JP2011140442A

JP2011140442A - Sulfhydryl oxidase activity promoter

Info

Publication number: JP2011140442A
Application number: JP2010000316A
Authority: JP
Inventors: Mariko Koike; 真理子小池; Shoichi Yahagi; 彰一矢作; Yuri Okano; 由利岡野; Hitoshi Masaki; 仁正木
Original assignee: Cosmos Technical Center Co Ltd; Nikko Chemicals Co Ltd
Current assignee: Cosmos Technical Center Co Ltd; Nikko Chemicals Co Ltd
Priority date: 2010-01-05
Filing date: 2010-01-05
Publication date: 2011-07-21

Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a sulfhydryl oxidase activity promoter. <P>SOLUTION: It has been recognized that lysophosphatidic acid (LPA) and/or a salt thereof excellently increase the mRNA expression of sulfhydryl oxidase 1. It has been found that the lysophosphatidic acid (LPA) and/or the salt thereof have a remarkably excellent effect for promoting the activity of sulfhydryl oxidase. <P>COPYRIGHT: (C)2011,JPO&INPIT

Description

本発明は、リゾホスファチジン酸及び／又はその塩を有効成分として含有するスルフヒドリルオキシダーゼ活性促進剤に関する。 The present invention relates to a sulfhydryl oxidase activity promoter containing lysophosphatidic acid and / or a salt thereof as an active ingredient.

人体の最外層は、表皮を構成するケラチノサイトの最終産物である角層であり、この角層を通して我々は外界より身体保護している。また同時に角層は、乾燥した大気の中で、生体に必要な水分の喪失を防ぐ働きを担っており、紫外線、乾燥、ストレスなどにより、角層の機能が低下するとドライスキンが発生する。この様な皮膚症状を緩和するために、皮膚バリア機能を向上させる成分が重要である。 The outermost layer of the human body is the stratum corneum, the final product of the keratinocytes that make up the epidermis, through which we protect the body from the outside. At the same time, the stratum corneum plays a role in preventing the loss of moisture necessary for the living body in a dry atmosphere, and dry skin occurs when the function of the stratum corneum decreases due to ultraviolet rays, drying, stress, and the like. In order to alleviate such skin symptoms, components that improve the skin barrier function are important.

角層でのバリア機能を担う因子として、コーニファイドエンベロープ（ＣＥ）、細胞間脂質、あるいは天然保湿因子（ＮＭＦ）が重要であることが知られており、我々は、これまでにリゾホスファチジン酸（以下、ＬＰＡ）及び又はその塩がＮＯ産生促進を介して細胞間脂質であるセラミドの産生を促進すること、また表皮分化・成熟過程におけるＬＰＡの作用メカニズムについて報告している（特許文献１、非引用文献１〜３）。 As factors responsible for the barrier function in the stratum corneum, it is known that a confined envelope (CE), an intercellular lipid, or a natural moisturizing factor (NMF) is important, and so far, we have proposed lysophosphatidic acid ( Hereinafter, LPA) and / or a salt thereof promotes the production of ceramide, which is an intercellular lipid, through the promotion of NO production, and reports on the mechanism of action of LPA in the process of epidermal differentiation / maturation (Patent Document 1, Non-patent Document 1) Cited references 1-3).

また、コーニファイドエンベロープ（ＣＥ）は、角化過程に従って細胞内で産生されるインボルクリンをはじめとする複数のＣＥがスルフヒドリルオキシダーゼ等の角層架橋酵素により架橋され、不溶化することにより形成される。 In addition, a conformed envelope (CE) is formed by insolubilizing a plurality of CEs including involucrin produced in a cell according to a keratinization process by a stratum corneum cross-linking enzyme such as sulfhydryl oxidase.

このような考えに基づき、スルフヒドリルオキシダーゼ活性促進剤を探索する試みがなされており、例えば、１−ヒドロキシ−４−メチル−６−（２，４，４，−トリメチルペンチル）−２（１Ｈ）−ピリドンモノエタノールアミン塩（特許文献１）、ローズマリーやアロエの抽出物（特許文献２）、ステロイド化合物（特許文献３）、各種カルシウム化合物（特許文献４）等が報告されている。 Based on such an idea, attempts have been made to search for a sulfhydryl oxidase activity promoter. For example, 1-hydroxy-4-methyl-6- (2,4,4, -trimethylpentyl) -2 (1H)- A pyridone monoethanolamine salt (patent document 1), an extract of rosemary and aloe (patent document 2), a steroid compound (patent document 3), various calcium compounds (patent document 4) and the like have been reported.

しかしながら、これまで用いられてきたスルフヒドリルオキシダーゼ活性促進剤はその効果が必ずしも十分でない。 However, the effect of the sulfhydryl oxidase activity promoter used so far is not always sufficient.

一方、本発明者らが着目しているＬＰＡ及び又はその塩については、本発明者らの報告及びＴＧＦα誘導を介した表皮細胞の増殖およびＴＧＦβ誘導を介した分化・肥厚を促すことに関する報告（非特許文献５）を除き、１−アシルリゾリン脂質誘導体を有効成分として含有するグリコサミノグリカン産生促進作用を有する皮膚活性化剤（特許文献５）、C１４−２２脂肪酸残基を有するリゾホスファチジン酸を有効成分とする表皮細胞におけるラミニン５の産生促進剤（特許文献６）等が報告されているのみで、スルフヒドリルオキシダーゼ活性促進剤に関する報告はこれまでにない。 On the other hand, with regard to LPA and / or its salt, which the present inventors have paid attention to, reports on the present inventors and reports on promoting epidermal cell proliferation through TGFα induction and differentiation / thickening through TGFβ induction ( Except for Non-patent Document 5), a skin activating agent having a glycosaminoglycan production promoting action containing 1-acyl lysophospholipid derivative as an active ingredient (Patent Document 5), and lysophosphatidic acid having a C14-22 fatty acid residue Only the production promoter of laminin 5 in the epidermal cells as an active ingredient (Patent Document 6) has been reported, and there has been no report on a sulfhydryl oxidase activity promoter.

