JP2010531655A - Cxcケモカイン受容体4(cxcr4)拮抗性ポリペプチド - Google Patents
Cxcケモカイン受容体4(cxcr4)拮抗性ポリペプチド Download PDFInfo
- Publication number
- JP2010531655A JP2010531655A JP2010513986A JP2010513986A JP2010531655A JP 2010531655 A JP2010531655 A JP 2010531655A JP 2010513986 A JP2010513986 A JP 2010513986A JP 2010513986 A JP2010513986 A JP 2010513986A JP 2010531655 A JP2010531655 A JP 2010531655A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- alb408
- cxcr4
- peptide
- cells
- hiv
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/76—Albumins
- C07K14/765—Serum albumin, e.g. HSA
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/06—Antiasthmatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/10—Antimycotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
- A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/06—Antianaemics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- G01N2333/715—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Virology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Hematology (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Zoology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Immunology (AREA)
Abstract
Description
Z1‐LVRYTKKVPQVSTPTL‐Z2(ALB‐408)
を有するペプチド、ならびに、その生物学的活性誘導体、特にアミド化、アセチル化、硫酸化、リン酸化、および/もしくはグリコシル化誘導体、ならびに、多重合成によって得ることができるALB408‐423の生物活性を有するペプチド、に関し;
ここで、Zは、0〜10の数のアミノ酸残基を表す。
ヒト血液ろ過液からの抗ウイルス効果を有するALB408‐423の単離
ヒト血液ろ過液は、所望により水による希釈および酸性化を行ってもよい。pH値は、1.5〜3.5が好ましく、2.5〜3.0が特に好ましい。その後、この血液ろ過液を、例えばスルホン酸基で修飾された支持体材料(Fraktogel SP‐650(M), Merck,ダルムシュタット,ドイツ)などのカチオン交換樹脂に通す。カチオン交換樹脂に結合したペプチドは、比較的高濃度の塩溶液で溶離させる。溶出液のイオン強度は、0.5M〜1Mの酢酸アンモニウム溶液のそれとおよそ同じである。
800〜1000リットルの血液ろ過液を、HClにより2.7のpH値に調節し、水で希釈して導電率を5.5mS/cmとし、3L/分の流速で強カチオン交換体にチャージする。
カラム: Vantage VA250(Amicon,ビッテン,ドイツ)
カラム材料: Fractogel TSK SP650(M)、25cm×20cm
流速: 3L/分
検出: 280nm、pH、導電率
バッファーA: 血液ろ過液 pH2.7、導電率5.5mS/cm
バッファーB: 0.5M酢酸アンモニウム
装置: Autopilot Chromatographic System(PerSeptive Biosystems,ビースバーデン,ドイツ)
バッチ抽出の酢酸アンモニウム溶出液を、10,000リットルの血液ろ過液ペプチド分まとめる。pHを2.7に調節した後、このペプチド抽出液を、導電率が5.5mS/cmである完全脱塩水を添加した状態の分取用カチオン交換体にチャージする。
カラム: Vantage 250VA
カラム材料: Fractogel TSK SP650(M)、25cm×20cm
流速: チャージ時 最大3L/分
溶離時 0.5〜1L/分
検出: 280nm、pH、導電率
サンプル: 血液ろ過液 pH2.7、導電率5.5mS/cm
装置: Autopilot Chromatographic System(PerSeptive Biosystems,ビースバーデン,ドイツ)
分画および同時に行う脱塩のために、個々のpHプールを逆相クロマトグラフィによって分離する。
カラム: FineLine 100(Pharmacia,フライブルク,ドイツ)
カラム材料: Source RPC、15μm
10×12.5cm(FineLine 100)
流速: 150ml/分(FineLine 100)
検出: 280nm、導電率、pH
バッファーA: 10mM HCl
バッファーB: 10mM HCl中の80% アセトニトリル
勾配: 0〜60%のバッファーBで5カラム分の容量
B〜E. 単離の第四〜第七工程。阻害活性を、純粋物質が得られるまで精製した。
F. 精製されたALB408‐423の質量スペクトル(MALDI‐MS)および配列分析。
本アッセイにて生物活性であった(図1A)pHプールIIからの画分6〜8の全量200mg(1087リットルの血液ろ過液等量に相当)を、セミ分取用逆相カラムを通して分離した。画分33+34が、本発明の物質を含有していた(図1B)。
カラム: 4.7cm×30cm スチールカラム
充填材料: Bakerbond RP‐C18、15〜30μm、300Å)
バッファーA: 100% 水、10mM HCl
バッファーB: 80% アセトニトリル、20% 水、10mM HCl
勾配: 0〜30%のBで2000ml
流速: 40ml/分(圧力:40bar)
検出: 214nmおよび280nm
クロマトグラフィ装置: BioCad 250、Perseptive Biosystems
画分: 勾配の開始(10.75分)から50mlずつ
アッセイで生物活性を示した、先のクロマトグラフィ工程からの画分33+34を、異なる移動相を用いて類似のセミ分取用逆相カラムを通して分離した。続くHIV感染アッセイにより、画分5+6が本発明の物質を含有することが明らかとなった(図1C)。
