JP2010532764A - C末端に配置された特異的結合性ドメインを有する結合性ペプチド - Google Patents
C末端に配置された特異的結合性ドメインを有する結合性ペプチド Download PDFInfo
- Publication number
- JP2010532764A JP2010532764A JP2010515288A JP2010515288A JP2010532764A JP 2010532764 A JP2010532764 A JP 2010532764A JP 2010515288 A JP2010515288 A JP 2010515288A JP 2010515288 A JP2010515288 A JP 2010515288A JP 2010532764 A JP2010532764 A JP 2010532764A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- pims
- seq
- specific binding
- cells
- antibody
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2833—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against MHC-molecules, e.g. HLA-molecules
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2887—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD20
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
- C07K2317/53—Hinge
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
- C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
- C07K2317/734—Complement-dependent cytotoxicity [CDC]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
Abstract
【選択図】なし
Description
質でありうる。いくつかの実施形態では、ヒンジは、定常サブ領域と特異的結合性ドメインとの間に配置されたPIMSリンカーと同一の配列を含む。いくつかの実施形態では、PIMS特異的結合性タンパク質は、定常サブ領域のC末端に配置された少なくとも第2の特異的結合性ドメインをさらに含み、かつ複数の特異的結合性ドメインは、同一もしくは異なる標的に結合しうる。
PIMSタンパク質またはPIMSポリペプチドは、他の特異的結合性分子、たとえば、ポリクロナール抗体もしくはモノクローナル抗体、それらのフラグメント、たとえば、Fab、F(ab')2、もしくはscFv、SMIP、ダイアボディ、scorpionなどの構造とは異なる構造を有する。PIMSタンパク質またはPIMSポリペプチドは、N末端にエフェクタードメイン(CH2-CH3、場合により、ヒンジ-CH2-CH3)かつC末端に標的特異的(たとえば抗原特異的)結合性ドメインを含有し、両ドメインは、(ヒンジ様)PIMSリンカーにより分離される。PIMSリンカーがIgヒンジに由来する場合、それは、好ましくは、そのPIMS分子のCH2ドメインおよびCH3ドメインの少なくとも1つと同一の抗体クラス、アイソタイプ、またはサブアイソタイプに由来する。標的特異的結合性ドメインは、単一のドメイン、たとえば、ラクダ科動物抗体結合性ドメインに由来する結合性ドメインでありうるか、またはより典型的には、VL様ドメインおよびVH様ドメインの鎖間もしくは鎖内の会合のように複数の領域が会合して少なくとも1つの結合性ドメインを形成しうる。PIMS構造では、エフェクター機能と結合性ドメインの機能特性との両方を最適化することが可能である。こうした分子は、単独で活性を有し、加えて、ScorpionのC末端結合性ドメインのような多重特異的結合性タンパク質の結合性ドメイン(すなわち、Scorpion結合性ドメイン2(BD2))を評価するための、さらにはエフェクタードメイン-BD2 Scorpionリンカーを評価するためのプラットフォームを提供する。
ポリペプチドのN末端の近傍またはN末端に配置される定常サブ領域は、免疫グロブリンタンパク質の定常領域に由来する。定常サブ領域は、一般的には、免疫グロブリンの定常重鎖領域の部分(必ずしも全部というわけではない)に由来する。典型的には、定常サブ領域は、免疫グロブリンのCH領域のヒンジ-CH2部分を含有するが、定常サブ領域が抗体に関連する少なくとも1つのエフェクター機能を保持するかぎり、それはヒンジ-CH2-CH3部分に由来しうるか、またはそれはCH領域のヒンジ-部分的CH2部分に由来しうる。また、定常サブ領域の部分は、異なる免疫グロブリンのCH領域に由来しうる。好ましい実施形態では、ヒンジおよびCH2領域、さらには適切であればCH3領域は、同一の抗体アイソタイプに由来する。さらに利用可能と考えられるのは、定常サブ領域またはN末端ヒンジに連結されたN末端リーダー配列を有する分子である。定常サブ領域は、免疫グロブリンのCH領域に関連する少なくとも1つの活性、たとえば、次のエフェクター機能、すなわち、当業者であればわかるように、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害(ADCC)、補体依存性細胞傷害(CDC)、プロテインA結合、少なくとも1つのFcレセプターへの結合、定常サブ領域が不在である以外は本発明に係るタンパク質と対比される再現性よく検出可能な安定性、および、本発明に係る分子の世代移転が有利である場合にはおそらく胎盤通過のうちの1つ以上を提供する。本発明に係る組成物に使用するのに好適な定常サブ領域としては、表2に例示された構造が挙げられるが、これらに限定されるものではない。定常サブ領域は、少なくとも1つの免疫グロブリン分子に由来し、かつ少なくとも1つの免疫グロブリンの1つまたは複数の領域と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を呈する。いくつかの実施形態では、定常サブ領域は、少なくとも1つの免疫グロブリンの1つもしくは複数の配列から修飾され(1つ以上の非天然の従来型もしくは非従来型の、たとえば合成のアミノ酸またはイミノ酸の置換により)、改変された二次もしくはより高次の構造をそれに関連する改変された性質と共に生じうるかまたはグリコシル化のような翻訳後プロセシングの改変を引き起こしうる一次構造をもたらす。
典型的なPIMS分子のPIMSリンカー領域の実際の構造を表3に提供する。表中、いくつかの好適な領域に対してアミノ酸配列および適切であればコードポリヌクレオチド配列が提供されているが、これらの領域に限定されるものではない。典型的には、これらのPIMSリンカー領域は、免疫グロブリンのヒンジ領域に由来する。同様に典型的には、PIMSリンカーの配列は、標準的なペプチド条件下でジスルフィド結合、好ましくは鎖間ジスルフィド結合を形成しうるシステイン残基を含む。少なくとも1つのシステインを有するヒンジ様PIMSリンカーを含むPIMS分子では、ホモ二量体化およびエフェクター機能が増大される。とくに指定がないかぎり、表3中の配列は、IgG1ヒンジ領域由来である。
PIMSリンカーペプチド
PIMSリンカーペプチドは、多くの場合、ヒンジ領域であるので、表3中に例示されたヒンジ領域構造をはじめとする本明細書中で規定されたヒンジ領域構造はいずれも、PIMSリンカーペプチドとして使用するのに好適である。本発明に係る組成物に有用なPIMSリンカーペプチドは、好ましくは、約2〜45アミノ酸または2〜38アミノ酸または5〜45アミノ酸の間である。たとえば、H1リンカーは2アミノ酸の長さであり、かつSTD2リンカーは38アミノ酸の長さである。さらに、PIMSリンカーは、特異的結合性ドメインを定常サブ領域に連結するために使用可能であり、かつこのPIMSリンカーは、免疫グロブリンのヒンジ領域に由来しうる。本明細書中に提供された一般に好適な長さパラメーターを用いれば、当業者であれば、たとえば立体障害を回避すべく、定常サブ領域および結合性ドメインの所望のレベルの可撓性および/または間隔を達成するように、所与のPIMSリンカーペプチドの配列および/または長さを改変することが可能であろう。代表的なPIMSリンカーペプチドの構造としては、表3中に提供されたヒンジ領域および表4中に提供されたペプチドリンカーが挙げられる。
接続領域として使用可能な他の選択肢のヒンジ配列およびリンカー配列は、IgV様ドメインまたはIgC様ドメインを接続する細胞表面レセプターの部分から作製可能である。細胞表面レセプターが多数のIgV様ドメインをタンデムに含有する場合にはIgV様ドメイン間の領域および細胞表面レセプターが多数のタンデムIgC様領域を含有する場合にはIgC様ドメイン間の領域を接続領域またはリンカーペプチドとして使用することが可能である。好ましいヒンジ配列およびリンカー配列は、5〜60アミノ酸長であり、主に可撓性でありうるが、より剛性の特性を提供することも可能であり、また、最小限のβシート構造を有して主にα螺旋構造を含有しうる。好ましい配列は、血漿中および血清中で安定であり、かつタンパク質分解切断に対して耐性がある。好ましい配列は、分子のC末端を安定化させるように1つのジスルフィド結合または多数のジスルフィド結合を形成する能力を付与する天然に存在するまたは追加のモチーフたとえばCPPCを含有しうる。好ましい配列は、1つ以上のグリコシル化部位を含有しうる。好ましいヒンジ配列およびリンカー配列の例としては、CD2、CD4、CD22、CD33、CD48、CD58、CD66、CD80、CD86、CD96、CD150、CD166、およびCD244のIgV様ドメインとIgC様ドメインとの間またはIgC様ドメイン間もしくはIgV様ドメイン間のドメイン間領域が挙げられるが、これらに限定されるものではない。また、CD69、CD72、およびCD161のような非IgSFメンバー由来のII型レセプターのジスルフィド含有領域から他の選択肢のヒンジを作製することも可能である。
PIMSリーダーペプチドは、発現されたPIMS分子の分泌を促進するシグナル配列として機能するというその既知の目的に使用すべくデザインされる。発現されたばかりの新生のPIMS分子を分泌経路内に誘導してリーダーペプチドとPIMS分子との間の連結部またはその近傍でリーダーペプチドを成熟PIMS分子から切り離すために、従来のリーダーペプチド(シグナル配列)のいずれかの使用が期待される。特定のリーダーペプチドは、当技術分野で公知の要件に基づいて選択されるであろう。また、分子工学的操作を容易にするために、制限エンドヌクレアーゼ切断部位を指定するポリヌクレオチドによりコードされる配列をリーダーペプチドに対するコード配列の先頭および末尾に導入することが可能である。ただし、そのような導入配列は、発現されたばかりの新生のタンパク質からのリーダーペプチドのいかなる所望のプロセシングをも許容できないほど妨害したり、リーダーペプチドがPIMS分子の成熟時に切断されない場合にPIMS分子のいかなる所望の機能をも許容できないほど妨害したりしないアミノ酸を指定するものとする。実施例で使用される代表的なリーダーペプチドとしては、アミノ酸配列H3N-MDFQVQIFSFLLISASVIMSRG-CO2H(たとえば、配列番号2の残基1〜22を参照されたい;C末端が単一のV残基により伸長されたリーダーである配列番号4の残基1〜23も参照されたい)を有する本明細書中に開示される2E12または抗CD28抗体リーダーペプチド、およびヒトVK3リーダーペプチドH3N-MEAPAQLLFLLLLWLPDTTG-CO2H(たとえば配列番号358のヌクレオチド1〜60によりコードされる配列番号250)が挙げられる。
PIMS分子の一使用は、たとえばscorpionのような多重特異的結合性タンパク質のエフェクタードメインおよび/または特異的結合性ドメインの評価および/または最適化における使用である。こうしたPIMS分子は、単独で活性を有するとともに、Scorpion結合性ドメイン2(BD2)およびエフェクタードメイン-BD2 Scorpionリンカーをより良く評価するためのプラットフォームを提供する。エフェクター機能を有する特異的結合性タンパク質としての使用ならびにScorpion BD2活性およびエフェクタードメイン-BD2リンカー活性の評価における使用のほかに、PIMS分子は、たとえば、ADCC活性および/またはCDC活性のようなエフェクタードメイン活性を改変するように修飾可能であり、これには、N末端ヒンジ(たとえば、IgG1 SCC-Pヒンジ)、または定常サブ領域もしくはもエフェクタードメインと特異的結合性ドメイン/(複数可)との間に配置されたヒンジ様PIMSリンカー、のいずれかの変更が含まれうる。これまでに得られたデータから、ヒト化CD20 PIMSのADCC活性は、少なくともその対応するSMIPと同程度に良好であり、CD20を提示する細胞のような特異的標的に増強されたエフェクター機能を送達するための強力な他の選択肢の分子になりうる可能性を有することが示される。
本発明の特定の実施形態では、エフェクター機能を有する本明細書に記載の特異的結合性タンパク質(すなわちPIMS)のいずれかを提供する。ただし、エフェクター機能を有する特異的結合性のタンパク質またはペプチドは、少なくとも1つの特異的結合部位を構成する2つ以上の結合性ドメインポリペプチド配列(たとえば、VLおよびVH)を含む。結合性ドメインポリペプチド配列は、抗原可変領域に由来する。結合性ドメインの由来源となる抗体は、次のような抗体、すなわち、ポリクローナル抗体(単一特異性ポリクローナル抗体を含む)、モノクローナル抗体(mAb)、組換え抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体(たとえばCDR移植抗体)、ヒト抗体、一本鎖抗体、触媒抗体、および当技術分野で公知の任意の他の形態の抗体、さらにはそれらのフラグメント、変異体、または誘導体である。いくつかの実施形態では、結合性ドメインは結合性部位である(たとえばラクダ科動物結合性ドメイン)。いくつかの実施形態では、本発明に係るタンパク質の結合性ドメインのそれぞれは、免疫グロブリンの完全可変領域に由来する。好ましい実施形態では、結合性ドメインは、それぞれ、ヒトIg可変領域に基づく。他の実施形態では、タンパク質は、Ig可変領域のフラグメントに由来する。そのような実施形態では、各結合性ドメインポリペプチド配列は、所与のIg可変領域の相補性決定領域のそれぞれの配列に対応することが好ましい。同様に本発明の範囲内で利用可能と考えられるのは、所与のIg可変領域のCDRの全部ではなくそれよりも少ない部分に対応する結合性ドメインである。ただし、そのような結合性ドメインは、少なくとも1つの標的に特異的に結合する能力を保持するものとする。
