JP2010501486A

JP2010501486A - 移植用の臓器又は組織を保存及び／又は調製するための方法及び組成物

Info

Publication number: JP2010501486A
Application number: JP2009524618A
Authority: JP
Inventors: フィンケルシュタイン，ジャック，ジュニア; ライオンズ，シー・ニール
Original assignee: リジェナークス・バイオファーマスーティカルズ・インコーポレイテッド
Priority date: 2006-08-18
Filing date: 2007-08-06
Publication date: 2010-01-21
Also published as: IL196995A0; CA2660928A1; KR20090049605A; CN101505782A; EP2061491A2; WO2008024195A3; AU2007288410A1; US20100278934A1; WO2008024195A2; MX2009001702A

Abstract

被験体のための移植用の臓器又は組織を保存及び／又は調製する方法であって、そのような治療を要する被験体、臓器又は組織に有効量の組成物を投与することを包含し、その組成物はポリペプチド剤、例えばチモシンベータ４（ＴＢ４）、ＴＢ４の生物活性を有するＴＢ４のアイソフォーム、類縁体又は誘導体、ＴＢ４の生物活性を有するＴＢ４のＮ末端変異体、ＴＢ４の生物活性を有するＴＢ４のＣ末端変異体、ＬＫＫＴＥＴ又はその保存的変異体、ＬＫＫＴＮＴ又はその保存的変異体、ＫＬＫＫＴＥＴ又はその保存的変異体、ＬＫＫＴＥＴＱ又はその保存的変異体、ＴＢ４スルホキシド、ＴＢ４^ａｌａ、ＴＢ９、ＴＢ１０、ＴＢ１１、ＴＢ１２、ＴＢ１３、ＴＢ１４、ＴＢ１５、ゲルソリン、ビタミンＤ結合タンパク質（ＤＢＰ）、プロフィリン、コフィリン、アドセベルチン、プロポミオシン、フィンシリン、デパクチン、ＤＮａｓｅｌ、ビリン、フラグミン、セベリン、キャッピングタンパク質、β−アクチニン又はアクメンチン、又は臓器又は組織中の上記ポリペプチド剤又はその保存的変異体の生成を刺激する刺激剤を含む。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２００６年８月１８日に出願された米国暫定出願番号６０／８３８，３８３号の利益を請求する。

発明の背景
発明の分野
本発明は、移植用の臓器又は組織を保存及び／又は調製する分野に関連する。

背景技術
低体温は、臓器及び組織の貯蔵方法の大部分において利用されており、冷温曝露の間に直接的には細胞の細胞外環境を、間接的には細胞内環境を制御することによりもっとも効果的に適用されることが分かっている。細胞の細胞外環境を制御して貯蔵を最適化することは、静的な冷温保存（又はフラッシュ貯蔵）又は低温連続灌流の何れかを包含する、異なる方策に基づいている。これらの方策は、貯蔵を最適化するためには細胞外環境の介入的制御に対する種々の道筋を必要とし、従って、このような方策を実現するために使用される溶液のための異なる設計要素を必要とする。

原則として、冷温フラッシュ保存又は貯蔵は、氷点（例えば約０℃）近傍であるがそれより低温ではない温度まで低下することで、任意の重要な程度まで代謝を支持する必要がなくなること、並びに細胞内及び細胞外のコンパートメント間の水及びイオンの正しい分布が代謝的よりもむしろ生理学的な手段により維持することができるという根拠に基づいている。代謝ポンプが不活性化されている期間、膜貫通イオンフラックスのための駆動力は、細胞内と細胞外の流体間のイオンバランスにおける相違である。水の取り込み（細胞膨潤）のための駆動力は、不透過性細胞内アニオンである。従って、細胞外の環境を操作して化学ポテンシャル勾配を無くすことにより、変化を防止又は制限することができる。これに基づいて、種々のフラッシュ、又は臓器及び組織の洗浄溶液が考案され、冷温保存に関して評価されている。これらの溶液は、一部の点において細胞内流体と似ていることから、頻繁には「細胞内」液とも称される。

細胞内フラッシュ溶液の原則的設計要素は、イオンバランス（顕著には１価のカチオン）を調節すること、及び水の取り込みを担う細胞内浸透圧のバランス調節を行う不透過性溶質を包含することにより浸透圧を上昇させることである。しかしながら、冷温フラッシュ溶液の効能のための重要な要因は、イオンの不均衡、特にカリウム枯渇が容易に、かつ急速に逆行可能であることが判明していることから、不透過性の溶質を包含することによる細胞浮腫の防止でありうる。これらの方法は約４〜３６時間、臓器及び組織を安定化させる。

