JP2010252790A - 流体の移動を制御するための染料組成物 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】第1の親和性基を有する第1の励起光によって励起されて発光を放射し得るか又は第2の染料にエネルギーを移動させ得る第1の染料と、(b)第2の親和性基を有する第2の励起光によって又は該第1の染料からのエネルギー移動によって、励起され得る第2の染料;を含んでいる、組成比を制御するためのキット。該第1の親和性基と該第2の親和性基が、互いに結合する親和性を有しており、該第1の親和性基が該第2の親和性基に結合したときに当該染料の間のエネルギー移動が可能となり、第1の励起光又は該第2の励起光で励起されたときに発光を放射し、該発光は、該第1の染料と該第2の染料の組成比についての尺度である;ように構成されていることを特徴とする、前記キット。
【選択図】図1
Description
(a) 第1の親和性基を有する第1の染料であって、第1の励起光によって励起されて発光を放射し得るか又は第2の染料にエネルギーを移動させ得る上記染料;
及び、
(b) 第2の親和性基を有する第2の染料であって、第2の励起光によって又は該第1の染料からのエネルギー移動によって、励起され得る上記染料;
を含んでいる、組成比を制御するためのキットであって、ここで、該キットは、該第1の染料と該第2の染料が、
該第1の親和性基と該第2の親和性基が、互いに結合する親和性を有しており、該第1の親和性基が該第2の親和性基に結合したときに当該染料の間のエネルギー移動が可能となる;
及び、
該第1の染料と該第2の染料の混合物が、該第1の励起光又は該第2の励起光で励起されたときに発光を放射し、該発光は、該第1の染料と該第2の染料の組成比についての尺度である;
ように構成されていることを特徴とする。
(a) 第1の親和性基を有する蛍光染料であって、第1の励起光によって励起されて芳香族構造又はヘテロ芳香族構造にエネルギーを移動させ得る第1の染料;
及び、
(b) 第2の親和性基を有する芳香族構造又はヘテロ芳香族構造であって、該芳香族構造又はヘテロ芳香族構造が該蛍光染料の蛍光発光を阻止するように、第1の染料からのエネルギー移動によって励起され得る上記芳香族構造又はヘテロ芳香族構造;
を含んでいる、組成比を制御するためのキットであって、ここで、該キットは、該第1の染料と該芳香族構造又はヘテロ芳香族構造が、
該第1の親和性基と該第2の親和性基が、互いに結合する親和性を有しており、該第1の親和性基が該第2の親和性基に結合したときに当該染料と当該芳香族構造又はヘテロ芳香族構造の間のエネルギー移動が可能となる;
及び、
該第1の染料と該芳香族構造又はヘテロ芳香族構造の混合物が、該第1の励起光で励起されたときに発光を放射し、該発光は、該第1の染料と該芳香族構造又はヘテロ芳香族構造の組成比についての尺度である;
ように構成されていることを特徴とする。
(a) 第1の親和性基を有する第1の染料を含んでいる第1の成分であって、励起光で励起されて発光を放射し得るか又は別の成分にエネルギーを移動させ得る上記成分;
及び、
(b) 第2の親和性基を有する第2の染料を含んでいる第2の成分であって、発光で又は該第1の染料からのエネルギー移動によって、励起され得る上記成分;
を含んでいる、組成比を制御するためのキットであって、ここで、該キットは、該第1の成分と該第2の成分が所定の組成比で組み合わされることを特徴とし、
ここで、該組成比は、励起光によって励起されたときに該染料によって放射される発光を測定することを介して制御可能であり;及び、
ここで、該第1の親和性基及び該第2の親和性基は互いに結合するように設計されており、該第1の親和性基が該第2の親和性基に結合したときに当該染料の間のエネルギー移動が可能となる。
(a) 第1の親和性基を有する第1の染料であって、励起光で励起されて発光を放射し得るか又は別の成分にエネルギーを移動させ得る上記染料;
及び、
(b) 第2の親和性基を有する第2の染料であって、発光で又は該第1の染料からのエネルギー移動によって、励起され得る上記染料;
