JP2010535474A - ヒトモノクローナル抗体およびそれを産生する方法 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、その全開示が参照により具体的に本明細書に組み入れられる、2007年8月3日に提出された米国特許仮出願第60/953,739号の優先権を主張する。
本発明は、National Cancer Institute, National Institute of Healthから与えられた助成金番号5K01CA095443の下で米国政府の支援を受けてなされた。米国政府は本発明において一定の権利を有する。
本発明は一般的に、細胞生物学および免疫学の分野に関する。より詳しくは、本発明は、ヒトモノクローナル抗体の産生に関する方法および組成物に関係する。
ワクチン接種に対する現在の代用法は、抗生物質、抗ウイルス剤、または病原体に結合してこれを中和する血液由来のタンパク質である抗体の受動移入からなる治療である。抗体源は、ヒトもしくはウマ血清などのポリクローナル供給源であってもよく、またはモノクローナル源(単細胞クローン)に由来してもよい。特異的抗原結合に関して制御および選択することが技術的に可能であることから、モノクローナル抗体は、世界中の癌治療において劇的な治療利益を生じた。感染物質および毒素の処置においてもある程度の成功がモノクローナル抗体に関して観察されているが、潜在的な治療物質および診断物質はほとんど利用されていないままである。
EP 0 218 158、EP 0 161 941、米国特許第5,024,946号、米国特許出願公開第2006/0252124号、Traggia et al. (2004)およびLanzavecchia et al. (2006)が含まれる多様な先行努力が、ヒトモノクローナル抗体の産生に向けられている。しかし、今日までのところ、ヒト抗体選択に関して改善された方法がなおも必要である。
実質的にいかなる抗原も、本発明に従うB細胞を選択するために利用してもよい。これらには、毒素、細胞受容体(たとえば、ウイルス侵入のための、細菌侵入のための、真菌侵入のための、寄生虫侵入のための、毒素侵入のための)、腫瘍抗原、サイトカイン/ケモカイン/増殖因子、サイトカイン/ケモカイン/増殖因子受容体、炎症メディエータ、疼痛メディエータ、組織損傷/障害メディエータ、活性化分子/リガンド/受容体上の抗原、共刺激分子/リガンド/受容体上の抗原、生得の免疫を媒介する分子、細胞接着分子、細胞接着受容体、過剰発現された/不十分にグリコシル化された/酸化した/ミスフォールドした/変異した細胞タンパク質(「改変された自己抗原」)、細胞アポトーシスを媒介する分子/リガンド/受容体、または増殖阻害分子が含まれる。これらの一覧は網羅的ではなく、例示のためにのみ提供される。
多様な感染物質は、本発明の標的として作用しうる抗原を有する。たとえば、細菌、カビおよび真菌、寄生虫、ならびにウイルスは全て、抗体の適した標的である抗原を提示する。
1.インフルエンザ
インフルエンザウイルスは、インフルエンザウイルス、イサウイルス、およびトゴトウイルスを含むオルトミクソウイルス科のRNAウイルスである。インフルエンザウイルスには3つのタイプが存在する:インフルエンザウイルスA、インフルエンザウイルスB、またはインフルエンザウイルスC。インフルエンザAおよびCは多数の種に感染するが、インフルエンザBはほとんど排他的にヒトに感染する。A型ウイルスは3つのインフルエンザタイプの中でも最もビルレントなヒト病原体であり、最も重度の疾患を引き起こす。インフルエンザAウイルスは、これらのウイルスに対する抗体応答に基づいて異なる血清型に細分類されうる。公知のヒト汎発流行死者の数によって順序がつけられた、ヒトにおいて確認されている血清型は:
H1N1は「スペイン風邪」を引き起こした
H2N2は「アジア風邪」を引き起こした
H3N2は「香港風邪」を引き起こした
H5N1は2006〜7年インフルエンザシーズンに汎発流行の脅威である
H7N7は異常な人畜共通伝染能を有する
H1N2はヒトおよびブタにおける風土病である
H9N2、H7N2、H7N3、H10N7
インフルエンザに対する活性インフルエンザワクチンのワクチン接種は、小児および高齢者などの高リスク群に強く推奨される。これらのワクチンは、いくつかの方策で産生されうる;最も一般的な方法は、ニワトリの受精卵においてウイルスを成長させることである。精製後、ウイルスを不活化して(たとえば、洗浄剤による処置によって)不活化ウイルスワクチンを産生する。または、ウイルスを、ビルレンスを失うまで卵において生育させることができ、弱毒化ウイルスを生ワクチンとして与えることができる。これらのインフルエンザワクチンの有効性は多様である。先に考察したように、ウイルスの高い変異率により、特定のインフルエンザワクチンは通常、わずか数年の保護を付与するに過ぎない。毎年、世界保健機構は、どのウイルス株が翌年に循環する可能性が最も高いかを予測して、製薬企業にこれらの株に対して最善の免疫を提供するワクチンを開発させている。ワクチンはまた、トリインフルエンザから家禽を保護するためにも開発されている。これらのワクチンはまた、多数の株に対して有効となりえて、予防戦略の一部として用いられるか、または大流行を撲滅するための試みにおいて選別と組み合わせられる。
2つのクラスの抗ウイルス剤はノイラミニダーゼ阻害剤とM2阻害剤(アダマンタン誘導体)である。ノイラミニダーゼ阻害剤は現在、インフルエンザウイルス感染症にとって好ましい。CDCは、2005〜06インフルエンザシーズンにおいてM2阻害剤を用いることを勧告した。
インフルエンザのほかに、多様な他のウイルスを用いて抗体を生成してもよく、その後抗体によって診断または処置してもよい。表1は、本発明と共に用いられる多様な他のウイルス標的を記載する:
アベルソンマウス白血病ウイルス(Abelson murine leukemia virus)、レトロウイルス科(Retroviridae)
アデレードリバーウイルス(Adelaide River virus)、ラブドウイルス科(Rhabdoviridae)
アデノ随伴ウイルス(Adeno-associated virus)1、パルボウイルス科(Parvoviridae)
アデノ随伴ウイルス2、パルボウイルス科
アデノ随伴ウイルス3、パルボウイルス科
アデノ随伴ウイルス4、パルボウイルス科
アデノ随伴ウイルス5、パルボウイルス科
アフリカミドリザルサイトメガロウイルス(cytomegalovirus)、ヘルペスウイルス科(Herpesviridae)
アフリカミドリザルHHV様ウイルス(HHV-like virus)、ヘルペスウイルス科
アフリカミドリザルポリオーマウイルス(polyomavirus)、パポーバウイルス科(Papovaviridae)
アフリカ馬疫ウイルス(African horse sickness viruses)1〜10、レトロウイルス科
アフリカ豚コレラウイルス(African swine fever virus)、アフリカ豚コレラ様ウイルス(African swine fever-like viruses)
アリューシャン病ウイルス(Aleutian disease virus)、パルボウイルス科
アリューシャンミンク病ウイルス(Aleutian mink disease virus)、パルボウイルス科
アメリカジリスヘルペスウイルス(herpesvirus)、ヘルペスウイルス科
ヒヒヘルペスウイルス、ヘルペスウイルス科
ヒヒポリオーマウイルス2、パポーバウイルス科
ウシアデノ随伴ウイルス(Bovine adeno-associated virus)、パルボウイルス科
ウシアデノウイルス(Bovine adenoviruses)1〜9、アデノウイルス科(Adenoviridae)
ウシアストロウイルス(Bovine astrovirus)1、アストロウイルス科(Astroviridae)
ウシアストロウイルス2、アストロウイルス科
ウシコロナウイルス(Bovine coronavirus)、コロナウイルス科(Coronaviridae)
ウシ下痢ウイルス(Bovine diarrhea virus)、フラビウイルス科(Flaviviridae)
ウシ脳炎ヘルペスウイルス(Bovine encephalitis herpesvirus)、ヘルペスウイルス科
ウシ腸内カリシウイルス(calicivirus)、カリシウイルス科(Caliciviridae)
ウシエンテロウイルス(Bovine enterovirus)1、ピコルナウイルス科(Picornaviridae)
ウシエンテロウイルス2、ピコルナウイルス科
ウシ流行熱ウイルス(Bovine ephemeral fever virus)、ラブドウイルス科
ウシヘルペスウイルス1、ヘルペスウイルス科
ウシヘルペスウイルス2、ヘルペスウイルス科
ウシヘルペスウイルス4、ヘルペスウイルス科
ウシヘルペスウイルス5、ヘルペスウイルス科
ウシ免疫不全ウイルス(Bovine immunodeficiency virus)、レトロウイルス科
ウシ白血病ウイルス(Bovine leukemia virus)、レトロウイルス科
ウシ乳頭炎ウイルス(Bovine mamillitis virus)、ヘルペスウイルス科
ウシ乳頭腫ウイルス(Bovine papillomavirus)1、パポーバウイルス科
ウシ乳頭腫ウイルス2、パポーバウイルス科
ウシ乳頭腫ウイルス4、パポーバウイルス科
ウシ丘疹性口炎ウイルス(Bovine papular stomatitis virus)、ポックスウイルス科(Poxviridae)
ウシパラインフルエンザウイルス(Bovine parainfluenza virus)3、パラミクソウイルス科(Paramyxoviridae)
ウシパルボウイルス(Bovine parvovirus)、パルボウイルス科
ウシポリオーマウイルス(Bovine polyomavirus)、パポーバウイルス科
ウシRSウイルス(Bovine respiratory syncytial virus)、パラミクソウイルス科
ウシライノウイルス(Bovine rhinovirus)1、ピコルナウイルス科
ウシライノウイルス2、ピコルナウイルス科
ウシライノウイルス3、ピコルナウイルス科
ウシシンシチウムウイルス(Bovine syncytial virus)、レトロウイルス科
カリフォルニア脳炎ウイルス(California encephalitis virus)、ブニヤウイルス科(Bunyaviridae)
カリフォルニアハーバー アザラシポックスウイルス(California harbor seal pox virus)、ポックスウイルス科
イヌアデノ随伴ウイルス(Canine adeno-associated virus)、パルボウイルス科
イヌアデノウイルス(Canine adenovirus)1、アデノウイルス科
イヌアデノウイルス2、アデノウイルス科
イヌカリシウイルス(Canine calicivirus)、カリシウイルス科
イヌコロナウイルス(Canine coronavirus)、コロナウイルス科
イヌジステンパーウイルス(Canine distemper virus)、パラミクソウイルス科
イヌヘルペスウイルス(Canine herpesvirus)、ヘルペスウイルス科
イヌ微小ウイルス(Canine minute virus)、パルボウイルス科
イヌ口腔乳頭腫ウイルス(Canine oral papillomavirus)、パポーバウイルス科
イヌパルボウイルス(Canine parvovirus)、パルボウイルス科
ニワトリ貧血ウイルス(Chicken anemia virus)、サーコウイルス科(Circoviridae)
ニワトリパルボウイルス(Chicken parvovirus)、パルボウイルス科
チンパンジーヘルペスウイルス(Chimpanzee herpesvirus)、ヘルペスウイルス科
ワタオヘルペスウイルス(Cottontail herpesvirus)、ヘルペスウイルス科
ワタオウサギ乳頭腫ウイルス(Cottontail rabbit papillomavirus)、パポーバウイルス科
牛痘ウイルス(Cow pox virus)、ポックスウイルス科
シカ繊維腫ウイルス(Deer fibroma virus)、パポーバウイルス科
シカパピローマウイルス(Deer papillomavirus)、パポーバウイルス科
ゾウロキソンドンタルヘルペスウイルス(Elephant loxondontal herpesvirus)、 ヘルペスウイルス科
ゾウパピローマウイルス(Elephant papillomavirus)、パポーバウイルス科
ゾウヘルペスウイルス(Elephantid herpesvirus)、ヘルペスウイルス科
EBウイルス(Epstein-Barr virus)、ヘルペスウイルス科
ウマヘルペスウイルス(Equid herpesvirus)1、ヘルペスウイルス科
ウマヘルペスウイルス2、ヘルペスウイルス科
ウマヘルペスウイルス3、ヘルペスウイルス科
ウマヘルペスウイルス4、ヘルペスウイルス科
ウマヘルペスウイルス5、ヘルペスウイルス科
ウマヘルペスウイルス6、ヘルペスウイルス科
ウマヘルペスウイルス7、ヘルペスウイルス科
ウマヘルペスウイルス8、ヘルペスウイルス科
ウマ流産ヘルペスウイルス(Equine abortion herpesvirus)、ヘルペスウイルス科
ウマアデノ随伴ウイルス(Equine adeno-associated virus)、パルボウイルス科
ウマアデノウイルス(Equine adenovirus)1、アデノウイルス科
ウマ動脈炎ウイルス(Equine arteritis virus)、アルテリウイルス属(Arterivirus)
ウマサイトメガロウイルス(Equine cytomegalovirus)、ヘルペスウイルス科
ウマ脳症ウイルス(Equine encephalosis virus)1〜7、レオウイルス科(Reoviridae)
ウマヘルペスウイルス(Equine herpesvirus)1、ヘルペスウイルス科
ウマヘルペスウイルス3、ヘルペスウイルス科
ウマヘルペスウイルス4、ヘルペスウイルス科
ウマヘルペスウイルス5、ヘルペスウイルス科
ウマ伝染性貧血ウイルス(Equine infectious anemia virus)、レトロウイルス科
ウマ乳頭腫ウイルス(Equine papillomavirus)、パポーバウイルス科
ウマ鼻肺炎ウイルス(Equine rhinopneumonitis virus)、ヘルペスウイルス科
ウマライノウイルス(Equine rhinovirus)1、ピコルナウイルス科
ウマライノウイルス2、ピコルナウイルス科
ウマライノウイルス3、ピコルナウイルス科
ヨーロッパコウモリウイルス(European bat virus)1、ラブドウイルス科
ヨーロッパコウモリウイルス2、ラブドウイルス科
ヨーロッパ褐色野兎症候群ウイルス(European brown hare syndrome virus)、カリシウイルス科
ヨーロッパオオシカ乳頭腫ウイルス(European elk papillomavirus)、パポーバウイルス科
ヨーロッパジリスサイトメガロウイルス(European ground squirrel cytomegalovirus)、ヘルペスウイルス科
ヨーロッパハリネズミヘルペスウイルス(European hedgehog herpesvirus)、ヘルペスウイルス科
ネコカリシウイルス(Feline calicivirus)、カリシウイルス科
ネコヘルペスウイルス(Feline herpesvirus)1、ヘルペスウイルス科
ネコ免疫不全ウイルス(Feline immunodeficiency virus)、レトロウイルス科
ネコ伝染性腹膜炎ウイルス(Feline infectious peritonitis virus)、コロナウイルス科
ネコ白血病ウイルス(Feline leukemia virus)、レトロウイルス科
ネコ汎白血病ウイルス(Feline parlleukopenia virus)、パルボウイルス科
ネコパルボウイルス(Feline parvovirus)、パルボウイルス科
ネコシンシチウムウイルス(Feline syncytial virus)、レトロウイルス科
ネコウイルス性鼻気管炎ウイルス(Feline viral rhinotracheitis virus)、ヘルペスウイルス科
ノネズミヘルペスウイルス(Field mouse herpesvirus)、ヘルペスウイルス科
口蹄疫ウイルス(Foot-and-mouth disease virus)A、ピコルナウイルス科
口蹄疫ウイルスASIA 1、ピコルナウイルス科
口蹄疫ウイルスC、ピコルナウイルス科
口蹄疫ウイルスO、ピコルナウイルス科
口蹄疫ウイルスSAT 1、ピコルナウイルス科
口蹄疫ウイルスSAT 2、ピコルナウイルス科
口蹄疫ウイルスSAT 3、ピコルナウイルス科
ヤギヘルペスウイルス(Goat herpesvirus)、ヘルペスウイルス科
ヤギ痘ウイルス(Goat pox virus)、ポックスウイルス科
ジリスB型肝炎ウイルス(Ground squirrel hepatitis B virus)、ヘパドナウイルス科(Hepadnaviridae)
A群ロタウイルス(Group A rotaviruses)、レオウイルス科
B群ロタウイルス、レオウイルス科
C群ロタウイルス、レオウイルス科
D群ロタウイルス、レオウイルス科
E群ロタウイルス、レオウイルス科
F群ロタウイルス、レオウイルス科
モルモットサイトメガロウイルス(Guinea pig cytomegalovirus)、ヘルペスウイルス科
モルモットヘルペスウイルス(Guinea pig herpesvirus)1、ヘルペスウイルス科
モルモットヘルペスウイルス3、ヘルペスウイルス科
モルモットC型オンコウイルス(Guinea pig t, vpe C oncovirus)、レトロウイルス科
ハムスターヘルペスウイルス(Hamster herpesvirus)、ヘルペスウイルス科
ハムスターポリオーマウイルス(Hamster polyoma virus)、パポーバウイルス科
ハンタンウイルス(Hantaan virus)、ブニヤウイルス科
ゴマフアザラシヘルペスウイルス(Harbor seal herpesvirus)、ヘルペスウイルス科
野ウサギ繊維腫ウイルス(Hare fibroma virus)、ポックスウイルス科
A型肝炎ウイルス(Hepatitis A virus)、ピコルナウイルス科
B型肝炎ウイルス、ヘパドナウイルス科
C型肝炎ウイルス、フラビウイルス科
ヘルペスウイルスM(Herpesvirus M)、ヘルペスウイルス科
ヒヒヘルペスウイルス(Herpesvirus papio)、ヘルペスウイルス科
オマキザルヘルペスウイルス型(Herpesvirus platyrrhinae type)、ヘルペスウイルス科
ポトヘルペスウイルス(Herpesvirus pottos)、ヘルペスウイルス科
リスザルヘルペスウイルス2(Herpesvirus saimiri 2)、ヘルペスウイルス科
サケヘルペスウイルス(Herpesvirus salmonis)、ヘルペスウイルス科
タマリンヘルペスウイルス(Herpesvirus sanguinus)、ヘルペスウイルス科
ヒラメヘルペスウイルス(Herpesvirus scophthalmus)、ヘルペスウイルス科
ワタオウサギヘルペスウイルス(Herpesvirus sylvilagus)、ヘルペスウイルス科
ヘルペスウイルスT(Herpesvirus T)、ヘルペスウイルス科
タマリンヘルペスウイルス(Herpesvirus tarnarinus)、ヘルペスウイルス科
豚コレラウイルス(Hog cholera virus)、フラビウイルス科
サルヘルペスウイルス(Herpes simiae virus)、ヘルペスウイルス科
単純ヘルペスウイルス(Herpes simplex virus)1、ヘルペスウイルス科
単純ヘルペスウイルス2、ヘルペスウイルス科
ヘルペスウイルス(Herpes virus)B、ヘルペスウイルス科
ヨザルヘルペスウイルス(Herpesvirus aotus)1、ヘルペスウイルス科
ヨザルヘルペスウイルス3、ヘルペスウイルス科
クモザルヘルペスウイルス(Herpesvirus ateles)株73、ヘルペスウイルス科
ウサギヘルペスウイルス(Herpesvirus cuniculi)、ヘルペスウイルス科
シクロプシスヘルペスウイルス(Herpesvirus cyclopsis)、ヘルペスウイルス科
ヒトアデノウイルス(Human adenoviruses)1〜47、アデノウイルス科
ヒトアストロウルイルス(Human astrovirus)1、アストロウイルス科
ヒトアストロウルイルス2、アストロウイルス科
ヒトアストロウルイルス3、アストロウイルス科