１９８８年以前は、臓器及び組織の臨床的貯蔵のための標準的な溶液はコリンズ溶液であり、これはリン酸カリウム、硫酸マグネシウム及びグルコースを含有している。しかしながら近年では、これは、硫酸マグネシウムを無添加とした「ユーロコリンズ」と称される改良版、或いはより広範には大部分のリン酸アニオンがラクトビオネートで置き換えられ、そしてグルコースがラフィノースで置き換えられているウイスコンシン大学溶液（ＷＵ溶液）に取って代わられている。これらのより大型の分子は、従来の溶液と比較して、低体温保存の間の細胞膨潤の有害作用に対抗する保護を向上させると考えられる。

移植用の臓器及び組織の保存及び調製のための進歩した方法及び組成物が当該分野でなお望まれている。

発明の概要
１つの態様によれば、被験体に対する移植用の臓器又は組織を保存及び／又は調製するための方法及び組成物は、臓器、組織又は被験体に対して有効量の組成物を投与することを包含し、その組成物はポリペプチド剤、例えばチモシンベータ４（ＴＢ４）、ＴＢ４の生物活性を有するＴＢ４のアイソフォーム、類縁体又は誘導体、ＴＢ４の生物活性を有するＴＢ４のＮ末端変異体、ＴＢ４の生物活性を有するＴＢ４のＣ末端変異体、ＬＫＫＴＥＴ又はその保存的変異体、ＬＫＫＴＮＴ又はその保存的変異体、ＫＬＫＫＴＥＴ又はその保存的変異体、ＬＫＫＴＥＴＱ又はその保存的変異体、ＴＢ４スルホキシド、ＴＢ４^ａｌａ、ＴＢ９、ＴＢ１０、ＴＢ１１、ＴＢ１２、ＴＢ１３、ＴＢ１４、ＴＢ１５、ゲルソリン、ビタミンＤ結合タンパク質（ＤＢＰ）、プロフィリン、コフィリン、アドセベルチン（ａｄｖｅｒｓｅｔｉｎ）、プロポミオシン、フィンシリン（ｆｉｎｃｉｌｉｎ）、デパクチン、ＤＮａｓｅｌ、ビリン（ｖｉｌｉｎ）、フラグミン、セベリン、キャッピングタンパク質、β−アクチニン又はアクメンチン、あるいは移植用の臓器又は組織を保存及び調製するために該臓器又は組織中での該ポリペプチド又はその保存的変異体の生成を刺激する刺激剤を含む。

発明の詳細な説明
如何なる特定の理論にも制約されないが、アクチン隔離ポリペプチド、例えばチモシンベータ４（Ｔβ４又はＴＢ４）及び他の物質、例えばアミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴ又はＬＫＫＴＮＴを含有するアクチン隔離ポリペプチド又はポリペプチドフラグメント、あるいはその保存的変異体は、移植用の臓器又は組織を保存及び調製する。

チモシンベータ４は、インビトロの内皮細胞の遊走及び分化の間にアップレギュレートされるタンパク質として当初は発見された。チモシンベータ４は、最初は胸腺から単離され、種々の組織中で発見される４３アミノ酸の４．９ｋＤａの偏在するポリペプチドである。このタンパク質に関しては数種類の役割が唱えられており、それには内皮細胞の分化及び遊走、Ｔ細胞分化、アクチン隔離、脈管形成及び創傷治癒における役割が包含される。

本発明による組成物は、移植ドナー又は移植レシピエントの内部又は外部に存在する臓器又は組織に投与してよい。

１つの実施形態によれば、本発明は被験体に対する移植用の臓器又は組織を保存及び／又は調製する方法であって、被験体の外部の臓器又は組織に有効量の組成物を投与することを含み、その組成物は、移植用の臓器又は組織を保存及び／又は調製するアミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴ又はＬＫＫＴＮＴを含むポリペプチド又はその保存的変異体でありうるチモシンベータ４（ＴＢ４）、ＴＢ４の生物活性を有するＴＢ４のアイソフォーム、類縁体又は誘導体、ＴＢ４の生物活性を有するＴＢ４のＮ末端変異体、ＴＢ４の生物活性を有するＴＢ４のＣ末端変異体、ＬＫＫＴＥＴ又はその保存的変異体、ＬＫＫＴＮＴ又はその保存的変異体、ＫＬＫＫＴＥＴ又はその保存的変異体、ＬＫＫＴＥＴＱ又はその保存的変異体、ＴＢ４スルホキシド、ＴＢ４^ａｌａ、ＴＢ９、ＴＢ１０、ＴＢ１１、ＴＢ１２、ＴＢ１３、ＴＢ１４、ＴＢ１５、ゲルソリン、ビタミンＤ結合タンパク質（ＤＢＰ）、プロフィリン、コフィリン、アドセベルチン、プロポミオシン、フィンシリン、デパクチン、ＤＮ
ａｓｅｌ、ビリン、フラグミン、セベリン、キャッピングタンパク質、β−アクチニン又はアクメンチンを含むポリペプチド剤を含む。ポリペプチド剤は、好ましくはチモシンβ４及び／又はそのＴβ４アイソフォーム、類縁体又は誘導体である。例としては、アミノ酸配列ＫＬＫＫＴＥＴ、ＬＫＫＴＥＴＱを含有するポリペプチド、Ｔβ４のＮ末端変異体及びＴβ４のＣ末端変異体が挙げられる。本発明はまた、酸化Ｔβ４を利用してもよい。他の実施形態によれば、ポリペプチド剤はチモシンベータ４又は酸化Ｔβ４以外である。

