JP2010524850A - Ｉｌ−１７ｆ／ｉｌ−１７ａの生物活性を調節するための方法および組成物 - Google Patents

Ｉｌ−１７ｆ／ｉｌ−１７ａの生物活性を調節するための方法および組成物 Download PDF

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Abstract

本発明は、新規マウスＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａを提供し、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーの特徴づけでのこのようなマウスＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの使用をさらに提供する。本発明は、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル経路のポリヌクレオチドおよびポリペプチド、ならびにＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ関連障害を治療する方法におけるＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル経路の標的化にも関連している。本発明はそれゆえ、たとえば気道炎症のマウスモデルでの単離ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマー、ならびに特異的または選択的ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａモジュレータ（たとえばシグナル伝達拮抗作用薬またはシグナル伝達拮抗薬（たとえば特異的または選択的拮抗抗体、特異的または選択的拮抗小型分子など））を使用する方法を提供する。

Description

この出願は、２００７年３月２８日に出願された米国仮出願第６０／９２０，５９１号および２００７年４月５日に出願された米国仮出願第６０／９２２，１７５号（この両方は、それらの全体が参考として本明細書に援用される）の利益を主張する。
発明の分野
本発明は、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル経路を作動させることが炎症、たとえば気道炎症を誘発するという発見と、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル経路を遮断することがＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ関連障害、たとえば炎症、たとえば気道炎症を予防および／または治療するという発見に関するものである。それゆえ本発明は、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬、たとえばＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａに対する拮抗抗体およびそのフラグメント、可溶性受容体、小型分子、抑制ポリヌクレオチドなどに関するものである。抗体および他のＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬は、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ関連障害、たとえば炎症性障害（たとえば自己免疫疾患（たとえば関節炎）、呼吸器疾患（たとえば気道炎症、ＣＯＰＤ、嚢胞性線維症、喘息、アレルギー、肺増悪（たとえば細菌感染による））、炎症性腸障害（たとえば潰瘍性大腸炎、クローン病））、および移植片拒絶を診断、予後診断、監視、予防、および／または治療する方法で有用である。
関連する背景技術
ＩＬ−１７サイトカインファミリーは６種の構造的に関連するタンパク質（ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｂ、ＩＬ−１７Ｃ、ＩＬ−１７Ｄ、ＩＬ−１７Ｅ、およびＩＬ−１７Ｆ）より成り、その機能がここで解明される。このファミリーで最も良く特徴付けられている分子は、ＩＬ−１７Ａである。ＩＬ−１７Ａは、ＣＤ４＋Ｔ細胞のサブセットであるＴｈ１７細胞によって主に発現され、２種の受容体ＩＬ−１７ＲＡ（当分野ではＩＬ−１７Ｒとしても公知）およびＩＬ−１７ＲＣ（非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３；Ｂｅｔｔｅｌｌｉら、（２００６）Ｎａｔｕｒｅ ４４１：２３５−３８；Ｍａｎｇａｎら、（２００６）Ｎａｔｕｒｅ ４４１：２３１−３４；Ｙａｏら、（１９９５）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ３：８１１−２１；Ｔｏｙら、（２００６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７７：３６−３９）を通じてシグナルに認識される。これらの受容体は幅広く発現されるが、ＩＬ−１７Ａは線維芽細胞、上皮細胞、および内皮細胞などの実質細胞に対して主に作用すると考えられている。ＩＬ−１７Ａによるシグナル伝達は、マトリクスメタロプロテアーゼおよび炎症誘発性サイトカインの発現を上昇させる（Ｋｏｌｌｓ ａｎｄ Ｌｉｎｄｅｎ（２００４）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２１：４６７−７６；Ｗｅａｖｅｒら、（２００７）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５：８２１−５２によって総説されているように）。ＩＬ−１７Ａは、ＣＸＣケモカインおよびＧ−ＣＳＦの誘導によって末梢部位に好中球を補充するようにも作用する。ＩＬ−１７Ａの発現は、重度の喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、および嚢胞性線維症を含む、好中球が存在する複数の肺疾患で上昇する（Ｂａｒｃｚｙｋら、（２００３）Ｒｅｓｐｉｒ．Ｍｅｄ．９７：７２６−３３；Ｍｏｌｅｔら、（２００１）Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０８：４３０−３８；Ｗｏｎｇら、（２００１）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２５：１７７−８３；Ｓｈｅｎら、（２００４）Ｚｈｏｎｇｈｕａ Ｎｅｉ Ｋｅ Ｚａ Ｚｈｉ ４３：８８８−９０；ＭｃＡｌｌｉｓｔｅｒら、（２００５）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７５：４０４−１２）。結果として、気道疾患の発病におけるＩＬ−１７Ａの役割に、相当な注目が集まっている。
気道内へのＩＬ−１７の投与は、ＣＸＣＬ１（ＫＣ）およびＣＸＣＬ２（ＭＩＰ−２）発現の上昇による好中球の著しい増加を誘発するのに十分である（非特許文献４；Ｆｅｒｒｅｔｔｉら、（２００３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７０：２１０６−１２）。ＬＰＳ主導の気道炎症モデルにおいて、ＩＬ−１７Ａの中和は好中球の数を著しく減少させる（Ｆｅｒｒｅｔｔｉら、（２００３）上掲；Ｍｉｙａｍｏｔｏら、（２００３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７０：４６６５−７２）。これらのデータは、気道炎症および好中球補充を調節するＩＬ−１７Ａの重要な役割を指摘している。
残りの５種のＩＬ−１７ファミリーメンバーのうち、ＩＬ−１７ＦがＩＬ−１７Ａに最も密接に関連している。この２種の分子は、高度の相同性（約５７％の類似性および５２％の同一性）を共有しており、シンテニーである（どちらもマウス染色体１Ａ４上に位置する）。ＩＬ−１７Ａと同様に、ＩＬ−１７Ｆ ｍＲＮＡおよびタンパク質はＴｈ１７細胞にて検出されている（非特許文献２；非特許文献５）。ＩＬ−１７Ｆがホモダイマーとして存在し、その１個が鎖間結合に関与する４個のシステインの相互作用によって形成された、システインノットモチーフの形を取る（Ｈｙｍｏｗｉｔｚら、（２００１）ＥＭＢＯ Ｊ．２０：５３３２−４１）。これらのシステインもＩＬ−１７Ａで高度に保存され、ＩＬ−１７ＡがＩＬ−１７Ｆに似たホモダイマー構造を有することが示唆される。ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆも同じ受容体を共有すると考えられており、同様の機能が示唆される（Ｔｏｙら、（２００６）上掲；Ｋｒａｍｅｒら、（２００６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７６：７１１−１５）。ＩＬ−１７Ｆの機能研究の大部分がヒトサイトカインの効果を調査している。組換えヒトＨＬ−１７Ｆを使用する試験管内研究によって、ＩＬ−１７Ｆが初代ヒト上皮細胞からＣ−ＧＳＦおよびＣＸＣＬ１を誘導可能であることが示された（ＭｃＡｌｌｉｓｔｅｒら、（２００５）上掲）。アデノウイルスベクターを使用するヒトＩＬ−１７Ｆの、またはマウス気道への肺遺伝子導入を使用するマウスＩＬ−１７Ｆの過剰発現は、好中球の数およびサイトカイン発現の著しい増大を誘発した（Ｈｕｒｓｔら、（２００２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：４４３−５３）。これらの研究はＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの気道での重複機能を指摘するが、冗長でない特徴もあると思われる。このことと一致して、ＩＬ−１７Ａ欠損マウスは、ＩＬ−１７Ｆ発現によって代償されないと思われる著明な表現型を有する（Ｎａｋａｅら、（２００３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７１：６１７３−７７）。
ＩＬ−１７ＡとＩＬ−１７Ｆとの間の高度の配列相同性およびそのシステインの保存位置は、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆのヘテロダイマーが存在できることを示唆した；Ｔｈ１７細胞によるＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの同時発現は、この可能性をさらに裏付けた。近年、生化学的方法および物理化学的方法を使用して、ヒトＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーの存在が証明された（非特許文献６；米国特許出願第１１／３５３，１６１号明細書も参照、その全体が参照により本明細書に組み込まれている）。初代ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞によって産生された天然ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーのマススペクトリー分析によって、ＩＬ−１７Ｆからのペプチド１個およびＩＬ−１７Ａからのペプチド１個を含有する、鎖間ジスルフィド結合ペプチドの存在が示された。このことは、新規機能を有する可能性があるＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーの存在を示唆している。
ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆを産生することに加えて、Ｔｈ１７細胞は、ＩＬ−１０ファミリーメンバーであるＩＬ−２２も産生する（非特許文献５；非特許文献７；非特許文献８；非特許文献９）。ＩＬ−２２は上皮細胞および一部の線維芽細胞に作用して、炎症における役割を果たすことが示されている。ＩＬ−２２は、急性期応答を示す遺伝子発現を誘導する（非特許文献１０）。ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆと同様に、ＩＬ−２２は、ある組織中でマトリクスメタロプロテイナーゼ、ケモカインおよびサイトカインの発現も上昇させることができる（非特許文献１０；Ｉｋｅｕｃｈｉら、（２００５）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．５２：１０３７−４６；Ａｎｄｏｈら、（２００５）Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ １２９：９６９−８４；Ｂｏｎｉｆａｃｅら、（２００５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７４：３６９５−０２）。Ｔｈ１７細胞による、ＩＬ−２２とＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆとの同時発現によって、これらのサイトカインが共に作用して炎症に介在することが示唆される。しかし、本明細書で開示される発明の前には、ヒトＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーの（複数の）受容体も、マウスＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーの受容体も公知でなく、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの生物活性の研究に利用できなかった。
Ａｇｇａｒｗａｌら、Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（２００３）２７８：１９１０−１４ Ｌａｎｇｒｉｓｈら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．（２００５）２０１：２３３−４０ Ｖｅｌｄｈｏｅｎら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２００６）２４：１７９−８９ Ｌａａｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９９）１６２：２３４７−５２ Ｌｉａｎｇら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．（２００６）２０３：２２７１−７９ Ｗｒｉｇｈｔら、Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（２００７）２８２：１３４４７−５５ Ｃｈｕｎｇら、Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ．（２００６）１６：９０２−０７ Ｚｈｅｎｇら、Ｎａｔｕｒｅ（２００７）４４５：６４８−５１ Ｒｅｎａｕｌｄ、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００３）３：６６７−７６ Ｗｏｌｋら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２００４）２１：２４１−５４
本発明は、ヒトＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーの（複数の）受容体、それゆえヒトＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの生物活性を提供する。本発明は、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーである新規なマウスタンパク質も提供する。マウスＴｈ１７細胞によるマウスＩＬ−１７Ａ、マウスＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ、およびマウスＩＬ−１７Ｆの発現の特徴、試験管内でのマウスＩＬ−１７Ａ、マウスＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ、およびマウスＩＬ−１７Ｆの機能および活性の比較、生体内での好中球補充およびケモカイン産生においてマウスＩＬ−１７Ａ、マウスＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ、およびマウスＩＬ−１７Ｆが果たす役割の比較も本明細書で開示される。加えて、気道炎症の調節におけるこれらのサイトカインの不可欠な役割を調べるためのＴｈ１７細胞養子移入モデルも確立される。本明細書では、ｍＩＬ−１７ＦおよびｍＩＬ−２２が気道のｍＩＬ−１７ＡまたはｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａと重複した機能を持たないことと、マウスＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａが生物学的に活性であり、生体内で好中球補充を誘導可能であることが示される。それゆえ本発明は、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル経路を各種の疾患、たとえば気道炎症、関節炎、喘息、アレルギー、ＣＯＰＤ、嚢胞性線維症、クローン病などの予防および／または治療の新たな標的として提供する。
本発明は、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７ＡヘテロダイマーおよびＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達に関連する各種の方法および組成物を提供する。それゆえ少なくとも１つの実施形態において、本発明は、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｒを含有するサンプルを複数の試験化合物の１種と接触させるステップと；サンプル中のＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの生物活性が、試験化合物と接触していないサンプル中のＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの生物活性と比較して低下したか否かを判定するステップとを含み；それにより試験化合物と接触したサンプル中のＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの生物活性のこのような低下によって、化合物をＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬として同定する、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達を拮抗することが可能な化合物をスクリーニングする方法を提供する。少なくとも１つの他の実施形態において、方法はさらに、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬が特異的ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬であるか否かを同定する最初または最後のステップを含む。少なくとも１つの他の実施形態において、同定するステップがさらに、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｒを含有するサンプルをＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬と接触させるステップと；サンプル中のＩＬ−１７Ａの生物活性が、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬と接触していないサンプル中のＩＬ−１７Ａの生物活性と比較して低下したか否かを判定するステップと；ＩＬ−１７ＦおよびＩＬ−１７Ｒを含有するサンプルをＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬と接触させるステップと；サンプル中のＩＬ−１７Ｆの生物活性が、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬と接触していないサンプル中のＩＬ−１７Ｆの生物活性と比較して低下したか否かを判定するステップとを含み；それによりＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬がＩＬ−１７ＦおよびＩＬ−１７Ａの両方の生物活性を低下させられなかったことによって、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬を特異的ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬として同定する。少なくとも１つの他の実施形態において、本発明はこれらの方法の１つによって同定された化合物を提供する。
少なくとも１つの実施形態において、本発明は、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７ＲＣを含有するサンプルを複数の試験化合物の１種と接触させるステップと；サンプル中のＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの生物活性が、試験化合物と接触していないサンプル中のＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの生物活性と比較して低下したか否かを判定するステップとを含み；それにより試験化合物と接触したサンプル中のＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの生物活性のこのような低下によって、化合物をＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬として同定する、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達を拮抗することが可能な化合物をスクリーニングする方法を提供する。少なくとも１つの他の実施形態において、方法はさらに、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬が特異的ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬であるか否かを同定する最初または最後のステップを含む。少なくとも１つの他の実施形態において、同定するステップがさらに、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７ＲＣを含有するサンプルをＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬と接触させるステップと；サンプル中のＩＬ−１７Ａの生物活性が、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬と接触していないサンプル中のＩＬ−１７Ａの生物活性と比較して低下したか否かを判定するステップと；ＩＬ−１７ＦおよびＩＬ−１７ＲＣを含有するサンプルをＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬と接触させるステップと；サンプル中のＩＬ−１７Ｆの生物活性が、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬と接触していないサンプル中のＩＬ−１７Ｆの生物活性と比較して低下したか否かを判定するステップとを含み；それによりＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬がＩＬ−１７ＦおよびＩＬ−１７Ａの両方の生物活性を低下させられなかったことによって、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬を特異的ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬として同定する。少なくとも１つの他の実施形態において、本発明はこれらの方法の１つによって同定された化合物を提供する。
少なくとも１つの実施形態において、本発明は、対象にＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬を投与するステップを含む、対象のＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ生物活性を抑制する方法を提供する。少なくとも１つの他の実施形態において、本発明は、細胞集団にＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬を投与するステップを含む、細胞集団のＧＲＯ−α分泌を抑制する方法を提供する。少なくとも１つの他の実施形態において、本発明は、対象にＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬の治療的有効量を投与するステップを含む、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ関連障害のリスクのある、またはＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ関連障害と診断された対象を治療する方法を提供する。少なくとも１つのさらなる実施形態において、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬は、特異的ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬である。少なくとも１つの他のさらなる実施形態において、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬は、拮抗小型分子および拮抗抗体からなる群より選択される。少なくとも１つの他の実施形態において、拮抗小型分子はＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａに特異的である。少なくとも１つの他の実施形態において、拮抗抗体はＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａに特異的である。少なくとも１つの他の実施形態において、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬は、本発明の方法の１つによって同定された化合物である。少なくとも１つの他の実施形態において、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ関連障害は炎症性障害である。少なくとも１つの他の実施形態において、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ関連障害は呼吸器障害である。少なくとも１つのさらなる実施形態において、呼吸器障害は気道炎症、喘息、およびＣＯＰＤからなる群より選択される。
少なくとも１つの実施形態において、本発明はＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬および製薬的に許容される担体を含む製薬組成物を提供する。少なくとも１つの他の実施形態において、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬は、拮抗小型分子および拮抗抗体からなる群より選択される。少なくとも１つの他の実施形態において、拮抗小型分子はＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａに特異的である。少なくとも１つの他の実施形態において、拮抗抗体はＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａに特異的である。少なくとも１つの他の実施形態において、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬は、本発明の方法の１つによって同定された化合物である。
少なくとも１つの実施形態において、本発明はＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーを特異的に結合な可能な単離抗体を提供する。少なくとも１つの他の実施形態において、抗体はＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達を抑制する。少なくとも１つの他の実施形態において、本発明はＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーを特異的に結合な可能な小型分子を提供する。少なくとも１つの他の実施形態において、小型分子はＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達を抑制する。
少なくとも１つの実施形態において、本発明は、対象にＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａを投与するステップを含む、対象において気道炎症を誘発する方法を提供する。少なくとも１つの他の実施形態において、対象はマウスである。
ＥＬＩＳＡによって測定した、濃度が上昇するヒトＩＬ−１７Ａ（ｈＩＬ−１７Ａ；◆）、ヒトＩＬ−１７Ｆ（ｈＩＬ−１７Ｆ；●）、またはヒトＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ（ｈＩＬ−１７Ｆ／Ａ；△）サイトカイン（ｎｇ／ｍｌサイトカイン；ｘ軸）のＩＬ−１７Ｒ．Ｆｃ受容体（図１Ａ）またはＩＬ−１７ＲＣ．Ｆｃ受容体（図１Ｂ）への結合（Ｏ．Ｄ．４５０ｎｍ；ｙ軸）を示す。 ＥＬＩＳＡによって測定した、濃度が上昇するヒトＩＬ−１７Ａ（ｈＩＬ−１７Ａ；◆）、ヒトＩＬ−１７Ｆ（ｈＩＬ−１７Ｆ；●）、またはヒトＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ（ｈＩＬ−１７Ｆ／Ａ；△）サイトカイン（ｎｇ／ｍｌサイトカイン；ｘ軸）のＩＬ−１７Ｒ．Ｆｃ受容体（図１Ａ）またはＩＬ−１７ＲＣ．Ｆｃ受容体（図１Ｂ）への結合（Ｏ．Ｄ．４５０ｎｍ；ｙ軸）を示す。 濃度が上昇するヒトＩＬ−１７Ａ（ＩＬ−１７Ａ；◆）、ヒトＩＬ−１７Ｆ（ＩＬ−１７Ｆ；▲）、またはヒトＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ（ＩＬ−１７Ｆ／Ａ；○）（ｎｇ／ｍｌサイトカイン；ｘ軸）による処置後のＢＪ細胞からのＧＲＯ−α放出によって表されるヒトＩＬ−１７Ａ、ヒトＩＬ−１７Ｆ、およびヒトＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ機能（生物）活性（ｐｇ／ｍｌ ＧＲＯ−アルファ；ｙ軸）を示す。ＧＲＯ−α放出はＥＬＩＳＡによって測定した。 （図３Ａ）溶解性受容体融合タンパク質ｈＩＬ−１７Ｒ．Ｆｃ、ｈＩＬ−１７ＲＣ．ＦｃまたはｈＩＬ−１７Ｒ．ＦｃおよびｈＩＬ−１７ＲＣ．Ｆｃの組合せならびに（図３Ｂ）抗ｈＩＬ−１７Ｒ抗体および抗ｈＩＬ−１７ＲＣ抗体の存在下で、１ｎｇ／ｍｌヒトＩＬ−１７Ａ、５０ｎｇ／ｍｌヒトＩＬ−１７Ｆ、または５ｎｇ／ｍｌヒトＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａサイトカインによって誘発されたＢＪ細胞からの相対ＧＲＯ−α放出（相対的応答；ｙ軸）を示す。対照抗体は両方の実験に含まれていた。 （図３Ａ）溶解性受容体融合タンパク質ｈＩＬ−１７Ｒ．Ｆｃ、ｈＩＬ−１７ＲＣ．ＦｃまたはｈＩＬ−１７Ｒ．ＦｃおよびｈＩＬ−１７ＲＣ．Ｆｃの組合せならびに（図３Ｂ）抗ｈＩＬ−１７Ｒ抗体および抗ｈＩＬ−１７ＲＣ抗体の存在下で、１ｎｇ／ｍｌヒトＩＬ−１７Ａ、５０ｎｇ／ｍｌヒトＩＬ−１７Ｆ、または５ｎｇ／ｍｌヒトＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａサイトカインによって誘発されたＢＪ細胞からの相対ＧＲＯ−α放出（相対的応答；ｙ軸）を示す。対照抗体は両方の実験に含まれていた。 ＢＪ細胞からのｈＩＬ−１７ＡおよびｈＩＬ−１７Ｆ誘発ＧＲＯ−α放出（相対的応答；ｙ軸）に対する、４種のＩＬ−１７Ｒ ｓｉＲＮＡ（Ｒ−１、Ｒ−２、Ｒ−３、およびＲ−４；ｘ軸）および４種のＩＬ−１７ＲＣ ｓｉＲＮＡ（ＲＣ−１、ＲＣ−２、ＲＣ−３、ＲＣ−４；ｘ軸）の効果をそれぞれ示す。「Ｔａｑｍａｎ」は、処置条件下でのＩＬ−１７Ｒ（図４Ａ）またはＩＬ−１７ＲＣ（図４Ｂ）ｍＲＮＡの相対量を表す。「モック」は、培地およびトランスフェクション試薬のみによる処置を表し、「ＮＴＣ１」は、非特異的対照ｓｉＲＮＡによるトランスフェクションを示す。ｈＩＬ−１７ＲおよびｈＩＬ−１７ＲＣがそれぞれ移入されたＨＥＫ２９３細胞中でのｈＩＬ−１７ＲおよびｈＩＬ−１７ＲＣ発現に対するｓｉＲＮＡトランスフェクションの効果は、ウェスタンブロットによって図４Ｃに示す。アクチンウェスタンブロットは、タンパク質添加対照を表す。 ＢＪ細胞からのｈＩＬ−１７ＡおよびｈＩＬ−１７Ｆ誘発ＧＲＯ−α放出（相対的応答；ｙ軸）に対する、４種のＩＬ−１７Ｒ ｓｉＲＮＡ（Ｒ−１、Ｒ−２、Ｒ−３、およびＲ−４；ｘ軸）および４種のＩＬ−１７ＲＣ ｓｉＲＮＡ（ＲＣ−１、ＲＣ−２、ＲＣ−３、ＲＣ−４；ｘ軸）の効果をそれぞれ示す。「Ｔａｑｍａｎ」は、処置条件下でのＩＬ−１７Ｒ（図４Ａ）またはＩＬ−１７ＲＣ（図４Ｂ）ｍＲＮＡの相対量を表す。「モック」は、培地およびトランスフェクション試薬のみによる処置を表し、「ＮＴＣ１」は、非特異的対照ｓｉＲＮＡによるトランスフェクションを示す。ｈＩＬ−１７ＲおよびｈＩＬ−１７ＲＣがそれぞれ移入されたＨＥＫ２９３細胞中でのｈＩＬ−１７ＲおよびｈＩＬ−１７ＲＣ発現に対するｓｉＲＮＡトランスフェクションの効果は、ウェスタンブロットによって図４Ｃに示す。アクチンウェスタンブロットは、タンパク質添加対照を表す。 ＢＪ細胞からのｈＩＬ−１７ＡおよびｈＩＬ−１７Ｆ誘発ＧＲＯ−α放出（相対的応答；ｙ軸）に対する、４種のＩＬ−１７Ｒ ｓｉＲＮＡ（Ｒ−１、Ｒ−２、Ｒ−３、およびＲ−４；ｘ軸）および４種のＩＬ−１７ＲＣ ｓｉＲＮＡ（ＲＣ−１、ＲＣ−２、ＲＣ−３、ＲＣ−４；ｘ軸）の効果をそれぞれ示す。「Ｔａｑｍａｎ」は、処置条件下でのＩＬ−１７Ｒ（図４Ａ）またはＩＬ−１７ＲＣ（図４Ｂ）ｍＲＮＡの相対量を表す。「モック」は、培地およびトランスフェクション試薬のみによる処置を表し、「ＮＴＣ１」は、非特異的対照ｓｉＲＮＡによるトランスフェクションを示す。ｈＩＬ−１７ＲおよびｈＩＬ−１７ＲＣがそれぞれ移入されたＨＥＫ２９３細胞中でのｈＩＬ−１７ＲおよびｈＩＬ−１７ＲＣ発現に対するｓｉＲＮＡトランスフェクションの効果は、ウェスタンブロットによって図４Ｃに示す。アクチンウェスタンブロットは、タンパク質添加対照を表す。 濃度が低下するヒトＩＬ−１７Ａ（図５Ａ）、ヒトＩＬ−１７Ｆ（図５Ｂ）、またはヒトＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ（図５Ｃ）（ｘ軸）によって処置したＢＪ細胞におけるＧＲＯ−α放出（ｐｇ／ｍｌ ＧＲＯα；ｙ軸）に対する、ＩＬ−１７Ｒ ｓｉＲＮＡ（Ｒ−３およびＲ−４）ならびにＩＬ−１７ＲＣ ｓｉＲＮＡ（ＲＣ−２およびＲＣ−４）処置の効果を表す。ＮＴＣ１は非特異的対照ｓｉＲＮＡによるトランスフェクションを表す。 照射脾細胞、１μｇ／ｍｌ ＯＶＡ３２３−３３９、および次の３種のサイトカイン処置のうち１つ：ＴＧＦ−β、ＩＬ−６、またはＴＧＦ−βおよびＩＬ−６の両方（ＴＧＦ−β、ＩＬ−６）による４日間の活性化後の、ＩＬ−１７Ｆ（ｙ軸）およびＩＬ−１７Ａ（ｘ軸）について細胞内染色されたＣＤ４＋ＣＤ６２Ｌ＋（未処置）ＤＯ１１ Ｔ細胞のフローサイトメトリーのドットプロットを示す。 活性化の１日、２日、３日、または４日後に細胞内マウスＩＬ−１７Ｆ（ｙ軸）およびマウスＩＬ−１７Ａ（ｘ軸）について染色され、照射脾細胞、１μｇ／ｍｌ ＯＶＡ３２３−３３９、ならびにＴＧＦ−βおよびＩＬ−６の両方によって活性化されたＣＤ４＋ＣＤ６２Ｌ＋（未処置）ＤＯ１１ Ｔ細胞のフローサイトメトリーのドットプロットを示す。すべてのプロットはＣＤ４＋ＤＯ１１Ｔ細胞にゲート設定された。データは３回の独立した実験の代表である。 （左パネル（ｉ））抗ＩＬ−１７Ａ抗体または（右パネル（ｉｉ））抗ＩＬ−１７Ｆ抗体を用いて分析した、精製組換えマウスＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ、マウスＩＬ−１７Ａ、またはマウスＩＬ−１７Ｆタンパク質（レーン当り３５ｎｇ）のウェスタンブロットを示す。マウスのＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａのサイズは、その精製で使用されるタグの存在によって変更される（実施例２．２．２を参照）。 マウスＩＬ−１７Ａ（図７Ｂ）、マウスＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ（図７Ｃ）、またはマウスＩＬ−１７Ｆ（図７Ｄ）定量ＥＬＩＳＡによる、精製組換えマウスＩＬ−１７Ａ（白丸）、マウスＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ（黒丸）またはマウスＩＬ−１７Ｆ（黒三角）の各種濃度（ｎｇ／ｍｌ；ｘ軸）の検出（Ｏ．Ｄ．；ｙ軸）を示す。挿入図は低濃度の拡大図を表し、点線は検出限界を表す。 マウスＩＬ−１７Ａ（図７Ｂ）、マウスＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ（図７Ｃ）、またはマウスＩＬ−１７Ｆ（図７Ｄ）定量ＥＬＩＳＡによる、精製組換えマウスＩＬ−１７Ａ（白丸）、マウスＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ（黒丸）またはマウスＩＬ−１７Ｆ（黒三角）の各種濃度（ｎｇ／ｍｌ；ｘ軸）の検出（Ｏ．Ｄ．；ｙ軸）を示す。挿入図は低濃度の拡大図を表し、点線は検出限界を表す。 マウスＩＬ−１７Ａ（図７Ｂ）、マウスＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ（図７Ｃ）、またはマウスＩＬ−１７Ｆ（図７Ｄ）定量ＥＬＩＳＡによる、精製組換えマウスＩＬ−１７Ａ（白丸）、マウスＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ（黒丸）またはマウスＩＬ−１７Ｆ（黒三角）の各種濃度（ｎｇ／ｍｌ；ｘ軸）の検出（Ｏ．Ｄ．；ｙ軸）を示す。挿入図は低濃度の拡大図を表し、点線は検出限界を表す。 照射脾細胞、１μｇ／ｍｌ ＯＶＡ３２３−３３９、および表示されたサイトカイン（ｘ軸）による７日間の１次活性化で活性化されたＣＤ４＋ＣＤ６２Ｌ＋ＤＯ１１ Ｔ細胞による、マウスＩＬ−１７Ａ（白棒）、マウスＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ（斜線棒）またはマウスＩＬ−１７Ｆ（黒棒）産生（ｎｇ／ｍｌ；ｙ軸）を示す。 照射脾細胞、１μｇ／ｍｌ ＯＶＡ３２３−３３９、および表示されたサイトカイン（ｘ軸；「１次」（すなわちＴＧＦ−β、ＩＬ−６、およびＩＬ−１β；またはＴＧＦ−β、ＩＬ−６、ＩＬ−１β、およびＩＬ−２３））による７日間の１次活性化で活性化され、収集され、一晩静止させられて、照射脾細胞、ＩＬ−２および１μｇ／ｍｌ ＯＶＡ３２３−３３９単独（−）；または以下：ＩＬ−２３、抗ＩＦＮ−γ抗体（αＩＦＮ−γ）、および抗ＩＬ−４抗体（αＩＬ−４）の添加のどちらかを用いて２次活性化（ｘ軸；「２次」）のために再刺激された、ＣＤ４＋ＣＤ６２Ｌ＋ＤＯ１１ Ｔ細胞による、マウスＩＬ−１７Ａ（白棒）、マウスＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ（斜線棒）またはマウスＩＬ−１７Ｆ（黒棒）産生（ｎｇ／ｍｌ；ｙ軸）を示す。図７Ｅおよび図７Ｆでは、各活性化の後、第４日にＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ、およびＩＬ−１７Ｆについて条件培地を分析して、表示されたデータは平均±ＳＤであり、＊はＩＬ−１７Ａの＜１ｎｇ／ｍｌを示す。図７Ｅおよび図７Ｆは、少なくとも３回の実験の代表である。 （図８Ａ）各種濃度のマウスＩＬ−１７Ａ（白四角）、マウスＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ（黒丸）、およびマウスＩＬ−１７Ｆ（黒三角）（サイトカイン（ｎｇ／ｍｌ）；ｘ軸）；（図８Ｂ）５０μｇ／ｍｌの２つの異なる抗ＩＬ−１７Ｆ抗体（αＩＬ−１７Ｆ（ＲＫ０１５−０１）（黒丸）またはαＩＬ−１７Ｆ（ＲＫ０１６−１７）（黒三角））あるいはラットＩｇＧ１（白四角）によって事前にインキュベートした、各種濃度のマウスＩＬ−１７Ｆ（ＩＬ−１７Ｆ（ｎｇ／ｍｌ）；ｘ軸）；あるいは（図８Ｃ）８０μｇ／ｍｌの表示された１種または複数の抗体によって事前にインキュベートした２００ｎｇ／ｍｌのマウスＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ（ｘ軸）を用いて２４時間インキュベートしたマウス肺上皮（ＭＬＥ−１２）細胞から単離した、条件培地のＣＸＣＬ１濃度（ＣＸＣＬ１（ｐｇ／ｍｌ；ｙ軸）を示す。図８Ａ、図８Ｂ、および図８Ｃでは、点線は外因性サイトカインの非存在下でＭＬＥ−１２細胞によって産生されたＣＸＣＬ１の基底量を表す。すべてのデータは平均±ＳＤとして表され、３回の実験の代表である。 （図８Ａ）各種濃度のマウスＩＬ−１７Ａ（白四角）、マウスＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ（黒丸）、およびマウスＩＬ−１７Ｆ（黒三角）（サイトカイン（ｎｇ／ｍｌ）；ｘ軸）；（図８Ｂ）５０μｇ／ｍｌの２つの異なる抗ＩＬ−１７Ｆ抗体（αＩＬ−１７Ｆ（ＲＫ０１５−０１）（黒丸）またはαＩＬ−１７Ｆ（ＲＫ０１６−１７）（黒三角））あるいはラットＩｇＧ１（白四角）によって事前にインキュベートした、各種濃度のマウスＩＬ−１７Ｆ（ＩＬ−１７Ｆ（ｎｇ／ｍｌ）；ｘ軸）；あるいは（図８Ｃ）８０μｇ／ｍｌの表示された１種または複数の抗体によって事前にインキュベートした２００ｎｇ／ｍｌのマウスＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ（ｘ軸）を用いて２４時間インキュベートしたマウス肺上皮（ＭＬＥ−１２）細胞から単離した、条件培地のＣＸＣＬ１濃度（ＣＸＣＬ１（ｐｇ／ｍｌ；ｙ軸）を示す。図８Ａ、図８Ｂ、および図８Ｃでは、点線は外因性サイトカインの非存在下でＭＬＥ−１２細胞によって産生されたＣＸＣＬ１の基底量を表す。すべてのデータは平均±ＳＤとして表され、３回の実験の代表である。 （図８Ａ）各種濃度のマウスＩＬ−１７Ａ（白四角）、マウスＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ（黒丸）、およびマウスＩＬ−１７Ｆ（黒三角）（サイトカイン（ｎｇ／ｍｌ）；ｘ軸）；（図８Ｂ）５０μｇ／ｍｌの２つの異なる抗ＩＬ−１７Ｆ抗体（αＩＬ−１７Ｆ（ＲＫ０１５−０１）（黒丸）またはαＩＬ−１７Ｆ（ＲＫ０１６−１７）（黒三角））あるいはラットＩｇＧ１（白四角）によって事前にインキュベートした、各種濃度のマウスＩＬ−１７Ｆ（ＩＬ−１７Ｆ（ｎｇ／ｍｌ）；ｘ軸）；あるいは（図８Ｃ）８０μｇ／ｍｌの表示された１種または複数の抗体によって事前にインキュベートした２００ｎｇ／ｍｌのマウスＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ（ｘ軸）を用いて２４時間インキュベートしたマウス肺上皮（ＭＬＥ−１２）細胞から単離した、条件培地のＣＸＣＬ１濃度（ＣＸＣＬ１（ｐｇ／ｍｌ；ｙ軸）を示す。図８Ａ、図８Ｂ、および図８Ｃでは、点線は外因性サイトカインの非存在下でＭＬＥ−１２細胞によって産生されたＣＸＣＬ１の基底量を表す。すべてのデータは平均±ＳＤとして表され、３回の実験の代表である。 （図９Ａ）ＢＡＬ液中のマウスＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ（ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ（ｐｇ／ｍｌ）；ｙ軸）およびマウスＩＬ−２２（ＩＬ−２２（ｐｇ／ｍｌ）；ｙ軸）の濃度；（図９Ｂ）ＢＡＬ液中の好中球、好酸球、リンパ球、および単球（ｘ軸）の細胞数の差（細胞（×１０５）；ｙ軸）；または（図９Ｃ）２．５×１０６ Ｔｈ１７細胞を投与して、続いて２４時間後にＰＢＳを１日１回、３日間連続して鼻内接種した、対照未処置ＢＡＬＢ／ｃ動物（白棒（図９Ａおよび図９Ｂ）；Ｔｈ１７／ＰＢＳ）、Ｔｈ１７細胞を投与せず、続いてオボアルブミン（ＯＶＡ）７５μｇを１日１回、３日間連続して鼻内接種した対照未処置ＢＡＬＢ／ｃ動物（斜線棒；細胞なし／ＯＶＡ）、または２．５×１０６ Ｔｈ１７細胞を投与して、続いて２４時間後にオボアルブミン（ＯＶＡ）７５μｇを１日１回、３日間連続して鼻内接種した未処置ＢＡＬＢ／ｃ動物（黒棒；Ｔｈ１７／ＯＶＡ）から単離した、肺の倍率４０×でのＨ＆Ｅ組織構造（「Ａ」は気道内腔を示し、「Ｖ」は血管を示す）を表す。図９Ａおよび図９Ｂでは、データは平均±ＳＥＭである。図９Ａ、図９Ｂ、および図９Ｃでは、ｎ＝１グループ当りマウス５〜６匹で、データは少なくとも２回の実験の代表である。 （図９Ａ）ＢＡＬ液中のマウスＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ（ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ（ｐｇ／ｍｌ）；ｙ軸）およびマウスＩＬ−２２（ＩＬ−２２（ｐｇ／ｍｌ）；ｙ軸）の濃度；（図９Ｂ）ＢＡＬ液中の好中球、好酸球、リンパ球、および単球（ｘ軸）の細胞数の差（細胞（×１０５）；ｙ軸）；または（図９Ｃ）２．５×１０６ Ｔｈ１７細胞を投与して、続いて２４時間後にＰＢＳを１日１回、３日間連続して鼻内接種した、対照未処置ＢＡＬＢ／ｃ動物（白棒（図９Ａおよび図９Ｂ）；Ｔｈ１７／ＰＢＳ）、Ｔｈ１７細胞を投与せず、続いてオボアルブミン（ＯＶＡ）７５μｇを１日１回、３日間連続して鼻内接種した対照未処置ＢＡＬＢ／ｃ動物（斜線棒；細胞なし／ＯＶＡ）、または２．５×１０６ Ｔｈ１７細胞を投与して、続いて２４時間後にオボアルブミン（ＯＶＡ）７５μｇを１日１回、３日間連続して鼻内接種した未処置ＢＡＬＢ／ｃ動物（黒棒；Ｔｈ１７／ＯＶＡ）から単離した、肺の倍率４０×でのＨ＆Ｅ組織構造（「Ａ」は気道内腔を示し、「Ｖ」は血管を示す）を表す。図９Ａおよび図９Ｂでは、データは平均±ＳＥＭである。図９Ａ、図９Ｂ、および図９Ｃでは、ｎ＝１グループ当りマウス５〜６匹で、データは少なくとも２回の実験の代表である。 （図９Ａ）ＢＡＬ液中のマウスＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ（ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ（ｐｇ／ｍｌ）；ｙ軸）およびマウスＩＬ−２２（ＩＬ−２２（ｐｇ／ｍｌ）；ｙ軸）の濃度；（図９Ｂ）ＢＡＬ液中の好中球、好酸球、リンパ球、および単球（ｘ軸）の細胞数の差（細胞（×１０５）；ｙ軸）；または（図９Ｃ）２．５×１０６ Ｔｈ１７細胞を投与して、続いて２４時間後にＰＢＳを１日１回、３日間連続して鼻内接種した、対照未処置ＢＡＬＢ／ｃ動物（白棒（図９Ａおよび図９Ｂ）；Ｔｈ１７／ＰＢＳ）、Ｔｈ１７細胞を投与せず、続いてオボアルブミン（ＯＶＡ）７５μｇを１日１回、３日間連続して鼻内接種した対照未処置ＢＡＬＢ／ｃ動物（斜線棒；細胞なし／ＯＶＡ）、または２．５×１０６ Ｔｈ１７細胞を投与して、続いて２４時間後にオボアルブミン（ＯＶＡ）７５μｇを１日１回、３日間連続して鼻内接種した未処置ＢＡＬＢ／ｃ動物（黒棒；Ｔｈ１７／ＯＶＡ）から単離した、肺の倍率４０×でのＨ＆Ｅ組織構造（「Ａ」は気道内腔を示し、「Ｖ」は血管を示す）を表す。図９Ａおよび図９Ｂでは、データは平均±ＳＥＭである。図９Ａ、図９Ｂ、および図９Ｃでは、ｎ＝１グループ当りマウス５〜６匹で、データは少なくとも２回の実験の代表である。 Ｔｈ１７細胞を投与されていないが（−；ｘ軸）、続いてオボアルブミンを鼻内接種された（ＯＶＡ；＋）対照動物から、もしくはＴｈ１７細胞を投与され（＋）、未処置であり（−）、あるいはマウスＩＬ−１７Ａ（抗ＩＬ−１７Ａ（５０１０４））に対する中和抗体（ｍＡｂ）、マウスＩＬ−１７Ｆ（抗ＩＬ−１７Ｆ（ＲＫ０１５−０１））に対する中和抗体、マウスＩＬ−２２（抗ＩＬ−２２（Ａｂ−０１））に対する中和抗体、または適切なアイソタイプ対照抗体（ＩｇＧ２ａまたはＩｇＧ１）によって処置され、続いてオボアルブミンを鼻内接種された（ＯＶＡ；＋）動物から単離したＢＡＬ液中の、（図１０Ａ）好中球の数（細胞（×１０５）；ｙ軸）、（図１０Ｂ）マウスＣＸＣＬ１の濃度（ｎｇ／ｍｌ；ｙ軸）、または（図１０Ｃ）ＣＸＣＬ５の濃度（ｎｇ／ｍｌ；ｙ軸）を示す。ＢＡＬ液は最後のオボアルブミン接種の２４時間後に収集した。データは平均±ＳＥＭであり、ｎ＝１グループ当りマウス８〜９匹で、抗体によって２〜３回の実験の代表である。 Ｔｈ１７細胞を投与されていないが（−；ｘ軸）、続いてオボアルブミンを鼻内接種された（ＯＶＡ；＋）対照動物から、もしくはＴｈ１７細胞を投与され（＋）、未処置であり（−）、あるいはマウスＩＬ−１７Ａ（抗ＩＬ−１７Ａ（５０１０４））に対する中和抗体（ｍＡｂ）、マウスＩＬ−１７Ｆ（抗ＩＬ−１７Ｆ（ＲＫ０１５−０１））に対する中和抗体、マウスＩＬ−２２（抗ＩＬ−２２（Ａｂ−０１））に対する中和抗体、または適切なアイソタイプ対照抗体（ＩｇＧ２ａまたはＩｇＧ１）によって処置され、続いてオボアルブミンを鼻内接種された（ＯＶＡ；＋）動物から単離したＢＡＬ液中の、（図１０Ａ）好中球の数（細胞（×１０５）；ｙ軸）、（図１０Ｂ）マウスＣＸＣＬ１の濃度（ｎｇ／ｍｌ；ｙ軸）、または（図１０Ｃ）ＣＸＣＬ５の濃度（ｎｇ／ｍｌ；ｙ軸）を示す。ＢＡＬ液は最後のオボアルブミン接種の２４時間後に収集した。データは平均±ＳＥＭであり、ｎ＝１グループ当りマウス８〜９匹で、抗体によって２〜３回の実験の代表である。 Ｔｈ１７細胞を投与されていないが（−；ｘ軸）、続いてオボアルブミンを鼻内接種された（ＯＶＡ；＋）対照動物から、もしくはＴｈ１７細胞を投与され（＋）、未処置であり（−）、あるいはマウスＩＬ−１７Ａ（抗ＩＬ−１７Ａ（５０１０４））に対する中和抗体（ｍＡｂ）、マウスＩＬ−１７Ｆ（抗ＩＬ−１７Ｆ（ＲＫ０１５−０１））に対する中和抗体、マウスＩＬ−２２（抗ＩＬ−２２（Ａｂ−０１））に対する中和抗体、または適切なアイソタイプ対照抗体（ＩｇＧ２ａまたはＩｇＧ１）によって処置され、続いてオボアルブミンを鼻内接種された（ＯＶＡ；＋）動物から単離したＢＡＬ液中の、（図１０Ａ）好中球の数（細胞（×１０５）；ｙ軸）、（図１０Ｂ）マウスＣＸＣＬ１の濃度（ｎｇ／ｍｌ；ｙ軸）、または（図１０Ｃ）ＣＸＣＬ５の濃度（ｎｇ／ｍｌ；ｙ軸）を示す。ＢＡＬ液は最後のオボアルブミン接種の２４時間後に収集した。データは平均±ＳＥＭであり、ｎ＝１グループ当りマウス８〜９匹で、抗体によって２〜３回の実験の代表である。 マウスに（Ａ）マウスＩＬ−１７ＡまたはマウスＩＬ−１７Ｆ（ｘ軸）の１．５μｇ鼻内１回用量、（Ｂ）マウスＩＬ−１７ＡまたはマウスＩＬ−１７Ｆ（ｘ軸）の１日１．５μｇ、３日間連続の鼻内用量、または（Ｃ〜Ｅ）マウスＩＬ−１７Ａ、マウスＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ、マウスＩＬ−１７Ｆ、またはマウスＩＬ−２２（ｘ軸）の１．５μｇ鼻内１回用量を投与した２４時間後に単離した、ＢＡＬ液中の好中球の数（細胞；ｙ軸）（Ａ〜Ｃ）、ＣＸＣＬ１濃度（ｐｇ／ｍｌ；ｙ軸）（Ａ、ＢおよびＤ）、およびＣＸＣＬ５濃度（ｐｇ／ｍｌ；ｙ軸）（Ａ、ＢおよびＥ）を示す。対照動物にはリン酸緩衝生理的食塩水（ＰＢＳ）を投与した。データは平均±ＳＥＭであり、ｎ＝７で、２回の実験の代表である。すべてのｐ値は、ＰＢＳのみを投与された対照動物に対して計算される。 マウスに（Ａ）マウスＩＬ−１７ＡまたはマウスＩＬ−１７Ｆ（ｘ軸）の１．５μｇ鼻内１回用量、（Ｂ）マウスＩＬ−１７ＡまたはマウスＩＬ−１７Ｆ（ｘ軸）の１日１．５μｇ、３日間連続の鼻内用量、または（Ｃ〜Ｅ）マウスＩＬ−１７Ａ、マウスＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ、マウスＩＬ−１７Ｆ、またはマウスＩＬ−２２（ｘ軸）の１．５μｇ鼻内１回用量を投与した２４時間後に単離した、ＢＡＬ液中の好中球の数（細胞；ｙ軸）（Ａ〜Ｃ）、ＣＸＣＬ１濃度（ｐｇ／ｍｌ；ｙ軸）（Ａ、ＢおよびＤ）、およびＣＸＣＬ５濃度（ｐｇ／ｍｌ；ｙ軸）（Ａ、ＢおよびＥ）を示す。対照動物にはリン酸緩衝生理的食塩水（ＰＢＳ）を投与した。データは平均±ＳＥＭであり、ｎ＝７で、２回の実験の代表である。すべてのｐ値は、ＰＢＳのみを投与された対照動物に対して計算される。 マウスに（Ａ）マウスＩＬ−１７ＡまたはマウスＩＬ−１７Ｆ（ｘ軸）の１．５μｇ鼻内１回用量、（Ｂ）マウスＩＬ−１７ＡまたはマウスＩＬ−１７Ｆ（ｘ軸）の１日１．５μｇ、３日間連続の鼻内用量、または（Ｃ〜Ｅ）マウスＩＬ−１７Ａ、マウスＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ、マウスＩＬ−１７Ｆ、またはマウスＩＬ−２２（ｘ軸）の１．５μｇ鼻内１回用量を投与した２４時間後に単離した、ＢＡＬ液中の好中球の数（細胞；ｙ軸）（Ａ〜Ｃ）、ＣＸＣＬ１濃度（ｐｇ／ｍｌ；ｙ軸）（Ａ、ＢおよびＤ）、およびＣＸＣＬ５濃度（ｐｇ／ｍｌ；ｙ軸）（Ａ、ＢおよびＥ）を示す。対照動物にはリン酸緩衝生理的食塩水（ＰＢＳ）を投与した。データは平均±ＳＥＭであり、ｎ＝７で、２回の実験の代表である。すべてのｐ値は、ＰＢＳのみを投与された対照動物に対して計算される。 マウスに（Ａ）マウスＩＬ−１７ＡまたはマウスＩＬ−１７Ｆ（ｘ軸）の１．５μｇ鼻内１回用量、（Ｂ）マウスＩＬ−１７ＡまたはマウスＩＬ−１７Ｆ（ｘ軸）の１日１．５μｇ、３日間連続の鼻内用量、または（Ｃ〜Ｅ）マウスＩＬ−１７Ａ、マウスＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ、マウスＩＬ−１７Ｆ、またはマウスＩＬ−２２（ｘ軸）の１．５μｇ鼻内１回用量を投与した２４時間後に単離した、ＢＡＬ液中の好中球の数（細胞；ｙ軸）（Ａ〜Ｃ）、ＣＸＣＬ１濃度（ｐｇ／ｍｌ；ｙ軸）（Ａ、ＢおよびＤ）、およびＣＸＣＬ５濃度（ｐｇ／ｍｌ；ｙ軸）（Ａ、ＢおよびＥ）を示す。対照動物にはリン酸緩衝生理的食塩水（ＰＢＳ）を投与した。データは平均±ＳＥＭであり、ｎ＝７で、２回の実験の代表である。すべてのｐ値は、ＰＢＳのみを投与された対照動物に対して計算される。 マウスに（Ａ）マウスＩＬ−１７ＡまたはマウスＩＬ−１７Ｆ（ｘ軸）の１．５μｇ鼻内１回用量、（Ｂ）マウスＩＬ−１７ＡまたはマウスＩＬ−１７Ｆ（ｘ軸）の１日１．５μｇ、３日間連続の鼻内用量、または（Ｃ〜Ｅ）マウスＩＬ−１７Ａ、マウスＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ、マウスＩＬ−１７Ｆ、またはマウスＩＬ−２２（ｘ軸）の１．５μｇ鼻内１回用量を投与した２４時間後に単離した、ＢＡＬ液中の好中球の数（細胞；ｙ軸）（Ａ〜Ｃ）、ＣＸＣＬ１濃度（ｐｇ／ｍｌ；ｙ軸）（Ａ、ＢおよびＤ）、およびＣＸＣＬ５濃度（ｐｇ／ｍｌ；ｙ軸）（Ａ、ＢおよびＥ）を示す。対照動物にはリン酸緩衝生理的食塩水（ＰＢＳ）を投与した。データは平均±ＳＥＭであり、ｎ＝７で、２回の実験の代表である。すべてのｐ値は、ＰＢＳのみを投与された対照動物に対して計算される。 ヤギ抗ラットＩｇＧ１で事前にコーティングされたＥＬＩＳＡプレートに結合した２つの異なる抗ＩＬ−１７Ｆ抗体：（Ａ）抗ＩＬ−１７Ｆ（ＲＫ０１５−０１）または（Ｂ）抗ＩＬ−１７Ｆ（ＲＫ０１６−１７）の一方を捕捉抗体として使用し、ヤギ抗マウスＩＬ−１７Ａを検出試薬として使用した、組換えマウスＩＬ−１７Ａ（白丸）またはマウスＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ（黒丸）の各種濃度（サイトカイン（ｎｇ／ｍｌ）；ｘ軸）の光学密度（Ｏ．Ｄ．；ｙ軸）を測定するＥＬＩＳＡの結果を示す。 ヤギ抗ラットＩｇＧ１で事前にコーティングされたＥＬＩＳＡプレートに結合した２つの異なる抗ＩＬ−１７Ｆ抗体：（Ａ）抗ＩＬ−１７Ｆ（ＲＫ０１５−０１）または（Ｂ）抗ＩＬ−１７Ｆ（ＲＫ０１６−１７）の一方を捕捉抗体として使用し、ヤギ抗マウスＩＬ−１７Ａを検出試薬として使用した、組換えマウスＩＬ−１７Ａ（白丸）またはマウスＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ（黒丸）の各種濃度（サイトカイン（ｎｇ／ｍｌ）；ｘ軸）の光学密度（Ｏ．Ｄ．；ｙ軸）を測定するＥＬＩＳＡの結果を示す。 ５０μｇ／ｍｌの以下の抗体の１種（ｘ軸）：ＩｇＧ２ａ、抗マウスＩＬ−１７Ａ（抗ｍＩＬ１７Ａ（５０１０４））、ラットＩｇＧ１（ｒＩｇＧ１）、抗マウスＩＬ−１７Ｆ（抗ｍＩＬ１７Ｆ（ＲＫ０１５−０１））、および抗マウスＩＬ−１７Ｆ（抗ｍＩＬ１７Ｆ（ＲＫ０１６−１７））で事前にインキュベートされた２００ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１７Ａで２４時間培養したＭＬＥ−１２細胞から単離した培地中のＣＸＣＬ１（「ＣＸＣＬ−１ｐｇ／ｍｌ」；ｙ軸）の濃度を示す。 Ｔｈ１７細胞を投与されていないが（−；ｘ軸）、続いてオボアルブミンを鼻内接種された（ＯＶＡ ｉ．ｎ．；＋）対照動物から、もしくはＴｈ１７細胞を投与され（＋）、未処置であり（−）、あるいはマウスＩＬ−１７Ｆに対する中和モノクローナル抗体（ｍＡｂ）（抗ＩＬ−１７Ｆ（ＲＫ０１６−１７））または適切なアイソタイプ対照抗体（ＩｇＧ１）によって処置され（＋）、続いてオボアルブミンを鼻内接種された動物から単離されたＢＡＬ液中の好中球の数（細胞（×１０５）；左パネル、ｙ軸）およびＣＸＣＬ５の濃度（ｎｇ／ｍｌ；右パネル、ｙ軸）を示す。ＢＡＬ液は最後のオボアルブミン接種の２４時間後に収集した。データは平均±ＳＥＭであり、ｎ＝１グループ当りマウス８〜９匹で、抗体によって２〜３回の実験の代表である。
本発明は、一部は２つの研究に基づいており；一方の研究はヒト（ｈ）ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａのシグナル経路を解明し、他方は新規なマウス（ｍ）ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーおよび生体内でのその生物活性を明らかにした。これらの研究は単独でまたはひとまとめにされて、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ関連障害を治療する方法において、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル経路を標的にするための基礎を提供する。
本発明者らは、ＩＬ−１７サイトカインファミリーの最近同定されたメンバーであるｈＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａが、ｈＩＬ−１７ＦおよびｈＩＬ−１７Ａと同じ受容体複合体を利用することを示した。本発明者らは、ヒトＩＬ−１７Ｆ（ｈＩＬ−１７Ｆ）、ヒトＩＬ−１７Ａ（ｈＩＬ−１７Ａ）、およびヒトＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ（ｈＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ）ヘテロダイマーの生物活性に対するヒトＩＬ−１７Ｒ（ｈＩＬ−１７Ｒ）およびヒトＩＬ−１７ＲＣ（ｈＩＬ−１７ＲＣ）受容体の役割を検討した。ＢｉａｃｏｒｅおよびｓｉＲＮＡを含む各種の手法を使用して、本発明者らは、ｈＩＬ−１７ＲおよびｈＩＬ−１７ＲＣへのヒトＩＬ−１７Ｆ、ｈＩＬ−１７Ａ、およびｈＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ結合の相互作用および動力学パラメータを特徴付けた。溶解性ｈＩＬ−１７ＲおよびｈＩＬ−１７ＲＣ受容体、これらの受容体に対する抗体、およびこれらの受容体に向けられた受容体ｓｉＲＮＡ分子を使用して、本発明者らは、３種のｈＩＬ−１７サイトカイン（すなわちｈＩＬ−１７Ａ、ｈＩＬ−１７Ｆ、およびｈＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ）の生物活性にはｈＩＬ−１７Ｒと、より少ない程度のｈＩＬ−１７ＲＣが必要であることを示した。さらに本発明者らは、ｈＩＬ−１７Ａ−およびｈＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ−介在応答ではｈＩＬ−１７Ｒが優勢であるが、ｈＩＬ−１７Ｆの生物活性ではｈＩＬ−１７ＲＣがＩＬ−１７Ｒよりも重要であると思われる証拠を提供する。それゆえ本発明は、一部は以下の発見：（１）ｈＩＬ−１７Ａ、ｈＩＬ−１７Ｆ、およびｈＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａは、ｈＩＬ−１７ＲＣ受容体に同じ親和性で結合する；（２）ｈＩＬ−１７ＡはｈＩＬ−１７Ｒ受容体に対して最強の親和性を有し、それにｈＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーが続き、それにｈＩＬ−１７Ｆが続く；（３）ｈＩＬ−１７Ａ、ｈＩＬ−１７Ｆ、およびｈＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａは、炎症誘発性サイトカイン（たとえばＧＲＯ−α）の放出を誘導する；（４）ｈＩＬ−１７ＲおよびｈＩＬ−１７ＲＣは、ｈＩＬ−１７Ｆ、ｈＩＬ−１７Ａ、およびｈＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達に必要であることに基づく。ｈＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７ＡがｈＩＬ−１７ＲおよびｈＩＬ−１７ＲＣを結合するという発見により、たとえば炎症性疾患、呼吸器障害、自己免疫疾患、および移植片拒絶を治療する方法における標的として本シグナル経路が与えられる。
ｈＩＬ−１７ＲがｈＩＬ−１７ＡおよびｈＩＬ−１７Ｆの機能活性に必要であることが先に報告された（ＭｃＡｌｌｉｓｔｅｒら、（２００５）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７５：４０４−１２）。また、ｈＩＬ−１７Ｒがリガンドの非存在下で細胞表面にて自己会合することと、受容体会合がｈＩＬ−１７Ａの存在下では立体配座変化のために減少することとが最近示された（Ｋｒａｍｅｒら、（２００６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７６：７１１−１５）。別の研究は、リガンド結合がｈＩＬ−１７Ｒの立体配座を変化させて、ｈＩＬ−１７ＲＣとの機能的異型相互作用を促進することを提唱した（Ｔｏｙら、（２００６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７７：３６−３９）。本発明に関連する研究は、サイトカインの生物活性におけるＩＬ−１７Ｒ／ＩＬ−１７ＲＣ細胞表面受容体複合体の役割を示唆している。
さらに本発明者らは、マウスＴｈ１７細胞がマウスＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ（ｍＩＬ−１７Ｆ／ｌＬ−１７Ａ）ヘテロダイマータンパク質も産生することを発見した。Ｔｈ１７へと分化する未処置ＣＤ４＋Ｔ細胞は、ｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａを、ｍＩＬ−１７Ａ（ｍＩＬ−１７Ａ）ホモダイマーよりも多い量で、マウスＩＬ−１７Ｆ（ｍＩＬ−１７Ｆ）ホモダイマーより少ない量で発現したが、分化したＴｈ１７細胞は、両方のマウスホモダイマーに匹敵する量でｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａを発現した。これらの結果は、Ｔｈ１７細胞によって産生されたＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ、およびＩＬ−１７Ｆの相対量が分化の段階に応じて調節されることを示す。これらの試験管内観察は、適応的免疫反応の早期の間にＴｈ１７細胞が分化することによる、生体内でのＩＬ−１７Ａ発現の制限を示唆している。最近、ＲＯＲγｔおよびＳＴＡＴ３転写因子がＴｈ１７分化の調節因子であると同定された（Ｉｖａｎｏｖら（２００６）Ｃｅｌｌ １２６：１１２１−３３；Ｃｈｅｎら（２００６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ Ｕ．Ｓ．Ａ．１０３：８１３７−４２）。観察された特徴的な特性は、未処置細胞対分化Ｔｈ１７細胞における、これらのまたは他の同定されていない転写因子の発現の差に関連する可能性がある。ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆをコードする座の間の転写到達性にも相違がある可能性がある。
本発明者らは、試験管内のｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７ＡがｍＩＬ−１７Ｆよりも効力が大きく、ｍＩＬ−１７Ａよりも効力が小さいことも示した。ｍＩＬ−１７Ｆ特異的抗体によってではなく、ＩＬ−１７Ａ特異的抗体によるｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの中和は、ｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ活性の大部分を低下させた。このことは、ｍＩＬ−１７ＡおよびｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７ＡがＩＬ−１７Ａ特異的抗体によって遮断される少なくとも１種の保存受容体結合部位を有することを示唆する。
生体内でのこれらのサイトカインを研究するために、本発明者らは、気道での好中球増加を特徴とするＴｈ１７細胞養子移入モデルを樹立した。ｍＩＬ−１７Ａ特異的抗体はＴｈ１７細胞が誘導した好中球増加およびＣＸＣＬ５発現を完全に予防したのに対して、ｍＩＬ−１７ＦまたはｍＩＬ−２２に特異的な抗体は、後者はＴｈ１７細胞によって産生されるサイトカインでもあるが、何ら効果がなかった。ｍＩＬ−１７ＦまたはｍＩＬ−２２ではなく、ｍＩＬ−１７ＡまたはｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａタンパク質の気道への直接投与は、好中球およびケモカイン発現を著しく増加させた。ひとまとめにすると、マウスのデータによって、ｍＩＬ−１７ＦおよびｍＩＬ−１７Ａが同一の機能を有さないことが示される。その上、マウスのデータは、新規なｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーの発現および機能を示し、気道炎症、たとえば気道好中球増加における本サイトカインの生体内での役割を示している。ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーは、Ｔｈ１７細胞のある機能に介在することが可能な新たなタンパク質に相当し、Ｔｈ１７系統で産生されるサイトカインの間の考えられる機能的協働に別の次元を加える。

ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ、およびＩＬ−１７ＲＣのポリヌクレオチドおよびポリペプチド
別途指摘しない限り、そして文脈が別途要求しない限り、ヒト（ｈ）またはマウス（ｍ）のいずれの種名もない「ＩＬ−１７Ａ」、「ＩＬ−１７Ｆ」、「ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ」、「ＩＬ−１７Ｒ」、（または「ＩＬ−１７ＲＡ」）および「ＩＬ−１７ＲＣ」という用語は、他の哺乳動物種と同様に、ヒトおよびマウス種の両方の各ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ、およびＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａサイトカインならびに各ＩＬ−１７Ｒ（またはＩＬ−１７ＲＡ）およびＩＬ−１７ＲＣ受容体を幅広く指す。
本発明は、ヒトＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル経路のさらなる特徴づけ、すなわちヒトＩＬ−１７Ａ、ヒトＩＬ−１７Ｆ、およびヒトＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの共通受容体としてのヒトＩＬ−１７ＲおよびヒトＩＬ−１７ＲＣの決定を提供する。したがって本発明は、ヒトＩＬ−１７Ｆ、ヒトＩＬ−１７Ａ、ヒトＩＬ−１７Ｒ、およびヒトＩＬ−１７ＲＣポリヌクレオチドおよびポリペプチドに関するものである。本発明は新規マウスＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーも提供する。したがって本発明は、マウスＩＬ−１７ＦおよびマウスＩＬ−１７Ａポリヌクレオチドおよびポリペプチドに関するものである。
ＩＬ−１７Ａヌクレオチドおよびアミノ酸配列は当分野で公知であり、提供される。ヒトＩＬ−１７ＡをコードするｃＤＮＡのヌクレオチド配列は配列番号：１として示され、ポリ（Ａ）テールを含む。核酸残基５４−５２１は、停止コドンを含む配列番号：１の読み取り枠を表す。配列番号：１によってコードされた全長ヒトＩＬ−１７Ａタンパク質のアミノ酸配列は、配列番号：２として示される。マウスＩＬ−１７ＡをコードするｃＤＮＡのヌクレオチド配列は、配列番号：３４として示される。配列番号：３４によってコードされた全長マウスＩＬ−１７Ａタンパク質のアミノ酸配列は、配列番号：３５として示される。
ＩＬ−１７Ｆヌクレオチドおよびアミノ酸配列は当分野で公知であり、提供される。ヒトＩＬ−１７ＦをコードするｃＤＮＡのヌクレオチド配列は、配列番号：３として示される。そのヌクレオチド配列によってコードされた全長ヒトＩＬ−１７Ｆタンパク質のアミノ酸配列は、配列番号：４として示される。成熟ＩＬ−１７Ｆタンパク質のアミノ酸配列は、配列番号：４のほぼアミノ酸３１から開始するタンパク質に相当する（たとえば参照によりその全体が本明細書に組み込まれている、米国特許出願第１０／１０２，０８０号明細書を参照）。マウスＩＬ−１７ＦをコードするｃＤＮＡのヌクレオチド配列は、配列番号：３６として示される。配列番号：３６によってコードされた全長マウスＩＬ−１７Ｆタンパク質のアミノ酸配列は、配列番号：３７として示される。
ＩＬ−１７Ｒヌクレオチドおよびアミノ酸配列は当分野で公知であり、提供される。ヒトＩＬ−１７ＲをコードするｃＤＮＡのヌクレオチド配列は配列番号：５として示され、ポリ（Ａ）テールを含む。核酸残基１３４−２７３４は、配列番号：５の読み取り枠を表し、停止コドンを含む。配列番号：５によってコードされた全長マウスＩＬ−１７Ｒタンパク質のアミノ酸配列は、配列番号：６として示される。ヒトＩＬ−１７Ｒのさらなる核酸配列は、ＮＣＢＩアクセション番号ＢＣ０１１６２４によって提供され、配列番号：２８として示される。配列番号：２８は、配列番号：２９で示される８６６アミノ酸タンパク質をコードする。
ＩＬ−１７ＲＣヌクレオチドおよびアミノ酸配列は当分野で公知であり、提供される。ヒトＩＬ−１７ＲＣをコードする複数のｃＤＮＡのヌクレオチド配列は配列番号：７、９、１１、１３および１５として示され、ポリ（Ａ）テールを含む。核酸残基２１９−２５９４、２１９−２３８１、２１９−１８３５、２１９−１０２２、および２１９−４９４は、停止コドンを含む、配列番号：７、９、１１、１３、および１５の読み取り枠をそれぞれ表す。配列番号：７、９、１１、１３、および１５によってコードされる全長ＩＬ−１７ＲＣタンパク質のアミノ酸配列は、配列番号：８、１０、１２、１４、および１６によってそれぞれ示される。ヒトＩＬ−１７ＲＣのさらなる核酸配列は、ＮＣＢＩアクセション番号ＡＹ３５９０９８によって提供され、配列番号：２６として示される。配列番号：２６は、配列番号：２７で示される７０５アミノ酸タンパク質をコードする。
本発明に関連する核酸は、ＤＮＡまたはＲＮＡを含み、全体または一部が合成であってもよい。本明細書に記載するようなヌクレオチド配列への言及は、文脈が別途要求しない限り、規定の配列を持つＤＮＡ分子を含み、Ｔの代わりにＵが使用された、規定の配列またはその補体を持つＲＮＡ分子をさらに含む。
本明細書に関連する単離されたポリヌクレオチドは、ハイブリダイゼーションプローブまたはプライマーとして使用されて、開示されたポリヌクレオチドをコードする配列と同じまたは類似の配列を有する核酸を同定および単離することがある。核酸を同定および単離するハイブリダイゼーション方法は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、サザンハイブリダイゼーション、インサイチューハイブリダイゼーションおよびノザンハイブリダイゼーションを含み、当業者に周知である。
ハイブリダイゼーション反応は、各種の厳密性条件下で実施されうる。ハイブリダイゼーション反応の厳密性は、２個の核酸分子が相互にハイブリダイズするのに伴う問題を含む。ハイブリダイズする各ポリヌクレオチドは、好ましくは低い厳密性条件下で、さらに好ましくは厳密性条件下で、最も好ましくは高い厳密性条件下で、その対応するポリヌクレオチドにハイブリダイズする。厳密性条件の例を下の表１に示す：高厳密性条件は、少なくともたとえば条件Ａ〜Ｆと同程度の厳密性条件であり；厳密性条件は、少なくともたとえば条件Ｇ〜Ｌと同程度の厳密性条件であり；低厳密性条件は、少なくともたとえば条件Ｍ〜Ｒと同程度の厳密性条件である。
１：ハイブリッド長は、ハイブリダイズするポリヌクレオチドの（複数の）ハイブリダイズされた領域について予想されるハイブリッド長である。ポリヌクレオチドを配列が未知の標的ポリヌクレオチドにハイブリダイズするとき、ハイブリッド長はハイブリダイズするポリヌクレオチドのハイブリッド長であると見なす。配列が公知のポリヌクレオチドがハイブリダイズされるとき、ハイブリッド長は、ポリヌクレオチドの配列を配列比較して、最適な配列相補性の１つまたは複数の領域を同定することによって決定される。

