JP2011251979A - 免疫原性組成物および方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】哺乳類または脊椎動物細胞において、それらの発現に対する調節配列による調節の下で、抗原をコード化するDNA配列を含むDNAプラスミドを含む一番目の組成物の有効量を、対象に投与する工程、および、哺乳類または脊椎動物細胞におけるそれらの発現に対する調節配列による調節の下で、抗原をコード化する核酸配列を含む組換え水疱性口内炎ウィルス(rVSV)を含む二番目の組成物の有効量を、対象に投与すること。二番目の組成物におけるrVSVは、適当なものの一例である。
【選択図】なし
Description
免疫原性組成物の効能を高めるために、タンパク質組成物、プラスミドを基にした組成物および組換えウィルス構築物を免疫原性組成物として用いた、様々な免疫原性組成物および方法が報告されてきた。先行する研究において、プラスミドを基にした免疫原性組成物は、全身投与をすると、タンパク質または組換えウィルスのような伝統的な抗原と共に、全身の免疫系に二次全身免疫を準備させることが立証されてきた(例えば、Xiangら,1997年 Springer Semin.Immunopathol.,19:257−268;Schneider,Jら、1998年 Nature Med.,4:397;およびSedeguh,Mら、1998年 Proc.Natl.Acad.Sci.,USA,95:7648;Roger,W.O.ら、2001年 Infec.&Immun.,69(9):5565−72;Eo,S.Kら、2001年 J.Immunol.,166(9):5473−9;Ramshaw I.A.およびRamsay,A.J.,2000年 Immunol.Today,21(4):163−5参照)。
本発明は、DNAプラスミド成分または組換えウィルス成分のいずれかを個別に投与した際に得られた結果と比較して、抗原に対する細胞性免疫応答に対して驚くべき相乗的な刺激を示す、プライム/ブースト投与法を介して、哺乳類の対象に病原性の抗原または他の抗原に対する免疫応答を誘導するための、新しい方法、組成物およびキットを提供する。
本発明の他の態様および実施形態は、以下の発明の詳細な記載にて開示されている。
本発明は、以前の論文において記述された免疫原性組成物の特定の成分の組み合わせを用いて、その成分を最適化して驚くべき相乗効果を生むことによって、哺乳類の対象または脊椎動物の対象における、抗原特異的免疫応答を誘導する新しい方法を提供する。一般に、本方法は、哺乳類または脊椎動物細胞における、DNAプラスミドによる、それらの発現に対する調節配列による調節の下で、抗原をコード化するDNA配列を含むDNAプラスミドを含む、有効量の組成物を対象に投与することを含む。本方法はまた、複製に適した組換え水疱性口内炎ウィルス(rVSV)を含む、有効量の組成物を対象に投与する工程を含む。このrVSVは、哺乳類または脊椎動物細胞における、rVSVによる、それらの発現に対する調節配列による調節の下で、抗原をコード化する核酸配列を含む。
この発明の免疫原性組成物は、免疫応答が起こることが望ましい、選別した抗原をコード化するDNA配列を含むDNAプラスミドを含む。プラスミドにおいて、選別した抗原は、哺乳類または脊椎動物細胞における、それらの発現の調節配列の調節の下にある。プラスミドそれ自身の成分は、一般的なものである。
本発明の方法および組成物において有用な他の免疫原性組成物は、複製に適した、生きた、弱毒化した水疱性口内炎ウィルス(VSV)輸送担体である。この組換えVSVは、哺乳類または脊椎動物細胞において、それらの発現の調節配列による調節の下で、選別した抗原をコード化している核酸配列を含む。本発明の方法において、DNAプラスミド組成物中に用いられる抗原は、rVSV免疫原性組成物中に用いられるものと同一の抗原である。