特開平０８−２０５２１号公報Japanese Patent Laid-Open No. 08-20521 特開平０８−２０５２２号公報Japanese Patent Laid-Open No. 08-20522 特開平０８−１３４０９５号公報Japanese Patent Application Laid-Open No. 08-134095 特開平１１−１００３２０号公報Japanese Patent Laid-Open No. 11-100320 特開２００４−２４８６６８号公報JP 2004-248668 A 特表２０００−２２６３０８号公報Special Table 2000-226308

Shoichi Yahagi, et al.,Lysophosphatidic acid（LPA） promotes the differentiation of keratinocytes: a possible role to improve the skin, 7th ASCS, 54-1, 2005Shoichi Yahagi, et al., Lysophosphatidic acid (LPA) promotes the differentiation of keratinocytes: a possible role to improve the skin, 7th ASCS, 54-1, 2005 矢作彰一ら、ヒト表皮角化細胞の分化機構に対するリゾホスファチジン酸（LPA）の作用、日本薬学会第124年講演要旨集、一般学術発表29（P1）III 068Shoichi Yahagi et al., Effect of lysophosphatidic acid (LPA) on the differentiation mechanism of human epidermal keratinocytes, Abstracts of the 124th Annual Meeting of the Pharmaceutical Society of Japan, 29 (P1) III 068 矢作彰一ら、リゾホスファチジン酸（LPA）の表皮角化メカニズム解析と皮膚外用剤への応用、日本薬学会第128年会講演要旨集、一般学術発表27PE−am179Shoichi Yahagi et al., Analysis of keratinization mechanism of lysophosphatidic acid (LPA) and its application to topical skin preparations, Abstracts of the 128th Annual Meeting of the Pharmaceutical Society of Japan, 27PE-am179 フレグランスジャーナル，Vol.35, No.1,81-83, 2007Fragrance Journal, Vol.35, No.1,81-83, 2007 Piazza GA.,et al., Exp Cell Res. 216;51-64, 1995Piazza GA., Et al., Exp Cell Res. 216; 51-64, 1995

本発明は、スルフヒドリルオキシダーゼ活性促進剤を提供することにある。 The present invention is to provide a sulfhydryl oxidase activity promoter.

本発明者らは、角層架橋酵素活性促進剤について鋭意研究した結果、ＬＰＡ及び又はその塩はスルフヒドリルオキシダーゼの活性を促進する効果が顕著に優れることを見出し、本発明を完成するに至った。 As a result of intensive studies on the stratum corneum cross-linking enzyme activity promoter, the present inventors have found that LPA and / or its salt are remarkably excellent in the effect of promoting the activity of sulfhydryl oxidase, and have completed the present invention.

本発明によれば、ＬＰＡ及び又はその塩は、スルフヒドリルオキシダーゼ活性促進作用が顕著であった。これらを配合することで、表皮バリア機能の改善などの表皮角化正常化効果を発揮する外用剤が得られる。 According to the present invention, LPA and / or a salt thereof had a remarkable effect of promoting sulfhydryl oxidase activity. By blending these, an external preparation that exhibits an effect of normalizing the skin keratinization such as improvement of the skin barrier function can be obtained.

以下、本発明の構成を更に詳細に説明する。 Hereinafter, the configuration of the present invention will be described in more detail.

本発明に係わるリゾホスファチジン酸（ＬＰＡ）は、大豆や卵黄などから得ることができ、また、大豆や卵黄などから得られるホスファチジルコリンをホスホリパーゼDにより加水分解して容易に得られる。本発明のＬＰＡは、ホスファチジン酸をホスホリパーゼA２で位置選択的に加水分解することにより容易に得られる。他にも、本発明のＬＰＡは、有機化学的に合成することが可能で、例えば、グリセロールリン酸に塩基存在下、脂肪酸クロライドを反応させたり、脂肪酸モノグリセリドおよび／または脂肪酸ジグリセリドに各種リン酸化剤を作用させたりして、目的のＬＰＡを得ることができる。特に、合成法を制限する必要はない。また、本発明のＬＰＡは、ＬＰＡを高濃度に含有するリン脂質であってもかまわず、高濃度にホスファチジン酸を含む大豆や卵黄などから得られるリン脂の部分加水分解物であってもかまわない。 The lysophosphatidic acid (LPA) according to the present invention can be obtained from soybeans, egg yolks, etc., and can be easily obtained by hydrolyzing phosphatidylcholine obtained from soybeans, egg yolks, etc. with phospholipase D. The LPA of the present invention can be easily obtained by regioselectively hydrolyzing phosphatidic acid with phospholipase A2. In addition, the LPA of the present invention can be synthesized organically, for example, by reacting glycerol phosphate with a fatty acid chloride in the presence of a base, or by converting a fatty acid monoglyceride and / or a fatty acid diglyceride with various phosphorylating agents. To obtain the target LPA. In particular, there is no need to limit the synthesis method. The LPA of the present invention may be a phospholipid containing LPA at a high concentration, or may be a partial hydrolyzate of phospholipid obtained from soybean or egg yolk containing phosphatidic acid at a high concentration. Absent.

本発明に係わるＬＰＡの構成脂肪酸は、特定はしないが、大豆や卵黄などから得た場合は、レシチン由来の混合脂肪酸であり、また、酸化安定性の向上を目的に水素添加反応をして飽和の脂肪酸にしても良く、更には、飽和脂肪酸と不飽和脂肪酸の混合脂肪酸でも良い。 The constituent fatty acids of LPA according to the present invention are not specified, but when obtained from soybeans or egg yolks, they are mixed fatty acids derived from lecithin, and saturated by hydrogenation reaction for the purpose of improving oxidative stability. Or a mixed fatty acid of a saturated fatty acid and an unsaturated fatty acid.