を含んでいる、組成比に依存する光を放射する染料組成物であって、ここで、該染料組成物は、該第1の染料と該第2の染料が、
該第1の親和性基と該第2の親和性基が、互いに結合する親和性を有しており、該第1の親和性基が該第2の親和性基に結合したときに当該染料の間のエネルギー移動が可能となる;
及び、
励起光で励起されたときに該染料組成物によって放射される発光が、該第1の染料と該第2の染料の組成比についての尺度である;
であるように提供されていることを特徴とする。
(a) 該2種類の成分を混合するステップであって、該第1の成分は、該第1の親和性基を有している該第1の染料を含んでおり、及び、該第2の成分は、該第2の親和性基を有している該第2の染料を含んでいる上記ステップ;
(b) 該第1の染料と該第2の染料が該親和性基を介して互いに結合していないような条件下で励起光で励起されたときの第1の発光測定を実施するステップ;
(c) 該第1の染料と該第2の染料が該親和性基を介して互いに結合しているような条件下で励起光で励起されたときの第2の発光測定を実施するステップ;
及び、
(d) 該2種類の成分の組成比を確認するためにステップ(b)とステップ(c)の2回の発光測定を比較するステップ;
を含む。
(a) 2種類の成分を混合するステップであって、該第1の成分は、該第1の親和性基を有している該第1の染料を含んでおり、及び、該第2の成分は、該第2の親和性基を有している該第2の染料を含んでいる上記ステップ;
(b) 該第1の染料と該第2の染料が結合しているような条件下で励起光で励起されたときの第1の発光測定を実施するステップであって、該第1の蛍光測定は、該第2の染料に対して特異的な励起波長を適用し且つ該第2の染料の発光強度を測定して実施する上記ステップ;
(c) 該第1の染料と該第2の染料が結合しているような条件下で励起光で励起されたときの第2の発光測定を実施するステップであって、該第2の蛍光測定は、該第1の染料に対して特異的な励起波長を適用し且つ該第2の染料の発光強度を測定して実施する上記ステップ;
及び、
(d) 該2種類の成分の組成比を確認するためにステップ(b)とステップ(c)の2回の発光測定を比較するステップ;
を含む。
(a) 2種類の成分を混合するステップであって、該第1の成分は、該第1の親和性基を有している蛍光染料を含んでおり、及び、該第2の成分は、該第2の親和性基を有している該芳香族構造又はヘテロ芳香族構造を含んでいる上記ステップ;
(b) 該蛍光染料と該芳香族構造又はヘテロ芳香族構造が該親和性基を介して互いに結合していないような条件下で励起光で励起されたときの第1の発光測定を実施するステップであって、該第1の発光測定は、該蛍光染料に対して特異的な励起波長を適用し且つ該蛍光染料の発光強度を測定して実施する上記ステップ;
(c) 該蛍光染料と該芳香族構造又はヘテロ芳香族構造が該親和性基を介して互いに結合しているような条件下で励起光で励起されたときの第2の発光測定を実施するステップであって、該第2の発光測定は、該蛍光染料に対して特異的な励起波長を適用し且つ該蛍光染料の発光強度を測定して実施する上記ステップ;
及び、
(d) 該2種類の成分の組成比を確認するためにステップ(b)とステップ(c)の2回の発光測定を比較するステップ;
を含む。
(a) 第1の親和性基を有する第1の染料であって、第1の励起光によって励起されて発光を放射し得るか又は第2の染料にエネルギーを移動させ得る上記染料;
及び、
(b) 第2の親和性基を有する第2の染料であって、第2の励起光によって又は該第1の染料からのエネルギー移動によって、励起され得る上記染料;
を含んでいる、組成比を制御するためのキットであって、ここで、該キットは、該第1の染料と該第2の染料が、
該第1の親和性基と該第2の親和性基が、互いに結合する親和性を有しており、該第1の親和性基が該第2の親和性基に結合したときに当該染料の間のエネルギー移動が可能となる;
及び、
該第1の染料と該第2の染料の混合物が、該第1の励起光又は該第2の励起光で励起されたときに発光を放射し、該発光は、該第1の染料と該第2の染料の組成比についての尺度である;
ように構成されていることを特徴とする。