本発明の方法および組成物において有用な抗原性または免疫原性組成物は、選別した抗原に対する脊椎動物の宿主における免疫応答を高める。選別した抗原は、プラスミドDNAまたはVSVによって発現される場合は、病原性ウィルス、細菌、真菌または寄生虫に由来する、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、断片およびそれらの融合体であってよい。あるいは、選別した抗原は、癌細胞または腫瘍細胞に由来するタンパク質、ポリペプチド、ペプチド、断片およびそれらの融合体であってよい。もう一つ別の実施形態において、選別した抗原は、アレルゲンに対するアレルギー反応を和らげるためにIgEの生成を妨げるために、アレルゲンに由来するタンパク質、ポリペプチド、ペプチド、断片およびそれらの融合体であってよい。さらにもう一つ別の実施形態において、脊椎動物宿主におけるアミロイド沈着によって特徴づけられる疾患を予防または治療するために、選別した抗原は、アミロイド前駆タンパク質に由来するもののような、宿主(自己分子)によって望ましくない方法、量または位置にて産生されるものである、分子またはその一部分に由来するタンパク質、ポリペプチド、ペプチド、断片およびそれらの融合体であってよい。本発明の一つの具体例として、選別した抗原は、HIV−1に由来するタンパク質、ポリペプチド、ペプチド、断片およびそれらの融合体であってよい。
本発明のあらゆる成分において利用するために適当なプロモーターは、構成性プロモーター、誘導性プロモーター、組織特異的プロモーターおよびその他から容易に選別してよい。活性が非特異的であり、本発明の抗原をコード化する核酸分子において用いられている、構成性プロモーターの例には、レトロウィルスのラウス肉腫ウィルス(RSV)プロモーター、レトロウィルスのLTRプロモーター(所望によりRSVエンハンサーを有していてもよい)、サイトメガロウィルス(CMV)プロモーター(所望によりCMVエンハンサーを有していてもよい)(例えば、Boshartら、1985年 Cell、41:521−530を参照)、SV40プロモーター、ジヒドロ葉酸還元酵素プロモーター、βアクチンプロモーター、ホスホグリセロールキナーゼ(PGK)プロモーター、およびEF1αプロモーター(Invitrogen)を含むが、それだけに限定されない。外界から供給された化合物によって調節される、誘導性プロモーターには、アラビノースプロモーター、亜鉛誘導性金属結合性タンパク質(MT)プロモーター、デキサメタゾン(Dex)誘導性マウス乳房腫瘍ウィルス(MMTV)プロモーター、T7ポリメラーゼプロモーター系(WO98/10088);エクジソン昆虫プロモーター(Noら、1996年 Proc.Natl.Acad.Sci.USA,93:3346−3351)、テトラサイクリン抑制系(Gossenら、1992年 Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:5547−5551)、テトラサイクリン誘導系(Gossenら、1995年 Science,268:1766−1769,Harveyら、1998年 Curr.Opin.Chem.Biol.,2:512−518も参照のこと)、RU486誘導系(Wangら、1997年 Nat.Biotech.,15:239−243およびWangら、1997年 Gene Ther.,4:432−441)およびラパマイシン誘導系(Magariら、1997年 J.Clin.Invest.,100:2865−2872)を含むが、それだけに限定されない。
本発明において有用な免疫原性組成物は、DNAプラスミドまたはrVSV組成物のいずれでも、無菌の水または無菌の生理食塩水のような、免疫学的に許容される希釈剤または医薬上許容されるキャリアをさらに含む。抗原性組成物もまた、従来の方法でそのような希釈剤またはキャリアと混合してよい。本明細書で用いられている「医薬上許容されているキャリア」という言葉は、ヒトまたは他の脊椎動物の宿主に適合した、あらゆる全ての溶媒、分散媒、被覆剤、抗菌薬および抗真菌薬、等張の吸収遅延薬等を含めることを意味している。適切なキャリアは、当業者には明白であるが、投与経路に大部分が依存しているであろう。
アジュバントは、免疫原または抗原と共に投与された際に免疫応答を高める物質である。いくつかのサイトカインまたはリンホカインが、免疫調節活性を有することが示されており、従って、それだけに限定されないが、インターロイキン1−α、1−β、2、4、5、6、7、8、10、12(例えば、米国特許第5723127号参照)、13、14、15、16、17および18(およびその変異体)、インターフェロンα、βおよびγ、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(例えば、米国特許第5078996号およびATCC受け入れ番号39900を参照)、マクロファージコロニー刺激因子、顆粒球コロニー刺激因子、GSF、および腫瘍壊死因子αおよびβを含めたものを、アジュバントとして用いてよい。本発明において有用なさらに他のアジュバントには、MCP−1MCP−1α、MCP−1βおよびRANTESを含むがそれだけに限定されない、ケモカインを含む。