JP2010532175A - 低減した変色を示す植物材料の同定方法、このように同定した植物および低減した変色を示す市販の作物の生産のための同定した植物の使用 - Google Patents
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Abstract
Description
さらに、本発明は、このように同定された植物材料、改良におけるその使用およびそれにより得られた植物に関する。
a)遺伝子変異を示す植物群から、特に遺伝子バンクから植物または植物部分を得ること;
b)所望により、植物または植物部分に損傷表面を作成すること;
c)植物または植物部分またはそこに作成された損傷表面をインキュベートして、その中またはその上に変色を生じさせること;
d)植物または植物部分の内部またはその上の変色を観察すること;
e)観察された変色を、対照植物または植物部分において観察された変色と比較して、植物または植物部分が変色を示すか否か、あるいは対照植物または植物部分と比較して低減した変色を示すか否かを評価すること;および
f)変色を示さないか、または対照植物または植物部分と比較して低減した変色を示す植物または植物部分を、低減した損傷誘発性表面変色形質を持つ植物として同定すること;
を含む方法を用いることにより、これを示した。
a)遺伝子変異を示す植物群から、特に遺伝子バンクから植物または植物部分を得ること;
b)その中または上に変色を生じさせることができる色素に変換され得る基質と植物または植物部分をインキュベートすること;
c)植物または植物部分の内部またはその上の変色を観察すること;
d)観察された変色を、対照植物または植物部分において観察された変色と比較して、植物または植物部分が変色を示すか否か、あるいは対照植物または植物部分と比較して低減した変色を示すか否かを評価すること;および
e)変色を示さないか、または対照植物または植物部分と比較して低減した変色を示す植物または植物部分を、低減した変色形質を持つ植物として同定すること;
を含む方法を用いることにより、検出することができる。
これらの方法は、同時係属出願のPCT/EP2007/000226およびPCT/EP2007/000230に記載されている。
a)低減した損傷誘発性表面変色を有する第一の親植物を、第2の親植物と交配させて、F1種子を得ること;
b)F1種子からF1植物を育て、F1植物を自殖させて、F2−種子を得ること;
c)損傷誘発性表面変色のレベルについて、少なくとも第2の親植物のレベルよりも低いF2植物を低減した損傷誘発性表面変色形質を有する植物として選抜すること;
を含む方法に関する。低減した損傷誘発性表面変色形質を有するこれらの植物およびその子孫は、本発明の植物である。
好ましい具体例において、第1の親は、表2に記載の植物から選択される。
本明細書において、「低減した損傷誘発性表面変色形質」と称される形質は、実施例1に記載のピンク化試験のスコアが3未満、好ましくは2未満、より好ましくは1未満である場合に植物に存在する。
図2:低減した変色を有するアイスバーグレタス(07V.67586)および通常の変色を有する培養品種「シルビナス(Silvinas)の写真。
図3:フレッシュカットナスの褐色化応答。左側に、カットしてから室温での貯蔵後数時間の果実組織を示す。右側に、室温で24時間インキュベートした果実組織を示す。種子の褐色化を明確に観察することができる。
図5:4mMのL−DOPAを含有する溶液中で種子をインキュベーションした場合のナス種子の黒色変色。ウェル1:陰性対照(バッファーのみ)、ウェル2−6:4mMのL−DOPA、ウェル3〜6:それぞれ、0.1、1.0、5.0および10mML−システインの添加。
低減した損傷表面変色についてのLactuca群のスクリーニング