5-置換ピリミジン類、例えば、5-メチル-dC、5-アミノアリル-dU若しくは-dC、5-(アミノエチル-3-アクリルイミド)-dU、5-プロピニル-dU若しくは-dC、5-ハロゲン化-dU及び-dC;
N4-置換シチジン類、例えば、N4-エチル-dC;
N-置換プリン類、例えば、N6-エチル-dA、N2-エチル-dG;
8-置換プリン類、例えば、8-[6-アミノ)-ヘキシ-1-イル]-8-アミノ-dG若しくは-dA、8-ハロゲノ-dA若しくは-dG、8-アルキル-dG若しくは-dA;又は、
2-置換-dA、例えば、2-アミノ-dA。
2'-メトキシ-、2'-フルオロ-、2'-メチルセレノ-dU、2'-アリルオキシ-、4'-メチル-dU、-dT;-dU、-dA、-dG。
(a) 第1の親和性基を有する蛍光染料であって、第1の励起光によって励起されて芳香族構造又はヘテロ芳香族構造にエネルギーを移動させ得る第1の染料;
及び、
(b) 第2の親和性基を有する芳香族構造又はヘテロ芳香族構造であって、該芳香族構造又はヘテロ芳香族構造が該蛍光染料の蛍光発光を阻止するように、該第1の染料からのエネルギー移動によって励起され得る上記芳香族構造又はヘテロ芳香族構造;
を含んでいる、組成比を制御するためのキットであって、ここで、該キットは、該第1の染料と該芳香族構造又はヘテロ芳香族構造が、
該第1の親和性基と該第2の親和性基が、互いに結合する親和性を有しており、該第1の親和性基が該第2の親和性基に結合したときに当該染料と当該芳香族構造又はヘテロ芳香族構造の間のエネルギー移動が可能となる;
及び、
該第1の染料と該芳香族構造又はヘテロ芳香族構造の混合物が、該第1の励起光で励起されたときに発光を放射し、該発光は、該第1の染料と該芳香族構造又はヘテロ芳香族構造の組成比についての尺度である;
ように構成されていることを特徴とする。
(a) 該2種類の成分を混合するステップであって、該第1の成分は、該第1の親和性基を有している該第1の染料を含んでおり、及び、該第2の成分は、該第2の親和性基を有している該第2の染料を含んでいる上記ステップ;
(b) 該第1の染料と該第2の染料が該親和性基を介して互いに結合していないような条件下で励起光で励起されたときの第1の発光測定を実施するステップ;
(c) 該第1の染料と該第2の染料が該親和性基を介して互いに結合しているような条件下で励起光で励起されたときの第2の発光測定を実施するステップ;
及び、
(d) 該2種類の成分の組成比を確認するためにステップ(b)とステップ(c)の2回の発光測定を比較するステップ;
を含む。
(a) 該2種類の成分を混合するステップであって、該第1の成分は、該第1の親和性基を有している該第1の染料を含んでおり、及び、該第2の成分は、該第2の親和性基を有している該第2の染料を含んでいる上記ステップ;
(b) 該第1の染料と該第2の染料が結合しているような条件下で励起光で励起されたときの第1の発光測定を実施するステップであって、該第1の蛍光測定は、該第2の染料に対して特異的な励起波長を適用し且つ該第2の染料の発光強度を測定して実施する上記ステップ;
(c) 該第1の染料と該第2の染料が結合しているような条件下で励起光で励起されたときの第2の発光測定を実施するステップであって、該第2の蛍光測定は、該第1の染料に対して特異的な励起波長を適用し且つ該第2の染料の発光強度を測定して実施する上記ステップ;
及び、
(d) 該2種類の成分の組成比を確認するためにステップ(b)とステップ(c)の2回の発光測定を比較するステップ;
を含む。
(a) 該2種類の成分を混合するステップであって、該第1の成分は、該第1の親和性基を有している該蛍光染料を含んでおり、及び、該第2の成分は、該第2の親和性基を有している該芳香族構造又はヘテロ芳香族構造を含んでいる上記ステップ;
(b) 該蛍光染料と該芳香族構造又はヘテロ芳香族構造が該親和性基を介して互いに結合していないような条件下で励起光で励起されたときの第1の発光測定を実施するステップであって、該第1の発光測定は、該蛍光染料に対して特異的な励起波長を適用し且つ該蛍光染料の発光強度を測定して実施する上記ステップ;