別の実施形態によれば、本発明はドナー又は移植レシピエントの何れかである被験体に対する移植用の臓器又は組織を保存及び／又は調製する方法であって、被験体の内部の臓器又は組織に有効量の組成物を投与することを含み、その組成物は、移植用の臓器又は組織を保存及び／又は調製するアミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴ又はＬＫＫＴＮＴを含むポリペプチド又はその保存的変異体でありうるチモシンベータ４（ＴＢ４）、ＴＢ４の生物活性を有するＴＢ４のアイソフォーム、類縁体又は誘導体、ＴＢ４の生物活性を有するＴＢ４のＮ末端変異体、ＴＢ４の生物活性を有するＴＢ４のＣ末端変異体、ＬＫＫＴＥＴ又はその保存的変異体、ＬＫＫＴＮＴ又はその保存的変異体、ＫＬＫＫＴＥＴ又はその保存的変異体、ＬＫＫＴＥＴＱ又はその保存的変異体、ＴＢ４スルホキシド、ＴＢ４^ａｌａ、ＴＢ９、ＴＢ１０、ＴＢ１１、ＴＢ１２、ＴＢ１３、ＴＢ１４、ＴＢ１５、ゲルソリン、ビタミンＤ結合タンパク質（ＤＢＰ）、プロフィリン、コフィリン、アドセベルチン、プロポミオシン、フィンシリン、デパクチン、ＤＮａｓｅｌ、ビリン、フラグミン、セベリン、キャッピングタンパク質、β−アクチニン又はアクメンチンを含むポリペプチド剤を含む。ポリペプチド剤は、好ましくはチモシンβ４及び／又はそのＴβ４アイソフォーム、類縁体又は誘導体である。例としては、アミノ酸配列ＫＬＫＫＴＥＴ、ＬＫＫＴＥＴＱを含有するポリペプチド、Ｔβ４のＮ末端変異体又はＴβ４のＣ末端変異体が挙げられる。本発明はまた、酸化Ｔβ４を利用してもよい。他の実施形態によれば、抗菌剤はチモシンベータ４又は酸化Ｔβ４以外である。

臓器は皮膚、心臓、肝臓、腎臓、膵臓、小腸、又は肺を挙げることができるが、これらに限定されない。組織は、皮膚、心臓、心臓弁、骨、骨髄、血管及び輸液用血液を挙げることができるが、これらに限定されない。

本発明により使用しうる組成物は、チモシンベータ４（ＴＢ４）、ＴＢ４の生物活性を有するＴＢ４のアイソフォーム、類縁体又は誘導体、ＴＢ４の生物活性を有するＴＢ４のＮ末端変異体、ＴＢ４の生物活性を有するＴＢ４のＣ末端変異体、ＬＫＫＴＥＴ又はその保存的変異体、ＬＫＫＴＮＴ又はその保存的変異体、ＫＬＫＫＴＥＴ又はその保存的変異体、ＬＫＫＴＥＴＱ又はその保存的変異体、ＴＢ４スルホキシド、ＴＢ４^ａｌａ、ＴＢ９、ＴＢ１０、ＴＢ１１、ＴＢ１２、ＴＢ１３、ＴＢ１４、ＴＢ１５、ゲルソリン、ビタミンＤ結合タンパク質（ＤＢＰ）、プロフィリン、コフィリン、アドセベルチン、プロポミオシン、フィンシリン、デパクチン、ＤＮａｓｅｌ、ビリン、フラグミン、セベリン、キャッピングタンパク質、β−アクチニン又はアクメンチンを含むポリペプチド剤、例えばチモシンβ４（Ｔβ４）及び／又はＴβ４アイソフォーム、類縁体又は誘導体のようなポリペプチド剤、例えば酸化Ｔβ４、Ｔβ４のＮ末端変異体及び／又はＴβ４のＣ末端変異体、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴ又はＬＫＫＴＮＴを含むか本質的にこれよりなるポリペプチド又はポリペプチドフラグメント、あるいはそれらの保存された変異体であって、移植用の臓器又は組織を保存及び／又は調製するものを包含する。参照により本明細書に組み込まれる国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ９９／１７２８２号は、本発明により有用でありうるＴβ４のアイソフォーム、並びに、本発明の実施形態とともに利用しうるアミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴ又はＬＫＫＴＮＴ、あるいはその保存的変異体を開示している。参照により本明細書に組み込まれる国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ９９／００８３３（ＷＯ９９／４９８８３）号は、本発明の実施形態により利用しうる酸化チモシンβ４を開示している。本発明は、Ｔβ４及びＴβ４アイソフォームに関して主に後述するが、以下の説明はアミノ酸配
列ＬＫＫＴＥＴ又はＬＫＫＴＮＴ、ＬＫＫＴＥＴ又はＬＫＫＴＮＴを含むか本質的にこれよりなるポリペプチド及びフラグメント、それらの保存された変異体であって移植用の臓器又は組織を保存及び調製するもの、及び／又はＴβ４アイソフォーム、類縁体又は誘導体、例えばＴβ４のＮ末端変異体、Ｔβ４のＣ末端変異体及びＴβ４の拮抗剤に等しく適用可能であることを意図していると理解しなければならない。本発明はまた、酸化Ｔβ４を利用してもよい。