本発明に係わるＬＰＡ及びその塩の対イオンは、一般的に使われる塩基性物質であれば特に限定する必要はなく、例えば、ナトリウム、カリウム、カルシウム、トリエタノールアミン、アルギニンなどで使用の目的に合わせてｐHを調整したものであれば良い。 The counter ion of LPA and a salt thereof according to the present invention is not particularly limited as long as it is a basic substance that is generally used. For example, sodium, potassium, calcium, triethanolamine, arginine, etc. What is necessary is just to adjust the pH.

本発明のＬＰＡの塩は、ＬＰＡをイソプロピルアルコールやアセトンやヘキサンなどの適当な溶媒に溶解させ、水酸化ナトリウムのエタノール溶液や水酸化カリウムのエタノール溶液やトリエタノールアミンやアルギニン水溶液などで中和し、溶媒を減圧留去することにより得られる。 The LPA salt of the present invention is obtained by dissolving LPA in a suitable solvent such as isopropyl alcohol, acetone or hexane, and neutralizing with an ethanol solution of sodium hydroxide, an ethanol solution of potassium hydroxide, triethanolamine or an aqueous arginine solution. The solvent is distilled off under reduced pressure.

本発明に係わるＬＰＡ及びその塩としては、試薬としても入手できるほか、市販品として入手できるＬＰＡを高濃度に含有するリン脂質である日光ケミカルズ社の「ＬＰＡ」等を利用することもできるし、これらの市販品を処理したものを利用することもできる。 As LPA and a salt thereof according to the present invention, it is also possible to use “LPA” of Nikko Chemicals, which is a phospholipid containing a high concentration of LPA available as a commercially available product, as a reagent, What processed these commercial items can also be used.

上記ＬＰＡ及びその塩は、１種又は２種以上を組み合わせて使用することができる。 The LPA and salts thereof can be used alone or in combination of two or more.

本発明に係わるＬＰＡ及び／又はその塩は、いずれも後で証明するように、角層架橋酵素であるスルフヒドリルオキシダーゼのｍＲＮＡ発現を増加する効果を有する。したがって、スルフヒドリルオキシダーゼ活性促進剤として有用である。 As will be demonstrated later, the LPA and / or salt thereof according to the present invention has an effect of increasing the mRNA expression of sulfhydryl oxidase, which is a stratum corneum cross-linking enzyme. Therefore, it is useful as a sulfhydryl oxidase activity promoter.

上記スルフヒドリルオキシダーゼ活性促進剤の外用剤への配合量は、用途、剤型、配合目的等によって異なり、特に限定されるものではないが、一般的には、ＬＰＡ及び／又はその塩として、外用剤中０．０００１〜５．０質量％が好ましく、より好ましくは０．００１〜２．０質量％である。 The blending amount of the sulfhydryl oxidase activity promoter in the external preparation varies depending on the use, dosage form, blending purpose, etc., and is not particularly limited. Generally, however, the external preparation is used as LPA and / or a salt thereof. The content is preferably 0.0001 to 5.0 mass%, more preferably 0.001 to 2.0 mass%.

本発明のスルフヒドリルオキシダーゼ活性促進剤は、更に他の成分と組み合わせることにより、その効果を相乗的に高めることができる。上記スルフヒドリルオキシダーゼ活性促進剤、並びにそれらを含有する表皮角正常化剤と組み合わせて使用される他の成分は、ビタミンＡおよびその誘導体、ビタミンＢ及びその誘導体、ビタミンＣ及びその誘導体、ビタミンＤ及びその誘導体、セラミド類、炭化水素油、上記ＬＰＡ及び／又はその塩を除くリン脂質等から選ばれるものであるが、具体的な成分としては、例えば、それぞれ以下に示すものが挙げられる。ここで以下に記載する「誘導体」には形成可能な塩が含まれる。 The sulfhydryl oxidase activity promoter of the present invention can be synergistically enhanced by further combining with other components. Other ingredients used in combination with the above sulfhydryl oxidase activity promoter and epidermis angle normalizing agent containing them are vitamin A and its derivatives, vitamin B and its derivatives, vitamin C and its derivatives, vitamin D and its Although it is selected from derivatives, ceramides, hydrocarbon oils, phospholipids excluding the LPA and / or salts thereof, specific components include, for example, those shown below. Here, the “derivatives” described below include salts that can be formed.

ビタミンＡおよびその誘導体としては、レチノール、パルミチン酸レチノール、リノール酸レチノール、酢酸レチノール、水添レチノール、レチナールおよびデヒドロレチナール等の誘導体、カロチノイド（カロチン、リコピン、アスタキサンチン、ルテイン）等が挙げられる。ビタミンＢおよびその誘導体としては、チアミン塩酸塩、チアミン硫酸塩、チアミンリン酸塩、リボフラビン、酢酸リボフラビン、フラビンアデニンジヌクレオチド、塩酸ピリドキシン、ジオクタン酸ピリドキシン、ジパルミチン酸ピリドキシン、トリヘキシルデカン酸ピリドキシン、シアノコバラミン、葉酸類、ニコチン酸アミド、ニコチン酸ベンジル等のニコチン酸類、コリン類等、ビタミンＣおよびその誘導体としては、ジパルミチン酸アスコルビルやテトラヘキシルデカン酸アスコルビル等のアスコルビン酸アルキルエステル、アスコルビン酸リン酸エステル、アスコルビン酸硫酸エステル、３−Ｏ−セチルアスコルビン酸等のアスコルビン酸アルキルエーテル等、ビタミンＤおよびその誘導体としては、エルゴカルシフェロール、コレカルシフェロール、ジヒドロキシスタナール等が挙げられる。 Examples of vitamin A and derivatives thereof include retinol, retinol palmitate, retinol linoleate, retinol acetate, hydrogenated retinol, retinal and dehydroretinal, carotenoids (carotene, lycopene, astaxanthin, lutein) and the like. Vitamin B and its derivatives include thiamine hydrochloride, thiamine sulfate, thiamine phosphate, riboflavin, riboflavin acetate, flavin adenine dinucleotide, pyridoxine hydrochloride, pyridoxine dioctanoate, pyridoxine dipalmitate, pyridoxine trihexyldecanoate, cyanocobalamin, Nicotinic acids such as folic acid, nicotinic acid amide and benzyl nicotinate, choline and the like, vitamin C and its derivatives include ascorbyl alkyl esters such as ascorbyl dipalmitate and ascorbyl tetrahexyldecanoate, ascorbic acid phosphate, ascorbine Acid sulfates, ascorbic acid alkyl ethers such as 3-O-cetylascorbic acid, etc., vitamin D and its derivatives include ergocalciferol, Leka Cie Fellows Le dihydroxy static knurls and the like.