ヒトアストロウルイルス4、アストロウイルス科
ヒトアストロウルイルス5、アストロウイルス科
ヒトカリシウイルス(Human calicivirus)、カリシウイルス科
ヒトカリシウイルス(Human caliciviruses)、カリシウイルス科
ヒトコロナウイルス(Human coronavirus)229E、コロナウイルス科
ヒトコロナウイルスOC43、コロナウイルス科
ヒトコクザッキーウイルス(Human coxsackievirus)A 1〜22、ピコルナウイルス科
ヒトコクザッキーウイルスA 24、ピコルナウイルス科
ヒトコクザッキーウイルスB 1〜6、ピコルナウイルス科
ヒトサイトメガロウイルス(Human cytomegalovirus)、ヘルペスウイルス科
ヒトエコーウイルス(Human echo virus)1〜7、ピコルナウイルス科
ヒトエコーウイルス11〜27、ピコルナウイルス科
ヒトエコーウイルス29〜33、ピコルナウイルス科
ヒトエコーウイルス9, ピコルナウイルス科
ヒトエンテロウイルス(Human enterovirus)68〜71、ピコルナウイルス科
ヒトフォーミーウイルス(Human foamy virus)、レトロウイルス科
ヒトヘルペスウイルス(Human herpesvirus)1、ヘルペスウイルス科
ヒトヘルペスウイルス2、ヘルペスウイルス科
ヒトヘルペスウイルス3、ヘルペスウイルス科
ヒトヘルペスウイルス4、ヘルペスウイルス科
ヒトヘルペスウイルス5、ヘルペスウイルス科
ヒトヘルペスウイルス6、ヘルペスウイルス科
ヒトヘルペスウイルス7、ヘルペスウイルス科
ヒト免疫不全ウイルス(Human immunodeficiency virus)1、レトロウイルス科
ヒト免疫不全ウイルス2、レトロウイルス科
ヒトパピローマウイルス(Human papillomavirus)11、パポーバウイルス科
ヒトパピローマウイルス16、パポーバウイルス科
ヒトパピローマウイルス18、パポーバウイルス科
ヒトパピローマウイルス31、パポーバウイルス科
ヒトパピローマウイルス33、パポーバウイルス科
ヒトパピローマウイルス5、パポーバウイルス科
ヒトパピローマウイルス6b、パポーバウイルス科
ヒトパピローマウイルス8、パポーバウイルス科
ヒトパピローマウイルス1a、パポーバウイルス科
ヒトパラインフルエンザウイルス(Human parainfluenza virus)1、パラミクソウイルス科
ヒトパラインフルエンザウイルス2、パラミクソウイルス科
ヒトパラインフルエンザウイルス3、パラミクソウイルス科
ヒトパラインフルエンザウイルス4a、パラミクソウイルス科
ヒトパラインフルエンザウイルス4b、パラミクソウイルス科
ヒトポリオウイルス(Human poliovirus)1、ピコルナウイルス科
ヒトポリオウイルス2、ピコルナウイルス科
ヒトポリオウイルス3、ピコルナウイルス科
ヒトRSウイルス(Human respiratory syncytial virus)、パラミクソウイルス科
ヒトライノウイルス(Human rhinovirus)1〜100、ピコルナウイルス科
ヒトライノウイルス1A、ピコルナウイルス科
ヒトスプマウイルス(Human spumavirus)、レトロウイルス科
ヒトTリンパ球向性ウイルス(Human T-lymphotropic virus)1、レトロウイルス科
ヒトリンパ球向性ウイルス2、レトロウイルス科
ジャーグジークテウイルス(Jaagsiekte virus)、レトロウイルス科
日本脳炎ウイルス(Japanese encephalitis virus)、フラビウイルス科
JCウイルス(JC virus)、パポーバウイルス科
キルステンネズミ肉腫ウイルス(Kirsten murine sarcoma virus)、レトロウイルス科
ラゴスコウモリウイルス(Lagos bat virus)、ラブドウイルス科
リンパ球脈絡髄膜炎ウイルス(Lymphocytic choriomeningitis virus)、アレナウイルス科(Arenaviridae)
マウス微小ウイルス(Mice minute virus)、パルボウイルス科
マウスニューモトロピックウイルス(Mice pneumotropic virus)、パポーバウイルス科
モロニーマウス肉腫ウイルス(Moloney murine sarcoma virus)、レトロウイルス科
モロニーウイルス(Moloney virus)、レトロウイルス科
サル痘ウイルス(Monkey pox virus)、ポックスウイルス科
マウスサイトメガロウイルス(Mouse cytomegalovirus)1、ヘルペスウイルス科
マウスエルバーフェルドウイルス(Mouse Elberfield virus)、ピコルナウイルス科
マウスヘルペスウイルス(Mouse herpesvirus)株68、ヘルペスウイルス科
マウス乳癌ウイルス(Mouse mammary tumor virus)、レトロウイルス科
マウス胸腺ヘルペスウイルス(Mouse thymic herpesvirus)、ヘルペスウイルス科
ミュールジカポックスウイルス(Mule deer pox virus)、ポックスウイルス科
ネズミアデノウイルス(Murine adenovirus)2、アデノウイルス科
Zネズミアデノウイルス(Z murine adenovirus)1、アデノウイルス科
マウス肝炎ウイルス(Murine hepatitis virus)、コロナウイルス科
マウスペルペスウイルス(Murine herpesvirus)、ヘルペスウイルス科
ネズミ白血病ウイルス(Murine leukemia virus)、レトロウイルス科
マウスパラインフルエンザウイルス(Murine parainfluenza virus)1、パラミクソウイルス科
マウスポリオウイルス(Murine poliovirus)、ピコルナウイルス科
マウスポリオーマウイルス(Murine polyomavirus)パポーバウイルス科
マレーバレー脳炎ウイルス(Murray Valley encephalitis virus)、フラビウイルス科
ナイロビヒツジ病ウイルス(Nairobi sheep disease virus)、ブニヤウイルス科
ヒツジアデノ随伴ウイルス(Ovine adeno-associated virus)、パルボウイルス科
ヒツジアデノウイルス(Ovine adenoviruses)1〜6、アデノウイルス科
ヒツジアストロウイルス(Ovine astrovirus)1、アストロウイルス科
ヒツジヘルペスウイルス(Ovine herpesvirus)1、ヘルペスウイルス科
ヒツジヘルペスウイルス2、ヘルペスウイルス科
ヒツジ肺腺腫ウイルス(Ovine pulmonary adenocarcinoma virus)、レトロウイルス科
パタスモンキーヘルペスウイルスpHデルタ(Patas monkey herpesvirus pH delta)、ヘルペスウイルス科
ペンギンポックスウイルス(Penguin pox virus)、ポックスウイルス科
マウス肺炎ウイルス(Pneumonia virus of mice)、パラミクソウイルス科
ブタアデノウイルス(Porcine adenoviruses)1〜6、アデノウイルス科
ブタアストロウイルス(Porcine astrovirus)1、アストロウイルス科
ブタサーコウイルス(Porcine circovirus)、サーコウイルス科
ブタ腸管カリシウイルス(Porcine enteric calicivirus)、カリシウイルス科
ブタエンテロウイルス(Porcine enterovirus)1〜11、ピコルナウイルス科
ブタ流行性下痢ウイルス(Porcine epidemic diarrhea virus)、コロナウイルス科
ブタ血球凝集性脳脊髄炎ウイルス(Porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus)、コロナウイルス科
ブタパルボウイルス(Porcine parvovirus)、パルボウイルス科
豚繁殖・呼吸障害症候群ウイルス(Porcine respiratory and reproductive syndrome)、アルテリウイルス属
ブタルブラウイルス(Porcine rubulavirus)、パラミクソウイルス科
ブタ伝染性胃腸炎ウイルス(Porcine transmissible gastroenteritis virus)、コロナウイルス科
ブタC型オンコウイルス(Porcine type C oncovirus)、レトロウイルス科
イルカジステンバーウイルス(Porpoise distemper virus)、パラミクソウイルス科
霊長類カリシウイルス(Primate calicivirus)、カリシウイルス科
ウサギコロナウイルス(Rabbit coronavirus)、コロナウイルス科
ウサギ線維腫ウイルス(Rabbit fibroma virus)、ポックスウイルス科
ウサギ出血性疾患ウイルス(Rabbit hemorrhagic disease virus)、カリシウイルス科
ウサギ腎臓空胞化ウイルス(Rabbit kidney vacuolating virus)、パポーバウイルス科
イエウサギ口腔乳頭腫ウイルス(Rabbit oral papillomavirus)、パポーバウイルス科
ウサギ痘ウイルス(Rabbit pox virus)、ポックスウイルス科
狂犬病ウイルス(Rabies virus)、ラブドウイルス科
ラックーンパルボウイルス(Raccoon parvovirus)、パルボウイルス科
ラックーン痘ウイルス(Raccoon pox virus)、ポックスウイルス科
アカシカヘルペスウイルス(Red deer herpes virus)、ヘルペスウイルス科
アカカンガルーポックスウイルス(Red kangaroo virus)、ポックスウイルス科
トナカイヘルペスウイルス(Reindeer herpesvirus)、ヘルペスウイルス科
トナカイ乳頭腫ウイルス(Reindeer papillomavirus)、パポーバウイルス科
レオウイルス(Reovirus)1、レオウイルス科
レオウイルス2、レオウイルス科
レオウイルス3、レオウイルス科
細網内皮症ウイルス(Reticuloendotheliosis virus)、レトロウイルス科
アカゲザルHHV-4様ウイルス(Rhesus HHV-4-like virus)、ヘルペスウイルス科
アカゲザル白血球随伴ウイルス1(Rhesus leukocyte associated herpesvirus strain 1)、ヘルペスウイルス科
アカゲザルサイトメガロウイルス(Rhesus monkey cytomegalovirus)、ヘルペスウイルス科
アカゲザルパピローマウイルス(Rhesus monkey papillomavirus)、パポーバウイルス科
風疹ウイルス(Rubella virus)、トガウイルス科(Togaviridae)
アザラシポックスウイルス(Seal pox virus)、ポックスウイルス科
センダイウイルス(Sendai virus)、パラミクソウイルス科
羊型悪性カタル熱ウイルス(Sheep associated malignant catarrhal fever of)、ヘルペスウイルス科
ヒツジ乳頭腫ウイルス(Sheep papillomavirus)、パポーバウイルス科
ヒツジ肺腺腫に関連するヘルペスウイルス(Sheep pulmonary adenomatosis associated herpesvirus)、ヘルペスウイルス科
ヒツジポックスウイルス(Sheep pox virus)、ポックスウイルス科
サルアデノウイルス(Simian adenoviruses)1〜27、アデノウイルス科
サルエージェントウイルス(Simian agent virus)12、パポーバウイルス科
サルエンテロウイルス(Simian enterovirus)1〜18、ピコルナウイルス科
サルフォーミーウイルス(Simian foamy virus)、レトロウイルス科
サル出血熱ウイルス(Simian hemorrhagic fever virus)、アルテリウイルス属
サルA型肝炎ウイルス(Simian hepatitis A virus)、ピコルナウイルス科
サル免疫不全ウイルス(Simian immunodeficiency virus)、レトロウイルス科
サルパラインフルエンザウイルス(Simian parainfluenza virus)10、パラミクソウイルス科
サルパラインフルエンザウイルス41、パラミクソウイルス科
サルパラインフルエンザウイルス5、パラミクソウイルス科
サルロタウイルス(Simian rotavirus)SA11、レオウイルス科
サル肉腫ウイルス(Simian sarcoma virus)、レトロウイルス科
サルTリンパ球向性ウイルス(Simian T-lymphotropic virus)、レトロウイルス科
サルD型ウイルス(Simian type D virus 1)、レトロウイルス科
サル水痘ヘルペスウイルス(Simian vancella herpesvirus)、ヘルペスウイルス科
SV40(Simian virus 40)、パポーバウイルス科
シンドビスウイルス(Sindbis virus)、トガウイルス科
スカンクポックスウイルス(Skunk pox virus)、ポックスウイルス科
クモザルヘルペスウイルス(Spider monkey herpesvirus)、ヘルペスウイルス科
リス線維腫ウイルス(Squirrel fibroma virus)、ポックスウイルス科
リスザルヘルペスウイルス(Squirrel monkey herpesvirus)、ヘルペスウイルス科
リスザルレトロウイルス(Squirrel monkey retrovirus)、レトロウイルス科
ブタサイトメガロウイルス(Swine cytomegalovirus)、ヘルペスウイルス科
ブタ不妊および呼吸器症候群ウイルス(Swine infertility and respiratory syndrome virus)、アルテリウイルス属
豚痘ウイルス(Swine pox virus)、ポックスウイルス科
ツバイアデノウイルス(Tree shrew adenovirus)1、アデノウイルス科
ツバイヘルペスウイルス(Tree shrew herpesvirus)、ヘルペスウイルス科
ワクチニア亜種(Vaccinia subspecies)、ポックスウイルス科
ワクチニアウイルス(Vaccinia virus)、ポックスウイルス科
水痘ウイルス(Varicella-zoster virus)1、ヘルペスウイルス科
水疱性口炎ウイルス、アラゴアス(Vesicular stomatitis Alagoas virus)、ラブドウイルス科
水疱性口炎ウイルス、インディアナ(Vesicular stomatitis Indiana virus)、ラブドウイルス科
水疱性口炎ウイルス、ニュージャージー(Vesicular stomatitis New Jersey virus)、ラブドウイルス科
ウエストナイル熱ウイルス(West Nile virus)、フラビウイルス科
西部ウマ脳炎ウイルス(Western equine encephalitis virus)、トガウイルス科
ウッドチャックB型肝炎ウイルス(Woodchuck hepatitis B virus)、ヘパドナウイルス科
ウッドチャックヘルペスウイルスマーモット(Woodchuck herpesvirus marmota)1、ヘルペスウイルス科
ウーリーサル肉腫ウイルス(Woolly monkey sarcoma virus)、レトロウイルス科
ヤバサル腫瘍ウイルス(Yaba monkey tumor virus)、ポックスウイルス科
黄熱ウイルス(Yellow fever virus)、フラビウイルス科
ウイルスに加えて、本発明に従って他の感染性物質を標的としてもよい。それらは、表2に説明される細菌、ならびに真菌および寄生虫を含む。
バシラス菌種(Bacillus spp.)
バクテロイデス・フラギリス(Bacteroides fragilis)
気管支敗血症菌(Bordetella bronchiseptica)
パラ百日咳菌(Bordetella parapertussis)
百日咳菌(Bordetella pertussis)
百日咳菌
ボレリア・ブルグドルフェリ(Borrelia burgdorferi)
ブランハメラ(モラキセラ)・カタラリス(Branhamella (Moraxella) catarrhalis)
ブランハメラ(モラキセラ)・カタラリス
ブランハメラ(モラキセラ)・カタラリス (β-ラクタマーゼ非産生)
ブランハメラ(モラキセラ)・カタラリス (β-ラクタマーゼ非産生)
ブランハメラ(モラキセラ)・カタラリス (β-ラクタマーゼ非産生)
ブランハメラ(モラキセラ)・カタラリス (β-ラクタマーゼ非産生)
ブランハメラ(モラキセラ)・カタラリス (β-ラクタマーゼ産生)
ブランハメラ(モラキセラ)・カタラリス (β-ラクタマーゼ産生)
ブランハメラ(モラキセラ)・カタラリス (β-ラクタマーゼ産生)
ブランハメラ(モラキセラ)・カタラリス (β-ラクタマーゼ産生)
カンピロバクター・ジェジュニ(Campylobacter jejuni)
カンピロバクター・ジェジュニ
カンピロバクター・ピロリ(Campylobacter pylori)
カンピロバクター・ピロリ
コリネバクテリウム(Corynebacterium)JK
コリネバクテリウムJK
エンテロコッカス・フェカーリス(Enterococcus faecalis)
エンテロコッカス・フェカーリス
エンテロコッカス・フェカーリス
エンテロコッカス・フェカーリス)
エンテロコッカス・フェシウム(Enterococcus faecium)
エンテロコッカス菌種(Enterococcus spp.)
軟性下疳菌(Haemophilus ducreyi)
インフルエンザ菌(Haemophilus influenzae)
インフルエンザ菌
インフルエンザ菌(β-ラクタマーゼ非産生)
インフルエンザ菌(β-ラクタマーゼ非産生)
インフルエンザ菌(β-ラクタマーゼ産生)
インフルエンザ菌(β-ラクタマーゼ産生)
インフルエンザ菌(ペニシリン感受性)
インフルエンザ菌(ペニシリン耐性)
パラインフルエンザ菌(Haemophilus parainfluenzae)
レジオネラ菌種(Legionella spp.)
レジオネラ・ニューモフィラ(Legionella pneumophila)
レジオネラ・ニューモフィラ
レジオネラ・ニューモフィラ
リステリア・モノサイトゲネス(Listeria monocytogenes)
リステリア・モノサイトゲネス
リステリア・モノサイトゲネス
マイコプラズマ・ホミニス(Mycoplasma hominis)
マイコプラズマ・ホミニス
マイコプラズマ・ニューモニエ(Mycoplasma pneumoniae)
マイコプラズマ・ニューモニエ
淋菌(Neisseria gonorrhoeae)
淋菌(β-ラクタマーゼ非産生)
淋菌(β-ラクタマーゼ非産生)
淋菌(β-ラクタマーゼ産生)
淋菌(β-ラクタマーゼ産生)
髄膜炎菌(Neisseria meningitidis)
ノカルジア・アステロイデス(Nocardia asteroides)
黄色ブドウ球菌(Staphylococcus aureus)
黄色ブドウ球菌
黄色ブドウ球菌(ペニシリン感受性)
黄色ブドウ球菌(ペニシリン感受性)
黄色ブドウ球菌(ペニシリン耐性)
黄色ブドウ球菌(メチシリン感受性)
黄色ブドウ球菌(メチシリン感受性)
黄色ブドウ球菌(メチシリン感受性)
黄色ブドウ球菌(メチシリン耐性)
黄色ブドウ球菌(メチシリン耐性)
黄色ブドウ球菌(メチシリン耐性)
黄色ブドウ球菌(メチシリン耐性)
スタフィロコッカス コアグラーゼ(Staphylococcus coaglase)f
スタフィロコッカス コアグラーゼf
スタフィロコッカス コアグラーゼf (β-ラクタマーゼ非産生)
スタフィロコッカス コアグラーゼf (β-ラクタマーゼ産生)
表皮ブドウ球菌(Staphylococcus epidermidis)
スタフィロコッカス・ヘモリチカス(Staphylococcus haemolyticus)
シュードモナス・フルオレッセンス(Staphylococcus hominis)
ストレプトコッカス・アガラクティエ(Streptococcus agalactiae)
ストレプトコッカス・アガラクティエ
肺炎連鎖球菌(Streptococcus pneumoniae)
肺炎連鎖球菌
肺炎連鎖球菌
肺炎連鎖球菌
肺炎連鎖球菌
肺炎連鎖球菌
化膿性連鎖球菌(Streptococcus pyogenes)
化膿性連鎖球菌
化膿性連鎖球菌
化膿性連鎖球菌
ストレプトコッカス菌種(Streptococcus spp.)
