JP2010511710A - 免疫性流産を低減するためのｉｌ−２７アゴニストの使用 - Google Patents

Abstract

サイトカインと、ＩＬ−２７アゴニストを用いて胎児に対する母体の寛容を調節する方法とが提供される。さらに、子宮内膜への胚の着床を調節する方法および診断方法も提供される。一実施形態では、被検体はヒトであり、ＩＬ−２７アゴニストを、ａ）妊娠第１三半期；ｂ）妊娠第２三半期；ｃ）妊娠第３三半期；またはｄ）妊娠第１、妊娠第２および妊娠第３三半期中に投与する。上記ＩＬ−２７アゴニストは、ＩＬ−２７タンパク質であってもよく、このタンパク質はヒトＩＬ−２７であってもよい。

Description

（発明の分野）
本発明は、寛容および子宮内膜への胚の着床を調節する方法を提供する。

（発明の背景）
哺乳動物の免疫反応は、「免疫ネットワーク」と呼ばれる一連の複雑な細胞間相互作用に基づいている。最近の研究から、このネットワークの内部の仕組みに対する新たな洞察が得られてきた。その反応の大部分が実際に、リンパ球、マクロファージ、顆粒球およびこれ以外の細胞のネットワーク様相互作用を中心に展開するのは以前から明らかであるが、一方、現在の免疫学者は一般に、サイトカインとして知られる可溶性タンパク質がこうした細胞間相互作用の制御に極めて重要な役割を果たしているという見解を持っている。したがって、細胞調節因子の単離、特徴付けおよび作用機序に対して大きな関心が集まっており、それを理解すれば、たとえば、免疫系障害など多くの医学的異常の診断および治療の大きな進歩につながるであろう。これらの因子の一部として、たとえば、幹細胞因子（ＳＣＦ：ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｆａｃｔｏｒ）またはＩＬ−１２などの造血成長および／または造血分化因子がある（たとえば、Ｍｉｒｅ−Ｓｌｕｉｓ ａｎｄ Ｔｈｏｒｐｅ（１９９８）Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ；Ｔｈｏｍｓｏｎ（ｅｄ．）（１９９８）Ｔｈｅ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ（３ｄ ｅｄ．）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ；Ｍｅｔｃａｌｆ ａｎｄ Ｎｉｃｏｌａ（１９９５）Ｔｈｅ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｃｏｌｏｎｙ Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ；ａｎｄ Ａｇｇａｒｗａｌ ａｎｄ Ｇｕｔｔｅｒｍａｎ（１９９１）Ｈｕｍａｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，Ｍａｌｄｅｎ，ＭＡを参照）。

サイトカインは、様々な形で細胞活性に関与している。多能性造血幹細胞が、複雑な免疫系を構成する多様な細胞系統からなる数々の前駆細胞へと増殖、成長および分化するのをサイトカインが支持することが明らかになっている。健康な免疫反応には細胞成分間の適切かつバランスのとれた相互作用が必要である。サイトカインが他の因子と併用投与されると、異なる細胞系統が、別の形で反応することが多い。

免疫反応に特に重要な細胞の系統として、免疫グロブリン（異物の除去を行うための異物に対する認識能および結合能を持つタンパク質）を産生および分泌できるＢ細胞、サイトカインを分泌し、かつＢ細胞および免疫ネットワークを構成する他の様々な細胞（他のＴ細胞など）を誘発または抑制する種々のサブセットのＴ細胞、感染性病原体および腫瘍細胞に反応してサイトカインの産生に関与するＮＫ（ｎａｔｕｒａｌ ｋｉｌｌｅｒ）細胞ならびに樹状細胞および他のミエロイド由来の細胞などの抗原提示細胞が挙げられる。

本発明は、ＩＬ−１２に関係するサイトカインであるＩＬ−２７の使用方法を提供する。ＩＬ−１２は、ｐ３５とｐ４０の２つのサブユニットからなるヘテロ二量体サイトカインであり、細胞性免疫に極めて重要な役割を果たしている。その活性は、２つのサブユニットＩＬ−１２Ｒβ１およびＩＬ−１２Ｒβ２を含む高親和性の受容体複合体により惹起される。ＩＬ−１２のｐ３５サブユニットは、ＥＢＩ３と呼ばれる第２の可溶性タンパク質に結合することができ、ｐ３５およびＥＢＩ３が分泌ヘテロ二量体を形成すると考えられた（ただし、このヘテロ二量体の機能は不明である）。また、ＥＢＩ３は、別のタンパク質ｐ２８にも結合し、現在ＩＬ−２７と呼ばれる、ｐ２８およびＥＢＩ３を含む可溶性ヘテロ二量体を形成する。ｐ２８サブユニットは、ＩＬ−８０またはＩＬ−Ｄ８０とも呼ばれる。ヒトおよびマウスのｐ３５サブユニットをコードするｃＤＮＡは、どちらも参照によって援用する特許文献１および特許文献２に記載されている（たとえば、Ｄｅｖｅｒｇｎｅ，ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ ９４：１２０４１−１２０４６；Ｃｈｕａ，ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：４２８６：４２９４；Ｐｒｅｓｋｙ，ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：２１７４−２１７９；Ｇａｔｅｌｙ，ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６：４９５−５２１；Ｐｒｅｓｋｙ，ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ ９３：１４００２−１４００７；Ｔｒｉｎｃｈｉｅｒｉ（１９９８）Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７０：８３−２４３；Ｔｒｉｎｃｈｉｅｒｉ（１９９８）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｓ．１７：２６９−２７８；Ｔｒｉｎｃｈｉｅｒｉ（１９９５）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：２５１−２７６を参照）。

インビトロ研究では、ＩＬ−２７の主要な供給源として活性化単球および単球由来樹状細胞が同定されている。これらの研究ではさらに、ＥＢＩ３遺伝子およびｐ２８遺伝子の発現が必ずしも協調的に起きるとは限らないことが明らかにされた。ｐ２８遺伝子は通常、ＥＢＩ３遺伝子よりも低レベルで発現し、極めて一過性であり、細胞型のスペクトルがより限定的である（たとえば、Ｐｆｌａｎｚ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １６：７７９−７９０を参照）。おそらくこうした低レベルかつ一過性の遺伝子発現が原因で、ｐ２８タンパク質のｉｎ ｓｉｔｕ発現を証明することが難しくなっている。ヒトリンパ球組織を用いたＥＢＩ３およびｐ２８発現の免疫組織化学的研究によれば、ＥＢＩ３発現は、多くの場合、検出可能なｐ２８の発現とは関連しておらず、ＥＢＩ３とｐ２８の共発現が主に検出されたのは、マクロファージ系統の細胞および反応組織の内皮細胞においてであった（たとえば、Ｌａｒｏｕｓｓｅｒｉｅ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｊ Ｐａｔｈｏｌ． ２０２：１６４−１７１；Ｌａｒｏｕｓｓｅｒｉｅ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ １６６：１２１７−１２２８；ａｎｄ Ｌａｒｏｕｓｓｅｒｉｅ（２００６）Ｊ Ｐａｔｈｏｌ ２０９：３６０−３６８を参照）。

ＥＢＩ３は、ＥＢＩ３がｐ２８と会合してＩＬ−２７を形成することが明らかになる前に、ヒトの胎児と母体の界面において非常に高レベルで発現することが示されていた（たとえば、Ｄｅｖｅｒｇｎｅ ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｊ Ｖｉｒｏｌ ７０：１１４３−１１５３；Ｄｅｖｅｒｇｎｅ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９４：１２０４１−１２０４６；ａｎｄ Ｄｅｖｅｒｇｎｅ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ １５９：１７６３−１７７６を参照）。ＥＢＩ３は、妊娠期間を通じて母胎の免疫系に直接接触している胎児由来の２つの細胞型、合胞体栄養細胞層（母体血と相互作用する）および絨毛外栄養膜（母体の子宮内膜（ｕｔｅｒｉｎｅ ｍｕｃｏｓａ）と相互作用する）のみに発現する。浸潤性の絨毛外栄養膜は、一部はサイトカインおよびケモカインの産生を介して母体の寛容および血管リモデリングに中心的な役割を果たしている（たとえば、Ｍｏｆｆｅｔｔ ａｎｄ Ｌｏｋｅ（２００６）Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ６：５８４−５９４を参照）。これらの細胞に、非古典的ＭＨＣクラスＩ分子のＨＬＡ−Ｇが特異的に発現する。ＨＬＡ−Ｇは、異なる表面分子に結合することで、脱落膜ＮＫ細胞、ＣＤ４^＋およびＣＤ８^＋Ｔ細胞など複数の細胞型で免疫調節機能を示し（たとえば、Ｌｅ Ｂｏｕｔｅｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｐｌａｃｅｎｔａ ２４：Ｓｕｐｐｌ Ａ．Ｓ１０−５．を参照）、新脈管形成を制御する（たとえば、Ｆｏｎｓ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｂｌｏｏｄ １０８：２６０８−２６１５．を参照）。興味深いことに、膜結合または可溶性ＨＬＡ−Ｇにより提示されたペプチドを精製すると、ＥＢＩ３の九量体ペプチドがペプチドとして最も多く含まれており、回収したすべてのリガンドの最大１５％を占めることが明らかになった（たとえば、Ｉｓｈｉｔａｎｉ（２００３）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７１：１３７６−１３８４を参照）。

米国特許出願公開第２００２／０１６４６０９号明細書 国際公開第０２／０６８５９６号パンフレット

上述から、サイトカインおよびサイトカイン受容体、たとえば、ＩＬ−２７およびその受容体複合体に関係する新しい機能および方法の発見が、妊娠異常の新たな治療に貢献する可能性があるは明らかである。特に、既知のサイトカインの有益な活性を促進または増強するサイトカインが発見および開発されれば、極めて好都合であろう。本発明は、ＩＬ−２７により寛容および胚の着床を調節する方法を提供する。

（発明の要旨）
本発明は、母体と胎児の界面部位におけるＩＬ−２７の発現および産生の発見に基づく。

本発明は、胎児性抗原に対する母体の寛容を誘導する方法であって、免疫性流産（ｉｍｍｕｎｅ ｍｒｄｉａｔｅｄ ａｂｏｒｔｉｏｎ）のリスクがあるか、それに罹患している被検体に有効量のＩＬ−２７アゴニストを投与することを含む、方法を提供する。一実施形態では、被検体はヒトであり、ＩＬ−２７アゴニストを、ａ）妊娠第１三半期；ｂ）妊娠第２三半期；ｃ）妊娠第３三半期；またはｄ）妊娠第１、妊娠第２および妊娠第３三半期中に投与する。ＩＬ−２７アゴニストは、ＩＬ−２７タンパク質であってもよく、このタンパク質はヒトＩＬ−２７であってもよい。ある実施形態では、ＩＬ−２７アゴニストは、ＩＬ−２７受容体（ＩＬ−２７Ｒ）複合体の少なくとも１つのサブユニットに結合するアゴニスト抗体である。ＩＬ−２７Ｒ複合体は、ヒトＩＬ−２７Ｒ複合体である。アゴニスト抗体は、ＩＬ−２７Ｒ複合体のシグナル伝達を誘導する。

本発明はまた、少なくとも１個の胚の子宮内膜への着床を促進する方法であって、有効量のＩＬ−２７アゴニストを被検体に投与することを含む、方法も提供する。ＩＬ−２７アゴニストについては、ａ）妊娠第１三半期；ｂ）妊娠第２三半期；ｃ）妊娠第３三半期；またはｄ）妊娠第１、妊娠第２および妊娠第３三半期中に投与してもよい。ＩＬ−２７アゴニストは、ＩＬ−２７タンパク質であることを意図している。さらなる実施形態では、ＩＬ−２７タンパク質はヒトＩＬ−２７である。さらに、ＩＬ−２７アゴニストは、ＩＬ−２７Ｒ複合体の少なくとも１つのサブユニットに結合するアゴニスト抗体であることも想定している。ＩＬ−２７複合体はヒトＩＬ−２７複合体であり、アゴニスト抗体は、ＩＬ−２７Ｒ複合体のシグナル伝達を誘導する。

さらに、被検体が免疫性流産であるかどうかを判定する診断方法であって、被検体から採取した生物学的サンプル中のＩＬ−２７またはＩＬ−２７Ｒの存在あるいはレベルを検出することと、被検体が自然流産であるかどうかを判定することとを含む、診断方法も提供する。生物学的サンプルについては、組織サンプル、細胞サンプルまたは血清サンプルからなる群から選択してもよい。さらなる実施形態では、組織サンプルは、絨毛膜絨毛サンプルおよび胎盤サンプルからなる群から選択される。

本発明は、被検体が免疫性流産を起こすリスクがあるかどうかを判定する予後診断方法であって、被検体から採取した生物学的サンプルまたはサンプルの単離物におけるＩＬ−２７またはＩＬ−２７ＲのｍＲＮＡまたはポリペプチドの存在またはレベルを検出し、それにより被検体が自然流産を起こすリスクがあるかどうかを判定することを含む、予後診断方法を包含する。生物学的サンプルは、絨毛膜絨毛サンプルおよび胎盤サンプルなどの組織サンプル、細胞サンプルまたは血清サンプルからなる群から選択される。

さらに、免疫性流産のリスクがあるか、それに罹患している被検体に対するＩＬ−２７アゴニストによる処置をモニターする方法であって、被検体由来の生物学的サンプルまたはサンプルの単離物におけるＴｈ１またはＴｈ２サイトカインのｍＲＮＡまたはポリペプチドのレベルを測定し、それにより被検体が免疫性流産のリスクがあるか、それに罹患しているかどうかを判定することを含む、方法も意図している。Ｔｈ１サイトカインは、ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１２およびＲＡＮＴＥＳからなる群から選択される。Ｔｈ２サイトカインは、ＣＳＦ−１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１０、ＩＬ−４、ＩＬ−１１、ＴＧＦおよびＩＬ−３からなる群から選択される。

図１は、半定量ＲＴ−ＰＣＲにより解析した、様々な妊娠時期に採取した７個の胎盤のＥＢＩ３、ｐ２８、ＩＬ−２７Ｒおよびｇｐ１３０の遺伝子発現を示す。ＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）による刺激の前あるいはそれで一晩刺激した後に磁気精製したヒト単球を陽性対照として用いた。＜＜−＞＞のレーンは、ＰＣＲ反応でｃＤＮＡを加えていない陰性対照である。Ｂ２−ミクログロブリン（Ｂ２ｍ）を、各条件で同じ材料の内部対照として用いた。 図２Ａは、ｐ２８によるＥＢＩ３の免疫共沈降を示す。妊娠１７および２８週目に採取した２個の胎盤のＮＰ４０抽出物を、ウサギポリクローナル抗ＥＢＩ３Ａｂ、ウサギポリクローナル抗ｐ２８Ａｂあるいはウサギ対照Ａｂ（ＩＰ当たり１０μｇ）による免疫沈降（ＩＰ）に供した。ＩＰの前に得た細胞ライセートの画分（レーン２および５）および免疫沈降物（レーン１、３、４、６、７）を１２％ゲルによるＳＤＳ−ＰＡＧＥで解析し、マウスモノクローナル抗ＥＢＩ３Ａｂまたはウサギポリクローナル抗ｐ２８Ａｂを用いたウエスタンブロット解析に供した。ＥＢＩ３およびｐ２８の位置を示してある。左の数字は、標準分子量のタンパク質（１０００の位で示す）の位置を示す。ｐ２８ブロットのｐ２８のバンドの上にあるバンドは、ウサギＩｇ鎖に相当する可能性が非常に高い。妊娠９週目、３３週目、３６週目および４０週目の胎盤のライセートにより、類似の免疫共沈降データを取得した。図２Ｂは、胎盤外植片の培養上清におけるＩＬ−２７の検出を示す。グラフの下の時間で示した様々な培養時間に採取した、満期胎盤１４個の外植片の培養上清をＩＬ−２７のＥＬＩＳＡで検査した。平均値（±ＳＤ）を示す。 図３は、各図の上端に示すように対照ウサギＡｂ（ａ）、ウサギポリクローナル抗ｐ２８Ａｂ（ｂ、ｃ）およびマウスモノクローナル抗ＥＢＩ３Ａｂ（ｄ）を用いた免疫組織化学的検査で解析した第１三半期胎盤の切片を示す。（ｃ）は、（ｂ）において枠で区切った部分の拡大図を示す。合胞体栄養細胞層細胞（ｓｙｎｃｙｔｉｏｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔ ｃｅｌｌ）はＥＢＩ３とｐ２８とに対して強い陽性を示すのに対し、栄養膜細胞層細胞（ｃｙｔｏｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔ ｃｅｌｌ）は陰性のままである点に留意されたい。絨毛癌成分を含む精巣混合型胚細胞腫瘍（ｔｅｓｔｉｃｕｌａｒ ｍｉｘｅｄ ｇｅｒｍ ｃｅｌｌ ｔｕｍｏｒ）例の切片をウサギ対照Ａｂ（ｅ）、ウサギポリクローナル抗ｐ２８Ａｂ（ｆ）またはマウスモノノクローナル抗ＥＢＩ３Ａｂ（ｇ）で染色した。ＥＢＩ３およびｐ２８に対して共に陽性の合胞体栄養細胞層細胞を示す。（ｆ）の挿入図は、合胞体栄養細胞層細胞がｐ２８陽性であるのに対し、形態学的に栄養膜細胞層細胞（矢印）と一致する細胞は陰性であることを示す。対物レンズ：（ａ）および（ｂ）で１０倍；（ｃ〜ｇ）で２０倍。ｃｃは栄養膜細胞層細胞；ｓｙは合胞体栄養細胞層細胞。 図４は、対照ウサギＡｂ（ａ）、ウサギ抗ｐ２８Ａｂ（ｂ）またはマウス抗ＥＢＩ３Ａｂ（ｃ）を用いて免疫組織化学的検査で解析した第１三半期胎盤の連続切片を示す。間質性栄養膜細胞は、ＥＢＩ３とｐ２８とに対して陽性である。対物レンズ：ａ〜ｃで×２０。ｓａは螺旋動脈；ｅｖｔは絨毛外栄養膜細胞（ｅｘｔｒａｖｉｌｌｏｕｓ ｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔ ｃｅｌｌ）。