セラミド類としては、スフィンゴシン、フィトスフィンゴシン、それらの長鎖脂肪酸アマイドであるセラミド１、セラミド２、セラミド３、セラミド４、セラミド５、セラミド６I、セラミド６II等の天然セラミド類、又、スフィンゴシン、フィトスフィンゴシンのリン脂質誘導体であるスフィンゴミエリン、フィトスフィンゴミエリン等のスフィンゴリン脂質、又、それらの配糖体であるセレブロシドやガングリオシド等のスフィンゴ糖脂質、フィトスフィンゴ糖脂質等の他、これらの天然セラミドの他に化学合成で得られたセラミド類似化合物も挙げることができる。 Examples of ceramides include sphingosine, phytosphingosine, natural ceramides such as ceramide 1, ceramide 2, ceramide 3, ceramide 4, ceramide 5, ceramide 6I, and ceramide 6II, which are long-chain fatty acid amides, and sphingosine and phytosphingosine. Other than these natural ceramides, including sphingophospholipids such as sphingomyelin and phytosphingomyelin, and glycosphingolipids such as cerebroside and ganglioside, phytosphingoglycolipids, etc. Also included are ceramide-like compounds obtained by chemical synthesis.

炭化水素油としては、例えば流動パラフィン、オゾケライト、スクワラン、パラフィン、イソパラフィン、プリスタン、セレシン、ワセリン、マイクロクリスタリンワックスなどが挙げられる。 Examples of the hydrocarbon oil include liquid paraffin, ozokerite, squalane, paraffin, isoparaffin, pristane, ceresin, petrolatum, and microcrystalline wax.

上記ＬＰＡ及び／又はその塩を除くリン脂質としては、大豆レシチン、卵黄レシチン、水素添加大豆レシチン、水素添加卵黄レシチン等のレシチン類、これらのレシチン類を酵素処理によりモノアシル体としたリゾレシチン及びまたは水素添加リゾレシチン、ヒドロキシル化したヒドロキシレシチン等の他、ホスファチジルコリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン等のレシチン中のリン脂質分画物も挙げることができる。 Examples of phospholipids excluding LPA and / or salts thereof include lecithins such as soybean lecithin, egg yolk lecithin, hydrogenated soybean lecithin, hydrogenated egg yolk lecithin, lysolecithin and / or hydrogen obtained by converting these lecithins into monoacyl bodies by enzyme treatment. In addition to added lysolecithin, hydroxylated hydroxylecithin and the like, phospholipid fractions in lecithin such as phosphatidylcholine, phosphatidylinositol, phosphatidylethanolamine, phosphatidylserine and the like can also be mentioned.

これらのスルフヒドリルオキシダーゼ活性促進剤と組み合わせて使用される他の成分うち、特に好ましいものとしては、ジオクタン酸ピリドキシン、ジパルミチン酸ピリドキシン、トリヘキシルデカン酸ピリドキシン、ワセリン、天然セラミド類、水素添加大豆レシチンが挙げられる。 Among the other components used in combination with these sulfhydryl oxidase activity promoters, particularly preferred are pyridoxine dioctanoate, pyridoxine dipalmitate, pyridoxine trihexyldecanoate, petrolatum, natural ceramides, and hydrogenated soybean lecithin. It is done.

本発明のスルフヒドリルオキシダーゼ活性促進剤と、組み合わせて使用される他の成分の配合比は、その種類により相違するが、一般的には、その配合比が質量基準で１００：１〜１：１００であることが好ましく、１０：１〜１：１０がより好ましい。この範囲であると、より優れたスルフヒドリルオキシダーゼ活性促進効果を発揮することができる。 The mixing ratio of the sulfhydryl oxidase activity promoter of the present invention and other components used in combination varies depending on the type, but generally the mixing ratio is 100: 1 to 1: 100 on a mass basis. It is preferable that 10: 1 to 1:10 is more preferable. Within this range, a superior sulfhydryl oxidase activity promoting effect can be exhibited.

本発明のスルフヒドリルオキシダーゼ活性促進剤を含む外用剤には、既存の角層架橋酵素活性促進剤、表皮バリア機能改善剤、表皮角正常化剤を配合することができる。これらの成分を併用することは、本効果の相乗効果をもたらし、本効果を損なうものではない。 The external preparation containing the sulfhydryl oxidase activity promoter of the present invention can contain an existing stratum corneum crosslinking enzyme activity promoter, epidermal barrier function improving agent, and epidermal angle normalizing agent. The combined use of these components brings about a synergistic effect of this effect and does not impair this effect.

既存の角層架橋酵素活性促進剤としては、システインやアセシル化システイン等のアミノ酸及びそれらの誘導体、グルタチオン、ローズマリー、アロエ、クワ等の植物抽出物、ビタミンＡ及びそれらの誘導体、ビタミンＤ及びそれらの誘導体等が挙げられる。 Existing stratum corneum cross-linking enzyme activity promoters include amino acids such as cysteine and acetylated cysteine and their derivatives, plant extracts such as glutathione, rosemary, aloe, mulberry, vitamin A and their derivatives, vitamin D and their And the like.