２：ＳＳＰＥ（１×ＳＳＰＥは、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、１０ｍＭ ＮａＨ２ＰＯ４、および１．２５ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４）をハイブリダイゼーションのＳＳＣ（１×ＳＳＣは、０．１５Ｍ ＮａＣｌおよび１５ｍＭクエン酸ナトリウムである）および洗浄緩衝液の代わりにすることが可能である；洗浄は、ハイブリダイゼーションが完了した後に１５分間実施する。

ＴＢ ＊−ＴＲ ＊：長さが５０塩基対未満であると予測されたハイブリッドのハイブリダイゼーション温度は、ハイブリッドの融解温度（Ｔｍ）より５〜１０℃低いはずであり、Ｔｍは次の式に従って決定される。長さが１８塩基対未満のハイブリッドの場合、Ｔｍ（℃）＝２（Ａ＋Ｔ塩基の数）＋４（Ｇ＋Ｃ塩基の数）。長さが１８〜４９塩基対のハイブリッドの場合、Ｔｍ（℃）＝８１．５＋１６．６（ｌｏｇ１０Ｎａ＋）＋０．４１（％Ｇ＋Ｃ）−（６００／Ｎ）、式中、Ｎはハイブリッド中の塩基の数であり、Ｎａ＋はハイブリダイゼーション緩衝液中のナトリウムイオンの濃度（１×ＳＳＣのＮａ＋＝０．１６５Ｍ）である。

ポリヌクレオチドハイブリダイゼーションの厳密性条件のさらなる例は、参照により本明細書に組み込まれている、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．，Ｅ．Ｆ．Ｆｒｉｔｓｃｈ，ａｎｄ Ｔ．Ｍａｎｉａｔｉｓ，１９８９，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，ｃｈａｐｔｅｒｓ ９ ａｎｄ １１、およびＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９９５，Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら、ｅｄｓ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ｓｅｃｔｉｏｎｓ ２．１０ ａｎｄ ６．３−６．４に与えられている。