本発明はまた、本発明に係るタンパク質またはペプチドをコードするポリヌクレオチド(単離されたまたは精製されたまたは純粋なポリヌクレオチド)、そのようなポリヌクレオチドを含むベクター(クローニングベクターおよび発現ベクターを含む)、および本発明に係るポリヌクレオチドまたはベクターでトランスフォームまたはトランスフェクトされた細胞(たとえば宿主細胞)を提供する。本発明に係るタンパク質またはポリペプチドをコードする際、ポリヌクレオチドは、定常サブ領域(Fcドメイン)、PIMSリンカー、および特異的結合性ドメインをコードし、これらはすべて、免疫グロブリン、好ましくはヒト免疫グロブリンに由来する。結合性ドメインは、全長可変領域配列(重鎖および/または軽鎖のいずれか)に対応するかまたはその部分配列に対応する配列を含有しうる。ただし、そのような結合性ドメインはそれぞれ、特異的に結合する能力を保持するものとする。定常サブ領域またはFcドメインは、全長免疫グロブリンFcドメイン配列に対応するかまたはその部分配列に対応する配列を有しうる。ただし、Fcドメインは、本明細書中に規定される少なくとも1つのエフェクター機能を呈するものとし、かつFcドメインは、完全抗体Fc領域ではないものとする。それに加えて、所与の結合性部位の結合性ドメインのそれぞれは、典型的には少なくとも8アミノ酸、好ましくは少なくとも13アミノ酸の長さであるリンカーペプチドを介して連結可能である。好ましいリンカー配列は、(Gly4Ser)n〔式中、n=3〜5〕のようなGly4Serモチーフに基づく配列である。
本発明はまた、ベクターと、公知のベクターから調製された構築物と、(ただし、それぞれ、本発明に係るポリヌクレオチドまたは核酸を含むものとする)、特定的には、本明細書中で規定される、たとえばPIMSをコードする任意の核酸を含む、遺伝子療法に有用な、送達構築物をはじめとする種々の公知の構築物のいずれかを含む組換え発現構築物と、本発明に係るベクターおよび/または他の構築物を用いて遺伝子工学的に操作された宿主細胞と、PIMSまたはそのフラグメントもしくは変異体をコードする核酸配列を組換え技術により含む発現構築物または他の構築物を投与する方法と、に関する。
本発明のさらなる態様は、本発明に係るポリヌクレオチドまたはクローニング/発現構築物のいずれかでトランスフォームもしくはトランスフェクトされたかまたはそれらを他の形で含有する宿主細胞を提供する。ポリヌクレオチドおよびクローニング/発現構築物は、トランスフォーメーション、トランスフェクション、およびトランスダクションをはじめとする当技術分野で公知の任意の方法を用いて、好適な細胞内に導入される。宿主細胞としては、たとえばex vivo遺伝子療法などのex vivo細胞療法を受ける被験者の細胞が挙げられる。本発明に係るポリヌクレオチド、ベクター、またはタンパク質を保有する場合の本発明の態様として利用可能と考えられる真核宿主細胞としては、被験者の自己細胞(たとえば、ヒト患者の自己細胞)のほかに、VERO細胞、HeLa細胞、チャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞系(発現PIMSのグリコシル化パターンを改変しうる改変CHO細胞を含む;米国特許出願公開第2003/0115614A1号明細書(参照により本明細書に組み入れられるものとする)を参照されたい)、COS細胞(たとえばCOS-7細胞)、W138細胞、BHK細胞、HepG2細胞、3T3細胞、RIN細胞、MDCK細胞、A549細胞、PC12細胞、K562細胞、HEK293細胞、HepG2細胞、N細胞、3T3細胞、スポドプテラ・フルギペルダ(Spodoptera frugiperda)細胞(たとえば、Sf9細胞)、サッカロミセス・セレビシアエ(Saccharomyces cerevisiae)細胞、ならびに本発明に係るタンパク質またはペプチドの発現および場合により単離に有用な当技術分野で公知の任意の他の真核細胞が挙げられる。同様に利用可能と考えられるのは、限定されるものではないが、エシェリキア・コリ(Escherichia coli)、バシラス・サブチリス(Bacillus subtilis)、サルモネラ・ティフィムリウム(Salmonella typhimurium)、ストレプトミセス属の放線菌をはじめとする原核細胞、または本発明に係るタンパク質もしくはペプチドの発現および場合により単離に好適な当技術分野で公知の任意の原核細胞である。とくに、原核細胞からタンパク質またはペプチドを単離する場合、封入体からタンパク質を抽出するため
の当技術分野で公知の技術を使用しうると考えられる。適切な宿主の選択は、本明細書に記載の教示から当業者の実施可能な範囲内にある。
いくつかの実施形態では、本発明に係る組成物、たとえば、PIMS、または本明細書中に記載のそのようなタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む組成物は、遺伝子療法などのためにin vivoもしくはin vitroで宿主細胞内でのコードタンパク質の発現を可能にするのに十分な条件下でかつ十分な時間をかけて投与するのに好適である。そのような組成物は、周知の方法に従って、投与に供される医薬組成物の形態に製剤化可能である。医薬組成物は、一般的には、製薬上許容される担体、賦形剤、または希釈剤と組み合わせて、1つ以上の組換え発現構築物および/またはそのような構築物の発現産物を含む。そのような担体は、利用される投与量および濃度ではレシピエントに対して非毒性であろう。本発明に係る核酸系製剤の場合または発現産物を含む製剤の場合、たとえば、真皮内経路、皮下経路、筋肉内経路、もしくは静脈内経路により、または所与の一群の状況下で好適な当技術分野で公知の任意の経路により、約0.01μg/kg〜約100mg/kg(体重)で投与されるであろう。好ましい投与量、たとえば、約1μg/kg〜約1mg/kgであり、約5μg/kg〜約200μg/kgがとくに好ましい。
抗原ポリペプチドに対するポリクローナル抗体は、一般的には、抗原ポリペプチドまたはそのフラグメントとアジュバントとの複数回の皮下注射または腹腔内注射を利用して、動物(たとえば、ウサギ、ハムスター、ヤギ、ヒツジ、ウマ、ブタ、ラット、アレチネズミ、モルモット、マウス、または任意の他の好適な哺乳動物種、さらには他の非哺乳動物種)内で産生される。アジュバントとしては、完全または不完全フロイントアジュバント、ミネラルゲル、たとえば、水酸化アルミニウム、および界面活性物質、たとえば、リゾレシチン、プルロニックポリオール、ポリアニオン、ペプチド、油エマルジョン、ならびにジニトロフェノールが挙げられるが、これらに限定されるものではない。BCG(カルメット・ゲラン(Calmette-Guerin)桿菌)およびコリネバクテリウム・パルバム(Corynebacterium parvum)もまた、潜在的に有用なアジュバントである。免疫化される種において免疫原性である担体タンパク質に抗原ポリペプチドをコンジュゲートすることが有用なこともあり、典型的な担体としては、キーホールリンペットヘモシアニン、血清アルブミン、ウシ科動物チログロブリン、またはダイズトリプシン阻害剤が挙げられる。また、免疫応答を増強するために、ミョウバンのような凝集剤も使用される。免疫化の後、動物から採血し、そして従来技術を用いて抗抗原ポリペプチド抗体力価に関して血清をアッセイする。ポリクローナル抗体は、検出された血清中で利用可能であるか、または、たとえば、抗原アフィニティークロマトグラフィーを用いて血清から精製可能である。
一例では、1つ以上のアミノ酸残基が特異的結合性ドメインの配列に追加された挿入変異体を提供する。挿入は、タンパク質の一方もしくは両方の末端に位置しうるか、または特異的結合性ドメインの内部領域中に定置しうる。本発明に係る変異体産物には、リーダー配列またはシグナル配列を除去して追加のアミノ末端残基を有するタンパク質を生成するようにした成熟PIMSが包含される。追加のアミノ末端残基は、他のタンパク質に由来しうるか、または特異的タンパク質に由来するものとして同定できない1つ以上の残基を含みうる。1位に追加のメチオニン残基を有するポリペプチド(たとえば、Met-1-PIMS)が利用可能と考えられ、2位および1位に追加のメチオニン残基およびリシン残基を有する本発明に係るポリペプチド(Met-2-Lys-1-PIMS)の場合も同様である。括弧内の表記は、記述される特徴(すなわちN末端残基)を強調したものであり、そのようなN末端を欠失している分子としてPIMSを規定しようとするものではない。Met-1-PIMSおよびMET-2-Lys-1-PIMSのそれぞれは、事実上、PIMSである。追加のMet残基、Met-Lys残基、もしくはLys残基(または一般に1つ以上の塩基性残基)を有する本発明に係るポリペプチドの変異体は、細菌宿主細胞内での組換えタンパク質産生の増大に有用である。
保存的置換I
側鎖特性 アミノ酸
脂肪族 非極性 G A P I L V
極性-非荷電 S T M N Q
極性-荷電 D E K R
芳香族 H F W Y
その他 N Q D E
他の選択肢として、保存的アミノ酸は、真下の表Bに示されるとおり、Lehninger, [Biochemistry, Second Edition; Worth Publishers, Inc. NY:NY (1975), pp.71-77]に記載されるように分類可能である。
保存的置換II
タイプ 側鎖特性 アミノ酸
非極性(疎水性) A.脂肪族: A L I V P
B.芳香族 F W
C.硫黄含有 M
D.境界 G
非荷電-極性 A.ヒドロキシル S T Y
B.アミド N Q
C.スルフヒドリル C
D.境界 G
正荷電(塩基性) K R H
負荷電(酸性) D E
保存的置換II
側鎖 特性 アミノ酸
非極性(疎水性) A.脂肪族: A L I V P
B.芳香族: F W
C.硫黄含有: M
D.境界: G
非荷電-極性 A.ヒドロキシル: S T Y
B.アミド: N Q
C.スルフヒドリル: C
D.境界: G
正荷電(塩基性) K R H
負荷電(酸性) D E
本発明はまた、PIMSポリペプチドの誘導体を提供する。誘導体としては、アミノ酸残基の挿入、欠失、置換のいずれでもない修飾を有するPIMSポリペプチドが挙げられる。好ましくは、修飾は、本質的に共有結合であり、その例としては、ポリマー、脂質、他の有機部分および無機部分との化学結合が挙げられる。本発明に係る誘導体は、特異的PIMSポリペプチドの血流中半減期を増大させるように調製可能であるか、または所望の細胞、組織、もしくは器官へのポリペプチドのターゲッティング能力を改良するようにデザイン可能である。
非免疫グロブリン系結合性分子に利用できない抗原特異的免疫グロブリン(たとえば抗体)の固有の特性を操作する特定の戦略が利用可能である。こうした代替手段に対するよりも、たとえば抗体系分子に対して有利に機能する戦略の良好な例は、免疫応答が進行するにつれて親和性の増大する抗体を生成するように免疫グロブリン遺伝子の体細胞超突然変異を利用する親和性成熟を介して標的への抗体の親和性をin vivo調節することである。このほかに、免疫グロブリンの構造ならびに免疫グロブリンの領域およびドメインを改変するために、組換え技術が開発されてきた。したがって、所与の抗原に対する改変された親和性を呈する、抗体に由来するポリペプチドを産生することが可能であり、こうしたポリペプチドを同定および精製または単離するためのいくつかの精製プロトコルおよびモニタリング選別が当技術分野で公知である。こうした公知の技術を用いて、抗原に対する低減または増大された親和性を呈する、抗体由来の結合性ドメインを含むポリペプチドを、得ることが可能である。改変された親和性を呈するポリペプチド変異体を生成するための戦略としては、タンパク質中に存在するアミノ酸を変化させるように、抗体をコードするDNAの部位特異的突然変異誘発またはランダム突然変異誘発を使用し、続いて、所望の変化、たとえば、改変されていない親または参照対象の抗体と対比して増大または低減された親和性を呈する抗体変異体を回収するようにデザインされたスクリーニング工程を行うことが挙げられる。
本発明に係るPIMSを含有しかつそれを発現するように、さまざまな発現ベクター/宿主系を使用することが可能である。こうした系としては、組換えバクテリオファージ、組換えプラスミド、組換えコスミド、または他の発現ベクターでトランスフォームされた細菌のような微生物、酵母発現ベクターまたは酵母シャトルベクターでトランスフォームされた酵母、ウイルス発現ベクター(たとえば、バキュロウイルスベクター)を感染させた昆虫細胞系、ウイルス発現ベクター(たとえば、カリフラワーモザイクウイルスCaMVベクター、タバコモザイクウイルスTMVベクター)でトランスフェクトされた植物細胞系または細菌発現ベクター(たとえば、TiもしくはpBR322プラスミド)でトランスフォームされた植物細胞系、あるいは動物細胞系が挙げられるが、これらに限定されるものではない。組換えPIMS産生に有用な哺乳動物細胞としては、VERO細胞、HeLa細胞、チャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞、、COS細胞(たとえばCOS-7細胞)、W138細胞、BHK細胞、HepG2細胞、3T3細胞、RIN細胞、MDCK細胞、A549細胞、PC12細胞、K562細胞、およびHEK293細胞が挙げられるが、これらに限定されるものではない。PIMSの組換え発現の代表的なプロトコルを本明細書の以下に記載する。