既存の表皮バリア機能改善剤及び表皮角正常化剤としては、ビタミンＢ及びそれらの誘導体、スフィンゴシン、升麻、牡丹皮、スギナなどの植物抽出物、ヒドロキシプロリンやその誘導体等のアミノ酸及びそれらの誘導体、フィトステロール誘導体等が挙げられる。 Examples of existing skin barrier function improving agents and skin angle normalizing agents include vitamin B and derivatives thereof, plant extracts such as sphingosine, linseed, peony skin, and horsetail, amino acids such as hydroxyproline and derivatives thereof, and derivatives thereof And phytosterol derivatives.

本発明の角層架橋酵素活性促進剤は、ＬＰＡ及びその塩を必須成分とするものであるが、本発明の角層架橋酵素活性促進剤を外用剤に使用する場合、例えば、外用剤には、油脂類、エステル類、炭化水素類、ロウ類、シリコーン系の油相成分、脂肪酸類、低級アルコール類、高級アルコール類、多価アルコール類、界面活性剤、水溶性高分子類、香料、水、各種溶媒等と併用することができ、さらに、老化防止剤、保湿剤、育毛剤、発毛剤、経皮吸収促進剤、紫外線吸収剤、細胞賦活剤、抗炎症剤、その他生理活性成分、防腐防カビ剤等を配合することができる。 The stratum corneum cross-linking enzyme activity promoter of the present invention comprises LPA and a salt thereof as essential components. When the stratum corneum cross-linking enzyme activity promoter of the present invention is used for an external preparation, for example, , Oils and fats, esters, hydrocarbons, waxes, silicone oil phase components, fatty acids, lower alcohols, higher alcohols, polyhydric alcohols, surfactants, water-soluble polymers, fragrances, water , Anti-aging agents, moisturizers, hair growth agents, hair growth agents, percutaneous absorption enhancers, ultraviolet absorbers, cell activators, anti-inflammatory agents, other physiologically active ingredients, An antiseptic and fungicide can be blended.

なお、ＬＰＡ及びその塩の類縁物質として、ホスファチジン酸及びその塩、環状ホスファチジン酸及びその塩、リン酸化グリセリルエーテル、環状リン酸化グリセリルエーテル及びその塩も本発明の効果及び使用が期待できる。 In addition, as the related substance of LPA and its salt, phosphatidic acid and its salt, cyclic phosphatidic acid and its salt, phosphorylated glyceryl ether, cyclic phosphorylated glyceryl ether and its salt can be expected to have the effect and use of the present invention.

本発明のスルフヒドリルオキシダーゼ活性促進剤は、医薬品組成物、化粧料等皮膚外用剤に好適に応用することができる。 The sulfhydryl oxidase activity promoter of the present invention can be suitably applied to skin external preparations such as pharmaceutical compositions and cosmetics.

以下に実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明の技術的範囲がこれらに限定されるものではない。 EXAMPLES The present invention will be specifically described below with reference to examples, but the technical scope of the present invention is not limited to these examples.

ＲＴ−ＰＣＲ法によるｍＲＮＡ発現の確認 Confirmation of mRNA expression by RT-PCR method

１．試験の概容
ＬＰＡのスルフヒドリルオキシダーゼ１（ＱＳＯＸ１）のｍＲＮＡ発現に対する作用を確認した。 1. Test Outline The effect of LPA on sulfhydryl oxidase 1 (QSOX1) mRNA expression was confirmed.

２．実験方法
表皮細胞におけるｍＲＮＡの発現量変化を、Reverse-transcription polymerase chain reaction（ＲＴ−ＰＣＲ）によって評価した。コントロールのハウスキーピング遺伝子としてCyclophilinを用いた。正常ヒト表皮細胞は、HuMedia-KG2培地（クラボウ）を用いて5.0×10⁵cells/wellの細胞密度にて35mm培養ディッシュに播種した。24時間培養後、ＬＰＡを含むHuMedia-KB2培地に交換し、24時間培養した。各試験試料の濃度は、表皮細胞の生存率に有意な低下を示さない濃度を最高濃度に設定した。細胞はPBS（−）にて洗浄したのち、500μLのTRIzol^(r)reagentを用いて細胞を破砕した。100μLのクロロホルムを添加して、十分に混和したのち、遠心操作によって上清の水層を得、２−プロパノール沈殿法にてTotal RNAを得た。RNAは冷75％エタノールで洗浄したのち、DEPC水に溶解してＲＴ−ＰＣＲに供した。
逆転写反応は、Super Script First-Strand Synthesis（Invitrogen）キットのプロトコールに準じ、Total RNA 1μgを用いて実施した。またPCR反応は、逆転写にて得られたcDNAを鋳型として、Taq DNA Polymerase（Roche）を用いて実施した。
ＰＣＲ産物はアガロースゲルにて電気泳動後、SYBR Goldにより染色して泳動画像を得た。得られた泳動画像の各バンドの輝度を CS Analyzer Version 2.0（ATTO株式会社）を用いて定量し、各遺伝子の発現量とした。遺伝子の発現量をCyclophilin遺伝子の発現量にて除することにより補正した後、無添加培養細胞（コントロール）の補正値を1とした相対値で表した。それぞれの遺伝子発現量はStudent t検定を用いて有意差検定を行い、コントロールに対する有意性を解析した。 2. Experimental Method Changes in the expression level of mRNA in epidermal cells were evaluated by reverse-transcription polymerase chain reaction (RT-PCR). Cyclophilin was used as a control housekeeping gene. Normal human epidermal cells were seeded in a 35 mm culture dish at a cell density of 5.0 × 10 ⁵ cells / well using HuMedia-KG2 medium (Kurabo). After culturing for 24 hours, the medium was replaced with HuMedia-KB2 medium containing LPA and cultured for 24 hours. The concentration of each test sample was set to the highest concentration that did not show a significant decrease in the survival rate of epidermal cells. The cells were washed with PBS (−) and then disrupted using 500 μL of TRIzol ^(r) reagent. After adding 100 μL of chloroform and mixing well, a supernatant aqueous layer was obtained by centrifugation, and total RNA was obtained by 2-propanol precipitation. The RNA was washed with cold 75% ethanol, dissolved in DEPC water, and subjected to RT-PCR.
The reverse transcription reaction was performed using 1 μg of Total RNA according to the protocol of the Super Script First-Strand Synthesis (Invitrogen) kit. The PCR reaction was performed using Taq DNA Polymerase (Roche) using the cDNA obtained by reverse transcription as a template.
The PCR product was electrophoresed on an agarose gel and then stained with SYBR Gold to obtain an electrophoretic image. The brightness of each band of the obtained electrophoretic image was quantified using CS Analyzer Version 2.0 (ATTO Co., Ltd.) and used as the expression level of each gene. After correcting the expression level of the gene by dividing the expression level of the Cyclophilin gene, it was expressed as a relative value with the correction value of the additive-free cultured cells (control) taken as 1. Each gene expression level was tested for significance using the Student t test and analyzed for significance with respect to the control.