(c) 該蛍光染料と該芳香族構造又はヘテロ芳香族構造が該親和性基を介して互いに結合しているような条件下で励起光で励起されたときの第2の発光測定を実施するステップであって、該第2の発光測定は、該蛍光染料に対して特異的な励起波長を適用し且つ該蛍光染料の発光強度を測定して実施する上記ステップ;
及び、
(d) 該2種類の成分の組成比を確認するためにステップ(b)とステップ(c)の2回の発光測定を比較するステップ;
を含む。
2種類の制御成分を含んでいる2成分溶液を用いたPCRセットアップ
成分混合物
(A) 以下のものからなる2倍濃縮マスターミックス:
・ 「RealTime ready DNA Master, Probes」[リアルタイムPCR用の試薬混合物(Roche Applied Science, cat no. 05502381001);これは、4μMの5'-末端が長波長蛍光染料(JA286, Roche Applied Science;最大励起波長 686nm, 最大発光波長 703nm)で末端標識されている配列番号3で示されるオリゴヌクレオチドを含んでいる];
・ 各1μMの配列番号1及び配列番号2で示されるヒトGAPDHプライマー;
・ 0.8μMのヒトGAPDH UPLプローブ(Universal Probe Library, Probe #60, Roche Applied Science, cat. no. 04688589001);
・ 4μMの3'-末端が非蛍光消光剤「Dabsyl」(Roche Applied Science, WO 2007/059816, 市販されているDabsyl CPGを用いて合成したもの)で末端標識されている配列番号4で示されるオリゴヌクレオチド。
制御測定(control measurement)において反応混合物の2成分溶液の種々の比率の効果を実証するために、マスターミックスAと検出ミックスBの種々の組合せを、Nanodrop Express液体ハンドリングロボット[Innovadyne, Part No.12043(Fluidics Module)及びPart No.11245(Stage Module)]を使用して、1536-ウェルPCRプレート(Roche Applied Science, cat. no.05358639001)の中に分配した。
LightCycler 1536装置上で、提供されている解析ソフトウェア(Roche Applied Science)を用いて、リアルタイム増幅及びピペット操作制御測定(pipetting control measurement)を実施した。
2成分溶液のうちの一方の50%を減らした部分を用いても、増幅曲線はまだ評価可能であったが、そのPCR性能は低下し始めた(図2を参照されたい)。除外された成分を用いた場合、結果はネガティブであった。
第2の制御成分としての種々の消光分子の使用
さまざまな染料又は消光分子を使用する上記制御概念の性能を実証するために、種々の利用可能な消光剤について、蛍光シグナルにおける温度依存性変化を示した。
・ 「RealTime ready DNA Master, Probes」[Roche Applied Science, cat no. 05502381001;これは、2μMの5'-末端が長波長蛍光染料(JA286, Roche Applied Science;最大励起波長 686nm, 最大発光波長 703nm)で末端標識されている配列番号3で示されるオリゴヌクレオチドを含んでいる;実施例1を参照されたい];
・ 2μMの3'-末端が以下の代替的な消光剤のうちの1種類で末端標識されている配列番号4で示されるオリゴヌクレオチド:
・ Dabsyl
・ Dabcyl
・ BHQ-2
・ 3×付加的なdG
・ 3×デアザdG
・ JA286 (自己消光用染料)
・ 無消光剤対照。
7種類の混合物のそれぞれの10μLを384-ウェルPCRプレート(Roche Applied Science, cat. no.04729749001)の中にピペットで移し、LightCycler 480装置(Roche Applied Science, cat. no.05015243001)内で上昇する温度勾配を用いて蛍光を測定した。