カラム: 4.7cm×30cm スチールカラム
充填材料: Bakerbond RP‐C18、15〜30μm、300Å)
バッファーA: 30% メタノール、70% 水、10mM HCl
バッファーB: 100% メタノール、10mM HCl
勾配: 0〜15%のBで40ml
15〜60%のBで1900ml
流速: 40ml/分(圧力:30bar)
検出: 214nmおよび280nm
クロマトグラフィ装置: BioCad 250、Perseptive Biosystems
画分: 勾配の開始(9.75分)から50mlずつ
先のクロマトグラフィからの生物活性画分5+6を、分析用逆相カラムを通して分離した。アリコートをバイオアッセイ(HIV阻害アッセイ)で試験した。画分51〜57が本発明の物質を含有していた(図1D)。
カラム: 2cm×25cm スチールカラム
充填材料: RP‐C4、5μm、100Å、Biotek Silica,エストリンゲン,ドイツ)
バッファーA: 水、0.1% TFA
バッファーB: 80% アセトニトリル、20% 水、0.1% TFA
勾配: 0〜5%のBで2分間、5〜35%のBで60分間、35〜100%のBで3分間
流速: 7ml/分
検出: 214nmおよび280nm
クロマトグラフィ装置: Kontron
画分: 1分から1分ごと
先のクロマトグラフィからの生物活性画分51〜57を、分析用逆相カラムを通して分離した。アリコートをバイオアッセイで試験した。画分31が本発明の物質を純粋な形態で含有していた(図1E)。
カラム: 1cm×25cm スチールカラム
充填材料: RP‐C18、5μm、300Å、Vydac(ヘスピーリア,米国)
バッファーA: 水、0.1% TFA
バッファーB: 80% アセトニトリル、20% 水、0.1% TFA
勾配: 0〜15%のBで5分間、15〜45%のBで60分間、45〜100%のBで1分間
流速: 2ml/分
検出: 214nmおよび280nm
クロマトグラフィ装置: Kontron
画分: 1分から1分ごと
質量測定
血液ろ過液から単離されたペプチド(実施例1の第七工程の画分31より)、および化学合成されたペプチド(実施例3)の質量測定を、MALDI質量分析器(Voyager DE‐Pro)で実施した。ペプチドの分子質量は、以下の質量数値(MW)に相当すると測定された。
ALB408‐423、ヒト血液ろ過液から単離(図1F): 1830.9Da
ALB408‐423、化学合成ペプチド: 1830.6Da
精製された天然のペプチドを、PROTEOMEFACTORY AG社,Dorotheenstr.94,10117 ベルリン(ドイツ)、から提供されたMS‐MSカップリング分析(ESI‐TRAP)により、Mascot検索エンジンによる確立されたESI MS‐MS質量のデータベース比較によって分析した結果、次の配列が最も確率の高かった。
LVRYTKKVPQVSTPTL(図1F)
SwissProtデータベースによるさらなるデータベース比較により、このペプチド配列が、ヒトタンパク質血清アルブミン(アクセス番号NP000468)のアミノ酸408‐423と100%の同一性を有することが示され、この配列は、アミノ酸:LVRYTKKVPQVSTPTL、を含有している。
実施例1の第七工程からの画分31の1.6mgを160μlのDMEMへ溶解した。続いて、ALB408‐423を含有する画分31の段階希釈物10μlを60μlのTZM‐bl細胞(60μl)へ添加し、1ngのp24抗原HIV‐1 NL4_3によって感染させ、全量を100μlとした。3日後、GalScreenアッセイにて感染率を測定した(実施例1参照)。画分31は、このX4向性HIV‐1 NL4_3による感染を用量依存的に阻害した。最大値の半分まで感染を阻害する用量(IC50)は、21.45μg/mlであった(図2)。
ALB408‐423の化学合成
ALB408‐423の化学合成は、公知のFmoc化学を用い、ペプチド合成機9050(Applied Biosystems)上での従来の固相合成によって実施した。得られたペプチドは、逆相クロマトグラフィで精製し、実施例2で述べた分析用RP‐HPLCおよびMALDI‐MS質量測定により、その同一性および純度を確定した。
X4‐向性HIV‐1変異体の感染を特異的に阻害する合成ALB408‐423
5000個のTZM‐bl細胞を、100μlのDMEM(10%FCS、100U/mlペニシリンG、および100μg/ml硫酸ストレプトマイシン)中へ播種した。ALB408‐423をPBSへ溶解した(10mg/ml)。1日後、PBSによるALB408‐423の段階希釈物20μlを細胞へ添加し、続いて、0.5ngのp24抗原HIV‐1で細胞を感染させ、全量を200μlとした。共受容体向性の異なる複数のHIV‐1分子クローンを用い、これらは記載に従って作出した(Papkalla et al., J. Virol. 76: 8455‐9, 2002)。
合成ALB408‐423はCXCR4向性レンチウイルスの感染を用量依存的に阻害する
X4向性HIV‐1 NL4‐3およびHIV‐2ROD10、またはCCR5向性HIV‐1 NL4‐3 92th014、HIV‐1‐7312、およびSIVmac239は、293T細胞の一過性のトランスフェクションによって作出し、これらを用いて、示した濃度のALB408‐423を含有するTZM‐bl細胞を感染させた。2日後、感染率を既述のようにして測定し算出した(実施例4)。結果から、ALB408‐423は、X4向性HIV‐1およびHIV‐2の感染を用量依存的に阻害したが(IC50は約10〜20μM)、一方このペプチドは、R5向性レンチウイルスの感染には影響を及ぼさなかったことが示され、これは、CXCR4向性HIV‐1およびHIV‐2の特異的な阻害を実証するものである(図4)。
ALB408‐423誘導体を用いた構造活性相関(SAR)研究
NもしくはC末端欠失、またはアミノ酸置換を含有する種々のALB408‐423誘導体(表1)を化学的に合成し、凍結乾燥したペプチドをPBS中へ溶解した。この抗ウイルス活性を、既述のようにしてX4向性HIV‐1 NL4‐3を用い、TZM‐bl細胞内で分析した(実施例4)。ALB408‐423のN末端欠失(409‐423、410‐423、411‐423、412‐423、413‐423、414‐423、415‐423)によって抗ウイルス活性が大きく減退または無効化され、このことは、ALB408‐423が介するX4向性HIV‐1の阻害に対して、N末端ロイシン(L408)が極めて重要であることを示している(図5および図6)。
ALB誘導体はいずれも細胞毒性を示さない