１つの公知の移植溶液はウイスコンシン大学溶液であり、これは例えばＫＨ_２ＰＯ_４（２５ミリモル／Ｌ）、ＭｇＳＯ_４（５ミリモル／Ｌ）、ラフィノース（３０ミリモル／Ｌ）、ヒドロキシエチルペンタフラクション澱粉（５０ｇ／Ｌ）、ペニシリン（２００，０００Ｕ／Ｌ）、インスリン（４０Ｕ／Ｌ）、デキサメタゾン（１６ｍｇ／ｄＬ）、Ｋラクトビオネート（１００ミリモル／Ｌ）、グルタチオン刺激ホルモン（３ミリモル／Ｌ）、アデノシン（５ミリモル／Ｌ）、アロプリノール（１ミリモル／Ｌ）、Ｎａ（２５ミリモル／Ｌ）、及びＫ（１２５ミリモル／Ｌ）を含有しうる。チモシンβ４（Ｔβ４）及び／又はＴβ４アイソフォームのようなポリペプチド剤は、そのような溶液に対して例えば約０．００１〜５０重量％の範囲内の量で添加してよい。

別の公知の移植溶液はユーロコリンズ溶液であり、これは例えばナトリウム（１０ｍＭ）、塩化物（１５ｍＭ）、カリウム（１１５ｍＭ）、重炭酸塩（１０ｍＭ）、リン酸塩（５０ｍＭ）及びグルコース（１９５ｍＭ）を含有しうる。チモシンβ４（Ｔβ４）及び／又はＴβ４アイソフォームのようなポリペプチド剤は、そのような溶液に対して例えば約０．００１〜５０重量％の範囲内の量で添加してよい。

１つの実施形態において、本発明は被験体に対する移植用の臓器又は組織を保存及び／又は調製する方法を提供し、被験体の外部の組織又は臓器に有効量の組成物を投与することを含み、その組成物はアミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴ又はＬＫＫＴＮＴを含むポリペプチド剤、その保存的変異体、あるいは移植用の臓器又は組織を保存及び／又は調製するために該臓器又は組織中でのＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴポリペプチド又はその保存的変異体の生成を刺激する刺激剤を含む。

別の実施形態において、本発明は移植用の臓器又は組織を保存及び調製する方法を提供し、被験体の内部の組織又は臓器に有効量の組成物を投与することを含み、その組成物は、該臓器又は組織において、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴ又はＬＫＫＴＮＴを含むポリペプチド剤、その保存的変異体、あるいは移植用の臓器又は組織を保存及び／又は調製するために該臓器又は組織中でのＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴポリペプチド又はその保存的変異体の生成を刺激する刺激剤を含む。

１つの実施形態において、本発明は本明細書に記載されるようなポリペプチド剤を含有する有効量の組成物に臓器又は組織を接触させることによる、被験体に対する移植用の臓器又は組織を保存及び／又は調製する方法を提供する。接触は直接又は全身に対するものであってよい。直接投与の例は、例えば、本明細書に記載されるようなポリペプチド剤を含む溶液、ローション、膏薬、ゲル、クリーム、ペースト、スプレー、懸濁液、分散液、ヒドロゲル、泡状物、軟膏又はオイルに、直接適用により組織を接触させることが挙げられる。薬剤の投与は、移植溶液において、本明細書に記載されるようなポリペプチド剤又は注射用水を包含しうる医薬上許容しうる担体を含有する組成物を用いながら、灌流、注射、注入、局所投与、又はその組み合わせにより実施される、好ましくは約−５℃〜約１
０℃の範囲内の温度、より好ましくは約−１℃〜約６℃の温度範囲内、更に好ましくは約０℃〜約５℃の温度範囲内における静的冷温保存、低温連続灌流、又は任意の他の適当な方法を挙げることができる。