試験した全ての消光剤で、オリゴヌクレオチドの融解温度を超え、第1の染料成分が第2の消光剤成分に結合しなくなったとき、蛍光の実質的な増大が観察された(図4を参照されたい)。かくして、これらの消光剤は全て、結合状態及び非結合状態において種々の温度で2回の測定を行う制御概念に適していると思われる。
第2の制御成分としての非蛍光染料の使用
この方法においては、制御測定は、一定の温度で同じ蛍光検出波長で、しかし、2種類の異なった励起波長を用いて行う。第1の成分中の染料は、直接的な励起で測定することが可能である。第2の成分の非蛍光染料(US 2007/0077588を参照されたい)が当該親和性基を介して第1の染料に結合している場合、この組合せは、第1の染料は直接的に励起されることのない短い波長で該非蛍光染料を励起させて測定する。しかしながら、励起された非蛍光染料から近接している第1の染料へのエネルギー移動に起因して、第1の染料の蛍光発光が生じる。
(A) 以下のものからなる2倍濃縮成分A:
・ 「RealTime ready DNA Master, Probes」[リアルタイムPCR用の試薬混合物(Roche Applied Science, cat no. 05502381001);これは、4μMの5'-末端が長波長蛍光染料(JA286, Roche Applied Science;最大励起波長 686nm, 最大発光波長 703nm)で末端標識されている配列番号3で示されるオリゴヌクレオチドを含んでいる;実施例1を参照されたい]。
・ 4μMの3'-末端が非蛍光染料(4',5'-ジメトキシ-5-カルボキシフルオレセイン(5-DmF))で末端標識されている配列番号4で示されるオリゴヌクレオチド。
制御測定において反応混合物の2成分溶液の種々の量の効果を実証するために、種々の量の成分A及び成分Bを384-ウェルPCRプレート(Roche Applied Science, cat. no.04729749001)のウェルの中にピペットで移した。
一定温度で、LightCycler 480装置(Roche Applied Science, cat. no.05015243001)中で、蛍光を測定した。
第1の染料(618/660)の直接的な励起からのシグナルは種々の量の成分Aとの相関関係を示しており、非蛍光染料(498/660)を介した励起からのシグナルは一定量の成分Aの存在下における成分Bの部分との相関関係を示している(図5及び図6を参照されたい)。
2種類の成分について親和性基としての「dig/抗-dig」の使用
さまざまな親和性基を使用する上記制御概念の性能を実証するために、染料JA286及び非蛍光染料(実施例3を参照されたい)についての親和性基としてジゴキシゲニン(DIG)及び抗-ジゴキシゲニン抗体(抗-DIG)を使用した。測定するために、該溶液を非蛍光染料の吸収波長で励起させ、アクセプタ染料の発光波長で検出した。
(A) 以下のものを含んでいる2倍濃縮成分A:
・ 10mM Tris(pH8.3)と3mM MgCl2の中の4μMのDIG[これは、長波長蛍光染料JA286(Roche Applied Science;最大励起波長 686nm, 最大発光波長 703 nm;実施例1を参照されたい)で標識されている]。
・ 10mM Tris(pH8.3)と3mM MgCl2の中の4μMの抗-DIG抗体(Roche Applied Science)[これは、非蛍光染料(Roche Applied Science)で標識されている]。
制御測定において2成分溶液のうちの一方が不足している効果を実証するために、種々の量の成分A及び成分Bを384-ウェルPCRプレート(Roche Applied Science, cat. no.04729749001)のウェルの中にピペットで移した。
一定温度で、LightCycler 480装置(Roche Applied Science, cat. no.05015243001)中で、蛍光を測定した。