本明細書に関連する単離されたポリヌクレオチドは、ハイブリダイゼーションプローブまたはプライマーとして使用されて、開示されたポリヌクレオチドの対立遺伝子変異体をコードする配列を有するＤＮＡを同定および単離することがある。対立遺伝子変異体は、開示されたポリヌクレオチドによってコードされたポリペプチドと同一である、または著しい類似性を有するポリペプチドをコードする、開示されたポリヌクレオチドの自然に発生した別の形である。好ましくは、対立遺伝子変異体は、開示されたポリヌクレオチドと少なくとも９０％の配列同一性（さらに好ましくは、少なくとも９５％の同一性；最も好ましくは、少なくとも９９％の同一性）を有する。あるいは、著しい類似性は、核酸セグメントが選択的ハイブリダイゼーション条件（たとえば高厳密性ハイブリダイゼーション条件）下で、開示されたポリヌクレオチドにハイブリダイズするときに存在する。
本明細書に関連する単離されたポリヌクレオチドはまた、ハイブリダイゼーションプローブまたはプライマーとして使用されて、開示されたポリヌクレオチドと相同のポリペプチドをコードする配列を有するＤＮＡを同定および単離することがある。これらの相同体は、開示されたポリペプチドまたはポリヌクレオチドとは異なる種から単離された、または同じ種であるが、開示されたポリヌクレオチドおよびポリペプチドに著しい配列類似性がある、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドである。好ましくは、ポリヌクレオチド相同体は、開示されたポリヌクレオチドと少なくとも５０％の配列同一性（さらに好ましくは、少なくとも７５％の同一性；最も好ましくは、少なくとも９０％の同一性）を有するが、ポリペプチド相同体は、開示されたポリペプチドと少なくとも３０％の配列同一性（さらに好ましくは、少なくとも４５％の同一性；最も好ましくは、少なくとも６０％の同一性）を有する。好ましくは、開示されたポリヌクレオチドおよびポリペプチドの相同体は、哺乳動物種から単離されたポリヌクレオチドおよびポリペプチドである。
２つの配列間の「相同性」または「配列同一性」の計算は次のように実施されることがある。配列は最適な比較を目的として、配列比較されることがある（たとえばギャップは最適な配列比較のために、第１および第２のアミノ酸または核酸配列の一方または両方に導入可能であり、非相同配列は比較目的のために、無視することができる）。好ましい実施形態において、比較を目的として配列比較された参照配列の長さは、参照配列の長さの、少なくとも３０％、好ましくは少なくとも４０％、さらに好ましくは少なくとも５０％、なおさらに好ましくは少なくとも６０％、なおさらに好ましくは少なくとも７０％、８０％、９０％、１００％である。次に対応するアミノ酸位置またはヌクレオチド位置でアミノ酸残基またはヌクレオチドが比較される。第１の配列内の位置が第２の配列内の対応する位置と同じアミノ酸残基またはヌクレオチドによって占有されているとき、ここで分子はその位置と同一であるか、または相同性を有する。２つの配列間の同一性のパーセントは、２つの配列の最適配列比較に導入する必要があるギャップの数、各ギャップの長さを考慮した、配列によって共有される同一位置の数の関数である。
２つの配列間の配列の比較および配列同一性のパーセントの決定は、数学的アルゴリズムを使用して達成される。一実施形態において、２つのアミノ酸配列間の同一性のパーセントは、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで入手可能）内のＧＡＰプログラムに組み込まれているＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈアルゴリズム（（１９７０）Ｊ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４４−５３）を使用して、Ｂｌｏｓｓｕｍ６２マトリクスまたはＰＡＭ２５０マトリクスのどちらか、そして１６、１４、１２、１０、８、６、または４のギャップ重みおよび１、２、３、４、５、または６の長重みを用いて決定される。別の実施形態において、２つのヌクレオチド配列間のパーセント同一性は、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで入手可能）内のＧＡＰプログラムを使用して、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリクスおよび４０、５０、６０、７０、または８０のギャップ重みおよび１、２、３、４、５、または６の長重みを用いて決定される。好ましいパラメータセット（および分子が本発明の配列同一性または相同性範囲内にあるか否かを判定するために適用すべきパラメータについて実務者に確信がない場合に、使用可能なパラメータセット）は、ギャップペナルティ１２、ギャップ伸長ペナルティ４、およびフレームシフト・ギャップ・ペナルティ５のＢｌｏｓｓｕｍ６２スコアリングマトリクスである。２つのアミノ酸またはヌクレオチド配列間の同一性のパーセントは、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれているＭｅｙｅｒｓ ａｎｄ Ｍｉｌｌｅｒ（（１９８９）ＣＡＢＩＯＳ ４：１１−１７）のアルゴリズムを使用して、ＰＡＭ１２０重み残基表（ｗｅｉｇｈｔ ｒｅｓｉｄｕｅ ｔａｂｌｅ）、ギャップ長ペナルティ１２およびギャップペナルティ４を用いて判定することも可能である。
本発明に関連するポリヌクレオチドをハイブリダイゼーションプローブおよびプライマーとしても使用して、本発明に関連するポリペプチドを発現する細胞および組織ならびにそれらが発現される条件を同定することがある。
さらに、本発明に関連するポリヌクレオチドの機能は、細胞または生物内の本発明に関連するポリヌクレオチドに対応する遺伝子の発現を変化させる（すなわち増強、低減、または修飾する）ために、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを使用することによって直接試験されることもある。これらの「対応する遺伝子」は、転写されて本発明に関連するポリペプチドが誘導されるｍＲＮＡを産生する本発明に関連するゲノムＤＮＡ配列である。
本発明に関連する遺伝子の発現の変化は、本発明に関連する遺伝子から転写されたｍＲＮＡを結合および／または切断するアンチセンスポリヌクレオチドおよびリボザイムなどの各種の抑制ポリヌクレオチドの使用によって、細胞または生物内で達成されることがある（たとえばＧａｌｄｅｒｉｓｉら、（１９９９）Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ．１８１：２５１−５７；Ｓｉｏｕｄ（２００１）Ｃｕｒｒ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．１：５７５−８８）。たとえばＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｒ、および／またはＩＬ−１７ＲＣに対する（複数の）抑制ポリヌクレオチドは、たとえばＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａのその受容体（たとえばＩＬ−１７Ｒおよび／またはＩＬ−１７ＲＣ）への結合を抑制するために、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ拮抗薬（シグナル伝達拮抗薬）として使用してもよい。結果として、このような抑制ポリヌクレオチドは、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ関連障害の予防または治療に有用である可能性がある。
本発明に関連するアンチセンスポリヌクレオチドまたはリボザイムは、本発明に関連する遺伝子のコーディング鎖全体、またはその部分のみに相補的である場合がある。あるいは、アンチセンスポリヌクレオチドまたはリボザイムは、本発明に関連する遺伝子のコーディング鎖の非コーディング領域に相補的であることも可能である。アンチセンスポリヌクレオチドまたはリボザイムは、当分野で周知の手順を用いた化学合成および酵素連結反応を使用して構築できる。化学合成されたポリヌクレオチドのヌクレオシド結合は修飾されて、その配列特異性を向上させるのと同様に、ヌクレアーゼ介在分解に抵抗するその能力を増強することができる。このような結合修飾としては、これに限定されるわけではないが、ホスホロチオエート、メチルホスホネート、ホスホロアミデート、ボラノホスフェート、モルホリノ、およびペプチド核酸（ＰＮＡ）結合が挙げられる（Ｇａｌｄｅｒｉｓｉら、上掲；Ｈｅａｓｍａｎ（２００２）Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．２４３：２０９−１４；Ｍｉｃｋｌｅｆｉｅｌｄ（２００１）Ｃｕｒｒ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．８：１１５７−７９）。あるいは、これらの分子は、本発明に関連するポリヌクレオチドがその中へアンチセンス（すなわち逆）方向にサブクローニングされた発現ベクターを使用して生物的に産生できる。
本発明の抑制ポリヌクレオチドは、２本鎖ＤＮＡの主溝内で高い特異性および親和性で結合する３本鎖形成性オリゴヌクレオチド（ＴＦＯ）も含む（Ｋｎａｕｅｒｔ ａｎｄ Ｇｌａｚｅｒ（２００１）Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．１０：２２４３−５１）。本発明に関連する遺伝子の発現は、遺伝子の調節領域に相補的なＴＦＯ（すなわちプロモータおよび／またはエンハンサ配列）を標的化して、遺伝子の転写を防止する３重らせん構造を形成することによって抑制できる。
本発明の一実施形態において、本発明の抑制ポリヌクレオチドは低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）分子である。これらのｓｉＲＮＡ分子は、標的ｍＲＮＡの配列特異的分解を引き起こす、短い（好ましくは１９〜２５ヌクレオチド；最も好ましくは１９または２１ヌクレオチド）、２本鎖ＲＮＡ分子である。この分解は、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）として公知である（たとえばＢａｓｓ（２００１）Ｎａｔｕｒｅ ４１１：４２８−２９）。ＲＮＡｉは、最初に下等生物で同定され、哺乳動物細胞に効果的に利用されており、最近ではＦａｓ ｍＲＮＡを標的としたｓｉＲＮＡ分子で処置したマウスにおいて劇症肝炎を予防することが示されている（（Ｓｏｎｇら（２００３）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：３４７−５１）。加えて、髄腔内送達されたｓｉＲＮＡがラットの２種のモデル（作用薬誘発疼痛モデルおよび神経因性疼痛モデル）での疼痛応答を遮断することが最近報告された（Ｄｏｒｎら（２００４）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３２（５）：ｅ４９）。
本発明のｓｉＲＮＡ分子は、２個の相補的１本鎖ＲＮＡ分子（その１個が標的ｍＲＮＡの部分に一致する）を共にアニーリングすることによって（Ｆｉｒｅら、米国特許第６，５０６，５５９号明細書）、またはそれ自体折畳まれて必要な２本鎖部分を産生するヘアピンＲＮＡ分子の使用によって（Ｙｕら（２００２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９９：６０４７−５２）産生されることがある。ｓｉＲＮＡ分子は、化学合成するか（Ｅｌｂａｓｈｉｒら（２００１）Ｎａｔｕｒｅ ４１１：４９４−９８）、または１本鎖ＤＮＡテンプレートを使用する試験管内転写によって産生してもよい（Ｙｕら、上掲）。あるいは、ｓｉＲＮＡ分子は、センスおよびアンチセンスｓｉＲＮＡ配列を含有する（複数の）発現ベクターを使用して、一過的（Ｙｕら、上掲；Ｓｕｉら（２００２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９９：５５１５−２０）または安定的（Ｐａｄｄｉｓｏｎら（２００２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９９：１４４３−４８）に、生物学的に産生することが可能である。最近、１次ヒト細胞における標的ｍＲＮＡのレベルの十分で配列特異的な方式での低下が、さらにｓｉＲＮＡ内へ処理されるヘアピンＲＮＡを発現するアデノウイルスを使用して示された（Ａｒｔｓら（２００３）Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．１３：２３２５−３２）。
本発明に関連するポリヌクレオチドを標的とするｓｉＲＮＡ分子は、当分野で周知の基準に基づいて設計可能である（たとえばＥｌｂａｓｈｉｒら（２００１）ＥＭＢＯ Ｊ．２０：６８７７−８８）。たとえば標的ｍＲＮＡの標的セグメントは、好ましくは、ＡＡ（最も好ましい）、ＴＡ、ＧＡ、またはＣＡで開始するべきである；ｓｉＲＮＡ分子のＧＣ比は、好ましくは４５〜５５％でるべきである；ｓｉＲＮＡ分子は、好ましくは列内に同じヌクレオチドを３個含有しないべきである；ｓｉＲＮＡ分子は、好ましくは列内に７つの混合Ｇ／Ｃを含有しないべきである；そして標的セグメントは、好ましくは標的ｍＲＮＡのＯＲＦ領域内にあり、好ましくは開始ＡＴＧの少なくとも７５ｂｐ後で、停止コドンの少なくとも７５ｂｐ前であるべきである。これらの基準または他の公知の基準（たとえばＲｅｙｎｏｌｄｓら（２００４）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２：３２６−３０）に基づいて、本発明に関連するｍＲＮＡを標的にした本発明に関連するｓｉＲＮＡ分子は、当業者によって設計されることがある。
表２は、本発明に関連するｓｉＲＮＡ分子が基づく例示的なポリヌクレオチド配列、代わりの配列名称、配列番号、およびそれぞれの標的を示す。表２に示すように、配列番号１７−２０として示した配列は、ｈＩＬ−１７ＲのｓｉＲＮＡ分子が基づくポリヌクレオチド配列を表し、配列番号：２１−２４は、ｈＩＬ−１７ＲＣのｓｉＲＮＡ分子を基づいているポリヌクレオチド配列を表す。配列番号：１７−２０として示した配列に基づくｓｉＲＮＡ分子を使用して、ｈＩＬ−１７Ｒの発現を標的とすることに成功し、配列番号：２１−２４として示した配列に基づくｓｉＲＮＡ分子を使用して、ｈＩＬ−１７ＲＣの発現を標的とすることに成功した（実施例１．２．６）。
ＩＬ−１７Ｆの抑制ポリヌクレオチド、たとえばｓｉＲＮＡ、アンチセンスポリヌクレオチド、リボザイム、ＴＦＯなどはＩＬ−１７Ｆおよび／またはＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの発現を標的とすることがある。同様に、ＩＬ−１７Ａの抑制ポリヌクレオチドは、ＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの発現を標的とすることがある。さらに、ＩＬ−１７ＦおよびＩＬ−１７Ａのどちらかまたは両方の抑制ポリヌクレオチドで細胞を処置することによって、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーの発現を標的とすることがある。それゆえ、ＩＬ−１７ＦおよびＩＬ−１７Ａのどちらかまたは両方の抑制ポリヌクレオチドは、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬と見なされることもある。
生物における本発明に関連する遺伝子の発現の変化は、本発明に関連するポリヌクレオチドがそのゲノム内に導入された非ヒトトランスジェニック動物の作製によって達成されることもある。このようなトランスジェニック動物は、本発明の遺伝子（すなわち導入遺伝子）の複数のコピーを有する動物を含む。（複数の）組織特異的調節配列は、導入遺伝子に作動可能に連結されて、本明細書に関連するポリペプチドの特定の細胞または特定の発生段階への発現を指示することがある。胚操作および微量注入によってトランスジェニック動物、特にマウスなどの動物を産生する方法は、慣例的となり、当分野で周知である（たとえばＢｏｃｋａｍｐら（２００２）Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｇｅｎｏｍｉｃｓ １１：１１５−３２）。
生物における本発明に関連する遺伝子の発現の変化は、本発明に関連するポリヌクレオチドに相当するその内在性遺伝子が外来ポリヌクレオチド配列の挿入によって破壊された動物（すなわちノックアウト動物）の作製を通じて達成されることもある。内在性遺伝子のコード領域が破壊され、それにより非機能性タンパク質が産生されることがある。あるいは内在性遺伝子の上流調節領域が別の制御要素によって破壊または置換えられて、なお機能性のタンパク質の発現の変化を引き起こすことがある。ノックアウト動物を産生する方法は、相同組換えを含み、当分野で周知である（たとえばＷｏｌｆｅｒら（２００２）Ｔｒｅｎｄｓ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２５：３３６−４０）。
本発明の単離ポリヌクレオチドも、本発明に関連するポリペプチド（活性フラグメントおよび／またはその融合ポリペプチドを含む）の組換え産生のために、発現制御配列に作動可能に連結されるか、および／または発現ベクター内へ連結されることがある。組換えタンパク質を発現する一般的な方法は、当分野で周知である。
発現ベクターは、本明細書で使用するように、それが結合されている別の核酸を運搬することができる核酸分子を指す。ベクターの１つの種類はプラスミドであり、中にさらなるＤＮＡセグメントが結合されることのある円形２本鎖ＤＮＡループを指す。ベクターの別の種類は、さらなるＤＮＡセグメントをウイルスゲノム内に結合できるウイルスベクターである。あるベクターは、それらが導入される宿主細胞において自律複製が可能である（たとえば細菌複製起点を有する細菌ベクターおよびエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（たとえば非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞への導入時に宿主細胞のゲノム内に組込むことが可能であり、それにより宿主ゲノムに沿って複製される。さらにあるベクターは、それらが作動可能に結合される遺伝子の発現を指示することができる。このようなベクターは本明細書では、組換え発現ベクター（または単に、発現ベクター）と呼ばれる。一般に、組換えＤＮＡ技法で有用な発現ベクターは、プラスミドの形であることが多い。本明細書において、プラスミドはベクターの最も一般に使用される形であるため、プラスミドおよびベクターは互換的に使用されることがある。しかし、本発明は、同等の機能を果たすウイルスベクター（たとえば複製欠損レトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルス）などの発現ベクターの他の形を含むことを意図する。
一実施形態において、本発明に関連するポリヌクレオチドを使用して、組換えＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達作用薬、たとえば少なくとも１種のＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ「受容体結合モチーフ」の存在に基づいて同定できる作用薬を作製する。本明細書で使用するように、「受容体結合モチーフ」という用語は、サイトカインをその必要な受容体に結合するのに重要であるアミノ酸配列または残基を含む。たとえば、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ作用薬（シグナル伝達作用薬）としては、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａおよび／またはそのフラグメント、たとえばＩＬ−１７ＲまたはＩＬ−１７ＲＣ結合フラグメントが挙げられる。別の実施形態において、本発明に関連するポリヌクレオチドを使用して、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ａ、および／またはＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達の拮抗薬（たとえばＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｒ、および／またはＩＬ−１７ＲＣ抑制ポリヌクレオチド；溶解性ＩＬ−１７Ｒおよび／またはＩＬ−１７ＲＣポリペプチド（フラグメント（たとえばＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ａ、および／またはＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ結合フラグメント）および／またはその融合タンパク質を含む）；抑制抗ＩＬ−１７Ｆ、抗ＩＬ−１７Ａ、抗ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ、抗ＩＬ−１７Ｒ、および／またはＩＬ−１７ＲＣ抗体；拮抗性小型分子など）を作製する。
融合タンパク質、すなわち第２のポリペプチド部分と連結された第１のポリペプチド部分を作製する方法は、当分野で周知である。たとえば本発明に関連するポリペプチド（たとえばＩＬ−１７Ａホモダイマー、ＩＬ−１７Ｆホモダイマー、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマー、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１７ＲＣ、およびそのフラグメント）は、第２のポリペプチド部分、たとえば免疫グロブリンまたはそのフラグメント（たとえばそのＦｃ結合フラグメント）に融合されることがある。一部の実施形態において、第１のポリペプチド部分は、本発明に関連する全長ポリペプチドを含む。あるいは、第１のポリペプチドは、全長ポリペプチドより短いものを含むことがある。さらに、本発明に関連するポリペプチドの溶解形は、本発明に関連するポリペプチドおよび免疫グロブリンのＦｃ部分を連結する「リンカー」配列を用いて、または用いずに、免疫グロブリンのＦｃ部分に融合されることがある（たとえば実施例１．１．２を参照）。グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、Ｌｅｘ−Ａ、チオレドキシン（ＴＲＸ）、ビオチン、またはマルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）などとの他の融合タンパク質も使用できる。
第２のポリペプチド部分は好ましくは溶解性である。一部の実施形態において、第２のポリペプチド部分は、連結されたポリペプチドの半減期（たとえば血中半減期）を延長させる。一部の実施形態において、第２のポリペプチド部分は、融合ポリペプチドの別のＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７ＲＣまたはＩＬ−１７Ｒポリペプチドとの会合、またはヘテロダイマーを形成するためのＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの会合を促進する配列を含む。一部の実施形態において、第２のポリペプチド部分は、少なくとも免疫グロブリンの領域を含む。免疫グロブリン融合ポリペプチドは当分野で公知であり、たとえば米国特許第５，５１６，９６４号明細書；５，２２５，５３８号明細書；５，４２８，１３０号明細書；５，５１４，５８２号明細書；５，７１４，１４７号明細書；および５，４５５，１６５号に記載されており、そのすべてはその全体が参照により本明細書に組み込まれている。融合タンパク質はさらに、そのフラグメントを含む第１のポリペプチド部分、たとえばＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｒ、またはＩＬ−１７ＲＣを第２の部分に結合するリンカー配列を含む。このようなリンカー配列の使用は当分野で周知である。たとえば融合タンパク質は、ペプチドリンカー、たとえば長さが約２〜２０、さらに好ましくは１０未満のアミノ酸のペプチドリンカーを含むことができる。一実施形態において、ペプチドリンカーは長さが２アミノ酸であってもよい。
別の実施形態において、組換えタンパク質はそのＮ末端に異種配列（すなわちＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７ＲまたはＩＬ−１７ＲＣ核酸によってコードされたポリペプチド中に存在しないポリペプチド配列）を含む。たとえば別のタンパク質からのシグナル配列が、そのフラグメントおよび／または融合タンパク質を含む、本発明に関連するポリペプチドと融合されることがある。ある宿主細胞（たとえば哺乳動物宿主細胞）において、組換えタンパク質の発現および／または分泌を異種シグナル配列の使用によって上昇させることができる。たとえば、融合タンパク質に含まれることがあるシグナルペプチドは、メリチン・シグナル・ペプチドＭＫＦＬＶＮＶＡＬＶＦＭＶＶＹＩＳＹＩＹＡ（配列番号：２５）である。
本発明に関連する融合タンパク質は、標準組換えＤＮＡ技法によって産生されることもある。たとえば、異なるペプチド配列をコードするＤＮＡフラグメントは在来の技法に従って、たとえば連結のための平滑またはねじれ形末端、適切な末端を与えるための制限酵素消化、必要に応じた付端の充填、望ましくない結合を回避するためのアルカリホスファターゼ処理、酵素連結を利用することによって、インフレームで共に連結される。別の実施形態において、融合遺伝子は、自動ＤＮＡ合成装置を含む在来の技法によって合成することができる。あるいは、遺伝子フラグメントのＰＣＲ増幅は、２個の連続した遺伝子フラグメントの間に相補的なオーバーハングを生じるアンカープライマーを使用して実施され、続いてアニーリングおよび再増幅されて、キメラ遺伝子配列を産生することができる（たとえばＡｕｓｕｂｅｌら（Ｅｄｓ．）ＣＵＲＲＥＮＴ ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ ＩＮ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，１９９２を参照）。さらに、融合部分（たとえば免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域）をコードする多くの発現ベクターが市販されている。たとえばＩＬ−１７Ｆ−、ＩＬ−１７Ａ−、ＩＬ−１７Ｒ−および／またはＩＬ−１７ＲＣ−コード核酸は、融合部分が免疫グロブリンタンパク質にインフレームで結合されるようにこのような発現ベクター内にクローニングされることがある。一部の実施形態において、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｒおよび／またはＩＬ−１７ＲＣ融合ポリペプチドは、ダイマー、トリマー、またはテトラマーなどのオリゴマーとして存在する。一実施形態において、ＩＬ−１７ＦおよびＩＬ−１７Ａ融合ポリペプチドはヘテロダイマーとして存在する。
本発明の組換え発現ベクターは、宿主細胞においてベクターの増幅を調節する配列（たとえば複製起点）などのさらなる配列および選択可能なマーカー遺伝子を保有することがある。選択可能なマーカー遺伝子は、中にベクターが導入されている宿主細胞の選択を容易にする。たとえば、通例、選択可能なマーカー遺伝子は、中にベクターが導入されている宿主細胞にＧ４１８、ハイグロマイシンまたはメトトレキサートなどの薬物に対する耐性を付与する。好ましい選択可能なマーカー遺伝子としては、ジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）遺伝子（ｄｈｆｒ−宿主細胞にてメトトレキサート選択／増幅によって使用するための）およびｎｅｏ遺伝子（Ｇ４１８選択のための）が挙げられる。
必要に応じてプロモータ配列、ターミネータ配列、ポリアデニル化配列、エンハンサ配列、マーカー遺伝子および他の配列、たとえば宿主細胞においてベクターの増幅を調節する配列（たとえば複製起点）を含む、適切な調節配列を含有する適切なベクターを選択または構築することが可能である。ベクターは、必要に応じて、プラスミドまたはウイルス性、たとえばファージ、あるいはファージミドであってもよい。さらなる詳細については、たとえばＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ：２ｎｄ ｅｄ．，Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，１９８９を参照。核酸構築物の調製、突然変異誘発、配列決定、ＤＮＡの細胞内への導入および遺伝子発現、ならびにタンパク質の分析における核酸の操作のための多くの公知の技法およびプロトコルは、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２ｎｄ ｅｄ．，Ａｕｓｕｂｅｌら、ｅｄｓ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，１９９２に詳細に記載されている。
それゆえ、本発明のさらなる態様は、本明細書で開示するような核酸を含む宿主細胞を提供する。なおさらなる態様は、このような核酸を宿主細胞内に導入するステップを含む方法を提供する。導入はいずれの利用可能な技法を使用してもよい。真核細胞の場合、適切な技法としては、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン、電気穿孔、リポソーム介在トランスフェクション、およびレトロウイルスまたは他のウイルス、たとえばワクシニア、または昆虫細胞の場合、バキュロウイルスを使用する形質導入が挙げられる。細菌細胞の場合、適切な技法としては、塩化カルシウム形質転換、電気穿孔、およびバクテリオファージを使用するトランスフェクションが挙げられる。導入の後に、たとえば遺伝子の発現条件下で宿主細胞を培養することによって、核酸からの発現を引き起こす、または許容することが続く場合がある。いくつかの細胞系が、本発明に関連するポリペプチドの組換え発現に適切な宿主細胞として作用することがある。哺乳動物細胞系としては、たとえばＣＯＳ細胞、ＣＨＯ細胞、２９３細胞（たとえばＨＥＫ２９３細胞）、Ａ４３１細胞、３Ｔ３細胞、ＣＶ−１細胞、ＨｅＬａ細胞、Ｌ細胞、ＢＨＫ２１細胞、ＨＬ−６０細胞、Ｕ９３７細胞、ＨａＫ細胞、ジャーカット細胞はもちろんのこと、１次組織および１次外植片の試験管内培養物に由来する細胞株も挙げられる。本発明の一実施形態において、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーは、１個の細胞にＩＬ−１７ＦおよびＩＬ−１７Ａ含有ベクターの両方を同時に形質移入すること、または１個の細胞にＩＬ−１７ＦおよびＩＬ−１７Ａの両方を含有するベクターを形質移入することのどちらかと、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーが発現されるようにＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの両方の組換え発現に適切な条件下で細胞を培養することによって産生されることがある。
あるいは、酵母などの下等真核生物、または原核生物中で本発明に関連するポリペプチドを組換え産生することも可能でありうる。潜在的に適切な酵母株としては、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ株、およびＣａｎｄｉｄａ株が挙げられる。潜在的に適切な細菌株としては、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ、およびＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍが挙げられる。本発明に関連するポリペプチドが酵母または細菌内で作製される場合、機能性を得るために、たとえば適切な部位のホスホリル化またはグリコシル化によってそれらを修飾することが必要な場合がある。このような共有結合は、周知の化学的または酵素的方法を使用して実施されることがある。
細菌での発現は、組換えタンパク質を包含する封入体の形成をもたらすことがある。それゆえ、活性またはより活性な物質を産生するために、組換えタンパク質の再折畳みが必要な場合がある。細菌封入体から正確に折畳まれた異種タンパク質を得るいくつかの方法が当分野で公知である。これらの方法は一般に、封入体からのタンパク質を溶解させて、次にカオトロピック剤を使用してタンパク質を完全に変性することを含む。システイン残基がタンパク質の１次アミノ酸配列内に存在するとき、ジスルフィド結合の正確な形成を許容する環境（酸化還元系）において再折畳みを実施することが必要な場合が多い。再折畳みの一般的な方法は、Ｋｏｈｎｏ（１９９０）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８５：１８７−９５に開示されている。欧州特許第ＥＰ ０４３３２２５号明細書、および米国特許第５，３９９，６７７号明細書は他の適切な方法について記載している。
本発明に関連するポリペプチドは、本明細書の単離されたポリヌクレオチドをバキュロウイルスベクターなどの１個以上の昆虫発現ベクター内の適切な制御配列に作動可能に連結して、昆虫細胞発現系を利用することによって、組換えにより産生されることもある。バキュロウイルス／Ｓｆ９発現系の材料および方法は、キットの形で市販されている（たとえばＭａｘＢａｃ（登録商標）キット、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，カールスバッド、カリフォルニア州）。
適切な宿主細胞内での組換え発現の後、本発明の組換えポリペプチドは次に、ゲル濾過およびイオン交換クロマトグラフィーなどの公知の精製プロセスを使用して培地または細胞抽出物から精製されることがある。たとえば、本発明に関連するポリペプチドの溶解形、たとえばＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１７ＲＣタンパク質（そのフラグメント、および／または融合タンパク質を含む）、その拮抗物質およびその作用物質が条件培地から精製されることがある。本発明に関連するポリペプチドの膜結合形は、発現する細胞から全膜画分を調製して、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００などの非イオン性洗剤を用いて膜を抽出することによって精製できる。本発明に関連するポリペプチドは、市販のタンパク質濃縮フィルタ、たとえばＡｍｉｃｏｎまたはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｐｅｌｌｉｃｏｎ限外濾過ユニットを使用して濃縮されることがある。濃縮ステップの後、濃縮物をゲル濾過媒体などの精製マトリクスに加えることができる。あるいは、アニオン交換樹脂、たとえばペンダントジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）またはポリエチレンイミン（ＰＥＩ）基を有するマトリクスまたは基材を利用することが可能である。マトリクスは、アクリルアミド、アガロース、デキストラン、セルロースまたはタンパク質精製で一般に利用される他のタイプでも可能である。あるいは、カチオン交換ステップを利用することが可能である。適切なカチオン交換体としては、スルホプロピルまたはカルボキシメチル基を含む各種の不溶性マトリクスが挙げられる。スルホプロピル基が好ましい（たとえばＳ−ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）カラム）。培養物上清からの組換えタンパク質の精製には、コンカナバリンＡ−アガロース、ヘパリン−ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ（登録商標）（Ｔｏｙｏ Ｓｏｄａ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，日本）またはＣｉｂａｃｒｏｎ ｂｌｕｅ ３ＧＡ ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）などの親和性樹脂での；あるいはフェニルエーテル、ブチルエーテル、またはプロピルエーテルなどの樹脂を使用する疎水性相互作用クロマトグラフィーによる；あるいはイムノアフィニティークロマトグラフィーによる；１つ以上のカラムステップも含むことがある。最後に、組換えタンパク質をさらに精製するために、疎水性ＲＰ−ＨＰＬＣ媒体、たとえばペンダントメチルまたは他の脂肪族基を有するシリカゲルを利用する、１つ以上の逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）ステップを利用可能である。組換えタンパク質に対する抗体（たとえば本明細書の方法を使用して記載された抗体）を含むアフィニティカラムも、公知の方法による精製ステップで使用されることがある。上述の精製ステップの一部または全部はまた、各種の組合せで、または他の公知の方法と共に利用されて、実質的に精製された単離組換えタンパク質を供給することがある。好ましくは、単離された組換えタンパク質は、他の哺乳動物タンパク質を実質的に含まないように精製される。さらに、これらの精製プロセスは、天然源を含む他の源から本発明のポリペプチドを精製するために使用されることもある。たとえば、トランスジェニック動物の生成物として、たとえばトランスジェニックウシ、ヤギ、ブタ、またはヒツジの乳の成分として発現される、本発明に関連するポリペプチドは、上述のように精製されることがある。
あるいは、ポリペプチドは、精製を促進する形で組換え発現されることもある。たとえば、ポリペプチドは、マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、またはチオレドキシン（ＴＲＸ）などのタンパク質との融合物として発現されることがある。このような融合タンパク質の発現および精製のためのキットは、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ ＢｉｏＬａｂｓ（ビバリー、マサチューセッツ州）、Ｐｈａｒｍａｃｉａ（ピスカタウェイ、ニュージャージー州）、およびＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎからそれぞれ市販されている。組換えタンパク質は、小型エピトープで標識して、次にエピトープに対する特異的抗体を使用して同定または精製することが可能である。好ましいエピトープはＦＬＡＧエピトープであり、Ｅａｓｔｍａｎ Ｋｏｄａｋ（ニューヘブン、コネチカット州）より市販されている。
あるいは、組換えＩＬ−１７ＦおよびＩＬ−１７Ａは、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーの精製を可能にするために、異なるエピトープで標識されることがある。ＩＬ−１７ＦおよびＩＬ−１７Ａでの異なる標識の存在によって、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆホモダイマーの両方を実質的に含まないＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーの単離が可能となる。たとえば、ＩＬ−１７Ａはエピトープ（たとえばＦＬＡＧ、ｍｙｃなどによって標識されることがあるが、ＩＬ−１７Ｆは異なるエピトープ（たとえばＨｉｓ、ＧＳＴなど）によって同時に標識され、両方のタンパク質は細胞内で同時に発現される。組換え宿主細胞、または宿主細胞が培養される培地からの抽出物が得られ、非還元条件下で２ステップアフィニティクロマトグラフィー精製を受けることがある。第１のアフィニティカラムは２つの異なる標識の一方、たとえばＩＬ−１７Ａ（またはＩＬ−１７Ａのフラグメント）に融合されたＦＬＡＧエピトープを結合して、したがって第１のカラムからの洗浄液はＩＬ−１７Ｆホモダイマーを（主に）含有して、第１のカラムからの溶離液はＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７ＡヘテロダイマーおよびＩＬ−１７Ａホモダイマーを含有する。次に第１のカラムからの溶離液を、２つの異なる標識の他方、たとえばＩＬ−１７Ｆに融合したＨｉｓ標識を特異的に結合する第２のアフィニティカラム上に配置することができる。それゆえ第２のカラムからの洗浄液は、ＩＬ−１７Ａホモダイマーを含有し、第２のカラムからの溶離液は、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆホモダイマーの両方を実質的に含まない（すなわちＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーのみを含有する）。組換え宿主細胞または宿主細胞培地からの抽出物は、タンパク質−タンパク質相互作用が妨害されない非還元条件下で得ることができるか、または還元条件下で得ることができ、次に処理されて、その中に含有されるＩＬ−１７ＦおよびＩＬ−１７Ａモノマーの適正な再折畳みおよび相互作用を可能にする。当業者は、宿主細胞が両方のＩＬ−１７ＦおよびＩＬ−１７Ａ融合タンパク質を発現する必要がないことをただちに認識する；むしろ１つのトランスフェクタントからの細胞または培地抽出物、たとえばＩＬ−１７ＡまたはＩＬ−１７Ｆ融合タンパク質のどちらかを発現する宿主細胞をＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆモノマーのダイマー化を可能にする条件下で取得して、組合せることが可能である。ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマー精製の詳細な方法は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれている、米国特許出願第１１／３５３，１６１号明細書に記載されている。
本発明に関連するポリペプチドは、公知の在来の化学合成によっても産生されることがある。このようなポリペプチドを化学合成する方法は、当業者に周知である。このような化学合成ポリペプチドは、天然の精製されたポリペプチドと共通の生物特性を所有することがあり、それゆえ天然ポリペプチドの生物活性または免疫学的代用物として利用されることがある。
ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ａ、およびＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達作用薬および拮抗薬を含む本発明に関連するポリペプチドは、開示されたポリペプチドと構造的に異なる（たとえばやや変更された配列を有する分子）を含むが、開示されたポリペプチドと実質的に同じ生物科学特性を有する（たとえば機能的に必須でないアミノ酸残基のみ変更されている）。このような分子としては、自然に発生した対立遺伝子変異体、および変化、置換（ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）、置換（ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ）、挿入、または欠失を含有する、計画的に操作した（ｄｅｌｉｂｅｒａｔｅｌｙ ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ）変異体が挙げられる。このような変化、置換、置換、挿入、または欠失の技法は、当業者に公知である。一部の実施形態において、ポリペプチド部分は、（非突然変異配列と比較して）タンパク質分解により耐性である配列を生じる自然に発生した配列（たとえば野生種）中に突然変異を有する変異ポリペプチドとして供給される。
本発明によるポリペプチドは、ペプチド模倣薬も含むことが可能である。ペプチド模倣薬は、タンパク質２次構造の要素を模倣するペプチド含有分子である。たとえばＪｏｈｎｓｏｎら、“Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｔｕｒｎ Ｍｉｍｅｔｉｃｓ”ｉｎ ＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ ＡＮＤ ＰＨＡＲＭＡＣＹ，Ｐｅｚｚｕｔｏら、Ｅｄｓ．，Ｃｈａｐｍａｎ ａｎｄ Ｈａｌｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９３）（参照によりその全体が本明細書に組み込まれている）を参照。ペプチド模倣薬の使用に隠れた基礎を成す原理は、タンパク質のペプチド主鎖が主に、抗体と抗原との相互作用などの分子間相互作用を促進するような方法でアミノ酸側鎖を配向させるために存在するということである。ペプチド模倣薬は、天然分子と同様の分子相互作用を許容することが予測されている。これらの原理は、開示された標的化ペプチドまたはポリペプチドの天然特性の多くを有するが、変更された、そして改良されされた特徴を持たない第２世代分子を設計するのに使用されることがある。
本発明に関連するポリペプチドを使用して、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａを結合するおよび／またはＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ生物活性を抑制することが可能である薬剤（たとえば他のＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ａ、およびＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬、たとえば抗ＩＬ−１７Ｆ、抗ＩＬ−１７Ａ、および抗ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ抗体）をスクリーニングすることがある。固定された、または固定されていない所望の結合タンパク質を利用する結合アッセイは、当分野で公知であり、本発明に関連するポリペプチドと共にこの目的に使用されることがある。精製細胞ベースまたはタンパク質ベース（細胞を含まない）スクリーニングアッセイを使用して、このような薬剤を同定することがある。たとえばＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａタンパク質は精製された形を担体上に固定して、精製ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａへの潜在的なリガンドの結合を測定してもよい。
抗体
一部の実施形態において、本発明は、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーのみに結合する、特異的抗ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ抗体、すなわち無処置抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。別の実施形態において、本発明は、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーに特異的ではないエピトープというよりはむしろＩＬ−１７ＦまたはＩＬ−１７Ａに特異的なエピトープを認識する選択的抗体のために、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの両方およびＩＬ−１７ＦまたはＩＬ−１７Ａの一方を結合する選択的抗ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ抗体を提供する。一実施形態において、抗体はシグナル伝達拮抗薬（ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達に対して特異的および選択的拮抗薬を含む）であり、すなわちそれらは少なくとも１つのＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ生物活性（たとえばヘテロダイマーのその受容体への結合、シグナル伝達成分のヘテロダイマー介在活性化、サイトカイン産生（たとえばＧＲＯ−α）のヘテロダイマー介在誘導、気道炎症のヘテロダイマー誘導など）を抑制する。本発明の拮抗抗体は、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ関連障害を診断、予後診断、監視および／または治療するのにも有用なことがある。当業者は、選択的および拮抗ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ抗体がＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの両方およびＩＬ−１７ＦまたはＩＬ−１７Ａの一方の少なくとも１つの生物活性を抑制することを認識する。別の実施形態において、抗体（特異的および選択的抗体を含む）は、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達に特異的に結合するが、それを抑制しない検出抗体であり、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達に関連する（一または複数の）障害を診断、予後診断および／または監視するキットの一部として、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの存在を検出するために使用されることがある。一実施形態において、抗体はモノクローナル抗体である。抗体は、ヒトＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ、および／またはＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａに対するヒト、ヒト化、キメラ、または試験管内産生抗体であってもよい。好ましい実施形態において、本発明の抗体、たとえば拮抗抗体または検出抗体は、哺乳動物、たとえばヒトＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａに向けられている。
当業者は、本明細書で使用するように、「抗体」という用語が、少なくとも１個の、好ましくは２個の重（Ｈ）鎖可変領域（本明細書ではＶＨと省略）と、少なくとも１個の、好ましくは２個の軽（Ｌ）鎖可変領域（本明細書ではＶＬと省略）を含むタンパク質を指すことを認識する。ＶＨおよびＶＬ領域は、より保存性の「フレームワーク領域」（「ＦＲ」）である領域と共に散在している、「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）と呼ばれる超可変性領域にさらに細分することができる。ＦＲおよびＣＤＲの程度は、精密に定義されている（その全体が参照により本明細書に組み込まれている、Ｋａｂａｔら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１−３２４２；およびＣｈｏｔｈｉａら（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ，Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−１７を参照）。各ＶＨおよびＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順序で配列されている３種のＣＤＲおよび４種のＦＲで構成される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。
抗体は、重鎖および軽鎖定常領域をさらに含み、それにより免疫グロブリン重鎖および軽鎖をそれぞれ形成することがある。一実施形態において、抗体は２本の免疫グロブリン重鎖および２本の免疫グロブリン軽鎖のテトラマーであり、免疫グロブリン重鎖および軽鎖はジスルフィド結合によって相互結合されている。重鎖定常領域は、３種のドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３で構成されている。軽鎖定常領域は、１種のドメイン、ＣＬで構成されている。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は通例、免疫系の各種の細胞（たとえばエフェクタ細胞）および古典的な補体系の第１成分（Ｃｌｑ）を含む、宿主組織または因子への抗体の結合に介在する。
免疫グロブリンは、免疫グロブリン遺伝子によって実質的にコードされた１つ以上のポリペプチドから成るタンパク質を指す。認識されたヒト免疫グロブリン遺伝子には、カッパ、ラムダ、アルファ（ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）、ガンマ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、デルタ、イプシロンおよびミュー定常領域遺伝子はもちろんのこと、無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子も含まれる。全長免疫グロブリン「軽鎖」（約２５Ｋｄ、すなわち２１４アミノ酸）は、ＮＨ２末端の可変領域遺伝子（約１１０アミノ酸）およびＣＯＯＨ末端のカッパまたはラムダ定常領域遺伝子によってコードされる。全長免疫グロブリン「重鎖」（約５０Ｋｄ、すなわち４４６アミノ酸）は、可変領域遺伝子（約１１６アミノ酸）および残りの上述の定常領域遺伝子の１つ、たとえばガンマ（約３３０アミノ酸をコード）によってコードされる。免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子は、抗体クラス、すなわちアイソタイプ（たとえばＩｇＭまたはＩｇＧ１）をコードする。抗体の抗原結合フラグメント（または単に「抗体部分」、すなわち「フラグメント」）は、本明細書で使用するように、抗原（たとえばＣＤ３）に特異的に結合する能力を保持する全長抗体の１つ以上のフラグメントを指す。抗体の「抗原結合フラグメント」という用語に含まれる結合フラグメントの例としては、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインから成る１価フラグメントである、Ｆａｂフラグメント；（ｉｉ）ジスルフィドブリッジによってヒンジ領域に結合された２個のＦａｂフラグメントを含む２価フラグメントである、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインから成るＦｄフラグメント；（ｉｖ）抗体の１本のアームのＶＬおよびＶＨドメインから成るＦｖフラグメント、（ｖ）ＶＨドメインから成る、ｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４−４６）；および（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、またはＣＤＲのセット、たとえば２または３個のＣＤＲを含む。さらに、Ｆｖフラグメントの２つのドメイン、ＶＬおよびＶＨは別々の遺伝子によってコードされているが、それらは、組換え方法を使用して、ＶＬおよびＶＨ領域が対になって１価分子を形成するタンパク質単鎖としてそれらが作製されるようにする合成リンカーによって結合されることがある（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として公知；たとえばＢｉｒｄら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３−２６；およびＨｕｓｔｏｎら（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９−８３を参照）。これらの単鎖抗体も、抗体の「抗原結合フラグメント」という用語に含まれることを意図する。これらの抗体フラグメントは、当業者に公知の在来の技法を使用して得られ、フラグメントは無処置抗体と同様の方式で有用性についてスクリーニングされる。
一部の実施形態において、本発明は単一ドメイン抗体を提供する。単一ドメイン抗体は、そのＣＤＲが単一ドメインポリペプチドの一部である抗体を含むことができる。例としては、これに限定されるわけではないが、重鎖抗体、軽鎖が自然に欠失した抗体、在来の４本鎖抗体に由来する単一ドメイン抗体、改変抗体および単一ドメイン、抗体に由来するもの以外の単一ドメイン骨格が挙げられる。単一ドメイン抗体は、当分野で公知であるもののいずれでも、またはいずれの将来の単一ドメイン抗体でもよい。単一ドメイン抗体は、これに限定されるわけではないが、マウス、ヒト、ラクダ、ラマ、ヤギ、ウサギ、ウシを含むいずれの種に由来してもよい。本発明の一態様により、単一ドメイン抗体は、本明細書で使用するように、軽鎖が欠失した重鎖抗体として公知の、天然発生型単一ドメイン抗体である。このような単一ドメイン抗体は、たとえばＷＯ ９４／０４６７８に開示されている。軽鎖が自然に欠失した重鎖抗体に由来するこの可変ドメインは、４本鎖免疫グロブリンの在来のＶＨからそれを区別するために、本明細書ではＶＨＨまたはナノボディとして公知である。このようなＶＨＨ分子は、ラクダ種、たとえばラクダ、ラマ、ヒトコブラクダ、アルパカおよびグアナコで産生される抗体から誘導することが可能である。ラクダ科のこれら以外の他の種が、軽鎖が自然に欠失した重鎖抗体を産生することがある；このようなＶＨＨ分子は本発明の範囲内である。
本発明のポリペプチドに対する抗体分子は、当業者に周知の方法によって産生されてもよい。たとえばモノクローナル抗体は、公知の方法に従って、ハイブリドーマの生成によって産生されることがある。この方式で形成されたハイブリドーマを次に、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）などの標準方法を使用してスクリーニングして、本発明のポリペプチドと特異的に結合する抗体を産生する１種以上のハイブリドーマを同定する。たとえばＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａを使用して動物を免疫化すると、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーを特異的に（すなわちＩＬ−１７ＦとＩＬ−１７Ａのどちらも結合しない）または選択的に（すなわちＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの両方およびＩＬ−１７ＦまたはＩＬ−１７Ａのどちらか（または両方）を結合する）結合するポリクローナルおよびモノクローナル抗体が得られることがある。同様に、ＩＬ−１７ＲまたはＩＬ−１７ＲＣタンパク質を使用すると、ＩＬ−１７ＲまたはＩＬ−１７ＲＣとそれぞれ反応する、そしてＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａのみへの、あるいはＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの両方への、そしてＩＬ−１７ＦまたはＩＬ−１７Ａのどちらか一方へのこれらの受容体の結合を抑制することがある、ポリクローナルおよびモノクローナル抗体が得られることがある。ＩＬ−１７ＲまたはＩＬ−１７ＲＣタンパク質を使用すると、ＩＬ−１７ＲまたはＩＬ−１７ＲＣのそれぞれと特異的に反応する、そしてＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ、および／またはＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａサイトカインのいずれかへのこれらの受容体の結合を抑制することがある、ポリクローナルおよびモノクローナル抗体が得られることもある。ペプチド免疫原はさらにカルボキシル末端にシステイン残基を含有することがあり、キーホール・リンペット・ヘモシアニン（ＫＬＨ）などのハプテンに結合することがある。さらなるペプチド免疫原は、チロシン残基を硫酸化チロシン残基で置換することによって生成されることがある。このようなペプチドを合成する方法は、たとえばＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄ（１９６３）Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９−５４；Ｋｒｓｔｅｎａｎｓｋｙら（１９８７）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．２１１：１０−１６でのように、当分野で周知である。本発明の全長ポリペプチドは免疫原として使用されることがあるか、あるいはポリペプチドの抗原ペプチドフラグメントが使用されることがある。本発明のポリペプチドの抗原ペプチドは、少なくとも７個の連続したアミノ酸残基から成り、ペプチドに対して産生された抗体がポリペプチドと特異的免疫複合体を形成するようにエピトープを含む。好ましくは、抗原ペプチドは少なくとも１０個のアミノ酸残基を、さらに好ましくは、少なくとも１５個のアミノ酸残基を、なおさらに好ましくは、少なくとも２０個のアミノ酸残基を、最も好ましくは、少なくとも３０個のアミノ酸残基を含む。
モノクローナル抗体は、組換えＤＮＡ技法の当業者に公知の他の方法によって生成されることがある。モノクローナル抗体分泌ハイブリドーマを調製する代替方法として、組換えコンビナトリアル免疫グロブリンライブラリ（たとえば抗体ファージ提示ライブラリ）を本発明に関連するポリペプチドによってスクリーニングして、それにより本発明に関連するポリペプチドに結合する免疫グロブリンライブラリのメンバーを単離することによって、本発明のポリペプチドに対するモノクローナル抗体を同定および単離してもよい。ファージ提示ライブラリを生成およびスクリーニングするための技法および市販のキットは、当業者に周知である。加えて、抗体提示ライブラリの生成およびスクリーニングでの使用に特に適している方法および試薬の例は、文献に見出すことができる。たとえば、「コンビナトリアル抗体提示」方法は周知であり、特定の抗原特異性を有する抗体フラグメントを同定および単離するために開発され、モノクローナル抗体を産生するために使用可能である（コンビナトリアル抗体提示の説明については、たとえばＳａｓｔｒｙら（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：５７２８；Ｈｕｓｅら（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１２７５；Ｏｒｌａｎｄｉら（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：３８３３を参照）。上述のように動物を免疫原で免疫した後に、得られたＢ細胞プールの抗体レパートリーがクローニングされる。オリゴマプライマーおよびＰＣＲの混合物を使用することによって、免疫グロブリン分子の多様な集団の可変領域のＤＮＡ配列を得る方法が一般に公知である。たとえば、５’リーダー（シグナルペプチド）配列および／またはフレームワーク１（ＦＲ１）配列に対応する混合オリゴヌクレオチドプライマーは、保存３’定常領域に対するプライマーと同様に、いくつかのマウス抗体からの重鎖および軽鎖可変領域のＰＣＲ増幅に使用することが可能である（Ｌａｒｒｉｃｋら（１９９１）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １１：１５２−５６）。同様の方法を使用して、ヒト抗体からのヒト重鎖および軽鎖可変領域を増幅することが可能である（Ｌａｒｒｉｃｋら（１９９１）Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｃｏｍｐａｎｉｏｎ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ２：１０６−１０）。
ポリクローナル血清および抗体は、適切な対象を本発明に関連するポリペプチドで免疫することによって産生されることがある。免疫化対象の抗体力価は、固定化タンパク質を使用するＥＬＩＳＡなどの標準技法によって、経時的に監視してもよい。所望ならば、本発明のポリペプチドに向けられた抗体分子を対象または培地から単離して、タンパク質Ａクロマトグラフィーなどの周知の技法によってさらに精製して、ＩｇＧ画分を得てもよい。
本発明のポリペプチドに対する抗体のフラグメントは、当分野で周知の方法による抗体の切断によって産生されることがある。たとえば、免疫学的活性ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２フラグメントは、抗体をペプシンなどの酵素によって処理することによって生成されることがある。
加えて、ヒトおよび非ヒト部分を含む、本発明のポリペプチドに対するキメラ、ヒト化、および単鎖抗体は、標準組換えＤＮＡ技法および／または組換えコンビナトリアル免疫グロブリンライブラリを使用して産生されることがある。ヒト化抗体は、内在性免疫グロブリン重鎖および軽鎖遺伝子を発現不可能であるが、ヒト重鎖および軽鎖遺伝子を発現可能であるトランスジェニックマウスを使用して産生されることもある。たとえば、たとえばＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａに向けられたヒトモノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、マウス免疫グロブリン遺伝子ではなく、ヒト免疫グロブリン遺伝子を保持するトランスジェニックマウスを使用して生成されることがある。次に、対象となる抗原で免疫されたこれらのトランスジェニックマウスからの脾細胞を使用して、ヒトタンパク質からのエピトープに対する特異的親和性を持つヒトｍＡｂを分泌するハイブリドーマを産生してもよい（たとえばＷｏｏｄら、ＷＯ ９１／００９０６；Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉら、ＷＯ ９１／１０７４１；Ｌｏｎｂｅｒｇら、ＷＯ ９２／０３９１８；Ｋａｙら、ＷＯ ９２／０３９１７；Ｌｏｎｂｅｒｇら（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６−５９；Ｇｒｅｅｎら（１９９４）Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．７：１３−２１；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：６８５１−５５；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎ（１９９３）Ｙｅａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：３３−４０；Ｔｕａｉｌｌｏｎら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：３７２０−２４；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎら（１９９１）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２１：１３２３−２６を参照）。
キメラ免疫グロブリン鎖を含むキメラ抗体は、当分野で公知の組換えＤＮＡ技法によって産生されることもある。たとえば、マウス（または他の種）のモノクローナル抗体分子のＦｃ定常領域をコードする遺伝子を制限酵素で消化して、マウスＦｃをコード化する領域を除去し、ヒトＦｃ定常領域をコードする遺伝子の相当部分を置換する（たとえばＲｏｂｉｎｓｏｎら、国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ８６／０２２６９号明細書；Ａｋｉｒａら、欧州特許出願第ＥＰ １８４，１８７号明細書；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ，欧州特許出願第ＥＰ １７１，４９６号明細書；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、欧州特許出願第ＥＰ １７３，４９４号明細書；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、ＷＯ ８６／０１５３３；Ｃａｂｉｌｌｙら、米国特許第４，８１６，５６７号明細書；Ｃａｂｉｌｌｙら、欧州特許出願第ＥＰ １２５，０２３号明細書；Ｂｅｔｔｅｒら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０４１−４３；Ｌｉｕら（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：３４３９−４３；Ｌｉｕら（１９８７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：３５２１−２６；Ｓｕｎら（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：２１４−１８；Ｎｉｓｈｉｍｕｒａら（１９８７）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．４７：９９９−１００５；Ｗｏｏｄら（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ ３１４：４４６−４９；およびＳｈａｗら（１９８８）Ｊ Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．８０：１５５３−５９を参照）。
抗体または免疫グロブリン鎖は、当分野で公知の方法によってヒト化されることがある。ヒト化免疫グロブリン鎖を含むヒト化抗体は、抗原結合に直接関与していないＦｖ可変領域の配列をヒトＦｖ可変領域からの同等の配列で置換することによって生成してもよい。ヒト化抗体を生成する一般的な方法は、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２−０７；Ｏｉら（１９８６）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４；Ｑｕｅｅｎら、米国特許第５，５８５，０８９号明細書；５，６９３，７６１号明細書；５，６９３，７６２号明細書によって提供され、そのすべての内容全体は参照により本明細書に組み込まれている。これらの方法としては、重鎖または軽鎖の少なくとも１つから免疫グロブリン可変領域の全部または一部をコードする核酸配列を単離、操作、および発現することが挙げられる。このような核酸配列源は当業者に周知であり、たとえば、所定の標的に対する抗体を産生するハイブリドーマから得られることがある。ヒト化抗体、またはそのフラグメントをコードする組換えＤＮＡは次に、適切な発現ベクター内にクローニングすることが可能である。
ヒト化またはＣＤＲグラフト抗体分子または免疫グロブリンは、ＣＤＲグラフト化または免疫グロブリン鎖の１個、２個、またはすべてのＣＤＲが置換されるＣＤＲ置換によって産生されることもある。たとえば米国特許第５，２２５，５３９号明細書；Ｊｏｎｅｓら（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５５２−２５；Ｖｅｒｈｏｅｙａｎら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４；Ｂｅｉｄｌｅｒら（１９８８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４１：４０５３−６０；Ｗｉｎｔｅｒ，米国特許第５，２２５，５３９号明細書を参照、そのすべての内容全体は本明細書での参照により本明細書に組み込まれている。Ｗｉｎｔｅｒは、本発明のヒト化抗体を調製するために使用されるＣＤＲグラフト方法について記載しており（英国特許出願第ＧＢ ２１８８６３８Ａ号明細書；Ｗｉｎｔｅｒ，米国特許第５，２２５，５３９号明細書）、そのすべての内容全体は本明細書での参照により本明細書に組み込まれている。特定のヒト抗体のＣＤＲはすべて、非ヒトＣＤＲの少なくとも一部によって置換され、またはＣＤＲの一部のみが非ヒトＣＤＲによって置換されることがある。所定の抗体へのヒト化抗体の結合に必要な数のＣＤＲを置換することのみ必要である。
抗体の他の部分、たとえば定常領域を欠失、付加または置換することによって修飾されたモノクローナル、キメラおよびヒト化抗体も本発明の範囲内である。非制限的な例として、抗体は、定常領域を欠失させることにより、定常領域を別の定常領域、たとえば抗体の半減期、安定性、または親和性を向上させることを意図する定常領域、または別の種または抗体クラスからの定常領域を置換することにより、そしてたとえばグリコシル化部位の数、エフェクタ細胞機能、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合、補体結合などを変化させるために定常領域内の１個以上のアミノ酸を修飾することより、修飾することが可能である。
抗体定常領域を変化させる方法は当分野で公知である。機能の変化、たとえば細胞上のＦｃＲ、または補体のＣ１成分などのエフェクタリガンドに対する親和性の変化がある抗体は、抗体の定常部分内の少なくとも１個のアミノ酸残基を別の残基で置換することによって産生可能である（たとえばＥＰ ３８８１５１Ａ１、Ｕ．Ｓ．５，６２４，８２１およびＵ．Ｓ．５，６４８，２６０を参照、そのすべての内容全体は本明細書での参照により本明細書に組み込まれている）。マウス（または他の種の）免疫グロブリンに対して同様の種類の変化を加えて、これらの機能を低減または除去してもよい；このような変化は当分野で公知である。
たとえば、指定された（複数の）残基を、その側鎖上に適切な官能基を有する（一または複数の）残基で置換することによって、あるいはグルタメートまたはアスパルテートなどの荷電官能基、あるいはフェニルアラニン、チロシン、トリプトファンまたはアラニンなどの芳香族非極性残基を導入することによって、ＦｃＲ（たとえばＦｃガンマＲ１）、またはＣ１ｑ結合に資する抗体（たとえばヒトＩｇＧなどのＩｇＧ）のＦｃ領域の親和性を変化させることが可能である（たとえばＵ．Ｓ．５，６２４，８２１を参照）。
本発明の抗体は、上清、細胞溶解液中、または細胞表面上の本発明のポリペプチドを単離、精製、および／または検出するのに有用なことがある。一実施形態において、抗ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ抗体を使用して、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａを単離、精製、および／または検出する。別の実施形態において、抗ＩＬ−１７Ａおよび抗ＩＬ−１７Ｆ抗体は、それぞれＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆのみを単離、精製、および／または検出することが可能である。なお別の実施形態において、抗ＩＬ−１７Ａおよび抗ＩＬ−１７Ｆ抗体は、それぞれＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーも単離、精製、および／または検出することが可能である。本発明で開示された抗体を使用して、臨床試験手順の一部としてたとえばＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａタンパク質レベルを診断的に監視しても、または抗体の抗原を含む細胞または組織を臨床的に治療モジュレータの標的にしてもよい。たとえば小型分子などの治療薬、または本発明の他の治療薬は、本発明のポリペプチドを発現する細胞または組織を治療薬の標的とするために、本発明の抗体に結合されることもある。ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｒ、またはＩＬ−１７ＲＣタンパク質に結合する拮抗抗体（好ましくはモノクローナル抗体）は、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達に関連する（一または複数の）疾患の治療にも有用である。それゆえ、本発明は、特異的拮抗ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ抗体、すなわちＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａに特異的に結合して、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達を低下、制限、遮断、またはそうでなければ減少させる抗体を含む組成物を提供する。本発明は、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ａ、およびＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａのいずれかのシグナル伝達を低下させるシグナル伝達拮抗薬を含む組成物も提供して、それゆえ３種のサイトカインすべての下流でシグナル伝達を低下させる。同様に、抗ＩＬ−１７Ｆ、抗ＩＬ−１７Ａ、抗ＩＬ１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ、抗ＩＬ−１７Ｒ、または抗ＩＬ−１７ＲＣ抗体は、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｒ、またはＩＬ−１７ＲＣそれぞれを単離、精製、検出および／または診断的に監視するのに、ならびに／あるいはＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｒ、またはＩＬ−１７ＲＣそれぞれを含む細胞または組織を臨床的に治療的モジュレータの標的とするのに有用である場合がある。抗ＩＬ−１７Ｆおよび抗ＩＬ−１７Ａ抗体は、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａを単離、精製、検出および／または診断的に監視するのに、あるいはＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａを含む細胞または組織を臨床的に治療的モジュレータの標的とするのにも有用でありうる。
本発明で使用する抗体に加えて、ＩＬ−１７Ｆホモダイマー、ＩＬ−１７Ａホモダイマー、および／またはＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーの活性を調節するために他の分子も利用されることがある。このような分子には、ｓｍａｌｌ ｍｏｄｕｌａｒ ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ（ＳＭＩＰ（商標））薬（Ｔｒｕｂｉｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、シアトル、ワシントン州）がある。ＳＭＩＰは、抗原、対抗受容体などの同族構造体の結合ドメインと、システイン残基を１個有するか、または有さないヒンジ領域ポリペプチドと、免疫グロブリンＣＨ２およびＣＨ３ドメインより成る単鎖ポリペプチドである（ｗｗｗ．ｔｒｕｂｉｏｎ．ｃｏｍも参照）。ＳＭＩＰならびにその使用および応用は、たとえば米国特許出願公開第２００３／０１１８５９２号明細書、第２００３／０１３３９３９号明細書、第２００４／００５８４４５号明細書、第２００５／０１３６０４９号明細書、第２００５／０１７５６１４号明細書、第２００５／０１８０９７０号明細書、第２００５／０１８６２１６号明細書、第２００５／０２０２０１２号明細書、第２００５／０２０２０２３号明細書、第２００５／０２０２０２８号明細書、第２００５／０２０２５３４号明細書、および第２００５／０２３８６４６号明細書、ならびにその関連特許ファミリーメンバーに開示されており、そのすべてはその全体が本明細書での参照により本明細書に組み込まれている。
スクリーニングアッセイ
本発明に関連するポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、細胞または生物中のＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの生物活性を調節することが可能であり、それにより炎症応答の潜在的な調節因子である薬剤のための薬理作用物質またはリード化合物を同定するスクリーニングアッセイに使用されることもある。たとえば、少なくともＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａを含有するサンプルに複数の試験化合物の１種（生物因子または小型有機分子のどちらか）を接触させて、処置サンプルそれぞれにおけるＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの生物活性（たとえばＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７ＡのＩＬ−１７ＲおよびＩＬ−１７ＲＣのどちらかまたは両方への結合、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ関連気道炎症（たとえば好中球補充、サイトカイン産生など））を未処置サンプルまたは別の試験化合物と接触させたサンプル中のＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの生物活性と比較することが可能である。このような比較によって、試験化合物のいずれが：１）それによりＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ拮抗薬を示す、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの発現または生物活性のレベルの実質的な低下、または２）それによりＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ作用薬を示すＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの発現または生物活性のレベルの実質的な上昇を生じるか否かが判定される。一実施形態において、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａモジュレータ（たとえばＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ活性を調節できる試験化合物）の同定は、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）（Ｂｉａｃｏｒｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＡＢ、ウプサラ、スウェーデン）、ＢＲＥＴ（生物発光共鳴エネルギー移動）およびＦＲＥＴ（蛍光共鳴エネルギー移動）アッセイなどの高スループットスクリーニングアッセイはもちろんのこと、ＥＬＩＳＡおよび細胞ベースアッセイも使用して実施する。
当業者は、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの生物活性を調節可能である薬理作用物質またはリード化合物が、ＩＬ−１７Ｆおよび／またはＩＬ−１７Ａのどちらかの生物活性も調節可能である場合があることを認識する。それゆえ本発明は、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａモジュレータ（たとえばＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達作用薬またはＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬）が特異的ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａモジュレータ（すなわち、それはＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａのみの生物活性を調節する）、または選択的ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａモジュレータ（すなわち、それはＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの両方ならびにＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆのどちらか１つまたは両方の生物活性を調節する）であるか否かを同定する方法を提供する。たとえば、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの生物活性を調節する可能性がある化合物、たとえばＩＬ−１７ＲおよびＩＬ−１７ＲＣのどちらかまたは両方に対するＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの相互作用を調節することが可能な化合物、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ関連気道炎症（たとえば好中球補充、サイトカイン産生など）を調節することが可能な化合物などを少なくともＩＬ−１７Ａを含有するサンプルに接触させて、処置したサンプルのＩＬ−１７Ａの生物活性、たとえばＩＬ−１７ＡのＩＬ−１７Ｒおよび／またはＩＬ−１７ＲＣへの結合、あるいはＩＬ−１７Ａ関連気道炎症（たとえば好中球補充、サイトカイン産生など）などを未処置サンプルのＩＬ−１７Ａの生物活性と比較することが可能である。化合物を少なくともＩＬ−１７Ｆを含有するサンプルにも接触させて、処置したサンプルのＩＬ−１７Ｆの生物活性、たとえばＩＬ−１７ＦのＩＬ−１７Ｒおよび／またはＩＬ−１７ＲＣへの結合、あるいはＩＬ−１７Ｆ関連気道炎症（たとえば好中球補充、サイトカイン産生など）などを、未処置サンプルの生物活性と比較することが可能である。ＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆ生物活性（すなわち生物活性の上昇または低下）の調節は、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａモジュレータが特異的ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａモジュレータではなく、むしろ選択的ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａモジュレータであることを示すであろう。これに対して、化合物がＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの両方の生物活性を調節できないことは、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａモジュレータが特異的ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａモジュレータであることを示す。当業者は、試験化合物がＩＬ−１７Ａモジュレータであるか否かを同定するステップ［たとえばＩＬ−１７ＡならびにＩＬ−１７ＲおよびＩＬ−１７ＲＣのどちらかまたは両方を含有するサンプルを試験化合物と接触させるステップと、サンプルのＩＬ−１７Ａの生物活性が試験化合物と接触させていないサンプルのＩＬ−１７Ａの生物活性と比較して調節される（たとえば上昇または低下する）か否かを判定するステップ］と、試験化合物がＩＬ−１７Ｆモジュレータであるか否かを同定するステップ［たとえばＩＬ−１７ＦならびにＩＬ−１７ＲおよびＩＬ−１７ＲＣのどちらかまたは両方を含有するサンプルに試験化合物を接触させるステップと、サンプルのＩＬ−１７Ｆの生物活性が試験化合物と接触させていないサンプルのＩＬ−１７Ｆの生物活性と比較して調節される（たとえば上昇または低下する）か否かを判定するステップ］が、いずれかの順序で連続してまたは同時に実施され、試験化合物がＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの生物活性を調節可能であるか否かを同定する方法［たとえばＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７ＡならびにＩＬ−１７ＲおよびＩＬ−１７ＲＣのどちらかまたは両方を含有するサンプルを試験化合物と接触させるステップと、サンプルのＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの生物活性が試験化合物と接触させていないサンプルのＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの生物活性と比較して上昇または低下するか否かを判定して、それにより試験化合物と接触させたサンプルのＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの生物活性のこのような上昇または低下が、化合物をＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａモジュレータ（たとえばＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達作用薬またはＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬）として同定するステップを含む］の前、後、またはその方法と同時に実施されることがあることを認識する。
別の実施形態において、特異的ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａモジュレータ（たとえば特異的ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ拮抗薬）を含むＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａモジュレータの同定は、実施例２．１．６および２．２．４に記載されているように気道炎症のマウスモデルを使用して実施される。たとえば、気道炎症を患っている実験対象（たとえばオボアルブミン反応性Ｔｈ１７細胞が養子移入され、オボアルブミンを接種されたマウス、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ａ、またはＩＬ−１７Ｆの用量にさらされたマウス（たとえば鼻内））を複数の試験化合物の１種（たとえば生物因子または小型有機分子のどちらか）によって処置して、処置対象それぞれの気道炎症のレベル（たとえば好中球補充、炎症性サイトカイン濃度）を未処置対象または別の試験化合物と接触させた対象の気道炎症のレベルと比較することができる。このような比較によって、試験化合物のいずれが：１）それによりＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ拮抗薬を示す、気道炎症のレベルの実質的な低下、または２）それによりＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ作用薬を示す、気道炎症のレベルの実質的な上昇を生じるか否かが判定される。当業者は、（１）（たとえばＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの用量にさらされたマウスにおける）ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ関連気道炎症を調節する、（２）（たとえばＩＬ−１７Ａの用量にさらされたマウスにおける）ＩＬ−１７Ａ関連気道炎症を調節しない、（３）（たとえばＩＬ−１７Ｆの用量にさらされたマウスにおける）ＩＬ−１７Ｆ関連気道炎症を調節しない試験化合物が特異的ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａモジュレータであることを認識する。
小型分子
ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達に関連する障害（たとえばＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ関連障害）に罹患した（またはそのリスクのある）生物（または対象）における、またはこのような障害に関与するこのような生物（または対象）からの細胞のＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ、および／またはＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ生物活性の低下は、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａを拮抗する、すなわちＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの活性を抑制する小型分子（通常は有機小型分子の使用）によっても達成されることがある。新規な拮抗小型分子は、本明細書に記載するスクリーニング方法によって同定されることがあり、後述する本発明の処置方法で使用されることがある。
反対に、たとえば免疫不全、たとえば好中球減少に罹患した（またはそのリスクのある）生物（または対象）、またはこのような障害に関与するこのような生物（または対象）からの細胞のＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ活性の上昇は、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａを作用させる、すなわちＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの活性を上昇させる小型分子（通常は有機小型分子の使用）によっても達成されることがある。新規な作用性小型分子は、たとえば米国特許第５，７０７，８２９号明細書；第６，０４３，３４４号明細書；第６，０７４，８４９号明細書および米国特許出願第１０／１０２，０８０号明細書に記載されているように、本明細書に記載するスクリーニング方法によって同定されることがあり、免疫不全を治療する方法で使用されることがあり、そのすべてはその全体が本明細書での参照により組み込まれている。
本発明の一部の実施形態において、拮抗または作用小型分子は、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーに特異的であってもよい（すなわち小型分子はヘテロダイマーのみを結合して、ヘテロダイマーのみの生物活性を調節する）。当業者は、特異的ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ拮抗または作用小型分子がＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａのみの活性をそれぞれ低下または上昇させるのに有用であり、それゆえＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ関連疾患（すなわち対象が正常対象のＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ生物活性と比較して変化したＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ生物活性を有する疾患）の治療において有用であろうことを認識する。本発明の他の実施形態において、拮抗または作用小型分子は、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーに選択的であってもよい（すなわちＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの両方およびＩＬ−１７ＡまたはＩＬ−１７Ｆのどちらか（あるいは両方）を結合して、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの両方およびＩＬ−１７ＡまたはＩＬ−１７Ｆのどちらか（あるいは両方）の生物活性を調節する小型分子）。当業者は、選択的ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ拮抗または作用小型分子がＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７ＡおよびたとえばＩＬ−１７ＦまたはＩＬ−１７Ａのどちらか一方の活性を低下または上昇させるのに有用であり、それゆえＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆ関連疾患／障害の治療に有用であろうことを認識する（たとえば、参照により本明細書に組み込まれている、米国特許出願第１１／３５３，１６１号明細書を参照）。
小型分子という用語は、巨大分子ではない化合物を指す（たとえばＫａｒｐ（２０００）Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｏｎｔｏｌｏｇｙ １６：２６９−８５；Ｖｅｒｋｍａｎ（２００４）ＡＪＰ−Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ．２８６：４６５−７４を参照）。それゆえ、小型分子は１０００ダルトン未満である化合物と見なされることが多い（たとえばＶｏｅｔ ａｎｄ Ｖｏｅｔ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２ｎｄｅｄ，ｅｄ．Ｎ．Ｒｏｓｅ，Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１４（１９９５））。たとえばＤａｖｉｓら（２００５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０２：５９８１−８６は、葉酸塩、メトトレキセート、および神経ペプチドを表すために小型分子という句を使用しているが、Ｈａｌｐｉｎ ａｎｄ Ｈａｒｂｕｒｙ（２００４）ＰＬｏｓ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２：１０２２−３０は、小型分子遺伝子産物、たとえばＤＮＡ、ＲＮＡおよびペプチドを表すためにその句を使用している。天然小型分子の例としては、これに限定されるわけではないが、コレステロール、神経伝達物質、およびｓｉＲＮＡが挙げられる；合成小型分子としては、これに限定されるわけではないが、多数の市販の小型分子データベース、たとえばＦＣＤ（Ｆｉｎｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ Ｄａｔａｂａｓｅ）、ＳＭＩＤ（Ｓｍａｌｌ Ｍｏｌｅｃｕｌｅ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ Ｄａｔａｂａｓｅ）、ＣｈＥＢＩ（Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｔｉｔｉｅｓ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ）、およびＣＳＤ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｄａｔａｂａｓｅ）に記載された各種の化学薬品が挙げられる（たとえばＡｌｆａｒａｎｏら（２００５）Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．Ｄａｔａｂａｓｅ Ｉｓｓｕｅ ３３：Ｄ４１６−２４を参照）。

ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達に関連する障害の進行を診断、予後診断および監視する方法
本発明は、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ活性のアップレギュレーションを検出することによって、たとえばＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａのアップレギュレーションを検出することによって、対象におけるＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ関連障害（たとえばＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの生物活性の上昇に直接的または間接的に関係する障害）の進行を診断、予後診断および監視する方法を提供し、これに限定されるわけではないが、ヒト対象におけるこのような方法の使用を含む。当業者は、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａに関連する障害がＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆ生物活性にも関連する可能性があることを認識する。それゆえ、これらの方法はたとえば、本明細書で記載するような１種以上のＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｒ、またはＩＬ−１７ＲＣポリヌクレオチドまたはそのフラグメント、１種以上のＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｒ、またはＩＬ−１７ＲＣポリペプチドまたはそのフラグメント（その融合タンパク質を含む）、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｒ、またはＩＬ−１７ＲＣペプチドまたはその誘導体に対する１種以上の抗体、あるいはＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｒ、またはＩＬ−１７ＲＣポリヌクレオチドおよび／またはポリペプチドの１種以上のモジュレータを含む群の少なくとも１つを含む、事前に包装された診断キットを利用することによって実施してもよい。これらはたとえば、臨床場面で好都合に使用されることがある。加えて、当業者は、たとえばＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａのアップレギュレーションが、免疫細胞、たとえば好中球の数をカウントすることなどの間接方法によっても検出可能であることを認識する。
「診断の」または「診断すること」は、病態の存在または非存在を同定することを意味する。診断方法は、対象（たとえばヒトまたは非ヒト哺乳動物）からの生体サンプル中のＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの（複数の）ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ遺伝子産物（たとえば、そのフラグメントを含む、ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ、および／またはポリペプチド）の試験量を決定することと、試験量を正常な量または範囲（すなわちＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達に関連する障害を被っていないことが公知の個体からの量または範囲）を比較することとによって、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達のアップレギュレーションを検出するステップを含む。特定の診断方法はＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達に関連する障害の確定診断を与えないこともあるが、方法が診断で役立つ確実な指標を与える場合にはそれで十分である。
本発明は、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ活性のアップレギュレーションを検出することによって、たとえばＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａのアップレギュレーションを検出することによって、このような障害を予後診断する方法も提供する。「予後診断の」または「予後診断すること」は、病態の考えられる発症および／または重症度を予測することを意味する。予後診断方法は、対象からの生体サンプル中のＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの（複数の）遺伝子産物の試験量を決定するステップと、試験量をＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの遺伝子産物の予後診断量または範囲（すなわちＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ関連障害の各種の重症度の個体からの量または範囲）と比較するステップを含む。試験サンプル中のＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ遺伝子産物の各種の量は、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達に関連する障害のある予後診断と一致している。特定の予後診断レベルのＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ遺伝子産物の量の検出は、対象の予後診断を与える。
本発明は、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ生物学的サイトカイン活性のアップレギュレーションを検出することによって、たとえばＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ遺伝子産物のアップレギュレーションを検出することによって、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達に関連するこのような障害の進行または経過を監視する方法も提供する。監視方法は、対象から採取した生体サンプル中のＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの遺伝子産物の、たとえば１回目および２回目の試験量を決定することと、量を比較することを含む。１回目と２回目のＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ遺伝子産物の量の変化はＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ関連障害の経過における変化を示し、量の減少はこのような障害の寛解を示し、量の増加はこのような障害の進行を示す。このような監視アッセイは、たとえば自己免疫障害の治療を受けている患者での特定の治療介入の有効性を評価するのにも有用である。
上で概説した方法でのＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達の増加は、体液（たとえば全血、血漿、および尿）、細胞（たとえば細胞全体、細胞画分、および細胞抽出物）、および他の組織を含む、各種の生体サンプルで検出してもよい。生体サンプルは、組織学的な目的で採取された生検および凍結切片などの組織切片も含む。好ましい生体サンプルとしては、血液、血漿、リンパ、組織生検、尿、ＣＳＦ（脳脊髄液）、滑液、およびＢＡＬ（気管支肺胞洗浄液）が挙げられる。生体サンプルの分析は対象からの細胞または組織の除去を必ずしも必要としないことが認識される。たとえば、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達遺伝子産物（たとえば抗体、核酸）を結合する適切に標識された薬剤を対象に投与して、（標的に結合したときに）標準撮像技術（たとえばＣＡＴ、ＮＭＲ（ＭＲＩ）、およびＰＥＴ）を使用して可視化することが可能である。
本発明の診断および予後診断アッセイにおいて、（複数の）ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ遺伝子産物を検出および定量して試験量を得る。試験量を次に正常な量または範囲と比較する。正常な量または範囲を著しく超えた量は、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達に関連する障害の診断ではプラスの徴候である。ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ遺伝子産物の検出および定量の詳細な方法を後述する。
ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ遺伝子産物の正常な量およびベースラインレベルは、いずれの特定のサンプルタイプおよび集合についても決定できる。一般に、（複数の）ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ遺伝子産物のベースライン（正常）レベルは、正常（たとえば健常）対象からの生体サンプルタイプ中の（複数の）ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ遺伝子産物のそれぞれの量を測定することによって決定される。あるいは、（複数の）ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ遺伝子産物の正常値は、罹患（または罹患の可能性がある）試験細胞または組織細胞が採取されたのと同じ対象から採取した健常細胞または組織中の量を測定することによって決定されることもある。（複数の）ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ遺伝子産物の量（正常量または試験量のどちらか）は、細胞当り、全タンパク質当り、または体積ベース当りで決定および表現されることがある。サンプルの細胞量を決定するために、構成的に発現された遺伝子産物または生体サンプルが採取された種類の細胞内で公知のレベルにて発現された遺伝子産物のレベルを測定することが可能である。
本発明のアッセイ方法は、相対値がこれらの方法の多くの利用で十分であるため、（複数の）ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ遺伝子産物の絶対値の測定を必ずしも必要としないことが認識される。（複数の）ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ遺伝子産物の量またはアバンダンスに加えて、変異または異常ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ遺伝子産物またはその発現パターン（たとえば突然変異転写物、切断ポリペプチド）は、（複数の）正常遺伝子産物および発現パターンとの比較によって同定してもよいことも認識される。
２個のサンプル中の特定の遺伝子の発現が著しく類似しているか、または著しく異なっているか、たとえば所与のレベルを著しく超えているか、または著しく下回っているかは、遺伝子自体、特に異なる個体または異なるサンプル間での発現の可変性によって変わる。発現レベルが著しく類似している、または異なっているかを決定するのは、当分野の技術の範囲内である。２個のサンプル間でたとえばＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの発現レベルが著しく類似している、また著しくことなっている、たとえば所与のレベルを著しく超えているか否かを決定するときには、個体、種、臓器、組織、または細胞の間でのたとえばＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ発現レベルにおける遺伝的変異などの因子を、考慮に入れてもよい（必要なときおよび場合）。個体、種、臓器、組織、または細胞間の遺伝子発現における自然の異質性の結果として、「著しく類似した」または「著しく超えた」などの句は、精密なパーセンテージまたは値として定義することはできないが、むしろ本発明を実施するときに当業者によって確認できる。
本発明の診断、予後診断、および監視アッセイは、生体サンプル中の（複数の）ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ遺伝子産物を検出および定量することを含む。ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ遺伝子産物としては、ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ（たとえばＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ ｍＲＮＡおよび／またはｃＤＮＡ）ならびに／あるいはポリペプチド（たとえばＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ａポリペプチド）が挙げられ、どちらも当業者に周知の方法を使用して測定可能である。
たとえば、ｍＲＮＡは、ノザンハイブリダイゼーション、インサイチューハイブリダイゼーション、ドットおよびスロットブロットなどのハイブリダイゼーションベースのアッセイ、ならびにオリゴヌクレオチドアッセイを使用して直接検出および定量することが可能である。ハイブリダイゼーションベースのアッセイは、プローブ核酸が標的核酸にハイブリダイズされるアッセイを指す。一部の形式では、標的、プローブ、または両方が固定化される。固定化核酸は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、また別のオリゴヌクレオチドあるいはポリヌクレオチドでもよく、天然または非天然発生型ヌクレオチド、ヌクレオチド類似体、または主鎖から成ることがある。本発明で使用するための核酸プローブ配列を選択する方法は、ＩＬ−１７Ｆおよび／またはＩＬ−１７Ａの核酸配列に基づき、当分野で周知である。
あるいは、ｍＲＮＡは検出および定量の前に増幅させることが可能である。このような増幅ベースアッセイは当分野で周知であり、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、逆転写ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）、ＰＣＲ−酵素結合免疫吸着アッセイ（ＰＣＲ−ＥＬＩＳＡ）、およびリガーゼ連鎖反応（ＬＣＲ）を含む。増幅ＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆ遺伝子産物（たとえばｍＲＮＡまたはｃＤＮＡ）を産生および検出するためのプライマーまたはプローブは、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆそれぞれの核酸配列に基づいて、当業者による過度の実験なしにただちに設計および産生されることがある。非制限的な例として、増幅ＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆ遺伝子産物は、たとえばゲル電気泳動によって；プローブ核酸へのハイブリダイゼーションによって；配列決定によって；蛍光、リン光、または放射性シグナルの検出によって；あるいは各種の周知の方法のいずれかによって；直接分析してもよい。加えて、標的核酸配列の増幅によって産生されたシグナルを増加させる方法が当業者に公知である。当業者は、どの増幅方法が使用されようとも、遺伝子産物の定量が所望である場合には、当分野で公知の各種の定量的方法（定量的ＰＣＲ）が使用されることを認識する。
本明細書に記載するように産生されることがある抗体ＩＬ−１７Ａ、抗ＩＬ−１７Ｆ、および／または抗ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ抗体を利用する各種の周知の免疫アッセイを使用して、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａポリペプチド（またはそのフラグメント）を検出してもよい。免疫アッセイは、たとえばＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａポリペプチド（またはそのフラグメント）に特異的に結合する抗体（たとえばポリクローナル、モノクローナル、キメラ、ヒト化、ｓｃＦｖ、および／またはそのフラグメント）を利用するアッセイを指す。本発明の実施に適切な、このように周知の免疫アッセイとしては、ＥＬＩＳＡ、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、免疫沈降、免疫蛍光、蛍光活性化細胞選別装置（ＦＡＣＳ）、およびウェスタンブロッティングが挙げられる。ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａポリペプチドは、たとえばサンドイッチＥＬＩＳＡを利用して、抗ＩＬ−１７Ａおよび抗ＩＬ−１７Ｆ抗体の組合せを使用して検出してもよい。加えて、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａポリペプチドは、（複数の）標識ＩＬ−１７Ｒおよび／またはＩＬ−１７ＲＣポリペプチドを使用して検出してもよい。反対に、ＩＬ−１７ＲまたはＩＬ−１７ＲＣは標識ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａポリペプチドを使用して検出してもよい。
当業者は、上述の方法がＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達に関連する障害に利用される場合があることを認識する。

療法でのＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａに関連する分子の使用
参照によりその全体が本明細書に組み込まれている、米国特許出願第１１／３５３，１６１号明細書は、ｈＩＬ−１７ＦおよびｈＩＬ−１７Ａの両方がｈＩＬ−１７Ｒおよび／またはｈＩＬ−１７ＲＣ受容体への結合を通じて類似の応答を誘導することを示す。本発明者らは、ｈＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーが同じｈＩＬ−１７ＲおよびｈＩＬ−１７ＲＣ受容体にも結合して、ｈＩＬ−１７ＡおよびｈＩＬ−１７Ｆホモダイマーに対する類似の応答を誘導することを最初に示している。さらに、発明者らは新規なマウスＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーを提供して、ヘテロダイマーが生体内で生物活性であることと、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ関連障害、たとえば気道炎症を治療および／または予防するために、ヘテロダイマーの遮断を生体内で使用できることとを示す。それゆえ当業者は、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ関連障害がＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ関連障害も含むことがあり、それゆえＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬によって治療してもよいことを認識する。
上述の方法を使用して同定したモジュレータを含む、本明細書で開示したＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達を調節する分子は、試験管内、生体外で使用される、または製薬組成物中に包含されて、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬（たとえばＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆ抑制ポリヌクレオチド；可溶性ＩＬ−１７Ｒおよび／またはＩＬ−１７ＲＣポリペプチド（そのフラグメントおよび／または融合タンパク質を含む）；抑制抗ＩＬ−１７Ｆ、抗ＩＬ１７Ａ、抗ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ、抗ＩＬ−１７Ｒ、または抗ＩＬ−１７ＲＣ抗体；拮抗小型分子；など）の投与によって、たとえばＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達関連障害を治療する対象または個体に生体内で投与されることがある。ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達を調節する分子を投与するか否かの決定で検討される複数の薬理ゲノム手法は、当業者に周知であり、ゲノムワイド関連、候補遺伝子手法、および遺伝子発現プロファイリングが挙げられる。本発明の製薬組成物は、その意図する投与経路に適合するように調合される（たとえば経口組成物は一般に、不活性希釈剤または食用担体を含む）。投与経路の他の非制限的な例しては、非経口（たとえば静脈内）、皮内、皮下、経口（たとえば吸入）、経皮（局所）、経粘膜、および直腸投与が挙げられる。意図する各経路に適合する製薬組成物は、当分野で周知である。
ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達作用薬またはＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬は、製薬的に許容される担体と組合せたときに、製薬組成物として使用されることがある。このような組成物は、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａを調節する分子（たとえばＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達作用薬またはＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬）および担体に加えて、各種の希釈剤、充填剤、塩、緩衝剤、安定剤、可溶化剤、および当分野で周知の他の物質を含有してもよい。「製薬的に許容される」という用語は、（複数の）活性成分の生物活性の有効性を妨害しない非毒性物質を意味する。担体の特徴は、投与経路によって変わる。
本発明の製薬組成物は、サイトカイン、リンホカイン、またはＭ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−Ｉ、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、Ｇ−ＣＳＦ、幹細胞因子、およびエリスロポエチンなどの他の造血因子も含有することがある。製薬組成物は、下でさらに詳細に記載されるような抗サイトカイン抗体を含むことがある。製薬組成物は、プラスミノーゲン活性化因子および第ＶＩＩＩ因子などの血栓溶解因子または抗血栓因子を含有することがある。製薬組成物は、下で詳細にさらに記載されるような他の抗炎症剤を含有することがある。このようなさらなる因子および／または薬剤は、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達作用薬またはＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬との相乗効果を産生するために、あるいはＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達作用薬またはＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬によって引き起こされる副作用を最小限に抑えるために、製薬組成物に含まれることがある。反対に、サイトカイン、リンホカイン、他の造血因子、血栓溶解因子または抗血栓因子、あるいは抗炎症剤の副作用を最小限に抑えるために、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達作用薬またはＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬が、特定のサイトカイン、リンホカイン、他の造血因子、血栓溶解因子または抗血栓因子、あるいは抗炎症剤の調合物に含まれることがある。
本発明の製薬組成物は、他の製薬的に許容される担体、ミセルなどの凝集形で存在する脂質などの両親媒性剤、水溶液中の不溶性単層、液晶、またはラメラ層に加えて、（複数の）ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達作用薬または（複数の）ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬が組合されているリポソームの形でもよい。リポソーム調合物の適切な脂質としては、制限なく、モノグリセリド、ジグリセリド、スルファチド、リゾレシチン、リン脂質、サポニン、胆汁酸などが挙げられる。
本明細書で使用するように、「治療的有効量」という用語は、意味のある患者利益、たとえばこのような状態の、症状の改善、治癒、または治癒率の向上を示すのに十分である、製薬組成物または方法の各活性成分の総量を意味する。単独で投与される個々の活性成分に適用されるとき、この用語はその成分単独を指す。組合せに適用されるとき、この用語は、組合せて連続投与されるか、または同時に投与されるかにかかわらず、治療効果を生じる活性成分の合せた量を指す。
本発明の治療または使用の方法を実施するには、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達モジュレータ（たとえばＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達作用薬またはＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬）の治療的有効量を対象、たとえば哺乳動物（たとえばヒト）に投与する。ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達モジュレータは、本発明の方法に従って、単独で、またはサイトカイン、リンホカイン、または他の造血因子、または抗炎症剤を利用する治療などの他の療法と組合せて投与してもよい。１種以上の薬剤と同時投与するときに、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ作用薬または拮抗薬は、第２の薬剤と同時に、または連続的に投与されることがある。連続投与する場合、担当医は、たとえば特異的な抗ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ拮抗抗体を他の薬剤と組合せて投与する適切な順序を決定する。
ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａモジュレータの治療的有効量を経口投与するとき、結合剤は錠剤、カプセル剤、粉剤、液剤またはエリキシル剤の形であろう。錠剤形で投与するとき、本発明の製薬組成物は、ゼラチンなどの固体担体またはアジュバントをさらに含有してもよい。錠剤、カプセル剤、および粉剤は、約５〜９５％の結合剤、好ましくは約２５〜９０％の結合剤を含有する。液体形で投与する場合、水、石油、動物油またはラッカセイ油、鉱油、大豆油、またはゴマ油などの植物由来の油、あるいは合成油などの液体担体を添加してもよい。製薬組成物の液体形は、生理食塩溶液、デキストロースまたは他のサッカライド溶液、あるいはエチレングリコール、プロピレングリコール、またはポリエチレングリコールなどのグリコールをさらに含有することもある。液体形で投与するとき、製薬組成物は、約０．５〜９０重量％の結合剤、好ましくは約１〜５０重量％の結合剤を含有する。
ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａモジュレータの治療的有効量を静脈内、皮膚または皮下注射によって投与するとき、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａモジュレータは発熱物質を含まない、非経口的に許容される水溶液の形であろう。ｐＨ、等張性、安定性などに十分な注意を払った、このような非経口的に許容されるタンパク質溶液の調製は、当業者の技術の範囲内である。静脈内、皮膚または皮下注射の好ましい製薬組成物は、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａモジュレータに加えて、塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、デキストロース注射液、デキストロースおよび塩化ナトリウム注射液、乳酸加リンゲル注射液などの等張性ビヒクル、または当分野で公知の他のビヒクルを含有すべきである。本発明の製薬組成物は、安定剤、保存料、緩衝剤、抗酸化剤、または当業者に公知の他の添加剤も含有することがある。
本発明の製薬組成物中のＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａモジュレータの量は、治療される状態の性質および重症度に、そして患者が受けた前治療の性質によって変わる。最終的に、担当医が個々の患者を治療するためのＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａモジュレータの量を決定する。最初に、担当医は、低用量のＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａモジュレータを投与して患者の応答を観察する。患者に対して最適治療効果が得られるまで、より高用量のＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａモジュレータを投与してもよく、その時点で投薬量は一般にさらに増加されない。本発明の方法を実施するために使用される各種の治療組成物がＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａモジュレータ、たとえば特異的拮抗抗ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ抗体を体重１ｋｇ当り約０．１μｇ〜約１００ｍｇ含有すべきであることが考慮される。
本発明の製薬組成物を使用する静脈内（ｉ．ｖ．）療法の期間は、治療される疾患の重症度ならびに個々の患者の状態および潜在的な特異体質反応に応じて変化する。ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａモジュレータの各利用の期間は、１時間を超える投与範囲内、たとえば約１２〜約２４時間の連続ｉ．ｖ．投与であることが考慮される。本発明の製薬組成物を使用する皮下（ｓ．ｃ．）療法も考慮される。これらの療法は、毎日、毎週、またはさらに好ましくは隔週、または毎月投与することができる。ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａモジュレータが小型分子（たとえば経口送達用）である場合、療法を毎日、１日２回、１日３回などで投与してもよいことも考慮される。最終的に、担当医は本発明の製薬組成物を使用する、ｉ．ｖ．またはｓ．ｃ．療法、あるいは小型分子を用いた療法の適切な期間、療法の投与のタイミングを決定する。
本発明のポリヌクレオチドおよびタンパク質は、下で示す使用または生物活性（本明細書で引用したアッセイと関連するものを含む）の１つ以上を示すことが予想される。本発明のタンパク質について記載された使用または活性は、（たとえばＤＮＡの導入に適切な遺伝子療法またはベクターなどにおける）このようなタンパク質の投与または使用によって、あるいはこのようなタンパク質をコードするポリヌクレオチドの投与または使用によって与えられることがある。