ALB変異体の細胞毒性効果の可能性を評価するために、5×103個のTZM‐bl細胞を、最も強力な抗ウイルス活性を及ぼすペプチド(表1および図9)の増加する種々の濃度と共に、3日間インキュベートした。細胞生存率を、CellTiter‐Glo発光細胞生存率アッセイ(Luminescent Cell Viability Assay)(Promega,#G7571)を製造元の推奨に従って用いて測定した。この発光に基づくアッセイは、細胞内ATPの量に基づいて生存細胞数を測定する。データは、ルミノメーターを用い、試薬の添加後10分で記録した。PBSのみでインキュベートした細胞から得られた発光活性を100%に設定した。図9に示した結果より、試験したいずれのALB誘導体でも、300μM以下の濃度では細胞毒性効果が見られなかったことが明らかに示される。
ALB408‐423の抗ウイルス活性および最も強力な誘導体
種々のHIV‐1クローンに対する最も活性であるALBペプチドの効果を調べるために、293T細胞をプロウイルスプラスミドでトランスフェクトすることによって異なる共受容体を利用するウイルスを作出した(Papkalla et al., J. Virol. 76: 8455‐9, 2002)。ウイルスストックをまずTZM‐bl細胞に滴定した。次に、100μMのペプチドを含有するTZM‐bl細胞を、感染性を正規化した量のX4向性、二重向性(X4/R5)、またはR5向性HIV‐1で感染させた。既述のように(実施例4)感染率を測定し、野生型ALB408‐423、C末端切断型ALB408‐419およびALB L408I‐419変異体、ならびにALB‐T412Aが、分析したすべてのX4向性HIV‐1クローン(NL4‐3、P51‐Sc、P34‐s)の感染をほぼ完全に阻害したことが示された(図10)。これらのペプチドは、R5向性HIV‐1感染に対しては影響を及ぼさず、二重向性HIV‐1クローン92ht593.1によるTZM‐bl細胞の感染は中程度に阻害しただけであった。これらのデータは、抗ウイルス活性が高められたALB変異体(ALB408‐423と比較して)(表1)も、X4向性HIV‐1変異体の広範囲にわたる阻害剤であることを実証している。
ALB408‐423、ALB408‐419、およびALB L408I‐419はX4向性HIV‐1の感染およびPBMC内での複製を阻害する
該当する一次細胞におけるALB408‐423およびその誘導体の効果を分析するために、末梢血液単核細胞を、フィコール密度遠心分離を用いて、ドイツ赤十字献血サービス バーデンビュルテンベルクヘッセン(DRK‐Blutspendedienst Baden‐Wurttemberg‐Hessen)より得たバフィーコートから単離した。1mlあたり1×106個のPBMCを、1μg/mlのフィトヘマグルチニン(PHA、Oxoid、#3085280)および10ng/mlのインターロイキン2(IL‐2、Strathmann、#9511192)にて3日間刺激した。その後、細胞をペレット化し、IL‐2を含有する培地へ再懸濁させた。1.5×105個のPBMC(250μl)を96ウェルディッシュへ播種し、ペプチドを添加し、細胞をX4向性HIV‐1 NL4‐3のp24抗原50pg/mlで感染させた。子孫ウイルスを含有する上清を感染後の第1、3、および6日に採取した。ウイルス産生をp24抗原ELISA(SAIC‐Frederick,Inc[AIDS & Cancer virus program])で測定した。100μMのALB408‐423およびALB L408I‐419を含む細胞から第6日に得られた上清では、p24抗原は検出することができず、100μMのALB408‐419を含有する上清では、ほんの僅かのp24レベルしか検出することができなかった(図11)。20μMのペプチドの存在下では、ウイルスの複製が大きく減退した。これらのデータは、試験したALB408‐423およびその2種類の誘導体が、天然のHIV標的細胞内にて、X4向性HIV‐1の感染および複製を阻害することを示している。
ALB408‐423ペプチドはCXCL12のCXCR4への結合を阻害する
ケモカインCXCL12のその受容体CXCR4への結合を阻害するALB408‐423の能力を試験するために、過去の記載(Valenzuela‐Fernandez, et al.; 2001, JBC 276:26550‐26558)に従って蛍光結合アッセイを生存細胞全体に対して実施した。CXCR4受容体は、EGFP蛍光タンパク質が受容体の細胞外アミノ末端部へ融合した融合タンパク質(EGFP‐CXCR4)として、ヒト胎児由来腎臓(HEK)細胞へ安定にトランスフェクトされる。ヒトケモカインCXCL12およびCXCL12‐テキサスレッドを記載に従って合成した(Amara et al., 1999, JBC 274:23916‐23925; Valenzuela‐Fernandez, et al., 2001, JBC 276:26550‐26558)。リガンド‐受容体相互作用のリアルタイム蛍光モニタリングを以下のようにして実施した。融合受容体EGFP‐hCXCR4を発現するHEK293細胞を、5mMのEDTAを補ったpH7.4のリン酸緩衝生理食塩水中で採取し、遠心分離に掛け、プロテアーゼ阻害剤(40μg/mL ベスタチンおよびバシトラシン、20μg/mL ホスホラミドン、50μg/mL キモスタチン、および1μg/mL ロイペプチン)を補ったHEPES‐ウシ血清アルブミンバッファー(10mM HEPES、137.5mM NaCl、1.25mM MgCl2、1.25mM CaCl2、6mM KCl、10mM グルコース、0.4mM NaH2PO4、1% ウシ血清アルブミン(w/v)、pH7.4)中へ再懸濁させた。実験は、HEPES−BSAバッファー中に懸濁させた細胞(通常、106細胞/mL)に対して実施した。510nmで発光(470nmで励起)される蛍光の時系列での記録を、分光蛍光光度計(fluorolog 2,Spex)を用いて21℃にて行い、0.3秒ごとにサンプリングした。30秒の時点て100nMのCXCL12‐TRを1mLの細胞懸濁液へ添加することによって蛍光結合測定を開始した。競合実験では、EGFP‐CXCR4を発現する細胞を、種々の濃度の競合物質の非存在下または存在下にて、予め10分間インキュベートした。次に、CXCL12‐TR(100nM)を添加し、平衡に達するまで(300秒)蛍光を記録した。データの解析は、Kaleidagraph 3.08 ソフトウェア(Synergy Software,レディング,ペンシルベニア州,米国)を用いて行った。CXCL12のテキサスレッド(TR)基へのエネルギー移動に起因するEGFP蛍光発光の低下として、蛍光CXCL12との関連性が検出される。
ペプチドALB408‐423はCXCR4、CCR5、およびCXCR4を介するCa2+動員を誘発せず、CXCL12が誘発するカルシウム細胞応答を阻害する