多くのＴβ４アイソフォームが同定されており、Ｔβ４の既知アミノ酸配列に対して約７０％、約７５％、又は約８０％以上の相同性を有する。そのようなアイソフォームは、例えばＴβ４^ａｌａ、Ｔβ９、Ｔβ１０、Ｔβ１１、Ｔβ１２、Ｔβ１３、Ｔβ１４及びＴβ１５を挙げることができる。Ｔβ４と同様、Ｔβ１０及びＴβ１５アイソフォームもアクチンを隔離することが分かっている。Ｔβ４、Ｔβ１０及びＴβ１５並びにこれらの他のアイソフォームは、アクチンの隔離又は結合の媒介に関与していると考えられるアミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴ又はＬＫＫＴＮＴを共有している。如何なる特定の理論にも制約されないが、本明細書に記載されるようなポリペプチド剤の活性は、少なくとも部分的にはそのような薬剤の抗炎症活性に起因ものでありうる。Ｔβ４はまたアクチンの重合を調節できる（例えばβ−チモシンは遊離型Ｇ−アクチンを隔離することによりＦ−アクチンを脱重合すると考えられる）。アクチン重合を調節するＴβ４の能力は、ＬＫＫＴＥＴ又はＬＫＫＴＮＴ配列を介したアクチンへの結合又はそれを隔離する能力に起因しうる。従って、Ｔβ４の場合と同様、抗炎症性及び／あるいはアクチンに結合又は隔離か、あるいはアクチン重合を調節する他のタンパク質、例えばアミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴ又はＬＫＫＴＮＴを有するＴβ４アイソフォームは、本明細書に記載される通り、単独又はＴβ４と組み合わせて有効でありうる。

上記のように、本明細書に記載されるような既知のＬＫＫＴＥＴ又はＬＫＫＴＮＴポリペプチド、例えばＴβ４アイソフォーム、例えばＴβ４^ａｌａ、Ｔβ９、Ｔβ１０、Ｔβ１１、Ｔβ１２、Ｔβ１３、Ｔβ１４及びＴβ１５、並びに未だ同定されていないＴβ４アイソフォームは、本発明の方法、組織又は臓器において有用となることを特に意図する。本明細書に記載するようなこのようなＬＫＫＴＥＴ又はＬＫＫＴＮＴポリペプチド、例えばＴβ４アイソフォームは、被験体、組織又は臓器において実施される方法を包含する本発明の方法において有用である。従って本発明は、更に本明細書に記載されるようなＬＫＫＴＥＴ又はＬＫＫＴＮＴポリペプチド、例えばＴβ４、並びにＴβ４アイソフォームＴβ４^ａｌａ、Ｔβ９、Ｔβ１０、Ｔβ１１、Ｔβ１２、Ｔβ１３、Ｔβ１４及びＴβ１５、及び移植片及び／又は医薬上許容しうる担体を含む組成物を提供する。

更に、適切な隔離、結合、可動化又は重合アッセイにおいて明らかにされるか、あるいは、例えばＬＫＫＴＥＴ又はＬＫＫＴＮＴのようなアクチン結合を媒介するアミノ酸配列の存在により同定されるように、抗炎症活性及び／又はアクチン隔離又は結合能力を有するか、あるいはアクチンを可動化するか又はアクチン重合を調節することができる他の薬剤又はタンパク質は、同様に本発明の方法において使用できる。そのようなタンパク質は、例えばゲルソリン、ビタミンＤ結合タンパク質（ＤＢＰ）、プロフィリン、コフィリン、デパクチン、ＤＮａｓｅｌ、ビリン、フラグミン、セベリン、キャッピングタンパク質、β−アクチニン又はアクメンチンを挙げることができる。そのような方法は被験体において実施されるものを包含するため、本発明は更に本明細書に記載される通りゲルソリン、ビタミンＤ結合タンパク質（ＤＢＰ）、プロフィリン、コフィリン、デパクチン、ＤＮａｓｅｌ、ビリン、フラグミン、セベリン、キャッピングタンパク質、β−アクチニン及びアクメンチンを含む組成物を提供する。従って、本発明はアミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴ又はＬＫＫＴＮＴ及びその保存的変異体を含むポリペプチドの使用を包含する。

本明細書で使用されるように、「保存的変異体」という用語又はその文法的変化型は、アミノ酸残基の生物学的に同様な別の残基による置き換えを意味する。保存的変異の例は、疎水性の残基、例えばイソロイシン、バリン、ロイシン又はメチオニンの別のものとの置き換え、極性残基の別のものとの置き換え、例えばリジンのアルギニンへの置換、アス
パラギン酸のグルタミン酸への置換、又はアスパラギンのグルタミンへの置換等が挙げられる。