例えば、Lセレクチン、PセレクチンおよびEセレクチンといったセレクチンのような接着分子もまた、アジュバントとして有用である可能性がある。さらに他の有用なアジュバントには、例えばCD34、GlyCAM−1およびMadCAM−1のようなムチン様分子、LFA−1、VLA−1、Mac−1およびp150.95のようなインテグリンファミリーのメンバー、例えばICAM−1、ICAM−2およびICAM−3、CD2およびLFA−3といった、PECAM、ICAMのような免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバー、CD40およびCD40Lのような共刺激分子、血管成長因子、神経成長因子、線維芽細胞成長因子、上皮成長因子、B7.2、PDGF、BL−1および血管内皮成長因子を含めた成長因子、Fas、TNF受容体、Flt、Apo−1、p55、WSL−1、DR3、TRAMP、Apo−3、AIR、LARD、NGRF、DR4、DR5、KILLER、TRAIL−R2、TRICK2およびDR6を含めた受容体分子を含むが、それだけに限定されない。さらに他のアジュバント分子には、カスパーゼ(ICE)を含む。出典明示により本明細書の一部とする、国際特許公報第WO98/17799号およびWO99/43839もまた参照のこと。
上で述べたキャリアに加えて、ポリヌクレオチド分子からなる免疫原性組成物は、望ましくは、局所麻酔薬、ペプチド、カチオン脂質を含めた脂質、リポソームまたは脂質粒子、ポリリシンのようなポリカチオン、デンドリマーのような分枝した三次カチオン、炭水化物、カチオン両親媒性化合物、洗浄剤、ベンジルアンモニウム界面活性剤、または細胞へのポリヌクレオチド輸送を促進する他の化合物のような、ポリヌクレオチドの促進剤または共試薬を、所望により含んでいてもよい。そのような促進剤には、局所麻酔薬のブピバカインまたはテトラカインを含む(出典明示により本明細書の一部とする、米国特許第5593972号;5817637号;5380876号;5981505号および6383512号、および国際特許公報WO98/17799を参照)。本発明において有用なそのような促進剤または共試薬の他の例は、それだけに限定されないが、出典明示により各々本明細書の一部とする、米国特許第5703055号;5739118号;5837533号;1996年4月4日に公開された、国際特許公報WO96/10038;および1994年8月8日に公開された、国際特許公報WO94/16737において記述されている。
保存剤、安定化成分、表面活性試薬などを含めた他の添加剤が、本発明の免疫原性組成物に含まれ得る。
一般に、本発明の免疫原性組成物の成分の適切な「有効量」または用量はまた、免疫化した対象の全身の健康状態、年齢および体重を特に最も含めた、対象の身体の状態と共に、用いた免疫原性組成物における抗原の同定に基づいているであろう。免疫原性組成物における投与の方法および経路、および追加の成分の存在はまた、プラスミドおよびrVSV組成物の用量および量に影響を与える可能性がある。そのような選別および有効用量の上方または下方調節は、当業者の知るところである。免疫応答、好ましくは防御反応を誘導するために、または対象における外来の効果を重大な有害な副作用なく生じるために必要となるプラスミドおよびrVSVの量は、それらの因子に依存して変化する。適当な用量は、当業者によって容易に決定される。
さらに他の具体例として、本発明は、抗原に対する免疫応答が望ましい、あらゆる上記の疾患または症状を治療するための、免疫原性、予防または治療投与法を容易に投与するための医薬用キットを提供する。このキットは、哺乳類または脊椎動物の対象における、高いレベルの抗原特異的免疫応答を誘導する方法において利用するために構築される。本キットは、哺乳類または脊椎動物の細胞において、それらの発現に対する調節配列の調節の下で、抗原をコード化するDNA配列を含むDNAプラスミドを含む、少なくとも一つの免疫原性組成物を含む。好ましくは、DNA免疫原性組成物を予めパックした複数回用量が、複数回の投与のためのキットにおいて与えられる。本キットはまた、哺乳類または脊椎動物の細胞において、それらの発現に対する調節配列の調節の下で、同一の抗原をコード化する核酸配列を含む、複製に適した、組換え水疱性口内炎ウィルス(rVSV)を含む、少なくとも一つの免疫原性組成物を含む。好ましくは、rVSV免疫原性組成物の予めパックした複数回用量が、多数の投与のためのキットにおいて与えられる。