CXCR4、CCR5、またはCXCR1が介する細胞応答を制御するALB408‐423の能力を、カルシウム指示薬をロードしたHEK293細胞上で調べた。indo‐1アセトキシメチルエステルをカルシウムプローブとして用い、記載に従って(Palanche et al., 2001, JBC 276:34853‐34861; Vollmer et al., 1999, JBC 274:37915‐37922)細胞内Ca2+放出測定を実施した。細胞応答は、分光蛍光光度計を用いて励起を355nmに、発光を405nmおよび475nmに設定し、1mLキュベット内で攪拌しながら37℃にて記録した。ヒトケモカインCCL5およびCXCL8は、Becton Dickinson Biosciences(サンホゼ,カリフォルニア州)より購入した。CXCR4、CCR5、またはCXCR1を発現する細胞を用いたCa2+動員アッセイにより、ケモカインアゴニスト、CXCL12(CXCR4)、CCL5(CCR5)、およびCXCL8(CXCR1)それぞれがCa2+動員を誘発し(図13)、一方、ALB408‐423単独ではいずれのカルシウム応答も誘発せず、従って、CXCR4、CCR5、およびCXCR1アゴニスト特性を示さないことが実証される(図13)。
ALB408‐423はCXCL12が誘発するCXCR4の内在化を阻害する
適切なケモカインで刺激すると、数多くのGタンパク質共役受容体が、クラスリン被覆ピットにより内在化する。CXCR4反応のアンタゴニストとして、ALB408‐423は、ケモカインが誘発するCXCR4受容体の内在化を変化させることもできる。CXCL12が媒介するCXCR4の内在化に対するALB408‐423のアンタゴニスト特性を分析するために、EGFP‐CXCR4受容体を発現する細胞を分割し、ラットI型コラーゲンをコーティングした12mmカバーガラス上で24ウェルプレートにて2日間増殖させた。次に、細胞を0〜30分の範囲の時間、100nM CXCL12、または50μM ALB408‐423、または100nM CXCL12プラス50μM ALB408‐423、を含有する、プロテアーゼ阻害剤を補ったHEPES‐BSAバッファー中にて37℃でインキュベートした。細胞を氷上へ配置することで内在化を停止させ、氷冷HEPES‐BSAバッファーで直ちに洗浄した。次に、細胞をPBS中の4%パラホルムアルデヒド中にて4℃で15分間固定し、続いて50mMのNH4Cl中にて15分間インキュベートした。カバーガラスを抗退色剤(anti‐fading agent)である
CXCL‐12が媒介するジャーカットT細胞の遊走を阻害するALB408‐423
CXCL12‐CXCR4シグナル伝達は、HIV/AIDS、癌、白血病、および関節炎等のいくつかの疾患において極めて重要な役割を担っている。CXCL12を発現する器官、組織、または細胞は、CXCR4を発現する腫瘍細胞を引き寄せることができ、転移を起こさせる。ALB408‐423がCXCL12の媒介による腫瘍細胞遊走を阻害することが可能かどうかを調べるために、モデルシステムとしてCXCR4を発現するジャーカットT細胞を用いて遊走アッセイを実施した(Princen et al., 2004, J. Virol. 78: 12996−13006)。ジャーカットT細胞を0.4×106(200μl)にて10%FBSを含有する媒体へ懸濁させ、次に、この細胞懸濁液(200μl)を5μmポアフィルターデバイス(Transwell,24‐ウェル細胞培養,Costar)の上部コンパートメントに添加した。次に、CXCL12含有(100ng/ml)または非含有の培養液600μlを下部コンパートメントに添加し、上部コンパートメントから細胞を誘引させた。CXCL12の誘発によるジャーカットT細胞遊走に対する阻害効果を研究するために、下部コンパートメントのCXCL12を種々の濃度のALB408‐423と混合した。この細胞培養プレートを、細胞培養インキュベータ内にて37℃で2時間インキュベートした。インキュベーションの後、プレートを取り出し、下部コンパートメントに遊走した細胞100μlを、計数チャンバーを用いて直接計数するか、または増殖アッセイ(CellTiter‐Glo(登録商標)試薬,Promega)を用いて製造元の推奨に従って分析した。増殖アッセイは、細胞数と直接比例する細胞内ATPレベルを測定する(データ示さず)。図16に示すデータは、ALB408‐423が、CXCL12が媒介するジャーカットT細胞遊走を用量依存的に阻害することを実証している。高濃度(360μg/ml)では、ALB408‐423はCXCL12が誘発する細胞遊走ほぼ完全に阻害し、いずれのペプチドも存在しない状態(CXCL12もALB408‐423もなし)で観察された比率と同等であった。これらのデータは、CXCR4アンタゴニストALB408‐423が、CXCL12によって媒介される腫瘍細胞の誘引を阻害することができることを示している。
CXCR4へのALB408‐423の結合はN末端アミノ酸の完全性に依存する
CXCR4への結合を媒介し、従ってX4向性HIV‐1の感染およびCXCL12の結合を阻害するALB408‐423の領域を同定するために、本発明者らは、いくつかのALB408‐423誘導体(表1参照)の、CXCL12が誘発するCa2+動員およびCXCL12‐Trの結合に対する影響を分析した。実験の詳細については実施例xおよびyを参照されたい。図17のAおよびBに示すように、N末端ロイシンが欠失したALB409‐423は、CXCL12が媒介するCa2+応答もCXCL12‐TrのCXCR4受容体への結合も阻害しなかった。興味深いことに、ALB409‐423は、HIV‐1阻害アッセイにおいても不活性であり、ALB409‐423がCXCR4へ結合できないことが、抗ウイルス活性の喪失の原因でもあることが示唆される。対照的に、C末端切断型のALB誘導体はいずれも、依然としてCXCR4受容体との相互作用が可能であり(図17A)、CXCL12が媒介するCa2+応答を阻害し(図17B)、野生型ペプチドに近い解離定数(30μM)を示すが、ただし、最も短い408‐413は、受容体に対する親和性が下がり(>200μM)、X4向性HIV‐1感染の阻害にもほとんど効果がない(図6および表1)。まとめると、これらのデータは、いくつかのC末端切断型ALB誘導体が、CXCR4と結合することができ、それによってCXCL12の結合およびシグナル伝達、またはX4向性HIV‐1感染を阻止するCXCR4アンタゴニストであることを示している。
Claims (23)
- 以下のアミノ酸配列:
Z1‐LVRYTKKVPQVSTPTL‐Z2(ALB‐408)
を有し、Zは0〜10の数のアミノ酸残基を表す、ペプチド、ならびに、その生物活性断片、および/または変異体、および/または誘導体、特にアミド化、アセチル化、硫酸化、リン酸化、および/もしくはグリコシル化誘導体、ならびに、多重合成によって得ることができるALB408‐423の生物学的活性を有するペプチド。 - 前記配列中の単一もしくは複数のアミノ酸残基が、置換、欠失、もしくは付加されたか、または、ALB408‐423の生物学的活性または薬理学的活性を改良する結果となるALB408‐423の単一のアミノ酸上への化学修飾が導入された、請求項1に記載のALB408‐423ペプチド。
- 前記ペプチドが、配列番号1〜32のアミノ酸配列を有する、請求項1および/または2に記載のペプチド。