タンパク質精製技術については、当業者に周知である。こうした技術は、あるレベルで、ポリペプチド画分と非ポリペプチド画分との粗分画を含む。少なくとも1つの他のタンパク質からPIMSポリペプチドを分離して、PIMSポリペプチドを精製するが、多くの場合、部分精製もしくは完全精製(または均一になるまで精製)を達成すべく、クロマトグラフィー、電気泳動、および/または他の公知の技術を用いてさらなる精製を行うことが望ましい。純粋PIMSペプチドの調製にとくに適した分析法は、イオン交換クロマトグラフィー、排除クロマトグラフィー、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、および等電点フォーカシングである。ペプチドを精製するとくに効率的な方法は、高速タンパク質液体クロマトグラフィーおよびHPLCである。
たとえば、標的細胞に対するADCCを誘導するためのエフェクター細胞としては、ヒト白血球、マクロファージ、単球、活性化好中球、活性化ナチュラルキラー(NK)細胞、および好酸球が挙げられる。エフェクター細胞は、FCαR(CD89)、FcγRI、FcγRII、FcγRIII、および/またはFCεR1を発現し、その例としては、単球および活性化好中球が挙げられる。
本発明は、1つ以上の結合性パートナーに結合するPIMSタンパク質ならびにその変異体および誘導体を提供する。この結合イベントは、疾患、障害、または病態(好ましくは、ヒトが罹患しているもの)の症状の治療、予防、または改善に有用である。こうした方法の好ましい実施形態では、PIMSタンパク質は、腫瘍特異的細胞表面マーカーのような標的を有する細胞を、細胞傷害活性を呈する免疫系の細胞のようなエフェクター細胞に会合させる。他の実施形態では、適正標的が免疫系の細胞傷害性細胞のようなエフェクター細胞と確実に会合するように、2つ以上の特異的結合性部位を有するPIMSタンパク質は、2つの異なる疾患特異的、障害特異的、または病態特異的な細胞表面マーカーに特異的に結合する。このほかに、抗原活性の誘導もしくは増大または抗原活性の阻害のために、PIMSタンパク質を使用することが可能である。PIMSタンパク質はまた、組合せ療法および緩和レジームに好適である。
PIMSの構築
図1に示されるように、PIMSペプチドは、次の構造ドメイン、すなわち、N末端に配置された定常サブ領域および少なくとも1つのC末端に配置された特異的結合性部位を有し、これらの2つのドメインのそれぞれは、免疫グロブリンヒンジに由来しうるPIMSリンカーにより連結される。いくつかの実施形態では、免疫グロブリンに由来するヒンジ領域は、定常サブ領域のN末端に位置するが、定常サブ領域は、依然として、特異的結合性部位のN末端側に配置される。いくつかの実施形態では、発現されたばかりの新生のPIMS分子のN末端は、コードペプチドの発現および分泌に有用であることが当技術分野で公知であるリーダーペプチドでありうる。このリーダーペプチドは、さらに、免疫グロブリンヒンジに由来する領域に共有結合で連結可能であるか、または定常サブ領域に直接連結可能である(ヒンジ領域に由来するN末端ドメインを欠失しているPIMS分子)。
W0001 PIMS中に見られるドメインの一般的構成(すなわち、CH2領域とCH3領域とを含む定常サブ領域Fcエフェクタードメインに連結されたN末端ヒンジ領域、それに続いて、PIMSリンカー、およびC末端に配置された結合性ドメイン)に一致するそのほかのPIMS分子を構築した。これらのPIMS分子をW0002〜W0009で表した。それらの配列は、配列番号360〜375で示される。W0002〜W0007はそれぞれ、2E12結合性ドメインを含み、CD28に特異的に結合する。W0008は、2Lm20-4 VHVL 12結合性ドメインを含み、そしてW0009は、2Lm20-4 VHVL 17を含み、それぞれ、CD20に特異的に結合する。これらのPIMSのアミノ酸配列さらには代表的コード核酸配列の特徴を表7に示す。したがって、所望の分子を標的にすべくさまざまな特異的結合性ドメインをPIMS中で使用しうることは明らかである。
異なる結合性ドメイン、異なるPIMSリンカー長さ、異なるPIMSリンカーソースなどを探索するさらに他のPIMS分子を構築した。表7中のいくつかのPIMS分子に対して同定された特徴を含めて、これらのそのほかのPIMS分子の構造を配列リスト中に提供する。これらのPIMS分子のいくつかは、表8に示される構成を呈する。
CHO-S細胞内へのPIMSコードポリヌクレオチドのトランスフェクション
本来のトランスフェクション実験を行う1日前、2つの滅菌フラスコのそれぞれに、8mM L-グルタミンが添加された250mlのFreestyle(登録商標)CHO発現培地中5×105細胞/mlで接種した。8% CO2を用いて37℃でフラスコをインキュベートし、70rpmで回転させた。トランスフェクションの日に、各フラスコ中の細胞を計数し、106細胞/mlになるようにFreestyle(登録商標)培地を添加した。個別の15ml滅菌チューブ中で、313μgのFreestyle(登録商標)Max Transfection試薬(1.0μg/ml)を4,687μlの OptiPro(登録商標)SFMに添加し、そして313μgのW0001 DNAプラスミド(1.0μg/ml)を4,687μlのOptiPro SFM(登録商標)に添加した。希釈されたFreestyle(登録商標)Max Transfection試薬を希釈状されたW0001プラスミドに添加し、そして室温で10分間インキュベートした。次に、DNA-Freestyle(登録商標)Max Reagent複合体を細胞の入ったフラスコに徐々に添加し、そして70rpmで回転するオービタルシェーカー上、37℃、8% CO2で細胞をインキュベートした。7日後、各フラスコの上清を回収し、500mlの全体積になるように再び組み合わせ、次に、2μmフィルターに通して濾過した。W0001タンパク質濃度は、ELISAにより測定したところ、7.38μg/mlであった。
発現試験
エフェクター機能を有する特異的結合性タンパク質をコードする以上に記載の核酸またはPIMS分子を用いて、発現試験を行った。PIMSタンパク質をコードする核酸をCOS細胞内に一過的にトランスフェクトし、この細胞の異種遺伝子発現を許容する周知の条件下にトランスフェクト細胞を保持した。先に記載したようにPEIまたはDEAE-デキストランを用いてDNAをCOS細胞内に一過的にトランスフェクトした(PEIに対しては、Boussif O. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 92: 7297-7301, (1995)(参照により本明細書に組み入れられるものとする)、Pollard H. et al., J. Biol. Chem. 273:7507-7511, (1998)(参照により本明細書に組み入れられるものとする)を参照されたい)。それぞれの新しい形態の平均発現レベルを決定するために、それぞれの新しい分子の多数の独立したトランスフェクションを行った。PEIによるトランスフェクションでは、COS細胞をDMEM/10% FBS培地で60mmの組織培養プレート上にプレーティングし、トランスフェクションの日に約90%の集密度になるように一晩インキュベートした。抗生物質を含有しない無血清DMEMに培地を変更して4時間インキュベートした。トランスフェクション培地(4ml/プレート)は、50μgのPEIおよび10〜20μgの対象のDNAプラスミドたとえばW0001プラスミドと共に無血清DMEMを含有していた。トランスフェクション培地をボルテックスにより混合し、室温で15分間インキュベートし、そして既存の培地を吸引した後、プレートに添加した。上清の捕集前の3〜7日間にわたり培養物をインキュベートした。培養物上清をSDS-PAGEおよびウェスタンブロッティングによりタンパク質発現に関してアッセイした。
ELISA結合アッセイ
PIMS分子、SMIP分子、およびScorpion分子を用いて、比較に基づくELISA結合アッセイを行った。2つの捕捉用抗体、すなわち、高親和性および低親和性の抗CD16抗体を使用した。アッセイを行うために、MaxiSorbプレート(Costar MaxiSorb黒色プラスチック96ウェルプレート)をそれぞれ最初に100μlの2μg/ml抗CD16低親和性または高親和性抗体でコーティングした(CD16 mIgG高親和性(870μg/ml): 7.8μl/3.4ml PBS; CD16 mIgG低親和性(560μg/ml): 23.6μl/6.6ml PBS)。プレートを覆って、4℃で一晩インキュベートした。翌朝、各プレートを200μlのNFDM(1日前に調製されたPBS/3%脱脂粉乳、3g/100ml)で2回洗浄した。次に、各ウェルに200μlのNFDMを添加することによりプレートをブロックし、室温で1時間インキュベートした。最高濃度未満でウェルに120μlのNFDMを添加することにより、希釈プレート(96ウェルプラスチックプレート)を作製した(カラム1〜7のC〜H)。続いて、8μg/mlの対象のタンパク質120μlを添加した。CD16高および低の対象のタンパク質(POI)のアッセイ:SO129(抗CD20×抗CD20多重特異的結合性タンパク質またはscorpion;1.2mg/ml)3.32μl〜500μl PBS;2Lm20-4(抗CD20 SMIP;1.0mg/ml−54mg/mlストックから希釈)、4μl〜500μl PBS;W0001(抗CD28 PIMS;348μg/ml)11.5μl PBSを、次に、500μlの最終体積になるように添加した。
Jurkat細胞結合アッセイ
W0001 PIMSのようなPIMS分子の特異的結合性を評価するために、結合試験を行った。最初に、従来技術を用いてJurkat細胞をプレーティングした。接種されたマルチウェルプレートに、プレートを横切って20μg/mlから0.16μg/mlまで2倍漸減を用いて、CD28精製タンパク質を添加した。タンパク質を含有しない1つのウェルは、バックグラウンド対照としての役割を果たした。
CD3+リンパ球結合アッセイ
また、CD3+リンパ球へのW0001 PIMSのようなPIMS分子の特異的結合性を評価するために結合試験を行った。試験のデザインは、フィコエリトリンコンジュゲート化ネズミ科動物抗CD3+抗体でリンパ球調製物のCD3+画分を標識することと、PIMSおよびSMIPの定常サブ領域に結合可能なFITC標識化ヤギ抗ヒト二次抗体を用いて、これらの細胞に結合するPIMS、SMIP、またはバックグラウンドを検出することと、を含む。
結合競合
B細胞への結合に関して、TRU-016、抗CD37 SMIPと競合する抗CD37 PIMSの能力を測定するために、結合試験を行った。10mLのRAMOS細胞を2×106細胞/mLの濃度になるようにTSA/FBS(0.5% FBSを含む1×TSA-50mM Tris HCl pH7.8、0.9% NaCl)中で再懸濁させた。この細胞懸濁液100μlを200,000細胞/ウェルになるように96ウェルU底プレートの個々のウェルに添加した。プレートを遠心分離して細胞をペレット化し、TSA/FBSを除去した。競合タンパク質の希釈を希釈プレート中であらかじめ行った。競合タンパク質の開始濃度は1.0μMであり、タンパク質は逐次3倍希釈した。100μlの希釈された競合タンパク質をU底プレートのウェルに添加した。100μLの12nM TRU-016-Eu(ユウロピウム標識化TRU-016)を各ウェル中の100μLの競合タンパク質および細胞に添加し、各ウェルで6nM TRU-016-Euの最終濃度を得た。タンパク質および細胞を4℃で30分間インキュベートした。処理細胞を200μLのTSA/FBSで3回洗浄した。細胞を200μLの強化溶液中に再懸濁させ、黄色の96ウェルプレートに移し、5分間振盪し、次に、EnVision-プレートリーダー(PerkinElmer、Waltham、MA)で読み取った。結果を図9に示す。結果から示されるように、PIMSリンカーの長さ(10〜25アミノ酸長を検査した)にかかわらず、かつPIMSリンカー(のタイプH7またはH65)にかかわらず、種々のPIMS分子はいずれもその濃度が増加するにつれてTRU-016-Euと置き換わる。データから、さまざまなPIMSリンカーは、CD37に結合するさまざまなPIMSにより実証されるように機能的であり、H65構造に基づくPIMSリンカーを含有するPIMSは、免疫グロブリンヒンジ領域に由来するH7リンカーに基づくPIMSリンカーを含有するPIMSよりも良好に結合することが確認される。
PIMSのそのほかの結合試験
A.Wil2-S細胞への抗CD20 PIMSの結合
Wil2-S B細胞結合試験では、100μg/mlのPIMSを使用した。簡潔に述べると、図6に示されるように、1ウェルあたり5×105個のWil2-S B細胞を、分子(たとえば、PIMSまたはSMIP)のそれぞれと共に、FACS緩衝液(1×PBS、1%ウシ胎仔血清、0.02%アジ化ナトリウム)中、氷上でインキュベートした。フィコエリトリン(PE)(Jackson Immunoresearch # 109-116-098)にコンジュゲートされたヤギ抗ヒトIgG(ガンマ特異的)を用いて、FACS緩衝液中、1:100希釈で結合を検出した。CellQuestソフトウェアを用いてFACsCaliburによる一色フローサイトメトリーにより結果を分析した。WIL2-S細胞への抗CD20 PIMSの結合を評価するほかに、表面上にCD20を発現するWil2-S細胞への抗CD20 SMIPの結合をも評価した。以上で述べたように、SMIP分子またはPIMS分子のFc部分を認識して図6に示されるように蛍光シグナル(幾何平均として表される)を誘起する蛍光標識化二次抗体を用いて、結合の検出を達成した。その図では、2Lm20-4sccは、DNE076としても知られるLH SMIPであり、2Lm20-4HL17は、17アミノ酸のgly4serリンカーを有するHL SMIPであり、DNE079としても知られ、2Lm20-4HL12は、12アミノ酸のgly4serリンカーを有するHL SMIPであり、DNE078としても知られ、PIMS20-17は、W0009としても知られ、PIMS20-12は、W0008としても知られる。