（好ましい実施形態の詳細な説明）
本明細書に引用する参考文献についてはすべて、参照によって援用すべく１つ１つの刊行物または特許出願を具体的に個々に示す場合と同程度に参照によって本明細書に援用する。

本明細書で使用する場合、添付の特許請求の範囲を含め、単語「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」などの単数形は、文脈上明らかに他の意味に解すべき場合を除き、それに対応する複数の言及を含む。

Ｉ．定義
未変性ＩＬ−２７タンパク質に対して形成された抗体により認識され得る分子、あるいは、未変性ＩＬ−２７タンパク質の刺激活性、阻害活性または結合活性のいずれかを持つ分子は、少なくとも１つの「ＩＬ−２７生物活性」または「ＩＬ−２７アゴニスト活性」を有する。たとえば、その分子は、免疫細胞を強化してＩＦＮγを産生させてもよいし、ＩＬ−２７受容体に結合してもよい。その分子は、好ましくはＷＳＸ−１／ＴＣＣＲに結合し、一層好ましくはＩＦＮγの産生を増強することができる。

「投与」および「処置」とは、ヒト、家畜、動物、実験被検体、細胞、組織、器官または生物学的液体に用いる場合、外因性の医薬剤、治療薬、診断剤または医薬組成物、治療組成物、診断用組成物を動物、ヒト、被検体、細胞、組織、器官または生物学的液体に接触させることをいう。「投与」および「処置」は、たとえば、治療方法、薬物動態学的方法、診断方法、調査方法および実験方法を指してもよい。細胞の処置は、試薬と細胞の接触ばかりでなく、体液が細胞と接触している場合の試薬と体液の接触を包含する。細胞の処置は、ヒトまたは動物において試薬が生物学的液体に接触するが、試薬と細胞の接触が明らかにされていない状態を含む。さらに、処置は、投与された試薬または細胞が代謝、分解または貯蔵条件により改変される状態も包含する。

生物活性、機能、健康または有機体の状態の「増進」という語は、増加、補強、強化または改善のプロセスをいう。

「作動可能に連結された」という語は、この語を用いた各成分が好適な条件下で固有の機能を発揮できる関係にあることを意味する。たとえば、タンパク質コード配列に「作動可能に連結された」制御配列は、制御配列の転写活性に適合した条件下でタンパク質コード配列の発現を達成するようにそこに連結される。

「制御配列」という語は、それが連結されるコード配列の発現およびプロセシングを行うことができる、被検体のポリヌクレオチド配列を意味する。そうした制御配列の性質は、宿主生物によって異なる場合がある。特定の実施形態では、原核生物の制御配列はプロモーター、リボソーム結合部位および転写終結配列を含むことがある。他の特定の実施形態では、真核生物の制御配列は、転写因子の１つまたは複数の認識部位を含むプロモーター、転写エンハンサー配列および転写終結配列を含んでもよい。ある実施形態では、「制御配列」はリーダー配列および／または融合パートナー配列を含み得る。

「ポリヌクレオチド」という語は、少なくとも長さ１０塩基の一本鎖または二本鎖核酸ポリマーを意味する。ある実施形態では、ポリヌクレオチドを含むヌクレオチドは、リボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドまたはどちらかのタイプのヌクレオチドの改変形であり得る。該改変体は、ブロモウリジンおよびイノシン誘導体などの塩基の改変体、２’，３’−ジデオキシリボースなどのリボース改変体ならびにホスホロチオアート、ホスホロジチオアート、ホスホロセレノアート、ホスホロジセレノアート、ホスホロアニロチオアート、ホスホラニラダートおよびホスホロアミダートなどのヌクレオチド間の連結改変体を含む。ポリヌクレオチドという語は、一本鎖形態および二本鎖形態のＤＮＡを含む。

「オリゴヌクレオチド」という語は、２００塩基以下の長さを持つポリヌクレオチドを意味する。好ましい実施形態では、オリゴヌクレオチドは長さ１０〜６０塩基である。より好ましい実施形態では、オリゴヌクレオチドは長さ１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０〜４０塩基である。たとえば、突然変異遺伝子の構築に用いる場合、オリゴヌクレオチドは一本鎖でも二本鎖でも構わない。本発明のオリゴヌクレオチドは、センスオリゴヌクレオチドであっても、アンチセンスオリゴヌクレオチドであってもよい。

「天然に存在するヌクレオチド」という語は、デオキシリボヌクレオチドおよびリボヌクレオチドを含む。「改変ヌクレオチド」という語は、改変または置換された糖基あるいは改変または置換された塩基を持つヌクレオチドを含む。「オリゴヌクレオチド連結」という語は、ホスホロチオアート、ホスホロジチオアート、ホスホロセレノアート、ホスホロジセレノアート、ホスホロアニロチオアート、ホスホラニラダート、ホスホロアミダートなどの連結を含む。たとえば、目的に応じてその開示内容を参照によって本明細書に援用するＬａＰｌａｎｃｈｅ ｅｔ ａｌ．（１９８６），Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１４：９０８１；Ｓｔｅｃ ｅｔ ａｌ．（１９８４），Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０６：６０７７；Ｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８），Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１６：３２０９；Ｚｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９９１），Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ ６：５３９；Ｚｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９９１），Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，ｐｐ．８７−１０８（Ｆ．Ｅｃｋｓｔｅｉｎ，ｅｄ．），Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｅｎｇｌａｎｄ；Ｓｔｅｃ ｅｔ ａｌ．，米国特許第５，１５１，５１０号；Ｕｈｌｍａｎｎ ａｎｄ Ｐｅｙｍａｎ（１９９０），Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ９０：５４３を参照されたい。本発明のオリゴヌクレオチドは、検出アッセイ用の放射標識、蛍光標識、ハプテンまたは抗原標識などの標識を含んでもよい。

「ベクター」という語は、宿主細胞へのコーディング情報の伝達に使用する任意の分子（核酸、プラスミドまたはウイルスなど）を意味する。

「発現ベクター」または「発現コンストラクト」という語は、宿主細胞の形質転換に好適なベクターをいい、それに作動的に連結された１つまたは複数の異種コード領域の発現を（宿主細胞と共同して）誘導および／または制御する核酸配列を含む。発現コンストラクトは、以下に限定されるものではないが、転写と、翻訳と、イントロンが存在する場合、それに作動可能に連結されたコード領域のＲＮＡスプライシングとに作用または制御する配列を含んでもよい。

「宿主細胞」という語は、核酸配列により形質転換されているか、形質転換され得て、それにより選択した目的の遺伝子を発現する細胞を意味する。選択した遺伝子が存在する限り、子孫の形態または遺伝子構成が最初の親細胞と同一かどうかに関係なく、宿主細胞は親細胞の子孫を含む。

「形質導入」という語は、通常、ファージによりある細菌の遺伝子が別の細菌に導入されることを意味する。また、「形質導入」は、真核細胞配列のレトロウイルスによる獲得および伝達のこともいう。

「トランスフェクション」という語は、細胞による外来または外因性ＤＮＡの取り込みを意味し、外因性ＤＮＡが細胞膜内に導入されているとき、細胞は「トランスフェクトされている」。当該技術分野において多くのトランスフェクション技術が周知であり、本明細書に開示する。たとえば、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，１９７３，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ５２：４５６；Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｉｄ；Ｄａｖｉｓ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｂａｓｉｃ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ；ａｎｄ Ｃｈｕ ｅｔ ａｌ．，１９８１，Ｇｅｎｅ １３：１９７を参照されたい。こうした技術を用いて１つまたは複数の外因性ＤＮＡ部分を好適な宿主細胞に導入することができる。

「形質転換」という語は、細胞の遺伝的特徴の変化をいい、細胞は、新しいＤＮＡを含むように改変されているとき、形質転換されている。たとえば、細胞は、トランスフェクション、形質導入または他の技術により未変性状態から遺伝子改変される場合、形質転換される。トランスフェクション後または形質導入後の形質転換ＤＮＡについては、細胞の染色体に物理的に組み込んで細胞のＤＮＡと組換えてもよいし、複製されない一過性のエピソーム要素のままでもよいし、プラスミドとして独立に複製させてもよい。細胞は、細胞分裂により形質転換ＤＮＡが複製されるとき、「安定に形質転換された」と考察される。

ＩＬ−２７のポリペプチドおよび核酸の保存的に改変された改変体、誘導体およびムテインの使用方法を提供する。「保存的に改変された改変体」は、アミノ酸配列および核酸配列の両方に用いられる。特定の核酸配列に関する保存的に改変された改変体とは、同一または本質的に同一のアミノ酸配列をコードする核酸をいい、あるいは、核酸がアミノ酸配列をコードしない場合、本質的に同一の核酸配列をいう。遺伝コードの縮重により、機能的に同一の核酸の多くが任意の特定のタンパク質をコードすることがある。

アミノ酸配列については、コード化配列の１つのアミノ酸またはごく一部のアミノ酸を保存アミノ酸で置換する、核酸配列、ペプチド配列、ポリペプチド配列またはタンパク質配列の個々の置換が、「保存的に改変された改変体」であることを当業者は認識する。機能的に類似したアミノ酸を与える保存的置換の表は、当該技術分野において周知である。たとえば、保存的置換の例は、以下の群の１つのアミノ酸と、同一群における別のアミノ酸との交換である（Ｌｅｅ，らに付与された米国特許第５，７６７，０６３号；Ｋｙｔｅ ａｎｄ Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ（１９８２）Ｊ．Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．１５７：１０５−１３２）：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、ＣｙｓまたはＭｅｔ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖の配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ；
（７）小アミノ酸：Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ。

「ポリペプチド」または「タンパク質」という語は、未変性タンパク質の配列、すなわち、天然に存在し明確な非組換え細胞、あるいは遺伝子操作または組換え細胞から産生されるタンパク質の配列を持つ分子を意味し、未変性タンパク質のアミノ酸配列を持つ分子または未変性の配列中の１つまたは複数のアミノ酸に欠失、付加および／または置換がある分子を含む。具体的には、「ポリペプチド」および「タンパク質」という語は、抗体、あるいは、そうした抗体の１つまたは複数のアミノ酸に欠失、付加および／または置換がある配列を包含する。「ポリペプチドフラグメント」という語は、アミノ末端欠失、カルボキシル末端欠失および／または内部欠失を持つポリペプチドをいう。ある実施形態では、フラグメントは少なくとも５〜約５００アミノ酸長である。ある実施形態では、フラグメントは少なくとも５、６、８、１０、１４、２０、５０、７０、１００、１１０、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００または４５０アミノ酸長であることが理解される。特に有用なポリペプチドフラグメントとして、結合ドメインなどの機能ドメインが挙げられる。抗体の場合の有用なフラグメントとして、ＣＤＲ領域、重鎖または軽鎖の可変ドメイン、抗体鎖または２つのＣＤＲをちょうど含む可変領域の一部などを含むが、これに限定されるものではない。

「天然に存在する」および「未変性の」という語は、この語を用いる生物材料（分子、配列、タンパク質複合体、細胞など）が自然界に見出され、ヒトにより操作されていないことを意味する。たとえば、有機体（ウイルスなど）に存在するポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列が自然界の供給源から単離することができ、かつヒトにより意図的に改変されていない場合、それは天然に存在するものである。同様に、「非天然の」または「外来の（ｎｏｎ−ｎａｔｉｖｅ）」という語は、自然界に見られないか、あるいは、ヒトにより構造改変されたまたは合成された材料をいう。

医薬品業界では、鋳型ペプチドと類似の特性を持つ非ペプチド薬物としてペプチドアナログが一般に用いられる。このタイプの非ペプチド化合物は、「ペプチド模倣体（ｐｅｐｔｉｄｅ ｍｉｍｅｔｉｃ）」または「ペプチド模倣物（ｐｅｐｔｉｄｅｍｉｍｅｔｉｃ）」と呼ばれる。参照によって本明細書に援用するＦａｕｃｈｅｒｅ（１９８６），Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｒｅｓ．１５：２９；Ｖｅｂｅｒ ＆ Ｆｒｅｉｄｉｎｇｅｒ，１９８５，ＴＩＮＳ ｐ．３９２；ａｎｄ Ｅｖａｎｓ ｅｔ ａｌ．（１９８７），Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３０：１２２９を参照されたい。そうした化合物は、コンピューター分子モデリングを用いて開発されることが多い。治療上有用なペプチドと構造的に類似したペプチド模倣体を用いると、類似の治療または予防効果が得られることがある。通常、ペプチド模倣物は、ヒト抗体などのパラダイムペプチドまたはポリペプチド（すなわち、生化学的特性または薬理学的活性を持つペプチドまたはポリペプチド）と構造的に類似しているが、当該技術分野において周知の方法で−−ＣＨ_２−−ＮＨ−−、−−ＣＨ_２−−Ｓ−−、−−ＣＨ_２−−ＣＨ_２−−、−−ＣＨ＝ＣＨ−−（シスおよびトランス）、−−ＣＯＣＨ_２−−、−−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_２−−および−−ＣＨ_２ＳＯ−−から選択される結合により必要に応じて置き換えられる１つまたは複数のペプチド結合を持つ。ある実施形態では、コンセンサス配列の１つまたは複数のアミノ酸を同じタイプのＤ−アミノ酸による系統的置換（Ｌ−リジンをＤ−リジンで置換など）を用いてより安定なペプチドを生成することができる。さらに、当該技術分野において公知の方法（任意の目的に応じて参照によって本明細書に援用するＲｉｚｏ ＆ Ｇｉｅｒａｓｃｈ，１９９２，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６１：３８７）により、たとえば、ペプチドを環化する分子内ジスルフィド架橋を形成できる内部システイン残基を付加して、コンセンサス配列または実質的に同一のコンセンサス配列改変を含む、束縛されたペプチドを生成してもよい。

「半減期延長剤」という語は、治療用タンパク質の分解を防止する、および／または半減期を延長させる、毒性を低下させる、免疫原性を低下させる、あるいは生物活性を増加させる分子をいう。例示的ビヒクルとして、Ｆｃドメイン（好ましい）および線状ポリマー（たとえば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリリシン、デキストランなど）；分枝鎖ポリマー（たとえば、１９８１年９月１５日に発行したＤｅｎｋｅｎｗａｌｔｅｒらに付与された米国特許第４，２８９，８７２号；１９９３年７月２０日に発行したＴａｍに付与された米国特許第５，２２９，４９０号；１９９３年１０月２８日に公開されたＦｒｅｃｈｅｔらによる国際公開第９３／２１２５９号を参照）；脂質；コレステロール群（ステロイドなど）；炭水化物またはオリゴ糖（デキストランなど）；サルベージ受容体に結合する任意の天然または合成タンパク質、ポリペプチドまたはペプチド；ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）などのアルブミン、ロイシンジッパードメインならびに他のそうしたタンパク質およびタンパク質フラグメントが挙げられる。

「未変性Ｆｃ」という語は、単量体または多量体を問わず、全抗体の消化から得られる非抗原結合フラグメントの配列を含む分子または配列をいう。未変性Ｆｃの最初の免疫グロブリン源は、好ましくはヒト由来であり、ＩｇＧ１およびＩｇＧ２が好ましいが、免疫グロブリンのいずれであってもよい。未変性Ｆｃは、共有結合（すなわち、ジスルフィド結合）および非共有結合により二量体または多量体に結合できる、単量体ポリペプチドからなる。未変性Ｆｃ分子の単量体サブユニット間の分子間ジスルフィド結合の数は、クラス（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥなど）またはサブクラス（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＡ１、ＩｇＧＡ２など）に応じて１〜４である。未変性Ｆｃの一例として、ＩｇＧのパパイン消化から得られるジスルフィド結合二量体がある（Ｅｌｌｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９８２），Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１０：４０７１−９を参照）。本明細書で使用する場合、「未変性Ｆｃ」という語は、単量体、二量体および多量体の総称である。

「選択的結合剤」という語は、目的のタンパク質に優先的に結合する分子をいう。選択的結合剤は、タンパク質、ペプチド、核酸、炭水化物、脂質または低分子量化合物を含んでもよい。本発明の主題の選択的結合剤であるタンパク質の例として、可溶性受容体（すなわち、天然に存在する膜結合タンパク質の細胞外ドメインの全部または一部を持つが、膜貫通ドメインまたは細胞内ドメインを持たないタンパク質）；抗体およびそのフラグメント；抗体および可溶性受容体の改変体、誘導体および融合タンパク質；ペプチド模倣物化合物；および有機模倣体化合物が挙げられる。好ましい実施形態では、選択的結合剤は、以下に限定されるものではないが、酵素的切断、ペプチド合成または組換え技術などの既知の技術により得られるポリクローナル抗体、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）、キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、可溶形または結合形で標識できる抗体に対する抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体およびこれらのフラグメント、領域または誘導体などの抗体である。

「抗原」という語は、抗体などの選択的結合剤が結合することができ、しかもその抗原のエピトープに結合できる抗体を産生する動物において使用可能な分子または分子の一部をいう。抗原が持つエピトープは１つでも複数でもよい。