ストレプトコッカス菌種
ウレアプラズマ・ウレアリティカム(Ureaplasma urealyticum)
ウレアプラズマ・ウレアリティカム
マイコプラズマ・ホミニス
マイコプラズマ・ニューモニエ
黄色ブドウ球菌
ウレアプラズマ・ウレアリティカム
多様な他の抗原が本発明に従って用いることが企図される。たとえば、自己抗原は通常、特異的自己免疫疾患に罹っている患者の免疫系によって認識される正常なタンパク質またはタンパク質複合体(および時にDNAまたはRNA)である。これらの抗原は、通常の条件では免疫系の標的であってはならないが、主に遺伝的および環境的要因により、そのような抗原に対する正常な免疫寛容がこれらの患者では失われている。以下の自己抗原が本発明の抗体の標的として企図される:アセチルコリン受容体、アデニンヌクレオチドトランスロケーター(ANT)、芳香族Lアミノ酸デカルボキシラーゼ、アシアロ糖タンパク質受容体、殺細菌/透過性増加タンパク質(Bpi)、カルシウム感知受容体、コレステロール側鎖切断酵素(CYPllα)、IV型コラーゲンα3鎖、チトクロームP450 2D6(CYP2D6)、デスミン、デスモグレイン1、デスモグレイン3、f-アクチン、GMガングリオシド、グルタミン酸デカルボキシラーゼ(GAD65)、グルタメート受容体(GLUR)、H/K ATPアーゼ、17-α-ヒドロキシラーゼ(CYP17)、21-ヒドロキシラーゼ(CYP21)、IA-2(ICA512)、インスリン、インスリン受容体、1型内因子、白血球機能関連抗原(LFA-1)、ミエリン関連糖タンパク質(MAG)、ミエリン塩基性タンパク質、ミエリン乏突起神経膠細胞糖タンパク質(MOG)、ミオシン、p-80-コイリン、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ複合体-E2(PDC-E2)、ヨウ化ナトリウムシンポータ(NIS)、SOX-10、甲状腺および眼筋共有タンパク質、サイログロブリン、甲状腺ペルオキシダーゼ、甲状腺刺激ホルモン受容体、組織トランスグルタミナーゼ、転写共活性化因子p75、トリプトファンヒドロキシラーゼ、チロシナーゼ、チロシンヒドロキシラーゼ、ACTH、アミノアシル-tRNAヒスチジルシンテターゼ、アミノアシル-tRNAシンテターゼ(いくつか)、カルジオリピン、炭酸脱水素酵素II、コラーゲン(多数の型)、セントロメア関連タンパク質、DNA依存的ヌクレオソーム刺激ATPアーゼ、フィブリラリン、フィブロネクチン、グルコース-6-リン酸イソメラーゼ、β2-糖タンパク質I(β2-GPI)、ゴルジン(95、97、160、180)、熱ショックタンパク質、ヘミデスモソームタンパク質180、ヒストンH2A-H2B-DNA、IgE受容体、ケラチン、ミエロペルオキシダーゼ、プロテナーゼ3(PR3)、RNAポリメラーゼI〜III(RNP)、シグナル認識タンパク質(SRP54)、トポイソメラーゼ-I(Scl-70)、チューブリン、ビメンチン、C1阻害剤、C1q、第II因子、第V因子、第VII因子、第VIII因子、第IX因子、第X因子、第XI因子、第XII因子、トロンビン、vWF、60-kDa Roタンパク質、糖タンパク質IIb/IIIg、およびIg/IX、酸化LDL、アンフィフィシン、サイクリンB1、DNAトポイソメラーゼII、デスモプラキン、ゲフィリン、Huタンパク質、神経ニコチンアセチルコリン受容体、p53、p62(IGF-II mRNA結合タンパク質)、リカバリン(recoverin)、Riタンパク質、βIVスペクトリン、シナプトタグミン、電位ゲートカルシウムチャンネルおよびyoタンパク質。
以下は、それによってヒトモノクローナル抗体を得ることができる一般的技法の説明である。これらの技法は例示的であり、改変されてもよいが、それでも本発明の本質的な局面を保持する。
扁桃からB細胞を調製するために、扁桃組織を抗生物質と混合して、乱切りにしておよそ1 mm3の小片となるように細切した後、扁桃片を軽くすりつぶしてナイロンストレーナを通して濾す。次に懸濁液をFicollクッション上で遠心する。単核球を含有する境界層を抽出して、DPBSによって洗浄して懸濁させる。抗体および磁気ビーズを用いる負の選択によってさらなる濃縮(>95%)を得ることができる。
EBV上清による接種によって感染させるために、B細胞を細胞106〜107個/mlで完全RPMI培地に懸濁させて、等量の濾過したEBV上清と共に混合した後、37℃および5%CO2で4時間インキュベートした。感染細胞が細胞培養に関して望ましい濃度で懸濁されるように(一般的に細胞105〜106個/ml)、完全RPMI培地を加えることによって培養体積を調節してもよい。次に、細胞をマルチウェルプレートに分配して、37℃および5%CO2の組織培養インキュベーターに移す。
B細胞分化および免疫グロブリンアイソタイプクラススイッチを誘導するために、サイトカインおよび他のシグナル伝達物質を、EBV感染B細胞に、感染直後、感染の16〜20時間後、および/または毎週の間隔(2、3、4、または5回)で連続的に加える。物質は培地において希釈してもよく、以下の最終濃度で細胞に加えてもよい:組換え型ヒトインターロイキン(IL)IL-4、0.2 ng/ml;IL-5、0.2 ng/ml;IL-6、0.1 ng/ml;IL-9、0.2 ng/ml;IL-10、0.24 ng/ml;IL-13、1 ng/ml;組換え型ヒトインターフェロン-α2a(IFN-α2a)、2,000 IU/ml;組換え型ヒトBAFF、1 ng/ml;組換え型ヒト可溶性CD40L、5 ng/ml;ヤギ抗ヒトIgM F(ab')2、1.4μg/ml(量は概算である)。特定の組み合わせは、IgM F(ab')2、CD40L±BAFF;抗IgM F(ab')2およびBAFF;CD40L±BAFF;抗 IgM F(ab')2およびIL-6±IL4;ならびに抗IgM F(ab')2およびIL-9±IL-13を含む。
収集後、扁桃および血液B細胞培養物から1週間に1回培養上清を収集して、プールして、ELISA、またはドットブロットもしくはフローサイトメトリーなどの他のスクリーニングフォーマットを用いて試験する。抗原をポリスチレン(たとえば、96ウェル)プレートのウェルに層状にして、たとえば終夜結合させてもよい。次にプレートを洗浄してブロックし、不死化B細胞培養上清試料または対照に1試料あたり3個ずつまたは他の複製実験で接触させる。その後、プレートを十分に洗浄した後、たとえば比色定量基質/p-ニトロフェノールリン酸二ナトリウム塩のAP変換によって結合IgGを検出するために、アルカリホスファターゼ(AP)共役ヤギ抗ヒトIgGまたは他の抗体を加える。
ヒト免疫グロブリン軽鎖および重鎖配列をクローニングおよび発現するために様々な方法を使用してもよい。参照により本明細書に組み入れられるWeltschof et al. (1995)は、本発明者らが用いた方法を詳細に記述している。可変領域または可変+定常領域をクローニングしてもよい。
クローニングした後、ヒト軽鎖および重鎖の核酸を適当な発現ベクターに挿入して、抗体の産生を支持する宿主細胞(たとえば、抗体産生細胞)に移入する。産生のために企図される特定の細胞株は293細胞、CHO細胞、COS細胞、または様々な型の骨髄腫細胞、IgGを欠損する細胞である。これらの細胞は、2つの基本的な方策においてヒトMAb産生のために活用されてもよい。第一に、骨髄腫または不死化細胞を、当初の融合のための体細胞および骨髄腫細胞を提供するために用いられたタイプの組織適合性の動物(たとえば、同系マウス)に注入する(しばしば腹腔内に)、または非適合性の細胞を注入するために免疫欠損動物に注入することができる。任意で、動物を炭化水素、特にプリスタン(テトラメチルペンタデカン)などの油によって注射前にプライミングする。注入された動物は、トランスフェクトされた骨髄腫によって産生された特異的モノクローナル抗体を分泌する腫瘍を発症する。血清または腹水などの動物の体液を採取してヒトMAbを高濃度で提供することができる。第二に、個々の細胞株をインビトロで培養することができ、この場合ヒトMAbは培養培地に自然に分泌され、そこから抗体を高濃度で容易に得ることができる。
本発明はインビボ診断技法においてヒトモノクローナル抗体を用いることを企図する。たとえば、癌は起源がヒトである場合に全身投与することができる抗体を用いて都合よく検出される。「検出可能な標識」は、結合した抗体の検出を容認する化合物および/または元素である。多くの適当なイメージング物質が、その抗体への付着法と共に当技術分野において公知である(たとえば、そのそれぞれが参照により本明細書に組み入れられる、米国特許第5,021,236号、第4,938,948号および第4,472,509号を参照されたい)。用いられるイメージング部分は、常磁性イオン;放射活性同位元素;蛍光体;NMR検出可能な物質;X線イメージングでありうる。
A.投与
受動抗体免疫の主な長所は、数週間およびおそらく数ヶ月持続しうる即時免疫状態を直ちに提供することである。いくつかのヒトIgGアイソタイプは、30日を超える血清半減期を有し、これは受動免疫された人に長命な保護を付与する。抗体は、それらが凝集体を含有せず、宿主組織と反応性を有しない限り、最小の毒性を有する天然の産物である。同様に、活性なワクチンが利用できることから、ワクチンと抗体の同時投与は、即時の保護と長期間持続する保護の双方を提供することが可能である(たとえば、曝露後予防における狂犬病に関して)。
宿主に投与する場合、MAbは宿主への投与にとって適した製剤に懸濁されると想像される。本発明の水性組成物は、薬学的に許容される製剤および/または水性培地において分散された抗体の有効量を含む。「薬学的および/または薬理学的に許容される」という句は、動物に投与した場合に、具体的に適当であればヒトに投与した場合に、有害反応、アレルギー反応、および/または他の望ましくない反応を生じない組成物を指す。
以下の実施例は、本発明の好ましい態様を示すために含まれるものである。当業者は、後述の実施例に開示される技術が本発明の実践において十分に機能するように本発明者らによって発見された技術を示すものであり、従ってその実践における好ましい様式を構成するとみなされることができることを認識すべきである。しかし、当業者は、本開示に照らして、開示される具体的態様に多くの変更を加えることが可能でありかつ、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく類似または同様の結果が得られることを認識すべきである。
扁桃腺B細胞の単離および培養
扁桃腺からB細胞を調製するために、扁桃腺組織を、1x Antibiotic-Antimycotic(Gibco/Invitrogen cat. #15240-062)が添加された20〜30mLのダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水(DPBS、CaCl2またはMgCl2不含;Gibco/Invitrogen, Grand Island, NY cat. #14190144)を含む無菌ペトリ皿(VWR International, cat. #25384-088)内に置いた。組織を切り刻み、メスで約1mm3片に細分化した。追加のリンパ球を、2枚の無菌顕微鏡スライド(VWR cat. #12-550-34)のすりガラス表面の間での扁桃腺片の穏やかな粉砕により放出させ、単一の細胞調製物を70μmナイロンストレーナ(BD Falcon, cat. #352350, BD Biosciences, Two Oak Park, Bedford, MA)を通して濾すことにより作製した。この懸濁物をFicoll(Amersham Biosciences cat. #17-1440-03, Uppsala, Sweden)クッション(15ml Ficoll上の35mlのサンプル)上に層状にし、1500Gで20分間分離した。単核細胞を含む境界層を抽出し、DPBSで2回洗浄し(1300Gで7分間)、カウントし、DPBS中に108個細胞/mlで再懸濁させた。高度に濃縮された(>95%)B細胞集団を、StemCell Technologies Inc.(Vancouver, Canada)からのStemSep Negative Selection Human B-cell Enrichment Kit抗体カクテル(cat. #14064A)および磁気ビーズ(cat. #19150)を使用し、製造業者の指示に従い、「The Big Easy」EasySepマグネット(StemCell Tech. cat. #18001)での使用のための以下の改変により得た。すべての工程を、層流バイオハザードフードにおいて、外界温度で実施した。細胞懸濁物を、無菌丸底14mlポリプロピレンチューブ(VWR cat. #60818-689)中に置き、等量のStemSep Negative Selection Human B-cell Enrichment Kit抗体カクテルと混合し、10分間インキュベートした。次に、抗体カクテル量と等しい量の磁気ビーズ懸濁液を加え、続いて10分間インキュベーションした。チューブ内の量をDPBSで10mlにし、チューブ(キャップ無し)を磁気内に10分間置き、その時にチューブ(依然として磁気内にある)の内容物を穏やかに1回の注ぎで第2の無菌14mlチューブ中にデカントした。非B細胞がその壁に付着している元のチューブを磁気から取り外し、第2のチューブを10分間の浄化インキュベーションのために挿入した。第1および第2のネガティブ選択工程後に得られる濃縮B細胞懸濁液を、15ml Falconチューブ中に注ぎ、カウントし、DPBSで洗浄し(1300Gで7分間)、37℃、5% CO2組織培養インキュベータにおけるインビトロ培養(一般的に105〜106個細胞/ml)のために適切な量の完全RPMI培地中に再懸濁させた。完全RPMI培地は、10%ウシ胎児血清(FBS, HyClone cat. #SH30088.03, lot. #AQC23460, Logan, Utah)を添加したRPMI 1640(Gibco/Invitrogen cat. #11875-093)、および100U/mlペニシリン、100μg/mlストレプトマイシン(cat. #15140-122)、2mM L-グルタミン(cat. #25030-081)、1mM ピルビン酸ナトリウム(cat. #11360-070)、10mM HEPES(cat. #15630-080)、0.1% 2-メルカプトエタノール(cat. #21985.023)、および0.1% Falk's Cloning Cocktail(50mM α-チオグリコール(Sigma, cat.# M6145)、20μM バソクプロインジスルホン酸(Sigma, cat. #B1125)、100mM Naピルビン酸(cat. #11360-070)、1M HEPES pH 7.4(cat. #15630-080)からなる)を含む。L-グルタミン、ピルビン酸ナトリウム、ペニシリン/ストレプトマイシン、およびHEPESをGibco/Invitrogenから得た。
末梢血からB細胞を調製するために、静脈血(180mlまで)を、1〜5mlクエン酸またはヘパリン硫酸(凝固を防ぐ)を含む60mlシリンジ中に採り、等量のDPBSで希釈し、Ficollクッション(15ml Ficoll上の35mlの希釈サンプル)上に層状にし、2000rpmで20分間分離した。血清(上層から)を回収し、一定分量で保存した。単核細胞を含む境界層を抽出し、DPBSで2回洗浄し(1300Gで7分間)、カウントし、DPBS中に108個細胞/mlで再懸濁させた。高度に純粋なB細胞集団が、StemSep Negative Human B-cell Enrichment Kit(StemCell Technologies Inc.)の使用により、末梢血B細胞の単離について記載のとおりに得られた。単離されたB細胞を洗浄し(1300Gで7分間)、105〜106個細胞/mlの完全RPMI培地(上記)で再懸濁させ、37℃、5% CO2組織培養インキュベータ中で培養した。
感染性エプスタイン-バーウイルス(EBV)ストックを調製するために、B95-8細胞、慢性的にB95-8株EBVに感染させたマーモセットのリンパ芽球様細胞株(LCL)(Miller & Lipman, 1973)、またはEBfaV-GFP細胞(Speck et al., 1999;下記)を、約105個細胞/mlの細胞密度で、37℃、5% CO2組織培養インキュベータにおいて完全RPMI培地(上記)中で培養した。EBfaV-GFP細胞はB95-8細胞に由来し、ここでEBVゲノムは相同組換えにより改変され、LMP2a遺伝子を欠失させ、それを高感度緑色蛍光タンパク質(EGFP)(CMV前初期プロモータの制御下)ならびにネオマイシン耐性(neoR)遺伝子(Speck et al., 1999)と置換した。これらの細胞は、EBfaV-GFP(LMP2a- EGFP+)ゲノムおよび野生型B95-8ゲノムの混合物を含む。
ウイルス濃縮は、濾過された上清を2つのCentricon Plus-70(100K MWカットオフ)ユニット(Millipore, Billerica, MA)に添加することにより実施し、製造業者の指示に従って濃縮した。フィルターユニットは、最小の濃縮液量(約0.5ml/濾過ユニット)が達成されるまで、15〜45分間遠心分離(2000G)にかけた(15分毎にモニターした)。濾液を捨て、ウイルス含有濃縮物を、完全RPMI培地を用い全量最大14ml(または元の培養上清量の1/10)になるように再懸濁させた。1mlの一定分量を凍結バイアル中に移し、液体窒素中で瞬間凍結させ、保存のために-80℃のフリーザーに移した。
B細胞を完全RPMI培地中で106〜107個細胞/mlに再懸濁させ、等量の濾過されたEBV上清と混合し、次にT-25フラスコ中に置き、37℃および5% CO2の組織培養インキュベータ中で4時間インキュベートした。培養体積を次に完全RPMI培地の添加により調整し、感染細胞を所望の濃度(一般的に105〜106個細胞/ml)で細胞培養のために再懸濁させ、マルチウェルプレート中に分注し、37℃および5% CO2の組織培養インキュベータに移すようにした。
B細胞を完全RPMI培地中で106〜107個細胞/mlに再懸濁させ、等量の濃縮EBVと混合し、6ウェル組織培養プレート(Greiner bio-one, cat. #65760)のウェル中に置いた。プレートを外気温度で1時間900Gの遠心分離にかけ、その時に感染細胞が所望の濃度(一般的に105〜106個細胞/ml)で完全RPMI培地中に再懸濁させ、マルチウェルプレート中に分注し、37℃および5% CO2の組織培養インキュベータに移した。
B細胞を上記のとおりにB95-8株EBVで感染させ、感染時にToll様受容体(TLR)リガンドを加えた。リガンドを以下の最終濃度で加えた:リポタンパク質Pam3-CSK4(0.5μg/ml)、ザイモサン(Zymoson)(1μg/ml)、ポリイノシン、ポリシチジン酸(poly I:C)(25μg/ml)、リポポリサッカリド(LPS)(5μg/ml)、イミキモド(1μg/ml)、非メチル化CpG DNA(1μg/ml)。すべてのTLRリガンド(InVivogen Incから)が、モハメド・セーラム博士(MUSC)の好意により供与された。
感染の12時間後、B細胞をカウントし、2倍希釈系列として96ウェル丸底プレート(Greiner cat#650180)のウェル中に分注し、この際ウェルの各連続列は先の列で見いだされた細胞数の半分を含んだ。最初の列は50,000個細胞/ウェルを含み、希釈系列の最終列は24個細胞/ウェルを含んだ。細胞を37℃および5% CO2の組織培養インキュベータ中で9日間インキュベートし、その時点でリンパ芽球腫細胞の増殖は顕微鏡により見ることができた。不死化効率を、リンパ芽球腫細胞の増殖がウェル中の少なくとも1個のB細胞のEBV不死化に起因したとの仮定に基づき推測した。このように、効率は、リンパ芽球腫細胞の増殖が顕微鏡により一貫して観察された、ウェル当たりの最低細胞数を含むウェルを含む列から算出し、初めにウェル中に分注された細胞数当たりの1つの不死化事象として表わした。
組換えEBV-GFPウイルスは、潜伏感染膜タンパク質2 (latent membrane protein-2) (LMP2)遺伝子の代わりに高感度緑色蛍光タンパク質をコードするEGFP遺伝子を含むため、ウイルスでの感染が感染後24時間という早期に蛍光顕微鏡により、または、フローサイトメトリーにより測定できる。293細胞を、以下のとおりに、接種により、または、スピンフェクションにより感染させた。細胞をトリプシン処理し、洗浄し、完全DMEM培地(DMEM(Mediatech cat #10-013-CM)、10% Cosmic Calf血清(CCS, HyClone cat. #HS0087.03, lot. #APE21241)、ペニシリン100U/ml、ストレプトマイシン100μg/ml(Gibco/Invitrogen, cat. #15140-122)を含む)中に、6ウェルプレートへ1×106個細胞/1ml/ウェルで再懸濁させた。1mlのEBfaV-GFPウイルスストック(濃縮または未濃縮)を細胞に加えた。プレートを、接種のために一晩インキュベートした、または、スピンフェクションのために900Gで1時間遠心分離にかけた。感染効率は、蛍光顕微鏡を使用した目視検査により感染後48時間目に測定した。
定量的にB細胞感染効率を評価するために、扁桃腺B細胞を2×105個細胞/100μl/ウェルで96ウェルプレートのウェル中に分注した。TLRリガンドを、先に上記の濃度でウェルの一部に加え、細胞を37℃、5% CO2で4時間インキュベートした。濃縮EBfaV-GFPウイルスストック(100μl/ウェル)を次に全ウェルに加え、細胞を先に記載したとおりにスピンフェクションにより感染させた。感染効率を、24時間後にEGFP+細胞についてのフローサイトメトリーにより分析した。
不死化プロセス中でのB細胞分化に及ぼすそれらの効果を決定するために、サイトカインおよび他のシグナル伝達薬剤を、感染直後または感染の16〜20時間後のいずれかで、1週間間隔でさらに2回、EBV感染したB細胞に加えた。すべての薬剤を完全RPMI培地中で希釈し、そして以下の最終濃度で細胞に加えた:組換えヒトインターロイキン(IL)IL-4、0.2ng/ml;IL-5、0.2ng/ml;IL-6、0.1ng/ml;IL-9、0.2ng/ml;IL-10、2.4ng/ml;IL-13、1ng/ml;組換えヒトインターフェロン-α(IFN-α2a)、2,000IU/ml;組換えヒトBAFF、1ng/ml;組換えヒト可溶性CD40L、5ng/ml;ヤギ抗ヒトIgM(Fab')2、1.4μg/ml;IL-4(cat. #200-04)、IL-5(cat. #200-05)、IL-6(cat. #200-06)、IL-9(cat. #200-09)、IL-10(cat. #200-10)、IL-13(cat. #200-13)、CD40L(cat. #310-02)、およびBAFF(cat. #310-13)はPeproTech(Rocky Hill, NJ)から得られた。IFN-α2a(Roferon(登録商標)-A)はRoche Pharmaceuticalsからであり、ヤギ抗ヒトIgM(Fab')2(cat. #109-006-129)はJackson Immune Research Laboratories Inc.からであった。
扁桃腺または抹消血のB細胞に、上記のとおり、スピンフェクションにより濃縮B95-8ウイルスを感染させた。スピンフェクション直後、細胞を、IL-4(0.2ng/ml)、IL-6(0.1ng/ml)、BAFF(10ng/ml)、およびヤギ抗ヒトIgM(Fab')2(1.62μg/ml)(3つのサンプルについて)、またはCD40L(5ng/mL)、BAFF(10ng/ml)、およびヤギ抗ヒトIgM(Fab')2(1.62μg/ml)(5つのサンプルについて)を加えた完全RPMI培地中に再懸濁させた。