また、Wil2-S B細胞に結合する抗DR PIMS分子の能力を評価するために、結合試験を行った。対象のタンパク質の適切な置換を行って、以上に記載の結合アッセイを使用した。簡潔に述べると、500,000個のWil2-S細胞をマルチウェルプレートの各ウェルに配置し、FACS緩衝液(1×PBS、1% FBS、0.02%アジ化ナトリウム)中、氷上で、試験対象のPIMSまたはSMIPの1つと共にインキュベートした。FACS緩衝液中でPEコンジュゲート化ヤギ抗ヒトIgG(ガンマ特異的)二次抗体(Jackson Immunoresearch #109-116-098)の1:100希釈液に細胞を暴露した後、フィコエリトリンの検出を達成した。図7に示される結果から、抗DR PIMS分子の結合は、PIMSリンカーに強く依存することがわかる。H7リンカーを有する抗DR PIMSであるW0035は、最小の結合活性を有する。H62リンカーを有する他の抗DR PIMSであるW0036は、W0035よりも良好に結合する。H65リンカーを含有するW0056は、親の抗DR SMIP(M0019)に匹敵する最良の結合活性を呈した。
他方の結合試験により、Ramos B細胞に結合するマウス抗CD37 PIMSおよび抗CD19 PIMSの能力を評価した。以上の一般的な記載および実施例5の記載と同じようにアッセイを行った。その結果を図9に示す。この実験での試験対象のタンパク質は、aHer2(抗Her2)であった。Her2)、TRU-016(抗CD37 SMIP)、W0028(マウス抗CD37 PIMS)、W0029(半ヒト化抗CD19 SMIP)、W0030(マウス抗CD19 PIMS、およびW0031(異なるマウス抗CD19 PIMS)に関連する開示について、実施例12を参照されたい。各タンパク質ごとに、16.7μg〜0.01μgにわたる範囲で3:1逐次希釈液を調製した。図9の結果に示されるように、TRU-016 SMIPおよびW0028は、タンパク質の濃度が0.01μg/mlから増大すると、他のPIMSまたはaHer2よりも有意に多くの量で結合するが、図9ではまた、試験した種々のPIMSタンパク質がそれらの標的に結合したことが確認される。
Jurkat T細胞への抗CD28 PIMSの結合についても調べた。さまざまな抗CD28 PIMSタンパク質、すなわち、W0001(H7 PIMSリンカーを有する抗CD28 PIMS)、W0050(H9 PIMSリンカーを有する抗CD28 PIMS)、W0051(H47 PIMSリンカーを有する抗CD28 PIMS)、W0052(H56 PIMSリンカーを有する抗CD28 PIMS)、W0053(H62 PIMSリンカーを有する抗CD28 PIMS)、W0083(H65 PIMSリンカーを有する抗CD28 PIMS)、および抗CD28 SMIPを分析した。この結合試験を行うために、以上に述べたタンパク質のそれぞれについて、10μg/mlから5ng/mlまでのさまざまな濃度で50μlのタンパク質溶液をV字形96ウェルプレートのウェルに個別に添加した。次に、50μl中2.5×105個のJurkat細胞を各ウェルに添加した。次に、サンプルを氷上で30分間インキュベートし、PBS中1% BSAで2回洗浄し、そして、PBS中1% BSAで抗ヒトIgG PEの1:200希釈液を添加した。プレートを氷上でさらに30分間インキュベートし、PBS中1% BSAで1回洗浄した。細胞をPBS中2%ホルムアルデヒドに再懸濁させた。Facscanを用いて各ウェル中での結合の平均蛍光強度を測定した。
また、FcレセプターFcγRIIIaおよびFcγRIIIbとして同定されるCD16を用いて、PIMS分子の定常サブ領域の結合試験を行った。CD16は、IgG抗体のFc領域に結合する。CD16へのPIMSの結合性を評価するために、低親和性CD16を利用した。アッセイを行うために、Ramos細胞を350,000細胞/ウェルで細胞培養物ウェルに添加した。TRU-016(抗CD37 SMIP)および抗CD37 PIMS分子を含む対象のタンパク質の溶液を0.011μg/ウェルから1.2μg/ウェルまでの範囲の濃度で添加した。CD16を1μg/ウェルになるように添加した。次に、反応混合物を200μl FACS緩衝液(1×PBS、1% FBS、0.02%アジ化ナトリウム)で2.5回洗浄した。次に、フィコエリトリン(PE)にコンジュゲートされた1:100希釈のヤギ抗マウス(Jackson Immunoresearch # 115-116-071)を添加し、混合物を氷上で45分間インキュベートした。続いて、反応混合物をFACS緩衝液で1.5回洗浄し、そして分析に付した。CD16lo(低親和性CD16)結合データを表9に示す。
PIMSのADCC活性
PIMSにより誘導または媒介される抗体依存性細胞傷害(ADCC)を評価するために、ADCCアッセイを行った。簡潔に述べると、10% FBS(#16140-071, Gibco/Invitrogen, Grand Island, NY)を含むIscoves培地(#12440-053, Gibco/Invitrogen, Grand Island, NY)中、37℃で、1×107細胞/ml BJAB B細胞を、500μCi/ml 51Crクロム酸ナトリウム(#CJS1, Amersham Biosciences, Piscataway, NJ)で2時間標識した。次に、10% FBSを含むRPMI(#11875-093, Gibco/Invitrogen, Grand Island, NY)培地で51Cr担持BJAB B細胞を3回洗浄し、そしてRPMI中に4×105細胞/mlで再懸濁させた。Lymphocyte Separation Medium(#50494, MP Biomedicals, Aurora, OH)を用いて遠心分離により、社内のドナー由来の末梢血単核細胞(PBMC)をヘパリン処理全血から単離し、RPMI培地で2回洗浄し、10% FBSを含むRPMI中に5×106細胞/mlで再懸濁させた。10% FBSを含むRPMI培地に最終濃度の4倍で試薬サンプルを添加し、各試薬の3つの10倍逐次希釈液を調製した。次に、指示最終濃度が達成されるように、これらの試薬を50μl/ウェルで96ウェルU底プレートに添加した。次に、51Cr標識化BJAB細胞を50μl/ウェル(2×104細胞/ウェル)でプレートに添加した。
PIMSのCDC活性
補体依存性細胞傷害(CDC)は、B細胞のような真核生物(たとえば哺乳動物)細胞が死滅する他の機序を提供する。特異的標的結合を呈するこれらの一本鎖分子が、表面上にPIMS結合性パートナーを発現するB細胞のように、標的細胞のCDCを誘導または媒介することが可能であるかを調べるために、PIMSのCDC活性を探究した。CDC活性を評価するために、1ウェルあたり5〜2.5×105個のRamos B細胞を50μlのIscoves(#12440-053, Gibco/Invitrogen, Grand Island, NY)培地(FBSなし)で96ウェルV底プレートに添加した。アッセイに付したタンパク質は、2Lm20-4(ヒト化抗CD20 SMIP)、TRU-015(抗CD20 SMIP)、W0008(10アミノ酸PIMSリンカーと共にHL配置構成の結合性ドメインを有するPIMS)、W0009(15アミノ酸PIMSリンカーと共にHL配置構成の結合性ドメインを有するPIMS)、および陰性対照としての培地単独でであった。個別に、Iscoves中のこれらの各タンパク質(またはIscoves単独)を指示最終濃度の2倍の濃度で50μlでウェルに添加した。細胞および試薬を37℃で45分間インキュベートした。FBSを含まないIscoves培地で細胞を2 1/2回洗浄し、指示濃度で96ウェルプレート中でヒト血清(# A113, Quidel, San Diego, CA)を含むIscoves中に再懸濁させた。次に、細胞を37℃で90分間インキュベートした。細胞を遠心分離により洗浄し、125μl冷PBS中に再懸濁させた。細胞をFACクラスターチューブ(#4410, CoStar, Corning, NY)に移し、ヨウ化プロピジウム(# P-16063, Molecular Probes, Eugene, OR)を含む125μl PBSを5μg/mlで添加した。細胞をヨウ化プロピジウムと共に暗所中、室温で15分間インキュベートし、次に、氷上に配置し、CellQuestソフトウェア(Becton Dickinson)を備えたFACsCaliburを用いて読取りおよび分析を行った。
PIMSによる細胞増殖阻害
以上の実施例により、PIMS分子は、ADCCおよび/またはCDCにより細胞死を誘導するのに有用であることが確証された。それに加えて、PIMS分子は、真核細胞の増殖を阻害するのに有用である。PIMS分子のこの性質を確証するために、10% FCS(Gibco/Invitrogen #01-40200J, Grand Island, NY)を含むRPMI 1640(Gibco Invitrogen #11875, Grand Island, NY)を用いて、図17に示される最終濃度の4倍の濃度になるように、種々のPIMSタンパク質、SMIPタンパク質、および他の対照の4倍希釈液を調製した。SU-DHL-6 B細胞(DMSZ # ACC 572, Braunschweig, Germany)を、2×105細胞/mlの濃度になるように、10% FCSを含むRPMI中に懸濁させた。黒色の96ウェル平底プレートをアッセイに使用し、所要により、200マイクロリットルの最終ウェル体積になるように培地をウェルに添加した。次に、細胞を50マイクロリットル/ウェル(104細胞/ウェル)で添加した。次に、対象のタンパク質を50マイクロリットル/ウェルでウェルに個別に添加した。培地中のFab'2ヤギ抗マウスIgG(GAM; Jackson Immunoresearch Labs #115-006-062, West Grove, PA)またはFab'2ヤギ抗ヒトIgG(GAH; Jackson Immunoresearch Labs #109-006-008, West Grove, PA)の架橋性溶液を調製した。対象のタンパク質の濃度の3倍の架橋剤の最終濃度が得られるように、4倍希釈液を調製した。次に、これらのタンパク質をウェルに個別に添加した。ただし、ヤギ抗ヒト二次抗体をPIMおよびSMIPと共にウェルに添加し、ヤギ抗マウス二次抗体をモノクローナル抗体とにウェルに添加した(図17参照)。プレートを5% CO2中、37℃で72時間インキュベートした。
抗Her2 PIMS
Her2(neu、ErbB-2、およびERBB2としても知られる)は、侵攻性乳癌に関連するタンパク質である。このタンパク質は、ErbBタンパク質ファミリーまたは表皮増殖因子レセプターファミリーのメンバーである。それは、通常、シグナルトランスダクション経路に関与して細胞の増殖および分化を引き起こす細胞膜表面結合レセプターチロシンキナーゼであり、それは、乳癌、卵巣癌、胃癌などの治療のような抗癌治療の標的になるとみなされてきた。Her2を特異的に認識するPIMS分子は、Her2を高レベルで発現する細胞すなわち癌細胞に、PIMSのADCC、CDC、および増殖阻害性をターゲッティングすることが期待されよう。
Claims (31)
- 抗体に由来する定常サブ領域と、
該定常サブ領域のC末端に配置されたPIMSリンカーと、
VLドメインおよびVHドメインの少なくとも1つを含む特異的結合性ドメインと、ただし、該特異的結合性ドメインは、該PIMSリンカーのC末端に配置されるものとする、
を含む特異的結合性タンパク質であって、少なくとも1つの標的に特異的に結合しかつ抗体分子の少なくとも1つのエフェクター機能を呈する、上記特異的結合性タンパク質。 - 前記定常サブ領域がCH2ドメインおよびCH3ドメインを含み、該CH2ドメインおよび該CH3ドメインの少なくとも1つが完全抗体ドメインである、請求項1に記載の特異的結合性タンパク質。
- 前記抗体ドメインが、IgG抗体ドメイン、IgE抗体ドメイン、IgD抗体ドメイン、IgA抗体ドメイン、およびIgM抗体ドメインよりなる群から選択される、請求項2に記載の特異的結合性タンパク質。
- 前記CH2ドメインおよび前記CH3ドメインの少なくとも1つが、配列番号377および配列番号379よりなる群から選択される配列を含む、請求項2に記載の特異的結合性タンパク質。
- 前記エフェクター機能が抗体依存性細胞傷害性または補体媒介性細胞傷害である、請求項1に記載の特異的結合性タンパク質。
- 前記PIMSリンカーがタイプII C-レクチンのストーク領域に由来する、請求項1に記載の特異的結合性タンパク質。
- 前記PIMSリンカーが、抗体ヒンジ領域、CD72ストーク領域、NKG2a、およびNKG2a C18Sよりなる群から選択される、請求項1に記載の特異的結合性タンパク質。
- 前記PIMSリンカーが、IgGヒンジ、IgAヒンジ、IgDヒンジ、IgEヒンジ、およびそれらの変異体よりなる群から選択される抗体ヒンジ領域である、請求項1に記載の特異的結合性タンパク質。
- 前記ヒンジが、ヒトIgG1、ヒトIgG2、ヒトIgG3、ヒトIgG4、およびそれらのヒト変異体よりなる群から選択される抗体ヒンジ領域である、請求項8に記載の特異的結合性タンパク質。
- 前記PIMSリンカーが、鎖間ジスルフィド結合を形成するための単一のシステイン残基を有する、請求項1に記載の特異的結合性タンパク質。
- 前記PIMSリンカーが、鎖間ジスルフィド結合を形成するための2つのシステイン残基を有する、請求項1に記載の特異的結合性タンパク質。
- 前記PIMSリンカーが、配列番号61〜118よりなる群から選択される配列を含む、請求項1に記載の特異的結合性タンパク質。
- 前記タンパク質が、CD3、CD19、CD20、CD28、CD37、およびDRよりなる群から選択される標的に特異的に結合する、請求項1に記載の特異的結合性タンパク質。
- 前記タンパク質が、W0001、W0002、W0003、W0004、W0005、W0006、W0007、W0008、W0009、W0011、W0012、W0023、W0024、W0025、W0028、W0029、W0030、W0031、W0035、W0036、W0041、W0042、W0044、W0045、W0050、W0051、W0052、W0053、W0055、W0056、W0057、W0083、W0087、W0094、W0095、W0096、およびW0097よりなる群から選択される、請求項1に記載の特異的結合性タンパク質。
- 前記VLドメインおよびVHドメインがドメイン間リンカーにより分離される、請求項1に記載の特異的結合性タンパク質。
- 前記ドメイン間リンカーの構造が(Gly4Ser)n〔式中、n=1〜5〕である、請求項15に記載の特異的結合性タンパク質。