「エピトープ」という語は、任意の決定基、好ましくは免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体に特異的に結合できるポリペプチド決定基を含む。ある実施形態では、エピトープ決定基は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリルまたはスルホニルなどの分子の化学的に活性な表面基を含み、ある実施形態では、特異的な三次元構造特性および／または特異的な電荷特性を持ってもよい。エピトープは、抗体が結合する抗原領域である。ある実施形態では、抗体は、タンパク質および／または高分子の複雑な混合物において標的抗原を優先的に認識するとき、抗原に特異的に結合するとされる。好ましい実施形態では、抗体は、解離定数が約１０ｎＭ以下、一層好ましくは解離定数が約１００ｐＭ以下、最も好ましくは解離定数が約１０ｐＭ以下のとき、抗原に特異的に結合するとされる。「抗体」または「抗体ペプチド（単数または複数）」とは、インタクトな抗体または特異的結合に際してインタクトな抗体と競合するその結合フラグメントをいい、キメラ抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体および二重特異性抗体を含む。ある実施形態では、結合フラグメントを組換えＤＮＡ技術により作製する。さらなる実施形態では、インタクトな抗体の酵素的切断または化学的切断により結合フラグメントを作製する。結合フラグメントには、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、免疫学的に機能的な免疫グロブリンフラグメント、重鎖抗体、軽鎖抗体および一本鎖抗体があるが、これに限定されるものではない。

「重鎖」という語は、全長重鎖および結合特異性を与えるのに十分な可変領域配列を持つそのフラグメントを含む。全長重鎖は、可変領域ドメインのＶ_Ｈならびに３つの定常領域ドメインＣ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２およびＣ_Ｈ３を含む。Ｖ_Ｈドメインは、ポリペプチドのアミノ末端にあり、ＣＨ^３ドメインはカルボキシル末端にある。

「軽鎖」という語は、全長軽鎖、および結合特異性を与えるのに十分な可変領域配列を持つそのフラグメントを含む。全長軽鎖は、可変領域ドメインのＶ_Ｌおよび定常領域ドメインのＣ_Ｌを含む。軽鎖の可変領域ドメインは重鎖と同様にポリペプチドのアミノ末端にある。

「Ｆａｂフラグメント」は、１本の軽鎖と１本の重鎖のＣ_Ｈ１および可変領域を含む。Ｆａｂ分子の重鎖は、別の重鎖分子とジスルフィド結合を形成できない。

「Ｆａｂ’フラグメント」は、１本の軽鎖と、Ｃ_Ｈ１ドメインとＣ_Ｈ２ドメインの間までの一層多くの定常領域を含む１本の重鎖とを含み、２本の重鎖の間に鎖間ジスルフィド結合が形成されてＦ（ａｂ’）_２分子になることができる。

「Ｆ（ａｂ’）_２フラグメント」は、２本の軽鎖と、Ｃ_Ｈ１ドメインとＣ_Ｈ２ドメインの間の定常領域の部分を含む２本の重鎖とを含み、２本の重鎖の間に鎖間ジスルフィド結合が形成されている。

「Ｆｖ領域」は、重鎖および軽鎖両方の可変領域を含むが、定常領域を欠いている。

「一本鎖抗体」は、重鎖および軽鎖可変領域がフレキシブルリンカーにより連結されて単一のポリペプチド鎖を形成し、これが抗原結合領域になっているＦｖ分子である。一本鎖抗体については、任意の目的に応じてその開示内容を参照によって援用する国際特許出願公開第８８／０１６４９号および米国特許第４，９４６，７７８号および同第５，２６０，２０３号に詳細に考察されている。

ある実施形態では、「多重特異性（ｍｕｌｔｉｓｐｅｃｉｆｉｃ）」または「多機能性」抗体以外の「二価抗体」は、抗原特異性が同一の結合部位を含むと理解される。

「二重特異性」または「二機能性」抗体は、２つの異なる重鎖／軽鎖対および２つの異なる結合部位を持つハイブリッド抗体である。二重特異性抗体については、以下に限定されるものではないが、ハイブリドーマの融合またはＦａｂ’フラグメントの連結など種々の方法により作製することができる。たとえば、Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉ ＆ Ｌａｃｈｍａｎｎ（１９９０），Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７９：３１５−３２１；Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．（１９９２），Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１５４７−１５５３を参照されたい。

「有効量」とは、使用目的を達成するのに十分な治療薬物の量である。たとえば、母体の寛容を促進する組成物の有効量は、胎児、胚または受精卵の免疫拒絶を予防するのに十分な量である。同様に、組成物の有効量は、受精卵または胚の子宮内膜への着床または付着を促す。障害、疾患または医学的状態を処置または軽減する有効量は、障害、疾患または医学的状態の症状を緩和または完全に除去するのに十分な量である。所定の治療薬物の有効量は、薬物の性質、投与経路、治療薬物を投与される動物の大きさおよび種ならびに投与目的などの要因によって異なる。個々の例の有効量については、当該技術分野において確立された方法に従い当業者が経験的に判定してもよい。

細胞を物質に「曝露する」とは、直接的または間接的に物質を細胞に与えることをいう。物質に関しては、たとえば、その物質へと変化することが知られているその物質の前駆体を与えることで、間接的に与えてもよい。たとえば、ＩＬ−２７への標的細胞の曝露は、ＩＬ−２７タンパク質を含む組成物を標的細胞に与えることにより、あるいは、ＩＬ−２７をコードする遺伝子（単数または複数）を標的細胞に導入することにより実施してもよい。あるいは、このことを、ＩＬ−２７をコードする遺伝子（単数または複数）を第２の細胞に導入し、標的細胞をその第２の細胞と混合することにより実施しても構わない。

「発現」は、たとえば、ｍＲＮＡのような核酸またはポリペプチドの生合成と、たとえば、核からサイトゾルへの移動、形質膜への挿入、脱顆粒または分泌などによる高分子の区分化における変化とを包含する。細胞による高分子の発現または産生には、細胞に認められる量、たとえば、ある特定の時点での細胞ホモジネート中に認められる量しか含めなくてもよい。通常、この規定は、非分泌性分子の発現に適用される。あるいは、細胞による高分子の発現または産生は、細胞に認められる量に加えて、たとえば、細胞培地または生体のコンパートメントにおいて分泌および蓄積した量を含める。通常、この規定は、分泌または脱顆粒されたタンパク質、たとえば、サイトカインに適用される。「レベル」とは、たとえば、所定容積の血漿、血清、血液、間質液、脳脊髄液または尿における濃度、臓器全体または臓器のフラグメントにおける濃度、たとえば、赤脾髄、白脾髄または膵島のような臓器内のコンパートメントにおける濃度、あるいは、たとえば、マクロファージのような特定の細胞または細胞群における濃度など、生体コンパートメントのようなコンパートメントにおける濃度をいう。

「ハイパーカイン」とは、サイトカインの少なくとも２つのサイトカインポリペプチドサブユニットが相互に共有結合している、操作されたヘテロ二量体、ホモ二量体または多量体のサイトカインである（Ｐｆｌａｎｚ，ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １６：７７９−７９０）。ＩＬ−２７の場合は、ｐ２８とＥＢＩ３が共有結合（ｃｏｖｅｌｅｎｔ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）したハイパーカインである。

「免疫細胞」とは、Ｂ細胞、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、単球、マクロファージ、マスト細胞、好酸球または抗原提示細胞（ＡＰＣ）もしくは樹状細胞などの免疫系の細胞である。免疫細胞は、文脈に応じて、免疫のメディエーターを発現する任意の細胞でも、サイトカインを発現する上皮細胞でもよい。

障害、疾患または医学的状態「の疑いがある」ヒトまたは動物の被検体とは、まだ障害、疾患または医学的状態があると診断されていないものの、障害の１つまたは複数の症状を示すか、障害の遺伝的素因があるか、再発を起こしやすい障害の処置を以前に受けたことがある被検体である。

「核酸」は、一本鎖核酸と、一本鎖核酸鎖およびその相補鎖の複合体からなる二本鎖核酸とを包含する。本発明は、たとえば、ＩＬ−２７ヘテロ二量体サイトカインの各サブユニットをコードする少なくとも１つの核酸を含む少なくとも１つの発現ベクター内に存在する少なくとも１つの核酸の使用方法を包含する。

本発明は、たとえば、上記の核酸が１つのベクターによってコードされる場合；１つの核酸が第１のベクターによってコードされ、残りの核酸が第２のベクターによってコードされる場合；および各核酸がそれぞれ別々のベクターによってコードされる場合の方法ならびにこれらの様々な組み合わせを意図している。さらに、上記のサイトカインを提供する方法であって、１種または複数種のサイトカインをベクターで提供する方法、および、たとえば、ベクターおよびポリペプチドを含む組成物による処置など、１種または複数種のサイトカインをサイトカインポリペプチドにより提供する方法も意図している。意図した方法のベクターは、たとえば、第１の核酸と作動可能に連結された第１のプロモーター；第２の核酸と作動可能に連結された第２のプロモーター；第３の核酸と作動可能に連結された第３のプロモーターなど、ならびに第１および第２の核酸と作動可能に連結された第１のプロモーター、第１、第２および第３の核酸と作動可能に連結された第１のプロモーターなどを含む。

「処置または軽減」とは、障害、疾患または医学的状態の症状の緩和または完全な除去を意味する。

本明細書で使用する場合、「生物学的サンプル」という語は、被検体、好ましくはヒト被験者から単離された、あるいは、被検体、好ましくはヒト被験者内に存在する生物材料のサンプルをいう。「生物材料」は、たとえば、組織、組織サンプル、腫瘍、腫瘍サンプル、細胞、生物学的液体および精製されたおよび／または部分的に精製された生体分子を含んでもよい。本明細書で使用する「単離された」という語は、生物学的サンプルの文脈で用いる場合、生物学的サンプルが被検体から除去されていることを示すものである。）。母体の血清または血液中のＩＬ−２７またはＩＬ−２７Ｒのレベルを測定する。別のさらなる実施形態では、ＩＬ−２７またはＩＬ−２７Ｒのレベルを胎盤、羊水または絨毛膜絨毛サンプル中で測定してもよい。

本明細書で使用する場合、「免疫性流産」という語は、たとえば、流産（ｍｉｓｃａｒｒｉａｇｅ）のような自然妊娠中絶を含む。本明細書に定義する免疫性流産は、受精胚が被検体の子宮壁に正しく着床できないこと、あるいは、胚がいったん着床して被検体の子宮から脱落することまたは被検体による胚が再吸収されることを含む。免疫性流産は、たとえば、胚性もしくは胎児性抗原または胚もしくは胎児に発現する、あるいは、胚もしくは胎児から放出される父系抗原などの抗原に対する被検体の免疫反応に起因する。

本明細書で使用する場合、「着床」という語は、自然受精プロセス後の、あるいは、生殖補助技術を用いた、子宮内膜への受精卵の付着を含む。本明細書で使用する場合、「生殖補助技術」とは、たとえば、排卵誘発、体外受精、胚芽移植など、生殖を技術的に補助する任意の方法をいう。ヒトの自然生殖プロセスにおいて、着床が起こるのは、通常、排卵から５〜７日後である。

本明細書で使用する場合、「胚」という語は、接合体が受精する時期から、その接合体から発生する生体が自由生活をするようになる時点までの多細胞生体の発生における段階を含む。

「寛容」は、たとえば、癌もしくは腫瘍または移植アロ抗原などのアロ抗原、外来抗原分子、外来分子複合体、または外来有機体もしくはウイルス由来の抗原に対して無反応である免疫寛容を包含する。寛容はまた、妊娠中の胎児性抗原に対する免疫無反応または免疫無反応の拡大も包含する。さらに、「寛容」は、自然寛容（ｎａｔｕｒａｌｌｙ ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ）および人為的または薬理学的に誘導した寛容も包含する。さらに、寛容は、分子類似性により認識される自己抗原に対する免疫無反応にも関する（たとえば、Ｌｉｕ（１９９７）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８６：６２５−６２９；Ｗａｌｄｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｂｂｏｌｄ（１９９８）Ａｎｎｕｌ Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６：６１９−６４４；Ｘｉａｏ ａｎｄ Ｌｉｎｋ（１９９７）Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．８５：１１９−１２８；Ｓｔｅｉｎｍａｎ，ｅｔ ａｌ．（２００３）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２１：６８５−７１１；Ｏｌｓｏｎ，ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：２７１９−２７２６；Ｔｏｕｓｓｉｒｏｔ（２００２）Ｃｕｒｒ．Ｄｒｕｇｓ Ｔａｒｇｅｔｓ Ｉｎｆｌａｍｍ．Ａｌｌｅｒｇｙ １：４５−５２；Ｔａｋａｈａｓｈｉ ａｎｄ Ｓａｋａｇｕｃｈｉ（２００３）Ｉｎｔ Ｒｅｖ ＣｙｔｏＬ ２２５：１−３２；Ｂｕｒｔ，ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｈｅｍａｔｏｌ．７６（Ｓｕｐｐｌ ｌ）：２２６−４７；Ｇｅｒｙ ａｎｄ Ｅｇｗｕａｇｕ（２００２）Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２１（２−３）：８９−１００；Ｗｅｉｎｅｒ（２００１）Ｍｉｃｒｏｂｅｓ Ｉｎｆｅｃｔ．３：９４７−５４を参照）。本発明における「母体の寛容」とは、胎児または胚に発現するか、胎児または胚により放出される胎児性抗原または父系抗原に対する寛容をいう。

ＩＩ．一般的事項
本発明は、胎児に対する母体の寛容を調節する方法を提供する。さらに、子宮内膜への胚の着床を調節する方法も提供する。

妊娠９〜４０週の範囲の７個の正常なヒト胎盤を用いてＥＢＩ３遺伝子およびｐ２８遺伝子の発現を調査した。無刺激あるいはＬＰＳで１８時間刺激した精製単球を陽性対照として用いた。ＬＰＳ刺激単球およびすべての胎盤の例では、ＥＢＩ１３およびｐ２８のシグナルが検出され、様々な在胎齢でＩＬ−２７の２つのサブユニットが胎盤に発現することが示された。同様に、ＩＬ−２７受容体の２つの成分ＩＬ−２７Ｒおよびｇｐ１３０の遺伝子発現もすべての胎盤で検出された（図１）。したがって、ＩＬ−２７およびＩＬ−２７Ｒ複合体をコードする遺伝子は、様々な妊娠期で胎盤に発現する。

次に、ヒト胎盤におけるタンパク質レベルのＩＬ−２７ヘテロ二量体を調べた。このため、０．５％ＮＰ４０抽出物を様々な妊娠期で胎盤から調製し、免疫共沈降実験に供した（図２Ａ）。ウサギ抗ｐ２８Ａｂまたは対照ウサギＩｇＧでｐ２８を免疫沈降し、結合したＥＢＩ３の量をＥＢＩ３のウエスタンブロットにより評価した。陽性対照として、ライセートをウサギ抗ＥＢＩ３Ａｂで免疫沈降に供した。予想通り、ＥＢＩ３のイムノブロットにより、免疫沈降前の胎盤ライセート中（図２Ａ、上パネル、レーン２および５）および抗ＥＢＩ３の免疫沈降物中（図２Ａ、上パネル、レーン１）で３３ｋＤａのタンパク質が同定された。より重要なのは、抗ｐ２８の免疫沈降物中でもＥＢＩ３が検出された（図２Ａ、上パネル、レーン４および７）が、対照の免疫沈降物（レーン３および６）中ではほとんど検出できなかったことであり、これによりＥＢＩ３がｐ２８に特異的に結合することが示唆された。ｐ２８については、抗ｐ２８Ａｂで免疫沈降しない限り、胎盤のライセートを用いたウエスタンブロットにより検出できなかった、（図２、下パネル）。また、ｐ２８のバンドは、抗ＥＢＩ３の免疫沈降物を用いたウエスタンブロットでも観察されなかった（図２Ａ、下パネル、レーン１）。その理由は、ＥＢＩ３／ｐ２８ヘテロ二量体に対して遊離ＥＢＩ３が過剰であること（以下を参照）およびｐ２８のブロットが低感度であることにある可能性が非常に高い。

胎盤細胞がＩＬ−２７を産生することを確かめるため、様々な培養時間に回収した満期胎盤外植片の培養上清に存在するＩＬ−２７の量をＥＬＩＳＡにより測定した。図２Ｂに示すように、ＩＬ−２７は約１〜４ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度で検出され、胎盤細胞がＩＬ−２７を産生することが確認された。これらの上清については、ＥＬＩＳＡにより以前にＥＢＩ３を検査し、１０〜３３ｎｇ／ｍｌのＥＢＩ３を含んでいた（たとえば、Ｄｅｖｅｒｇｎｅ，ｅｔ ａｌ．（２００１）Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ １５９：１７６３−１７７６を参照）。したがって、遊離ＥＢＩ３はすべての例でＩＬ−２７ヘテロ二量体よりも過多に（平均で約１０倍過剰）存在した。類似の知見が、本実験で観察された範囲の量でＥＢＩ３およびＩＬ−２７を含む、活性化ヒト単球由来の樹状細胞の培養上清でも観察された（たとえば、Ｎａｇａｉ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７：５２３３−５２４３を参照）。こうしたＥＢＩ３の過剰な産生は、ヒト胎盤におけるＩＬ−２７発現に関する以前の研究と整合している（たとえば、Ｐｆｌａｎｚ，ｅｔ ａｌ．（２００２）を参照 上掲）。