Ｔβ４は多くの組織及び細胞の型に局在し、このためＴβ４又は本明細書に記載されるような別のポリペプチド剤等のＬＫＫＴＥＴ又はＬＫＫＴＮＴポリペプチドの生成を刺激する薬剤を組成物に添加するか、あるいは薬剤が組成物を構成することにより組織及び／又は細胞からのポリペプチド剤の生成をもたらすことができる。そのような刺激剤は成長因子のファミリのメンバ、例えばインスリン様成長因子（ＩＧＦ−１）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、表皮成長因子（ＥＧＦ）、形質転換成長因子ベータ（ＴＧＦ−β）、塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）、チモシンα１（Ｔα１）及び血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）を包含うる。より好ましくは、刺激剤は形質転換成長因子ベータ（ＴＧＦ−β）又はＴＧＦ−βスーパーファミリの別のメンバである。

１つの実施形態によれば、被験体、臓器又は組織は、被験体、臓器又は組織における本明細書に定義されるようなポリペプチド剤の生成を刺激する刺激剤で治療される。

更に、移植用の臓器又は組織の保存及び調製に役立つ他の薬剤は、本明細書に記載されるようなポリペプチド剤と共に組成物に添加されうる。例えば、限定しないが単独又は組み合わせにおける本明細書に記載されるようなポリペプチド剤を有効量における以下の薬剤：抗生物質、ＶＥＧＦ、ＫＧＦ、ＦＧＦ、ＰＦＧＦ、ＴＧＦβ、ＩＧＦ−１、ＩＧＦ−２、ＩＬ−１、プロチモシンα及び／又はチモシンα１の任意の１つ以上と組み合わせて添加することができる。

本発明はまた、移植片中の本明細書に記載されるような治療有効量のポリペプチド剤及び／又は製薬上許容しうる担体を含む組成物も包含する。

治療をもたらす実際の投薬量、あるいは試薬、製剤又は組成物は多くの要因、例えば臓器、組織又は被験体の大きさ及び健康状態により変動する。しかしながら、当業者は当該分野でよく知られている任意の適当な方法を使用して、使用すべき適切な投薬量を決定することができる。

適当な製剤は、本明細書に記載されるようなポリペプチド剤を約０．００１〜５０重量％の範囲内、より好ましくは約０．０１〜０．１重量％の範囲内、最も好ましくは約０．０５重量％の濃度において包含しうる。

本明細書に記載されるような方策においては、本明細書に記載されるようなポリペプチド剤の投与又は送達の種々の経路、例えば被験体への任意の従来の投与手法（例えば限定しないが灌流、注射、注入、又は局所投与）を用いる。本明細書に記載されるようなポリペプチド剤を使用又は含有する方法及び組成物は、移植片及び／又は医薬上許容しうる非毒性の賦形剤又は担体と混合することにより、医薬組成物に製剤しうる。

本発明は、本明細書に記載されるようなポリペプチド剤と相互作用するか、これを増強するか、又は抑制する抗体の使用を包含する。異なるエピトープ特異性を有するプールされたモノクローナル抗体より本質的になる抗体、並びに、個別のモノクローナル抗体の調製品が提供される。モノクローナル抗体は、上記したＰＣＴ／ＵＳ９９／１７２８２号に開示されるような当業者に周知の方法により、タンパク質の抗原含有フラグメントから製造される。抗体という用語は本発明においては、モノクローナル及びポリクローナル抗体を包含することを意味する。

更に別の実施形態においては、本発明は遺伝子発現を調節する有効量の刺激剤を投与す
ることにより被験体を治療する方法を提供する。「調節」という用語は、本明細書に記載されるようなポリペプチドが過剰発現される場合は、発現の阻害又は抑制を、本明細書に記載されるようなポリペプチド剤が過少発現される場合は、発現の誘導を指す。「有効量」という用語は本明細書に記載されるようなポリペプチド剤の遺伝子発現を調節し、移植用の臓器又は組織の保存及び／又は調製をもたらす場合に有効である刺激剤の量を意味する。本明細書に記載されるようなポリペプチド剤の遺伝子発現を調節する刺激剤は、例えばポリヌクレオチドでありうる。ポリヌクレオチドはアンチセンス、トリプレックス剤、又はリボザイムでありうる。例えば本明細書に記載されるようなポリペプチド剤の構造遺伝子領域に対して、又はプロモーター領域に対して指向されたアンチセンスが利用されうる。本明細書に記載されるようなポリペプチド剤の遺伝子発現を調節する刺激剤はまた、短鎖干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）でありうる。