- 前記ドメイン間リンカーが、配列番号544、配列番号545、配列番号184、配列番号240、配列番号242、配列番号243、配列番号245、配列番号247、配列番号248、配列番号539、および配列番号540よりなる群から選択される配列を含む、請求項15に記載の特異的結合性タンパク質。
- 前記VLドメインおよび前記VHドメインの少なくとも1つが、配列番号2の残基23〜128、配列番号2の残基145〜265、配列番号2の残基520〜640、配列番号2の残基661〜772、配列番号28の残基508〜629、配列番号28の残基647〜754、配列番号30の残基508〜629、配列番号30の残基652〜759、配列番号44の残基21〜127、配列番号44の残基143〜264、配列番号354の残基1〜121、および配列番号354の残基134〜239よりなる群から選択される配列を含む、請求項1に記載の特異的結合性タンパク質。
- 前記サブ領域のN末端に配置されたヒンジをさらに含む、請求項1に記載の特異的結合性タンパク質。
- 前記ヒンジが、前記定常サブ領域と前記特異的結合性ドメインとの間に配置された前記PIMSリンカーと同一の配列を含む、請求項19に記載の特異的結合性タンパク質。
- 前記定常サブ領域のC末端に配置された少なくとも第2の特異的結合性ドメインをさらに含む、請求項1に記載の特異的結合性タンパク質。
- 前記特異的結合性ドメインのそれぞれが同一の標的に結合する、請求項21に記載の特異的結合性タンパク質。
- 請求項1に記載の特異的結合性タンパク質を産生する方法であって、
請求項1に記載の特異的結合性タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む細胞と培地とを接触させることと、
該ポリヌクレオチドの発現に好適な条件下の該培地中で該細胞をインキュベートすることと、
を含む、上記方法。 - 癌、炎症、および自己免疫性障害よりなる群から選択される病態を治療する方法であって、必要とする生物に有効量の請求項1に記載の特異的結合性タンパク質を投与することを含む、上記方法。
- 前記生物がヒトである、請求項24に記載の方法。
- 癌、炎症、および自己免疫性障害よりなる群から選択される病態の症状を改善する方法であって、必要とする生物に有効量の請求項1に記載の特異的結合性タンパク質を投与することを含む、上記方法。
- 前記生物がヒトである、請求項26に記載の方法。
- 癌、炎症、および自己免疫性障害よりなる群から選択される病態を治療するための医薬の調製における、請求項1に記載の特異的結合性タンパク質の使用。
- 前記生物がヒトである、請求項28に記載の使用。
- 癌、炎症、および自己免疫性障害よりなる群から選択される病態の症状を改善するための医薬の調製における、請求項1に記載の特異的結合性タンパク質の使用。
- 前記生物がヒトである、請求項30に記載の使用。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US94839707P | 2007-07-06 | 2007-07-06 | |
PCT/US2008/069378 WO2009023386A2 (en) | 2007-07-06 | 2008-07-07 | Binding peptides having a c-terminally disposed specific binding domain |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2010532764A true JP2010532764A (ja) | 2010-10-14 |
JP2010532764A5 JP2010532764A5 (ja) | 2011-08-25 |
Family
ID=40351400
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2010515288A Pending JP2010532764A (ja) | 2007-07-06 | 2008-07-07 | C末端に配置された特異的結合性ドメインを有する結合性ペプチド |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20090148447A1 (ja) |
EP (1) | EP2167130A2 (ja) |
JP (1) | JP2010532764A (ja) |
CN (1) | CN101990439A (ja) |
AU (1) | AU2008287195A1 (ja) |
BR (1) | BRPI0814060A2 (ja) |
CA (1) | CA2691819A1 (ja) |
WO (1) | WO2009023386A2 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2013524777A (ja) * | 2010-03-12 | 2013-06-20 | イミュノジェン, インコーポレイテッド | Cd37結合分子及びそのイムノコンジュゲート |
Families Citing this family (46)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7754208B2 (en) * | 2001-01-17 | 2010-07-13 | Trubion Pharmaceuticals, Inc. | Binding domain-immunoglobulin fusion proteins |
US7829084B2 (en) * | 2001-01-17 | 2010-11-09 | Trubion Pharmaceuticals, Inc. | Binding constructs and methods for use thereof |
US20030133939A1 (en) * | 2001-01-17 | 2003-07-17 | Genecraft, Inc. | Binding domain-immunoglobulin fusion proteins |
ES2460517T3 (es) | 2005-07-25 | 2014-05-13 | Emergent Product Development Seattle, Llc | Reducción de células b mediante el uso de moléculas de unión específica a cd37 y de unión específica a cd20 |
AU2007257692B2 (en) * | 2006-06-12 | 2013-11-14 | Aptevo Research And Development Llc | Single-chain multivalent binding proteins with effector function |
PE20140196A1 (es) | 2007-08-09 | 2014-03-19 | Boehringer Ingelheim Int | Anticuerpos anti-cd37 |
US8629246B2 (en) | 2007-09-26 | 2014-01-14 | Ucb Pharma S.A. | Dual specificity antibody fusions |
DK2132228T3 (da) * | 2008-04-11 | 2011-10-10 | Emergent Product Dev Seattle | CD37-immunterapeutisk middel og kombination med bifunktionelt kemoterapeutisk middel deraf |
KR20110044992A (ko) * | 2008-07-02 | 2011-05-03 | 이머전트 프로덕트 디벨롭먼트 시애틀, 엘엘씨 | TGF-β 길항제 다중-표적 결합 단백질 |
ES2620603T3 (es) * | 2008-09-26 | 2017-06-29 | Ucb Biopharma Sprl | Productos biológicos |
CN102227447A (zh) | 2008-10-02 | 2011-10-26 | 新兴产品开发西雅图有限公司 | Cd86拮抗物多靶点结合蛋白 |
EA032828B1 (ru) * | 2008-10-10 | 2019-07-31 | Аптево Рисёрч Энд Девелопмент Ллс | Иммунотерапевтические средства против комплекса tcr |
LT3460056T (lt) * | 2009-11-02 | 2020-12-28 | University Of Washington | Terapinės nukleazės kompozicijos ir būdai |
WO2011079308A2 (en) | 2009-12-23 | 2011-06-30 | Emergent Product Development Seattle, Llc | Compositions comprising tnf-alpha and il-6 antagonists and methods of use thereof |
CN105693861A (zh) | 2009-12-29 | 2016-06-22 | 新兴产品开发西雅图有限公司 | 异二聚体结合蛋白及其应用 |
ES2788198T3 (es) | 2010-05-14 | 2020-10-20 | Univ Oregon Health & Science | Vectores de CMVH y CMVRh recombinantes que codifican un antígeno heterólogo aislado del virus de la hepatitis B y usos de los mismos |
SG185354A1 (en) | 2010-05-20 | 2012-12-28 | Ablynx Nv | Biological materials related to her3 |
US20120189618A1 (en) * | 2010-07-16 | 2012-07-26 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Superior efficacy of cd37 antibodies in cll blood samples |
CN101912599A (zh) * | 2010-07-30 | 2010-12-15 | 北京凯因科技股份有限公司 | 重组人白介素15在治疗恶性腹水瘤药物中的应用 |
EP2638073A4 (en) * | 2010-11-09 | 2014-05-07 | Altimab Therapeutics Inc | PROTEIN COMPLEXES FOR ANTIGEN BINDING, AND METHODS OF USE |
BR112013025208A2 (pt) | 2011-04-01 | 2018-09-11 | Immunogen Inc | moléculas de ligação a cd-37 e imunoconjugados das mesmas |
IL300276A (en) | 2011-04-29 | 2023-04-01 | Univ Washington | Therapeutic nuclease preparations and methods |
UA117218C2 (uk) | 2011-05-05 | 2018-07-10 | Мерк Патент Гмбх | Поліпептид, спрямований проти il-17a, il-17f та/або il17-a/f |
RS57397B8 (sr) | 2011-06-10 | 2020-01-31 | Univ Oregon Health & Science | Cmv glikoproteini i rekombinantni vektori |
US20130068691A1 (en) * | 2011-08-05 | 2013-03-21 | Henry John Smith | Targeted apheresis for the treatment of rheumatoid arthritis and immune disorders |
SI2828284T1 (sl) | 2012-03-20 | 2019-10-30 | Biogen Ma Inc | Virus JC nevtralizirajoča protitelesa |
EP2828292B1 (en) * | 2012-03-20 | 2018-10-31 | Biogen MA Inc. | Jcv neutralizing antibodies |
UA119227C2 (uk) | 2012-04-20 | 2019-05-27 | Аптево Рісьорч Енд Девелопмент Ллс | Поліпептид, що зв'язується з cd3 |
WO2013171287A1 (en) | 2012-05-16 | 2013-11-21 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Combination of cd37 antibodies with ice (ifosfamide, carboplatin, etoposide) |
ES2759252T3 (es) | 2013-10-31 | 2020-05-08 | Resolve Therapeutics Llc | Fusiones y métodos terapéuticos de nucleasa-albúmina |
CA2934436A1 (en) * | 2013-12-20 | 2015-06-25 | Cellectis | Method of engineering multi-input signal sensitive t cell for immunotherapy |
GB201411320D0 (en) | 2014-06-25 | 2014-08-06 | Ucb Biopharma Sprl | Antibody construct |