妊婦の血清中に増加したレベルのＥＢＩ３が存在することは既に明らかにされている。ＥＢＩ３の血清レベルは妊娠から２ヶ月後に既に上方制御され、在胎齢と共に徐々に上昇し、妊娠末期には最大４００ｎｇ／ｍｌの濃度に達する（たとえば、Ｄｅｖｅｒｇｎｅ，ｅｔ ａｌ．（２００１）を参照 上掲）。しかしながら、妊婦７名の血清についてＥＬＩＳＡによりＩＬ−２７を検査したところ、期間を問わず、顕著なレベルのＩＬ−２７は検出されなかった。このようにそれらの血清中でＩＬ−２７が検出されないのは、インビボでのＩＬ−２７の半減期が短いことが原因であり得る。実際、サブユニットが共有結合するＩＬ−１２およびＩＬ−２３など他のヘテロ二量体サイトカインと異なり、ＥＢＩ３とｐ２８の結合は、共有結合でない点に留意すべきである。結果として、このヘテロ二量体はインビボで解離しやすく、それにより血清中での検出を低めている可能性がある。

胎盤の自由絨毛は、内層の栄養膜細胞層および外層の合胞体栄養細胞層からなる。本発明者らは以前に、免疫組織化学的検査により自由絨毛におけるＥＢＩ３の発現が合胞体栄養細胞層に限定されることを示した。これらの細胞は妊娠期間を通じてＥＢＩ３陽性であるのに対し、絨毛性栄養膜細胞層、Ｈｏｆｂａｕｅｒ細胞（胎盤のマクロファージ）および胎児内皮細胞はＥＢＩ３陰性であった（Ｄｅｖｅｒｇｎｅ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ １５９：１７６３−１７７６）。合胞体栄養細胞層にＩＬ−２７の第２のサブユニットが発現するかどうかを検討するため、第１、第２および第３三半期の胎盤１９個を対象としてウサギポリクローナルまたはラットモノクローナル抗ｐ２８Ａｂを用いて免疫組織化学的検査によりｐ２８の発現を解析した。これらの胎盤については、免疫組織化学的検査によりＥＢＩ３を以前検査してあったか（たとえば、Ｄｅｖｅｒｇｎｅ ｅｔ ａｌ．（２００１）を参照 上掲）、あるいはそうでない場合、ＥＢＩ３およびｐ２８を平行して検査した。図３ａ〜図３ｃに示すように、合胞体栄養細胞層では著しいｐ２８染色性が見られた一方、栄養膜細胞層ではｐ２８シグナルが観察されなかったか、非常に低かった。合胞体栄養細胞層のｐ２８染色性は、通常、第１三半期の胎盤で最も強かったが、第２および第３三半期の胎盤でも観察された。

妊娠以外に、ある種の胚細胞腫瘍において栄養膜性細胞（ｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ ｃｅｌｌ）が観察されることがある。したがって、栄養膜細胞（ｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔ ｃｅｌｌ）がＩＬ−２７の２つのサブユニットを共発現する能力をさらに解析するため、絨毛癌など７例の精巣胚細胞腫瘍について、免疫組織化学的検査によりＥＢＩ３およびｐ２８の発現を解析した。これらの腫瘍では、胎盤の栄養膜細胞と同様に、合胞体栄養細胞層細胞にはＥＢＩ３およびｐ２８が共発現するが、栄養膜細胞層細胞には共発現しなかった（図３ｅ〜図３ｇ）。

胎盤の付着絨毛の栄養膜細胞層は子宮に浸潤し、絨毛外栄養膜（ｅｘｔｒａｖｉｌｌｏｕｓ ｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔ）に分化する。これらの浸潤性の絨毛外栄養膜は、間質性栄養膜（ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ ｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔ）、多核巨細胞および血管内栄養膜（ｅｎｄｏｖａｓｃｕｌａｒ ｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔ）と呼ばれる、母体の子宮螺旋動脈に浸潤し、これを形質転換させる栄養膜の不均一な集団からなる。ＥＢＩ３は、間質性栄養膜、多核巨細胞および螺旋動脈壁に浸潤する栄養膜に発現するが、これらの細胞が血管内栄養膜に分化したならば、下方制御されることは既に明らかにされた。ＥＢＩ３陽性絨毛外栄養膜は、妊娠期間を通じて観察され、脱落膜におけるＥＢＩ３の主な供給源をなしていた。その理由は、脱落膜細胞および浸潤性リンパ球など、この部位に存在する他の細胞型はＥＢＩ３陰性であるためであった（たとえば、Ｄｅｖｅｒｇｎｅ ｅｔ ａｌ．（２００１）を参照 上掲）。上述の１９個の胎盤におけるｐ２８発現の免疫組織化学的研究から、期間に関係なく絨毛外栄養膜（間質性栄養膜および多核巨細胞）にｐ２８が発現することが示された（図４）。したがって、絨毛外栄養膜には合胞体栄養細胞層のようにＩＬ−２７の２つのサブユニットが共発現し得る。

この研究は、胎児と母体の界面でのＥＢＩ３の発現に関するこれまでの観察結果を発展させるものである。本研究から、この部位の合胞体栄養細胞層および絨毛外栄養膜にＥＢＩ３ばかりでなくＩＬ−２７も発現することが明らかになる。従来のｉｎ ｓｉｔｕ解析では、樹状細胞またはリンパ腫の腫瘍性細胞など、ＥＢＩ３を強力に発現する細胞においてｐ２８の発現が検出されなかった。そのため、栄養膜細胞（ｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔ ｃｅｌｌ）を用いたＩＬ−２７の２つのサブユニットのｉｎ ｓｉｔｕ検出に関しては、あまり期待されていなかった（Ｌａｒｏｕｓｓｅｒｉｅ，ｅｔ ａｌ．（２００４）上掲；Ｌａｒｏｕｓｓｅｒｉｅ ｅｔ ａｌ．（２００５）上掲；ａｎｄ Ｌａｒｏｕｓｓｅｒｉｅ ｅｔ ａｌ．（２００６）上掲．）。また、胎児と母体の界面でのＩＬ−２７の発現も、この新しいサイトカインの最初に記載された機能に照らして、予測されていなかった。実際に最初の研究では、ナイーブＣＤ４^＋Ｔ細胞への反応性（ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ）をＩＬ−１２に与える能力、およびナイーブＣＤ４^＋Ｔ細胞および単球においてそれぞれＩＦＮ−γおよびプロ炎症性サイトカインの発現を増加させる能力などを理由に、ＩＬ−２７をｐｒｏ−Ｔｈ１およびプロ炎症性サイトカインとして同定した（たとえば、Ｐｆｌａｎｚ ｅｔ ａｌ．（２００２）上掲；ａｎｄ Ｐｆｌａｎｚ ｅｔ ａｌ．（２００４）を参照 上掲）。

これらの知見は、妊娠が成立するのはＴｈ２優位の状況である一方、Ｔｈ１サイトカインは妊娠に有害（ｄｅｌｅｔｏｒｉｏｕｓ）であるとした、過去１０年を通じて普及していた考え方と対照的である（Ｗｅｇｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｔｏｄａｙ １４：３５３−３５６）。しかしながら、この仮説は後に、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１２およびＩＬ−１８などの古典的なＴｈ１サイトカインが正常な子宮に発現することが明らかになり、適量で発現する場合、妊娠において正の制御に関与していることが示唆されたため、疑問視された（Ｃｈａｏｕａｔ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｌｅｔｔ ９２：２０７−２１４）。ＬＩＦおよびＩＬ−１１などのプロ炎症性サイトカインは、着床プロセスにおいて、特に栄養膜および脱落膜細胞に接着分子を誘導することで、決定的に重要な役割を果たしていることが明らかになった（Ｃｈａｏｕａｔ，ｅｔ ａｌ．（２００４）上掲）。これらの知見により、Ｔｈ１／Ｔｈ２パラダイムおよび妊娠におけるＴｈ１およびプロ炎症性サイトカインの積極的な役割に関する見解が再考された。さらに、最近の研究からは、ＩＬ−２７の生物活性がそのｐｒｏ−Ｔｈ１活性をはるかに超えて拡張したことが示され、マウスの研究に基づき、過剰なＴ細胞活性および炎症反応の抑制におけるＩＬ−２７の役割が提案された（Ｔｒｉｎｃｈｉｅｒｉ，ｅｔ ａｌ．（２００３）上掲）。近年、主要なプロ炎症性Ｔｈ細胞サブセットであるＴｈ１７細胞の発生をＩＬ−２７が阻害することが証明され、ＩＬ−２７の抗炎症の役割が一部解明された（Ｂａｔｔｅｎ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ７：９２９−９３６；ａｎｄ Ｓｔｕｍｈｏｆｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ７：９３７−９４５）。

以上をまとめると、これらの観察結果から、ＩＬ−２７が、本前後関係およびサイトカイン環境に応じて、Ｔｈ反応および炎症反応の制御において明らかに正反対の役割を果たすモデルが導かれた。多くのマウスモデルでは、ＩＬ−２７の免疫抑制機能がそのｐｒｏ−Ｔｈ１活性に比べて優位であることが示唆された（たとえば、Ｂａｔｔｅｎ ｅｔ ａｌ．（２００６）上掲；Ｓｔｕｍｈｏｆｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００６）上掲；Ｖｉｌｌａｒｉｎｏ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １９：６４５−６５５；Ｈａｍａｎｏ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １９：６５７−６６７；ａｎｄ Ｗｉｒｔｚ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ ２０３：１８７５−１８８１を参照）。

ＲＴ−ＰＣＲ解析により、ＩＬ−２７受容体鎖をコードする遺伝子が様々な在胎齢で胎盤に発現することが明らかになった。免疫組織化学的検査に好適なＩＬ−２７Ｒ抗体がないため、ＩＬ−２７受容体をｉｎ ｓｉｔｕ発現している細胞の正確な性質は、確認できなかった。しかしながら、従来の研究から、この受容体が多くの細胞型に発現し、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞およびＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋制御性Ｔ細胞など（Ｖｉｌｌａｒｉｎｏ（２００５）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７４：７６８４−７６９１）の多くは、胎児と母体の界面に存在することが明らかになっている（Ｂｏｙｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９９：１３７４１−１３７４６；Ｓｈａｏ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７４：７５３９−７５４７；Ｓａｓａｋｉ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｍｏｌ Ｈｕｍ Ｒｅｐｒｏｄ １０：３４７−３５３；Ｓｏｍｅｒｓｅｔ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １１２：３８−４３；Ｔｉｌｂｕｒｇｓ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｐｌａｃｅｎｔａ ２７ Ｓｕｐｐｌ Ａ：Ｓ４７−５３；ａｎｄ Ｚｅｎｃｌｕｓｓｅｎ（２００６）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｓｅｍｉｎ Ｉｍｍｕｎ ２８：３１−３９）。これらの中で、脱落膜ＮＫ細胞は、白血球集団の５０％超を占める場合、妊娠の第１および第２三半期に脱落膜に特に浸潤する、最も多く含まれるリンパ球集団である。脱落膜ＮＫ細胞および浸潤性の栄養膜は、１つにサイトカイン産生を通して直接相互合作用し、その機能を相互に制御する（Ｍｏｆｆｅｔｔ−Ｋｉｎｇ（２００２）Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２：６５６−６６３；Ｐａｒｈａｍ（２００４）Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ ２００：９５１−９５５；Ｔａｂｉａｓｃｏ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｐｌａｃｅｎｔａ ２７ Ｓｕｐｐｌ Ａ：Ｓ３４−９；ａｎｄ Ｌｅ Ｂｏｕｔｅｉｌｌｅｒ ａｎｄ Ｔａｂｉａｓｃｏ（２００６）Ｎａｔ Ｍｅｄ １２：９９１−９９２）。これらの２つの細胞型の間で制御される相互作用は、血管を拡張し発育中の胎児胎盤ユニットに十分な血液供給を行うのに必要な重要な事象である、母体の子宮動脈の血管の形質転換に決定的に重要な役割を担うことが特に明らかになっている。子宮ＫＮ細胞は、ＶＥＧＦなどの血管新生促進因子の産生により血管新生促進活性を示す（Ｈａｎｎａ，ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｎａｔ Ｍｅｄ １２：１０６５−１０７４）。興味深いことに、この細胞はさらに、高用量では流産の作用があるにもかかわらず、正常なマウスの妊娠の過程で脱落膜および子宮血管の修飾が適切に進展するのに必要なＩＦＮ−γも産生する（Ａｓｈｋａｒ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １９２：２５９−２６９）。ＩＬ−２７は、末梢ＮＫ細胞によるＩＦＮ−γ産生に関与し（Ｐｆｌａｎｚ，ｅｔ ａｌ．（２００２）上掲）、脱落膜ＫＮ細胞によるＩＦＮ−γ、さらには他の可溶性因子の産生を制御し得ることが明らかにされている。同様に、ＩＬ−２７は、以前のマウス研究から示唆されるように、脱落膜ＮＫＴ細胞によるサイトカインの産生を調節し得る（Ｙａｍａｎａｋａ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７２：３５９０−３５９６）。

ＩＦＮ−γ以外にＩＬ−１２およびＩＬ−１８も、妊娠中の新脈管形成に関与していることが示唆されている。したがって、体外受精後に着床不全が繰り返される女性では、血管の変質に伴い子宮内膜で調節不全のＩＬ−１２およびＩＬ−１８発現プロファイル（欠損または過剰）が観察された（Ｌｅｄｅｅ−Ｂａｔａｉｌｌｅ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｆｅｒｔｉｌ Ｓｔｅｒｉｌ ８１：５９−６５）。ＩＬ−２７は最近、内皮細胞に直接作用し、抗新脈管形成性（ａｎｔｉａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ）ケモカインＩＰ−１０およびＭＩＧの産生を誘導することで新脈管形成を阻害することが明らかになっている（Ｓｈｉｍｉｚｕ，ｅｔ ａｌ．（２００６）上掲）。それ故、絨毛外栄養膜によるＩＬ−２７の産生により、過剰な新脈管形成促進活性を防ぐネガティブフィードバック機構が働く可能性がある。実際に絨毛外栄養膜は、Ｆａｓ／ＦａｓＬ相互作用を介して（Ａｓｈｔｏｎ，ｅｔ ａｌ．（２００５）Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ Ｔｈｒｏｍｂ Ｖａｓｃ Ｂｉｏｌ ２５：１０２−１０８）、または可溶性ＨＬＡ−Ｇ１の分泌を介して（Ｆｏｎｓ，ｅｔ ａｌ．（２００６）上掲）内皮細胞のアポトーシスの誘導により抗新脈管形成性活性を示すことが既に知られている。

ＩＬ−２７は、新脈管形成における役割ばかりでなく、正常または病的状態においてＴ細胞応答の抑制または炎症反応の制御に局所的に関与し得る。ヒトおよびマウスでは、脱落膜においてＩＬ−１７の産生が認められているが（Ｏｓｔｏｊｉｃ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ａｍ Ｊ Ｒｅｐｒｏｄ Ｉｍｍｕｎｏｌ ４９：１０１−１１２）、ヒト脱落膜にＴｈ１７細胞が存在するかどうかについては、今後の検討が待たれる。

最後に、ＩＬ−２７の産生は胎盤で検出されたが、その産生量はＥＢＩ３に比べて非常に少ない点に留意すべきである。まだ明らかにされていないが、ＥＢＩ３は、ｐ２８との結合とは別に、おそらくＩＬ−２７アンタゴニストとしての役割を果たし得ることが示唆されている。その場合、そうした過剰な遊離ＥＢＩ３がＩＬ−２７の機能を制御し得る。

ＩＩＩ．ＩＬ−２７アゴニスト
ＩＬ−２７の活性のアゴニズムを実現できるのは、たとえば、ＩＬ−２７ポリペプチドまたはそのミュータント、リガンドＩＬ−２７に対して形成されたアゴニスト抗体またはそのフラグメント、リガンドのサブユニットに対するアゴニスト抗体（たとえば、抗ｐ２８抗体または抗ＥＢＩ３抗体）、受容体複合体とリガンドの相互作用を高めることができる、ｐ２８およびＥＢＩ３の両方に結合する抗体のようなＩＬ−２７アゴニストによってである。この抗体はまた、ＩＬ−２７受容体複合体（ＷＳＸ−１／ＴＣＣＲ、ｇｐ１３０）に対するアゴニスト抗体であってもよい。このアゴニスト抗体は、受容体に対するリガンドの結合を模倣して、受容体複合体のシグナル伝達を誘導する。

あるいは、特定されたリガンド受容体対形成により媒介された相互作用またはシグナル伝達を模倣したり、増強したりできる化合物について小分子ライブラリーをスクリーニングしてもよい。

本発明は、特定のサイトカインリガンド、好ましくは、たとえば、霊長類、ヒト、ネコ、イヌ、ラットまたはマウスのような哺乳動物のサイトカインリガンドに特異的に結合する、抗体または結合組成物の使用を提供する。抗体については、天然に存在する（全長）形または組換え形を問わず、個別の改変体、多型改変体、対立遺伝子改変体、系統改変体または種改変体およびこれらのフラグメントなど、種々のサイトカインタンパク質に対して形成してもよい。さらに、抗体に関しては、未変性（または活性）形または、不活性形（たとえば変性形）を問わず、受容体タンパク質に対して形成しても構わない。抗イディオタイプ抗体を用いてもよい。

リガンドまたは受容体タンパク質と特異的に反応する抗体の作製には、多くの免疫原を選択することができる。組換えタンパク質は、モノクローナルまたはポリクローナル抗体の作製に好ましい免疫原である。また、たとえば、霊長類、齧歯類などの適切な供給源からの天然に存在するタンパク質を純粋な形あるいは不純な形で用いてもよい。さらに、適切なタンパク質配列を用いて作製した合成ペプチドを抗体作製の免疫原として用いてもよい。組換えタンパク質については、たとえば、Ｃｏｌｉｇａｎ，ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．）（１９９５ ａｎｄ ｐｅｒｉｏｄｉｃ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；ａｎｄ Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ（ｅｄｓ．）（１９８７ ａｎｄ ｐｅｒｉｏｄｉｃ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ／Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹに記載のように、真核細胞または原核細胞に発現させ精製してもよい。抗体の作製には、必要に応じて、自然に折りたたまれた材料を用いても変性材料を用いてもよい。たとえば、モノクローナルあるいはポリクローナル抗体を作製して、タンパク質を測定するイムノアッセイでその後使用してもよいし、免疫精製法を行ってもよい。