免疫障害を治療するためのＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬の使用
ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬は、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達の抑制が望ましい対象に投与されることもある。これらの状態としては、これに限定されるわけではないが、炎症性障害、たとえば自己免疫疾患（たとえば関節炎（関節リウマチを含む）、乾癬、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症）、呼吸性疾患（たとえば気道炎症、ＣＯＰＤ、嚢胞性線維症、喘息、アレルギー）、移植片拒絶（実質臓器移植片拒絶を含む）、および炎症性腸疾患（たとえば潰瘍性大腸炎、クローン病）が挙げられる。
これらの方法は、一部は、本発明に関連するｈＩＬ−１７Ｆ、ｈＩＬ−１７Ａ、および／またはｈＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ拮抗薬（たとえばｈＩＬ−１７Ｒ．Ｆｃ、ｈＩＬ−１７ＲＣ．Ｆｃ、抗ｈＩＬ−１７Ｒ抗体、抗ｈＩＬ−１７ＲＣ抗体）によって細胞を治療することが、ヒト包皮線維芽細胞からのｈＩＬ−１７Ａ、ｈＩＬ−１７Ｆ、および／またはｈＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ誘導サイトカイン放出、たとえばＧＲＯ−αサイトカイン放出を抑制するという発見に基づいている（実施例１．２．４〜１．２．５）。加えて、これらの方法は、一部は、本発明に関連する抑制ポリヌクレオチド（たとえばＩＬ−１７Ｒ ｓｉＲＮＡおよびＩＬ−１７ＲＣ ｓｉＲＮＡ）によって細胞を処置することが、ｈＩＬ−１７Ａ、ｈＩＬ−１７Ｆ、およびｈＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ誘導サイトカイン放出を抑制するという発見に基づいている（実施例１．２．６）。さらに、本発明者らは、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａが生体内の気道炎症で役割を果たすことと、サイトカインの遮断がこのような気道炎症を予防およびまたは低減することとを示す（実施例２．２．３〜２．２．５）。したがって、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ拮抗薬（たとえばＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬）、すなわちＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ生物活性を抑制する分子は、たとえばＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ関連障害、たとえばＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達に関連する障害を治療または予防する目的で、生体内で炎症を低減するために使用されることもある。
ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ拮抗薬は、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ生物活性を抑制するためにも使用されることがあり、それゆえ各種の免疫障害を治療または予防するために使用可能である。治療または予防可能である障害の非制限的な例としては、これに限定されるわけではないが、移植片拒絶、自己免疫疾患（たとえば真性糖尿病、関節炎（関節リウマチ、若年性関節リウマチ、骨関節炎、乾癬性関節炎、反応性関節炎を含む）、多発性硬化症、脳脊髄炎、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、自己免疫性甲状腺炎、皮膚炎（アトピー性皮膚炎および湿疹性皮膚炎を含む）、ライテル症候群、乾癬、シェーグレン症候群、クローン病、アフタ性潰瘍、虹彩炎、結膜炎、角結膜炎、潰瘍性大腸炎、脊椎関節症、強直性脊椎炎、内因性喘息、アレルギー性喘息、皮膚エリテマトーデス、強皮症、膣炎、直腸炎、薬疹、ハンセン病逆転応答（ｌｅｐｒｏｓｙ ｒｅｖｅｒｓａｌ ｒｅａｃｔｉｏｎｓ）、癩性結節性紅斑、自己免疫性ブドウ膜炎、アレルギー性脳脊髄炎、急性壊死性出血性脳症、特発性両側性進行性感音難聴、再生不良性貧血、赤芽球ろう、特発性血小板減少、多発性軟骨炎、ヴェゲナー肉芽腫症、慢性活動性肝炎、スティーヴンズ−ジョンソン症候群、特発性スプルー、扁平苔癬、グレーヴズ病、サルコイドーシス、原発性胆汁性肝硬変、後部ブドウ膜炎、および間質性肺線維症）、移植片対宿主病、肺増悪（たとえば細菌感染による）、アトピー性アレルギーなどのアレルギーが挙げられる。ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ、および／またはＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーシグナル伝達を妨害するＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬（たとえばＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆおよび／またはＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａに対する拮抗抗体およびそのフラグメント；溶解性受容体；小型分子；抑制ポリヌクレオチドなど）の投与を含む方法を使用して治療できる好ましい障害としては、これに限定されるわけではないが、炎症性障害、たとえば自己免疫疾患（たとえば関節炎（関節リウマチを含む）、乾癬、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症）、呼吸性疾患（たとえば気道炎症、ＣＯＰＤ、嚢胞性線維症、喘息、アレルギー）、移植片拒絶（実質臓器移植片拒絶を含む）、および炎症性腸疾患（たとえば潰瘍性大腸炎、クローン病）が挙げられる。
ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬（たとえばＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ、および／またはＩＬ−１７ＲＣ抑制ポリヌクレオチド；溶解性ＩＬ−１７Ｒおよび／またはＩＬ−１７ＲＣポリペプチド（そのフラグメントおよび／または融合タンパク質を含む）；抑制抗ＩＬ−１７Ｆ、抗ＩＬ−１７Ａ、抗ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ、抗ＩＬ−１７Ｒ、またはＩＬ−１７ＲＣ抗体；ならびに／あるいは拮抗小型分子など）を使用して、いくつかの方法で免疫応答を調節（たとえばダウンレギュレート）することが可能である。ダウンレギュレーションは、すでに進行している炎症応答を抑制または遮断する形でもよく、炎症応答の誘導を防止することを含む場合がある。
一実施形態において、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬は、その製薬組成物を含めて、併用療法で、すなわち免疫障害および炎症性疾患などの病態または障害を治療するのに有用である他の薬剤、たとえば治療剤と組合せて投与される。「組合せて」という用語は本文脈では、薬剤が、同時にまたは連続的にのどちらかで、実質的に同時期に投与されることを意味する。連続的に投与する場合、たとえば第２の化合物の投与開始時に、２種のうち最初の化合物は好ましくは、治療部位にて有効濃度でなお検出可能である。
たとえば、併用療法は、本明細書でさらに詳細に記載するように、１種以上のさらなる治療剤、たとえば１種以上のサイトカインおよび成長因子阻害薬、免疫抑制薬、抗炎症剤、代謝阻害薬、酵素阻害薬、ならびに／あるいは細胞傷害剤または細胞分裂阻害薬と同時調合、および／または同時投与される、１種以上のＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬（たとえばＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ｒ、および／またはＩＬ−１７ＲＣ抑制ポリヌクレオチド；溶解性ＩＬ−１７Ｒおよび／またはＩＬ−１７ＲＣポリペプチド（そのフラグメント、および／または融合タンパク質を含む））；抑制抗ＩＬ−１７Ｆ、抗ＩＬ−１７Ａ、抗ＩＬ１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ、抗ＩＬ−１７Ｒ、またはＩＬ−１７ＲＣ抗体；拮抗小型分子など）を含むことが可能である。さらに、本明細書に記載する１種以上のＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬は、本明細書に記載する治療剤の２種以上と組合せて使用してもよい。このような併用療法は、投与された治療剤のより少ない投薬量を好都合に利用して、それゆえ各種の単剤療法に関連する、考えられる毒性および合併症を回避することがある。その上、本明細書で開示する治療剤は、抗ＩＬ１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ受容体シグナル経路とは異なる経路に作用して、それゆえＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬の効果を向上させる、および／または効果と相乗作用することが予想される。
ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬と組合せて使用される好ましい治療剤は、炎症応答の各種の段階で妨害する薬剤である。一実施形態において、本明細書に記載する１種以上のＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬は、他のサイトカインまたは成長因子拮抗薬（たとえば溶解性受容体、ペプチド阻害薬、小型分子、リガンド融合物）；あるいは他の標的に結合するその抗体または抗原結合フラグメント（たとえば他のサイトカインまたは成長因子、その受容体、あるいは他の細胞表面分子に結合する抗体）；および抗炎症性サイトカインまたはその作用薬などの１種以上のさらなる薬剤と同時調合、および／または同時投与してもよい。本明細書に記載するＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬と組合せて使用可能である薬剤の例としては、これに限定されるわけではないが、１種以上のインターロイキン（ＩＬ）またはその受容体の拮抗薬、たとえばＩＬ−Ｉ、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１およびＩＬ−２２の拮抗薬；腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、ＬＴ、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦおよびＰＤＧＦなどのサイトカインまたは成長因子またはその受容体の拮抗薬が挙げられる。ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬は、たとえばＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２０（たとえばＣＤ２０阻害薬リツキシマブ（リツキサン（登録商標）））、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０（Ｂ７．１）、ＣＤ８６（Ｂ７．２）、ＣＤ９０、あるいはＣＤ１５４（ｇｐ３９またはＣＤ４０Ｌ）を含むそのリガンド、あるいはＬＦＡ−１／ＩＣＡＭ−１およびＶＬＡ−４／ＶＣＡＭ−１などの細胞表面分子に対する抗体の阻害薬と組合せることも可能である（Ｙｕｓｕｆ−Ｍａｋａｇｉａｎｓａｒら（２００２）Ｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｒｅｖ．２２：１４６−６７）。本明細書に記載するＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬と組合せて使用可能である好ましい拮抗薬としては、ＩＬ−Ｉ、ＩＬ−１２、ＴＮＦα、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、およびＩＬ−２２の拮抗薬が挙げられる。
これらの薬剤の例としては、ＩＬ−１２（好ましくはヒトＩＬ−１２）に結合するキメラ、ヒト化、ヒトまたは試験管内産生抗体（またはその抗原結合フラグメント）などのＩＬ−１２拮抗薬、たとえばＷＯ ００／５６７７２に開示されている抗体；ＩＬ−１２受容体阻害薬、たとえばヒトＩＬ−１２受容体に対する抗体；およびＩＬ−１２受容体、たとえばヒトＩＬ−１２受容体の溶解性フラグメントが挙げられる。ＩＬ−１５拮抗薬の例としては、ＩＬ−１５およびその受容体に対する抗体（またはその抗原結合フラグメント）、たとえばヒトＩＬ−１５またはその受容体に対するキメラ、ヒト化、ヒトまたは試験管内産生抗体、ＩＬ−１５受容体の溶解性フラグメント、およびＩＬ−１５結合タンパク質が挙げられる。ＩＬ−１８拮抗薬の例としては、ヒトＩＬ−１８に対する抗体、たとえばキメラ、ヒト化、ヒトまたは試験管内酸性抗体（またはその抗原結合フラグメント）、ＩＬ−１８受容体の溶解性フラグメント、およびＩＬ−１８結合タンパク質（ＩＬ−１８ＢＰ）が挙げられる。ＩＬ−１拮抗薬の例としては、Ｖｘ７４０などのインターロイキン−１変換酵素（ＩＣＥ）阻害薬、ＩＬ−１拮抗薬、たとえばＩＬ−ＩＲＡ（アニキンラ、キネレット（商標）、Ａｍｇｅｎ）、ｓＩＬ１ＲＩＩ（Ｉｍｍｕｎｅｘ）、および抗ＩＬ−１受容体抗体（またはその抗原結合フラグメント）が挙げられる。
ＴＮＦ拮抗薬の例としては、（ヒュミラ（商標）、Ｄ２Ｅ７、ヒトＴＮＦα抗体）、ＣＤＰ−５７１／ＣＤＰ−８７０／ＢＡＹ−１０−３３５６（ヒト化抗ＴＮＦα抗体；Ｃｅｌｌｔｅｃｈ／Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、ｃＡ２（キメラ抗ＴＮＦα抗体；レミケード（登録商標）、Ｃｅｎｔｏｃｏｒ）；抗ＴＮＦ抗体フラグメント（たとえばＣＰＤ８７０）などの、ＴＮＦ（たとえばヒトＴＮＦα）に対するキメラ、ヒト化、ヒトまたは試験管内産生抗体（またはその抗原結合フラグメント）；ＴＮＦ受容体、たとえばｐ５５またはｐ７５ヒトＴＮＦ受容体またはその誘導体の溶解性フラグメント、たとえば７５ｋｄ ＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤ ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、エンブレル（商標）；Ｉｍｍｕｎｅｘ）、ｐ５５ｋｄ ＴＮＦＲ−ＩｇＧ（５５ｋＤ ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質（レネルセプト（登録商標））；酵素拮抗体、たとえばＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害薬（たとえばアルファ−スルホニルヒドロキサム酸誘導体、およびＮ−ヒドロキシホルムアミドＴＡＣＥ受容体ＧＷ３３３３、−００５、または−０２２）；およびＴＮＦ−ｂｐ／ｓ−ＴＮＦＲ（溶解性ＴＮＦ結合タンパク質）が挙げられる。好ましいＴＮＦ拮抗薬は、ＴＮＦ受容体、たとえばｐ５５またはｐ７５ヒトＴＮＦ受容体またはその誘導体の溶解性フラグメント、たとえば７５ｋｄ ＴＮＦＲ−ＩｇＧ、およびＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害薬である。
他の実施形態において、本明細書に記載するＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬は、以下：ＩＬ−１３拮抗薬、たとえば溶解性ＩＬ−１３受容体（ｓＩＬ−１３）および／またはＩＬ−１３に対する抗体；ＩＬ−２拮抗薬、たとえばＤＡＢ４８６−ＩＬ−２および／またはＤＡＢ３８９−ＩＬ−２（ＩＬ−２融合タンパク質、Ｓｅｒａｇｅｎ）、および／またはＩＬ−２Ｒに対する抗体、たとえば抗Ｔａｃ（ヒト化抗ＩＬ−２Ｒ、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｓｉｇｎ Ｌａｂｓ）の１種以上と組合せて投与してもよい。なお別の組合せとしては、非枯渇（ｎｏｎｄｅｐｌｅｔｉｎｇ）抗ＣＤ４阻害薬（ＩＤＥＣ−ＣＥ９．１／ＳＢ ２１０３９６；非枯渇霊長類化抗ＣＤ４抗体；ＩＤＥＣ／ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）と組合せたＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬が挙げられる。なお他の好ましい組合せとしては、抗体、溶解性受容体または拮抗リガンドを含む、共刺激経路ＣＤ８０（Ｂ７．１）またはＣＤ８６（Ｂ７．２）の拮抗薬；はもちろんのこと、ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド（ＰＳＧＬ）、抗炎症サイトカイン、たとえばＩＬ−４（ＤＮＡＸ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ）；ＩＬ−１０（ＳＣＨ５２０００；組換えＩＬ−１０ＤＮＡＸ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ）；ＩＬ−１３およびＴＧＦ−β、およびその作用薬（たとえば作用抗体）が挙げられる。
他の実施形態において、１種以上のＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬は、１種以上の抗炎症薬、免疫抑制薬または酵素阻害薬と同時調合、および／または同時投与することが可能である。本明細書に記載するＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬と組合せて使用することが可能である薬物または阻害薬の非制限的な例としては、これに限定されるわけではないが；（複数の）非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、たとえばイブプロフェン、テニダップ、ナプロキセン、メロキシカム、ピロキシカム、ジクロフェナク、およびインドメタシン；スルファサラジン；プレドニゾロンなどのコルチコステロイド；（複数の）サイトカイン抑制抗炎症薬（ＣＳＡＩＤ）；ヌクレオチド生合成の阻害薬、たとえばプリン生合成の阻害薬、葉酸拮抗薬（たとえばメトトレキセート（Ｎ−［４−［［（２，４−ジアミノ−６−プテリジニル）メチル］メチルアミノ］ベンゾイル］−Ｌ−グルタミン酸）；およびピリミジン生合成の阻害薬、たとえばジヒドロオロト酸脱水素酵素（ＤＨＯＤＨ）阻害薬の１種以上が挙げられる。ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬と組合せて使用するための好ましい治療剤としては、ＮＳＡＩＤ、ＣＳＡＩＤ、（ＤＨＯＤＨ）阻害薬（たとえばレフルノミド）、および葉酸拮抗薬（たとえばメトトレキセート）が挙げられる。
さらなる阻害薬の例としては；コルチコステロイド（経口、吸入および局所注射）；免疫抑制剤、たとえばシクロスポリン、タクロリムス（ＦＫ−５０６）；およびｍＴＯＲ阻害薬、たとえばシロリムス（ラパマイシン−ラパミューン（商標）またはラパマイシン誘導体、たとえば溶解性ラパマイシン誘導体（たとえばエステルラパマイシン誘導体、たとえばＣＣＩ−７７９）；ＴＮＦαまたはＩＬ−１などの炎症誘発性サイトカインによるシグナル伝達を妨害する薬剤（たとえばＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８またはＭＡＰキナーゼ阻害薬）；ＣＯＸ２阻害薬、たとえばセレコキシブ、ロフェコキシブ、およびその変異体；ホスホジエステラーゼ阻害薬、たとえばＲ９７３４０１（ホスホジエステラーゼＩＶ型阻害薬）；ホスホリパーゼ阻害薬、たとえば細胞質型ホスホリパーゼ２（ｃＰＬＡ２）の阻害薬（たとえばトリフルオロメチルケトン類似体）；血管内皮成長因子または成長因子受容体の阻害薬、たとえばＶＥＧＦ阻害薬および／またはＶＥＧＦ−Ｒ阻害薬；ならびに血管新生阻害薬の１種以上が挙げられる。ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬と組合せて使用するための好ましい治療剤は、免疫抑制剤、たとえばシクロスポリン、タクロリムス（ＦＫ−５０６）；ｍＴＯＲ阻害薬、たとえばシロリムス（ラパマイシン）またはラパマイシン誘導体、たとえば溶解性ラパマイシン誘導体（たとえばエステルラパマイシン誘導体、たとえばＣＣＩ−７７９）；ＣＯＸ２阻害薬、たとえばセレコキシブおよびその変異体；ならびにホスホリパーゼ阻害薬、たとえば細胞質型ホスホリパーゼ２（ｃＰＬＡ２）の阻害薬、たとえばトリフルオロメチルケトン類似体である。
ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬と組合せることが可能である治療剤のさらなる例としては：６−メルカプトプリン（６−ＭＰ）；アザチオプリンスルファサラジン；メサラジン；オルサラジン；クロロキン／ヒドロキシクロロキン（プラキニル（登録商標））；ペニシラミン；金チオリンゴ酸塩（筋肉内および経口）；アザチオプリン；コルヒチン；ベータ−２アドレナリン受容体拮抗薬（サルブタモール、テルブタリン、サルメテロール）；キサンチン（テオフィリン、アミノフィリン）；クロモグリク酸塩；ネドクロミル；ケトチフェン；イプラトロピウムおよびオキシトロピウム；ミコフェノール酸モフェチル；アデノシン作用薬；抗血栓剤；補体阻害薬；およびアドレナリン作動薬の１種以上が挙げられる。
ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達に関連する特定の障害を治療または予防する他の治療剤と組合せた、本明細書で開示するＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬の使用を下でさらに詳細に議論する。
ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬が組合されることのある、関節障害（たとえば関節リウマチ、炎症性関節炎、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、骨関節炎、および乾癬性関節炎）を治療または予防するための薬剤の非制限的な例としては、以下：本明細書に記載するＩＬ−１２拮抗薬；ＮＳＡＩＤ；ＣＳＡＩＤ；ＴＮＦ、たとえば本明細書に記載するＴＮＦα拮抗薬；本明細書に記載する非枯渇抗ＣＤ４抗体；本明細書に記載するＩＬ−２拮抗薬；抗炎症性サイトカイン、たとえばＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３およびＴＧＦα、またはその作用薬；本明細書に記載するＩＬ−１またはＩＬ−１受容体拮抗薬；本明細書に記載するホスホジエステラーゼ阻害薬；本明細書に記載するＣｏｘ−２阻害薬；イロプロスト；メトトレキセート；サリドマイドおよびサリドマイド関連薬（たとえばＣｅｌｇｅｎ）；レフルノミド；プラスミノーゲン活性化の阻害薬、たとえばトラネキサム酸；サイトカイン阻害薬、たとえばＴ−６１４；プロスタグランジンＥ１；アザチオプリン；インターロイキン−１変換酵素（ＩＣＥ）の阻害薬；ｚａｐ−７０および／またはｌｃｋ阻害薬（チロシンキナーゼｚａｐ−７０またはｌｃｋの阻害薬）；本明細書に記載する血管内皮成長因子または血管内皮成長因子受容体の阻害薬；本明細書に記載する血管新生阻害薬；コルチコステロイド抗炎症薬（たとえばＳＢ２０３５８０）；ＴＮＦ−コンバターゼ阻害薬；ＩＬ−１１；ＩＬ−１３；ＩＬ−１７阻害薬；金；ペニシラミン；クロロキン；ヒドロキシクロロキン；クロランブシル；シクロホスファミド；シクロスポリン；全リンパ照射；抗胸腺細胞グロブリン；ＣＤ５−毒素；経口投与ペプチドおよびコラーゲン；ロベンザリット２ナトリウム；サイトカイン調節剤（ＣＲＡ）ＨＰ２２８およびＨＰ４６６（Ｈｏｕｇｈｔｅｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）；ＩＣＡＭ−１アンチセンスホスホロチオエートオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ２３０２；Ｉｓｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）；溶解性補体受容体１（ＴＰ１０；Ｔ Ｃｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．）；プレドニゾン；オルゴテイン；グリコサミノグリカンポリサルフェート；ミノサイクリン（ＭＩＮＯＣＩＮ（登録商標））；抗ＩＬ２Ｒ抗体；海産脂質および植物脂質（魚類および植物種子脂肪酸）；オーラノフィン；フェニルブタゾン；メクロフェナム酸；フルフェナム酸；静脈内免疫グロブリン；ジロートン；ミコフェノール酸（ＲＳ−６１４４３）；タクロリムス（ＦＫ−５０６）；シロリムス（ラパマイシン）；アミプリロース（テラフェクチン）；クラドリビン（２−クロロデオキシアデノシン）；およびアザリビンの１種以上が挙げられる。好ましい組合せは、メトトレキセートまたはレフルノミドと、中程度または重症の関節リウマチの症例ではシクロスポリンと組合せた、１種以上のＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬を含む。
関節炎障害を治療するためにＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬と組合せて使用する阻害薬の好ましい例としては、ＴＮＦに結合する、ＴＮＦ拮抗薬（たとえばキメラ、ヒト化、ヒトまたは試験管内産生抗体、またはその抗原結合フラグメント；ＴＮＦ受容体、たとえばｐ５５またはｐ７５ヒトＴＮＦ受容体またはその誘導体の溶解性フラグメント、たとえば７５ｋｄ ＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤ ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、エンブレル（商標））、ｐ５５ ｋＤ ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質；ＴＮＦ酵素拮抗薬、たとえばＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害薬）；ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、ＩＬ−２２の阻害薬；Ｔ細胞およびＢ細胞枯渇剤（たとえば抗ＣＤ４または抗ＣＤ２２抗体）；小型分子阻害薬、たとえばメトトレキセートおよびレフルノミド；シロリムス（ラパマイシン）およびその類似体、たとえばＣＣＩ−７７９；ＣＯＸ−２およびｃＰＬＡ２阻害薬；ＮＳＡＩＤ；ｐ３８阻害薬、ＴＰＬ−２、Ｍｋ−２およびＮＦκＢ阻害薬；ＲＡＧＥまたは溶解性ＲＡＧＥ；Ｐ−セレクチンまたはＰＳＧＬ−Ｉ阻害薬（たとえば小型分子阻害薬、それに対する抗体、たとえばＰ−セレクチンに対する抗体）；エストロゲン受容体ベータ（ＥＲＢ）作用薬またはＥＲＢ−ＮＦκＢ拮抗薬が挙げられる。１種以上のＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬と同時投与および／または同時調合可能である最も好ましいさらなる治療薬としては：ＴＮＦ受容体、たとえばｐ５５またはｐ７５ヒトＴＮＦ受容体またはその誘導体の溶解性フラグメント、たとえば７５ｋｄ ＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤ ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、エンブレル（商標））；メトトレキセート、レフルノミド、あるいはシロリムス（ラパマイシン）またはその類似体、たとえばＣＣＩ−７７９の１種以上が挙げられる。
ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬を組合せることが可能である、多発性硬化症を治療または予防するための薬剤の非制限的な例としては、以下の：インターフェロン、たとえばインターフェロン−アルファ１ａ（たとえばアボネックス（商標）；Ｂｉｏｇｅｎ）およびインターフェロン−１ｂ（ベタセロン（商標）Ｃｈｉｒｏｎ／Ｂｅｒｌｅｘ）；コポリマー１（Ｃｏｐ−１；コパキソン（商標）Ｔｅｖａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）；高圧酸素；静脈内免疫グロブリン；クラドリビン；本明細書に記載するＴＮＦ拮抗薬；コルチコステロイド；プレドニゾロン；メチルプレドニゾロン；アザチオプリン；シクロホスファミド；シクロスポリン；シクロスポリンＡ、メトトレキセート；４−アミノピリジン；およびチザニジンが挙げられる。ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達の拮抗薬と組合せて使用可能であるさらなる拮抗薬としては、他のヒトサイトカインまたは成長因子、たとえばＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−１１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ、およびＰＤＧＦに対する抗体、またはそれらの拮抗薬が挙げられる。本明細書に記載したＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ９０またはそのリガンドなどの細胞表面分子に対する抗体と組合せることが可能である。ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬は、メトトレキセート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、たとえばイブプロフェン、プレドニゾロンなどのコルチコステロイド、ホスホジエステラーゼ阻害薬、アデノシン作用薬、抗血栓剤、補体阻害薬、アドレナリン作動薬、本明細書に記載する炎症誘発性サイトカインによるシグナル伝達を妨害する薬剤、ＩＬ−Ｉｂ変換酵素阻害薬（たとえばＶｘ７４０）、抗Ｐ７、ＰＳＧＬ、ＴＡＣＥ阻害薬、キナーゼ阻害薬などのＴ細胞シグナル伝達阻害薬、メタロプロテイナーゼ阻害薬、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害薬、本明細書に記載する溶解性サイトカイン受容体およびその誘導体、および抗炎症性サイトカイン（たとえばＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３およびＴＧＦ）と組合されることもある。
ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬を組合せることが可能である、多発性硬化症の治療剤の好ましい例としては、インターフェロン−β、たとえばＩＦＮβ−１ａおよびＩＦＮβ−１ｂ；コパキソン、コルチコステロイド、ＩＬ−１阻害薬、ＴＮＦ阻害薬、ＣＤ４０リガンドおよびＣＤ８０に対する抗体、ＩＬ−１２拮抗薬が挙げられる。
ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗を組合せることが可能である、炎症性腸疾患（たとえばクローン病、潰瘍性大腸炎）を治療または予防する薬剤の非制限的な例としては、以下：ブデノシド；上皮成長因子；コルチコステロイド；シクロスポリン；スルファサラジン；アミノサリチラート；６−メルカプトプリン；アザチオプリン；メトロニダゾール；リポキシゲナーゼ阻害薬；メサラミン；オルサラジン；バルサラジド；抗酸化薬；トロンボキサン阻害薬；ＩＬ−１拮抗薬；抗ＩＬ−１抗体；抗ＩＬ−６抗体；抗ＩＬ−２２抗体；成長因子；エラスターゼ阻害薬；ピリジニル−イミダゾール化合物；本明細書に記載するＴＮＦ拮抗薬；ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３および／またはＴＧＦβサイトカインまたはその作用薬（たとえば作用抗体）；ＩＬ−１１；プレドニゾロン、デキサメタゾンまたはブデソニドのグルクロニドまたはデキストラン結合プロドラッグ；ＩＣＡＭ−１アンチセンスホスホロチオエートオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ２３０２；Ｉｓｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）；溶解性補体受容体１（ＴＰ１０；Ｔ Ｃｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．）；低速放出メサラジン；メトトレキセート；血小板活性化因子（ＰＡＦ）の拮抗薬；シプロフロキサシン；およびリグノカインが挙げられる。
ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬を組合せることが可能である、皮膚の炎症性疾患および障害（これに限定されるわけではないが、乾癬を含む）を治療または予防する薬剤の非制限的な例としては、以下の：ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、およびＩＬ−２２の拮抗薬が挙げられる。
一実施形態において、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬は、免疫応答、たとえば移植片拒絶を調節するのに関与する他の標的に向けられた１種以上の抗体と組合せて使用することが可能である。本発明のＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬を組合せることが可能である、免疫応答を治療または予防する薬剤の非制限的例としては、以下の：これに限定されるわけではないが、ＣＤ２５（インターロイキン−２受容体−ａ）、ＣＤ１１ａ（ＬＦＡ−１）、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ−１）、ＣＤ４、ＣＤ４５、ＣＤ２８／ＣＴＬＡ４（ＣＤ８０（Ｂ７．１）、たとえばＣＴＬＡ４Ｉｇ−アバタセプト（オレンシア（登録商標））、ＩＣＯＳＬ、ＩＣＯＳおよび／またはＣＤ８６（Ｂ７．２）を含む他の細胞表面分子に対する抗体が挙げられる。なお別の実施形態において、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬は、シクロスポリンＡまたはＦＫ５０６などの１種以上の一般的な免疫抑制剤と組合せて使用される。
本発明の別の実施形態において、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬は、抗原提示細胞融合物をダウンレギュレートする方法および／または免疫抑制を管理する療法と組合せて使用される。抗原提示細胞機能をダウンレギュレートする方法と；および２）免疫抑制を管理する併用療法は、当分野で周知である（たとえばＸｉａｏら（２００３）ＢｉｏＤｒｕｇｓ １７：１０３−１１；Ｋｕｗａｎａ（２００２）Ｈｕｍ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６３：１１５６−６３；Ｌｕら（２００２）Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ７３：Ｓ１９−２２；Ｒｉｆｌｅら（２００２）Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ７３：Ｓ１−Ｓ２；Ｍａｎｃｉｎｉら（２００４）Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ．Ｎｕｒｓ．Ｑ．２７：６１−６４）。
他の実施形態において、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬は、自己免疫障害、炎症性疾患などに対するワクチンアジュバントとして使用される。これらの種類の障害の治療のためのアジュバントの組合せは、標的化自己抗原、すなわち自己免疫に関与する自己抗原、たとえばミエリン塩基性タンパク質；炎症性自己抗原、たとえばアミロイドペプチドタンパク質、または移植抗原、たとえば同種抗原からの広範囲の抗原と組合せて使用するのに適切である。抗原は、タンパク質に由来するペプチドまたはポリペプチドはもちろんのこと、以下のいずれか：サッカライド、タンパク質、ポリヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド、自己抗原、アミロイドペプチドタンパク質、移植抗原、アレルゲン、または他の巨大分子成分のフラグメントを含むことがある。一部の例において、１種を超える抗原が抗原組成に含まれる。
たとえば、本発明のアジュバントの組合せを含有する、脊椎動物宿主においてアレルゲンに対する応答を緩和する所望のワクチンとしては、アレルゲンまたはそのフラグメントを含有するワクチンが挙げられる。このようなアレルゲンの例は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている、米国特許第５，８３０，８７７号明細書および国際公開第９９／５１２５９号パンフレットに記載されており、花粉、昆虫毒、動物鱗屑、菌類胞子および薬物（ペニシリンなど）を含む。ワクチンは、アレルギー反応の公知の原因であるＩｇＥ抗体の産生を妨害する。別の例において、本発明のアジュバントの組合せを含有する、脊椎動物宿主においてアミロイド沈着を特徴とする疾患を予防または治療するための所望のワクチンは、アミロイドペプチドタンパク質（ＡＰＰ）の一部を含有するワクチンを含む。この疾患は、アルツハイマー病、アミロイドーシスまたはアミロイド生成疾患などと様々に呼ばれる。それゆえ、本発明のワクチンとしては、たとえば、Ａβペプチドはもちろんのこと、ＡβペプチドのフラグメントおよびＡβペプチドに対する抗体またはそのフラグメントも加えた本発明のアジュバントの組合せが挙げられる。
本発明の別の態様はしたがって、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬を他の治療化合物と共に投与するためのキットに関する。一実施形態において、キットは、製薬的担体中で調合された１種以上の結合剤と、少なくとも１種の薬剤、たとえば、１種以上の別個の製薬的調製物中で必要に応じて調合された治療剤とを含む。
本出願を通じて引用されたすべての参考文献、特許、および特許出願の内容全体は、本明細書での参照により本明細書に組み込まれる。
以下の実施例は、本発明の例証的な実施形態を提供し、本発明を決して制限しない。当業者は、多数の他の実施形態が本発明の範囲内に含まれることを認識する。
実施例は、在来の方法、ベクターの構築、ポリペプチドをコードする遺伝子のこのようなベクターおよびプラスミドへの挿入、このようなベクターおよびプラスミドの宿主細胞への導入、および宿主細胞におけるこのようなベクターおよびプラスミドからのポリペプチドの発現で利用されるような方法の詳細な説明は含まない。このような方法は当業者に周知である。
（実施例１）
ヒトヘテロ受容体複合体ＩＬ−１７ＲおよびＩＬ−１７ＲＣをその機能活性のために必要とする、新規ヘテロダイマーヒトサイトカインＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ
（実施例１．１）
材料および方法
（実施例１．１．１）
試薬
ヒトＩＬ−１７Ｒ．ＦｃおよびｈＩＬ−１７ＲＣ．ＦｃをＲ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ（ミネアポリス、ミネソタ州）より購入した。ヒトＩＬ−１７Ｆ、ｈＩＬ−１７ＡおよびｈＩＬ−１７／ＩＬ−１７Ａを先に記載された方法に従って精製した（どちらもその全体が参照により本明細書に組み込まれている、米国特許出願第１１／３５３，１６１号明細書；Ｗｒｉｇｈｔら（２００７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８２：１３４４７−５５）。ｈＩＬ−１７Ｆ、ｈＩＬ−１７ＡおよびｈＩＬ−１７／ＩＬ−１７Ａは、ＦＬＵＯＲＥＰＯＲＴＥＲ（登録商標）Ｍｉｎｉ−ｂｉｏｔｉｎ−ＸＸタンパク質標識キットを製造者のプロトコルに従って使用して（Ｃａｔ．＃Ｆ−６３４７，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ、グランドアイランド、ニューヨーク州）ビオチン化した。
（実施例１．１．２）
ヒトＩＬ−１７受容体融合タンパク質のクローニング
全長ヒトＩＬ−１７ＲおよびｈＩＬ−１７ＲＣを、未刺激ＭＧ６３細胞から作製したｃＤＮＡからＰＣＲ増幅した。配列決定により、ＮＣＢＩアクセションＮｏ．ＡＹ３５９０９８に一致するヒトＩＬ−１７ＲＣの核酸配列（配列番号：２７として示される７０５アミノ酸タンパクをコードする、配列番号：２６）およびＮＣＢＩアクセションＮｏ．ＢＣ０１１６２４に一致するヒトＩＬ−１７Ｒの核酸配列（配列番号：２９として示される８６６アミノ酸タンパクをコードする、配列番号：２８）を確認した。全長クローンをレトロウイルス構築物中にそれぞれサブクローニングして、溶解性融合タンパク質の産生のためのテンプレートとしても使用した。ヒトＩＬ−１７Ｒ（配列番号：２９の残基１−３１７）の細胞外部分をインフレームでリンカー（ＧＳＧＳＧＳＧ、配列番号：３０）およびヒトＩｇＧ１ Ｆｃ（配列番号：３１として示される核酸配列、配列番号：３２として示されるアミノ酸配列）と融合した。ヒトＩＬ−１７ＲＣの細胞外部分（配列番号：２７の残基１−４５２）をインフレームでリンカー（ＡＧＳＧＳＧＳＧ、配列番号：３３）およびヒトＩｇＧ１ Ｆｃと融合した。これらのＰＣＲ誘導融合受容体を、ＣＭＶプロモータ駆動哺乳動物発現構築物中に別々にサブクローニングした。構築物はすべて配列検証した。
（実施例１．１．３）
ヒトＩＬ−１７受容体融合タンパク質の発現
タンパク質は、ＨＥＫ２９３細胞（ＴｒａｎｓＩＴ−ＬＴ１、Ｍｉｒｕｓ、マディソン、ウィスコンシン州）の一過性トランスフェクションによって発現した。トランスフェクションの２４時間後、ＤＮＡ／リポソーム混合物を含有する培地を除去して、無血清培地と交換した。条件培地を４８時間後に収集して、タンパク質産生をウェスタン分析によって評価した。
（実施例１．１．４）
ヒトＩＬ−１７受容体融合タンパク質の精製
ヒトＩＬ−１７Ｒ．ＦｃまたはｈＩＬ−１７ＲＣ．Ｆｃを含有する培地をタンパク質Ａカラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ、ピスカタウェイ、ニュージャージー州）に流した。カラムをＰＢＳで洗浄して、融合タンパク質を２０ｍＭクエン酸、２００ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ３で溶離した。ＩＬ−１７Ｒ．Ｆｃ凝集物は、ＰＢＳ ｐＨ７．２ランニング緩衝液を使用してタンパク質をサイズ排除カラムに通過させることによって除去した。タンパク質をＰＢＳ ｐＨ７．２で透析して、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、ウェスタン分析および分析的サイズ排除クロマトグラフィーによって特徴づけした。
（実施例１．１．５）
ヒトＩＬ−１７Ｒ．ＦｃおよびヒトＩＬ−１７ＲＣ．Ｆｃに結合するヒトＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ、またはＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７ＡのＥＬＩＳＡ
ヒトＩＬ−１７Ｒ．Ｆｃ（ｈＩＬ−１７Ｒ．Ｆｃ）およびＩＬ−１７ＲＣ．Ｆｃ（ｈＩＬ−１７ＲＣ．Ｆｃ）へのヒトＩＬ−１７Ｆ、ｈＩＬ−１７ＡまたはｈＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの結合を間接サンドイッチＥＬＩＳＡによって判定した。ＥＬＩＳＡプレート（Ｃｏｓｔａｒ、ケンブリッジ、マサチューセッツ州）を１０μｇ／ｍｌヤギ抗ヒトＩｇＧ−Ｆｃ（Ｂｅｔｈｙｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、モンゴメリー、テキサス州）で一晩コーティングした。次にヒトＩＬ−１７Ｒ．ＦｃまたはｈＩＬ１７−ＲＣ．Ｆｃをそれぞれ６ｎｇ／ｍｌおよび３０ｎｇ／ｍｌにて３時間かけて、続いてビオチン化ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７ＦまたはＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの連続希釈物を２時間かけて添加した。プレートをＰｏＩｙ−ＨＲＰストレプトアビジン（Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、ロックフォード、イリノイ州）およびＴＭＢ基質（ＫＰＬ Ｌａｂｓ、ゲイサースバーグ、メリーランド州）で展開した。
（実施例１．１．６）
ＢＪ包皮線維芽細胞の細胞培養
ＢＪヒト包皮線維芽細胞（ＡＴＣＣ（商標）Ｃａｔ．＃ＣＲＬ−２５２２、ベセズダ、メリーランド州）をＤＭＥ＋１０％ ＦＣＳ、２ｍＭグルタミン、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、０．１ｍＭ ＭＥＭ非必須アミノ酸、１００Ｕ／ｍｌペニシリン、および１００μｇ／ｍｌストレプトマイシン中に維持した。
（実施例１．１．７）
ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ生物活性を測定するための細胞ベースアッセイ
トリプシン／ＥＤＴＡを使用してＢＪ細胞を培養フラスコから放出させて、溶解性受容体を含む、または含まない培地にｈＩＬ−１７Ａ、ｈＩＬ−１７Ｆ、またはｈＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａが事前に希釈された９６ウェルのマイクロタイタープレートに５ｘ１０３細胞／ウェルで播種した。細胞表面受容体に対する抗体を使用する処置では、サイトカインを添加する前に抗体を含有するウェルに細胞を播種した。細胞を３７℃で１６〜２４時間インキュベートして、次に上清を除去して、ＥＬＩＳＡ（マッチド抗体ペア（捕捉にはＭＡＢ２７５、検出にはＢＡＦ２７５），Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、ミネアポリス、ミネソタ州）によってＧＲＯ−αを分析した。
（実施例１．１．８）
ＨＥＫ２９３細胞におけるヒトＩＬ−１７Ｒ．ＦｃおよびヒトＩＬ−１７ＲＣ．Ｆｃ過剰発現
ＨＥＫ２９３細胞を形質導入して、２９３ ＶＳＶ−Ｇ細胞の一過性トランスフェクションから産生したレトロウイルス上清を使用して、ヒトＩＬ−１７Ｒ．Ｆｃ（ｈＩＬ−１７Ｒ．Ｆｃ）またはヒトおよびヒトＩＬ−１７ＲＣ．Ｆｃ（ｈＩＬ−１７ＲＣ．Ｆｃ）のどちらかを過剰発現させた。簡潔には、１０ｍｍ培養皿に播種した２９３ ＶＳＶ−Ｇ細胞に、ＦＵＧＥＮＥ（登録商標）６（Ｒｏｃｈｅ、インディアナポリス、インディアナ州）９μｌを製造者の説明に従って使用して、ｈＩＬ−１７Ｒ．ＦｃまたはｈＩＬ−１７ＲＣ．Ｆｃのどちらかを含有するレトロウイルスプラスミド６μｇをトランスフェクトした。３７℃での２４時間のインキュベーションの後、トランスフェクション培地を除去して、薬物を含まない培地６ｍｌと交換して、培養皿を３２℃で培養した。ウイルス上清を４８時間後に、続いて１４〜２４時間間隔で３日間にわたって収集した。上清は収集直後に−８０℃で凍結させた。形質導入の１日前に、ＨＥＫ２９３細胞を６ウェルの培養プレートに播種した。培地を吸引して、６μｇ／ｍｌポリブレンを含有する、新たに解凍したレトロウイルス上清２ｍｌと交換した。プレートを７３０×ｇ、３２℃で１時間遠心分離して、次に３７℃のインキュベータに戻した。６時間後、培地３ｍｌを各ウェル内のウイルス上清に添加した。翌日、形質導入された細胞をより大型の培養皿に広げた。
（実施例１．１．９）
ｓｉＲＮＡトランスフェクション
トランスフェクションの１日前にＢＪ線維芽細胞を９６ウェルプレートの培地中に１０４細胞／ウェルで播種した。ＤＨＡＲＭＡＦＥＣＴ（登録商標）＃１トランスフェクション試薬を製造者の説明に従って用いて（Ｃａｔ．＃Ｔ−２００１−０３，Ｄｈａｒｍａｃｏｎ、ラファイエット、コロラド州）、ＢＪ細胞をトランスフェクトした。ＯＰＴＩ−ＭＥＭ（登録商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カールスバッド、カリフォルニア州）を用いて１０μｌに希釈して、室温にて５分間、事前にインキュベートしたｓｉＲＮＡ ２０ｎＭの混合物を、ＯＰＴＩ−ＭＥＭ（登録商標）９．７μｌに添加したＤＨＡＲＭＡＦＥＣＴ（登録商標）＃１ ０．３μｌの混合物と合せて、十分に混合し、室温で２０分間インキュベートした；次にトランスフェクションミックス２０μｌを、培地８０μｌを含有する細胞の各ウェルに添加した。２４時間後、トランスフェクション培地を除去して、ｈＩＬ−１７Ｆ、ｈＩＬ−１７ＡまたはｈＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａを各種の濃度で含有する培地と交換した。上清を１６時間後に収集して、細胞をＰＢＳで１回洗浄し、ＥＬＩＳＡ（マッチド抗体ペア、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）によってＧＲＯ−αについて分析した。
（実施例１．１．１０）
標的ｍＲＮＡのｓｉＲＮＡ介在分解の定量
ＴＵＲＢＯＣＡＰＴＵＲＥ（登録商標）ｍＲＮＡキット（Ｑｉａｇｅｎ）を製造者の説明に従って使用して、ＢＪ線維芽細胞からｍＲＮＡを単離した。ワンステップＥｕｒｏｇｅｎｔｅｃ ＲＴｑＰＣＲ ｍａｓｔｅｒＭｉｘ Ｐｌｕｓ、ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）プロトコルを使用し、それによりサンプル当りｍＲＮＡ １０μｌを、ＡＢＩ Ｐｒｉｓｍ ７７００ ＤＮＡ配列検出装置（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、フォスターシティ、カリフォルニア州）で実施した２５μｌ ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）ＰＣＲ反応物で使用した。ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）ＰＣＲの条件は以下の通りである：ＭｉｃｒｏＡｍｐ Ｏｐｔｉｃａｌキャップで覆ったＭｉｃｒｏＡｍｐ Ｏｐｔｉｃａｌ ９６ウェルプレート上で、４８℃で３０分、９５℃で１０分、次に９５℃で１５秒、および６０℃で１分それぞれを４０サイクル。各プレートは、各反応ミックスの試験ｃＤＮＡテンプレートおよび非テンプレート対照を３通り含有していた。各マウス遺伝子の発現をヒトベータ２−マイクログロブリン遺伝子発現に正規化した。ＩＬ−１７Ｒ（Ｈｓ００２３４８８８＿ｍｌ）およびＩＬ−１７ＲＣ（Ｈｓ００２６２０６２＿ｍｌ）のＴＡＱＭＡＮ（登録商標）遺伝子発現アッセイプローブ−プライマーセットをＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓより入手した。