３．結果
結果を表1に示した。ＬＰＡ処理により、スルフヒドリルオキシダーゼ１のｍＲＮＡ発現において、有意な増加が認められた。また、ＬＰＡとビタミンＣ誘導体であるテトラヘキシルデカン酸アルコルビル（ＶＣ−ＩＰ）を併用することで、スルフヒドリルオキシダーゼ１のｍＲＮＡ発現をさらに増加させ、相乗効果を示すことが明らかとなった。

3. Results The results are shown in Table 1. A significant increase in sulfhydryl oxidase 1 mRNA expression was observed with LPA treatment. Moreover, it became clear that the combined use of LPA and vitamin C derivative tetrahexyldecanoate alkorvir (VC-IP) further increased the mRNA expression of sulfhydryl oxidase 1 and exhibited a synergistic effect.

ＬＰＡ配合製剤の表皮バリア機能改善作用の確認 Confirmation of improvement of epidermal barrier function of LPA formulation

１．試験の概要
ＬＰＡ配合製剤の表皮バリア機能改善作用を評価した。 1. Exam overview
The effect of improving the skin barrier function of the LPA combination preparation was evaluated.

２．実験方法 2. experimental method

２−１．被験者
一般健常人、男女１０名を被験者とした。 2-1. Subjects Subjects were normal healthy people and 10 men and women.

２−２．製剤使用方法および試験期間
各被験者は、プラセボ製剤および０．１％ＬＰＡ配合製剤を朝夕１日２回ずつ半顔に塗布した。試用期間は４週間とし、使用前、使用４週間後の経皮水分蒸散量（ＴＥＷＬ）を測定した。 2-2. Formulation Usage Method and Test Period Each subject applied a placebo formulation and a 0.1% LPA combination formulation to his / her face twice a day in the morning and evening. The trial period was 4 weeks, and the transdermal water transpiration (TEWL) was measured before use and after 4 weeks of use.

２−３．経皮水分蒸散量（ＴＥＷＬ）の測定
各測定時間において、被験者は、あらかじめ指定洗顔料で洗顔、タオルで拭き取ったのち、恒温恒湿室（室温２１℃、湿度４５％）にて１５分の馴化を行った。被験部位のＴＥＷＬをサイクロン水分蒸散計AS-CT1（アサヒバイオメッド）を用いて測定し、被験部位を３回測定した平均値をもってその部位のＴＥＷＬ値とした。ＴＥＷＬ値の変化は使用前の初期値を100%とした相対値で示した。 2-3. Measurement of transcutaneous moisture transpiration (TEWL) At each measurement time, the subject was pre-washed with a specified face wash, wiped with a towel, and then acclimated for 15 minutes in a constant temperature and humidity room (room temperature 21 ° C, humidity 45%). Went. The TEWL of the test site was measured using a cyclone moisture transpiration meter AS-CT1 (Asahi Biomed), and the average value obtained by measuring the test site three times was used as the TEWL value of the site. The change in the TEWL value is shown as a relative value with the initial value before use as 100%.

３．結果
結果を表２に示した。肌状態の悪化する冬季に試験を実施したため、いずれの製剤を用いた場合も使用前と比較してＴＥＷＬ値の有意な増加を認めたが、ＬＰＡ配合製剤ではプラセボ製剤と比較してＴＥＷＬ値上昇を有意に抑制することが明らかとなった。すなわち、表皮架橋酵素の発現増加効果による表皮バリア機能の改善作用を示すことが示唆された。

3. Results The results are shown in Table 2. Tests were conducted in the winter when the skin condition deteriorated, so a significant increase in the TEWL value was observed when using any formulation compared to before use, but the TEWL value increased compared with the placebo formulation in the LPA combination formulation Was found to be significantly suppressed. That is, it was suggested that the effect of improving the epidermal barrier function by the effect of increasing the expression of the epidermal cross-linking enzyme was exhibited.

以下に、本発明のスルフヒドリルオキシダーゼ活性促進剤を配合した皮膚外用剤の応用例を示す。応用例１〜９は、いずれもスルフヒドリルオキシダーゼ活性促進効果を有していた。 Below, the application example of the skin external preparation which mix | blended the sulfhydryl oxidase activity promoter of this invention is shown. Application Examples 1 to 9 all had a sulfhydryl oxidase activity promoting effect.