別の実施形態においては、本発明は本明細書に記載されるようなポリペプチド剤の活性を調節する化合物を利用するための方法を提供する。本明細書に記載されるようなポリペプチドの活性に影響する化合物（例えば拮抗剤及びアゴニスト）はポリペプチド、ペプチド模倣物、ポリペプチド、化合物、例えば亜鉛等の無機物、及び生物学的薬剤を包含する。

本明細書に記載されるような刺激剤のスクリーニング方法は、移植用の組織又は臓器を候補化合物と接触させること；及びＬＫＫＴＥＴ又はＬＫＫＴＮＴポリペプチドの該組織中での活性を測定することを含み、ここで該組織又は臓器中の該ペプチドの活性が、該候補化合物が欠失した対応する組織又は臓器中の該ポリペプチドの活性のレベルと比較して増大していることは、該化合物が該刺激剤を誘導することができることを示す。

実施例１
材料及び方法
ヒト肝星細胞ＨＳＣはＡＤＭＥＴテクノロジーから購入した肝細胞混合物から、ＯｐｔｉＰｒｅｐ（登録商標）密度勾配培地（Ｓｉｇｍａ）上で分離した後に得た。コンフルエントとなるまで培養し、次に２５０，０００細胞／６０ｍｍ皿の密度でプレーティングし、１０％ウシ胎児血清、１％非必須アミノ酸及び抗生物質を添加したＭＥＭ中で培養した。細胞を約４８時間培養液中に維持し、半コンフルエント時に１％アルブミン、抗生物質及び１％非必須アミノ酸を添加したＭＥＭを用いながら一夜血清枯渇した。Ｔｒｉｚｏｌ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）でＲＮＡを抽出し、プライマーを用いてＲＴ−ＰＣＲを実施した。ＧＡＰＤＨの発現を対照として使用した。全ての実験は２連で実施した。

結果：
種々の濃度のＴβ４と共に２４時間培養したＨＳＣから抽出されたＲＮＡのＰＣＲ分析によれば、分化したＨＳＣのマーカーであるα−ＳＭＡのｍＲＮＡ、並びに、分化に関与しうるＷｎｔ経路の遺伝子メンバーであるβ−カテニン及びＧＳＫ３βのｍＲＮＡの発現はそれぞれ４倍、３倍及び２．５倍増大したことが明らかになった。多くの場合において、増大は用量依存性であった。α−ＳＭＡの最大発現は１μｇ／ｍｌのＴβ４で得られたのに対し、β−カテニンのｍＲＮＡの最大増大は１ｎｇ／ｍｌで達成された。ＨＳＣ分化の別のマーカー、即ちＰＤＧＦ−β受容体の発現は、用量依存的様式で抑制された（１μｇ／ｍｌのＴβ４で７５％）。興味深いことに、肝細胞の再生において重要な役割を果たす既知の抗線維形成性サイトカインであるＨＧＦのｍＲＮＡの発現は１ｍｇ／ｍＬのＴβ４で４倍増大した。

肝細胞成長因子（ＨＧＦ）は肝細胞の栄養因子である。上記はＴβ４が肝星細胞によるＨＧＦの発現をアップレギュレートすることを明らかにしている。ラットＨＳＣとヒト肝細胞の共培物を調製する。対照は肝細胞のために使用した通常の無ホルモン培地（ｈｏｒ
ｍｏｎａｌｌｙ−ｄｅｆｉｎｅｄｍｅｄｉｕｍ）を用いてインキュベートする。実験培養物には同じ培地中Ｔβ４を１００ｎｇ／ｍｌ超添加する。コラゲナーゼ及びトリプシンを用いて１週間後に細胞を採取する。肝細胞は低速遠心分離によりＨＳＣから分離し、細胞を計数して全ＲＮＡ抽出のために使用する。肝細胞は増殖し、培養１週間後には数が増大する。細胞画分の純度は抗ヒトアルブミン抗体で染色後に測定する（ラットＨＳＣは陰性）。ＲＮＡをＲＴ−ＰＣＲのために使用し、肝特異的遺伝子の発現をヒトプライマーを用いて分析する。ラットプライマーを使用してラットＨＳＣの夾雑の程度を調べる。