培養上清(24ウェルプレートの各ウェルから1ml)を、感染後1週目から開始して、種々の時間点で回収し、アッセイまで-20℃で凍結保存した。解凍した上清、10μl/サンプル、または、精製ヒトIgG(Sigma-Aldrich cat. #I2511)もしくはIgM(cat. #I8260)からなる10μlのスタンダードを、100mM Na2HPO4、pH 9からなる90μlの結合バッファーと混合した。サンプルを次にNunc 96ウェルEasyWashプレート(Costar cat. #3369)の4組のウェルに直接結合させた。すべてのサンプルを2組のプレートに加え、1つはIgGの検出のため、他方はIgMの検出のためであった。プレートを室温で1時間インキュベートし、PBST(80.0g NaCl、11.6g Na2HPO4、2.0g KCl、5ml Tween-20、pH 7.0、10L中)からなる洗浄バッファーで4回洗浄し、洗浄バッファー中の2% BSAで1時間ブロッキングした。IgGおよびIgMを結合したプレートを、ヤギ抗ヒトIgGまたはIgM(それぞれSouthern Biotech cat #2040-04または2020-04)が結合したアルカリホスファターゼ(AP)を使用して検出し、1:1,000希釈した100μl/ウェルを1時間加えた。洗浄後、発色基質p-ニトロフェニルリン酸二ナトリウム塩(PNPP、Peirce cat #37620)のAP変換を、Multiskan Spectrumプレートリーダー(ThermoLabsystems)を使用してOD405での吸光度を測定することにより検出した。培養上清サンプル中のヒト免疫グロブリンのレベルを、MultiSkanソフトウェアを使用し、精製ヒトIgGおよびIgMスタンダードの標準曲線の較正に従って算出した。
培養上清を、週1回、扁桃腺および末梢血の固定化B細胞培養物から回収した(各ウェルから150μl、新鮮RPMI+CD40L、BAFF、および抗ヒトIgMで交換した)。1および2週間後、上清を、プレート上の各ウェルからの25μlのサンプルを合わせることによりプールした。3週目について、プールした上清を、特定列(A、B、Cなど)中の各ウェルからの50μlを合わせることにより、各プレート上の個々の列から生成した。全ウェルからの上清を、個々のまたはプールした2つのウェルをテストする際に、分析のために使用した。ひとたび抗H5 HA IgGを分泌する個々のウェルが同定されれば、そのウェルからの細胞をカウントし、各々が1000、100、10、または1個細胞/ウェルを含む、少なくとも4枚の96ウェルプレート中にサブクローンニングした。2週間後、プレート、次に列、次にウェルからのサンプル回収および上清の分析を繰り返した。サブクローンニング戦略の目的は、最初に1ウェル当たりわずか1個の細胞を蒔いたウェルからH5 HA反応性IgGを得ることであった。
H5N1鳥インフルエンザ株A/Vietnam/1203/2004(Protein Sciences Corp)からの精製組換えH5ヘマグルチニン(HA)を、高pHの100mMリン酸ナトリウム結合バッファー(pH9.0)中で2μg/mlに希釈し、96ウェルEasyWashプレート(Costar cat. #3369)中に50μl/ウェルで分注し、一晩結合させた。各サンプル中での非特異的なプレート結合のコントロールのために、等しい数のウェルには結合バッファーのみを入れた。プレートを次に洗浄し、2% BSAを含む中性pHの100mMリン酸ナトリウムバッファー(pH7.2)でブロッキングした。サンプルまたは対照からの培養上清、100μl/ウェルを3通りに加えた。対照は、完全RPMI培地で1:500に希釈した健康なヒトボランティアからの血清;完全RPMI培地中で5μg/mlに希釈した精製ヒトIgG(Sigma)およびRituxan(登録商標)(ヒト化抗CD20 IgG1モノクローナル抗体、Genentech, San Francisco, CA 94080, cat. #50242-051-21, lot #M70267)を含んだ。続いて、プレートを十分に洗浄した。次に、1:1000希釈したアルカリホスファターゼ(AP)結合ヤギ抗ヒトIgG(Southern Biotech cat. #2040-04)を100μl/ウェル加え、外気温度で1時間インキュベートし、p-ニトロフェニルリン酸二ナトリウム塩(PNPP、Peirce cat. #37620)からなる発色基質のAP変換による検出が続いた。吸光度は405nmで測定した。結果は、平均OD405値±標準偏差(n=3)で表わした。未コーティングウェル(結合バッファーだけ)への非特異的なサンプル結合に起因するバックグラウンド値を、H5 HAコーティングウェルへの結合から得られた値から引いた。
Toll様受容体(TLR)リガンドおよびEBVの濃縮は、EBV感染力を有意には改善しない
Traggiai et at.(2004)は、少なくとも1つのTLRリガンド(CpG)の培養記憶B細胞への添加によってEBV感染効率を増強できることを報告した。ナイーブB細胞がいくつかのTLRを発現するため(Bourke et al., 2003)、いくつかのTLRリガンドがナイーブB細胞のEBV感染に及ぼす効果を評価することが合理的であった。初代B細胞を、Pam3(Pam3Cys-Ser(Lys)4)(0.5μg/mL)、ザイモサン(1μg/mL)、Poly I:C(ポリイノシン‐ポリシチジル酸)(25μg/mL)、LPS(リポポリサッカリド)(5μg/mL)、イミキモド(1μg/mL)、CpG(10μg/mL)、または無リガンドのいずれかと一晩インキュベートした。これらは、共通の病原性抗原を模倣する合成タンパク質である。これらの各々は、B細胞中の異なる先天性免疫経路を活性化する。リポペプチドPam3(Hamilton-Williams et al., 2005)はTLR2および1に結合し、ザイモサン(サッカロマイセス・セレヴィシエ(Saccharomyces cerevisiae)から調製された酵母細胞壁成分)はTLR2および6に結合し、Poly I:C(ウイルス二本鎖DNA模倣体)はTLR3に結合し、LPS(微生物細胞壁成分)はTLR4に結合し(Hamilton-Williams et al., 2005)、イミキモド(イミダゾキノリンファミリー中の小分子化合物で、抗ウイルス効果および抗腫瘍効果の両方を呈する)はTLR7に結合し、低メチル化CpG DNAはTLR9に結合する(Hamilton-Williams et al., 2005)。本発明者らはこれらのTLRリガンドを選んだ。その理由は、それらは広範なTLRに結合し、良好な範囲の活性を与えうるからである。一晩のインキュベーション後、細胞を、未濃縮B95-8 EBVの2つの異なる調製物(調製物1、調製物2)で感染させた。図1Aに示すとおり、イミキモド、Pam3、およびCpGの添加によって、一部の場合において、感染効率が1.5%近く改善されたが、しかし、全般的な感染力は非常に低かった。また、ウイルスストック調製物の間の変動が、ウイルス感染力に有意な影響を与えた(図1A)。
「スピンフェクション」または「スピノキュレーション(spinoculation)」によってHIVなどの他のエンベロープを持つウイルスの感染力が増強されると報告されている(Audige et al., 2006; O'Doherty et al., 2000)。この技術は、細胞およびウイルスストックを合わせること、次にこの組み合わせを低速度で1時間遠心分離することを含む。濃縮および「スピンフェクション」技術を評価するために、付着性細胞株Q293Aに組換えEBfaV-GFPウイルスを感染させ、その中のEBV潜伏遺伝子LMP2aを高感度緑色蛍光タンパク質EGFP遺伝子(Speck et al., 1999)で置換した。Q293A細胞に、EBfaV-GFPウイルスストックの濃縮または未濃縮調製物を24時間接種し、または、濃縮ウイルスで、900Gで1時間「スピンフェクト」した。図2Aは、未濃縮ウイルスの低感染効率を実証した。未濃縮ウイルスを上回る感染力の著しい増加が、EBfaV-GFPの10倍濃縮で観察された(図2B)。図2Cでは、Q293A細胞を濃縮ウイルスで「スピンフェクト」した;組み合わせによって、未濃縮または濃縮のいずれかのウイルスでの接種を上回り、感染効率が増加した(図2A-C)。
ナイーブB細胞は、B細胞受容体(BCR)と特定抗原の間の相互作用を通じて活性化される;活性化はT細胞からの共刺激シグナルにより助けられる。インビボでのB細胞分化は、T細胞の助けに依存的である。したがって、本発明者らは、BCRを架橋して抗原を模倣する状態でT細胞由来の増殖因子と分化因子の両方を提供できるならば、EBV不死化LCLはインビトロで分化を強いられうると仮定した。
扁桃腺B細胞をサイトカインおよびシグナル伝達薬剤で3週間処理した;培養上清を、各週後、10週目までELISAにより分析した。図4に表わすドナーサンプルの2つからの扁桃腺B細胞を、限られたパネルのシグナル伝達薬剤の組み合わせで3週間処理した。これらのサンプルは、1週間後、主にIgMを最初に分泌したが(図4)、IgMおよびIgGの発現パターンは経時的にインビトロで変化した。培養後10日という早期に開始し、免疫グロブリンアイソタイプクラススイッチが、サイトカインの特定の組み合わせでの処理後に起こった。図5に見られるように、8週間を超えて培養された細胞では、免疫グロブリン発現パターンが明確に異なった(図5Aおよび5B)。CD40L単独、またはIL-6との組み合わせでの抗IgM(Fab')2での継続的なサイトカイン処理は、高レベルのIgG分泌をもたらした(図5A)。このIgGの増加は、IgM分泌の下落を伴った(図5A)。対照的に、抗IgM(Fab')2およびIL-4で処理したB細胞は、IgGよりも高レベルのIgMを分泌した(図5Aおよび5B)。図5Bは、CD40L、抗IgM(Fab')2、およびBAFFと培養した細胞も、優先的なIgG分泌をもたらすことを示した。全クラスで、B細胞は、何週間にもわたり高レベルで免疫グロブリンの分泌を継続した。これらの結果は、LCLが、シグナル伝達薬剤での処理後にIgMからIgGへの免疫グロブリンアイソタイプクラススイッチを受けていたことを示唆した。
図5Aおよび5Bは、抗IgM(Fab')2およびIL-6、可溶性CD40L単独、または抗IgM(Fab')2、BAFF、および可溶性CD40Lで処理されたEBV不死化細胞が、優先的にIgG分泌を増加するが、抗IgM(Fab')2およびIL-4で処理された、または、サイトカインおよびシグナル伝達薬剤の非存在下で、培地だけで培養されたEBV不死化細胞がIgMを主に分泌することを実証した。不死化細胞は、20週間を超えて多量の免疫グロブリンを分泌した(データ示さず)。これらの観察結果は、まとめると、B細胞分化が起こっていたことを示した。不死化B細胞がインビトロでプラズマ様細胞に分化するか否かを研究するために、抗IgM(Fab')2およびIL-4またはIL-6で処理され、主にIgMまたはIgGをそれぞれ分泌するEBV不死化B細胞を、共通のB細胞表面マーカー(説明については表5を参照のこと)について染色し、不死化前に初代扁桃腺B細胞と比較した。図6Aは、非感染の初代扁桃腺B細胞(上パネル)の大半がナイーブであり、または、免疫グロブリンアイソタイプクラススイッチを受けていなかったことを示した。初代扁桃腺B細胞は汎親和性B細胞表面マーカーCD19およびCD20について陽性染色され、細胞の大部分が表面免疫グロブリンIgD(免疫グロブリンアイソタイプクラススイッチまたは体細胞超変異を受けていないナイーブB細胞および成熟B細胞のマーカーである)について陽性染色された。また、初代細胞は、活性化マーカーCD27およびCD30の低レベル発現を有した(図6A)。対照的に、主にIgMまたはIgGを分泌した不死化細胞(図6B、下パネル)は、表現型的に初期プラズマ細胞と似ていた;予測されうるとおり、両方の集団が、汎B細胞マーカーCD19について陽性であったが、しかし、それらはCD20(プラズマB細胞で共通して喪失される)およびIgD(ナイーブおよび初期成熟B細胞のマーカーである)の発現減少を有し、それらは活性化マーカーCD30およびCD27の発現増加を有した(図6B)。主にIgGまたはIgMを分泌する不死化B細胞は、CD38(IgG分泌細胞で情報制御された終末分化マーカーである)の発現においてだけ異なった(図6B)。これらの結果によって、シグナル伝達薬剤で処理された不死化細胞が実際にインビトロで分化していたことが確認された。
今日まで、初代B細胞の組換えEGFP発現ウイルスでのエプスタイン-バーウイルス感染が最適化されて、蛍光細胞の一晩集団が達成され、有意に増加した平均蛍光活性(MFI)は、例えば、バックグラウンドMFI 15.1と比較し、遠心限外濾過および「スピンインフェクション」技術を使用したウイルス濃縮を通して61.9であった。シグナル伝達薬剤の組み合わせ(CD40L単独または抗IgM(Fab')2およびBAFFとの組み合わせ;または、IL-4を伴う、または伴わない、IL-6との組み合わせでの抗IgM(Fab')2)を同定し、それらは一貫してB細胞の活性化および分化を増加させ、優先的なIgG分泌をもたらした。サイトカインの他の組み合わせは、一貫して、IgG分泌、例えば、IL-9およびIL-13を誘導した。異なるB細胞表面マーカーに特異的な抗体でのフローサイトメトリー染色によって、インビトロで分化誘導されていたEBV不死化B LCLが、プラズマB細胞と似ており、それらが由来する初期の初代扁桃腺B細胞とは似ていなかったことが示された。
インビトロでのプラズマ細胞の作製は、鳥インフルエンザをはじめとする目的の標的に特異的なヒトモノクローナル抗体の作製のために利用されうることを示唆した。大半の人々が鳥インフルエンザに暴露されていないが、他の密接に関連するインフルエンザ株には暴露されている。従って、健康な個人が、ヒトインフルエンザウイルスにより刺激され、鳥インフルエンザのH5 HAタンパク質と交差反応する記憶B細胞を有しうると想定することが合理的である。H5 HA反応性IgG抗体が健康な個人の血液中に存在するか否かを確認するために、血清を、H5N1鳥インフルエンザ(HS 1-5)に暴露されていなかった5人の健康なボランティアから回収し、次に、市販の組換えH5 HAに結合する抗体でのELISAによりアッセイした。血清中のこれらの抗体を検出するために、組換えH5 HAを使用したELISAを作製した。H5 HA特異的結合を、全結合からバックグラウンドを引くことにより算出した(方法に記載)。4人のドナー(HS1、2、3、5)が血清中に変動量のH5 HA特異的IgGを有し(図7)、ドナーHS 3および5が最高の反応性を有した。対照的に、ドナーHS 4は陰性対照(CD20抗原に特異的なヒト化モノクローナル抗体リツキシマブ(Rituxan(登録商標))または精製全ヒトIgGからなる)よりも低い反応性を有し、このボランティアがH5 HA交差反応性IgG抗体を欠くことを示す(図7)。健康なボランティアの血清におけるH5 HA特異的IgGの検出は、H5 HA反応性IgG抗体がELISAスクリーニングにより検出できることを示した。しかし、本発明者らはELISAを使用してIgM抗体結合を検出できなかった。その理由は、バックグラウンド結合が高過ぎ、意味のある結果が出せなかったからである(データ示さず)。これらの結果は、鳥インフルエンザのH5ヘマグルチニンに特異的なIgG抗体が、EBV不死化細胞中のB細胞分化経路を利用することにより作製できるとの仮説を支持した。その理由は、それらは、H5N1に暴露されない健康な人が、ウイルスに対する抗体反応を作る能力を有することを示したからである。
ELISAの結果は、所与の特異性のB細胞クローンが、H5N1鳥インフルエンザに暴露されていない個人から単離できることを示唆した。不死化および分化の技術をテストするために、PBMCをボランティア5(HS5=V5)から抽出した。B細胞を、2つの異なるサイトカイン/シグナル伝達薬剤の組み合わせを使用して培養した:(1)抗IgM(Fab')2、IL-4およびIL-6(PBMC A1の結果を参照のこと);(2)抗IgM(Fab')2、CD40LおよびBAFF(PBMC A2の結果を参照のこと)。
B細胞を、方法に記載のとおりに、および、表6にまとめるとおり、ボランティアHS 5のPBMCから単離し、EBVで不死化した。細胞を、抗IgM(Fab')2、IL-4、およびIL-6で処理し、B細胞の分化および免疫グロブリン産生を誘導し、次に96ウェルプレート3枚に蒔いた。1週間後、各プレートの全ウェルからの培養上清を回収し、プールした;3枚のプレートのいずれかからのプールされた上清サンプルにおいて、ヒト血清対照と比較して、検出されるH5 HA特異的IgG結合はほとんど存在しなかった(図8)。しかし、2週間の処理後、H5 HA特異的IgGは、B細胞の全3枚のプレートからのプールされた培養上清において検出された(図8、プレート1、プレート2、およびプレート3)。H5 HA反応性IgGを分泌する反応性B細胞クローンの位置を決定するために、反応プレート上の各列の全ウェルをプールし、アッセイした。3枚のプレートの各々からのいくつかの列が、H5 HA反応性B細胞を含んだ(プレート1、列E;プレート2、列C、D、およびE;ならびにプレート3、列D)(図9)。図10は、最も反応性の高いB細胞がプレート2、列Dの隣接ウェル11および12からのプールされた上清中に位置することを示した。上清のさらなる分析では、反応性B細胞が、プレート2、列D、ウェル11に見出された(図11);これらの細胞は、陽性血清対照と類似のレベルのH5 HA反応性IgGを分泌していた(図11)。このウェルをサブクローンニングした;しかし、H5 HA反応性B細胞は、それらが12週間の培養後に単離される前に死んだ。クローン単離計画の概要および知見を、図12および表6にまとめている。
B細胞を、方法に記載のとおりに、および、表6にまとめるとおり、ボランティアHS 5のPBMCから2回目に単離し、EBVに感染させた。細胞を次に、方法に記載のとおりに、抗IgM(Fab')2、CD40L、およびBAFFでの処理により分化を誘導した。(薬剤のこの組み合わせによって、PBMC A1およびBで使用された組み合わせを上回るIgG抗体産生レベルが改善された)6枚の各96ウェルプレートの全ウェルからの培養上清を、感染後、週1回回収し、プールし、H5 HA反応性IgG抗体についてアッセイした。4週間後、異なるプレート(プレート4 G8、プレート5 E1、およびプレート6 C2)の3つのウェルはH5 HA反応性IgGを含んだ。3つの反応性ウェルをサブクローンニングし、図13に概説し、および、表6にまとめるとおり、続いて可能なクローンをウェルの2つから同定した。H5 HA反応性B細胞は、培養において10週後に、それらの単離前に死んだ。
B細胞を、方法に記載のとおりに、および、表6にまとめるとおり、ボランティア6の末梢血から単離し、EBVで不死化した。不死化細胞を、抗IgM(Fab')2、IL-4、およびIL-6で処理し、96ウェルプレート3枚に蒔いた。3週間のサイトカイン処理後、H5 HA特異的IgG抗体は、ボランティア6の上清または血清中に検出されなかった(図14)。このサンプルの分析は、血清または不死化細胞の上清のいずれかにおけるH5 HA反応性が繰り返し欠如したため、中断された。
ボランティア2名からの末梢血由来B細胞を単離し、EBVで不死化し、次に抗IgM(Fab')2、IL-4、およびIL-6;または、抗IgM(Fab')2、CD40L、およびBAFFのいずれかで分化を誘導した。H5 HA反応性IgG抗体を分泌するB細胞をボランティア1名から、2つの別々の場合(PBMC A1およびA2)に単離し、いずれかの方法を使用して分化を誘導した。これらのサンプルにおいてより多くのH5 HA反応性IgG分泌B細胞を得るために、異なるサイトカインの組み合わせを、免疫グロブリンアイソタイプクラススイッチを誘導する効率を最適化する目的でテストした。この変化によって、PBMC A2レパートリーから、PBMC A1レパートリーからよりも多くの反応性細胞が産出されるが、差は有意ではなかった。サンプルを、同じボランティアから1ヶ月を少し超える間隔で単離した。対照的に、ボランティア6から単離されたB細胞は、反応性クローンを産生しなかった。これらの結果を表6にまとめている。
H5 HA反応性IgGを産生する不死化B細胞を、それらがナイーブB細胞の分化を誘導することを証明するために、抹消血(PBMC)から単離することが成功しており、レパートリーの作製のためのナイーブの細胞集団は、医学的理由のために扁桃摘出術を受けた、その他の点では健康な小児からの扁桃腺B細胞から得た。図6Aで実証されたとおり、扁桃腺B細胞は主にナイーブであり、または、免疫グロブリンアイソタイプクラススイッチを受けていない。本発明者らは、26の扁桃腺サンプルでの末梢血サンプルで実施された実験を繰り返した(表6にまとめた)。分化を誘導するための処理によって、最初の扁桃腺(TNSL A)後の抗IgM(Fab')2、IL-4、およびIL-6から、残りのすべて(TNSL B〜E)について抗IgM(Fab')2、CD40L、およびBAFFに変わった。その理由は、第2の組み合わせによってIgG分泌が選択的に増加したからである(データ示さず)。扁桃腺レパートリーのいくつかからの代表的な結果を図15〜32に示す。
B細胞を、方法に記載のとおりに、および、表6にまとめるとおり、扁桃腺から単離し、EBVで不死化し、抗IgM(Fab')2、IL-4、およびIL-6で処理し、次に96ウェルプレート10枚中で培養した。1週間後、H5 HA反応性IgGは検出されなかった。しかし、2週間のサイトカイン処理後、H5 HA結合活性が、プレート10枚のうち2枚(プレート6および9)で検出された(図15)。3週間後、2列(プレート9のCおよびF)が交差反応性IgGを有するとして同定された;残念ながら、このサンプルは真菌混入のために失われ、分析は中断された(図15)。この喪失にもかかわらず、このサンプルによって、目的の抗原への抗原のIgG反応性を得ることが扁桃腺B細胞から可能になることが実証された。
B細胞を、方法に記載のとおりに、および、表6にまとめるとおり、扁桃腺から単離し、EBVで不死化し、抗IgM(Fab')2、CD40L、およびBAFFで処理し、IgG抗体産生を増加させ、96ウェルプレート10枚中に蒔いた。低レベルのH5 HA反応性IgGが、2週間の分析後、プレート3列Dで検出されたが、反応性は続いて回復されなかった;従って、サンプル分析は中断した(図16)。
B細胞を、方法に記載のとおりに、および、表6にまとめるとおり、扁桃腺から単離し、EBVで不死化し、抗IgM(Fab')2、CD40L、およびBAFFで刺激し、96ウェルプレート10枚中に蒔いた。第1週後、H5 HA反応性IgGが、プレート7、8、9、および10(図17)で、非常に低レベルで検出された。しかし、2週間後、H5 HA反応性IgG抗体はプレートのいずれでも検出されず、反応性は続いて回復されなかった。従って、サンプル分析を4週間後に中断した(図17)。
B細胞を、方法に記載のとおりに、および、表6にまとめるとおり、扁桃腺から単離し、EBVで不死化し、抗IgM(Fab')2、CD40L、およびBAFFで刺激し、10枚の96ウェルプレート中に蒔いた。1週間後、培養上清中に検出可能なH5 HA反応性IgGは存在しなかった(図18)。しかし、2週間後、H5 HA反応性IgGがプレート1、8、9、および10で同定された(図19)。プレート10は強いH5 HA反応性を呈し、ボランティアHS 5からのヒト血清と類似していた;従って、個々のウェルからの培養上清を直ぐに分析した。他のプレートは第2週後に結合強度を失い、サブクローンニングのために追跡されなかった。反応性B細胞が、プレート10、列Gで、隣接ウェル3および4からのプールされたサンプル中で見出され、ヒト血清対照と類似の結合レベルを呈した(図20)。反応性ウェルがG4として同定された(図21);しかし、反応性は低下しており、抗体を産生する細胞の死が始まっていることを示す。このウェルからのB細胞を続いてサブクローンニングしたが、図29に示したとおり、H5 HA反応性IgGを産生する細胞は生存せず、単離できなかった。単離計画を図22にまとめている。
B細胞を、方法に記載のとおりに、および、表6にまとめるとおり、扁桃腺から単離し、EBVで不死化し、抗IgM(Fab')2、CD40L、およびBAFFで刺激し、96ウェルプレート4枚中に蒔いた。1週間後、プレート1および3はH5 HAに反応性が弱かった(図23)。2週間後、プレート1、列BおよびEならびにプレート3、列Aが、H5 HAと反応性のIgGを分泌するB細胞を含むとして同定された(図24)。プールされた隣接ウェルからの培養上清の分析によって、プレート1、列Bウェル5および6、列E、ウェル3および4、11および12;ならびにプレート3列A、ウェル9および10がH5 HAと反応性のIgGを含むことが決定された(図25)。これらの対のウェルのうち、プレート1列Eウェル11およびプレート3、列A、ウェル10がH5 HA反応性IgGを含んだ(図26)。プレート3ウェルA10をサブクローンニングした。その理由は、それが最も強いH5 HA結合を有したからである。反応性が、5週間後にわずか1000個の細胞を含むウェル中で検出された(図27)。一次ラウンドのサブクローンニングのための単離計画を図28にまとめ、概説した。H5 HA反応性が、1000個細胞/ウェルを含むプレートでの一次ラウンドのサブクローンニング中に同定された(図29)。反応性細胞をウェルC7およびE3において同定した(図30Aおよび30B)。これらのウェルからの細胞を、2つの追加ラウンドの限界希釈クローンニングにかけ、2つのH5 HA反応性クローン、TE-3A10-E3A5およびTE-3A10-C7F6(それぞれE3A5およびC7F6と呼ばれる場合もある)(図30C)の同定をもたらした。