ポリクローナル抗体の作製方法は、当業者によく知られている。代表的には、免疫原、好ましくは精製されたタンパク質をアジュバントと混合し、この混合物で動物を免疫する。免疫原調製物に対する動物の免疫反応については、試験採血を行い目的のタンパク質に対する反応力価を測定することでモニターする。たとえば、通常、免疫を繰り返した後に、免疫原に対して適度に高い抗体力価が得られたときは、動物から血液を採取し、抗血清を調製する。さらに必要に応じて、タンパク質に反応する抗体を富化するため抗血清の分画を行ってもよい。たとえば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ；またはＣｏｌｉｇａｎを参照されたい。また、たとえば、ＤＮＡベクターによる免疫化など他の方法により免疫を行っても構わない。たとえば、Ｗａｎｇ，ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ２２８：２７８−２８４を参照されたい。

モノクローナル抗体については、当該技術分野の研究者によく知られた様々な技術により得ることができる。代表的には、所望の抗原で免疫した動物の脾臓細胞を、通常、骨髄腫細胞と融合して不死化する。Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ（１９７６）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：５１１−５１９を参照されたい。不死化の別の方法として、エプスタインバーウイルス、オンコジーンまたはレトロウイルスによる形質転換または当該技術分野において公知の他の方法が挙げられる。たとえば、Ｄｏｙｌｅ，ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．）（１９９４ ａｎｄ ｐｅｒｉｏｄｉｃ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ）Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹを参照されたい。抗原に対する所望の特異性および親和性を持つ抗体の産生について、単一の不死化細胞から生じるコロニーをスクリーニングして、そうした細胞から産生されるモノクローナル抗体の収量を、脊椎動物宿主の腹膜腔に注射するなど様々な技術により高めてもよい。あるいは、たとえば、Ｈｕｓｅ，ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１２７５−１２８１に概説された一般的なプロトコルに従って、ヒトＢ細胞のＤＮＡライブラリーをスクリーニングしてモノクローナル抗体またはその結合フラグメントをコードするＤＮＡ配列を単離しても構わない。

リガンドまたは受容体タンパク質の所定のフラグメントに対する抗体または結合組成物（結合フラグメントおよび一本鎖バージョンなど）については、フラグメントとキャリアタンパク質のコンジュゲートで動物を免疫することにより形成できる。所望の抗体を分泌している細胞から、モノクローナル抗体を調製する。これらの抗体について、正常タンパク質または不完全なタンパク質に対する結合をスクリーニングすればよい。抗体または結合組成物は、通常はＫ_Ｄが少なくとも約１０^−３Ｍ、より通常には少なくとも１０^−６Ｍ、典型的には少なくとも１０^−７Ｍ、より典型的には少なくとも１０^−８Ｍ、好ましくは少なくとも約１０^−９Ｍ、一層好ましくは少なくとも１０^−１０Ｍ、最も好ましくは少なくとも１０^−１１Ｍで結合する（たとえば、Ｐｒｅｓｔａ，ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．８５：３７９−３８９；Ｙａｎｇ，ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｏｎｃｏｌ．Ｈｅｍａｔｏｌ．３８：１７−２３；Ｃａｒｎａｈａｎ，ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（Ｓｕｐｐｌ．）９：３９８２ｓ−３９９０ｓを参照）。

場合によっては、マウス、齧歯類、霊長類、ヒトなどの様々な哺乳動物宿主からモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を調製することが望ましい。そうしたモノクローナル抗体の調製技術に関する記載は、たとえば、Ｓｔｉｔｅｓ，ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．）Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（４ｔｈ ｅｄ．）Ｌａｎｇｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｌｏｓ Ａｌｔｏｓ，ＣＡおよびその中に引用された参考文献；Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ；Ｇｏｄｉｎｇ（１９８６）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ（２ｄ ｅｄ．）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；および特に、モノクローナル抗体の作製の一方法を考察するＫｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５−４９７で確認することができる。簡単にまとめると、この方法では、動物に免疫原の注射を行うことを含む。次いでこの動物を屠殺し、その脾臓から細胞を採取し、次いでこの細胞を骨髄腫細胞と融合する。得られたものは、ハイブリッド細胞、すなわち、インビトロで再産生が可能な「ハイブリドーマ」である。その後ハイブリド−マの集団をスクリーニングし、それぞれが免疫原に対して単一の抗体種を分泌する個々のクローンを単離する。こうして、得られた各抗体種は、免疫原性物質上に認められる特異的な部位に反応して生成された免疫動物由来の不死化およびクローン化された単一Ｂ細胞の産物である。

本発明のポリペプチドおよび抗体については、キメラまたはヒト化抗体を含め改変して用いても、改変せずに用いてもよい。ポリペプチドおよび抗体に関しては、多くの場合、検出可能なシグナルを発する物質に共有結合または非共有結合で連結して標識する。種々の標識およびコンジュゲーション技術が知られており、科学文献にも特許文献にも広く報告されている。好適な標識として、放射性核種、酵素、基質、補助因子、阻害剤、蛍光部分、化学発光部分、磁気粒子などが挙げられる。そうした標識の使用を教示する特許として、米国特許第３，８１７，８３７号；同第３，８５０，７５２号；同第３，９３９，３５０号；同第３，９９６，３４５号；同第４，２７７，４３７号；同第４，２７５，１４９号；および同第４，３６６，２４１号がある。また、組換え免疫グロブリンを作製してもよく、Ｃａｂｉｌｌｙ，米国特許第４，８１６，５６７号または下記；およびＱｕｅｅｎ，ｅｔ ａｌ（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ ８６：１００２９−１００３３を参照されたい。あるいは、組換え免疫グロブリンを、トランスジェニックマウスを用いて作製してもよく、Ｍｅｎｄｅｚ，ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １５：１４６−１５６と、さらにＡｂｇｅｎｉｘおよびＭｅｄａｒｅｘの技術も参照されたい。

モノクローナル抗体は通常、ヒト供給源からではなく非ヒト供給源から得られる（Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，ｐｐ．１３９−２４３）。非ヒト供給源を用いると、モノクローナル抗体の治療効率が制限される場合がある。マウスまたは他の非ヒト供給源から得られた抗体は、免疫反応を誘発する、エフェクター機能があまり増強されない、血流からの急速なクリアランスという好ましくない特性を持つことがある（Ｂａｃａ，ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４）。これらの理由から、治療抗体を、ヒト化により調製することが望ましい場合がある。

「ヒト化抗体」とは、たとえば、齧歯類のような非ヒト起源の抗原結合領域と、たとえば、ヒトフレームワーク領域、ヒト定常領域またはその一部のようなヒト起源の免疫グロブリンの少なくとも一部とを含む抗体を意味する（たとえば、米国特許第６，３５２，８３２号を参照）。

ヒト化抗体は、親マウス抗体の６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）に由来するアミノ酸配列を含み、これがヒト抗体のフレームワークに移植される。ヒト化抗体における非ヒト配列の量は、低い方が好ましく、言い換えれば、約５％である（Ｂａｃａ，ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４）。最適な結合を実現するには、通常、ＣＤＲの立体構造の支持に関与するある種のフレームワークアミノ酸を、親マウス抗体に見られる対応するアミノ酸に戻すことで、ヒト化抗体を微調節する必要があるかもしれない。普通親に戻すフレームワークアミノ酸は、ＣＤＲループの立体構造の支持に関与するフレームワークアミノ酸である（Ｃｈｏｔｈｉａ，ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７７−８８３；Ｆｏｏｔｅ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：４８７−４９９）。抗原結合に最も多く影響するフレームワーク残基は、比較的小さく、１１残基のように小さい場合がある（Ｂａｃａ，ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４）。

ヒト化抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＥならびに任意のアイソタイプ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を含む）を含む、定常領域のすべてのタイプを持つ抗体を含む。ヒト化抗体が細胞傷害活性を示すことが望ましい場合、定常ドメインは、通常、補体結合定常ドメインであり、クラスは代表的にはＩｇＧ１である。そうした細胞傷害活性が望ましくない場合、定常ドメインは、ＩｇＧ２クラスのそれであってもよい。ヒト化抗体は、複数のクラスまたはアイソタイプ由来の配列を含んでもよい（Ｖａｓｑｕｅｚ，ｅｔ ａｌ．に付与された米国特許第６，３２９，５１１号）。結合親和性が高い抗体のスクリーニングおよび選択には、ファージディスプレイ技術を用いてもよい（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｃｈａｍｅｓ（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ ２１：３７１−３７７；Ｂａｒｂａｓ，ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｐｈａｇｅ Ｄｉｓｐｌａｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｋａｙ，ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｐｈａｇｅ Ｄｉｓｐｌａｙ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）。

また、ファージディスプレイ法またはトランスジェニックマウスに含まれるヒト抗体ライブラリーを用いて、抗体を調製または設計してもよい（たとえば、ｄｅ Ｂｒｕｉｎ，ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １７：３９７−３９９；Ｖａｕｇｈａｎ，ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４：３０９−３１４；Ｂａｒｂａｓ（１９９５）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １：８３７−８３９；Ｍｅｎｄｅｚ，ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １５：１４６−１５６；Ｈｕｓｅ，ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１２７５−１２８１；Ｗａｒｄ，ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４−５４６を参照）。

抗体は、特異的な結合組成物の一形態に過ぎない。用途が似ていることが多い他の結合組成物として、たとえば、結合パートナー−結合パートナー様式で、抗体−抗原相互作用で、または生理的に関連する天然のタンパク質−タンパク質相互作用（たとえば、所望のタンパク質に特異的に結合する、共有結合あるいは非共有結合タンパク質）でリガンドまたは受容体に特異的に結合する分子が挙げられる。分子は、ポリマーでも化学試薬であってもよい。機能的アナログについては、構造的に改変したタンパク質であってもよいし、たとえば、適切な結合決定基と相互作用する分子形状を持つ構造的に無関係の分子であっても構わない。

ＩＶ．ＩＬ−２７ポリペプチドアゴニスト
本発明のＩＬ−２７アゴニストポリペプチドは、様々な細胞株に発現することができる。これらの実施形態では、ＩＬ−２７ヘテロ二量体またはその単一のサブユニット（たとえばＥＢＩ−３またはｐ２８）をコードする配列を用いて、好適な哺乳動物宿主細胞を形質転換してもよい。これらの実施形態によれば、たとえば、ポリヌクレオチドをウイルス（またはウイルスベクター）にパッケージングし、このウイルス（またはベクター）を宿主細胞へ形質導入するなど、ポリヌクレオチドを宿主細胞に導入する任意の既知の方法、あるいは、当該技術分野において公知のトランスフェクション手順により、形質転換を行うことができる。そうした手順については、米国特許第４，３９９，２１６号、同第４，９１２，０４０号、同第４，７４０，４６１号および同第４，９５９，４５５号（任意の目的に応じて、これらすべてを参照によって本明細書に援用する）に例示されている。通常、使用する形質転換の手順は、形質転換される宿主に依存し得る。異種ポリヌクレオチドを哺乳動物細胞に導入する方法は、当該技術分野において周知であり、以下に限定されるものではないが、デキストランを介したトランスフェクション、リン酸カルシウム沈殿、ポリブレンを介したトランスフェクション、プロトプラスト融合、エレクトロポレーション、ポリヌクレオチド（単数または複数）のリポソーム封入および核へのＤＮＡの直接マイクロインジェクションが挙げられる。

本発明の方法のある実施形態では、標準的なライゲーション技術を用いて、ＩＬ−２７ヘテロ二量体またはその個々のサブユニットをコードする核酸分子を適切な発現ベクターに挿入する。ベクターは代表的には、使用する特定の宿主細胞において機能する（すなわち、ベクターが宿主細胞機構に適合して遺伝子の増幅および／または遺伝子の発現が起こり得る）ように選択する。発現ベクターの概説については、Ｇｏｅｄｄｅｌ（ｅｄ．），１９９０，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．Ｖｏｌ．１８５，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ．Ｎ．Ｙを参照されたい。

代表的には、宿主細胞のいずれかに用いる発現ベクターは、プラスミドの維持と、外因性ヌクレオチド配列のクローンニングおよび発現のための配列を含む。そうした配列は、「フランキング配列」と総称され、ある実施形態では、代表的には、プロモーター、１つまたは複数のエンハンサー配列、複製開始点、転写終結配列、ドナーおよびアクセプタースプライス部位を含む完全なイントロン配列、ポリペプチド分泌のためのリーダー配列をコードする配列、リボソーム結合部位、ポリアデニル化配列、発現するポリペプチドをコードする核酸を挿入するためのポリリンカー領域、および選択可能なマーカー要素など、ヌクレオチド配列の１つまたは複数を含む。これらの配列はそれぞれ以下で考察する。

必要に応じて、ベクターは、「タグ」コード配列、すなわち、ポリペプチドコード配列の５’または３’末端に位置するオリゴヌクレオチド分子を含んでもよく、このオリゴヌクレオチド配列は、ポリＨｉｓ（ヘキサＨｉｓなど）、あるいは、市販されている抗体が存在するＦＬＡＧ、ＨＡ（インフルエンザウイルスの赤血球凝集素（ｈｅｍａｇｌｕｔｉｎｉｎ））またはｍｙｃなどの他の「タグ」をコードする。このタグは代表的には、ポリペプチドの発現時にポリペプチドに融合され、宿主細胞からの抗体のアフィニティー精製または検出の手段としての機能を果たすことができる。アフィニティー精製については、たとえば、親和性マトリックスとしてのタグに対する抗体を用いてカラムクロマトグラフィーにより実施してもよい。その後必要に応じて、切断用のある種のペプチダーゼを用いるなど様々な手段により、精製されたポリペプチドからタグを除去してもよい。

フランキング配列は、同種（すなわち、宿主細胞と同じ種および／または系統）でも、異種（すなわち、宿主細胞種または系統以外の種）でも、ハイブリッド（すなわち、複数の供給源のフランキング配列の組み合わせ）でも、合成でも、未変性でもよい。このため、フランキング配列の供給源は、どのような原核生物または真核生物でも、どのような脊椎動物または無脊椎動物でも、どのような植物でもよく、ただし、フランキング配列は、宿主細胞機構において機能的であり、宿主細胞機構により活性化され得る。

本発明のベクターに有用なフランキング配列に関しては、当該技術分野において周知の複数の方法のいずれかで得ることができる。代表的には、マッピングおよび／または制限エンドヌクレアーゼ消化により、本明細書に有用なフランキング配列を前もって特定しておいて、適当な制限エンドヌクレアーゼを用いて適切な組織供給源からこれを単離することができる。場合によっては、フランキング配列の全ヌクレオチド配列が既知であることもある。この場合、核酸合成またはクローンニングのため本明細書に記載した方法を用いて、フランキング配列を合成してもよい。

フランキング配列は、その全部または一部だけが既知の場合、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により、および／または、同種もしくは他の種のオリゴヌクレオチドおよび／またはフランキング配列フラグメントなどの好適なプローブでゲノムライブラリーをスクリーニングすることにより得てもよい。フランキング配列が分からない場合は、たとえば、コード配列、さらには他の遺伝子（単数または複数）を含み得るより大きなＤＮＡ部分から、フランキング配列を含むＤＮＡのフラグメントを単離すればよい。単離を行うには、制限エンドヌクレアーゼ消化により適切なＤＮＡフラグメントを作製し、続いてアガロースゲル精製、Ｑｉａｇｅｎ（登録商標）カラムクロマトグラフィー（Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ，Ｃａｌｉｆ．）または当業者に公知の他の方法を用いて単離してもよい。この目的を達成するのに好適な酵素に何を選択するかについては、当業者に容易に明らかになるであろう。

複製開始点は、代表的には、市販されている原核生物発現ベクターの一部になっており、この開始点は宿主細胞においてベクターの増幅に役立つ。選択したベクターが複製開始点部位を含まない場合、既知の配列に基づき化学的に合成し、ベクターに連結してもよい。たとえば、プラスミドｐＢＲ３２２の複製開始点（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，Ｍａｓｓ．）は、大部分のグラム陰性菌に好適であり、種々のウイルス性の開始点（ＳＶ４０、ポリオーマ、アデノウイルス、水疱性口内炎ウイルス（ｖｅｓｉｃｕｌａｒ ｓｔｏｍａｔｉｔｕｓ ｖｉｒｕｓ）（ＶＳＶ）またはＨＰＶもしくはＢＰＶなどのパピローマウイルス）は、哺乳動物細胞のクローニングベクターに有用である。通常、哺乳動物の発現ベクターは、複製開始点成分を必要としない（たとえば、ＳＶ４０開始点は、ウイルス初期プロモーターも含む場合に限り使用されることが多い）。

転写終結配列は代表的には、ポリペプチドコード領域末端の３’側に位置し、転写を終結させる働きをする。通常、原核生物細胞の転写終結配列は、Ｇ−Ｃリッチなフラグメントに続きポリ−Ｔ配列がある。この配列については、ライブラリーから簡単にクローニングが可能であり、ベクターの一部として市販されてもいるが、本明細書に記載の方法のような核酸合成を用いて簡単に合成することもできる。