CA2955306C (en) | 2014-07-16 | 2021-06-01 | Oregon Health & Science University | Human cytomegalovirus comprising exogenous antigens |
MX2017015039A (es) | 2015-06-08 | 2018-08-09 | Debiopharm Int Sa | Combinaciones de inmunoconjugado anti-cd37 y anticuerpo anti-cd20. |
WO2017040247A1 (en) | 2015-08-28 | 2017-03-09 | Immunogen, Inc. | Antibodies and assays for detection of cd37 |
UA126278C2 (uk) | 2015-09-21 | 2022-09-14 | Аптево Рісьорч Енд Девелопмент Ллс | Поліпептиди, які зв'язують cd3 |
US10688164B2 (en) | 2015-11-20 | 2020-06-23 | Oregon Health & Science University | CMV vectors comprising microRNA recognition elements |
WO2018075591A1 (en) | 2016-10-18 | 2018-04-26 | Oregon Health & Science University | Cytomegalovirus vectors eliciting t cells restricted by major histocompatibility complex e molecules |
EP3535297B1 (en) | 2016-11-02 | 2022-08-10 | Debiopharm International, S.A. | Methods for improving anti-cd37 immunoconjugate therapy |
US11578115B2 (en) | 2017-01-10 | 2023-02-14 | The General Hospital Corporation | Chimeric antigen receptors based on alternative signal 1 domains |
CN108395482B (zh) * | 2017-02-08 | 2021-02-05 | 西比曼生物科技(香港)有限公司 | 一种靶向cd20抗原嵌合抗原受体的构建及其工程化t细胞的活性鉴定 |
CA3056115A1 (en) | 2017-03-16 | 2018-09-20 | The General Hospital Corporation | Chimeric antigen receptors targeting cd37 |
WO2019246546A1 (en) * | 2018-06-22 | 2019-12-26 | The General Hospital Corporation | Chimeric antigen receptors targeting cd37 and cd19 |
AU2020329217A1 (en) | 2019-08-12 | 2022-07-28 | Aptevo Research And Development Llc | 4-1BB and OX40 binding proteins and related compositions and methods, antibodies against 4-1BB, antibodies against OX40 |
WO2022104692A1 (en) * | 2020-11-20 | 2022-05-27 | Bliss Biopharmaceutical (Hangzhou) Co., Ltd. | Engineered antibody, antibody-drug conjugate, and use thereof |
CA3200314A1 (en) | 2020-12-01 | 2022-06-09 | Peter Pavlik | Tumor-associated antigens and cd-3 binding proteins, related compositions, and methods |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1995009917A1 (en) * | 1993-10-07 | 1995-04-13 | The Regents Of The University Of California | Genetically engineered bispecific tetravalent antibodies |
US20030118592A1 (en) * | 2001-01-17 | 2003-06-26 | Genecraft, Inc. | Binding domain-immunoglobulin fusion proteins |
WO2005018671A1 (ja) * | 2003-08-21 | 2005-03-03 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | 癌転移阻害剤 |
WO2005047334A1 (en) * | 2003-11-13 | 2005-05-26 | Hanmi Pharmaceutical. Co., Ltd. | Igg fc fragment for a drug carrier and method for the preparation thereof |
WO2008143954A2 (en) * | 2007-05-14 | 2008-11-27 | Biogen Idec Ma Inc. | Single-chain fc (scfc) regions, binding polypeptides comprising same, and methods related thereto |
Family Cites Families (95)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4444744A (en) * | 1980-03-03 | 1984-04-24 | Goldenberg Milton David | Tumor localization and therapy with labeled antibodies to cell surface antigens |
US4331647A (en) * | 1980-03-03 | 1982-05-25 | Goldenberg Milton David | Tumor localization and therapy with labeled antibody fragments specific to tumor-associated markers |
US4316885A (en) * | 1980-08-25 | 1982-02-23 | Ayerst, Mckenna And Harrison, Inc. | Acyl derivatives of rapamycin |
US4640835A (en) * | 1981-10-30 | 1987-02-03 | Nippon Chemiphar Company, Ltd. | Plasminogen activator derivatives |
US4818709A (en) * | 1983-01-21 | 1989-04-04 | Primus Frederick J | CEA-family antigens, Anti-CEA antibodies and CEA immunoassay |
US4496689A (en) * | 1983-12-27 | 1985-01-29 | Miles Laboratories, Inc. | Covalently attached complex of alpha-1-proteinase inhibitor with a water soluble polymer |
GB8508845D0 (en) * | 1985-04-04 | 1985-05-09 | Hoffmann La Roche | Vaccinia dna |
EP0206448B1 (en) * | 1985-06-19 | 1990-11-14 | Ajinomoto Co., Inc. | Hemoglobin combined with a poly(alkylene oxide) |
US4650803A (en) * | 1985-12-06 | 1987-03-17 | University Of Kansas | Prodrugs of rapamycin |
US4932412A (en) * | 1986-12-18 | 1990-06-12 | Immunomedics, Inc. | Intraoperative and endoscopic tumor detection and therapy |
US4897268A (en) * | 1987-08-03 | 1990-01-30 | Southern Research Institute | Drug delivery system and method of making the same |
US5601819A (en) * | 1988-08-11 | 1997-02-11 | The General Hospital Corporation | Bispecific antibodies for selective immune regulation and for selective immune cell binding |
US5217713A (en) * | 1988-12-27 | 1993-06-08 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Cytotoxic bispecific monoclonal antibody, its production and use |
DE3920358A1 (de) * | 1989-06-22 | 1991-01-17 | Behringwerke Ag | Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung |
US5897861A (en) * | 1989-06-29 | 1999-04-27 | Medarex, Inc. | Bispecific reagents for AIDS therapy |
US6020145A (en) * | 1989-06-30 | 2000-02-01 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods for determining the presence of carcinoma using the antigen binding region of monoclonal antibody BR96 |
US5023264A (en) * | 1990-07-16 | 1991-06-11 | American Home Products Corporation | Rapamycin oximes |
US5023263A (en) * | 1990-08-09 | 1991-06-11 | American Home Products Corporation | 42-oxorapamycin |
US5221670A (en) * | 1990-09-19 | 1993-06-22 | American Home Products Corporation | Rapamycin esters |
US5120842A (en) * | 1991-04-01 | 1992-06-09 | American Home Products Corporation | Silyl ethers of rapamycin |
US5100883A (en) * | 1991-04-08 | 1992-03-31 | American Home Products Corporation | Fluorinated esters of rapamycin |
US5118678A (en) * | 1991-04-17 | 1992-06-02 | American Home Products Corporation | Carbamates of rapamycin |
US5118677A (en) * | 1991-05-20 | 1992-06-02 | American Home Products Corporation | Amide esters of rapamycin |
US5637481A (en) * | 1993-02-01 | 1997-06-10 | Bristol-Myers Squibb Company | Expression vectors encoding bispecific fusion proteins and methods of producing biologically active bispecific fusion proteins in a mammalian cell |
AU3178993A (en) * | 1991-11-25 | 1993-06-28 | Enzon, Inc. | Multivalent antigen-binding proteins |
WO1993011236A1 (en) * | 1991-12-02 | 1993-06-10 | Medical Research Council | Production of anti-self antibodies from antibody segment repertoires and displayed on phage |
US5177203A (en) * | 1992-03-05 | 1993-01-05 | American Home Products Corporation | Rapamycin 42-sulfonates and 42-(N-carboalkoxy) sulfamates useful as immunosuppressive agents |