H5 HAへの結合の特異性を評価するために、H5 HAへのTE-3A10-C7F6およびTE-3A10-E3A5(C7F6およびE3A5)の結合についての相対的親和性を、H1 HAおよびH7 HAについてのそれらの親和性と比較して試験した。H1およびH7 HAに特異的なELISAアッセイを開発した。クローンC7F6およびE3A5からの培養上清を、健康な成人ボランティア5名からのヒト血清との比較で、相対的結合についてアッセイした(図31)。大半の健康な成人が、H1 HAに対する抗体応答を有すると予測されうる。その理由は、大半のヒトインフルエンザウイルス感染がH1株ウイルスを原因とし、H1 HAが毎年のインフルエンザンワクチンの成分であるからである。図31に見られるように、すべてのボランティアが血清中にH1 HA反応性IgGを有していた。しかし、予測のとおり、H5 HAおよびH7 HAへのずっと低い血清反応性を有した。その理由は、H5およびH7は鳥インフルエンザ株であるからである。対照的に、クローンC7F6およびE3A5の両方が、H5 HAに結合したIgGを分泌したが、H1またはH7 HAへの結合よりも有意に高い反応性であり(図31)、C7F6およびE3A5の両方がH5 HAに比較的特異的であることを示す。興味深いことに、H5 HA反応性クローンがヒト株H1 HAへいくらかの交差反応性を有したが、他の鳥H7株との低レベルの反応性を有した。精製ヒトIgGを対照として使用し、図31に見られるように、H1 HA反応性もこのサンプル中に存在し、全ドナーにおいて見出されるH1 HAとの強い反応性と一致する。
全RNAを各クローンの約106個の細胞から、RNEasyプロトコール(Qiagen, #74104)を使用し、QIAshredderカラム(Qiagen, #79654)で抽出した。RNAを、High Capacity cDNA Reverse Transcription Kit(Applied Biosystems, #4368813)で、製造業者の指示に従いcDNAに変換し、PCRにより、軽鎖および重鎖型の含量について、Welschof et al.(1995)から適応したプラーマー組を使用して分析した(図34A)。すべてのフォワードプライマーがXbaI制限酵素部位を取り込み、リバースプライマーがSalI制限酵素部位を取り込んだ。PCR産物を1%アガロースゲルで分析した結果(図34B)、E3A5およびC7F6の両方がλ1軽鎖を有し、E3A5がVH3重鎖を有し、C7F6がVH1重鎖を有したことを示す。検出可能な産物をもたらす反応を、プルーフリーディングAccuzyme(商標)Mixキット(Biolinc, # BIO-25027)を使用してスケールアップした。PCR産物をQIAquick Gel Extraction Kit(Qiagen, # 28704)を使用してゲル精製し、各々の一部を、シークエンシングのために、MUSC DNA Core Facilityへ、元のフォワードおよびリバースPCRプライマーと共に提出した。各産物の残りを、XbaIおよびSalI(New England Biolabs)で消化し、哺乳動物発現ベクター中への続くサブクローンニングのために、XbaI/SalI消化したpSP73プラスミド(Promega, # P2221)中にクローンニングした。フォワードおよびリバースDNA配列をVector NTI(Invitrogen)ALIGN機能を使用して整列させ、組み合わせた修正配列を生成した。これらをVBASE2オンラインソフトウェア(Retter et al., 2005)を使用して分析した。この分析の結果を図35A〜35Eに示す。配列ナンバリングおよびモチーフ整列化をKabatスタンダードに従って実施した(Johnson and Wu, 2000)。E3A5(SEQ ID NO:16および17)はVL遺伝子セグメントIGLV063およびJLセグメントIGLJ3*02を有し、生殖系列の配列との相同性はそれぞれ99%および100%であった(図35A)。C7F6(SEQ ID NO:19および20)はVL遺伝子セグメントIGLV067およびJLセグメントIGLJ1*01を有し、生殖系列の配列との相同性はそれぞれ99%および100%であった(図35B)。E3A5(SEQ ID NO:22および23)はVH遺伝子セグメントIGHV157、DHセグメントIGHD4-17*1、およびJHセグメントIGHJ3*02を有し、生殖系列の配列との相同性はそれぞれ90%、93%、および96%であった(図35C)。C7F6(SEQ ID NO:25および26)はVH遺伝子セグメントIGHV220、DHセグメントIGHD2-2*03、およびJHセグメントIGHJ6*02を有し、生殖系列の配列との相同性はそれぞれ90%、93%、および96%であった(図35D)。C7F6およびE3A5の両方についての軽鎖および重鎖の相補性決定領域を図35Eに描写している(SEQ ID NO:28、29、30、および31)。
不死化扁桃腺レパートリーの作製
濃縮EBVストックの生成および扁桃腺組織からのB細胞の調製を実施例1および2に記載している。これらの方法は変更されていない。EBV不死化B細胞の分化誘導のために、本発明者らは、先に記載したとおりに、可溶性CD40リガンド(5ng/ml)、BAFF(10ng/ml)、およびヤギ抗ヒトIgM F(ab')2(1.62ng/ml)を含む10% FBS(Hyclone)を添加した完全RPMI培地(Gibco)を使用した。
サンプル培養上清の回収およびELISAによる抗原反応性についてのスクリーニングを以下のとおりに改変している。培養上清を、96ウェルプレートの対応するウェル中に、形質導入後10〜14日目に各ウェルから100μl回収し、一定分量をプールし(各プレートの全ウェルからの30μlの上清)、抗原反応性についての特異的ELISAによりスクリーニングした。培養上清を、CD40L、BAFF、および抗ヒトIgM(Fab')2を含む100μlの新鮮RPMI培地と交換した。抗原反応性がプールされたウェル中で検出された場合、プールに寄与する個々のウェルの各々を5つの新しいウェルに分割し、培養物の生存を保存し、陽性ウェルの同一性を追加のELISA実験により確認した。ひとたび特定抗原に反応性のIgGを含む個々のウェルが、迅速スクリーニング戦略を使用して、扁桃腺レパートリーにおいて同定されていれば、そのウェルからの細胞をカウントし、その50〜80%を96ウェルプレート中にサブクローンニングし(約500〜1000個細胞/ウェル、カウントに依存する)、残りを凍結した。7〜10日後、上清を上に概説したとおりに回収し、迅速スクリーニング分析を繰り返した。これに、2つの追加ラウンドの限界希釈サブクローンニングおよびスクリーニングが続いた。クローン性は、最低希釈時に、クローンが96ウェルプレートのウェルの30%未満で得られ、プレートのすべてのクローンが特定抗原に反応性のIgGを産生した場合に想定した。
テスト抗原のアッセイプレートへの結合
前日に、1X結合バッファー(20mM Tris-Cl pH 8.5)にSEB抗原(BT202redおよびビオチン化BT202 B、Toxin Technologies, Inc.)を5μg/mL加える。使用するバッファーの量は、50μLバッファー/ウェルで5mL/96ウェルプレートである。注:SEB/SEC2ボックスにおいて鍵の掛った80℃フリーザー中に保存されたSEB抗原。各々の一定分量0.5μg/μL SEBを個々に標識する。増加順に一定分量を使用する。一定分量の解凍および使用時、IBCノート中にSEB毒素ログと共に使用を記録する。マルチチャネルピペッターを使用し、50μL/ウェルの抗原結合バッファーミックスを非無菌平底96ウェルプレート(CoStar EIA/RIAプレート、フタ無し96ウェルEasy Wash, prod #3369を使用する)のテストウェルに加える。対照バックグラウンドウェルについて、50μLの1X結合バッファー(抗原なし)を加える。プレートを付着性プレートフィルムで覆い、4℃で一晩置く。
20℃のフリーザーからアッセイのために必要な任意の上清サンプルを取り出し、室温で放置して解凍する。プレート洗浄機(Wellwash 4 Mk2)を以下のとおりに準備する:コントロールカードを機械の右側に挿入し、機械をオンにする。カードのパラメーターが以下のとおりに設定されていることを確かめること:Dials: SoakX0.5min=0、Pause=0、Washes=3、VolumeX50μL=4; Toggles: single、12way、plate、stepoff、wash HI、dry、F1 off、F2 off、F dry。廃棄物が存在する場合、廃棄物容器を空にする。dH2O容器を1X TBST容器と交換する。開始前に少なくとも500mL/プレートのTBSTが容器中にあることを確認すること。<PRIME>ボタンを押して、システムからdH2Oを流す。「Wash Plate」を置き、<4>列ボタン次に<START>ボタンを押すことによりシステムを洗浄する。プレート洗浄機はプレートの最初の半分を3回洗浄し、次にプレートを吸引して乾燥させておくべきである。
付着性プレートフィルムを洗浄すべきプレートから取り外し、洗浄機に置く。プレートを3回洗浄する(<8>次に<START>を押す)。洗浄後、残りのTBSTをプレートから素早く振って乾かす(以降、各洗浄後にこれをする)。マルチチャネルピペッターを使用して100μlのブロッキング溶液を各ウェル中にピペットで加える。プレートを付着性プレートフィルムで覆い、室温で1時間放置する。
96ウェルプレートからの上清のサンプルを使用する場合、解凍したサンプルプレートを2K rpm/2分/室温での遠心分離において短時間スピンする。任意の上清サンプルを必要に応じて希釈する。希釈するためにブロッキング溶液を使用し、100μLの希釈サンプルを1ウェル当たりに加えることができる。バックグラウンド対照での2通りのアッセイのために、少なくとも400μLの希釈サンプルが必要になりうる。ブロッキングしたプレートを3回洗浄する。サンプルを、プレート図表に従い、100μLのサンプル/ウェルを使用してピペットで加える。必要に応じて、(+)および(-)対照をプレートに加える(例、SEBアッセイのためのブロッキングバッファー中のマウスα-SEBモノクローナル抗体の1:5000希釈)。ブランクウェルには100μLのブロッキング溶液が加えられている。プレートを付着性プレートフィルムで覆い、450rpmで1時間に設定したプレートシェーカーに置く。複数のプレートを振盪するために、パラフィルムの細片を、添加前に、プレートスタックの周りに巻く。
二次抗体の希釈物を作製する。ブロッキング溶液および適切な希釈率の適切な抗体を使用する。1ウェル当たり100μLが必要であり、そのため1プレート当たり10mLが必要になりうる。[α-ヒトIgG 2°Abについて、ヤギα-ヒトIgG抗体を1:10,000希釈で使用する(1μL 2°Ab/10mLブロッキング溶液)。陽性対照マウスα-SEBモノクローナル抗体について、ヤギ抗マウスIgG-AP 2°Abの1:10,000希釈を使用する]。サンプル結合後、シェーカーを取り外し、付着性フィルムを取り外す。コントロールカードの洗浄ダイアルを3から4に変更し、プレートを4回洗浄する。100μLの二次抗体を各ウェル中にピペットで加える。プレートを新しい付着性フィルムで密封し、450rpmのプレートシェーカー上に1時間置く。
2°Ab結合が完了する5分前に、反応物を調製する。1枚のプレートについて、2mLの5x基質バッファーを8mLのdiH2Oおよび2つの反応錠剤と15mL培養チューブ中で混合する。錠剤が完全に溶解するまで反転により混合する。プレートをミキサーから取り外し、付着性フィルムを取り外す。毒素を封じ込めるため、すべての手順をドラフト中で実施すべきである。バイオハザード廃棄物容器中の処分すべきすべての廃棄物および消耗品をオートクレーブする。液体廃棄物は処分前に10%漂白剤で処理する。アッセイ中には適切な防御装備(手袋および安全ゴーグル)を使用する。使用前にSEB特定IBC規制を参照すること。完了までの時間:プレートコーティング(アッセイの前日):30分間、ELISAアッセイ:4〜8時間+現像時間(30分間〜24時間)。
テスト抗原のアッセイプレートへの結合
前日に、1X結合バッファー(20mM Tris-Cl pH 8.5)にSEC-2抗原を5μg/mL加える。使用するバッファーの量は、50μLバッファー/ウェルで5mL/96ウェルプレートである。注:SEB/SEC2ボックスにおいて鍵の掛った80℃フリーザー中に保存されたSEC-2抗原。各々の一定分量0.5μg/μL SEC-2を個々に標識する。増加順に一定分量を使用する。一定分量の解凍および使用時、IBCノート中にSEC-2毒素ログと共に使用を記録する。マルチチャネルピペッターを使用し、50μL/ウェルの抗原結合バッファーミックスを非無菌平底96ウェルプレート(CoStar EIA/RIAプレート、フタ無し96ウェルEasy Wash, prod #3369を使用する)のテストウェルに加える。対照バックグラウンドウェルについて、50μLの1X結合バッファー(抗原なし)を加える。プレートを付着性プレートフィルムで覆い、4℃で一晩置く。
20℃のフリーザーからアッセイのために必要な任意の上清サンプルを取り出し、室温で放置して解凍する。プレート洗浄機(Wellwash 4 Mk2)を以下のとおりに準備する:コントロールカードを機械の右側に挿入し、機械をオンにする。カードのパラメーターが以下のとおりに設定されていることを確かめること:Dials: SoakX0.5min=0、Pause=0、Washes=3、VolumeX50μL=4; Toggles: single、12way、plate、stepoff、wash HI、dry、F1 off、F2 off、F dry。廃棄物が存在する場合、廃棄物容器を空にする。dH2O容器を1X TBST容器と交換する。開始前に少なくとも500mL/プレートのTBSTが容器中にあることを確認すること。<PRIME>ボタンを押して、システムからdH2Oを流す。「Wash Plate」を置き、<4>列ボタン次に<START>ボタンを押すことによりシステムを洗浄する。プレート洗浄機はプレートの最初の半分を3回洗浄し、次にプレートを吸引して乾燥させておくべきである。
付着性プレートフィルムを洗浄すべきプレートから取り外し、洗浄機に置く。プレートを3回洗浄する(<8>次に<START>を押す)。洗浄後、残りのTBSTをプレートから素早く振って乾かす(以降、各洗浄後にこれをする)。マルチチャネルピペッターを使用して100μlのブロッキング溶液を各ウェル中にピペットで加える。プレートを付着性プレートフィルムで覆い、室温で1時間放置する。
96ウェルプレートからの上清のサンプルを使用する場合、解凍したサンプルプレートを2K rpm/2分/室温での遠心分離において短時間スピンする。任意の上清サンプルを必要に応じて希釈する。希釈するためにブロッキング溶液を使用し、100μLの希釈サンプルを1ウェル当たりに加えることができる。バックグラウンド対照での2通りのアッセイのために、少なくとも400μLの希釈サンプルが必要になりうる。ブロッキングしたプレートを3回洗浄する。サンプルを、プレート図表に従い、100μLのサンプル/ウェルを使用してピペットで加える。必要に応じて、(+)および(-)対照をプレートに加える(例、SEC-2アッセイのためのブロッキングバッファー中のマウスα-SEC-2モノクローナル抗体の1:5000希釈)。ブランクウェルには100μLのブロッキング溶液が加えられている。プレートを付着性プレートフィルムで覆い、450rpmで1時間に設定したプレートシェーカーに置く。複数のプレートを振盪するために、パラフィルムの細片を、添加前に、プレートスタックの周りに巻く。
二次抗体の希釈物を作製する。ブロッキング溶液および適切な希釈率の適切な抗体を使用する。100μLが1ウェル当たりに必要であり、そのため10mLが1プレート当たりに必要になりうる。[α-ヒトIgG 2°Abについて、ヤギα-ヒトIgG抗体を1:10,000希釈で使用する(1μL 2°Ab/10mLブロッキング溶液)。陽性対照マウスα-SEC-2モノクローナル抗体について、ヤギα-マウスIgG-AP 2°Abの1:10000希釈を使用する]。サンプル結合後、シェーカーを取り外し、付着性フィルムを取り外す。コントロールカードの洗浄ダイアルを3から4に変更し、プレートを4回洗浄する。100μLの二次抗体を各ウェル中にピペットで加える。プレートを新しい付着性フィルムで密封し、450rpmのプレートシェーカー上に1時間置く。
2°Ab結合が完了する5分前、反応物を調製する。1枚のプレートについて、2mLの5x基質バッファーを8mLのdiH2Oおよび2つの反応錠剤と15mL培養チューブ中で混合する。錠剤が完全に溶解するまで反転により混合する。プレートをミキサーから取り外し、付着性フィルムを取り外す。コントロールカードの洗浄ダイアルを4から6に変更し、プレートを6回洗浄する。100μLの調製反応物をプレートの各ウェルに加える。新しい付着性フィルムをプレートに置き、プレートリーダー下のデスクの引き出しにプレートを置く。引き出しにプレートを放置し、無色から黄色への色の変化をモニターする。現像のための時間は、極めて強い反応での30分間から非常に弱い反応での6時間まででありうる。色が一部のウェルで顕著である場合、および、溶液が飽和する前に、プレートを読むことが理想的である。
プレートが定量できる状態になった際、プレートリーダーがオンになっており、MSS2.2ソフトウェアのためのScanIt REがオープンになっていることを確かめること。適切なプレートリーディングプログラムを開き、適宜、実行を設定する。カバーフィルムを取り付けるべきプレートから取り外す。プレートを機械に取り付け、スキャンする。スキャンの結果を観察し(Photometric and Statistics)、追加のスキャンが必要か否かを決定する。スキャニングが完了したら、プレートを取り外し、カバーフィルムを交換し、引き出しに一晩置く。すべてのスキャンが完了した後、プレートリーダーをオフにする。
抗原:Staph Entertoxin C-2 Toxin Technologies, Inc. (CT222red)
陽性対照抗体:抗SEC g1マウスMab:Toxin Technologies, Inc.(MC165)
結合バッファー(1X)20mM Tris-Cl、pH 8.5
TBSTバッファー(1X)50mM Tris、0.9% NaCl(w:v)、0.1% Tween-20(v:v)、HClでpH 7.5にする。5X TBSストックからdiH2Oを使用して希釈し、Tween-20を加え、撹拌子を使用して数分間混合する。それをガラスボトルまたはTBST Wellwash容器中で混合できる。撹拌子を容器中に残す。
ブロッキング溶液(1X)Pierce SuperBlockドライブレンド、TBSブロッキングバッファー(prod #0037545)。1パケットのバッファー粉末を200mLのdiH2Oに加える。溶解するまで混合する。4℃で保存する。毒素を封じ込めるため、すべての手順は、ドラフト中で実施すべきである。バイオハザード廃棄物容器中の処分すべきすべての廃棄物および消耗品をオートクレーブする。液体廃棄物は処分前に10%漂白剤で処理する。アッセイ中には適切な防御装備(手袋および安全ゴーグル)を使用する。使用前にSEC特定IBC規制を参照すること。
完了までの時間:プレートコーティング(アッセイの前日):30分間、ELISAアッセイ:4〜8時間+現像時間(30分間〜24時間)
テスト抗原のアッセイプレートへの結合
前日に、1X結合バッファー(1x DPBS、Gibco 14190)にPLGF抗原を2μg/mL加える。使用するバッファーの量は、50μLバッファー/ウェルで5mL/96ウェルプレートである。マルチチャネルピペッターを使用し、50μL/ウェルの抗原結合バッファーミックスを非無菌平底96ウェルプレート(CoStar EIA/RIAプレート、フタ無し96ウェルEasy Wash, prod #3369を使用する)のテストウェルに加える。対照バックグラウンドウェルについて、50μLの1X結合バッファー(抗原なし)を加える。プレートを付着性プレートフィルムで覆い、4℃で一晩置く。
20℃のフリーザーからアッセイのために必要な任意の上清サンプルを取り出し、室温で放置して解凍する。プレート洗浄機(Wellwash 4 Mk2)を以下のとおりに準備する:コントロールカードを機械の右側に挿入し、機械をオンにする。カードのパラメーターが以下のとおりに設定されていることを確かめること:Dials: SoakX0.5min=0、Pause=O、Washes=3、VolumeX50μL=4; Toggles: single、12way、plate、stepoff、wash HI、dry、F1 off、F2 off、F dry。廃棄物が存在する場合、廃棄物容器を空にする。dH2O容器を1X TBST容器と交換する。開始前に少なくとも500mL/プレートのTBSTが容器中にあることを確認すること。<PRIME>ボタンを押して、システムからdH2Oを流す。「Wash Plate」を置き、<4>列ボタン次に<START>ボタンを押すことによりシステムを洗浄する。プレート洗浄機はプレートの最初の半分を3回洗浄し、次にプレートを吸引して乾燥させておくべきである。
付着性プレートフィルムを洗浄すべきプレートから取り外し、洗浄機に置く。プレートを3回洗浄する(<8>次に<START>を押す)。洗浄後、残りのTBSTをプレートから素早く振って乾かす(以降、各洗浄後にこれをする)。マルチチャネルピペッターを使用して100μlのブロッキング溶液を各ウェル中にピペットで加える。プレートを付着性プレートフィルムで覆い、室温で1時間放置する。
96ウェルプレートからの上清のサンプルを使用する場合、解凍したサンプルプレートを2K rpm/2分/室温での遠心分離において短時間スピンする。任意の上清サンプルを必要に応じて希釈する。希釈するためにブロッキング溶液を使用し、100μLの希釈サンプルを1ウェル当たりに加えることができる。バックグラウンド対照での2通りのアッセイのために、少なくとも400μLの希釈サンプルが必要になりうる。ブロッキングしたプレートを3回洗浄する。サンプルを、プレート図表に従い、100μLのサンプル/ウェルを使用してピペットで加える。必要に応じて、(+)および(-)対照をプレートに加える(例、PLGFアッセイのためのブロッキングバッファー中のマウスα-ヒトPLGFモノクローナル抗体の1:2000希釈)。ブランクウェルには100μLのブロッキング溶液が加えられている。プレートを付着性プレートフィルムで覆い、450rpmで1時間に設定したプレートシェーカーに置く。複数のプレートを振盪するために、パラフィルムの細片を、添加前に、プレートスタックの周りに巻く。
二次抗体の希釈物を作製する。ブロッキング溶液および適切な希釈率の適切な抗体を使用する。100μLが1ウェル当たりに必要であり、そのため10mLが1プレート当たりに必要になりうる。α-ヒトIgG 2°Abについて、ヤギα-ヒトIgG抗体を1:10,000希釈で使用する(1μL 2°Ab/10mLブロッキング溶液)。陽性対照マウスα-ヒトPLGFモノクローナル抗体について、ヤギα-マウスIgG-AP 2°Abの1:10000希釈を使用する]サンプル結合後、シェーカーを取り外し、付着性フィルムを取り外す。コントロールカードの洗浄ダイアルを3から4に変更し、プレートを4回洗浄する。100μLの二次抗体を各ウェル中にピペットで加える。プレートを新しい付着性フィルムで密封し、450rpmのプレートシェーカー上に1時間置く。