Claims

移植用に臓器又は組織を保存又は調製するための方法であって、該方法は組成物に臓器又は組織を接触させることを含み、該組成物はポリペプチド剤、例えばチモシンベータ４（ＴＢ４）、ＴＢ４の生物活性を有するＴＢ４のアイソフォーム、類縁体又は誘導体、ＴＢ４の生物活性を有するＴＢ４のＮ末端変異体、ＴＢ４の生物活性を有するＴＢ４のＣ末端変異体、ＬＫＫＴＥＴ又はその保存的変異体、ＬＫＫＴＮＴ又はその保存的変異体、ＫＬＫＫＴＥＴ又はその保存的変異体、ＬＫＫＴＥＴＱ又はその保存的変異体、ＴＢ４スルホキシド、ＴＢ４^ａｌａ、ＴＢ９、ＴＢ１０、ＴＢ１１、ＴＢ１２、ＴＢ１３、ＴＢ１４、ＴＢ１５、ゲルソリン、ビタミンＤ結合タンパク質（ＤＢＰ）、プロフィリン、コフィリン、アドセベルチン、プロポミオシン、フィンシリン、デパクチン、ＤＮａｓｅｌ、ビリン、フラグミン、セベリン、キャッピングタンパク質、β−アクチニン又はアクメンチン、又は移植用の前記臓器又は組織を保存又は調製するために前記臓器又は組織中のポリペプチド剤又はその保存的変異体の生成を刺激する刺激剤を含む上記方法。
前記接触を被験体の身体の外部で行う、請求項１に記載の方法。
前記接触を被験体の身体の内部で行う、請求項１に記載の方法。
前記臓器又は組織を被験体の身体内部にある間に前記組成物で灌流する、請求項１に記載の方法。
前記身体は前記臓器又は組織のドナーのものである、請求項４に記載の方法。
前記身体は前記臓器又は組織の移植レシピエントのものである、請求項４に記載の方法。
前記組織が皮膚、心臓、心臓弁、骨、骨髄、血管、又は輸液用血液である、請求項１に記載の方法。
前記臓器が心臓、肝臓、腎臓、膵臓、小腸、又は肺である、請求項１に記載の方法。
前記組成物が移植用の前記臓器又は組織を保存する、請求項１記載の方法。
前記ポリペプチド剤が組み換え又は合成のポリペプチドである、請求項１に記載の方法。
前記組成物がＴβ４又はＴβ４のアイソフォームを含む、請求項１に記載の方法。
前記ポリペプチド剤がアミノ酸配列ＫＬＫＫＴＥＴ、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴＱ、Ｔβ４のＮ末端変異体、Ｔβ４のＣ末端変異体、又はＴβ４のアイソフォームを含む、請求項１に記載の方法。
組成物を直接投与又は全身投与の何れかにより投与する、請求項１記載の方法。
前記組成物を溶液、ゲル、クリーム、ペースト、ローション、スプレー、懸濁液、分散液、膏薬、ヒドロゲル、泡状物又は軟膏製剤の形態において直接投与する、請求項１に記載の方法。
前記ポリペプチド剤を、約−５℃〜約１０℃の範囲内の温度で静的冷却保存又は低温連
続灌流により前記臓器又は組織に投与するか、灌流、注射、注入、局所投与、又はその組み合わせにより投与する、請求項１に記載の方法。
前記組成物が更に水溶液及びリン酸カリウム、硫酸マグネシウム、グルコース、ラクトビオネート又はラフィノースの少なくとも１つを含む、請求項１に記載の方法。
移植用の臓器又は組織を保存又は調製するための組成物であって、該組成物はポリペプチド剤、例えばチモシンベータ４（ＴＢ４）、ＴＢ４の生物活性を有するＴＢ４のアイソフォーム、類縁体又は誘導体、ＴＢ４の生物活性を有するＴＢ４のＮ末端変異体、ＴＢ４の生物活性を有するＴＢ４のＣ末端変異体、ＬＫＫＴＥＴ又はその保存的変異体、ＬＫＫＴＮＴ又はその保存的変異体、ＫＬＫＫＴＥＴ又はその保存的変異体、ＬＫＫＴＥＴＱ又はその保存的変異体、ＴＢ４スルホキシド、ＴＢ４^ａｌａ、ＴＢ９、ＴＢ１０、ＴＢ１１、ＴＢ１２、ＴＢ１３、ＴＢ１４、ＴＢ１５、ゲルソリン、ビタミンＤ結合タンパク質（ＤＢＰ）、プロフィリン、コフィリン、アドセベルチン、プロポミオシン、フィンシリン、デパクチン、ＤＮａｓｅｌ、ビリン、フラグミン、セベリン、キャッピングタンパク質、β−アクチニン又はアクメンチン、又は前記ポリペプチド剤又はその保存的変異体の前記臓器又は組織における生成を刺激する刺激剤を含み、前記組成物が更に水溶液及びリン酸カリウム又はラクトビオネートの少なくとも１つ、及びグルコース又はラフィノースの少なくとも１つを含む、組成物。
Ｔβ４又はＴβ４のアイソフォームを含む、請求項１７に記載の組成物。
Ｔβ４を含む、請求項１７に記載の組成物。
前記組成物がＴβ４を含む、請求項１に記載の方法。