応用例１
美容液
質量％
リゾホスファチジン酸カリウム０．１
スクワラン１．０
べヘニルアルコール４．０
ワセリン３．０
流動パラフィン１５．０
モノラウリン酸デカグリセリル１．０
モノステアリン酸ＰＯＥ（２０）ソルビタン
３．０
キサンタンガム０．１
１，３−ブチレングリコール３．０
グリセリン７．０
クエン酸０．０６
クエン酸ナトリウム０．２
防腐剤適量
香料適量
精製水残部 Application example 1
Serum
mass%
Potassium lysophosphatidate 0.1
Squalane 1.0
Behenyl alcohol 4.0
Vaseline 3.0
Liquid paraffin 15.0
Decaglyceryl monolaurate 1.0
Monostearic acid POE (20) sorbitan
3.0
Xanthan gum 0.1
1,3-butylene glycol 3.0
Glycerin 7.0
Citric acid 0.06
Sodium citrate 0.2
Preservative appropriate amount Fragrance appropriate amount Purified water balance

応用例２
化粧水
質量％
リゾホスファチジン酸Ｌ−アルギニン０．０５
リゾホスファチジン酸ナトリウム０．０５
ε−アミノカプロン酸０．１
Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸マグネシウム
０．１
ローズマリーエキス０．１
スギナエキス０．１
スクワラン０．２
モノラウリン酸デカグリセリル２．０
ヒアルロン酸ナトリウム０．２
１，３−ブチレングリコール１．０
グリセリン２．０
ＰＯＰ（６）ＰＯＥ（２０）デシルテトラ
デシルエーテル０．５
エチルアルコール１０．０
アルギニン０．１
クエン酸０．４
クエン酸ナトリウム２．０
防腐剤適量
香料適量
精製水残部 Application example 2
Lotion
mass%
Lysophosphatidic acid L-arginine 0.05
Sodium lysophosphatidate 0.05
ε-aminocaproic acid 0.1
L-ascorbic acid-2-magnesium phosphate
0.1
Rosemary extract 0.1
Horsetail extract 0.1
Squalane 0.2
Decaglyceryl monolaurate 2.0
Sodium hyaluronate 0.2
1,3-butylene glycol 1.0
Glycerin 2.0
POP (6) POE (20) decyltetradecyl ether 0.5
Ethyl alcohol 10.0
Arginine 0.1
Citric acid 0.4
Sodium citrate 2.0
Preservative appropriate amount Fragrance appropriate amount Purified water balance

応用例３
クリーム２（エモリエントタイプ）
質量％
リゾホスファチジン酸０．５
ジオクタン酸ピリドキシン０．１
テトラヘキシルデカン酸アスコルビル１．０
トリヘキシルデカン酸ピリドキシン０．５
コレカルシフェロール０．１
ｄｌ−α−トコフェロール０．２
パルミチン酸レチノール０．１
水添レチノール０．１
フィトスフィンゴシン０．１
スクワラン１０．０
ミリスチン酸イソセチル６．０
トリ２−エチルヘキサン酸グリセリル３．０
マカデミアナッツ油１．０
ジメチルポリシロキサン０．２
セタノール５．０
ＰＯＥ（２０）セチルエーテル１．０
テトラオレイン酸ＰＯＥ（４０）ソルビット
０．５
モノステアリン酸グリセリル１．０
水素添加大豆レシチン０．２
グリセリン５．０
キサンタンガム０．１
ヒアルロン酸ナトリウム０．０１
クエン酸０．１
クエン酸ナトリウム０．４
防腐剤適量
精製水残部 Application example 3
Cream 2 (emollient type)
mass%
Lysophosphatidic acid 0.5
Pyridoxine dioctanoate 0.1
Ascorbyl tetrahexyldecanoate 1.0
Trihexyldecanoic acid pyridoxine 0.5
Cholecalciferol 0.1
dl-α-tocopherol 0.2
Retinol palmitate 0.1
Hydrogenated retinol 0.1
Phytosphingosine 0.1
Squalane 10.0
Isocetyl myristate 6.0
Glyceryl tri-2-ethylhexanoate 3.0
Macadamia nut oil 1.0
Dimethylpolysiloxane 0.2
Cetanol 5.0
POE (20) cetyl ether 1.0
Tetraoleic acid POE (40) Sorbit
0.5
Glyceryl monostearate 1.0
Hydrogenated soybean lecithin 0.2
Glycerin 5.0
Xanthan gum 0.1
Sodium hyaluronate 0.01
Citric acid 0.1
Sodium citrate 0.4
Preservative appropriate amount Purified water balance

応用例４
美容オイル
質量％
リゾホスファチジン酸０．００１
ホスファチジン酸０．００１
ミリスチン酸イソセチル１０．０
ホホバ油５．０
ブドウ種子油１．０
天然ビタミンＥ０．１
リノール酸レチノール０．１
アセチル化システイン０．１
スクワラン残部 Application example 4
Beauty oil
mass%
Lysophosphatidic acid 0.001
Phosphatidic acid 0.001
Isocetyl myristate 10.0
Jojoba oil 5.0
Grape seed oil 1.0
Natural vitamin E 0.1
Retinol linoleate 0.1
Acetylated cysteine 0.1
Squalane remainder

応用例５
スキンローション
質量％
トリ（カプリル酸・カプリン酸）グリセリル
０．１
ＰＯＰ（４）ＰＯＥ（２０）セチルエーテル
０．６
ジプロピレングリコール５．０
グリセリン５．０
リゾホスファチジン酸トリエタノールアミン０．０１
リゾホスファチジン酸カルシウム０．０１
ホスファチジン酸カルシウム０．０３
グリチルレチン酸ジカリウム０．２
ヒドロキシプロリン０．１
エルゴチオネイン０．００１
乳酸、グルコース、クエン酸、リンゴ酸、
チャエキスの混合物０．３
クエン酸ナトリウム０．５
ヒアルロン酸ナトリウム０．１
防腐剤適量
精製水残部 Application example 5
Skin lotion
mass%
Tri (caprylic acid / capric acid) glyceryl
0.1
POP (4) POE (20) cetyl ether
0.6
Dipropylene glycol 5.0
Glycerin 5.0
Lysophosphatidic acid triethanolamine 0.01
Calcium lysophosphatidate 0.01
Calcium phosphatidate 0.03
Dipotassium glycyrrhetinate 0.2
Hydroxyproline 0.1
Ergothioneine 0.001
Lactic acid, glucose, citric acid, malic acid,
Cha extract mixture 0.3
Sodium citrate 0.5
Sodium hyaluronate 0.1
Preservative appropriate amount Purified water balance