レタスの受託植物を、損傷誘発性変色を示す潜在能力についてスクリーニングした。種子を、標準的な条件を用いて室温内の鉢植え用の土を含むトレイにおいて発芽させ、レタスを成長させた。3〜4枚の本葉が成長した若い植物を、コルク穿孔器を用いてサンプリングした。このように得られた葉片を、6℃で容器中湿った濾紙の間でインキュベートした。約1週間後、ピンク変色を、1〜5の範囲で採点した。1は検出可能なピンク変色が無いことを意味し、5は非常に明確な最大レベルのピンク変色を意味する。結果を表1に示す。この表は、整理番号および個々のスコアを示す。低減したピンク変色を有することが確認された受託植物が以下のように同定された。
意外にも、いくつかの受託植物が低減した変色を示すことが見出された。変色を与えるプロセスは損傷部位にかかる不利な生物的および非生物的ストレス因子に対する植物の防御であると考えられ、この形質は、自然および栽培条件下では不利であると考えられるので、この結果は予想外であった。
よく知られた受託植物、例えば「アイスバーグ(Iceberg)」および「サリナス(Salinas)」が、この試験において低減したピンクのサインを示していなかった。
異なるLactuca受託植物のピンク化スコア。各々のフィールド番号は、個々の受託植物を意味する。受託植物あたり2つの植物をサンプリングした。スコアは、ピンク化のレベル:1=ピンク化なし〜5=強いピンク化を示す。2つの植物のピンク化が異なる場合、2つのスコアを示す。1つのスコアが示されている場合、2つの植物は、この試験で同じように反応している。
野外スクリーニング
野外スクリーニングを、カットクリスプヘッド(crisphead)結球レタスの視覚的評価により行った。1つの受託植物において、低減した損傷表面の変色が観察された(図2)。この受託植物は、07V.67586番であった。続く野生試験での視覚的評価により再試験し、低減した変色を有することが確認された。この視覚的評価は、カットした翌日に行った。意外にも、実施例1に記載のプロトコールによる追試では、低減したピンク化を示さなかった。これは、07V.67586番の低減した変色の遺伝的原因が、実施例1に記載の他の受託植物とは異なっていることを示している。
ナスの低減した変色
ナスの果実のカットおよび包装の後、急速な褐変反応が観察され得る。このカット果実組織の損傷表面は、すぐに褐色に変化し、製品の質が低下する。より重要には、果実内にある種子は強い褐色化を示し、図3に示されるように、周囲に対して目立っている。
PPO基質としてのジヒドロキシフェニルアラニン(L−DOPA)を含有する溶液中でのナス種子のインキュベーション後、メラニン形成が明確に黒色変色として確認された。図5に示されるように、L−システインにより完全に阻害されるので、この黒色変色はPPO−介在性である。
このスクリーニング法により得られ、種子−関連PPO活性の強い低減を示すナスを、表3に示す。
Claims (47)
- 対照植物または植物部分と比較して低減または消失した損傷誘発性表面変色を示す植物または植物部分の試験方法であって:
a)遺伝子変異を示す植物群から、特に遺伝子バンクから植物または植物部分を得ること;
b)所望により、植物または植物部分に損傷表面を作成すること;
c)植物または植物部分またはそこに作成された損傷表面をインキュベートして、その中またはその上に変色を生じさせること;
d)植物または植物部分の内部またはその上の変色を観察すること;
e)観察された変色を、対照植物または植物部分において観察された変色と比較して、植物または植物部分が変色を示すか否か、あるいは対照植物または植物部分と比較して低減した変色を示すか否かを評価すること;および
f)変色を示さないか、または対照植物または植物部分と比較して低減した変色を示す植物または植物部分を、低減した損傷誘発性表面変色形質を持つ植物として同定すること;
を含む方法。 - 植物が、葉または茎部分のために栽培される野菜植物である、請求項1記載の方法。
- 植物がレタス、エンダイブおよびチコリから選択される、請求項2記載の方法。
- 植物が、根または根茎部分のために栽培される野菜植物である、請求項1記載の方法。
- 植物が、ジャガイモ、サツマイモおよび根セロリから選択される、請求項4記載の方法。
- 植物が果実部分のために栽培される結実植物である、請求項1記載の方法。