2°Ab結合が完了する5分前、反応物を調製する。1枚のプレートについて、2mLの5x基質バッファーを8mLのdiH2Oおよび2つの反応錠剤と15mL培養チューブ中で混合する。錠剤が完全に溶解するまで反転により混合する。プレートをミキサーから取り外し、付着性フィルムを取り外す。コントロールカードの洗浄ダイアルを4から6に変更し、プレートを6回洗浄する。100μLの調製反応物をプレートの各ウェルに加える。新しい付着性フィルムをプレートに置き、プレートリーダー下のデスクの引き出しにプレートを置く。引き出しにプレートを放置し、無色から黄色への色の変化をモニターする。現像のための時間は、極めて強い反応での30分間から非常に弱い反応での6時間まででありうる。色が一部のウェルで顕著である場合、および、溶液が飽和する前に、プレートを読むことが理想的である。
プレートが定量できる状態になった際、プレートリーダーがオンになっており、MSS2.2ソフトウェアのためのScanIt REがオープンになっていることを確かめること。適切なプレートリーディングプログラムを開き、適宜、実行を設定する。カバーフィルムを取り付けるプレートから取り外す。プレートを機械に取り付け、スキャンする。スキャンの結果を観察し(Photometric and Statistics)、追加のスキャンが必要か否かを決定する。スキャニングが完了したら、プレートを取り外し、カバーフィルムを交換し、引き出しに一晩置く。すべてのスキャンが完了した後、プレートリーダーをオフにする。
抗原:組換えヒトPLGF PeproTech (100-06)
陽性対照抗体:マウス抗ヒトPLGF Mab:R&D Systems (MAB264)
結合バッファー(1X)1x ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水、Gibco (14190)
TBSTバッファー(1X)50mM Tris、0.9% NaCl(w:v)、0.1% Tween-20(v:v)、HClでpH 7.5にする。5X TBSストックからdiH2Oを使用して希釈し、Tween-20を加え、撹拌子を使用して数分間混合する。それをガラスボトルまたはTBST Wellwash容器中で混合できる。撹拌子を容器中に残す。
ブロッキング溶液(1X)Pierce SuperBlockドライブレンド、TBSブロッキングバッファー(prod #0037545)。1パケットのバッファー粉末を200mLのdiH2Oに加える。溶解するまで混合する。4℃で保存する。長期保存(>1週間)のために、100mgアジ化ナトリウム/200mLを加える。
基質(1X)Pierceホスファターゼ基質キット(prod #37620)。1枚のプレートについて、10mLを以下のとおりに15mL培養チューブ中に作製する:2mLの5X DEA基質バッファー、8mLのdiH2O、2つのPNPP錠剤。錠剤が完全に溶解するまで反転により混合する。
完了までの時間:プレートコーティング(アッセイの前日):30分間、ELISAアッセイ:4〜8時間+現像時間(30分間〜24時間)
テスト抗原のアッセイプレートへの結合
前日に、1X結合バッファー(1x DPBS、Gibco 14190)にリシンB鎖抗原を5μg/mL加える。使用するバッファーの量は、50μLバッファー/ウェルで5mL/96ウェルプレートである。マルチチャネルピペッターを使用し、50μL/ウェルの抗原結合バッファーミックスを非無菌平底96ウェルプレート(CoStar EIA/RIAプレート、フタ無し96ウェルEasy Wash, prod #3369を使用する)のテストウェルに加える。対照バックグラウンドウェルについて、50μLの1X結合バッファー(抗原なし)を加える。プレートを付着性プレートフィルムで覆い、4℃で一晩置く。
20℃のフリーザーからアッセイのために必要な任意の上清サンプルを取り出し、室温で放置して解凍する。プレート洗浄機(Wellwash 4 Mk2)を以下のとおりに準備する:コントロールカードを機械の右側に挿入し、機械をオンにする。カードのパラメーターが以下のとおりに設定されていることを確かめること:Dials: SoakX0.5min=0、Pause=0、Washes=3、VolumeX50μL=4; Toggles: single、12way、plate、stepoff、wash HI、dry、F1 off、F2 off、F dry。廃棄物が存在する場合、廃棄物容器を空にする。dH2O容器を1X TBST容器と交換する。開始前に少なくとも500mL/プレートのTBSTが容器中にあることを確認すること。<PRIME>ボタンを押して、システムからdH2Oを流す。「Wash Plate」を置き、<4>列ボタン次に<START>ボタンを押すことによりシステムを洗浄する。プレート洗浄機はプレートの最初の半分を3回洗浄し、次にプレートを吸引して乾燥させておくべきである。
付着性プレートフィルムを洗浄すべきプレートから取り外し、洗浄機に置く。プレートを3回洗浄する(<8>次に<START>を押す)。洗浄後、残りのTBSTをプレートから素早く振って乾かす(以降、各洗浄後にこれをする)。マルチチャネルピペッターを使用して100μlのブロッキング溶液を各ウェル中にピペットで加える。プレートを付着性プレートフィルムで覆い、室温で1時間放置する。
96ウェルプレートからの上清のサンプルを使用する場合、解凍したサンプルプレートを2K rpm/2分/室温での遠心分離において短時間スピンする。任意の上清サンプルを必要に応じて希釈する。希釈するためにブロッキング溶液を使用し、100μLの希釈サンプルを1ウェル当たりに加えることができる。バックグラウンド対照での2通りのアッセイのために、少なくとも400μLの希釈サンプルが必要になりうる。ブロッキングしたプレートを3回洗浄する。サンプルを、プレート図表に従い、100μLのサンプル/ウェルを使用してピペットで加える。必要に応じて、(+)および(-)対照をプレートに加える(例、リシンアッセイのためのブロッキングバッファー中のマウスα-リシンBモノクローナル抗体の1:5000希釈)。ブランクウェルには100μLのブロッキング溶液が加えられている。プレートを付着性プレートフィルムで覆い、450rpmで1時間に設定したプレートシェーカーに置く。複数のプレートを振盪するために、パラフィルムの細片を、添加前に、プレートスタックの周りに巻く。
二次抗体の希釈物を作製する。ブロッキング溶液および適切な希釈率の適切な抗体を使用する。1ウェル当たり100μLが必要であり、そのため1プレート当たり10mLが必要になりうる。[α-ヒトIgG 2°Abについて、ヤギα-ヒトIgG抗体を1:10,000希釈で使用する(1μL 2°Ab/10mLブロッキング溶液)。陽性対照マウスα-リシンBモノクローナル抗体について、ヤギα-マウスIgG-AP 2°Abの1:10000希釈を使用する]サンプル結合後、シェーカーを取り外し、付着性フィルムを取り外す。コントロールカードの洗浄ダイアルを3から4に変更し、プレートを4回洗浄する。100μLの二次抗体を各ウェル中にピペットで加える。プレートを新しい付着性フィルムで密封し、450rpmのプレートシェーカー上に1時間置く。
2°Ab結合が完了する5分前、反応物を調製する。1枚のプレートについて、2mLの5x基質バッファーを8mLのdiH2Oおよび2つの反応錠剤と15mL培養チューブ中で混合する。錠剤が完全に溶解するまで反転により混合する。プレートをミキサーから取り外し、付着性フィルムを取り外す。コントロールカードの洗浄ダイアルを4から6に変更し、プレートを6回洗浄する。100μLの調製反応物をプレートの各ウェルに加える。新しい付着性フィルムをプレートに置き、プレートリーダー下のデスクの引き出しにプレートを置く。引き出しにプレートを放置し、無色から黄色への色の変化をモニターする。現像のための時間は、極めて強い反応での30分間から非常に弱い反応での6時間まででありうる。色が一部のウェルで顕著である場合、および、溶液が飽和する前に、プレートを読むことが理想的である。
プレートが定量できる状態になった際、プレートリーダーがオンになっており、MSS2.2ソフトウェアのためのScanIt REがオープンになっていることを確かめること。適切なプレートリーディングプログラムを開き、適宜、実行を設定する。カバーフィルムを取り付けるプレートから取り外す。プレートを機械に取り付け、スキャンする。スキャンの結果を観察し(Photometric and Statistics)、追加のスキャンが必要か否かを決定する。スキャニングが完了したら、プレートを取り外し、カバーフィルムを交換し、引き出しに一晩置く。すべてのスキャンが完了した後、プレートリーダーをオフにする。
抗原:リシンB鎖Vector Laboratories (L-1290)
陽性対照抗体:マウス抗リシンB Mab:Santa Cruz Biotechnologies (sc-52197)
結合バッファー(1X)1xダルベッコリン酸緩衝生理食塩水、Gibco (14190)
TBSTバッファー(1X)50mM Tris、0.9% NaCl(w:v)、0.1% Tween-20(v:v)、HClでpH7.5にする。5X TBSストックからdiH2Oを使用して希釈し、Tween-20を加え、撹拌子を使用して数分間混合する。それをガラスボトルまたはTBST Wellwash容器中で混合できる。撹拌子を容器中に残す。
ブロッキング溶液(1X)Pierce SuperBlockドライブレンド、TBSブロッキングバッファー(prod #0037545)。1パケットのバッファー粉末を200mLのdiH2Oに加える。溶解するまで混合する。4℃で保存する。長期保存(>1週間)のために、100mgアジ化ナトリウム/200mLを加える。
基質(1X)Pierceホスファターゼ基質キット(prod #37620)。1枚のプレートについて、10mLを以下のとおりに15mL培養チューブ中に作製する:2mLの5X DEA基質バッファー、8mLのdiH2O、2つのPNPP錠剤。錠剤が完全に溶解するまで反転により混合する。
完了までの時間:プレートコーティング(アッセイの前日):30分間、ELISAアッセイ:4〜8時間+現像時間(30分間〜24時間)
テスト抗原のアッセイプレートへの結合
前日に、1X結合バッファー(1x DPBS、Gibco 14190)にIL-6抗原を5μg/mL加える。使用するバッファーの量は、50μLバッファー/ウェルで5mL/96ウェルプレートである。マルチチャネルピペッターを使用し、50μL/ウェルの抗原結合バッファーミックスを非無菌平底96ウェルプレート(CoStar EIA/RIAプレート、フタ無し96ウェルEasy Wash, prod #3369を使用する)のテストウェルに加える。対照バックグラウンドウェルについて、50μLの1X結合バッファー(抗原なし)を加える。プレートを付着性プレートフィルムで覆い、4℃で一晩置く。
20℃のフリーザーからアッセイのために必要な任意の上清サンプルを取り出し、室温で放置して解凍する。プレート洗浄機(Wellwash 4 Mk2)を以下のとおりに準備する:コントロールカードを機械の右側に挿入し、機械をオンにする。カードのパラメーターが以下のとおりに設定されていることを確かめること:Dials: SoakX0.5min=0、Pause=0、Washes=3、VolumeX50μL=4; Toggles: single、12way、plate、stepoff、wash HI、dry、F1 off、F2 off、F dry。廃棄物が存在する場合、廃棄物容器を空にする。dH2O容器を1X TBST容器と交換する。開始前に少なくとも500mL/プレートのTBSTが容器中にあることを確認すること。<PRIME>ボタンを押して、システムからdH2Oを流す。「Wash Plate」を置き、<4>列ボタン次に<START>ボタンを押すことによりシステムを洗浄する。プレート洗浄機はプレートの最初の半分を3回洗浄し、次にプレートを吸引して乾燥させておくべきである。
付着性プレートフィルムを洗浄すべきプレートから取り外し、洗浄機に置く。プレートを3回洗浄する(<8>次に<START>を押す)。洗浄後、残りのTBSTをプレートから素早く振って乾かす(以降、各洗浄後にこれをする)。マルチチャネルピペッターを使用して100μlのブロッキング溶液を各ウェル中にピペットで加える。プレートを付着性プレートフィルムで覆い、室温で1時間放置する。
96ウェルプレートからの上清のサンプルを使用する場合、解凍したサンプルプレートを2K rpm/2分/室温での遠心分離において短時間スピンする。任意の上清サンプルを必要に応じて希釈する。希釈するためにブロッキング溶液を使用し、100μLの希釈サンプルを1ウェル当たりに加えることができる。バックグラウンド対照での2通りのアッセイのために、少なくとも400μLの希釈サンプルが必要になりうる。ブロッキングしたプレートを3回洗浄する。サンプルを、プレート図表に従い、100μLのサンプル/ウェルを使用してピペットで加える。必要に応じて、(+)および(-)対照をプレートに加える(例、IL-6アッセイのためのブロッキングバッファー中のマウスα-ヒトIL-6モノクローナル抗体の1:5000希釈)。ブランクウェルには100μLのブロッキング溶液が加えられている。プレートを付着性プレートフィルムで覆い、450rpmで1時間に設定したプレートシェーカーに置く。複数のプレートを振盪するために、パラフィルムの細片を、添加前に、プレートスタックの周りに巻く。
二次抗体の希釈物を作製する。ブロッキング溶液および適切な希釈率の適切な抗体を使用する。100μLが1ウェル当たりに必要であり、そのため10mLが1プレート当たりに必要になりうる。[α-ヒトIgG 2°Abについて、ヤギα-ヒトIgG抗体を1:10,000希釈で使用する(1μL 2°Ab/10mLブロッキング溶液)。陽性対照マウスα-ヒトIL-6モノクローナル抗体について、ヤギα-マウスIgG-AP 2°Abの1:10000希釈を使用する]サンプル結合後、シェーカーを取り外し、付着性フィルムを取り外す。コントロールカードの洗浄ダイアルを3から4に変更し、プレートを4回洗浄する。100μLの二次抗体を各ウェル中にピペットで加える。プレートを新しい付着性フィルムで密封し、450rpmのプレートシェーカー上に1時間置く。
2°Ab結合が完了する5分前、反応物を調製する。1枚のプレートについて、2mLの5x基質バッファーを8mLのdiH2Oおよび2つの反応錠剤と15mL培養チューブ中で混合する。錠剤が完全に溶解するまで反転により混合する。プレートをミキサーから取り外し、付着性フィルムを取り外す。コントロールカードの洗浄ダイアルを4から6に変更し、プレートを6回洗浄する。100μLの調製反応物をプレートの各ウェルに加える。新しい付着性フィルムをプレートに置き、プレートリーダー下のデスクの引き出しにプレートを置く。引き出しにプレートを放置し、無色から黄色への色の変化をモニターする。現像のための時間は、極めて強い反応での30分間から非常に弱い反応での6時間まででありうる。色が一部のウェルで顕著である場合、および、溶液が飽和する前に、プレートを読むことが理想的である。
プレートが定量できる状態になった際、プレートリーダーがオンになっており、MSS2.2ソフトウェアのためのScanIt REがオープンになっていることを確かめること。適切なプレートリーディングプログラムを開き、適宜、実行を設定する。カバーフィルムを取り付けるプレートから取り外す。プレートを機械に取り付け、スキャンする。スキャンの結果を観察し(Photometric and Statistics)、追加のスキャンが必要か否かを決定する。スキャニングが完了したら、プレートを取り外し、カバーフィルムを交換し、引き出しに一晩置く。すべてのスキャンが完了した後、プレートリーダーをオフにする。
抗原:組換えヒトIL-6 GenScript (Z00372-1mg)
陽性対照抗体:マウス抗ヒトIL-6 Mab:PeproTech (500-M06)
結合バッファー(1X)1x ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水、Gibco(14190)
TBSTバッファー(1X)50mM Tris、0.9% NaCl(w:v)、0.1% Tween-20(v:v)、HClでpH 7.5にする。5X TBSストックからdiH2Oを使用して希釈し、Tween-20を加え、撹拌子を使用して数分間混合する。それをガラスボトルまたはTBST Wellwash容器中で混合できる。撹拌子を容器中に残す。
ブロッキング溶液(1X)Pierce SuperBlockドライブレンド、TBSブロッキングバッファー(prod #0037545)。1パケットのバッファー粉末を200mLのdiH2Oに加える。溶解するまで混合する。4℃で保存する。長期保存(>1週間)のために、100mgアジ化ナトリウム/200mLを加える。
基質(1X)Pierceホスファターゼ基質キット(prod #37620)。1枚のプレートについて、10mLを以下のとおりに15mL培養チューブ中に作製する:2mLの5X DEA基質バッファー、8mLのdiH2O、2つのPNPP錠剤。錠剤が完全に溶解するまで反転により混合する。
完了までの時間:プレートコーティング(アッセイの前日):30分間、ELISAアッセイ:4〜8時間+現像時間(30分間〜24時間)
特定抗原と反応性のヒトIgGを検出するELISAの開発
SEB、SEC2、PLGF、リシンBサブユニット、またはIL6と反応性の抗体についての不死化扁桃腺レパートリーをスクリーニングするために、本発明者らは酵素結合免疫吸着検定法(ELISA)を開発した。各ELISAについて、特定抗原を最初にプレートに結合させ、そして次にヒトIgGを含む不死化レパートリーからの細胞上清をウェルに適用した。非特異的IgGを洗い流し、抗原特異的IgGを抗原コーティングしたウェルに結合させた。結合したIgGを、次に、標識抗ヒトIgGで、発色基質(OD405nmでの吸光度が増加する)の存在下で検出し、分光光度法により検出した。各ELISAで次が必要となった:1)プレートに結合した抗原の量の最適化;2)検出抗体の最適化;3)バッファーの最適化;4)陽性対照として使用したマウスモノクローナル抗体結合との比較。例として、工程3および4、バッファーの最適化およびマウスモノクローナル抗体結合との比較(PLGF ELISAのために使用)を図36に示す。類似の結果が各ELISAについて得られた。各々のための最適化条件を、材料および方法のセクションにおいて詳細に記載した。
11の扁桃腺レパートリーを作製し、異なる抗原との反応性についてスクリーニングした:TNSL-R、-S、-T、-V、-W、-X、-Y、-Z、-α、-β、-γ。各レパートリーが、10枚の96ウェル丸底プレート中に蒔かれた7〜21×107個のEBV不死化細胞を含み、可溶性CD40リガンド(5ng/ml)、BAFF(10ng/ml)、およびヤギ抗ヒトIgM F(ab')2(1.62ng/ml)で分化誘導された(「材料および方法」に記載)。各レパートリーの特徴のまとめを表7および9に見出すことができる。また、以前に作製され、次に、液体窒素中で凍結保存されていた3つの不死化扁桃腺レパートリーを、解凍し、2枚の24ウェルプレート中で培養した:TNSL-G、-H、-I(表7および9)。
11の扁桃腺レパートリー、および3つの解凍されたレパートリーを、SEB(表1)およびSEC2(表7)への結合についてスクリーニングした。10の新しいレパートリー(TNSL-R、-S、-V、-W、-X、-Y、-Z、-α、-β、-γ)、および3つの解凍されたレパートリーを、PLGF結合についてスクリーニングした(表11)。9の新しいレパートリー(TNSL-R、-S、-V、-W、-X、-Z、-α、-β、-γ)、および3つの解凍されたレパートリーを、リシンBサブユニット結合についてスクリーニングした(表13)。4の新しいレパートリー(TNSL-R、-S、-β、-γ)を、IL6結合についてスクリーニングした(表15)。より少ないレパートリーをIL6についてスクリーニングした。その理由は、そのELISAを最適化するためにより長い時間が必要であったからである。
すべての11の新しい扁桃腺レパートリーについての培養上清を、SEB反応性について、不死化に続く10dと18dの間にスクリーニングした(表7にまとめる)。反応性IgGを伴うウェルを検出するために使用する迅速スクリーニング戦略の例を図37に示す。合計960ウェルを含む10枚の96ウェルプレートからの扁桃腺レパートリーTNSL-X(TX)上清を、10枚のプレートの各々の対応するウェル、例えばウェルA1プールからプールされた上清(図37A)、および各プレートのウェルのすべてからのプールされた上清(プレートプール、図37B)を含む2つのELISAでスクリーニングした。図37Aは、10枚のプレートの1つのウェルA8およびH3中の細胞がSEBに反応性であることを示した。図37Bは、TXプレート2および4がSEB反応性である細胞を含むことを示した。図37Cのこれらのデータを組み合わせると、本発明者らは、TXプレート4および8のウェルA8およびH3をテストした。結果は、プレート8のウェルA8(TX-8A8)、およびプレート4のウェルH3(TX-4H3)が活性を含むことを示した。これらのウェルは、このように一次サブクローンニング分析のために選んだ。表8に見られるように、TX-8A8およびTX-4H3を、最初に3枚の各96ウェルプレート中に6/04/08にサブクローンニングした(1,000個細胞/ウェルを含む)。
表9および図42に見られるように、SEC2反応性細胞を3つの扁桃腺レパートリー(TNSL-R、-S、および-V)において検出した。反応性細胞を含むウェル(TR-10A4、TR-10E12、TS-6C5、およびTV-bB2)をサブクローンニングし、反応性をTV-bB2プレートの3枚のうちの1枚からの細胞において検出した(図43A)が、TR-10A4、TR-10E12、TS-6C5プレートからでは失われていた(図42B)。最高の反応性を伴う2つのTV6F7ウェル(TVbB2 2E1、2F2、図43B)を、6/23/08の二次ラウンドのサブクローンニングのために選び、ここで50個細胞/ウェルを含む2枚のプレートを作製した(表10)。
表11ならびに図44および図46に見られるように、PLGF反応性細胞を2つの扁桃腺レパートリー(TNSL-W、および-Z)において検出した。反応性細胞を含むウェル(TW-1E12、図44;TZ-3B10およびTZ-5F9、図46)をサブクローンニングした。5つのサブクローンニングしたTW-1E12プレートのうち2つがPLGF反応性であった(図45A)。これらのプレートの個々のウェルをスクリーニングし、最高の反応性を伴う3つのウェル(TW 2E3、2G9、5A10)を、6/23/08の二次ラウンドのサブクローンニングのために選び、ここで50個細胞/ウェルを含む2枚のプレートを作製した(表12)。細胞を現在十分なレベルにまで増殖させ、個々のウェル中でPLGF反応性IgGについてテストしている。
表13ならびに図47Cに見られるように、リシンBサブユニット反応性細胞を扁桃腺レパートリーTNSL-Zの2つのウェル(TZ-7B8およびTZ-6F10)において検出した。反応性細胞を含むウェルを6/21/08にサブクローンニングし、96ウェルプレート5枚の各々が50個細胞/ウェルを含んだ(表14)。これらのプレートの個々のウェルを7/14/08にスクリーニングし、最高の反応性を伴うウェル(TZ-7B8-1A12、-1E3、-2A1、-2A3、-4A1、図48)および(TZ-6F10 1C3、1D6、1F11、2F2、2G2、3E1、4H4、4G6、5D7、図49)を二次ラウンドのサブクローンニング、シークエンシングのために選んだ。