選択可能なマーカー遺伝子は、選択培地で増殖する宿主細胞の生存および増殖に必要なタンパク質をコードする。典型的な選択マーカー遺伝子は、（ａ）抗生物質または他のトキシン、たとえば、アンピシリン、テトラサイクリンまたはカナマイシンに対する耐性を原核生物宿主細胞に与えるタンパク質；（ｂ）細胞の栄養要求性の欠損を補うタンパク質；または（ｃ）複合培地または規定の培地から得られない重要な栄養素を供給するタンパク質をコードする。好ましい選択可能なマーカーは、カナマイシン耐性遺伝子、アンピシリン耐性遺伝子およびテトラサイクリン耐性遺伝子である。また、ネオマイシン耐性遺伝子については、原核生物宿主細胞でも真核生物宿主細胞でも選択用に用いてよい。

他の選択可能な遺伝子を用いて、発現する遺伝子を増幅させてもよい。増幅とは、増殖または細胞の生存に重要なタンパク質を産生する上で必要性がより高い遺伝子が、組換え細胞の染色体内で継代的に通常タンデムに反復されるプロセスである。哺乳動物細胞に好適な選択可能なマーカーの例として、ジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）およびプロモーターを持たないチミジンキナーゼが挙げられる。哺乳動物細胞の形質転換体については、ベクターに存在する選択可能な遺伝子により形質転換体のみが独自に生存に適合する淘汰圧下に置く。淘汰圧を加えるには、培地中の選択剤濃度を連続的に高め、それにより選択可能な遺伝子と別の遺伝子をコードするＤＮＡとの両方を増幅する条件下で形質転換細胞を培養する。その結果、増幅したＤＮＡから多量のポリペプチドを合成することができる。

リボソーム結合部位は通常、ｍＲＮＡの翻訳開始に必要であり、シャイン―ダルガーノ配列（原核生物）またはコザック配列（真核生物）を特徴とする。この要素は通常、プロモーターの３’側および発現するポリペプチドのコード配列の５’側に位置する。

真核生物宿主細胞の発現系においてグリコシル化が望まれるような場合においては、様々なプレまたはプロ配列を操作してグリコシル化または収量を改善し得る。たとえば、特定のシグナルペプチドのペプチダーゼ切断部位を変更してもよいし、グリコシル化にも作用する場合があるプロ配列を付加してもよい。最終のタンパク質産物は、完全には除去され得なかった、発現に伴う１つまたは複数の付加アミノ酸を（成熟タンパク質の最初のアミノ酸に対して）その１位に含んでもよい。たとえば、最終のタンパク質産物は、アミノ末端に結合したペプチダーゼ切断部位に認められる１つまたは２つのアミノ酸残基を含んでもよい。また、複数の酵素切断部位を用いると、成熟ポリペプチド内のそうした領域で酵素切断が行われる場合に、所望のポリペプチドの形がやや切り取られ得る。

本発明の発現ベクターおよびクローニングベクターは代表的には、宿主生物により認識され、かつ抗体をコードする分子に作動可能に連結されたプロモーターを含む。プロモーターは、構造遺伝子の開始コドンの上流（すなわち、５’側）（通常約１００〜１０００ｂｐ以内）に位置し、構造遺伝子の転写を制御する非転写配列である。プロモーターは慣習的に、誘導プロモーターおよび構成的プロモーターという２つのクラスの１つに分類される。誘導プロモーターは、栄養素の有無または温度変化などの培養条件の何らかの変化に応じて、プロモーターの制御下でＤＮＡの高レベルの転写を開始する。一方、構成的プロモーターは、連続的な遺伝子産物の産生を開始する。すなわち、遺伝子発現に対する制御をほとんど行わないか、まったく行わない。有望な種々の宿主細胞により認識される多くのプロモーターがよく知られている。好適なプロモーターは、制限酵素消化で供給源のＤＮＡからプロモーターを除去し、所望のプロモーター配列をベクターに挿入することで、本発明の抗体を構成する重鎖または軽鎖をコードするＤＮＡに作動可能に連結される。

また、酵母宿主に用いるのに好適なプロモーターも当該技術分野において周知である。酵母エンハンサーは、酵母プロモーターと一緒に用いると都合がよい。哺乳動物宿主細胞に用いるのに好適なプロモーターは、よく知られており、ポリオーマウイルス、鶏痘ウイルス、アデノウイルス（アデノウイルス２など）、ウシパピローマウイルス、トリ肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルスおよび最も好ましくはシミアンウイルス４０（ＳＶ４０）などのウイルスのゲノムから得られるプロモーターがあるが、これに限定されるものではない。他の好適な哺乳動物プロモーターとして、たとえば、熱ショックプロモーターおよびアクチンプロモーターのような異種哺乳動物のプロモーターが挙げられる。

関心の対象になり得るさらなるプロモーターとして、ＳＶ４０初期プロモーター領域（Ｂｅｒｎｏｉｓｔ ａｎｄ Ｃｈａｍｂｏｎ，１９８１，Ｎａｔｕｒｅ ２９０：３０４−１０）；ＣＭＶプロモーター；ラウス肉腫ウイルスの３’長末端反復配列に含まれるプロモーター（Ｙａｍａｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，１９８０，Ｃｅｌｌ ２２：７８７−９７）；ヘルペスチミジンキナーゼプロモーター（Ｗａｇｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ ７８：１４４４−４５）；メタロチオニン遺伝子の制御配列（Ｂｒｉｎｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８２，Ｎａｔｕｒｅ ２９６：３９−４２）；βラクタマーゼプロモーターなどの原核生物発現ベクター（Ｖｉｌｌａ−Ｋａｍａｒｏｆｆ ｅｔ ａｌ．，１９７８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ ７５：３７２７−３１）；またはｔａｃプロモーター（ＤｅＢｏｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ ８０：２１−２５）があるが、これに限定されるものではない。さらに、組織特異性を示しトランスジェニックアニマルに用いられてきた動物転写制御領域として、膵腺房細胞で活性なエラスターゼＩ遺伝子制御領域（Ｓｗｉｆｔ ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｃｅｌｌ ３８：６３９−４６；Ｏｒｎｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｓｙｍｐ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．５０：３９９−４０９（１９８６）；ＭａｃＤｏｎａｌｄ，１９８７，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ ７：４２５−５１５）；膵β細胞で活性なインスリン遺伝子制御領域（Ｈａｎａｈａｎ，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ ３１５：１１５−２２）；リンパ系細胞で活性な免疫グロブリン遺伝子制御領域（Ｇｒｏｓｓｃｈｅｄｌ ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｃｅｌｌ ３８：６４７−５８；Ａｄａｍｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ ３１８：５３３−３８；Ａｌｅｘａｎｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．７：１４３６−４４）；精巣細胞、乳腺細胞、リンパ系細胞およびマスト細胞で活性なマウス乳腺癌ウイルス制御領域（Ｌｅｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｃｅｌｌ ４５：４８５−９５）；肝臓で活性なアルブミン遺伝子制御領域（Ｐｉｎｋｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌ．１：２６８−７６）；肝臓で活性なαフェトプロテイン遺伝子制御領域（Ｋｒｕｍｌａｕｆ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５：１６３９−４８；Ｈａｍｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３５：５３−５８）；肝臓で活性なα１アンチトリプシン遺伝子制御領域（Ｋｅｌｓｅｙ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌ．１：１６１−７１）；骨髄系細胞で活性なβグロビン遺伝子制御領域（Ｍｏｇｒａｍ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ ３１５：３３８−４０；Ｋｏｌｌｉａｓ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｃｅｌｌ ４６：８９−９４）；脳のオリゴデンドロサイト細胞で活性なミエリン塩基性タンパク質遺伝子制御領域（Ｒｅａｄｈｅａｄ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｃｅｌｌ ４８：７０３−１２）；骨格筋で活性なミオシン軽鎖−２遺伝子制御領域（Ｓａｎｉ，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ ３１４：２８３−８６）；および視床下部で活性な性腺刺激ホルモン放出ホルモン遺伝子制御領域（Ｍａｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３４：１３７２−７８）が注目される。

エンハンサー配列については、高等真核生物で、ベクターに挿入して本発明の抗体を構成する軽鎖または重鎖をコードするＤＮＡの転写を増加させてもよい。エンハンサーは、ＤＮＡのシス作用エレメント（通常、長さ約１０〜３００ｂｐ）であり、プロモーターに作用し転写を増加させる。エンハンサーは、配向および位置とはあまり関係がなく、転写ユニットの５’および３’で確認されている。哺乳動物の遺伝子から入手できる複数のエンハンサー配列（グロビン、エラスターゼ、アルブミン、αフェトプロテインおよびインスリンなど）が知られている。しかしながら、ウイルス由来のエンハンサーを用いるのが典型的である。真核生物プロモーターの活性化を増強する例示的な要素として、当該技術分野において公知のＳＶ４０エンハンサー、サイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、ポリオーマエンハンサーおよびアデノウイルスエンハンサーが挙げられる。エンハンサーをベクターに接合するのは核酸分子の５’位でも３’位でもよいが、代表的にはプロモーターの５’部位に置く。

本発明の発現ベクターについては、市販されているベクターのような出発ベクターから構築してもよい。そうしたベクターは、所望のフランキング配列をすべて含む場合もあるが、そうでない場合もある。本明細書に記載の１つまたは複数のフランキング配列がまだベクターに存在していない場合、フランキング配列を個別に得てベクターに連結してもよい。各フランキング配列を得る方法は、当業者によく知られている。

ベクターを構築し、軽鎖もしくは重鎖または軽鎖および重鎖をコードする核酸分子をベクターの適切な部位に挿入した後、増幅および／またはポリペプチド発現のため完成したベクターを好適な宿主細胞に挿入してもよい。選択した宿主細胞に抗体の発現ベクターを形質転換するには、トランスフェクション、感染、リン酸カルシウム共沈殿、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、リポフェクション、ＤＥＡＥ−デキストランによるトランスフェクションまたは他の既知の技術など、よく知られた方法を行えばよい。選択する方法は、使用する宿主細胞のタイプによってある程度決まる。これらの方法および他の好適な方法は、当業者によく知られており、たとえば、上掲のＳａｍｂｒｏｏｋらに記載されている。

宿主細胞は、適切な条件下で培養されると、抗体を合成するが、抗体はその後培地から回収してもよいし（宿主細胞が抗体を培地に分泌する場合）、抗体を産生する宿主細胞から直接回収してもよい（抗体が分泌されない場合）。どの宿主細胞を選択するのが適切かは、所望の発現レベル、活性に望ましいまたは必要なポリペプチド改変（グリコシル化またはリン酸化など）および生物活性分子への折りたたまれやすさなど様々な要因によって異なる。

発現用の宿主として入手可能な哺乳動物細胞株は、当該技術分野において周知であり、以下に限定されるものではないが、チャイニーズハムスターの卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎（ＢＨＫ）細胞、サル腎細胞（ＣＯＳ）、ヒト肝細胞癌細胞（ＨｅｐＧ２など）およびこれ以外の多くの細胞株などアメリカンタイプカルチャーコレクション（Ａ．Ｔ．Ｃ．Ｃ）から入手可能な多くの不死化細胞株があるが、これに限定されるものではない。

Ｖ．治療用組成物
本発明は、たとえば、再発性流産、胚着床の不良、子癇前症などの生殖障害を処置するＩＬ−２７のアゴニストの使用方法を提供する。

本発明のアンタゴニストおよび／またはアゴニストに関しては、単独で投与しても、同一または付随する経路の他のアゴニストあるいは症状の処置に用いる他の化合物と組み合わせて投与してもよい。診断方法は、予後の予測；特定の治療コースに反応するあるいはしない患者のサブセットの判定；生殖関連障害またはこの障害のサブタイプの診断；または治療に対する反応の評価などの側面を含む。

処置、治療または診断については、アゴニストまたはアンタゴニストの直接投与により行ってもよいし、アゴニストまたはアンタゴニストをコードする核酸の投与により行ってもよい。アゴニストは、抗体から得られた結合組成物、ＩＬ−２７またはＩＬ−２７Ｒに特異的に結合する抗体または抗体フラグメント、ＩＬ−２７ポリペプチドもしくは改変体、またはアゴニストをコードする核酸を発現するベクターを包含する（たとえば、Ａｒｅｎｚ ａｎｄ Ｓｃｈｅｐｅｒｓ（２００３）Ｎａｔｕｒｗｉｓｓｅｎｓｃｈａｆｔｅｎ ９０：３４５−３５９；Ｓａｚａｎｉ ａｎｄ Ｋｏｌｅ（２００３）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１２：４８１−４８６；Ｐｉｒｏｌｌｏ，ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ９９：５５−７７；Ｗａｎｇ，ｅｔ ａｌ．（２００３）Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌ．１３：１６９−１８９を参照）。

ポリペプチドもしくはアゴニスト抗体、その結合組成物または小分子アゴニストなど、医薬組成物または無菌組成物を調製するには、その物質を、好ましくは不活性な薬学的に許容されるキャリアまたは賦形剤と混合する。そうした医薬組成物の調製に関しては、当該技術分野において公知であり、たとえば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ａｎｄ Ｕ．Ｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ：Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（１９８４）を参照されたい。

抗体、結合組成物またはサイトカインについては、非経口的に、好ましくは静脈内に通常投与する。そうしたタンパク質またはペプチドは、免疫原性を持つ場合があるため、たとえば、Ｔｏｍａｓｉ，ｅｔ ａｌ，米国特許第４，７３２，８６３号により教示されているように通常のＩＶ投与セットあるいは皮下デポーにより、ゆっくりと投与するのが好ましい。免疫学的反応を最小限にとどめる方法を用いても構わない。小分子物質は、経口投与で効果を発揮してもよい。

また、膣内投与に好適な組成物として、当該技術分野において適切であることが公知のキャリアを含むペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、気泡、薄膜または噴霧組成物が挙げられる。用いられるキャリアは、膣内投与に適合しているべきである。組み合わせは、注水液（ｄｏｕｃｈｅ）、気泡、薄膜、軟膏（ｏｉｎｔｍｅｎｔ）、クリーム、バルム、ゲル、軟膏（ｓａｌｖｅ）、ペースト、スラリー、経膣坐剤または潤滑ゼリー（ｓｅｘｕａｌ ｌｕｂｒｉｃａｎｔ）など、たとえば、固形、半固形および液体剤形であってもよい。

活性化合物については、インプラントおよびマイクロカプセル化送達系のような放出制御調合物など、化合物の体からの急速な消失を防止するキャリアを用いて調製する。エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステルおよびポリ乳酸など、生分解性、生体適合性ポリマーを用いてもよい。そうした調合物の調製方法は、当業者には明らかである。また、これらの材料は、たとえば、Ａｌｚａ ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎおよびＮｏｖａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．から市販されている。さらに、リポソーム懸濁液（ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体により感染細胞を標的にしたリポソームなど）を薬学的に許容されるキャリアとして用いてもよい。これらは、たとえば、米国特許第４，５２２，８１１号に記載されているように当業者に公知の方法により調製できる。

生物製剤については、非経口的に投与する場合、薬学的に許容される非経口ビヒクルと共に注射可能な単位剤形（溶液、懸濁液、エマルジョン）として製剤化する。そうしたビヒクルは、本質的に無毒で治療効果がないのが一般的である。この治療剤に関しては、様々な添加剤および／または希釈剤を使用してあるいは使用せずに、水、生理食塩水または緩衝ビヒクルなどの水性ビヒクルに加えて投与してもよい。あるいは、本ペプチドを含ませるため、亜鉛懸濁液などの懸濁液を調製してもよい。そうした懸濁液は、皮下（ＳＱ）または筋肉内（ＩＭ）注射に有用であり得る。生物製剤および添加剤の比率は、両剤が有効量で存在する限り、広範囲に異なってもよい。本抗体は、凝集体、他のタンパク質、エンドトキシンなどを実質的に含まず、約５〜３０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは１０〜２０ｍｇ／ｍｌの濃度で精製された形で製剤化されるのが好ましい。好ましくは、エンドトキシンのレベルは、２．５ＥＵ／ｍｌ未満である。たとえば、Ａｖｉｓ，ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．）（１９９３）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ，２ｄ ｅｄ．，Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ，２ｄ ｅｄ．，Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｄｉｓｐｅｒｓｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｆｏｄｏｒ，ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５１：７６７−７７３，Ｃｏｌｉｇａｎ（ｅｄ．）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ；Ｈｏｏｄ，ｅｔ ａｌ．（１９８４）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｐｅａｒｓｏｎ，Ｕｐｐｅｒ Ｓａｄｄｌｅ Ｒｉｖｅｒ，ＮＹ；Ｐａｕｌ（ｅｄ．）（１９９９）Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４^ｔｈ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａ．，ＰＡ；Ｐａｒｃｅ，ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：２４３−２４７；Ｏｗｉｃｋｉ，ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ ８７：４００７−４０１１；ａｎｄ Ｂｌｕｎｄｅｌｌ ａｎｄ Ｊｏｈｎｓｏｎ（１９７６）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照されたい。

治療剤のためにどの投与レジメンを選択するかは、その物質の血清または組織代謝回転速度、症状のレベル、その物質の免疫原性および標的細胞の到達性、投与のタイミングなど複数の要因に左右される。好ましくは、投与レジメンは、許容可能な副作用のレベルと整合し、患者に送達される治療剤の量を最大にする。したがって、生物製剤の送達量は、個々の物質および処置される症候の重症度にある程度依存する。適切な抗体用量を選択する際のガイダンスは、たとえば、Ｂａｃｈ，ｅｔ ａｌ．，ｃｈａｐｔｅｒ ２２，ｉｎ Ｆｅｒｒｏｎｅ，ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．）（１９８５）Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｎｏｇｅｓ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｐａｒｋ Ｒｉｄｇｅ，ＮＪ；ａｎｄ Ｈａｂｅｒ，ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．）（１９７７）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ（Ｒｕｓｓｅｌｌ，ｐｇｓ．３０３−３５７，ａｎｄ Ｓｍｉｔｈ，ｅｔ ａｌ．，ｐｇｓ．３６５−３８９）で確認できる。あるいは、標準的な方法論を用いてサイトカインまたは小分子の用量を測定する。

