を含む、上記装置。 - 皮膚に電極を接触させる前にポリヌクレオチドワクチンが皮膚に適用される、請求項4に記載の装置。
- ポリヌクレオチドワクチンが電極にプレコーティングされ、電極が皮膚と接触すると同時に皮膚に適用される、請求項4に記載の装置。
- ポリヌクレオチドワクチンを哺乳類の皮膚細胞中に送達するための方法であって、
(a.)ポリヌクレオチドワクチンを投与部位の皮膚中に投与する段階と、
(b.)投与部位周辺の皮膚に針電極を当てる段階と、
(c.)100ミリ秒未満のパルス間隔を有する一連の狭間隔電気波形を印加して、ポリヌクレオチドワクチンをエレクトロポレーションによって皮膚細胞中に送達する段階と
を含む、上記方法。 - ポリヌクレオチドワクチンを哺乳類の皮膚細胞に送達するための装置であって、
100ミリ秒未満のパルス間隔を有する一連の狭間隔電気波形を印加できる狭間隔電気波形発生装置と、
前記狭間隔電気波形発生装置に接続された、ポリヌクレオチドワクチンが適用された皮膚に接触するように適合された電極と
を含む、上記装置。
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