本実施例は、実施例2および3において述べているような、本発明の具体例において有用なプラスミドの実例を記述している。これらのプラスミドは、本発明の範疇を制限するものではないが、その後の実験において利用するために最適化された。次のDNA免疫原性組成物は、標準的な組換えDNA技術を利用して構築された。HIVまたはSIVのgag遺伝子を発現しているDNA骨格ベクターは、HCMVプロモーター、BGHポリA末端配列、Co1E1細菌の複製の開始遺伝子(ori);および選別のためのカナマイシン耐性遺伝子を利用する。
WLV102プラスミドは、それに対する免疫応答が望ましかった選別した抗原として、SIVgagp37を発現している細菌のプラスミドである。WLV102プラスミド(4383bp)は、DNAプラスミド発現ベクターWLV001に挿入された、RNA最適化した先端部を切り取られたSIVに由来するgag遺伝子(p37)(Qiuら、1999年 J.Virol.,73:9145−9152)からなる。gag遺伝子は、抑制配列を不活化することによってRNA最適化し、それによって、出典明示により本明細書の一部とする、米国特許第5965726号;5972596号;6174666号;6291664号および6414132号;および国際特許公報WO01/46408において詳細に考察された技術を用いて、高いレベルのRevから独立したgag遺伝子の発現を可能にした。
サルIL−12WLV104プラスミドは、サルIL−12のヘテロ二量体を発現している二重プロモーター構造である。WLV103プラスミドは、ヒトIL12タンパク質p35およびp40をコード化する二つの遺伝子からなる二重プロモーター発現プラスミドである。プラスミドは、全体で6259ヌクレオチドを有する。二つのインターロイキン12サブユニット、p35またはp40のうちの一つを含むWLV103における各々のシストロンは、別々の調節分子の調節の下にある。p35サブユニットは、HCMVプロモーター/エンハンサー、およびSV40ポリアデニル化シグナル(SalIおよびMluI部位の間でクローニングされる)の調節下にある。p40サブユニットは、SCMVプロモーターの調節下にあり、BGHポリアデニル化シグナル(XhoI部位にクローニングされる)を有する。
A.VSVゲノムcDNAクローニング
VSVゲノムcDNA操作についての遺伝的背景は、pVSV−XN1(Schnell,M.J.ら、1996年 J.Virol.,70:2318−23)である。このクローンは、修飾を受けた形態のVSVインディアナ種(VSVi)cDNA配列を含む。修飾には、二つの特有の制限エンドヌクレアーゼ認識部位(XhoIおよびNheI)を付加し、VSV遺伝子開始シグナルおよびVSV遺伝子停止シグナルのコピーを付加することを含む。HIV−189.6penvgp160またはSIVgagp55またはHIV−1gagのような外来の遺伝子が、XhoIおよびNheI部位の間に都合よく挿入される場合は、VSV転写調節シグナルによる発現調節に適した位置に定着する。VSVcDNA配列にはまた、生きたウィルス複製産物を回復させることを促進するために必要となるシス作用性DNA配列が側面に位置している。T7RNAポリメラーゼプロモーターは、ウィルスcDNA全体にわたる一次転写産物の転写にあたるものである。リボザイムは、T7RNAポリメラーゼが転写を終結させた後に、RNAゲノムの末端を形成するために一次転写産物を解離する。
ゲノムcDNAプラスミドまたはゲノムcDNAプラスミドから転写したRNAは、細胞に導入した後、ウィルス複製周期を開始させるには不十分であった。ウィルスゲノムRNAは、単独では、翻訳または複製のための活性のある鋳型ではなかった。従って、組換えウィルスは、様々なVSVゲノムcDNA構造から復元されなければならない。当該分野において知られた回復手順は、クローニングしたDNAからウィルスを復元することを可能にする。ウィルスの回復の成功には、ウィルスmRNA合成およびゲノム複製のために必要としたウィルスRNA依存性RNAポリメラーゼを形成する、PおよびLタンパク質と共に、ウィルスゲノムRNAをカプシドに包むために、VSVゲノムRNAがVSVNタンパク質と共に細胞中に存在することを必要とした。培養した細胞中でこれら全てのウィルス成分を生成することは、VSV、N、PおよびLタンパク質をコード化する発現プラスミドに加えて、VSVゲノムcDNAについてのプラスミドを共感染させることによって達成された。