適切な用量については、たとえば、当該技術分野において処置に作用することが知られていたり、そのように思われていたり、予想されていたりするパラメータまたは因子により、臨床家が決定する。通常、用量は、至適用量よりもやや少ない量から始め、その後、任意の負の副作用に対して望ましい効果または至適効果が得られるまで少しずつ増量する。重要な診断尺度として、たとえば、発生した炎症または炎症性サイトカインのレベルのような症状の尺度が挙げられる。好ましくは、使用する生物製剤は、処置対象の動物と同じ種由来であり、それにより試薬に対する液性免疫反応を最小限にとどめる。

リガンドまたは受容体に特異的に結合する抗体またはそのフラグメントの１週間の総用量の範囲は通常、体重１キログラム当たり約１０μｇ以上、より一般的には約１００μｇ以上、典型的には約５００μｇ以上、より典型的には約１０００μｇ以上、好ましくは約５ｍｇ以上、一層好ましくは約１０ｍｇ以上である。通常、この範囲は、体重１キログラム当たり１００ｍｇ未満、好ましくは約５０ｍｇ未満、一層好ましくは約２５ｍｇ未満である。ポリペプチドまたは小分子治療剤は、類似のモル濃度で用いてもよい。

サイトカイン受容体によるシグナル伝達のアンタゴニスト（たとえば、抗体または結合フラグメント）の１週間の用量範囲は、体重１キログラム当たり約１μｇ以上、好ましくは少なくとも約５μｇ以上、一層好ましくは少なくとも約１０μｇ以上である。通常、この範囲は、体重１キログラム当たり約１０００μｇ未満、好ましくは約５００μｇ未満、一層好ましくは約１００μｇ未満である。投与量は、所望の処置を達成するスケジュールに基づき、スケジュールは定期的に期間を短くしたり長くしたりしてもよい。一般的な範囲は、体重１キログラム当たり少なくとも約１０μｇ〜約５０ｍｇ、好ましくは約１００μｇ〜約１０ｍｇである。サイトカインアゴニストまたは小分子治療剤については代表的には、類似のモル量で用いるが、それらは恐らく分子量がより小さいので、体重用量が少なくなる。

本発明は、たとえば、炎症に関連した症状を緩和するエストロゲンまたはプロゲストロンなどのホルモンまたは抗生物質もしくは抗感染症剤など、既知の治療物と組み合わせた生物製剤の投与も提供する。糖質コルチコイドの１日の投与量は、１日当たり少なくとも約１ｍｇ以上、通常少なくとも約２ｍｇ、好ましくは少なくとも約５ｍｇである。通常、その投与量は、１日当たり約１００ｍｇ未満、代表的には約５０ｍｇ未満、好ましくは約２０ｍｇ未満、一層好ましくは少なくとも約１０ｍｇである。一般に、この範囲は、１日当たり少なくとも約１ｍｇ〜約１００ｍｇ、好ましくは約２ｍｇ〜５０ｍｇである。「有効量」という語は、医学的状態の症状または徴候を緩和するのに十分な量を意味する。代表的な哺乳動物宿主には、マウス、ラット、ネコ、イヌおよびヒトを含む霊長類がある。個々の患者に対する有効量は、処置対象の症候、患者の健康全般、投与の方法経路および用量ならびにサイドアフェクト（ｓｉｄｅ ａｆｆｅｃｔ）の重症度などの因子によって異なり得る。併用する場合の有効量は、成分の組み合わせ比率となり、その作用は個々の成分単独の作用に限定されるものではない。

治療剤の有効量は、典型的には少なくとも約１０％；通常、少なくとも約２０％；好ましくは少なくとも約３０％；一層好ましくは少なくとも約５０％症状を緩和する。本発明は、本明細書の別の箇所（たとえば、上述の適応症に関連する障害の処置の概要についての一般的な記載）に記載されているような治療用途に用いられる試薬を提供する。Ｂｅｒｋｏｗ（ｅｄ．）Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｍｅｒｃｋ ＆ Ｃｏ．，Ｒａｈｗａｙ，Ｎ．Ｊ．；Ｂｒａｕｗａｌｄ，ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．）（２００１）Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１５^ｔｈ ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，ＮＹ；Ｇｉｌｍａｎ，ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．）（１９９０）Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ：Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｅｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，８ｔｈ Ｅｄ．，Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ；Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１７ｔｈ ｅｄ．（１９９０），Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎ；Ｌａｎｇｅｒ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−１５３３；Ｍｅｒｃｋ Ｉｎｄｅｘ，Ｍｅｒｃｋ ＆ Ｃｏ．，Ｒａｈｗａｙ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ；ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（ＰＤＲ）；Ｃｏｔｒａｎ，ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），上掲；ａｎｄ Ｄａｌｅ ａｎｄ Ｆｅｄｅｒｍａｎ（ｅｄｓ．）（２０００）Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｈｅａｌｔｈｅｏｎ／ＷｅｂＭＤ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹを参照されたい。

ＶＩ．診断方法
本発明は、生物学的サンプル中のＩＬ−２７またはＩＬ−２７Ｒの存在を検出する方法を提供する。この方法は、タンパク質または核酸分子（ｍＲＮＡなど）を検出できる薬物と生物学的サンプルを接触させ、生物学的サンプル中のこれらの遺伝子の１つまたは両方の存在を検出することを含む。ｍＲＮＡを検出する薬物の１つは、特定の遺伝子のｍＲＮＡに特異的にハイブリダイズできる標識核酸プローブである。核酸プローブは、たとえば、全長ｃＤＮＡでも、長さが少なくとも１５、３０、５０、１００、２５０または５００ヌクレオチドのオリゴヌクレオチドなど、その一部でもよいが、ストリンジェントな条件下で特定のｍＲＮＡに特異的にハイブリダイズするのに十分に相補的である。プローブについては、ＧｅｎＢａｎｋから公に入手可能な配列（ヒトＥＢＩ−３のＮＭ＿００５７５５；ヒトｐ２８のＮＭ＿１４５６５９；ヒトＷＳＸ１／ＴＣＣＲのＮＭ＿００４８４３；およびヒトｇｐ１３０のＮＭ＿１７５７６７など）を用いて設計してもよい。所望の遺伝子名および所望の有機体名を用いてＧｅｎＢａｎｋを検索して、ヒト以外の種に由来する前述の遺伝子のいずれかの配列を取得してもよい。

サンプル中のｍＲＮＡについては、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｔａｑｍａｎ ＥＺ ＲＴ−ＰＣＲキット（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を用いて測定する。遺伝子特異的プライマーおよびプローブに関しては、Ｐｒｉｍｅｒ Ｅｘｐｒｅｓｓソフトウェア（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）および受託番号により上述の遺伝子配列を用いて設計してもよい。

特定のタンパク質（接着分子、炎症性サイトカインまたは免疫細胞表面抗原など）を検出する薬物は、特定のタンパク質に結合できる標識抗体または標識可能な抗体である。抗体は、ポリクローナル抗体でも、一層好ましくはモノクローナル抗体でもよい。インタクトな抗体またはそのフラグメント（ＦａｂまたはＦ（ａｂ’）_２など）を用いてもよい。プローブまたは抗体に対する「標識または標識可能な」という語は、検出可能な物質（^１２５Ｉなど）をプローブまたは抗体にカップリング（すなわち、物理的結合）してプローブまたは抗体を直接標識すること、さらに直接標識された他の試薬と反応させてプローブまたは抗体を間接標識することとを包含することを意図している。間接標識の例として、蛍光標識二次抗体を用いた一次抗体の検出および蛍光標識ストレプトアビジンで検出できるようにしたビオチンによるＤＮＡプローブの末端標識が挙げられる。

生物学的サンプルは、被検体から単離されたサンプルを含み、単離後さらに処理または操作を加えずに本発明の方法に供される。別の実施形態では、単離後および本発明の方法に供する前に、生物学的サンプルを処理または操作してもよい。たとえば、サンプルを冷蔵（４℃で保管など）、凍結（−２０℃で保管、−１３５℃で保管、液体窒素による凍結または当該技術分野において公知の多くの標準的な低温保存技術のいずれか１つを用いた凍結保存など）してもよい。さらに、被検体からの単離後および本発明の方法に供する前に、サンプルを精製してもよい。本明細書で使用する場合、「精製」という語は、生物学的サンプルの文脈で用いる場合、単離された生物学的サンプルの少なくとも１つの成分が生物学的サンプルから除去されて、精製後に成分が減少し、したがってより純粋な成分が残ることを示すことを意図している。たとえば、血清サンプルを当該技術分野において公知の遠心分離技術より１つまたは複数の成分に分離して、部分精製サンプル調製物を得てもよい。さらに、生物学的サンプルを、実質的に１つの成分だけが残るように精製することもできる。たとえば、生物学的サンプルのタンパク質またはｍＲＮＡ成分だけが実質的に残るように、組織または腫瘍サンプルを精製することができる。

成分を検出しやすいように、生物学的サンプルの成分を増幅することが望ましい場合がある。たとえば、ｍＲＮＡを検出しやすいように、（ＲＴ−ＰＣＲなどにより）生物学的サンプルのｍＲＮＡ成分を増幅してもよい。本明細書で使用する場合、「ＲＴ−ＰＣＲ」（「逆転写酵素−ポリメラーゼ連鎖反応」）という語は、ｍＲＮＡを逆転写酵素と反応させ、ｍＲＮＡの塩基配列と相補的なＤＮＡを産生することを含む。次いで選択したｃＤＮＡを、その増幅作用から耐熱性ＤＮＡポリメラーゼ（ｐｏｌｙ ｅｒａｓｅ）の作用を利用するポリメラーゼ連鎖反応により大量に作製し得る。別の増幅方法として、以下に限定されるものではないが、自己支持配列複製（Ｇｕａｔｅｌｌｉ，Ｊ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：１８７４−１８７８）、転写増幅系（Ｋｗｏｈ，Ｄ．Ｙ．ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１１７３−１１７７）、Ｑβレプリカーゼ（Ｌｉｚａｒｄｉ，Ｐ．Ｍ．ｅｔ ａｌｌ，１９８８，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ６：１１９７）または任意の他の核酸増幅法があり、その後、増幅された分子を当業者によく知られた技術により検出する。核酸分子数が非常に少ない場合、こうした検出スキームは、そうした分子の検出に特に有用である。

本発明の検出方法については、生物学的サンプル中のタンパク質または核酸分子のインビトロおよびインビボでの検出に用いてもよい。たとえば、インビトロでのｍＲＮＡの検出技術として、ノーザンハイブリダイゼーションおよびｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションが挙げられる。インビトロでのタンパク質の検出技術として、酵素結合免疫吸着測定（ＥＬＩＳＡ）、ウエスタンブロット、免疫沈降および免疫蛍光法が挙げられる。

被験者の生物学的サンプル中のＩＬ−２７またはＩＬ−２７Ｒのレベルが異常かどうかを判定するには、被験者のＩＬ−２７またはＩＬ−２７Ｒのレベルを、たとえば、妊娠が正常だった女性から測定したこれらの分子の平均レベルと比較する。被験者において測定したこれらの分子のレベルの方が正常な妊娠の場合のレベルよりも低ければ（すなわち、統計学的に有意に低い）、被験者は、免疫性（ｉｎｍｕｎｅ−ｍｅｄｉａｔｅｄ）自然流産が発生するリスクがあると診断される。

たとえば、ＩＬ−２７またはＩＬ−２７Ｒのレベルが１０〜２０％低い被検体は、リスクがあると診断される。なお別の実施形態では、たとえば、好適または適切な対照と比較したときに、レベルが２０〜３０％、３０〜４０％、４０〜５０％、５０〜１００％、１００〜２００％、２００〜４００％（２倍〜４倍など）、４倍〜１０倍、１０倍〜１００倍、１００倍またはそれを超えて低い被検体は、免疫性自然流産のリスクがあると診断される。

本発明はまた、生物学的サンプル中のＩＬ−２７またはＩＬ−２７Ｒの存在を検出するキットを含む。たとえば、そのキットは、生物学的サンプル中のＩＬ−２７ヘテロ二量体またはＩＬ−２７Ｒ複合体の少なくとも１つのサブユニットのｍＲＮＡまたはポリペプチドを検出できる標識薬物または標識可能な薬物および生物学的サンプル中のＩＬ−２７またはＩＬ−２７ＲのｍＲＮＡまたはポリペプチドの量を測定する手段を含んでもよい。この薬物は、好適な容器に包装されていてもよい。さらに、そのキットは、サンプル中のＩＬ−２７またはＩＬ−２７Ｒの量を標準物質（ＩＬ−２７またはＩＬ−２７Ｒレベルの正常範囲および異常範囲を示すチャートあるいは好適または適切な対照サンプルなど）と比較する手段をさらに含んでもよく、および／または、ＩＬ−２７ヘテロ二量体またはＩＬ−２７Ｒ複合体の少なくとも１つのサブユニットのｍＲＮＡまたはポリペプチドを検出するキットの使用説明書をさらに含んでもよい。

胚に対する母体の免疫寛容に関する現在のモデルは、サイトカインおよびホルモンの間接的なシグナル伝達の活用と母体のリンパ球の能動的な免疫抑制という２つの相補的な機構が中心になっている。多くの既知の免疫調節性サイトカインについて、最近、胚に対する母体の寛容に作用することが明らかになっているとの記載がなされた。ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１２およびＲＡＮＴＥＳなど、（細胞内の寄生虫感染などの過程で）細胞傷害性を促進するＴｈ１サイトカインは、流産を起こしやすいマウスで自然流産率を上昇させることが明らかになっているのに対し、液性免疫を促進するＣＳＦ−１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１０、ＩＬ−４、ＩＬ−１１、ＴＧＦおよびＩＬ−３などのＴｈ２サイトカインの存在は、流産率の低下と相関することが示されている（Ｃｈａｏｕａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｊ Ｒｅｐｒｏｄ Ｆｅｒｔｉｌ ８９，４４７−５８；Ｇａｆｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７，４０８−１９）。また、胚供給源に由来する因子の研究では、能動的な免疫抑制についても記述されている。未同定のタンパク質および抗父系遮断抗原の中には、胚に対して若干の免疫抑制を与えるものがあることがこれまでに報告されている（Ｈｅｒｒｅｒａ−Ｇｏｎｚａｌｅｚ ａｎｄ Ｄｒｅｓｓｅｒ，１９９３，Ｄｅｖ Ｃｏｍｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７，１−１８）。実施例７〜１１は、異常妊娠（ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ ｐｒｅｇｎａｎｃｙ）中のマウスにおいては、多くのサイトカインと共に接着分子および細胞表面抗原の発現レベルが変化するが、ＣＴＬＡ４Ｉｇによる処置で多くが正常化し得ることを示している。このため、これらの遺伝子の発現レベルの変化は、被検体が免疫性自然流産のリスクがあるかどうか、それを発生しているかどうか、あるいは、それに罹患しているかどうかを判定する診断基準として用い得る。

また、上記のような本発明の方法を用いて、被検体の処置の進展をモニターすることも望み得る。たとえば、ある被検体（ヒトなど）が、本明細書に記載の処置方法のいずれか１つにより、免疫性自然流産の処置を受け得る。上述の診断方法を用いて、ＩＬ−２７またはＩＬ−２７Ｒのレベルが正常レベルに戻ったかどうかを判定することができる。その後、結果に応じて被検体の処置を変更（たとえば、増減）してもよい。

本発明の広範な範囲は、以下の実施例を参照すると最もよく理解される。実施例は、本発明を個々の実施形態に限定することを意図するものではない。

Ｉ．一般的な方法
以下の標準的な方法の多くは、たとえば、Ｍａｎｉａｔｉｓ，ｅｔ ａｌ．（１９８２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ；Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（２ｄ ｅｄ．）Ｖｏｌｓ．１−３，ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ；Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｂｒｏｏｋｌｙｎ，ＮＹ；ｏｒ Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．（１９８７ ａｎｄ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｗｉｌｅｙ／Ｇｒｅｅｎｅ，ＮＹ；Ｉｎｎｉｓ，ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．）（１９９０）ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹに記載または参照されている。タンパク質の精製方法には、硫酸アンモニウム沈殿、カラムクロマトグラフィー、電気泳動、遠心分離、結晶化などのような方法がある。たとえば、Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．（１９８７ ａｎｄ ｐｅｒｉｏｄｉｃ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ）；Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ（１９９０）「Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，」Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．１８２およびこのシリーズの他の巻；Ｃｏｌｉｇａｎ，ｅｔ ａｌ．（１９９５ ａｎｄ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｐ．Ｍａｔｓｕｄａｉｒａ（ｅｄ．）（１９９３）Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｍｉｃｒｏｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ；およびタンパク質精製産物の使用に関する製造者の文献、たとえば、Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪまたはＢｉｏ−Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ．を参照されたい。組換え技術と組み合わせれば、たとえば、プロテアーゼの除去が可能な配列により、ＦＬＡＧ配列などの適切なセグメント（エピトープタグ）または融合が可能な等価物に融合できる。たとえば、Ｈｏｃｈｕｌｉ（１９８９）Ｃｈｅｍｉｓｃｈｅ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅ １２：６９−７０；Ｈｏｃｈｕｌｉ（１９９０）「Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｗｉｔｈ Ｍｅｔａｌ Ｃｈｅｌａｔｅ Ａｂｓｏｒｂｅｎｔ」ｉｎ Ｓｅｔｌｏｗ（ｅｄ．）Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ １２：８７−９８，Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ；ａｎｄ Ｃｒｏｗｅ，ｅｔ ａｌ．（１９９２）ＱＩＡｅｘｐｒｅｓｓ：Ｔｈｅ Ｈｉｇｈ Ｌｅｖｅｌ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ＆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ，ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．，Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ，ＣＡを参照されたい。