US6066718A (en) * | 1992-09-25 | 2000-05-23 | Novartis Corporation | Reshaped monoclonal antibodies against an immunoglobulin isotype |
US5480988A (en) * | 1992-10-13 | 1996-01-02 | American Home Products Corporation | Carbamates of rapamycin |
US5411967A (en) * | 1992-10-13 | 1995-05-02 | American Home Products Corporation | Carbamates of rapamycin |
US5489680A (en) * | 1992-10-13 | 1996-02-06 | American Home Products Corporation | Carbamates of rapamycin |
US5480989A (en) * | 1992-10-13 | 1996-01-02 | American Home Products Corporation | Carbamates of rapamycin |
US5302584A (en) * | 1992-10-13 | 1994-04-12 | American Home Products Corporation | Carbamates of rapamycin |
US5504091A (en) * | 1993-04-23 | 1996-04-02 | American Home Products Corporation | Biotin esters of rapamycin |
US5391730A (en) * | 1993-10-08 | 1995-02-21 | American Home Products Corporation | Phosphorylcarbamates of rapamycin and oxime derivatives thereof |
US5385909A (en) * | 1993-11-22 | 1995-01-31 | American Home Products Corporation | Heterocyclic esters of rapamycin |
US5385910A (en) * | 1993-11-22 | 1995-01-31 | American Home Products Corporation | Gem-distributed esters of rapamycin |
US5385908A (en) * | 1993-11-22 | 1995-01-31 | American Home Products Corporation | Hindered esters of rapamycin |
US5389639A (en) * | 1993-12-29 | 1995-02-14 | American Home Products Company | Amino alkanoic esters of rapamycin |
US6380369B1 (en) * | 1994-01-27 | 2002-04-30 | Human Genome Sciences, Inc. | Human DNA mismatch repair proteins |
US5945273A (en) * | 1997-06-03 | 1999-08-31 | Human Genome Sciences, Inc. | Human oxalyl-coa decarboxylase |
US5888773A (en) * | 1994-08-17 | 1999-03-30 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Method of producing single-chain Fv molecules |
ATE198492T1 (de) * | 1994-08-26 | 2001-01-15 | Aventis Pharma Gmbh | Gentherapie von erkrankungen, die durch das immunsystem bedingt sind, mit hilfe eines zellspezifischen zellzyklusregulierten wirkstoffes |
US6380169B1 (en) * | 1994-08-31 | 2002-04-30 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Metal complex containing oligonucleoside cleavage compounds and therapies |
US5736524A (en) * | 1994-11-14 | 1998-04-07 | Merck & Co.,. Inc. | Polynucleotide tuberculosis vaccine |
US5491231A (en) * | 1994-11-28 | 1996-02-13 | American Home Products Corporation | Hindered N-oxide esters of rapamycin |
US6383814B1 (en) * | 1994-12-09 | 2002-05-07 | Genzyme Corporation | Cationic amphiphiles for intracellular delivery of therapeutic molecules |
US6410690B1 (en) * | 1995-06-07 | 2002-06-25 | Medarex, Inc. | Therapeutic compounds comprised of anti-Fc receptor antibodies |
US5866330A (en) * | 1995-09-12 | 1999-02-02 | The Johns Hopkins University School Of Medicine | Method for serial analysis of gene expression |
US6379966B2 (en) * | 1999-02-26 | 2002-04-30 | Mirus Corporation | Intravascular delivery of non-viral nucleic acid |
DE19613691A1 (de) * | 1996-04-05 | 1997-10-09 | Boehringer Ingelheim Int | Arzneimittel für die Behandlung von Tumorerkrankungen |
US5922845A (en) * | 1996-07-11 | 1999-07-13 | Medarex, Inc. | Therapeutic multispecific compounds comprised of anti-Fcα receptor antibodies |
US5846948A (en) * | 1996-08-30 | 1998-12-08 | Arch Development Corporation | Herpes simplex virus ORF P is a repressor of viral protein synthesis |
GB9618477D0 (en) * | 1996-09-04 | 1996-10-16 | Univ Leeds | Gene therapy |
US5858753A (en) * | 1996-11-25 | 1999-01-12 | Icos Corporation | Lipid kinase |
DE19651443A1 (de) * | 1996-12-11 | 1998-06-18 | Hoechst Ag | Selbstverstärkende, pharmakologisch kontrollierbare Expressionssysteme |
EP0860445A1 (en) * | 1997-02-18 | 1998-08-26 | Hoechst Aktiengesellschaft | New nucleotide sequences for the cell cycle regulated expression of structural genes |
ES2200316T3 (es) * | 1997-03-11 | 2004-03-01 | Les Laboratoires Aeterna Inc. | Composiciones para tratar tumores que contienen extractos de cartilago de tiburon y agentes antineoplasticos. |
EP0970101A2 (en) * | 1997-03-20 | 2000-01-12 | University Of Washington | Solvent for biopolymer synthesis, solvent microdroplets and methods of use |
US6384203B1 (en) * | 1999-05-12 | 2002-05-07 | Immunex Corporation | Family of immunoregulators designated leukocyte immunoglobulin-like receptors (LIR) |
US6217900B1 (en) * | 1997-04-30 | 2001-04-17 | American Home Products Corporation | Vesicular complexes and methods of making and using the same |
US20020062010A1 (en) * | 1997-05-02 | 2002-05-23 | Genentech, Inc. | Method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components |
US6383746B1 (en) * | 1997-10-23 | 2002-05-07 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Functional promoter for CCR5 |
US6383811B2 (en) * | 1997-12-30 | 2002-05-07 | Mirus Corporation | Polyampholytes for delivering polyions to a cell |
US6383481B1 (en) * | 1998-03-30 | 2002-05-07 | Japan Immunoresearch Laboratories Co., Ltd. | Method for transplantation of hemopoietic stem cells |
JP2002512361A (ja) * | 1998-04-22 | 2002-04-23 | ジェンベク、インコーポレイティッド | アデノウイルスの効率的精製 |
US7052872B1 (en) * | 1999-06-22 | 2006-05-30 | Immunomedics, Inc. | Bi-specific antibodies for pre-targeting diagnosis and therapy |
US6383794B1 (en) * | 1998-08-24 | 2002-05-07 | Uab Research Foundation | Methods of producing high titer recombinant adeno-associated virus |
US6197294B1 (en) * | 1998-10-26 | 2001-03-06 | Neurotech S.A. | Cell surface molecule-induced macrophage activation |
US6380371B1 (en) * | 1998-12-10 | 2002-04-30 | The Regents Of The University Of California | Endoglycan: a novel protein having selectin ligand and chemokine presentation activity |
US6383753B1 (en) * | 1999-03-31 | 2002-05-07 | Regents Of The University Of Michigan | Yeast mammalian regulators of cell proliferation |
AU4476600A (en) * | 1999-04-22 | 2000-11-10 | Vanderbilt University | Polymeric encapsulation system promoting angiogenesis |
US6380382B1 (en) * | 1999-06-30 | 2002-04-30 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Gene encoding a protein having diagnostic, preventive, therapeutic, and other uses |
US6380362B1 (en) * | 1999-12-23 | 2002-04-30 | Genesis Research & Development Corporation Ltd. | Polynucleotides, polypeptides expressed by the polynucleotides and methods for their use |
AU2001241747A1 (en) * | 2000-02-25 | 2001-09-03 | Health Research Inc. | Method for transdermal sampling of analytes |