- 請求項1〜3のいずれか1項に記載のALB408‐423、ならびに/またはその断片、変異体、誘導体、および類似体、をコードするポリヌクレオチド。
- DNA、RNA、ゲノムDNA、またはPNAから構成されることを特徴とする、請求項4に記載のポリヌクレオチド。
- 請求項4に記載のポリヌクレオチドを含有するベクター。
- 請求項6に記載のベクターを含有する遺伝子操作された宿主細胞。
- ALB408‐423活性を有するポリペプチドをコードし、請求項4に記載のポリヌクレオチドとハイブリダイズする、ポリヌクレオチド。
- 請求項1〜3のいずれか1項に記載のポリペプチドに対する抗体。
- 請求項1〜3のいずれか1項に記載のポリペプチドに対するアンタゴニスト/阻害剤。
- 請求項1〜3のいずれか1項に記載のポリペプチドの治療量を投与することによって、ALB408‐423を必要とする患者を治療するための方法。
- アンタゴニスト/阻害剤の治療量を投与することによって、ALB408‐423の阻害を必要とする患者を治療するための方法。
- 請求項1〜3のいずれか1項に記載のポリペプチド、および適合する担体からなる、ガレノス製剤。
- ALB408‐423をコードするDNAの投与および患者内でのインビボでのその発現によって前記ポリペプチドの治療効果が達成される、患者を治療するための方法。
- カチオン交換抽出による血液ろ過液からの抽出、ならびにそれに続く吸着物質の溶離、ペプチドを含有する前記抽出物の再度のカチオン交換クロマトグラフィ、および分画逆相クロマトグラフィ、による請求項1に記載のALB408‐423を調製するためのプロセス。
- メリフィールド合成である固相合成、または、保護アミノ酸を用いる、当業者に公知の方法による液相合成、およびその精製による、請求項1〜3のいずれか1項に記載のALB408‐423を調製するためのプロセス。
- 一般的な生物工学的ベクターを用いる、当業者に公知の異種発現の方法による、請求項1〜3のいずれか1項に記載のALB408‐423を調製するためのプロセス。
- 請求項8に記載のポリクローナルもしくはモノクローナル抗体を含有する、または請求項1〜3のいずれか1項に記載のALB408‐423をコードする核酸もしくはmRNAを含有する、診断薬。
- 請求項1〜3のいずれか1項に記載のペプチド、または請求項4に記載のポリヌクレオチドを含有する、組織、血漿、尿、および脳脊髄液中のこの物質のレベルを分析するための試験システムのための、診断薬。
- 請求項1〜3のいずれか1項に記載のペプチドを検出する診断薬および試験システムであって、組織、血漿、尿、および脳脊髄液中のこの物質のレベルを、RP‐HPLC、タンパク質沈殿、および/または固相抽出によるサンプル調製とMALDI‐MSまたはESI‐MS等の質量分析法を組み合わせることによって分析するための、診断薬および試験システム。
- ウイルス性疾患、細菌および真菌感染、炎症および新生物形成プロセスに対するマーカーとして、ならびに炎症プロセス、撹乱された炎症反応、腫瘍性疾患、成長障害、免疫系の疾患におけるマーカーとして、ならびに骨疾患におけるマーカーとして、請求項1〜3のいずれか1項に記載のペプチドを含有する診断薬。
- 経口、静脈内、筋肉内、皮内、皮下、くも膜下腔内投与のためのガレノス剤形の活性成分として、および経肺投与のためのエアロゾルとして、請求項1〜3のいずれか1項に記載のペプチドを含有する薬剤。
- ウイルス性疾患、特にHIV‐1、HIV‐2、サイトメガロウイルス、単純ヘルペスウイルス(1型および2型)、水痘帯状疱疹ウイルス、A型肝炎およびB型肝炎ウイルス、インフルエンザウイルス、ポリオウイルス、ライノウイルス、風疹ウイルス、麻疹ウイルス、狂犬病ウイルス、ラウス肉腫ウイルス、エプスタイン‐バーウイルスの治療、ならびに細菌および真菌感染、炎症プロセス、撹乱された炎症反応、腫瘍性疾患、成長障害、神経疾患、凝血および造血の疾患、血管疾患、免疫系の疾患の治療、ならびに創傷および骨の治癒、のための薬剤の調製のための、請求項1〜3のいずれか1項に記載のペプチド、ならびに請求項4の記載のポリヌクレオチド、ならびに請求項9および10に記載の抗体/アンタゴニスト、ならびに請求項13に記載のガレノス製剤の、使用。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE102007030904A DE102007030904A1 (de) | 2007-07-03 | 2007-07-03 | Humanes zirkulierendes antivirales Albumin-Fragment (ALB-408) und seine Verwendung |
PCT/EP2008/058566 WO2009004054A2 (en) | 2007-07-03 | 2008-07-03 | A cxc chemokine receptor 4 (cxcr4) antagonistic polypeptide |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2014125189A Division JP5941497B2 (ja) | 2007-07-03 | 2014-06-18 | Cxcケモカイン受容体4(cxcr4)拮抗性ポリペプチド |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2010531655A true JP2010531655A (ja) | 2010-09-30 |
Family
ID=39760841
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2010513986A Pending JP2010531655A (ja) | 2007-07-03 | 2008-07-03 | Cxcケモカイン受容体4(cxcr4)拮抗性ポリペプチド |
JP2014125189A Active JP5941497B2 (ja) | 2007-07-03 | 2014-06-18 | Cxcケモカイン受容体4(cxcr4)拮抗性ポリペプチド |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2014125189A Active JP5941497B2 (ja) | 2007-07-03 | 2014-06-18 | Cxcケモカイン受容体4(cxcr4)拮抗性ポリペプチド |
Country Status (12)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US9045563B2 (ja) |
EP (2) | EP2162462B1 (ja) |
JP (2) | JP2010531655A (ja) |
CN (1) | CN101730709B (ja) |
CA (2) | CA2691061C (ja) |
DE (1) | DE102007030904A1 (ja) |