次の実施例において用いた特異的な組換えVSVベクターを生成するために、HIV−189.6Pgp160を発現している組換えVSVをVSVGタンパク質(rVSVHIV−1envG)膜貫通領域に融合させ、SIVmac239gagp55(rVSVSIVgag)を混合し、実施例の免疫原性組成物として用いた。インフルエンザ血球凝集素タンパク質を発現しているrVSV(rVSVfluHA)を、調節組成物として用いた。組換えVSVベクターを、VSVのGおよびL転写単位の間に挿入した望ましい抗原をコード化する遺伝子を用いて、以前に記述されたように(Roseら、2000年 J.Virol.,74:10903−10)調製した。次の構造は、上記の、Roseらの論文において記述された。
チャンディプラ糖タンパク質[G(Ch)]遺伝子を含むプラスミド(Masters,P.S.,1989年 Virol.,171:285−290)は、Dr.Amiya、Banerjee、Cleveland Clinicによって与えられた。インディアナ糖タンパク質[G(I)]遺伝子の代わりに、G(Ch)遺伝子を含むVSVベクターを構成するために、相補的プライマー
組換えVSVは、確立された方法(Lawsonら 1995年 上で引用した)を用いて復元された。簡潔に言うと、赤ん坊のハムスター腎(BHK)細胞は、10cmのディッシュ上で増殖し、約60%融合した。細胞を、その後10の重複感染度(MOI)で、vTF7−3、T7RNAポリメラーゼを発現する組換えワクシニアウィルスに感染させた(Fuerstら、1987年 Mol.Cell.Biol.7:2538−2544)。1時間後、各々のディッシュの細胞を、3μgのpBS−N、5μgのpBS−P、1μgのpBS−L、および上で記述した三つの全長の組換え体のうちの一つをコード化する10μgのプラスミドによってトランスフェクションした。トランスフェクションを、ジメチルジオクトアデシル臭化アンモニウムおよびジオレイルホスファチジルエタノラミンを含む、カチオンリポソーム試薬を用いて実行された(Roseら、1991年 Biotechniques 10:520−525)。細胞を、その後37℃で48時間インキュベーションした。細胞の上澄みを、0.2μmのフィルターを通過させてワクシニアウィルスの大部分を除去し、その後新しいBHK細胞に加えて追加で48時間37℃インキュベーションした。復元のために、VSVG(pBS−G)をコード化する追加のプラスミド、4μg/プレートが、N、PおよびL支持プラスミドと共に含まれた。感染性ウィルスの復元は、BHK細胞の単層を、VSV細胞変性効果について調べることによって確認された。ウィルスプラークを、その後BHK細胞上で単離し、個別のプラークに由来するウィルス群を、BHK細胞の直径10cmのプレートに単一のプラークに由来するウィルスを付加することによって、増殖させた。これらの群を、その後80℃で貯蔵した。VSV(GI)−89.6G、VSV(GCh)−89.6GおよびVSV(GNJ)−89.6Gについて得られた滴定価は、VSV滴定価を約3倍減少させる手順である冷凍および解凍後、全て107から108PFU/mlの範囲にあった。
A.免疫化プロトコール
マカークザル(グループにつき5体)を、SIVgagp37ポリタンパク質を発現しているDNAプラスミド5mg(グループ1および2)、または空のDNAプラスミド5mg(グループ3および4)を組み合わせて、サルのIL−12p35およびIL−12p40をコード化する5mgの二シストロンのDNAプラスミドを筋内注射することによって免疫化した。これら全てのDNAプラスミドおよびその処方は、実施例1に詳細に記述されている。DNA免疫化スケジュールは、0日目に最初の免疫化、続いて4週目および8週目に最初および二番目の免疫化することを規定していた。注射は、三角筋および大腿四頭筋における四つの部位に、針および注射器を用いて部位あたり1ccで行った。
他には酵素結合免疫スポットアッセイ(ELISpot)とも呼ばれる、濾過免疫プラークアッセイは、個別の抗体分泌B細胞を検出し、定量するために、最初に開発された。本技術は、迅速で用途の広い、従来のプラーク形成細胞アッセイに代わる選択肢を提供した。最近の改良ELISpotアッセイの感受性が向上したため、1秒あたりの特定のタンパク質を100分子生成する細胞が検出され得る。これらのアッセイは、タンパク質分泌細胞のすぐ近くを取り巻く環境において、(サイトカインのような)タンパク質の濃度が相対的に高いことを利用している。これらの細胞生成物を、高親和性抗体を用いて捕捉し、検出した。