CA2405961A1 (en) * | 2000-04-26 | 2001-11-01 | Elusys Therapeutics, Inc. | Bispecific molecules and uses thereof |
US7560534B2 (en) * | 2000-05-08 | 2009-07-14 | Celldex Research Corporation | Molecular conjugates comprising human monoclonal antibodies to dendritic cells |
US20020025317A1 (en) * | 2000-07-20 | 2002-02-28 | Schering Ag | Bispecific monoclonal antibodies to IL-12 and IL-18 |
EP1307490B1 (de) * | 2000-08-11 | 2007-04-18 | Ruprecht-Karls-Universität Heidelberg | Fv-konstrukte mit beeinflussbarer affinitat zu einer zu bindenden substanz |
US20030133939A1 (en) * | 2001-01-17 | 2003-07-17 | Genecraft, Inc. | Binding domain-immunoglobulin fusion proteins |
KR100900176B1 (ko) * | 2001-03-07 | 2009-06-02 | 메르크 파텐트 게엠베하 | 하이브리드 이소타입 항체 부분구조를 포함하는 단백질을위한 발현 기술 |
UA78706C2 (en) * | 2001-06-01 | 2007-04-25 | Wyeth Corp | Combination of rapamycin derivative and antitumor alkylating agent and method for treating soft tissue sarcoma and colonic cancer |
US20030026780A1 (en) * | 2001-07-18 | 2003-02-06 | Hood Leroy E. | Innate immunity mediated methods of treating pathological conditions |
JP2005507659A (ja) * | 2001-10-15 | 2005-03-24 | イミューノメディクス、インコーポレイテッド | 直接ターゲッティング結合タンパク質 |
AU2003209446B2 (en) * | 2002-03-01 | 2008-09-25 | Immunomedics, Inc. | Bispecific antibody point mutations for enhancing rate of clearance |
US7332580B2 (en) * | 2002-04-05 | 2008-02-19 | The Regents Of The University Of California | Bispecific single chain Fv antibody molecules and methods of use thereof |
US7332585B2 (en) * | 2002-04-05 | 2008-02-19 | The Regents Of The California University | Bispecific single chain Fv antibody molecules and methods of use thereof |
EP1583503A4 (en) * | 2002-12-20 | 2006-08-09 | Biogen Idec Inc | POLYVALENT LYMPHOTOXIN BETA RECEPTOR AGONISTS AND THERAPEUTIC USE THEREOF |
CN1279056C (zh) * | 2003-06-06 | 2006-10-11 | 马菁 | 肿瘤相关抗原sm5-1的特异性抗体及其应用 |
US6864837B2 (en) * | 2003-07-18 | 2005-03-08 | Ems Technologies, Inc. | Vertical electrical downtilt antenna |
US20060008415A1 (en) * | 2004-06-25 | 2006-01-12 | Protein Design Labs, Inc. | Stable liquid and lyophilized formulation of proteins |
RU2007108538A (ru) * | 2004-08-11 | 2008-09-20 | Трабьон Фармасьютикалз, Инк. (Us) | Слитые со связывающим доменом белки |
WO2006117782A2 (en) * | 2005-05-04 | 2006-11-09 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Recombinant antibodies against cd55 and cd59 and uses thereof |
US7612181B2 (en) * | 2005-08-19 | 2009-11-03 | Abbott Laboratories | Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof |
AU2007257692B2 (en) * | 2006-06-12 | 2013-11-14 | Aptevo Research And Development Llc | Single-chain multivalent binding proteins with effector function |
-
2008
- 2008-07-07 AU AU2008287195A patent/AU2008287195A1/en not_active Abandoned
- 2008-07-07 CN CN2008801052519A patent/CN101990439A/zh active Pending
- 2008-07-07 BR BRPI0814060-0A2A patent/BRPI0814060A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2008-07-07 WO PCT/US2008/069378 patent/WO2009023386A2/en active Application Filing
- 2008-07-07 CA CA002691819A patent/CA2691819A1/en not_active Abandoned
- 2008-07-07 JP JP2010515288A patent/JP2010532764A/ja active Pending
- 2008-07-07 US US12/168,875 patent/US20090148447A1/en not_active Abandoned
- 2008-07-07 EP EP08827538A patent/EP2167130A2/en not_active Withdrawn
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1995009917A1 (en) * | 1993-10-07 | 1995-04-13 | The Regents Of The University Of California | Genetically engineered bispecific tetravalent antibodies |
US20030118592A1 (en) * | 2001-01-17 | 2003-06-26 | Genecraft, Inc. | Binding domain-immunoglobulin fusion proteins |
WO2005018671A1 (ja) * | 2003-08-21 | 2005-03-03 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | 癌転移阻害剤 |
WO2005047334A1 (en) * | 2003-11-13 | 2005-05-26 | Hanmi Pharmaceutical. Co., Ltd. | Igg fc fragment for a drug carrier and method for the preparation thereof |
WO2008143954A2 (en) * | 2007-05-14 | 2008-11-27 | Biogen Idec Ma Inc. | Single-chain fc (scfc) regions, binding polypeptides comprising same, and methods related thereto |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
NAT. BIOTECHNOL., 1997, 15(2), PP.159-163, JPN6013026975, ISSN: 0002548665 * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2013524777A (ja) * | 2010-03-12 | 2013-06-20 | イミュノジェン, インコーポレイテッド | Cd37結合分子及びそのイムノコンジュゲート |
JP2015091267A (ja) * | 2010-03-12 | 2015-05-14 | イミュノジェン, インコーポレイテッド | Cd37結合分子及びそのイムノコンジュゲート |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2009023386A3 (en) | 2009-11-19 |
CN101990439A (zh) | 2011-03-23 |
EP2167130A2 (en) | 2010-03-31 |
CA2691819A1 (en) | 2009-02-19 |
WO2009023386A2 (en) | 2009-02-19 |
AU2008287195A1 (en) | 2009-02-19 |
US20090148447A1 (en) | 2009-06-11 |
BRPI0814060A2 (pt) | 2015-01-06 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6722243B2 (ja) | 単鎖多価結合タンパク質 | |
JP2010532764A (ja) | C末端に配置された特異的結合性ドメインを有する結合性ペプチド | |
EP3130606B1 (en) | Immunoactivating bispecific antibodies | |
JP5740076B2 (ja) | Cd37特異的及びcd20特異的結合分子を用いたb細胞の減少 | |
US8034902B2 (en) | Recombinant antibodies against CD55 and CD59 and uses thereof | |
TW200848431A (en) | Single-chain multivalent binding proteins with effector function | |
TW202016144A (zh) | 包括cd3抗原結合片段之組成物及其用途 | |
AU2014200661B2 (en) | Single-chain multivalent binding proteins with effector function | |
AU2018267609A1 (en) | Single-chain multivalent binding proteins with effector function | |
Mohseni Nodehi | Improved Antibody-Dependent Cell-Mediated Cytotoxicity (ADCC) of Affinity Maturated and Fc-Engineered Antibodies Directed Against the AML Stem Cell Antigen CD96 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
RD01 | Notification of change of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7426 Effective date: 20100712 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20100712 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20110706 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20110706 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20130604 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A712 Effective date: 20130612 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20130612 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20130822 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20130829 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20140225 |