DK (2) | DK2162462T3 (ja) |
ES (2) | ES2655289T3 (ja) |
HU (2) | HUE047454T2 (ja) |
PL (2) | PL3275894T3 (ja) |
PT (2) | PT2162462T (ja) |
WO (1) | WO2009004054A2 (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2016013828A1 (ko) * | 2014-07-21 | 2016-01-28 | 연세대학교 산학협력단 | 황산화된 더피 케모카인 수용체의 세포 외 도메인 1 변이체 및 이의 용도 |
JP2016521716A (ja) * | 2013-06-12 | 2016-07-25 | ファリス バイオテック ゲーエムベーハー | 天然cxcr4に対するアンタゴニスト活性を有するペプチド |
Families Citing this family (22)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP2771484A1 (en) | 2011-10-28 | 2014-09-03 | Galderma Research & Development | New leukocyte infiltrate markers for rosacea and uses thereof |
US9458450B2 (en) | 2012-03-15 | 2016-10-04 | Flodesign Sonics, Inc. | Acoustophoretic separation technology using multi-dimensional standing waves |
US10967298B2 (en) | 2012-03-15 | 2021-04-06 | Flodesign Sonics, Inc. | Driver and control for variable impedence load |
US9950282B2 (en) | 2012-03-15 | 2018-04-24 | Flodesign Sonics, Inc. | Electronic configuration and control for acoustic standing wave generation |
US10704021B2 (en) | 2012-03-15 | 2020-07-07 | Flodesign Sonics, Inc. | Acoustic perfusion devices |
EP2799877A1 (en) * | 2013-05-03 | 2014-11-05 | Universität Ulm | Process for diagnosing a human subject with diseases affecting the kidneys, or at risk of acquiring diseases affecting the kidneys |
CN104292302B (zh) * | 2013-07-16 | 2018-05-04 | 国家纳米科学中心 | 一种增强肿瘤细胞对抗肿瘤药物敏感性的多肽及其应用 |
CA2935960C (en) | 2014-01-08 | 2023-01-10 | Bart Lipkens | Acoustophoresis device with dual acoustophoretic chamber |
WO2016079143A1 (de) | 2014-11-17 | 2016-05-26 | Pharis Biotec Gmbh | Inhibitor der viralen hepatitis c infektion |
US11377651B2 (en) | 2016-10-19 | 2022-07-05 | Flodesign Sonics, Inc. | Cell therapy processes utilizing acoustophoresis |
US11021699B2 (en) | 2015-04-29 | 2021-06-01 | FioDesign Sonics, Inc. | Separation using angled acoustic waves |
US11708572B2 (en) | 2015-04-29 | 2023-07-25 | Flodesign Sonics, Inc. | Acoustic cell separation techniques and processes |
US11474085B2 (en) | 2015-07-28 | 2022-10-18 | Flodesign Sonics, Inc. | Expanded bed affinity selection |
US11459540B2 (en) | 2015-07-28 | 2022-10-04 | Flodesign Sonics, Inc. | Expanded bed affinity selection |
US11214789B2 (en) | 2016-05-03 | 2022-01-04 | Flodesign Sonics, Inc. | Concentration and washing of particles with acoustics |
US11085035B2 (en) | 2016-05-03 | 2021-08-10 | Flodesign Sonics, Inc. | Therapeutic cell washing, concentration, and separation utilizing acoustophoresis |
JP2020513248A (ja) | 2016-10-19 | 2020-05-14 | フロデザイン ソニックス, インク.Flodesign Sonics, Inc. | 音響による親和性細胞抽出 |
JP7274228B2 (ja) * | 2017-09-08 | 2023-05-16 | ネオペプ ファーマ ゲーエムベーハー ウント コンパニー カーゲー | 病気の治療のためのポリペプチド |
BR112020009889A2 (pt) | 2017-12-14 | 2020-11-03 | Flodesign Sonics, Inc. | acionador e controlador de transdutor acústico |
EP3877396A1 (en) | 2018-11-09 | 2021-09-15 | Neopep Pharma GmbH & Co. KG | Polypeptides for the treatment of stress, immunoreaction and stroke syndromes |