最初のDNA免疫化後、SIVgag特異的IFN−γELISpot反応は、SIVgag/IL−12DNAで免疫化したマカークザル(平均254SFC/106細胞)10頭のうち8頭で容易に検出された。二番目のSIVgag/IL−12DNA免疫化後、免疫化したマカークザル10頭のうち10頭が、高いレベルのELISpot反応を起こし、三番目のgag/IL−12DNA投与は、動物の大多数(平均1133SFC/106細胞)においてgag特異的ELISpot反応をブーストした。最初のrVSVHIVenv/rVSVSIVgagブーストの後、平均SIVgagELISpot反応は、一回のrVSVHIVenv/rVSVSIVgag免疫化のみを受けた反応(平均386SFC/106細胞)よりも、実質的に高かった。これらの結果は、rVSV免疫化の免疫原性を増大させるために、サイトカインで向上させたDNAプライムを利用することを支持している。
表1は、同一の結果を、表の形で報告している。
マカークザル(Rh)を、実施例3のプライム/ブースト戦略、および同一のプロトコールに従ったその中に記述されているプラスミドおよびVSVベクターを用いて免疫化する。最初のプライミング組成物投与の約32週後、マカークを、病原性SIV/HIV組換えウィルスSHIV89.6Pの50%サル感染用量(MID50)の330倍の用量で刺激する(Reimannら、1996年 J.Virol.,70:3198−3206;Reimannら、1996年 J.Virol.,70:6922−6928)。
Claims (45)
- 哺乳類の対象にて抗原特異的免疫応答を誘導する方法であり、
(a)DNAプラスミドによるその発現に対する調節配列による調節の下で、抗原をコード化するDNA配列を含むDNAプラスミドを含む一番目の組成物の有効量を、対象に投与し;
(b)組換え水疱性口内炎ウィルス(VSV)によるその発現に対する調節配列による調節の下で、該抗原をコード化する核酸配列を含む組換えVSVを含む二番目の組成物の有効量を、該対象に投与することを含む;
工程を含む方法。 - VSVが複製成分であるところの、請求項1記載の方法。
- VSVが複製できないところの、請求項1記載の方法。
- 一番目の組成物が、二番目の組成物の投与に先立って少なくとも1回対象に投与されるところの、請求項1記載の方法。
- 二番目の組成物が少なくとも1回対象に投与されるところの、請求項4記載の方法。
- 二番目の組成物が、一番目の組成物の投与に先立って少なくとも1回対象に投与されるところの、請求項1記載の方法。
- 一番目の組成物が少なくとも1回対象に投与されるところの、請求項6記載の方法。
- 工程(a)において、さらに有効量のサイトカインを哺乳類に投与することを含む、請求項1記載の方法。
- サイトカインが、DNAプラスミドによるその発現に対する調節配列による調節の下で、サイトカインをコード化するDNA配列を含むDNAプラスミドを含む核酸組成物として投与されるところの、請求項8記載の方法。
- サイトカインが、IL−12、IL−15、GM−CSFおよびそれらの組み合わせからなる群から選ばれるところの、請求項9記載の方法。
- サイトカインコード化配列が、抗原コード化配列と同一のDNAプラスミド上に存在しているところの、請求項9記載の方法。
- サイトカインコード化配列が、抗原コード化配列とは異なるDNAプラスミド上に存在しているところの、請求項9記載の方法。
- 工程(b)において、さらに有効量のサイトカインを哺乳類に投与することを含む、請求項1記載の方法。
- サイトカインが、タンパク質の形態で投与されるところの、請求項13記載の方法。
- サイトカインが、IL−12、IL−15、GM−CSFおよびそれらの組み合わせからなる群から選ばれるところの、請求項14記載の方法。
- 抗原が、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、それらの断片または融合体であり、そのタンパク質が、細菌、ウィルス、真菌、寄生虫、癌細胞、腫瘍細胞、アレルゲンおよび自己分子からなる群から選ばれるメンバーに由来するところの、請求項1記載の方法。
- ウィルスが、ヒトまたはサル免疫不全ウィルスであるところの、請求項16記載の方法。
- 抗原が、gag、pol、env、nef、vpr、vpu、vifおよびtat、およびそれらの免疫原性断片または融合体からなる群から選ばれるところの、請求項17記載の方法。
- 一番目の組成物が、同一または異なる抗原の一つより多くのコピーをコード化するDNA配列を含む一つのDNAプラスミドを含むところの、請求項1記載の方法。