二次ラウンドのサブクローンニング(25〜500個細胞/ウェル)から2週間後、個々のウェルからの培養上清を、3通り、リシンBサブユニット反応性についてELISAによりテストした。図58Aに見られるように、2回目のサブクローンニング細胞を含む12/20ウェルが変動レベルのリシンB反応性を有した。ウェルTZ6F10-4H4およびTZ-7B8-2A3中の細胞を、免疫グロブリンシークエンシング分析のために選んだ。RT-PCRを、図54Aに記載のプライマーを使用して、先の記載のとおりに実施した。各ウェルにおいて、λ1/3およびλ6からなる2つの軽鎖および重鎖配列を同定した(VH1およびVH3)。PCR増幅産物をシークエンシングした。シークエンシングによって、TZ-6F10-4H4についての軽鎖免疫グロブリン可変領域がIGLV048およびIGLJ03*2遺伝子セグメントで構成されることが示された(図59A)(SEQ ID NO:41および42)。VH3重鎖免疫グロブリン可変領域はIGHV035で構成された(図59B)(SEQ ID NO:45および46)。軽鎖領域は生殖系列配列と>99%の相同性を有し、重鎖領域は超変異されており、89%のVH生殖系相同性を伴った;得られた配列を、生殖系列配列に対して比較し、図59AおよびBに提示する。重鎖および軽鎖の相補性決定領域を図59Fにおいて同定する。スクリーニングによって、TZ-7B8-2A3についてのλ3軽鎖免疫グロブリン可変領域がIGLV063およびIGLJ03*2遺伝子セグメントで構成されることが示された(図59C)(SEQ ID NO:49および50)。第2のλ6軽鎖配列をウェルTZ-7B8-2A3中の細胞において同定し、ILGV048およびIGLJ3*02遺伝子セグメントで構成された(図59D)(SEQ ID NO:52および53)。VH1重鎖免疫グロブリン可変領域はIGHV157、IGHD3-10*2、IGHJ04*2で構成された(図59E)(SEQ ID NO:57および58)。軽鎖領域は生殖系列配列と>98%の相同性を有し、重鎖領域は超変異されており、96%のVH生殖系相同性、生殖系と46% DHおよび81% JH相同性を伴った;得られた配列を、生殖系列配列に対して比較し、図59C〜Eに提示する。重鎖および軽鎖の相補性決定領域を図59Fにおいて同定する(SEQ ID NO:60、61、62、63、および64)。
表15に見られるように、4つの不死化細胞株をIL6反応性についてテストしたが、検出されたIL6特異的細胞株は現在まで存在していない。
扁桃腺および末梢血由来のB細胞レパートリーの生成および分析
濃縮EBVストックの生成および扁桃腺組織および末梢血のサンプルからのB細胞の調製が先に記載されている。EBV不死化B細胞の分化誘導のために、先の記載したとおりに、可溶性CD40リガンド(5ng/ml)、BAFF(10ng/ml)、およびヤギ抗ヒトIgM F(ab')2(1.62ng/ml)を含む完全RPMI培地を使用した。
サンプル培養上清の回収およびELISAによるH5 HA反応性についてのスクリーニングを以下のとおりに改変している。培養上清を、96ウェルプレートの対応するウェル中に、形質導入後10日目に各ウェルから100μl回収し、一定分量をプールし(各プレートの全ウェルからの30μlの上清)、H5 HA反応性についてのELISAによりスクリーニングした。培養上清を、CD40L、BAFF、および抗ヒトIgM(Fab')2を含む100μlの新鮮RPMI培地と交換した。H5 HA反応性がプールされたウェル中で検出された場合、プールに寄与する個々のウェルの各々を5つの新しいウェルにサブクローンニングし、生存を保存し、陽性ウェルの同一性を追加のELISA実験により確認した。ひとたびH5 HA反応性IgGを含む個々のウェルが、迅速スクリーニング戦略において同定されていれば、そのウェルからの細胞をカウントし、その50〜80%を96ウェルプレート中にサブクローンニングし(約500個細胞/ウェル、カウントに依存する)、残りを凍結した。サブクローンニング後の種々の時間に、上清を上に概説したとおりに回収し、迅速スクリーニング分析を繰り返した。これに、追加ラウンドの限界希釈サブクローンニングおよびスクリーニングが続いた。クローン性は、最低希釈で、プレートの全ウェルが抗H5 HA反応性IgGを産生した場合に想定した。
Hisタグ付き組換えH5 HA(株H5N1 A/Vietnam/1203/2004)をImmune Technology Corpから得た(#IT-003-0051p)。このタンパク質(H5 a.a. 18〜530)はN末端6ヒスチジン(6×His)タグおよびHA切断部位に欠失(ΔRRRKKR)を有する。Hisタグ付きH5 HAを中性pH結合バッファー(1x DPBS、pH 7.2)中で、2μg/mlで96ウェルELISAプレートのウェルのコーティングのために調製した(50μl/ウェル);目盛付きプレートを一晩4℃で結合させた。各サンプルおよび対照についての非特異的結合を、3通りに、H5 HAコーティングウェルに対し、結合バッファーだけを受けた等しい数の未コーティングウェルから得られた結果を比較することにより評価した。次の日、プレートを洗浄し、中性pHブロッキング溶液(SuperBlock-TBS、pH 7.4、Pierceから)+0.1% Tween 20でブロッキングし、サンプルまたは対照(100μl/ウェル)と3通りにインキュベートした。対照は、以前にH5 HA反応性(RPMI培養培地中で1:500で希釈)であることが見出されたボランティア(V5)からのヒト血清、および非反応性の精製ヒトIgG(500ng/0.1ml RPMI培養培地、Sigma)からなった。十分な洗浄後、アルカリホスファターゼ標識ヤギ抗ヒトIgG(Southern)を各ウェルに加え、発色基質の反応および検出が続いた。H5 HA結合についての平均OD405値±標準偏差(n=3)(平均非特異的結合を引いた)をすべてのグラフに示す。
2つの異なるビーズシステムを用いた。試薬の量をスクリーニングすべき1×106個細胞当たりで与え、異なる細胞数に従って変更した。THE(商標)Anti-His MagBeads(GenScript Corporation, #L00275)について、0.5mg(50μlのストック)ビーズを2mlの冷DPBSで3回洗浄し、0.2mlの冷洗浄バッファー1(DPBS+0.2% BSAおよび20mM EDTA)中に再懸濁させた。洗浄したビーズを氷上で0.5μgのHISタグ付きH5 HAと混合し、氷上で1時間振盪しながらインキュベートし、次にWB1で2回洗浄した。MagnaBead(登録商標)Biotin Binder(Invitrogen, # 110.47)について、15μl(4×108ビーズ/ml)のビーズを冷DPBSで3回洗浄し、0.2mlの冷WB1中に再懸濁させた。ビーズを氷上で1μgのTHE(商標)Anti-His mAb[biotin](GenScript, #A00613)および1μgのHISタグ付きH5 HAと混合し、氷上で1時間振盪しながらインキュベートし、次にWB1で2回洗浄した。いずれのビーズ::his-H5 HA複合体についても、DPBSで3回洗浄した1×106個の細胞を0.2mlのWB1中に再懸濁させ、ビーズ複合体と合わせる。チューブを氷上で30分間振盪する。懸濁液を氷冷WB1で10mlにし、3分間の分離のためのEasySepマグネット中に置く。未結合細胞(フロースルーまたはFTと呼ぶ)を含む上清を回収し、ビーズ-細胞の残余分を10mlのWB1で2回洗浄する。次に、3mlの室温のトリプシン-EDTA溶液(Mediatech Cellgro #21-053-C1)を加えて、そして室温で5分間インキュベートする。次に、7mlの完全培養培地を不活性トリプシンに加え、もはやビーズに付着しない細胞(トリプシン洗浄分画)を回収する。ビーズを10mlのWB1で2回洗浄し、1mlの完全培養培地(トリプシンビーズ分画)中に再懸濁させる。FTおよびトリプシン分画をカウントし、1600rpmで7分間遠心分離し、完全RPMI培地中に再懸濁し、96ウェルプレートのウェル中に1×104〜5×104個細胞/ウェルで分注する。
TN-6G7-7F8-2G7培養上清を回収し、抗ヒトIgGでプレコーティングした96ウェルELISAプレートのウェル中に分注し、先のセクションに記載のとおりに、SuperBlock+0.1% Tween-20でブロッキングした。ブロッキング後、プレートを十分に洗浄し、次に、100μlの4つのサブタイプ特異的アルカリホスファターゼ標識マウスモノクローナル抗体とインキュベートした:抗Hu IgG1(Invitrogen 05-3322)、抗体Hu IgG2(Invitrogen 05-3522)、抗体Hu IgG3(Invitrogen 05-3622)、および抗体Hu IgG4(Invitrogen 05-3722)。すべての抗体をブロッキング溶液で1:250に希釈した。抗体との1時間のインキュベーションの後、続けて発光基質反応および検出を行った。平均OD405値±標準偏差(n=3)を報告した。
全RNAを、約105〜106個細胞から、RNEasyプロトコール(Qiagen, # 74104)を使用して、QIAshredderカラム(Qiagen, # 79654)で抽出した。RNAを、High Capacity cDNA Reverse Transcription Kitで、製造業者の指示(Applied Biosystems, # 4368813)に従ってcDNAに変換し、Welschof et al.(1995)から適用したプライマー組を使用した軽鎖および重鎖型含量についてのPCRにより分析した(図xAを参照のこと)。すべてのフォワードプライマーがXbaI制限酵素部位を取り込んでいたが、リバースプライマーはSalI制限酵素部位を取り込んでいた。PCR産物を1%アガロースゲルで分析した(図xB)。検出可能な産物をもたらす反応を、プルーフリーディングAccuzyme(商標)Mixキット(Bioline, # BIO-25027)を使用してスケールアップした。PCR産物を、QIAquick Gel Extraction Kit(Qiagen, # 28704)を使用してゲル精製し、各々の一部を、シークエンシングのために、MUSC DNA Core Facilityへ、元のフォワードおよびリバースPCRプライマーと共に提出した。各産物の残りを、XbaIおよびSalI(New England Biolabs)で消化し、哺乳動物発現ベクター中への続くサブクローニングのために、同様にXbaI/SalI消化されたpSP73プラスミド(Promega, # P2221)中にクローンニングした。フォワードおよびリバースDNA配列をVector NTI(Invitrogen)ALIGN機能を使用して整列させ、組み合わせた修正配列を生成した。これらをVBASE2オンラインソフトウェア(Retter et al., 2005)を使用して分析した。配列ナンバリングおよびモチーフ整列化をKabatスタンダードに従って実施した(Johnson and Wu, 2000)。
TN-6G7-7F8-2G7細胞の由来
ヒト扁桃腺由来の不死化B細胞レパートリーを、表16にまとめるとおりに作製した。H5N1ヘマグルチニン(H5 HA)反応性についてエプスタイン-バーウイルス(EBV)感染後10〜14日目にすべてをスクリーニングした。TN-6G7-7F8-2G7細胞は扁桃腺レパートリーTNSL-Nに由来した(表16で、黄色で強調)。培養上清を、プレートプール(単一プレート中の全ウェルに由来する培養上清のプールされた一定分量)およびウェルプール(すべての10枚のプレート上の同じ位置の特定のウェルからのプールされた一定分量)のテストで構成される迅速スクリーニングELISA方法を使用してスクリーニングした。図50に示すとおり、これらのデータの相関関係によって個々の陽性ウェルの迅速道程が可能になった。図50Aに見られるように、プールされたウェルからの培養上清のELISA分析によって、H5 HA反応性IgGが10枚のプレートのうち少なくとも1枚のウェルG7中に見出されることが示された。図50Bは、反応性がプレート6で最高であることを示した。陽性ウェルからの培養上清中での反応性の立証を、次の日に実施した。ELISAを3通りに実施し、プレートへのバックグラウンド結合(H5 HA抗原の非存在下)を結果から引いた。図50Cは、プレート6ウェルG7が最高の反応性を有することを示した;このように、ウェル6G7からの細胞を500個細胞/ウェルで10枚の96ウェルプレート中にサブクローンニングし、一次ラウンドのサブクローンニングと呼んだ。2週間後、サブクローンニング細胞からの培養上清を、類似の迅速スクリーニング戦略を使用して、H5 HA反応性についてスクリーニングした(図51)。図51Aに見られるように、H5 HA反応性が複数のウェル中で同定され、C8およびF8が最高の反応性を有した。図51Bは、有意なH5 HA反応性がプレート2、3、5、7、および8で検出された;従って、ウェルC8およびF8からの培養上清をこれらのプレートの各々でテストした。図51Cに見られるように、ウェル2C8、8C8、および7F8が活性を含み、ウェル7F8が最高の反応性を有した。そのウェルからの細胞は、従って、500個細胞/ウェルで2枚のプレート中にサブクローンニングされ、二次ラウンドのサブクローンニングと呼んだ。3週間後、両方のプレートからのウェルプールからの培養上清を、ELISAにより、H5 HA反応性についてスクリーニングした。図52Aに見られるように、複数のウェルが陽性であり、ウェルG7が最高の反応性を有した。図52Bは、最も強い反応性がプレート2ウェルG7中の培養上清に由来することを示した;このように、このウェルからの細胞を50個細胞/ウェルで2枚の96ウェルプレート中にサブクローンニングし、三次ラウンドのサブクローンニングと呼んだ。真菌汚染によって、4週間後、プロセスを同じウェルに由来する凍結細胞の一定分量を使用して繰り返す必要があった。4週間後、両方のサブクローンニングしたプレートの全ウェルはH5 HA反応性であることが見出され、クローン性を示唆した(図53A)。サブクローンニング戦略を表17にまとめた。
TN-6G7-7F8-2G7細胞からの培養上清におけるIgGのサブタイピングによって、細胞がIgG1を分泌することが示された(図53B)。これは確認され、RT-PCR分析によりさらに分析され(図54)、細胞がλ1軽鎖およびVH3重鎖を発現することが示された(図54B)。PCR増幅産物のシークエンシングによって、軽鎖免疫グロブリン可変領域がIGLV015およびIGLJ2*01遺伝子セグメントで構成されることが示された(図55A)(SEQ ID NO:32および33)。重鎖免疫グロブリン可変領域はIGHV318、IGHD4-23*1、およびIGHJ4*3で構成された(図55B)(SEQ ID NO:36および37)。軽鎖領域は生殖系列配列と>99%の相同性を有し、重鎖領域は超変異されており、92%のVH生殖系相同性、生殖系列と56% DHおよび80% JH相同性を伴った;得られた配列を、生殖系列配列に対して比較し、図55Aおよび55Bに提示する。重鎖および軽鎖の相補性決定領域を図55C(SEQ ID NO:39および40)において同定する。
解離定数は、抗原についての抗体の親和性の測定値である。解離定数が低いほど、親和性は高くなる。一般的に、Kdが10-8未満である抗体を治療範囲内で考える。E3A5モノクローナル抗体についての抗体解離定数を算出するために、研究者らは平衡状態にある抗原-抗体複合体の濃度、全抗体濃度、および平衡状態にある抗原部位の量を知る必要があった。これらを次に使用して、スキャッチャードプロットを生成した。スキャッチャード方程式は[x]/[Ag]=([AbT]-[x])/Kdであり、ここで[x]および[Ag]はそれぞれ平衡状態にある抗体-抗原複合体および抗原の濃度であり、[AbT]は全抗体濃度である。研究者らは、Friguet et al. (1985)により提示された方法を使用し、ここで、抗原-抗体の平衡状態はコーティングされた抗原への暴露前に事前に確立される。コーティングされた抗原がわずか一部分(10%以下)の遊離抗体と相互作用する場合、それによって平衡状態が有意に移動することはなく、このように真の親和性が測定されることを確実にする。親和性定数の逆数によって次に解離定数Kdが出され、ここでKa=1/Kdである。
上記のとおり、わずか10%の抗体がプレート上で抗原に結合することが重要である。その条件が満たされたか否かを判断するために、2枚の同一の96ウェルプレート中のウェルをhis-H5 HA(DPBS中500ng/mlで100μl/ウェル)で、4℃で一晩コーティングした。次の日、2倍希釈系列のE3A5を、RPMI 1640完全培地を希釈剤として使用して準備した。プレートを洗浄し、標準的H5 HA ELISAプロトコールに従ってブロッキングした後、抗体希釈液をウェル中に3通り置き(プレート1の100μl/ウェル)、室温で15分間インキュベートした。次に、プレート1の全ウェルの内容物をプレート2のそれらの正確な対応物に移し、続いて2回目の15分間インキュベーションをした。続いて、両方のプレートを洗浄し、ブロッキングバッファー中で1:10,000希釈したアルカリホスファターゼ結合ヤギ抗ヒトIgG Fc検出抗体(100μl/ウェル)に1時間暴露させた。発色基質の反応および検出に続き、平均OD405値±標準偏差(n=3)を得て、相対的抗体濃度に対してプロットした。線をデータ点に適合させ、プレート1(S1)および2(S2)での線の傾きを決定した。コーティングされた抗原への抗体結合のレベルを、式S1-S2/S1により算出した。0.1以下の値は、抗体の10%以下がプレートをコーティングする抗原に結合したことを示す。
H5 HA抗原でコーティングした96ウェルプレートを記載のとおりに調製した。18ng/mlでE3A5を含む溶液を完全培地で調製した。His-H5 HA(75kDa)を10の異なる濃度で連続2倍希釈(1.3x10-7M〜1.3x10-10M)として調製した。等量の抗体溶液および抗体希釈液の各々を一緒に混合し、室温で一晩平衡化させた。次の日、事前にインキュベートした抗体-抗原溶液を加え、調製プレートの洗浄されたウェルに100μl/ウェルで加えた。15分間のインキュベーションに続き、工程の残りは上に厳密に記載したプロトコールに従った。
クローンE3A5およびC7F6から単離された組換えIg遺伝子を産生する細胞株を作製するために、完全長の重鎖および軽鎖Ig遺伝子をそれらのcDNAから増幅した。可変領域は約400bpであり、完全長の軽鎖は約700bp、完全長の重鎖は約1400bpであった(図XXXA)。プライマーを作製するために、GenbankのBLASTサーチをクローンニングされた可変領域配列を使用して実施し、新しいプライマーデザインのためにリーダーペプチド配列を同定した。重鎖および軽鎖の定常領域のC末端のためのリバースプライマーは、それらの遺伝子の発表された配列に由来した。使用したプライマーはそれぞれ
および
であり、E3A5およびC7F6 cDNAからのIgG軽鎖の増幅のためにリバースプライマー
を組み合わせた。同様に、
および
をリバースプライマー
と共に使用し、それぞれC7F6およびE3A5の重鎖を増幅した。PCR反応をAccuPrime Taq DNAポリメラーゼ(Invitrogen、#12339-016)を使用して、提供されるPCRバッファーI、および最終濃度各1μMのプライマーで実施した。E3A5およびC7F6細胞の両方からの完全長の重鎖および軽鎖を単離した(図57A)。
Claims (34)
- 以下の工程を含む、予め決定された抗原に特異的な抗体を分泌する不死化ヒトB細胞を産生する方法:
(a)IgM陽性ヒトB細胞集団を得る工程;
(b)該集団を、
(i)ヒトB細胞を不死化するために、エプスタイン-バーウイルス(EBV)と、および
(ii)免疫グロブリンアイソタイプのIgMからIgGへのクラススイッチを誘導するために、サイトカイン/増殖因子/シグナル伝達物質のカクテルと
接触させる工程;
(c)前記不死化および免疫グロブリンアイソタイプクラススイッチを支持する条件下で細胞を培養する工程。 - 以下の工程をさらに含む、請求項1記載の方法:
(d)予め決定された抗原に対する抗体を発現する不死化ヒトB細胞を選択する工程。 - 予め決定された抗原が、ウイルス抗原、細菌抗原、真菌抗原、寄生虫抗原、毒素抗原、ウイルスの侵入に関する細胞受容体抗原、細菌の侵入に関する細胞受容体、真菌の侵入に関する細胞受容体、寄生虫の侵入を媒介する細胞受容体、毒素の侵入を媒介する細胞受容体、腫瘍抗原、サイトカイン/ケモカイン/増殖因子抗原、サイトカイン/ケモカイン/増殖因子受容体抗原、炎症を媒介する分子上の抗原、疼痛を媒介する分子上の抗原、組織損傷/障害を媒介する分子上の抗原、活性化分子/リガンド/受容体上の抗原、共刺激分子/リガンド/受容体上の抗原、先天免疫を媒介する分子上の抗原、細胞接着分子上の抗原、細胞接着分子受容体上の抗原、病状に関連する過剰発現した/不十分にグリコシル化された/酸化した/ミスフォールドした/変異した細胞タンパク質(「改変された自己」抗原)上の抗原、細胞アポトーシスを媒介する分子/リガンド/受容体上の抗原、増殖阻害分子上の抗原、H5N1血液凝集素(H5 HA)、癌血管新生分子である胎盤誘発増殖因子(PLGF)、癌および自己免疫関連因子であるインターロイキン-6(IL6)、ブドウ球菌エンテロトキシンB(SEB)、ブドウ球菌エンテロトキシンC2(SEC2)、またはリシンBサブユニットを含む、請求項1記載の方法。
- 予め決定された抗原がH5 HA、PLGF、IL6、SEB、SEC2、またはリシンBサブユニットである、請求項3記載の方法。
- 抗体がモノクローナル抗体である、請求項2記載の方法。
- 予め決定された抗原がH5 HAである、請求項4記載の方法。
- 予め決定された抗原がPLGFである、請求項4記載の方法。
- 予め決定された抗原がIL6である、請求項4記載の方法。
- 予め決定された抗原がSEBである、請求項4記載の方法。
- 予め決定された抗原がSEC2である、請求項4記載の方法。
- 予め決定された抗原がリシンBサブユニットである、請求項4記載の方法。
- 選択する工程が、不死化B細胞培地の上清に対して実施されるイムノアッセイを含む、請求項2記載の方法。
- サイトカインカクテルが、B細胞受容体とクロスリンクするもしくはB細胞受容体を活性化する抗IgM F(ab’)2または他の物質、組換えヒトインターロイキン(IL)-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10、IL-13、INFα、BAFF、および/もしくはB細胞の分化を引き起こす他のサイトカイン、ならびに/または可溶性CD40L、ならびに/またはヒトB細胞に共刺激シグナルを供給する他の物質を含む、請求項1記載の方法。
- 集団が末梢血、扁桃、骨髄、脾臓、リンパ節、臍帯血、肝臓、アフェレーシス技法、および/またはバフィーコートから得られる、請求項1記載の方法。
- 工程(d)の不死化ヒトB細胞から重鎖および/または軽鎖全体をコードする核酸を単離する工程をさらに含む、請求項2記載の方法。
- 工程(d)の不死化ヒトB細胞から重鎖および/または軽鎖の抗原結合領域をコードする核酸を単離する工程をさらに含む、請求項2記載の方法。
- 前記核酸を、重鎖および/または軽鎖のフレームワーク領域をコードする核酸へとクローニングする工程をさらに含む、請求項16記載の方法。
- 工程(b)が、EBVを濃縮する工程、感染の間に遠心分離する工程、または両方をさらに含む、請求項1記載の方法。
- 工程(c)の後に、ヒトB細胞集団を凍結する工程をさらに含む、請求項1記載の方法。
- 工程(b)(ii)の後に、工程(b)(ii)を約0〜96時間実施する、請求項1記載の方法。
- 工程(b)(ii)の後に、工程(b)(ii)を約16〜20時間実施する、請求項20記載の方法。
- 集団の約50%〜99%がEBV感染によって不死化される、請求項1記載の方法。
- 集団の約95%〜99%がEBV感染によって不死化される、請求項22記載の方法。
- 工程(d)が、感染の後1〜4週間行われる、請求項2記載の方法。
- 工程(d)が、感染の後2〜3週間行われる、請求項24記載の方法。
- 工程(d)が、保存された凍結不死化B細胞を解凍した後、および/または不死化B細胞由来の保存された凍結培地上清を解凍した後に行われる、請求項2記載の方法。
- B細胞が抗原で処理されていない、請求項1記載の方法。
- B細胞が抗原で処理された、請求項1記載の方法。
- 炭疽菌毒素、エボラウイルス抗原、リシンA鎖、A鎖、ペスト菌(Yersinia pestis)抗原、マールブルグウイルス抗原、MDRブドウ球菌(Staphylococcus)抗原、およびコレラ毒素と免疫学的に結合するIgGを発現する、ハイブリドーマではない不死化ヒトB細胞。
- EBVで不死化されている、請求項29記載の不死化ヒトB細胞。
- 請求項29記載の細胞によって作製された、単離されたモノクローナル抗体。
- H5N1血液凝集素(H5 HA)に対して特異性を有する、単離されたモノクローナル抗体。
- 以下を含む、請求項32記載の単離された抗体:
(a)SEQ ID NO:22、25、または36に示したアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;および
(b)SEQ ID NO:16、19、または32に示したアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域。 - 以下を含む、請求項32記載の単離された抗体:
(a)SEQ ID NO:23、26、または37の核酸配列によってコードされている重鎖可変領域;および
(b)SEQ ID NO:17、20、または33の核酸配列によってコードされている軽鎖可変領域。
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Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2022091160A (ja) * | 2016-10-23 | 2022-06-20 | バークレー ライツ,インコーポレイテッド | B細胞リンパ球をスクリーニングする方法 |
Families Citing this family (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP5550132B2 (ja) * | 2009-10-30 | 2014-07-16 | 学校法人東京理科大学 | 抗原特異的b細胞集団の製造方法 |
EP3037435B1 (en) * | 2009-11-17 | 2019-08-07 | MUSC Foundation for Research Development | Human monoclonal antibodies to human nucleolin |
GB2502127A (en) * | 2012-05-17 | 2013-11-20 | Kymab Ltd | Multivalent antibodies and in vivo methods for their production |
EP3426691A4 (en) | 2016-03-07 | 2019-09-25 | Charlestonpharma, LLC | ANTI-NUCLEOLIN ANTIBODIES |
WO2018144425A1 (en) * | 2017-01-31 | 2018-08-09 | Vanderbilt University | Generation of human allergen-and helminth-specific ige monoclonal antibodies for diagnostic and therapeutic use |
CN108531460B (zh) * | 2018-03-30 | 2020-07-14 | 四川迈克生物新材料技术有限公司 | 抗人IgM单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及应用 |
CN109596821A (zh) * | 2018-12-12 | 2019-04-09 | 广西医科大学第附属医院 | ELISA保证型兔抗树鼩多克隆IgG抗体的制备方法 |
AU2020271467B2 (en) * | 2019-04-11 | 2024-06-27 | Scripps Korea Antibody Institute | Antibodies against programmed death-ligand 1 and uses thereof |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2000020460A1 (en) * | 1998-10-05 | 2000-04-13 | Ludwig Institute For Cancer Research | Methods for producing human tumor antigen specific antibodies |
WO2004076677A2 (en) * | 2003-02-26 | 2004-09-10 | Institute For Research In Biomedicine | Monoclonal antibody production by ebv transformation of b cells |
WO2004087914A1 (ja) * | 2003-03-31 | 2004-10-14 | Institute For Antibodies Co. Ltd. | 抗体作製方法 |
WO2007067046A1 (en) * | 2005-12-09 | 2007-06-14 | Academisch Medisch Centrum Bij De Universiteit Van Amsterdam | Means and methods for influencing the stability of antibody producing cells |
Family Cites Families (52)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
NL154598B (nl) | 1970-11-10 | 1977-09-15 | Organon Nv | Werkwijze voor het aantonen en bepalen van laagmoleculire verbindingen en van eiwitten die deze verbindingen specifiek kunnen binden, alsmede testverpakking. |
US3817837A (en) | 1971-05-14 | 1974-06-18 | Syva Corp | Enzyme amplification assay |
US3939350A (en) | 1974-04-29 | 1976-02-17 | Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Fluorescent immunoassay employing total reflection for activation |
US3996345A (en) | 1974-08-12 | 1976-12-07 | Syva Company | Fluorescence quenching with immunological pairs in immunoassays |
US4277437A (en) | 1978-04-05 | 1981-07-07 | Syva Company | Kit for carrying out chemically induced fluorescence immunoassay |
US4275149A (en) | 1978-11-24 | 1981-06-23 | Syva Company | Macromolecular environment control in specific receptor assays |
US4366241A (en) | 1980-08-07 | 1982-12-28 | Syva Company | Concentrating zone method in heterogeneous immunoassays |
US4957939A (en) | 1981-07-24 | 1990-09-18 | Schering Aktiengesellschaft | Sterile pharmaceutical compositions of gadolinium chelates useful enhancing NMR imaging |
CH652145A5 (de) | 1982-01-22 | 1985-10-31 | Sandoz Ag | Verfahren zur in vitro-herstellung von hybridomen welche humane monoklonale antikoerper erzeugen. |
US4464465A (en) | 1982-04-05 | 1984-08-07 | Genetic Systems Corporation | Cell-driven viral transfer in eukaryotes |
US4472509A (en) | 1982-06-07 | 1984-09-18 | Gansow Otto A | Metal chelate conjugated monoclonal antibodies |
US4574116A (en) | 1983-01-13 | 1986-03-04 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Jr. University | Methods and cell lines for immortalization and monoclonal antibody production by antigen-stimulated B-lymphocytes |
US4632761A (en) | 1983-08-15 | 1986-12-30 | W. R. Grace & Co. | Centrifugal microconcentrator and methods for its use |
US4634666A (en) | 1984-01-06 | 1987-01-06 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Human-murine hybridoma fusion partner |
US4683200A (en) | 1984-05-17 | 1987-07-28 | Setsuo Hirohashi | Monoclonal antibody to human cancer antigen and method for producing same |
US4693975A (en) | 1984-11-20 | 1987-09-15 | The Wistar Institute | Human hybridroma fusion partner for production of human monoclonal antibodies |
US4804627A (en) * | 1985-05-09 | 1989-02-14 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Method for cloning lymphoblastoid cells |
EP0218158A3 (en) | 1985-09-30 | 1988-12-07 | Asahi Kasei Kogyo Kabushiki Kaisha | Human monoclonal antibody, B-cell line for producing this antibody and method for preparing this B-cell line and antibody. |
US4938948A (en) | 1985-10-07 | 1990-07-03 | Cetus Corporation | Method for imaging breast tumors using labeled monoclonal anti-human breast cancer antibodies |
US5223417A (en) * | 1987-04-23 | 1993-06-29 | New York University | Method for transforming human B lymphocytes |
AU633698B2 (en) | 1990-01-12 | 1993-02-04 | Amgen Fremont Inc. | Generation of xenogeneic antibodies |
US5229275A (en) | 1990-04-26 | 1993-07-20 | Akzo N.V. | In-vitro method for producing antigen-specific human monoclonal antibodies |
US5814318A (en) | 1990-08-29 | 1998-09-29 | Genpharm International Inc. | Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
US5641622A (en) | 1990-09-13 | 1997-06-24 | Baxter International Inc. | Continuous centrifugation process for the separation of biological components from heterogeneous cell populations |
DE69229254T2 (de) | 1991-10-30 | 1999-09-23 | Idemitsu Kosan Co | Verfahren zur Herstellung von menschlichen Lymphozyten und menschlichen Antikörpern; und so hergestellte Antikörper |
CA2168202A1 (en) | 1993-07-30 | 1995-03-16 | Joseph Dougherty | Efficient gene transfer into primary lymphocytes |
US5534423A (en) | 1993-10-08 | 1996-07-09 | Regents Of The University Of Michigan | Methods of increasing rates of infection by directing motion of vectors |
US5874085A (en) | 1993-11-10 | 1999-02-23 | Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine | Vaccine for enhanced production of IgA antibodies |
US5702892A (en) | 1995-05-09 | 1997-12-30 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Phage-display of immunoglobulin heavy chain libraries |
DE19541844C1 (de) | 1995-11-09 | 1997-07-24 | Gsf Forschungszentrum Umwelt | Verfahren zur Herstellung von menschlichen Antikörpern und deren Verwendung |
JP2002532066A (ja) * | 1998-11-16 | 2002-10-02 | ジェンウェイ バイオテック, インコーポレイテッド | 鳥類におけるポリヌクレオチドワクチンを用いる抗体の産生 |
CA2372585A1 (en) | 1999-05-10 | 2000-11-16 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Method of culturing cells |
US6541225B1 (en) | 2000-01-26 | 2003-04-01 | Raven Biotechnologies, Inc. | Methods and compositions for generating human monoclonal antibodies |
ATE321069T1 (de) | 2000-05-12 | 2006-04-15 | Vlaams Interuniv Inst Biotech | Verwendung von inhibitoren des plazenta wachstumsfactors für die behandlung einer pathologischen angiogenese, pathologischen arteriogenese, entzündung, tumorbildung und/oder gefässdurchlässigkeit (ödem) |
AU2001256746A1 (en) * | 2000-05-15 | 2001-11-26 | Sonoko Habu | Chimeric mouse having immunity constructed by using human cd34-positive cells and use thereof |
US20030165483A1 (en) | 2000-07-10 | 2003-09-04 | Ulrich Zimmermann | Method for the modification of biological cells |
WO2002018550A1 (en) | 2000-08-25 | 2002-03-07 | The General Hospital Corporation | Selective precipitation of viruses |
US20050196755A1 (en) | 2000-11-17 | 2005-09-08 | Maurice Zauderer | In vitro methods of producing and identifying immunoglobulin molecules in eukaryotic cells |
US20030059763A1 (en) | 2001-01-26 | 2003-03-27 | Andrew Saxon | Immunoglobulin class switch recombination |
IL161968A0 (en) * | 2001-11-14 | 2005-11-20 | Centocor Inc | Anti-il-6 antibodies, compositions, methods and uses |
NZ534205A (en) | 2001-12-22 | 2006-04-28 | Antibody A 4 | Method for the generation of genetically modified vertebrate precursor lymphocytes and use thereof for the production of heterologous binding proteins |
GB2398783A (en) | 2003-02-26 | 2004-09-01 | Antonio Lanzavecchia | A method for producing immortalised human B memory lymphocytes |
US20070087331A1 (en) | 2003-05-15 | 2007-04-19 | Cytos Biotechnology Ag | Selection of b cells with specificity if interest: method of preparation and use |
EP1651269A2 (en) * | 2003-07-25 | 2006-05-03 | United States Army Medical Research and Material Command | Monoclonal antibodies against ricin toxin and methods of making and using thereof |
WO2006078774A2 (en) * | 2005-01-19 | 2006-07-27 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Regulation of autophagy and cell survival |
CA2604238C (en) * | 2005-04-15 | 2015-07-07 | Neogenix Oncology, Inc. | Recombinant monoclonal antibodies and corresponding antigens for colon and pancreatic cancers |
JP2007018316A (ja) * | 2005-07-08 | 2007-01-25 | Seiko Epson Corp | ファイル操作処理装置 |
US7807415B2 (en) | 2005-08-23 | 2010-10-05 | Iq Therapeutics Bv | Methods of producing stable B-lymphocytes |
EP1974020B1 (en) | 2005-12-16 | 2011-06-15 | Ribovax Biotechnologies SA | Methods for obtaining immortalized antibody secreting cells |
CA2706700A1 (en) | 2007-11-08 | 2009-05-14 | Cytimmune Sciences, Inc. | Compositions and methods for generating antibodies |
JP5414535B2 (ja) | 2007-12-03 | 2014-02-12 | 株式会社アドバンス | 1本鎖抗体scFvの製造方法 |
EP3037435B1 (en) | 2009-11-17 | 2019-08-07 | MUSC Foundation for Research Development | Human monoclonal antibodies to human nucleolin |
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Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2000020460A1 (en) * | 1998-10-05 | 2000-04-13 | Ludwig Institute For Cancer Research | Methods for producing human tumor antigen specific antibodies |
WO2004076677A2 (en) * | 2003-02-26 | 2004-09-10 | Institute For Research In Biomedicine | Monoclonal antibody production by ebv transformation of b cells |
WO2004087914A1 (ja) * | 2003-03-31 | 2004-10-14 | Institute For Antibodies Co. Ltd. | 抗体作製方法 |
WO2007067046A1 (en) * | 2005-12-09 | 2007-06-14 | Academisch Medisch Centrum Bij De Universiteit Van Amsterdam | Means and methods for influencing the stability of antibody producing cells |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
JPN6013034741; The Journal of Immunology Vol.160, 1998, p.2145-2157 * |
JPN6014005781; Virology Vol.278, 2000, p.55-59 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2022091160A (ja) * | 2016-10-23 | 2022-06-20 | バークレー ライツ,インコーポレイテッド | B細胞リンパ球をスクリーニングする方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
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