該混合物中に2種類の成分が存在している場合、励起されたドナーからアクセプタ染料までのエネルギー移動に起因して、蛍光シグナルを測定することができる。この蛍光シグナルは、当該2種類の成分のうちの一方が除外されている場合に測定され得るバックグラウンドシグナルよりも有意に高い(図7を参照されたい)。
Claims (18)
- (a) 第1の親和性基を有する第1の染料であって、第1の励起光によって励起されて発光を放射し得るか又は第2の染料にエネルギーを移動させ得る上記染料;
及び、
(b) 第2の親和性基を有する第2の染料であって、第2の励起光によって又は該第1の染料からのエネルギー移動によって、励起され得る上記染料;
を含んでいる、組成比を制御するためのキットであって、
該第1の染料と該第2の染料が、
該第1の親和性基と該第2の親和性基が、互いに結合する親和性を有しており、該第1の親和性基が該第2の親和性基に結合したときに当該染料の間のエネルギー移動が可能となる;
及び、
該第1の染料と該第2の染料の混合物が、該第1の励起光又は該第2の励起光で励起されたときに発光を放射し、該発光は、該第1の染料と該第2の染料の組成比についての尺度である;
ように構成されていることを特徴とする、前記キット。 - 前記第1の親和性基が第1のオリゴヌクレオチドであり且つ前記第2の親和性基が該第1のオリゴヌクレオチドに対して相補的な第2のオリゴヌクレオチドである、請求項1に記載のキット。
- 前記第1の染料が蛍光染料であり且つ前記第2の染料が消光分子であり、ここで、該消光分子は、該消光分子が該蛍光染料の蛍光発光を阻止するように、該親和性基が結合したときに該蛍光染料からのエネルギー移動によって励起され得る、請求項1又は2に記載のキット。
- 前記蛍光染料と前記消光分子が同一の分子である、請求項3に記載のキット。
- 前記第1の染料が第1の蛍光染料であり且つ前記第2の染料が第2の蛍光染料であり、ここで、該第2の蛍光染料は該第1の蛍光染料よりも長い最大励起波長を有し、及び、該第2の蛍光染料は、該第2の蛍光染料が該第1の蛍光染料の波長とは異なる波長を有する蛍光を放射するように、当該親和性基が結合したときに該第1の蛍光染料からのエネルギー移動によって励起され得る、請求項1又は2に記載のキット。
- 前記第1の染料が非蛍光染料であり且つ前記第2の染料が蛍光染料であり、ここで、該蛍光染料は、該蛍光染料が蛍光を放射するように、当該親和性基が結合したときに該非蛍光染料からのエネルギー移動によって励起され得る、請求項1又は2に記載のキット。
- さらに第1の反応成分を含んでいる、請求項1〜6に記載のキット。
- (a) 第1の親和性基を有する蛍光染料であって、第1の励起光によって励起されて芳香族構造又はヘテロ芳香族構造にエネルギーを移動させ得る第1の染料;
及び、
(b) 第2の親和性基を有する芳香族構造又はヘテロ芳香族構造であって、該芳香族構造又はヘテロ芳香族構造が該蛍光染料の蛍光発光を阻止するように、該第1の染料からのエネルギー移動によって励起され得る上記芳香族構造又はヘテロ芳香族構造;
を含んでいる、組成比を制御するためのキットであって、
該第1の染料と該芳香族構造又はヘテロ芳香族構造が、
該第1の親和性基と該第2の親和性基が、互いに結合する親和性を有しており、該第1の親和性基が該第2の親和性基に結合したときに当該染料と当該芳香族構造又はヘテロ芳香族構造の間のエネルギー移動が可能となる;
及び、
該第1の染料と該芳香族構造又はヘテロ芳香族構造の混合物が、該第1の励起光で励起されたときに発光を放射し、該発光は、該第1の染料と該芳香族構造又はヘテロ芳香族構造の組成比についての尺度である;
ように構成されていることを特徴とする、前記キット。 - 請求項1〜7のいずれか1項に記載のキットを用いて2種類の成分の組成比を確認する方法であって、ここで、該方法が、
(a) 該2種類の成分を混合するステップであって、該第1の成分は、該第1の親和性基を有している該第1の染料を含んでおり、及び、該第2の成分は、該第2の親和性基を有している該第2の染料を含んでいる上記ステップ;
(b) 該第1の染料と該第2の染料が該親和性基を介して互いに結合していないような条件下で励起光で励起されたときの第1の発光測定を実施するステップ;