- 一番目の組成物が、各々のDNAプラスミドが同一または異なる抗原をコード化する、一つより多くのDNAプラスミドを含むところの、請求項1記載の方法。
- その免疫応答が、抗原に対するCD8+T細胞反応において、DNAプラスミドまたは組換えVSV単独で投与することによって達成されるよりも向上していることを含むところの、請求項1記載の方法。
- その免疫応答が、抗原に対する抗体反応において、一番目の組成物または二番目の組成物単独で投与することによって達成されるよりも相乗的に向上していることを含むところの、請求項1記載の方法。
- 哺乳類の対象が霊長類であるところの、請求項1記載の方法。
- 哺乳類の対象がヒトであるところの、請求項23記載の方法。
- 工程(a)において、組換えVSVに先立って、各々のプラスミドが異なる抗原をコード化する配列を含む、少なくとも二つのDNAプラスミドを投与することをさらに含む、請求項1記載の方法。
- 工程(b)において、少なくとも二つの組換えVSVをさらに投与することを含む、請求項1記載の方法。
- 各々の組換えVSVが、同じ抗原コード化配列であるが、異なるVSVのGタンパク質および異なるVSV血清型を有するところの、請求項26記載の方法。
- 各々の組換えVSVが、同じVSVのGタンパク質であるが、異なる抗原コード化配列を有するところの、請求項26記載の方法。
- 各々の組換えVSVが、異なる抗原コード化配列を有し、異なるVSVのGタンパク質を有するところの、請求項26記載の方法。
- 二番目およびあらゆる追加の組換えVSVが、最初の組換えVSV投与に続くブースターとして投与されるところの、請求項26記載の方法。
- さらに少なくとも三回該ブースターを投与することを含むところの、請求項30記載の方法。
- DNAプラスミド組成物が、医薬上許容される希釈剤、賦形剤またはキャリアに投与されるところの、請求項1記載の方法。
- 賦形剤がブピバカインを含むところの、請求項32記載の方法。
- rVSV組成物が、医薬上許容される希釈剤、賦形剤またはキャリアに投与されるところの、請求項1記載の方法。
- 哺乳類の対象における、抗原に対する抗原特異的免疫応答を誘導するための免疫原性組成物であり、
(a)DNAプラスミドによるその発現に対する調節配列による調節の下で、抗原をコード化するDNA配列を含むDNAプラスミドを含む一番目の組成物;および
(b)組換え水疱性口内炎ウィルス(VSV)によるその発現に対する調節配列による調節の下で、該抗原をコード化する核酸配列を含む、少なくとも一つの組換えVSV
を含む免疫原性組成物。 - VSVが複製成分であるところの、請求項35記載の組成物。
- VSVが複製できないところの、請求項35記載の組成物。
- サイトカイン組成物をさらに含む、請求項35記載の免疫原性組成物。
- そのサイトカイン組成物が、DNAプラスミドによるその発現に対する調節配列による調節の下で、サイトカインをコード化するDNA配列を含むDNAプラスミドを含む核酸組成物を含むところの、請求項38記載の免疫原性組成物。
- 哺乳類の対象における抗原特異的免疫応答を誘導するための方法に利用するためのキットであり、
DNAプラスミドによるその発現に対する調節配列による調節の下で、抗原をコード化するDNA配列を含むDNAプラスミドを含む、少なくとも一つの一番目の組成物;
組換え水疱性口内炎ウィルス(VSV)によるその発現に対する調節配列による調節の下で、該抗原をコード化する核酸配列を含む組換えVSVを含む、少なくとも一つの二番目の組成物;および
請求項1記載の方法を実践するための使用説明書
を含むキット。 - VSVが複製成分であるところの、請求項40記載のキット。
- VSVが複製できないところの、請求項40記載のキット。
- サイトカイン組成物をさらに含む、請求項40記載のキット。
- そのサイトカイン組成物が、DNAプラスミドによるその発現に対する調節配列による調節の下で、サイトカインをコード化するDNA配列を含むDNAプラスミドを含む核酸組成物を含むところの、請求項43記載のキット。
- 動物における、抗原に対する免疫応答を誘導するための医薬の調製における、
(a)DNAプラスミドによるその発現に対する調節配列による調節の下で、該抗原をコード化するDNA配列を含むDNAプラスミドを含む、一番目の組成物;および
(b)組換え水疱性口内炎ウィルス(VSV)によるその発現に対する調節配列による調節の下で、該抗原をコード化する核酸配列を含む、少なくとも一つの組換えVSV;
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