標準的な免疫学的技術は、たとえば、Ｈｅｒｔｚｅｎｂｅｒｇ，ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．）（１９９６）Ｗｅｉｒ’ｓ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ｖｏｌｓ．１−４，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，Ｍａｌｄｅｎ，ＭＡ；Ｃｏｌｉｇａｎ（１９９１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｗｉｌｅｙ／Ｇｒｅｅｎｅ，ＮＹ；ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ｖｏｌｓ．７０，７３，７４，８４，９２，９３，１０８，１１６，１２１，１３２，１５０，１６２，ａｎｄ １６３に記載されている。サイトカインアッセイについては、たとえば、Ｔｈｏｍｓｏｎ（ｅｄ．）（１９９８）Ｔｈｅ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ（３ｄ ｅｄ．）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ；Ｍｉｒｅ−Ｓｌｕｉｓ ａｎｄ Ｔｈｏｒｐｅ（１９９８）Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ；Ｍｅｔｃａｌｆ ａｎｄ Ｎｉｃｏｌａ（１９９５）Ｔｈｅ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｃｏｌｏｎｙ Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ；ａｎｄ Ａｇｇａｒｗａｌ ａｎｄ Ｇｕｔｔｅｒｍａｎ（１９９１）Ｈｕｍａｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，Ｍａｌｄｅｎ，ＭＡに記載されている。

血管の生物活性アッセイは、当該技術分野において周知である。こうしたアッセイは、たとえば、動脈平滑筋の増殖（たとえば、Ｋｏｙｏｍａ，ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｃｅｌｌ ８７：１０６９−１０７８を参照）、血管上皮への単球接着（たとえば、ＭｃＥｖｏｙ，ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８５：２０６９−２０７７；Ｒｏｓｓ（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ ３６２：８０１−８０９；Ｒｅｋｈｔｅｒ ａｎｄ Ｇｏｒｄｏｎ（１９９５）Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１４７：６６８−６７７；Ｔｈｙｂｅｒｇ，ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ １０：９６６−９９０；Ｇｕｍｂｉｎｅｒ（１９９６）Ｃｅｌｌ ８４：３４５−３５７を参照などの腫瘍または他の組織における新脈管形成活性および抗新脈管形成性活性をカバーする。

神経細胞の生物活性アッセイについては、たとえば、Ｗｏｕｔｅｒｌｏｏｄ（ｅｄ．１９９５）Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｍｏｄｕｌｅｓ １０，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ；Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；ａｎｄ Ｎｅｕｒｏｍｅｔｈｏｄｓ Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ．に記載されている。発生系の方法論は、たとえば、Ｍｅｉｓａｍｉ（ｅｄ．）Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ；ａｎｄ Ｃｈｒｉｓｐｅｅｌｓ（ｅｄ．）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ ｉｎ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅに記載されている。

ＦＡＣＳ分析については、Ｍｅｌａｍｅｄ，ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ ａｎｄ Ｓｏｒｔｉｎｇ，Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｓｈａｐｉｒｏ（１９８８）Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，Ｌｉｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；ａｎｄ Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ，Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹに記載されている。

ＩＩ．ヒト組織
妊娠９〜４０週にある８個の胎盤の凍結組織サンプルをＲＴ−ＰＣＲおよび／または免疫共沈降実験により解析した。さらに、妊娠第１三半期（４〜１０週、ｎ＝１１）、第２三半期（１７〜２７週、ｎ＝４）および第３三半期（３３〜３９週、ｎ＝４）の胎盤１９個のホルマリン固定パラフィン包埋組織サンプルを免疫組織化学的検査により解析した。胎盤については、堕胎（第１三半期の胎盤）、治療的中絶、流産、帝王切開または自然分娩（第２および第３三半期の胎盤）から採取した。肉眼的検査および組織学的検査で異常がなかったためこれらの胎盤を選択した。子癇前症を示す病変および感染症は観察されなかった。さらに、精巣胚細胞腫瘍７例のパラフィン包埋組織サンプル（絨毛癌成分を含む混合型胚細胞腫瘍５例および合胞体栄養細胞層細胞を含むセミノーマ２例）も解析した。

フランスの倫理ガイドラインに従って、患者の同意を得てから採取した凍結組織と、組織学的検査および診断目的（ｐｕｒｐｏｓｉｓ）のために収集した固定組織とを調査した。

ＩＩＩ．ＲＮＡの抽出およびＲＴ−ＰＣＲ解析
ＴＲＩｚｏｌ抽出により凍結組織または細胞からＲＮＡを単離し、続いてＭ−ＭＬＶ逆転写酵素およびｏｌｉｇｏ（ｄＴ）プライマー（試薬はすべてＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃｅｒｇｙ−Ｐｏｎｔｏｉｓｅ，Ｆｒａｎｃｅ製）を用いてＤＮａｓｅＩ消化および逆転写を行った。ＰＣＲ解析では、以下のプライマーを用いた：

熱サイクルプロファイルは、以下のとおりであった：９４℃で１分、５５℃で３０秒および７２℃で２０秒、３０サイクル（ＥＢＩ３）、３２サイクル（ｐ２８）、３５サイクル（ＩＬ−２７Ｒ）および３０サイクル（ｇｐ１３０およびβ２−ミクログロブリン）。

ＩＶ．免疫共沈降およびウエスタンブロット解析
凍結胎盤の組織を粉砕し、プロテアーゼ阻害剤（１ｍＭのＰＭＳＦ、１μｇ／ｍｌのペプスタチン、１０μｇ／ｍｌのロイペプチン）を含む溶解緩衝液（０．５％ノニデットＰ−４０、５０ｍＭのトリス（ｐＨ７．４）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３％グリセロール、１．５ｍＭのＥＤＴＡ）中でインキュベートして氷上で１時間溶解した。細胞ライセートを１３，０００×ｇで１５分間遠心した。次いで、この上清を、プロテインＡセファロース（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｃｌａｙ，Ｆｒａｎｃｅ）により４℃で２時間プレクリアし、ウサギポリクローナル抗ＥＢＩ３もしくは抗ｐ２８抗体（Ａｂ）または対照ウサギＩｇＧ Ａｂ（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ−Ｑｕｅｎｔｉｎ−Ｆａｌｌａｖｉｅｒ，Ｆｒａｎｃｅ）と４℃で２時間インキュベートした。ウサギポリクローナル抗ＥＢＩ３または抗ｐ２８Ａｂをそれぞれ、細菌性６Ｈｉｓ−ＥＢＩ３融合タンパク質（たとえば、Ｄｅｖｅｒｇｎｅ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ １５９：１７６３−１７７６を参照）またはｐ２８のＮ末端にマッピングされたペプチド（たとえば、Ｌａｒｏｕｓｓｅｒｉｅ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｊ Ｐａｔｈｏｌ ２０２：１６４−１７１を参照）で免疫されたウサギの血清から精製した。免疫複合体を、４℃で１時間プロテインＡセファロースとインキュベートして回収した。次いでビーズを、１ｍｌの０．５％ＮＰ−４０溶解緩衝液で５回洗浄し、結合タンパク質を、ＳＤＳサンプル緩衝液中で煮沸して回収した。イムノブロッティングのため、溶出したタンパク質をＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離し、ニトロセルロース膜にトランスファーした。ＥＢＩ３を、マウス２Ｇ４Ｈ６ｍＡｂを用いて検出し（Ｄｅｖｅｒｇｎｅ ｅｔ ａｌ．（２００１）上掲）、ｐ２８を、ｐ２８のＣ末端を認識するアフィニテイ精製ウサギ抗ｐ２８Ａｂ（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）を用いて検出した。マウスＡｂまたはウサギＡｂの結合をそれぞれ、西洋わさびペルオキシダーゼ結合体化抗マウスＡｂまたは西洋わさびペルオキシダーゼ結合体化プロテインＡで検出した（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）。ペルオキシダーゼ反応を化学発光試薬により展開させた（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌ，ＵＳＡ）。

Ｖ．ＥＬＩＳＡ
正常な満期胎盤１４個の胎盤外植片の培養上清（以前に記載されているように調製（Ｄｅｖｅｒｇｎｅ，ｅｔ ａｌ．（２００１）上掲））および正常な妊娠の女性７名の血清（妊娠中の様々な時期（妊娠９〜４０週）由来）についてＥＬＩＳＡによりＩＬ−２７を検査した。これらはすべて、ＥＬＩＳＡによりＥＢＩ３について既に検査がなされていた（Ｄｅｖｅｒｇｎｅら（２００１）上掲）。ＥＢＩ３／ｐ２８ヘテロ二量体を認識するが、遊離ＥＢＩ３を認識しないＩＬ−２７のＥＬＩＳＡについては、既に記載されている（たとえば、Ｐｆｌａｎｚ，ｅｔ ａｌ．（２００２）を参照 上掲）。

ＶＩ．免疫組織化学的検査
記載のように間接的なアビジン−ビオチンペルオキシダーゼ技術により、ホルマリン固定パラフィン包埋組織について免疫組織化学的検査を行った（Ｌａｒｏｕｓｓｅｒｉｅ，ｅｔ ａｌ．（２００４）上掲；Ｌａｒｏｕｓｓｅｒｉｅ，ｅｔ ａｌ．（２００５）上掲；Ｌａｒｏｕｓｓｅｒｉｅ，ｅｔ ａｌ．（２００６）上掲；ａｎｄ Ｄｅｖｅｒｇｎｅ，ｅｔ ａｌ．（２００１）上掲）。ペルオキシダーゼ反応を３’−ジアミノベンジジンで展開させ、切片をハリスヘマトキシリンで対比染色した。ＥＢＩ３を、２μｇ／ｍｌの２Ｇ４Ｈ６マウスｍＡｂ（ＩｇＧ２ａ）と平行してアイソタイプ対応対照ｍＡｂ（ＲＰＣ５，ＩｇＧ２ａ，Ｃａｐｐｅｌ Ｄｕｒｈａｍ，ＮＣ，ＵＳＡ）を用いて検出した。ｐ２８を、１〜２μｇ／ｍｌでアフィニテイ精製ウサギポリクローナル抗ｐ２８抗体（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ）を用いて検出し、正常なウサギＩｇＧ（Ｓｉｇｍａ）を陰性対照として用いた。場合によっては、正常なラットＩｇＧと平行してラット抗ｐ２８モノクローナルＡｂ（１０μｇ／ｍｌ）（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ）を用い、記載のように（Ｌａｒｏｕｓｓｅｒｉｅ，ｅｔ ａｌ．（２００４）上掲）ビオチン化ウサギ抗ラットポリクローナルＩｇＧ（Ｖｅｃｔｏｒ ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）で検出した。

ＶＩＩ．免疫性流産の動物モデル
流産を起こしやすいＤＢＡ×ＣＢＡマウスモデルは、免疫性自然流産に関する研究の標準的なモデルである（Ｔｏｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８９ ，Ｊ Ｒｅｐｒｏｄ Ｆｅｒｔｉｌ Ｓｕｐｐｌ ３７，７９−８４）。ＣＢＡ妊娠雌マウスでは、ＤＢＡ：ＣＢＡハイブリッドの吸収胚率は、２１〜３０％であるのに対し、対照Ｂａｌｂ Ｃ：ＣＢＡの吸収胚率は８％である。このモデル系の場合、胚に対する母体の免疫学的拒絶反応が妊娠６日目、着床後２日目に始まる（Ｄｕｃｌｏｓ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ａｍ Ｊ Ｒｅｐｒｏｄ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３３，３５４−６６）。胚に対する母体の拒絶を抑制するＩＬ−２７アゴニストの潜在力を評価するため、ＩＬ−２７アゴニストを、自然流産率が高いマウス、自然流産率が高いあるいは低い妊娠マウスに投与する。着床時期（４日目）および胚に対する免疫学的反応が最初に検出される日（６日目）に対応する妊娠４日目および６日目など様々な時点で投与を行う。吸収された胚の定量を妊娠１２日目に行う。高率で流産が起こるＣＢＡ×ＤＢＡ交配マウス（ｎ＝１４）の吸収胚率を、対照Ｂａｌｂ／Ｃ×ＤＢＡ交配マウスのそれと比較する。

本明細書に引用するすべての参考文献については、すべての目的ために参照によってその全体を援用すべく、１つ１つの刊行物、特許または特許出願を具体的に個々に示しているのと同じ程度に参照によって本明細書に援用する。

当業者には明らかなように、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、その多くの変形例および変更例が可能である。本明細書に記載の具体的な実施形態は、例示のみを目的として提供されるものであり、本発明は、添付の特許請求の範囲の用語およびその特許請求の範囲が権利を有する等価物の全範囲によってのみ限定される。

Claims (23)

1. 胎児性抗原に対する母体の寛容を誘導する方法であって、免疫性流産のリスクがあるか、免疫性流産に罹患している被検体に有効量のＩＬ−２７アゴニストを投与する工程を含む、方法。
2. 前記被検体はヒトであり、前記ＩＬ−２７アゴニストは、
   ａ）妊娠第１三半期；
   ｂ）妊娠第２三半期；
   ｃ）妊娠第３三半期；または
   ｄ）妊娠第１、妊娠第２および妊娠第３三半期
   の間に投与される、請求項１に記載の方法。
3. 前記ＩＬ−２７アゴニストはＩＬ−２７タンパク質である、請求項１に記載の方法。
4. 前記ＩＬ−２７タンパク質はヒトＩＬ−２７タンパク質である、請求項３に記載の方法。
5. 前記ＩＬ−２７アゴニストは、ＩＬ−２７受容体（ＩＬ−２７Ｒ）複合体の少なくとも１つのサブユニットに結合するアゴニスト抗体である、請求項１に記載の方法。
6. 前記ＩＬ−２７Ｒ複合体はヒトＩＬ−２７Ｒ複合体である、請求項５に記載の方法。
7. 前記アゴニスト抗体は前記ＩＬ−２７Ｒ複合体のシグナル伝達を誘導する、請求項５に記載の方法。
8. 少なくとも１個の胚の子宮内膜への着床を促進する方法であって、有効量のＩＬ−２７アゴニストを被検体に投与する工程を含む、方法。
9. 前記被検体はヒトであり、ＩＬ−２７アゴニストは、
   ａ）妊娠第１三半期；
   ｂ）妊娠第２三半期；
   ｃ）妊娠第３三半期；または
   ｄ）妊娠第１、妊娠第２および妊娠第３三半期
   の間に投与される、請求項８に記載の方法。
10. 前記ＩＬ−２７アゴニストはＩＬ−２７タンパク質である、請求項８に記載の方法。
11. 前記ＩＬ−２７タンパク質はヒトＩＬ−２７タンパク質である、請求項１０に記載の方法。
12. 前記ＩＬ−２７アゴニストは、ＩＬ−２７Ｒ複合体の少なくとも１つのサブユニットに結合するアゴニスト抗体である、請求項８に記載の方法。
13. 前記ＩＬ−２７複合体はヒトＩＬ−２７複合体である、請求項１２に記載の方法。
14. 前記アゴニスト抗体は前記ＩＬ−２７Ｒ複合体のシグナル伝達を誘導する、請求項１２に記載の方法。
15. 被検体が免疫性流産であるかどうかを判定する診断方法であって、該被検体から得られた生物学的サンプル中のＩＬ−２７またはＩＬ−２７Ｒの存在またはレベルを検出する工程と、該被検体が自然流産を有しているかどうかを判定する工程とを含む、診断方法。
16. 前記生物学的サンプルは組織サンプル、細胞サンプルまたは血清サンプルからなる群から選択される、請求項１５に記載の方法。
17. 前記組織サンプルは絨毛膜絨毛サンプルおよび胎盤サンプルからなる群から選択される、請求項１６に記載の方法。
18. 被検体が免疫性流産を起こすリスクがあるかどうかを判定する予後診断方法であって、該被検体から得られた生物学的サンプルまたは該サンプルの単離物中のＩＬ−２７またはＩＬ−２７ＲのｍＲＮＡまたはポリペプチドの存在またはレベルを検出する工程を含み、それにより該被検体が自然流産を起こすリスクがあるかどうかを判定する、予後診断方法。
19. 前記生物学的サンプルは組織サンプル、細胞サンプルまたは血清サンプルからなる群から選択される、請求項１８に記載の方法。
20. 前記組織サンプルは絨毛膜絨毛サンプルおよび胎盤サンプルからなる群から選択される、請求項１９に記載の方法。
21. 免疫性流産のリスクがあるか、免疫性流産に罹患している被検体に対するＩＬ−２７アゴニストによる処置をモニターする方法であって、該被検体からの生物学的サンプルまたは該サンプルの単離物中のＴｈ１またはＴｈ２サイトカインのｍＲＮＡまたはポリペプチドのレベルを測定する工程を含み、それにより該被検体が免疫性流産のリスクがあるか、免疫性流産に罹患しているどうかを判定する、方法。
22. 前記Ｔｈ１サイトカインはＴＮＦ−α、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１２およびＲＡＮＴＥＳからなる群から選択される、請求項２１に記載の方法。
23. 前記Ｔｈ２サイトカインはＣＳＦ−１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１０、ＩＬ−４、ＩＬ−１１、ＴＧＦおよびＩＬ−３からなる群から選択される、請求項２１に記載の方法。

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