(c) 該第1の染料と該第2の染料が該親和性基を介して互いに結合しているような条件下で励起光で励起されたときの第2の発光測定を実施するステップ;
及び、
(d) 該2種類の成分の組成比を確認するためにステップ(b)とステップ(c)の2回の発光測定を比較するステップ;
を含んでいる、前記方法。 - ステップ(b)の前記第1の発光測定を、ステップ(a)における前記2種類の成分の混合に先立って、前記第1の成分を用いて実施する、請求項9に記載の方法。
- ステップ(b)の前記第1の発光測定を、前記第1の染料に対して特異的な励起波長を適用し且つ該第1の染料の発光強度を測定して実施する、請求項9又は10に記載の方法。
- ステップ(b)の前記第1の発光測定を、前記第2の染料に対して特異的な励起波長を適用し且つ該第2の染料の発光強度を測定して実施する、請求項9に記載の方法。
- ステップ(c)の前記第2の発光測定を、前記第1の染料に対して特異的な励起波長を適用し且つ前記第2の染料の発光強度を測定して実施する、請求項9〜12のいずれか1項に記載の方法。
- ステップ(c)の前記第2の発光測定を、前記第1の染料に対して特異的な励起波長を適用し且つ該第1の染料の発光強度を測定して実施する、請求項9〜12のいずれか1項に記載の方法。
- 請求項5〜7のいずれか1項に記載のキットを用いて2種類の成分の組成比を確認する方法であって、ここで、該方法が、
(a) 該2種類の成分を混合するステップであって、該第1の成分は、該第1の親和性基を有している該第1の染料を含んでおり、及び、該第2の成分は、該第2の親和性基を有している該第2の染料を含んでいる上記ステップ;
(b) 該第1の染料と該第2の染料が結合しているような条件下で励起光で励起されたときの第1の発光測定を実施するステップであって、該第1の蛍光測定は、該第2の染料に対して特異的な励起波長を適用し且つ該第2の染料の発光強度を測定して実施する上記ステップ;
(c) 該第1の染料と該第2の染料が結合しているような条件下で励起光で励起されたときの第2の発光測定を実施するステップであって、該第2の蛍光測定は、該第1の染料に対して特異的な励起波長を適用し且つ該第2の染料の発光強度を測定して実施する上記ステップ;及び、
(d) 該2種類の成分の組成比を確認するためにステップ(b)とステップ(c)の2回の発光測定を比較するステップ;
を含んでいる、前記方法。 - 前記第1の親和性基を有している前記第1の染料と前記第2の親和性基を有している前記第2の染料の間の前記結合が不可逆的である、請求項15に記載の方法。
- 請求項8に記載のキットを用いて2種類の成分の組成比を確認する方法であって、ここで、該方法が、
(a) 該2種類の成分を混合するステップであって、該第1の成分は、該第1の親和性基を有している該蛍光染料を含んでおり、及び、該第2の成分は、該第2の親和性基を有している該芳香族構造又はヘテロ芳香族構造を含んでいる上記ステップ;
(b) 該蛍光染料と該芳香族構造又はヘテロ芳香族構造が該親和性基を介して互いに結合していないような条件下で励起光で励起されたときの第1の発光測定を実施するステップであって、該第1の発光測定は、該蛍光染料に対して特異的な励起波長を適用し且つ該蛍光染料の発光強度を測定して実施する上記ステップ;
(c) 該蛍光染料と該芳香族構造又はヘテロ芳香族構造が該親和性基を介して互いに結合しているような条件下で励起光で励起されたときの第2の発光測定を実施するステップであって、該第2の発光測定は、該蛍光染料に対して特異的な励起波長を適用し且つ該蛍光染料の発光強度を測定して実施する上記ステップ;
及び、
(d) 該2種類の成分の組成比を確認するためにステップ(b)とステップ(c)の2回の発光測定を比較するステップ;
を含んでいる、前記方法。 - ステップ(b)の前記第1の発光測定を、ステップ(a)における前記2種類の成分の混合に先立って、前記第1の成分を用いて実施する、請求項17に記載の方法。
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