EP3872084A1 (en) * | 2020-02-27 | 2021-09-01 | Universität Ulm | Epi-x4 based peptides and derivatives thereof |
WO2023099725A1 (de) * | 2021-12-02 | 2023-06-08 | Pharis Biotec Gmbh | Pharmazeutische zubereitung enthaltend eine mischung eines natriuretischen peptids (anp) und eines peptidischen hemmstoffs des cxcr4-rezeptors |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1999014231A2 (de) * | 1997-09-16 | 1999-03-25 | Forssmann Wolf Georg | Bifidogene peptide und deren verwendung |
CN1195779C (zh) * | 2001-05-24 | 2005-04-06 | 中国科学院遗传与发育生物学研究所 | 抗人卵巢癌抗人cd3双特异性抗体 |
GB0217347D0 (en) * | 2002-07-26 | 2002-09-04 | Univ Edinburgh | Novel albumins |
JP5576610B2 (ja) * | 2006-02-20 | 2014-08-20 | フィロジカ リミテッド | ペプチド構造のライブラリーの構築およびスクリーニング方法 |
CN1872879B (zh) * | 2006-06-29 | 2011-09-14 | 孙晗笑 | 来源于病毒巨噬细胞炎性蛋白的cxcr4受体拮抗活性多肽及其应用 |
EP2423222B2 (en) * | 2007-01-30 | 2020-07-29 | Epivax, Inc. | Regulatory t cell epitopes, compositions and uses thereof |
-
2007
- 2007-07-03 DE DE102007030904A patent/DE102007030904A1/de not_active Withdrawn
-
2008
- 2008-07-03 HU HUE17192177A patent/HUE047454T2/hu unknown
- 2008-07-03 WO PCT/EP2008/058566 patent/WO2009004054A2/en active Application Filing
- 2008-07-03 EP EP08774691.3A patent/EP2162462B1/en active Active
- 2008-07-03 ES ES08774691.3T patent/ES2655289T3/es active Active
- 2008-07-03 ES ES17192177T patent/ES2770361T3/es active Active
- 2008-07-03 CA CA2691061A patent/CA2691061C/en active Active
- 2008-07-03 PL PL17192177T patent/PL3275894T3/pl unknown
- 2008-07-03 PT PT87746913T patent/PT2162462T/pt unknown
- 2008-07-03 JP JP2010513986A patent/JP2010531655A/ja active Pending
- 2008-07-03 PT PT171921778T patent/PT3275894T/pt unknown
- 2008-07-03 DK DK08774691.3T patent/DK2162462T3/da active
- 2008-07-03 CA CA2968054A patent/CA2968054C/en active Active
- 2008-07-03 CN CN2008800233131A patent/CN101730709B/zh active Active
- 2008-07-03 US US12/452,480 patent/US9045563B2/en active Active
- 2008-07-03 HU HUE08774691A patent/HUE037931T2/hu unknown
- 2008-07-03 DK DK17192177.8T patent/DK3275894T3/da active
- 2008-07-03 EP EP17192177.8A patent/EP3275894B1/en active Active
- 2008-07-03 PL PL08774691T patent/PL2162462T3/pl unknown
-
2014
- 2014-06-18 JP JP2014125189A patent/JP5941497B2/ja active Active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
JPN6013008711; Analytical Biochemistry Vol.361, 200702, p.263-272 * |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2016521716A (ja) * | 2013-06-12 | 2016-07-25 | ファリス バイオテック ゲーエムベーハー | 天然cxcr4に対するアンタゴニスト活性を有するペプチド |
US10294272B2 (en) | 2013-06-12 | 2019-05-21 | Pharis Biotec Gmbh | Peptides with antagonistic activities against natural CXCR4 |
WO2016013828A1 (ko) * | 2014-07-21 | 2016-01-28 | 연세대학교 산학협력단 | 황산화된 더피 케모카인 수용체의 세포 외 도메인 1 변이체 및 이의 용도 |
KR101805255B1 (ko) | 2014-07-21 | 2017-12-07 | 연세대학교 산학협력단 | 황산화된 더피 케모카인 수용체의 세포 외 도메인 1 변이체 및 이의 용도 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP2162462B1 (en) | 2017-10-25 |
ES2655289T3 (es) | 2018-02-19 |
PT3275894T (pt) | 2020-02-06 |
US20130029902A1 (en) | 2013-01-31 |
PL2162462T3 (pl) | 2018-03-30 |
CA2691061C (en) | 2017-07-11 |