- 植物が、ナス、リンゴ、バナナ、アボガド、モモ、西洋梨、アンズおよびマンゴーから選択される、請求項6記載の方法。
- 植物が花または花部分のために栽培される顕花植物である、請求項1記載の方法。
- 植物が、チョウセンアザミ、ガーベラおよびキクから選択される、請求項8記載の方法。
- 植物がキノコである、請求項1記載の方法。
- 植物が、キク科、特にアキノノゲシ属、より具体的にはレタス種に属する、請求項1〜3いずれか一項記載の方法。
- 植物が、キクニガナ属、特にチコリ種およびチコリ・エンダイヴ種に属する、請求項1〜3いずれか一項記載の方法。
- 植物部分が、葉、頭状花序、シュート、根、塊茎、茎、花、果実、種子、発芽種子、またはそれらの断片および細胞から選択される、請求項1〜12いずれか一項記載の方法。
- 植物部分が葉片である、請求項11または12記載の方法。
- 植物部分が中肋組織由来の断片である、請求項11または12記載の方法。
- インキュベーションが水性環境下で行われる、請求項1〜15いずれか一項記載の方法。
- 水性環境が湿らせた濾紙を含む、請求項16記載の方法。
- 水性環境が水または水溶液を含む、請求項16記載の方法。
- 水性環境が、L−3,4−ジヒドロキシフェニルアラニン、クロロゲン酸、イソクロロゲン酸、L−チロシンおよびカテコールから選択される化合物を含有する、請求項17または18記載の方法。
- 植物がリンゴであり、水性環境が、クロロゲン酸(葉肉試験用)、カテコール、カテキン(皮試験用)、カフェ酸、フラボノール配糖体類、3,4−ジヒドロキシフェニルアラニン(DOPA)、3,4−ジヒドロキシ安息香酸、p−クレゾール、4−メチルカテコール、ロイコシアニジン、p−クマル酸から選択される化合物を含有する、請求項17または18記載の方法。
- 植物がアンズであり、水性環境が、イソクロロゲン酸、カフェ酸、4−メチルカテコール、クロロゲン酸、カテキン、エピカテキン、ピロガロール、カテコール、フラボノール類、p−クマル酸誘導体から選択される化合物を含有する、請求項17または18記載の方法。
- 植物がアボガドであり、水性環境が、4−メチルカテコール、ドーパミン、ピロガロール、カテコール、クロロゲン酸、カフェ酸、DOPAから選択される化合物を含有する、請求項17または18記載の方法。
- 植物がバナナであり、水性環境が、3,4−ジヒドロキシフェニルエチルアミン(ドーパミン)、ロイコデルフィニジン、ロイコシアニジンから選択される化合物を含有する、請求項17または18記載の方法。
- 植物がナスであり、水性環境が、クロロゲン酸、カフェ酸、クマル酸、および桂皮酸誘導体から選択される化合物を含有する、請求項17または18記載の方法。
- 植物がレタスであり、水性環境が、チロシン、カフェ酸、クロロゲン酸誘導体から選択される化合物を含有する、請求項17または18記載の方法。
- 植物がマンゴーであり、水性環境が、ドーパミン−HCl、4−メチルカテコール、カフェ酸、カテコール、カテキン、クロロゲン酸、チロシン、DOPA、およびp−クレゾールから選択される化合物を含有する、請求項17または18記載の方法。
- 植物がキノコであり、水性環境が、チロシン、カテコール、DOPA、ドーパミン、アドレナリン、およびノルアドレナリンから選択される化合物を含有する、請求項17または18記載の方法。
- 植物がモモであり、水性環境が、クロロゲン酸、ピロガロール、4−メチルカテコール、カテコール、カフェ酸、没食子酸、カテキン、およびドーパミンから選択される化合物を含有する、請求項17または18記載の方法。
- 植物が西洋梨であり、水性環境クロロゲン酸、カテコール、カテキン、カフェ酸、DOPA、3,4−ジヒドロキシ安息香酸、およびp−クレゾールから選択される化合物を含有する、請求項17または18記載の方法。
- 植物がジャガイモであり、水性環境が、クロロゲン酸、カフェ酸、カテコール、DOPA、p−クレゾール、p−ヒドロキシフェニル、プロピオン酸、p−ヒドロキシフェニルピルビン酸、およびm−クレゾールから選択される化合物を含有する、請求項17または18記載の方法。