（実施例１．１．１１）
ｓｉＲＮＡトランスフェクション効率のウェスタンブロット分析
ウェスタンブロット分析では、９６ウェルプレートに播種したＨＥＫ２９３細胞１．２×１０４にＩＬ−１７ＲまたはＩＬ−１７ＲＣプラスミドを、実施例１．１．９に記載した方法を使用してトランスフェクトした。トランスフェクションの４８時間後、細胞をＰＢＳで１回洗浄して、Ｍ−ＰＥＲ哺乳動物タンパク質抽出試薬（Ｃａｔ．＃７８５０１、Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．、ロックフォード、イリノイ州）を使用して氷上で溶解させた。抽出後、次にタンパク質をＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルに添加して、ナイロン膜に移した。膜を０．１％ Ｔｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳ中の５％脱脂粉乳によって３０分間ブロックした。ＩＬ−１７ＲまたはＩＬ−１７ＲＣ抗体を膜に１：４０００で添加して一晩インキュベーションした（抗ヒトＩＬ−１７Ｒ抗体、Ｃａｔ．＃ＡＦ１７７、抗ヒトＩＬ−１７ＲＣ抗体、Ｃａｔ．＃ＡＦ２２６９、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、ミネアポリス、ミネソタ州）。膜は、０．１％ Ｔｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳによって３回、それぞれ１０分間洗浄した。１：２０００でのロバ抗ヤギＩｇＧ−ＨＲＰ（Ｃａｔ．＃ＳＣ−２０２０、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｃ、サンタクルーズ、カリフォルニア州）によるインキュベーションの１時間後、ＷＥＳＴＥＲＮ ＬＩＧＨＴＩＮＧ（登録商標）Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ Ｒｅａｇｅｎｔ Ｐｌｕｓ（Ｃａｔ．＃ＮＥＬ１０３００１ＥＡ，Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ、ウェルズリー、マサチューセッツ州）を使用してタンパク質を描出した。
（実施例１．１．１２）
ＩＬ−１７ＲまたはＩＬ−１７ＲＣ受容体とのＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ａ、またはＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ結合の結合動力学
反応速度測定のためにＢｉａｃｏｒｅ ２０００装置（Ｂｉａｃｏｒｅ、ピスカタウェイ、ニュージャージー州）を使用した。精製ｈＩＬ−１７Ｒ．ＦｃまたはｈＩＬ−１７ＲＣ．Ｆｃ（Ｗｙｅｔｈ、ケンブリッジ、マサチューセッツ州）を含むセンサチップ表面は、製造者の勧告（Ｂｉａｃｏｒｅ）に従ってアミンカップリングを使用して調製した。簡潔には、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドヒドロクロライドおよびＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ−ＥＤＣ）の混合物（Ｂｉａｃｏｒｅ）を各フローセルに注入することによって、センサチップ表面を最初に活性化した。ｐＨ４．５の１０ｍＭ酢酸ナトリウム中、５μｇ／ｍｌのｈＩＬ−１７Ｒ．ＦｃまたはｈＩＬ−１７ＲＣ．Ｆｃを、所望の標的レベルが１０００〜２０００ＲＵの独立したフローセルに注入した。残存する活性部位を１ＭエタノールアミンＨＣｌでブロックした。ＮＨＳ−ＥＤＣの、続いて１ＭエタノールアミンＨＣｌの注射によって基準面を調製した。すべての実験は２２℃で実施し、データ収集速度は１０Ｈｚであった。ヒトＩＬ−１７Ｆ、ｈＩＬ−１７ＡまたはｈＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーを初期濃度４００ｎＭでＨＢＳＴ緩衝液（０．１５Ｍ ＮａＣｌ、３．４ｍＭ ＥＤＴＡ、および０．００５％界面活性剤Ｐ２０を含む１０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ）中にそれぞれ希釈して、同じ緩衝液で１００ｎＭ、５０ｎＭ、２５ｎＭ、１２．５ｎＭ、６．２５ｎＭ、３．１２ｎＭおよび１．５６ｎＭに連続希釈した。サンプルを各センサ表面に５０μＬ／分で３通り注入して、３分間結合させ、続いて１０分間解離させた。各解離の終わりに、表面を１．８３Ｍ ＭｇＣｌ２、０．４６Ｍ ＫＳＣＮ、０．９２Ｍ尿素、および１．８３Ｍグアニジン−ＨＣｌの３０％溶液の３０秒間の注入と、続いての２回連続での１５秒間のＨＢＳＴ注入によって再生した。サンプルを少なくとも２回試験して、２つ以上の固定化センサ表面による結果を得た。データはＭｙｓｚｋａ（（１９９９）Ｊ Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ，１２：２４９−８４）に記載されているように２重参照して、Ｓｃｒｕｂｂｅｒ２ソフトウェア（ＢｉｏＬｏｇｉｃ Ｓｏｆｔｗａｒｅ ｖ２．０ａ、キャンベル、オーストラリア）を用いてデータ品質を改善した。得られた反応速度データは、Ｂｉａｃｏｒｅ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアバージョン３．２を使用して、１：１結合モデルに適合させた。
（実施例１．２）
結果
（実施例１．２．１）
ヒトＩＬ−１７Ｒ．ＦｃおよびヒトＩＬ−１７ＲＣ．Ｆｃに結合するヒトＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ
ｈＩＬ−１７Ｆ、ｈＩＬ−１７ＡまたはｈＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７ＡのｈＩＬ−１７Ｒ．Ｆｃおよび／またはｈＩＬ−１７ＲＣ．Ｆｃへの結合を間接サンドイッチＥＬＩＳＡによって評価した。３種のサイトカインすべてが１８〜２５ｎｇ／ｍｌのほぼ同じＥＣ５０でｈＩＬ−１７ＲＣ．Ｆｃに結合した（図１Ｂ）。しかしｈＩＬ−１７Ｒ．Ｆｃへの結合では、３種のサイトカインのＥＣ５０は異なっていた。ｈＩＬ−１７ＡとｈＩＬ−１７Ｒ．Ｆｃとの間には２５ｎｇ／ｍｌのＥＣ５０で、最も固い結合が生じた。ヒトＩＬ−１７Ｆは、２０００ｎｇ／ｍｌを超えるＥＣ５０でｈＩＬ−１７Ｒ．Ｆｃに弱く結合した。ｈＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーは、ｈＩＬ−１７Ａの結合の１０分の１の強さであるが、ｈＩＬ−１７Ｆの結合のほぼ１０倍の強さである、３００ｎｇ／ｍｌのＥＣ５０を有する（図１Ａ）。
（実施例１．２．２）
ヒトＩＬ−１７Ｒ．ＦｃおよびヒトＩＬ−１７ＲＣ．ＦｃとのヒトＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの結合動力学
ヒトＩＬ−１７Ｆ、ｈＩＬ−１７ＡおよびｈＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７ＡのｈＩＬ−１７Ｒ．ＦｃおよびｈＩＬ−１７ＲＣ．Ｆｃ受容体の両方への結合動力学を比較した。会合および解離速度定数は、実施例１．１．１２に記載したようにＢｉａｃｏｒｅを使用して、リアルタイム表面プラズモン共鳴によって直接測定した。計算した解離定数を表３に示す。ヒトＩＬ−１７Ａは、ｈＩＬ−１７Ｒ．Ｆｃに対して、ＫＤが約２ｎＭの最も強い結合を示した。これに対して、ｈＩＬ−１７Ｆは、約１７４ｎＭのＫＤでｈＩＬ−１７Ｒ．Ｆｃに比較的弱く結合した。興味深いことに、ｈＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーは、ｈＩＬ−１７Ｒ．Ｆｃに約２６ｎＭの、すなわちｈＩＬ−１７ＡとｈＩＬ−１７Ｆの間である、ＫＤ値を有していた。これらのリガンド、ｈＩＬ−１７Ｆ、ｈＩＬ−１７Ａ、およびｈＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａはそれぞれ同じオンおよびオフ速度でｈＩＬ−１７ＲＣ．Ｆｃを結合して、それゆえ約１１〜２０ｎＭの同様のＫＤ値を有していた。
（実施例１．２．３）
ヒトＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの生物活性
ヒトＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの生物活性は、細胞ベースアッセイを使用して評価した。ｈＩＬ−１７Ａ、ｈＩＬ−１７Ｆ、またはｈＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーを用いて培養したＢＪ細胞からの条件培地のＥＬＩＳＡ分析によって、３種すべてのサイトカインがＢＪ細胞でのＧＲＯ−α分泌を誘導することと、ｈＩＬ−１７ＦがｈＩＬ−１７Ａより効力が小さいことが示された。ｈＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーは、ｈＩＬ−１７Ａではなく、ｈＩＬ−１７Ｆと比較して、ＢＪ細胞によるＧＲＯ−α産生のより効力が大きい誘導物質であることが見出された（図２）。ＢＪ細胞以外の細胞系を使用したときに、同様の結果が得られた（データは示さず）。
（実施例１．２．４）
ヒトＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの生物活性に対するヒトＩＬ−１７Ｒ．ＦｃおよびヒトＩＬ−１７ＲＣ．Ｆｃの効果
ｈＩＬ−１７Ａ、ｈＩＬ−１７ＦおよびｈＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの観察された生物活性が２種の提唱された受容体のどちらかまたは両方との相互作用によるものか否かを評価するために、サイトカインの活性を溶解性受容体ｈＩＬ−１７Ｒ．ＦｃおよびｈＩＬ−１７ＲＣ．Ｆｃの存在下および非存在下で測定した。図３Ａに示すように、ｈＩＬ−１７Ａの活性は、ｈＩＬ−１７Ｒ．Ｆｃの存在下ではほぼバックグラウンドまで低下したが、この実験においてＩＬ−１７ＲＣ．Ｆｃ受容体の存在下ではＩＬ−１７Ａ活性には著しい影響は見られなかった。ＩＬ−１７Ｒ．ＦｃおよびＩＬ−１７ＲＣ．Ｆｃの両方による処置は、ＩＬ−１７Ｒ．Ｆｃ単独での処置を超えてＩＬ−１７Ａ活性の抑制を上昇させることはなかった。ｈＩＬ−１７Ｆの活性は、ＩＬ−１７ＲＣ．Ｆｃ受容体の存在下で遮断されたが、ＩＬ−１７Ｒ．Ｆｃ受容体の存在下では遮断されなかった；他方、ＩＬ−１７Ｒ．ＦｃおよびＩＬ−１７ＲＣ．Ｆｃの両方の添加は、ＩＬ−１７ＲＣ．Ｆｃ単独の添加を超えてＩＬ−１７Ｆ活性の抑制を上昇させることはなかった。対照的に、ＩＬ−１７Ｒ．ＦｃおよびＩＬ−１７ＲＣ．Ｆｃの両方は、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーの活性に対して多少の抑制効果を有したが、２種の溶解性受容体の組合せは相加効果を有し、ヘテロダイマーの活性を著しく抑制した。非特異的ヒトＩｇＧは、３種のサイトカインのいずれの活性に対しても効果を有しない。これらのデータは、溶解性ＩＬ−１７ＲはＩＬ−１７Ａの活性を抑制することが可能であり、溶解性ＩＬ−１７ＲＣはＩＬ−１７Ｆの活性を抑制することが可能であるが；ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマー活性に対する著しい効果には、２種の溶解性受容体の組合せが必要であることを示している。
（実施例１．２．５）
ヒトＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの生物活性に対する抗ＩＬ−１７Ｒおよび抗ＩＬ−１７ＲＣ抗体の効果
抗ヒトＩＬ−１７Ｒまたは抗ヒトＩＬ−１７ＲＣ抗体を用いて、そして用いずに事前にインキュベートしたＢＪ細胞を使用して、ｈＩＬ−１７Ｆ、ｈＩＬ−１７ＡおよびｈＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの活性も評価した。図３Ｂに示すように、ＢＪ細胞を抗ヒトＩＬ−１７Ｒ抗体で処置したときには、ｈＩＬ−１７サイトカインの活性は著しく低下した。しかし、抗ヒトＩＬ−１７ＲＣ抗体は、ｈＩＬ−１７ＡおよびｈＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの活性と比較して、ｈＩＬ−１７Ｆの活性により甚大な効果を有した。これらの分子の活性を中和する抗体の能力は、溶解性受容体を使用して観察されたものと正反対である。
（実施例１．２．６）
ヒトＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの生物活性に対するヒトＩＬ−１７ＲおよびヒトＩＬ−１７ＲＣの効果
ｈＩＬ−１７Ｆ、ｈＩＬ−１７ＡまたはｈＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達におけるｈＩＬ−１７ＲおよびｈＩＬ−１７ＲＣの役割をさらに評価した。ＢＪ細胞に異なるｈＩＬ−１７ＲまたはｈＩＬ−１７ＲＣ ｓｉＲＮＡをトランスフェクトして、続いてｈＩＬ−１７ＦまたはｈＩＬ−１７Ａのどちらかを添加して、相対的な応答をＥＬＩＳＡによって決定した（図４）。各受容体について評価したオリゴのうち、ｈＩＬ−１７Ｒ（Ｒ−３およびＲ−４）またはｈＩＬ−１７ＲＣ（ＲＣ−２およびＲＣ−４）に対する２種の最良のｓｉＲＮＡオリゴを、ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）結果（図４Ａおよび４Ｂ）およびＨＥＫ２９３細胞のタンパク質レベルを低下させる能力（図４Ｃ）に基づいて選択した。３つの異なる濃度のヒトＩＬ−１７Ｆ、ｈＩＬ−１７ＡおよびｈＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａを、ｈＩＬ−１７ＲまたはｈＩＬ−１７ＲＣ ｓｉＲＮＡのどちらかがトランスフェクトされたＢＪ細胞に添加した（図５）。ＩＬ−１７ＲおよびＩＬ−１７ＲＣ ｓｉＲＮＡによって、３つの異なる濃度のｈＩＬ−１７Ｆ、ｈＩＬ−１７ＡおよびｈＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａに対するＧＲＯ−α分泌の量が低下した。ＩＬ−１７Ｒ ｓｉＲＮＡは、ＩＬ−１７ＲＣ ｓｉＲＮＡと比較して、サイトカイン活性に対してより大きい効果を有していた。この結果は、３種のｈＩＬ−１７サイトカインすべての活性がｈＩＬ−１７ＲおよびｈＩＬ−１７ＲＣに依存していることを示唆する。
（実施例２）
マウスＴｈ１７細胞によって産生され、気道好中球補充を誘導するマウスＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマータンパク質
（実施例２．１）
材料および方法
（実施例２．１．１）
抗体および試薬
抗マウスＩＬ−１７Ａ抗体（Ｃａｔ．＃５０１０１、５０１０４）をＲ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓより入手した。抗マウスＩＬ−１７Ｆ抗体（ＲＫ０１５−０１、ＲＫ０１６−１７）、抗マウスＩＬ−２２抗体（Ａｂ−０１）、および関連アイソタイプ対照抗体を、先に記載された方法を使用して産生した（Ｌｉａｎｇら（２００６）上掲）。マウスＩＬ−６、ｍＩＬ−１β、ｍＴＮＦ−α、およびｍＩＬ−２３をＲ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓより入手した。ｍＴＧＦ−βおよびオボアルブミン（ＯＶＡ）をＳｉｇｍａ（セントルイス、ミズーリ州）より入手した。ＯＶＡ３２３−３３９をＮｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅ（ガーデナー、マサチューセッツ州）より入手した。抗ＩＦＮ−γ（Ｃａｔ．＃ＸＭＧ１．２）および抗ＩＬ−４（Ｃａｔ．＃ＢＶＤ４−１Ｄ１１）をＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ（フランクリンレイクス、ニュージャージー州）より入手した。
（実施例２．１．２）
ｍＩＬ−１７Ａ、ｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ、およびｍＩＬ−１７Ｆの産生および精製
組換えタンパク質の配列を、先に記載した在来の方法を使用して発現ベクター内へ組込んだ（Ｌｉら（２００４）Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．４：６９３−７０８）。ＣＨＯ細胞内で産生されたＨｉｓタグｍＩＬ−１７ＡまたはＨｉｓタグｍＩＬ−１７ＦをＮｉｃｋｅｌ ＮＴＡ Ｓｕｐｅｒｆｌｏｗカラム（Ｑｉａｇｅｎ）で精製した。タンパク質を２５０ｍＭイミダゾールで溶離させて、ゲル濾過（Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００、Ａｍｅｒｓｈａｍ）によってさらに精製し、いずれの高分子量タンパク質も除去した。精製したサイトカインを次にエンテロキナーゼ（サイトカインのエンテロキナーゼに対する１５００：１の比で）によって室温にて４時間消化した。消化したタンパク質をＮｉｃｋｅｌ ＮＴＡに再度添加して、エンテロキナーゼ−Ｈｉｓタグを除去した。
マウスＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーは、ＦｌａｇタグｍＩＬ−１７ＡまたはＨＰＣ（タンパク質Ｃの重鎖）ＨｉｓタグｍＩＬ−１７Ｆをコードする等量のプラスミドによるＨＥＫ２９３細胞の一過性コトランスフェクションによって産生した（Ｌｉｃｈｔｙら（２００５）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒ．Ｐｕｒｉｆ．４１：９８−１０５）。条件培地を７２時間後に収集して、バッチは抗Ｆｌａｇ Ｍ２アフィニティ樹脂（Ｓｉｇｍａ）に結合させた。結合したタンパク質（ｍＩＬ−１７ＡおよびｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ）を２００μｇ／ｍｌのＦｌａｇペプチド（Ｓｉｇｍａ）によって溶離させた。マウスＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａを次に、抗タンパク質Ｃアフィニティマトリクス（Ｒｏｃｈｅ）へのバッチ結合によってｍＩＬ−１７Ａから精製した。マウスＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａを５ｍＭ ＥＤＴＡによって溶離して、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）で透析し、次にＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル、ウェスタンブロット分析、質量分析法およびサイズ排除クロマトグラフィーによって特徴づけした。得られたｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーは、銀染色によって決定したように、９９％を超える純度であった。組換えタンパク質すべてのエンドトキシンレベルは、３ＥＵ／ｍｇ未満であった。
ウェスタンブロット分析では、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ、またはＩＬ−１７Ｆ ３５ｎｇを添加した。マウスＩＬ−１７Ａは、ヤギ抗マウスＩＬ−１７Ａ（ＡＦ４２１ＮＡ、１：２０００希釈、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）、続いてロバ抗ヤギＨＲＰ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、ウェストグローブ、ペンシルベニア州）によるプロービングによって検出した。ＩＬ−１７Ｆは、ＩＬ−１７Ｆ反応性抗体に対して陽性反応を示したマウスＩＬ−１７Ｆで先に免疫化したラットからの血清（１：２０００希釈）を使用して検出し、続いてヤギ抗ラットＨＲＰ（Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）によって検出した。
（実施例２．１．３）
試験管内Ｔ細胞活性化
ＣＤ４＋ＣＤ６２Ｌ＋未処置ＤＯ１１ Ｔ細胞はＤＯ１１．１０マウスの脾臓から、ＭＡＣ陽性および陰性選択（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ、オーバーン、カリフォルニア州）を、先に記載されたように（Ｌｉａｎｇら（２００６）上掲）使用して精製した。２×１０５ＤＯ１１Ｔ細胞を４ｘ１０６照射脾細胞および１μｇ／ｍｌのＯＶＡ３２３−３３９によって活性化した。サイトカインは以下の濃度：１ｎｇ／ｍｌ ｍＴＧＦ−β、２０ｎｇ／ｍｌ ｍＩＬ−６、１０ｎｇ／ｍｌ ｍＩＬ−１β、１０ｎｇ／ｍｌ ｍＴＮＦ−α、および１０ｎｇ／ｍｌ ｍＩＬ−２３で添加した。再刺激では、細胞を１次活性化の第７日に収集して、一晩静止させ、照射脾細胞、１μｇ／ｍｌ ＯＶＡ３２３−３３９、５ｎｇ／ｍｌ ｍＩＬ−２、場合によっては１０ｎｇ／ｍｌ ｍＩＬ−２３、１０μｇ／ｍｌ抗ＩＦＮ−γ、および１０μｇ／ｍｌ抗ＩＬ−４によって再刺激した。条件培地を１次および２次刺激の第４日に収集した。細胞内サイトカイン染色は、５０ｎｇ／ｍｌ ＰＭＡ（Ｓｉｇｍａ）、１μｇ／ｍｌイノマイシン（Ｓｉｇｍａ）、およびＧＯＬＧＩＰＬＵＧ（登録商標）（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）によって細胞を５時間再刺激することによって実施した。細胞を表面染色して、ＣＹＴＯＦＩＸ／ＣＹＴＯＰＥＲＭ（登録商標）を製造者の指示（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）に従って使用して透過処理した。細胞内サイトカイン染色は、抗ＩＬ−１７Ａ ＰＥ（ＴＣ１１−１８Ｈ１０）および抗ＩＬ−１７Ｆ Ａｌｅｘａ ６４７（ＲＫ０１５−０１）を使用して実施した。１０％ ＦＢＳ、２ｍＭ Ｌ−グルタミン、５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１００Ｕ／ｍｌ Ｐｅｎ−Ｓｔｒｅｐ、および２．５μＭ β−メルカプトエタノールを添加したＲＰＭＩ１６４０中ですべてのリンパ球を培養した。
（実施例２．１．４）
ＥＬＩＳＡ
ｍＩＬ−１７Ａホモダイマーを定量するために、プレートを２μｇ／ｍｌ 抗ＩＬ−１７Ａ（Ｃａｔ．＃５０１０１）で一晩コーティングした。プレートをＰＢＳ中１％ ＢＳＡでブロックした後に、サンプルをプレート内で室温にて２時間インキュベートした。ビオチン化した同じ抗ＩＬ−１７Ａ抗体を次に１μｇ／ｍｌにて使用して、プレート結合ｍＩＬ−１７Ａを特異的に検出した。ＩＬ−１７Ｆホモダイマーを定量するために、抗ＩＬ−１７Ｆ（ＲＫ０１６−１７）を捕捉試薬（２μｇ／ｍｌ）および検出試薬（１μｇ／ｍｌ）の両方として使用する同様の方法に従って、ＥＬＩＳＡを実施した。ｍＩＬ−１７ＡおよびｍＩＬ−１７Ｆ ＥＬＩＳＡの検出限界はそれぞれ、１ｎｇ／ｍｌおよび４ｎｇ／ｍｌであった。ｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７ＡヘテロダイマーＥＬＩＳＡは、抗ＩＬ−１７Ａ（Ｃａｔ．＃５０１０１、２μｇ／ｍｌ）を捕捉試薬として、ビオチン化ヤギ抗ＩＬ−１７Ｆポリクローナル抗体（Ｃａｔ．＃ＢＡＦ２０５７、２００ｎｇ／ｍｌ、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を検出試薬として使用して実施した。ｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７ＡヘテロダイマーＥＬＩＳＡの検出限界は、４０ｐｇ／ｍｌであった。Ｔ細胞条件培地中でこれらの分子の発現を定量するために、本ＥＬＩＳＡは最も感受性であるため、ｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーの量を決定する適切な希釈物を最初に生成した。適切なＥＬＩＳＡを使用するｍＩＬ−１７ＡおよびｍＩＬ−１７Ｆを次に定量した。各ホモダイマーＥＬＩＳＡに対するｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの考えられる寄与を補正するために、各サンプルについてＥＬＩＳＡより得られたＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーの量を利用して、ホモダイマーＥＬＩＳＡでの組換えｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの滴定に基づいて、ｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａが寄与するＯ．Ｄ．の量を逆算した。存在するホモダイマーの量を計算する前に、ホモダイマーＥＬＩＳＡでの各サンプルについて得られた実際のＯ．Ｄ．値からこのＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ Ｏ．Ｄ．の寄与を引いた。ＩＬ−２２ ＥＬＩＳＡは、先に記載されているように実施した（Ｌｉａｎｇら（２００６）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０３：２２７１−７９）。ＣＸＣＬ１およびＣＸＣＬ５は、ＤｕｏＳｅｔ ＥＬＩＳＡを製造者の指示に従って使用して定量した（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）。
（実施例２．１．５）
ＭＬＥ−１２細胞の処置
２．５×１０４ ＭＬＥ−１２細胞（ＡＴＣＣ Ｃａｔ．＃ＣＲＬ−２１１０）をサイトカイン、またはサイトカインおよび抗体の両方の事前にインキュベートした組合せによって、９６ウェルプレート内で２４時間インキュベートした。条件培地を２４時間後に収集した。ＭＬＥ細胞をＨＩＴＥＳ、２％ ＦＢＳ、および２ｍＭ Ｌ−グルタミン中で培養した。
（実施例２．１．６）
動物実験
ＢＡＬＢ／ｃＢｙＪおよびＣＣｇ−Ｔｇ（ＤＯ１１．１０）１０Ｄｌｏ／Ｊ（ＤＯ１１）マウスをＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（バーハーバー、メイン州）より入手した。ＤＯ１１マウスからのＣＤ４＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞を、実施例２．１．３に記載されているように、ＴＧＦ−β、ＩＬ−６、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、およびＩＬ−２３の存在下で５日間にわたって、Ｔｈ１７細胞に分化させた。Ｔｈ１７介在気道炎症を樹立するために、２．５×１０６ Ｔｈ１７細胞を未処置ＢＡＬＢ／ｃレシピエントマウスに静脈内導入した（第０日）。マウスを２４時間安静にして、次にＯＶＡ ７５μｇを３日連続で毎日、鼻内接種した（第１、２、および３日）。対照マウスには、Ｔｈ１７細胞および鼻内ＰＢＳ、または単に鼻内ＯＶＡおよび無細胞のどちらかを投与した。抗体を用いた研究では、第１日の最初のＯＶＡ接種前に、抗体３００μｇを腹腔内注射した。第１、２、および３日にＯＶＡの各鼻内接種の１時間前に、抗体（１００μｇ）も鼻内投与した。最後の接種の２４時間後に、マウスを殺処分して、ＰＢＳを含む０．７ｍｌ洗浄液を３回使用して、気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）を実施した。３回の洗浄液のうちの最初の洗浄液を、遠心分離によって細胞を収集した後に、ケモカイン分析用に保管した。全細胞数を決定するために、３回の洗浄液すべてによる細胞を合せ、ＣｅｌｌＤｙｎ血液分析装置（Ａｂｂｏｔｔ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ、アボットパーク、イリノイ州）を使用してカウントした。Ｈｅｍａ−３ステインによって染色したサイトスピンスライドをカウントすることによって、示差細胞分析を実施した。各スライドで２００細胞がカウントされた。ＢＡＬを受けていないマウスによる肺を組織学的分析のために１０％中性緩衝ホルマリンで固定した。鼻内研究では、ＢＡＬＢ／ｃＢｙＪマウスに７５μｌ中の組換えマウスＩＬ−１７Ａ、ｍＩＬ−１７Ｆ、ｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ、またはｍＩＬ−２２ １．５μｇを、１回、または３日連続で毎日、鼻内接種した。接種２４時間後、ＢＡＬ液を上述のように収集して分析した。すべてのマウスは８〜１２週齢を使用して、Ｗｙｅｔｈ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ＩＡＣＵＣ規則に厳密に従って収容した。
（実施例２．１．７）
データ分析
すべての統計的に有意な値は、対応のないＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定によって決定した。
（実施例２．２）
結果
（実施例２．２．１）
マウスＴｈ１７細胞によって同時発現されるマウスＩＬ−１７ＡおよびマウスＩＬ−１７Ａ
未処置Ｔ細胞からのＴｈ１７分化は、主にＴＧＦ−βおよびＩＬ−６の組合せによって開始されるが、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−１βなどの他の炎症誘発性サイトカインは応答をさらに増強することが可能である（Ｖｅｌｄｈｏｅｎら（２００６）上掲；Ｂｅｔｔｅｌｌｉら（２００６）上掲；Ｍａｎｇａｎら（２００６）上掲）。これらの研究はＩＬ−１７Ａタンパク質発現がこの方法で調節されることを明確に示しているが、ＩＬ−１７Ｆタンパク質発現が同様に調節されるか否かは報告されていない。ＩＬ−１７Ｆ発現の調節について調べるために、ＤＯ１１．１０（ＤＯ１１）マウスから精製した未処置（ＣＤ４＋ＣＤ６２Ｌ＋）Ｔ細胞を照射脾細胞、ＯＶＡ３２３−３３９、および各種のサイトカインによって活性化して、ＩＬ−１７Ｆの細胞内サイトカイン染色を実施した。ＩＬ−１７Ａと同様に、ＴＧＦ−βおよびＩＬ−６の両方の添加によって実質的なＩＬ−１７Ｆ発現が検出された（図６Ａ）。Ｔｈ１７分化の間のｍＩＬ−１７ＡおよびｍＩＬ−１７Ｆの相対発現を、活性化後の複数の時点で分析した。全体として、ｍＩＬ−１７Ｆの発現はｍＩＬ−１７Ａよりも一貫して高く、両方のサイトカインの発現は第３日の後に低下した（図６Ｂ）。ＩＬ−１７Ａ＋ＩＬ−１７Ｆ＋細胞はＴｈ１７細胞の実質的部分に相当し、第２日にｍＩＬ−１７ＡはｍＩＬ−１７Ｆと共に高度に同時発現された（ＩＬ−１７Ａ＋細胞の８８％もｍＩＬ−１７Ｆを発現させた）。第３日（６５％）および第４日（４０％）の同時発現の低下は、ｍＩＬ−１７ＡおよびｍＩＬ−１７Ｆの発現の全体的な低下に関連している可能性がある。これらのデータによって、ＩＬ−１７Ｆタンパク質がＴＧＦ−βおよびＩＬ−６の組合せによって誘導されることが示される。さらに、ＩＬ−１７Ａ＋ＩＬ−１７Ｆ＋細胞は、Ｔｈ１７細胞の実質的な集合に相当する。
（実施例２．２．２）
マウスＩＬ−１７ＡおよびマウスＩＬ−１７Ｆより成るヘテロダイマータンパク質を産生するマウスＴｈ１７細胞
ヒトＩＬ−１７Ｆ、およびおそらくｈＩＬ−１７Ａは、保存システイン・ジスルフィド・ブリッジによって共に保持されたヘテロダイマーとして存在する（Ｈｙｍｏｗｉｔｚら（２００１）上掲；Ｗｒｉｇｈｔら（２００７）上掲）。ｍＩＬ−１７ＦおよびｍＩＬ−１７Ａ内でのこれらのシステインの保存位置は、マウスＴｈ１７細胞によるｍＩＬ−１７ＡおよびｍＩＬ−１７Ｆの同時発現と共に、ｍＩＬ−１７ＡおよびｍＩＬ−１７Ｆがヘテロダイマーも形成する可能性があることを示唆している。この可能性を調べるために、ＨＥＫ２９３細胞内で異なってタグ付けされたｍＩＬ−１７ＡおよびｍＩＬ−１７Ｆを過剰発現することによって、組換えマウスｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーを産生した。推定上のｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの精製は、タンパク質タグを使用する連続精製によって行った。非還元ゲルでのウェスタンブロット分析によって、この精製された２重タグタンパク質がｍＩＬ−１７ＡおよびｍＩＬ−１７Ｆエピトープの両方を同じバンド内に含有することが明らかになった（図７Ａ）。別個のバンドが異なってグリコシル化された種を表す（データは示さず）。これらのデータによって、ｍＩＬ−１７ＡおよびｍＩＬ−１７Ｆ遺伝子が試験管内で過剰発現されるときのｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーの形成が示される。
ｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７ＡヘテロダイマーがマウスＴ細胞によって産生されるか否かを判定するために、ｍＩＬ−１７Ａ、ｍＩＬ−１７Ｆ、およびｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａを定量するためのＥＬＩＳＡが最初に樹立された。ホモダイマーを特異的に定量するために、同じモノクローナル抗体をサンドイッチＥＬＩＳＡにおける捕捉抗体および検出抗体の両方として使用した。この形式により、ホモダイマーまたはより高次のマルチマーによってのみサンドイッチが正しく形成される。ｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーを定量するために、検出試薬としてのｍＩＬ−１７Ｆ特異的抗体と組合された捕捉抗体としてのｍＩＬ−１７Ａ特異的抗体を使用して、サンドイッチＥＬＩＳＡを実施した。これらのＥＬＩＳＡの特異性は、精製組換えｍＩＬ−１７Ａ、ｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ、およびｍＩＬ−１７Ｆタンパク質を使用して検証した（図７Ｂ〜７Ｄ）。
異なる条件下で活性化されたＴｈ１７細胞によって産生された天然ｍＩＬ−１７Ａ、ｍＩＬ−１７Ｆ、およびｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの量を定量した。未処置ＤＯ１１ Ｔ細胞は、ｍＴＧＦ−βおよびｍＩＬ−６によって活性化して、一部の場合では、ｍＴＮＦ−α、ｍＩＬ−１β、ｍＩＬ−２３、または３つのサイトカインすべてをさらに添加した。これらすべての条件下で、ｍＩＬ−１７Ｆは最も豊富に産生され、ｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーは中程度の発現を有し、ｍＩＬ−１７Ａは最も少ない量で発現された（図７Ｅ）。ｍＴＧＦ−βおよびｍＩＬ−６の組合せを用いて活性化された細胞内で、またはこの条件にｍＴＮＦ−αまたはｍＩＬ−２３をさらに添加したときに、マウスＩＬ−１７Ａは検出限界（１ｎｇ／ｍｌ）より低かった（図７Ｅ）。ｍＩＬ−ｌβの添加により、ｍＩＬ−１７Ａ発現は９倍、ｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａは５倍、およびｍＩＬ−１７Ｆは３倍上昇した。ＩＬ−２３は、ｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ産生を１．８倍、ＩＬ−１７Ｆ産生を２倍上昇させた。対照的に、ｍＴＮＦ−αまたはＩＬ−２３の添加によって、ｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７ＡおよびｍＩＬ−１７Ｆの発現は、仮に上昇したとしても、わずかに上昇した（たとえば図７Ｅを参照）。これらのデータによって、各種のＴｈ１７分化条件下で分化した未処置Ｔ細胞が３種の別個のＩＬ−１７タンパク質を産生し、ＩＬ−１７Ｆが最大量で、続いてＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ、次にＩＬ−１７Ａが発現したことを示す。
分化Ｔｈ１７によるこれらのタンパク質の発現を調べるために、最初に未処置ＤＯ１１Ｔ細胞を１次活性化で指示されたサイトカインによって７日間活性化させた（図７Ｆ）。それらを一晩静止させた後に、これらの細胞をｍＩＬ−２およびＯＶＡ３２３−３３９の存在下で、またはｍＩＬ−２、ＯＶＡ３２３−３３９、ｍＩＬ−２３ならびにＩＦＮ−γおよびＩＬ−４に対する抗体によって．再刺激した。未処置細胞の発現プロフィールとは対照的に、ｍＩＬ−１７Ａ、ｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ、およびｍＩＬ−１７Ｆは、ＯＶＡ３２３−３３９によって再刺激された分化Ｔｈ１７細胞によって、匹敵する量で産生された（図７Ｆ）。マウスＩＬ−２３によって、ＩＦＮ−γおよびＩＬ−４に対する抗体と共に３種のタンパク質すべての発現がかなり向上し、ｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａは一貫して、ｍＩＬ−１７ＡまたはｍＩＬ−１７Ｆよりも多い量で産生された。これらのデータによって、ＩＬ−１７Ａ発現は、新たに活性化された未処置細胞と比較して分化Ｔｈ１７細胞内で上昇することが証明される。さらに、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーは、ＩＬ−１７誘導条件によって刺激された未処置Ｔ細胞および分化Ｔｈ１７細胞の両方によって発現した。
（実施例２．２．３）
生物活性タンパク質であるＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマー
ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆは、上皮細胞および線維芽細胞によってケモカインの発現を向上させることが公知であるが、マウスサイトカインを使用する直接比較は報告されていない。ｍＩＬ−１７Ａ、ｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ、およびｍＩＬ−１７Ｆの活性を調べるために、マウス肺上皮細胞系、ＭＬＥ−１２をこれらのサイトカインで処置して、好中球化学誘引物質、ＣＸＣＬ１（ＫＣ）の発現について調べた。マウスＩＬ−１７ＡおよびｍＩＬ−１７ＦはどちらもＣＸＣＬ１の発現を向上させたが、ｍＩＬ−１７Ｆの活性はｍＩＬ−１７Ａの１００〜１０００分の１であった（図８Ａ）。ｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７ＡヘテロダイマーはＣＸＣＬ１も上昇させて、一貫してｍＩＬ−１７Ａよりも効力が小さく、ｍＩＬ−１７Ｆよりも効力が大きい（図８Ａ）。これらのデータによって、ｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａが生物活性タンパク質であることが証明される。
ｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７ＡにおけるｍＩＬ−１７ＡおよびｍＩＬ−１７Ｆの相対的寄与を調べるために、ＩＬ−１７Ｆに対する中和抗体を産生した。ＭＬＥ−１２細胞に対するｍＩＬ−１７Ｆの２００ｎｇ／ｍｌまでの活性を、５０μｇ／ｍｌの抗体によって完全に中和する２種の抗体を同定した（図８Ｂ）。これらの抗ＩＬ−１７Ｆ抗体は、ｍＩＬ−１７Ａを結合または中和せず、ｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーに結合することが可能である（図１２Ａおよび１２Ｂを参照）。ｍＩＬ−１７Ａ特異的抗体（５０１０４）も試験して、ＭＬＥ−１２細胞に対する、ｍＩＬ−１７Ａの効果を中和することができるが（図１２Ｃ）、ｍＩＬ−１７Ｆの効果を中和することができない（データは示さず）ことが判断された。ｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーの中和に対するこれらの抗体の効果について調べた。ＭＬＥ−１２細胞を８０μｇ／ｍｌ（〜１００倍モル過剰）で使用されるモノクローナル抗体と組合せた２００ｎｇ／ｍｌ ｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーによって処置した。ｍＩＬ−１７Ａ特異的抗体は、ｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの効果を、そのアイソタイプ対照（ＩｇＧ２ａ）と比較して〜８５％低下させた（図８Ｃ）。対照的に、抗ＩＬ−１７Ｆ（ＲＫ０１５−０１またはＲＫ０１６−１７）によるｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの中和は、アイソタイプ対照（ＩｇＧ１）と比較して、効果がないか、わずかな効果しかなかった（一部の実験では最大２０％）。ＩＬ−１７Ｆ特異的抗体をＩＬ−１７Ａ特異的抗体と組合せて使用したとき、ｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの活性はほぼ完全に中和された（〜９５％）。これらのデータによって、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａを完全に中和するためにＩＬ−１７Ａ特異的抗体およびＩＬ−１７Ｆ特異的抗体の組合せが必要であるが、このサイトカインの活性の大部分がＩＬ−１７Ａ特異的抗体のみを使用して中和できることが示される。
本明細書で示したデータの解釈は、ｍＩＬ−１７Ｆ特異的抗体がｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａとその（複数の）受容体との間の相互作用をうまく遮断するか否かによって変わる。ｍＩＬ−１７Ｆ特異的抗体がｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａに結合しているが、受容体との相互作用を遮断していない場合、これはｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７ＡとｍＩＬ−１７Ｆとの間で受容体結合部位が１個もないことを示唆している。これはｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７ＡおよびｍＩＬ−１７Ｆの受容体−結合部位の配座の違いによるか、または代わりの受容体と相互作用するｍＩＬ−１７Ｆ／ｍＩＬ−１７Ａでの別個の部位の存在による可能性がある。これらの可能性は、ｍＩＬ−１７Ｆ特異的抗体が結合されるときでさえ、受容体の相互作用を可能にしている。本モデルでは、抗体の組合せを使用するデータは次に、ｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７ＡへのｍＩＬ−１７Ａ特異的抗体の結合が、ｍＩＬ−１７Ｆ特異的抗体によってここで中和が生成できるように、ｍＩＬ−１７Ｆ／ｍＩＬ−１７Ａ受容体結合部位を変化させる可能性があることを示唆する。あるいは、ｍＩＬ−１７Ｆ特異的抗体のみがｍＩＬ−１７Ｆ／ｍＩＬ−１７Ａのその受容体との相互作用をうまく遮断する場合、データは次にこの相互作用が必要でなく、ｍＩＬ−１７Ｆ／ｍＩＬ−１７Ａでの他の受容体部位の結合がシグナル伝達に十分であることを示す。発明者らは、ｍＩＬ−１７Ｆ特異的抗体がｍＩＬ−１７Ａ特異的抗体の組合せでさらに中和できることを観察した。これは、ｍＩＬ−１７Ｆ特異的抗体によって遮断された受容体結合部位がｍＩＬ−１７Ａ特異的抗体によって中和されたシグナルよりも強力でないシグナルを送達することを示唆する。
（実施例２．２．４）
ＩＬ−１７Ａに依存する気道における好中球増加を誘導するＴｈ１７細胞
試験管内データにより、組換えｍＩＬ−１７ＡがｍＩＬ−１７Ｆよりも生物学的に活性であるであり、ｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７ＡがｍＩＬ１７Ａよりも活性が低く、ｍＩＬ−１７Ｆよりも活性が高いことが示される。試験管内でのＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ含有タンパク質の相対的な寄与を調べるために、Ｔｈ１７依存性気道炎症モデルを樹立した。ＤＯ１１マウスからのＣＤ４＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞をｍＴＧＦ−β、ｍＩＬ−６、ｍＩＬ−１β、ｍＴＮＦ−α、およびｍＩＬ−２３によって５日間分化させて、その後、細胞を未処置ＢＡＬＢ／ｃ宿主に養子移入した。気道炎症を誘導するために、続いてマウスに３日間連続して、鼻内ＯＶＡを毎日接種した。対照マウスには、Ｔｈ１７細胞および鼻内ＰＢＳ、または無細胞および鼻内ＯＶＡのどちらかを投与した。ＢＡＬ液中のマウスＩＬ−１７ＡおよびｍＩＬ−１７Ｆは、ホモダイマー特異的ＥＬＩＳＡ中の検出限界（それぞれ１ｎｇ／ｍｌおよび４ｎｇ／ｍｌ）より下であった（データは示さず）。ｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーの発現は検出レベル（４０ｐｇ／ｍｌ）より上で検出され、Ｔｈ１７細胞が移入されてＯＶＡに曝露されたマウスでは、対照マウスと比較して、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーの大幅な６倍の上昇が観察された（図９Ａ）。Ｔｈ１７細胞によって発現されることが最近記載されたサイトカインである、ｍＩＬ−２２の大幅な６倍の上昇は（Ｌｉａｎｇら（２００６）上掲；Ｃｈｕｎｇら（２００６）Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ．１６：９０２−０７；Ｚｈｅｎｇら（２００７）Ｎａｔｕｒｅ ４４５：６４８−５１）も検出された（図９Ａ）。ｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７ＡおよびｍＩＬ−２２の発現によって、気道にＴｈ１７細胞が存在して活性化されることが示される。次にこのモデルの細胞炎症を調べた。Ｔｈ１７細胞およびＯＶＡを投与したマウスは、対照マウスのどちらの群と比較しても、ＢＡＬ液中の好中球数およびリンパ球数が著しく増加した（図９Ｂ）。Ｔｈ１７細胞および鼻内ＯＶＡを投与されたマウスでは、単球および好酸球は増加しなかった（図９Ｂ）。肺組織の組織学的分析によっても、対照群と比較したときに、Ｔｈ１７細胞が移入されてＯＶＡに曝露されたマウスでの気管支周囲炎および血管周囲炎の増大が明らかになった（図９Ｃ）。好中球は、ＢＡＬ液で見られた結果と同様に、炎症の重要な構成要素である。まとめると、これらにデータによって、Ｔｈ１７細胞が好中球の補充を特徴とする気道炎症応答を誘導可能であることが示される。
Ｔｈ１７細胞は気道好中球増加を誘導することが可能であるが、これらの影響に特異的に寄与するサイトカインは不明である。この問題を調べるために、ｍＩＬ−１７Ａ、ｍＩＬ−１７Ｆ、およびｍＩＬ−２２に対する中和抗体を投与した。ｍＩＬ−１７Ａ特異的抗体（Ｃａｔ．＃５０１０４）による処置は、アイソタイプ（ＩｇＧ２ａ）と比較して、好中球の数を対照マウスと同様のレベルまで著しく低下させた（図１０Ａ）。対照的に、ｍＩＬ−１７Ｆ（ＲＫ０１５−０１またはＲＫ０１６−１７）またはｍＩＬ−２２（Ａｂ−０１）に対する中和抗体は、好中球数に影響を及ぼさない（図１０Ａ、図１３）ｍＩＬ−１７Ａ、ｍＩＬ−１７Ｆ、またはｍＩＬ−２２に特異的な抗体で処置したマウスでは、リンパ球数、好酸球数、または単球数に対する著しい効果は見られなかった（データは示さず）。ＣＸＣＬ１の濃度は処置群のいずれにおいても著しく調節されなかったが（図１０Ｂ）、別の強力な好中球化学誘引物質、ＣＸＣＬ５（ＬＩＸ）（Ｗｕｙｔｓら（１９９６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５７：１７３６−４３；Ｃｈａｎｄｒａｓｅｋａｒら（２００１）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ １０３：２２９６−０２）は、ＩＬ−１７Ａ特異的抗体によって、対照マウスと同様の濃度まで著しく低下した（図１０Ｃ）。ｍＩＬ−１７ＦまたはｍＩＬ−２２に特異的な抗体は、ＣＸＣＬ５を変化させなかった（図１０Ｃ）。これらのデータによって、ＩＬ−１７Ａ特異的抗体のみの投与が、Ｔｈ１７細胞に誘導された気道好中球増加を防止するのに十分であったことが示される。
（実施例２．２．５）
生体内でのマウスＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの好中球補充
本明細書で開示したＴｈ１７依存気道炎症モデルでは、ＢＡＬ液中でのｍＩＬ−１７ＡおよびｍＩＬ−１７Ｆの発現が検出限界より低かった。結果として、ｍＩＬ−１７ＡまたはｍＩＬ−１７Ｆが気道で発現されているのを示すことができなかった。しかし、分化Ｔｈ１７細胞によるｍＩＬ−１７Ａ、ｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ、およびｍＩＬ−１７Ｆの匹敵する発現によって、ヘテロダイマータンパク質は存在するが、検出限界より低いことが示唆された。ｍＩＬ−１７ＡおよびｍＩＬ−１７Ｆの効果を直接調べるために、組換えタンパク質１．５μｇを気道内に１回（図１１Ａ）または３日間連続で毎日（図１１Ｂ）投与した。最後の投与の２４時間後のＢＡＬ液中での好中球補充およびケモカイン産生を調べた。ヒトＩＬ−１７は、１回投与時（図１１Ａ）または３回投与時（図１１Ｂ）のどちらでも、好中球、ＣＸＣＬ１、およびＣＸＣＬ５を著しく上昇させた。対照的に、ｍＩＬ−１７Ｆは、好中球数またはＣＸＣＬ１を著しく増加させなかった（図１１Ａおよび１１Ｂ）。ｍＩＬ−１７Ｆを３回投与したときのみ、ＣＸＣＬ５のわずかで重要な増加が見られた（図１１Ｂ）。ｍＩＬ−１７Ｆの用量を１０倍に増加すると（１５μｇ）、１回投与時または３回投与時のどちらでも、１．５μｇで見られたものと比較して、好中球、ＣＸＣＬ１、またはＣＸＣＬ５はさらに増加しなかった（データは示さず）。組換えｍＩＬ−２２によって、１回投与時には好中球またはケモカインの観察可能な上昇は一切生じなかった（図１１Ｃ〜１１Ｅ）。Ｇ−ＣＳＦ、ＣＸＣＬ２、ＭＣＰ−１、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、およびＩＦＮ−γの発現は、これらのサンプルのいずれでも検出されなかった（データは示さず）。
ｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーの活性を気道内のｍＩＬ−１７ＡおよびｍＩＬ−１７Ｆと比較した。ｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ １．５μｇの１回用量によって、好中球、ＣＸＣＬ１、およびＣＸＣＬ５の著しい上昇が誘導された（図１１Ｃ〜１１Ｅ）。好中球の誘導はｍＩＬ−１７ＡとｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａとの間で同様であったが（ｐ＝０．７６）、ＣＸＣＬ１およびＣＸＣＬ５の発現は、ｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａで処置したマウスではｍＩＬ−１７Ａの２分の１〜３分の１であった。これらの発見は、ｍＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーが生体内で生物活性分子であり、好中球の補充を誘導可能であることを示す。