PL3275894T3 (pl) | 2020-07-13 |
EP3275894B1 (en) | 2019-11-13 |
DK2162462T3 (da) | 2018-01-29 |
CN101730709A (zh) | 2010-06-09 |
HUE047454T2 (hu) | 2020-04-28 |
EP3275894A1 (en) | 2018-01-31 |
US9045563B2 (en) | 2015-06-02 |
ES2770361T3 (es) | 2020-07-01 |
JP5941497B2 (ja) | 2016-06-29 |
PT2162462T (pt) | 2018-01-31 |
WO2009004054A8 (en) | 2017-04-06 |
CA2968054A1 (en) | 2009-01-08 |
JP2014209914A (ja) | 2014-11-13 |
WO2009004054A2 (en) | 2009-01-08 |
DE102007030904A1 (de) | 2009-02-05 |
EP2162462A2 (en) | 2010-03-17 |
CA2691061A1 (en) | 2009-01-08 |
CN101730709B (zh) | 2013-06-12 |
WO2009004054A3 (en) | 2009-02-26 |
CA2968054C (en) | 2022-06-14 |
HUE037931T2 (hu) | 2018-09-28 |
DK3275894T3 (en) | 2020-02-03 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5941497B2 (ja) | Cxcケモカイン受容体4(cxcr4)拮抗性ポリペプチド | |
JP4790624B2 (ja) | 生体分子パーティションモチーフ及びそれらの使用 | |
EP3577462B1 (en) | Interaction between c-peptides and elastin receptor, a model for understanding vascular disease | |
US10695404B2 (en) | Treatment of steroid-induced hyperglycemia with fibroblast growth factor (FGF) 1 analogs | |
Janssens et al. | Natural nitration of CXCL12 reduces its signaling capacity and chemotactic activity in vitro and abrogates intra-articular lymphocyte recruitment in vivo | |
Ameti et al. | Characterization of a chimeric chemokine as a specific ligand for ACKR3 | |
CA2466877C (en) | Compositions useful as ligands for the formyl peptide receptor like 1 receptor and methods of use thereof | |
WO2020018715A1 (en) | Soluble multimeric immunoglobulin-scaffold based fusion proteins and uses thereof | |
Tudan et al. | C-terminal cyclization of an SDF-1 small peptide analogue dramatically increases receptor affinity and activation of the CXCR4 receptor | |
AU2002323255A1 (en) | Compositions useful as ligands for the formyl peptide receptor like 1 receptor and methods of use thereof | |
JP4813720B2 (ja) | ヒト循環ウイルス阻害ペプチド(virip)及びその使用 | |
JP2002509693A (ja) | カドヘリン由来成長因子及びその使用 | |
WO2008059066A1 (en) | New chemokine derivatives of ccl14, synthesis and use as drugs for the treatment of allergic diseases | |
ES2368814T3 (es) | Composiciones útiles como ligandos para el receptor de tipo receptor 1 de péptidos formilados y métodos de uso de las mismas. | |
JP2002335972A (ja) | インスリン受容体関連受容体結合蛋白質及びその利用 | |
KR100867257B1 (ko) | 포밀 펩티드 수용체 유사 1 수용체에 대한 리간드로유용한 조성물 및 이의 사용 방법 | |
WO2023104822A1 (en) | Chimeric adiponectin polypeptides, extracellular vesicle comprising the same, and uses thereof | |
Tjoeng | Development of a Murine Model to Study Inhibitors of CXCR3-Ligand Interactions | |
Chertov et al. | Identification of Neutrophil Granule Protein | |
JP2007223958A (ja) | 細胞死誘導ペプチド、map化細胞死誘導ペプチド、細胞死誘導剤及び抗癌剤 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20110630 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20130226 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20130527 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20130603 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20130822 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20140218 |