- 植物がサツマイモであり、水性環境が、クロロゲン酸、カフェ酸、およびカフェイルアミドから選択される化合物を含有する、請求項17または18記載の方法。
- 対照植物が、7日間5℃において2枚の湿らせた濾紙の間でインキュベートした場合、縁の辺りがピンク色に変色する葉片の植物体である、請求項1〜31いずれか一項記載の方法。
- 対照植物または植物部分と比較して低減または消失した表面変色を示す植物または植物部分の試験方法であって:
a)遺伝子変異を示す植物群から、特に遺伝子バンクから植物または植物部分を得ること;
b)その中または上に変色を生じさせることができる色素に変換され得る基質と植物または植物部分をインキュベートすること;
c)植物または植物部分の内部またはその上の変色を観察すること;
d)観察された変色を、対照植物または植物部分において観察された変色と比較して、植物または植物部分が変色を示すか否か、あるいは対照植物または植物部分と比較して低減した変色を示すか否かを評価すること;および
e)変色を示さないか、または対照植物または植物部分と比較して低減した変色を示す植物または植物部分を、低減した損傷誘発性表面変色形質を持つ植物として同定すること;
を含む方法。 - 基質が請求項20〜31に記載の化合物から選択される、請求項33記載の方法。
- 化合物がL−DOPAである、請求項34記載の方法。
- 植物または植物部分が、基質とインキュベーションする前に損傷され、該損傷または損傷付近の変色を観察する、請求項33、34または35記載の方法。
- 植物部分が、種子、発芽種子または葉片である、請求項33〜36いずれか一項記載の方法。
- 変色が、L−システインにより阻害または逆転し得る、請求項1〜37いずれか一項記載の方法。
- 低減した変色、特に低減した損傷誘発性表面変色および農学的に許容される特性を示す作物の生産において、低減した変色形質、特に低減した損傷誘発性表面変色形質の源としての、請求項1〜38いずれか一項記載の方法により得ることができる植物の使用。
- 農学的に許容される特性を示す植物が市販の作物である、請求項39記載の使用。
- 低減した変色形質、特に低減した損傷誘発性表面変色形質の源である植物が、L.virosaaccession 651968(NCIMB 41489)、L.saligna accession 650147(NCIMB 41485)およびL.sativa accession 07V.67586(NCIMB 41569)から選択される、請求項39または40記載の使用。
- 低減した変色、特に低減した損傷誘発性表面変色および農学的に許容される特性を示す作物が、改良および選抜により生産され、該選抜が請求項1〜38いずれか一項記載の方法により行われる、請求項39〜41いずれか一項記載の使用。
- 低減した変色、特に低減した損傷誘発性表面変色および農学的に許容される特性を示す作物が、遺伝子組み換えを受容植物に導入する手段により元の植物から得ることができる、低減した変色形質、特に低減した損傷誘発性表面変色形質を形質導入することにより生産される、請求項39〜41いずれか一項記載の使用。
- 低減した変色、特に低減した損傷誘発性表面変色を示す農学的に許容される植物の生産方法であって、工程:
a)低減した損傷誘発性表面変色を有する第一の親植物を、第2の親植物と交配させて、F1種子を得ること;
b)F1種子からF1植物を育て、F1植物を自殖させて、F2−種子を得ること;
c)変色、特に損傷誘発性表面変色のレベルについて、少なくとも第2の親植物のレベルよりも低いF2植物を低減した変色形質、特に低減した損傷誘発性表面変色形質を有する植物として選抜すること;
を含む方法。 - 請求項44記載の方法により得ることができる、低減した変色を示す、特に、低減した損傷誘発性表面変色を示す植物。
- ナスである請求項45記載の植物。
- 請求項44〜46いずれか一項記載植物の子孫。
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