Claims (29)

  1. ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達を拮抗可能である化合物をスクリーニングする方法であって：
    （ａ）ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｒを含有するサンプルを複数の試験化合物の１種と接触させるステップと；
    （ｂ）前記サンプル中のＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの生物活性が、前記試験化合物と接触していないサンプル中のＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの生物活性と比較して低下したか否かを判定するステップと；
    を含み；
    ここで、前記試験化合物と接触した前記サンプル中のＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの生物活性のこのような低下によって、前記化合物をＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬として同定する；
    方法。
  2. 前記ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬が特異的ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬であるか否かを同定する最初または最後のステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
  3. 前記同定するステップが：
    （ａ）ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｒを含有するサンプルをＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬と接触させるステップと；
    （ｂ）前記サンプル中のＩＬ−１７Ａの生物活性が、前記ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬と接触していないサンプル中のＩＬ−１７Ａの生物活性と比較して低下したか否かを判定するステップと；
    （ｃ）ＩＬ−１７ＦおよびＩＬ−１７Ｒを含有するサンプルを前記ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬と接触させるステップと；
    （ｄ）前記サンプル中のＩＬ−１７Ｆの生物活性が、前記ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬と接触していないサンプル中のＩＬ−１７Ｆの生物活性と比較して低下したか否かを判定するステップと；
    を含み；
    ここで、前記ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬がＩＬ−１７ＦおよびＩＬ−１７Ａの両方の生物活性を低下させられなかったことによって、前記ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬を特異的ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬として同定する；
    請求項２に記載の方法。
  4. ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達を拮抗可能である化合物をスクリーニングする方法であって：
    （ａ）ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７ＲＣを含有するサンプルを複数の試験化合物の１種と接触させるステップと；
    （ｂ）前記サンプル中のＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの生物活性が、前記試験化合物と接触していないサンプル中のＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの生物活性と比較して低下したか否かを判定するステップと；
    を含み；
    ここで、前記試験化合物と接触したサンプル中のＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａの生物活性のこのような低下によって、前記化合物をＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬として同定する；
    方法。
  5. 前記ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬が特異的ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬であるか否かを同定する最初または最後のステップをさらに含む、請求項４に記載の方法。
  6. 前記同定するステップが：
    （ａ）ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７ＲＣを含有するサンプルを前記ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬と接触させるステップと；
    （ｂ）前記サンプル中のＩＬ−１７Ａの生物活性が、前記ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬と接触していないサンプル中のＩＬ−１７Ａの生物活性と比較して低下したか否かを判定するステップと；
    （ｃ）ＩＬ−１７ＦおよびＩＬ−１７ＲＣを含有するサンプルを前記ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬と接触させるステップと；
    （ｄ）前記サンプル中のＩＬ−１７Ｆの生物活性が、前記ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬と接触していないサンプル中のＩＬ−１７Ｆの生物活性と比較して低下したか否かを判定するステップと；
    を含み；
    ここで、前記ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬がＩＬ−１７ＦおよびＩＬ−１７Ａの両方の生物活性を低下させられなかったことによって、前記ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬を特異的ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬として同定する；
    請求項５に記載の方法。
  7. 請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法によって同定された化合物。
  8. 対象にＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬を投与するステップを含む、対象のＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ生物活性を抑制する方法。
  9. 前記ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ生物活性がＧＲＯ−α分泌である、請求項８に記載の方法。
  10. 前記ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬が拮抗小型分子、拮抗抗体、ＩＬ−１７Ｒ融合ポリペプチド、およびＩＬ−１７ＲＣ融合ポリペプチドからなる群より選択される、請求項８に記載の方法。
  11. 前記ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬が特異的ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬である、請求項８に記載の方法。
  12. 前記ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬が請求項７に記載の化合物である、請求項８に記載の方法。
  13. 対象にＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬の治療的有効量を投与するステップを含む、ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ関連障害のリスクのある、またはＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ関連障害と診断された対象を治療する方法。
  14. 前記ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬が拮抗小型分子、拮抗抗体、ＩＬ−１７Ｒ融合ポリペプチド、およびＩＬ−１７ＲＣ融合ポリペプチドからなる群より選択される、請求項１３に記載の方法。
  15. 前記ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬が特異的ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬である、請求項１３に記載の方法。
  16. 前記ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬が請求項７に記載の化合物である、請求項１３に記載の方法。
  17. ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬および製薬的に許容される担体を含む製薬組成物。
  18. 前記ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬が拮抗小型分子、拮抗抗体、ＩＬ−１７Ｒ融合ポリペプチド、およびＩＬ−１７ＲＣ融合ポリペプチドからなる群より選択される、請求項１７に記載の組成物。
  19. 前記ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬が特異的ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬である、請求項１７に記載の組成物。
  20. 前記ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達拮抗薬が請求項７に記載の化合物である、請求項１７に記載の組成物。
  21. ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーを特異的に結合することが可能である単離抗体。
  22. 前記抗体がＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達を抑制する、請求項２１に記載の抗体。
  23. ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａヘテロダイマーを特異的に結合することが可能である小型分子。
  24. 前記小型分子がＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａシグナル伝達を抑制する、請求項２３に記載の小型分子。
  25. 前記ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ関連障害が炎症性障害である、請求項１３に記載の方法。
  26. 前記ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａ関連障害が呼吸器障害である、請求項１３に記載の方法。
  27. 前記呼吸器障害が気道炎症、喘息、およびＣＯＰＤからなる群より選択される、請求項２６に記載の方法。
  28. 対象にＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７Ａを投与するステップを含む、対象の気道炎症を誘導する方法。
  29. 前記対象がマウスである、請求項２８に記載の方法。
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