応用例６
乳液
質量％
ｄ−δ−トコフェロール０．１
油溶性トマトエキス（リコピン１％含有）０．０１
エルゴカルシフェロール０．１
スクワラン５．０
２−エチルヘキサン酸セチル５．０
ジメチルポリシロキサン０．５
パルミチン酸セチル０．５
ベヘニルアルコール１．５
ステアリン酸０．５
セラミド２０．１
ヒドロキシステアリン酸フィトステリル０．５
キミルアルコール０．１
親油型モノステアリン酸グリセリル
１．０
モノステアリン酸ＰＯＥ（２０）ソルビタン
１．０
テトラオレイン酸ＰＯＥ（４０）ソルビタン
１．５
ジプロピレングリコール２．０
グリセリン５．０
リゾホスファチジン酸１．０
キサンタンガム０．１
防腐剤適量
精製水残部 Application example 6
Latex
mass%
d-δ-tocopherol 0.1
Oil-soluble tomato extract (containing 1% lycopene) 0.01
Ergocalciferol 0.1
Squalane 5.0
Cetyl 2-ethylhexanoate 5.0
Dimethylpolysiloxane 0.5
Cetyl palmitate 0.5
Behenyl alcohol 1.5
Stearic acid 0.5
Ceramide 2 0.1
Phytosteryl hydroxystearate 0.5
Kimyl alcohol 0.1
Lipophilic glyceryl monostearate
1.0
Monostearic acid POE (20) sorbitan
1.0
Tetraoleic acid POE (40) sorbitan
1.5
Dipropylene glycol 2.0
Glycerin 5.0
Lysophosphatidic acid 1.0
Xanthan gum 0.1
Preservative appropriate amount Purified water balance

応用例７
サンスクリーンクリーム
質量％
リゾホスファチジン酸を３０%含有する
大豆レシチン酵素分解物０．３
環状ホスファチジン酸０．２
流動パラフィン７．０
デカメチルシクロペンタシロキサン３．０
セチルアルコール４．０
縮合リシノール酸ヘキサグリセリル０．５
ＰＯＥ（２０）セチルエーテル１．０
パラメトキシ桂皮酸オクチル７．０
酸化チタン３．０
セチル硫酸ナトリウム０．２
ステアロイルメチルタウリンナトリウム０．３
ｄｌ−α−トコフェロール０．２
１，３−ブチレングリコール５．０
キサンタンガム０．３
ピロリドンカルボン酸ナトリウム０．１
スギナエキス０．１
クワエキス０．１
クエン酸０．２
クエン酸ナトリウム０．３
防腐剤適量
精製水残部 Application example 7
Sunscreen cream
mass%
Soybean lecithin enzymatic degradation product containing 30% lysophosphatidic acid 0.3
Cyclic phosphatidic acid 0.2
Liquid paraffin 7.0
Decamethylcyclopentasiloxane 3.0
Cetyl alcohol 4.0
Condensed ricinoleic acid hexaglyceryl 0.5
POE (20) cetyl ether 1.0
Octyl paramethoxycinnamate 7.0
Titanium oxide 3.0
Sodium cetyl sulfate 0.2
Stearoyl methyl taurine sodium 0.3
dl-α-tocopherol 0.2
1,3-butylene glycol 5.0
Xanthan gum 0.3
Sodium pyrrolidonecarboxylate 0.1
Horsetail extract 0.1
Mulberry extract 0.1
Citric acid 0.2
Sodium citrate 0.3
Preservative appropriate amount Purified water balance

応用例８
外用剤（軟膏製剤）
質量％
リゾホスファチジン酸５．０
ＰＯＥ（３０）セチルエーテル２．０
モノステアリン酸グリセリル１０．０
流動パラフィン１０．０
白色ワセリン５．０
セタノール６．０
プロピレングリコール１０．０
防腐剤適量
精製水残部
（調製方法）
軟膏組成物の製造方法の常法に従い、乳化組成物を調製した。 Application example 8
External preparation (ointment formulation)
mass%
Lysophosphatidic acid 5.0
POE (30) cetyl ether 2.0
Glyceryl monostearate 10.0
Liquid paraffin 10.0
White petrolatum 5.0
Cetanol 6.0
Propylene glycol 10.0
Preservative Appropriate amount Purified water The remainder (preparation method)
An emulsified composition was prepared according to a conventional method for producing an ointment composition.

応用例９
外用剤（乳剤）
質量％
リゾホスファチジン酸１．０
リン酸化グリセリルエーテル１．０
白色ワセリン１．０
マイクロクリスタリンワックス３．０
フィトステロール０．２
ラノリン１０．０
モノオレイン酸ソルビタン４．７５
モノオレイン酸ＰＯＥ（２０）ソルビタン０．２５
グリセリン５．０
防腐剤適量
精製水残部
（調製方法）
乳剤組成物の製造方法の常法に従い、乳化組成物を調製した。 Application example 9
External preparation (emulsion)
mass%
Lysophosphatidic acid 1.0
Phosphorylated glyceryl ether 1.0
White petrolatum 1.0
Microcrystalline wax 3.0
Phytosterol 0.2
Lanolin 10.0
Sorbitan monooleate 4.75
Monooleic acid POE (20) sorbitan 0.25
Glycerin 5.0
Preservative Appropriate amount Purified water The remainder (preparation method)
An emulsion composition was prepared according to a conventional method for producing an emulsion composition.

Claims

A sulfhydryl oxidase activity promoter containing lysophosphatidic acid and / or a salt thereof as an active ingredient.