JP2010237116A - 画像解析方法および画像解析装置 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】<ステップS1>:複数フレームの蛍光画像を取得する。<ステップS2>:解析領域を設定する。<ステップS3,S4>:1フレームの蛍光画像の解析領域に対して相関計算を行なって拡散時間を推定する。<ステップS5>:推定した拡散時間に基づいて所望パラメータを算出する。<ステップS6>:算出した所望パラメータに基づいて新たなRICSの空間相関計算式を得る。<ステップS7>:所望パラメータに基づいて解析に利用する蛍光画像を選定し、解析に利用する蛍光画像の解析領域のピクセルのデータと新たなRICSの解析式により空間自己相関解析を行なう。同様に、異なるチャンネルのフレーム蛍光強度データを用いてRICSの空間相互相関解析を行なう。
【選択図】図9
Description
試料Sの観察領域と取得する蛍光画像のフレーム数を設定した上で、前述した1フレームの蛍光画像を取得する動作を設定したフレーム数の回数だけ繰り返して、設定したフレーム数の蛍光画像を取得する。蛍光画像の取得は、もちろん、同一の観察領域に対して同一の走査方法によって行なう。取得する複数フレームの蛍光画像は、時系列的に取得された画像であり、各画像は、ピクセルデータが時系列的に取得された複数のピクセルからなる。
図10に示すように、蛍光画像領域R1に対して解析領域R2を設定する。解析領域R2は、蛍光画像領域R1の一部に限定されるものではなく、蛍光画像領域R1に一致していてもよい。解析領域R2は、アプリケーション的にはデフォルトで蛍光画像領域R1すなわちステップS1における走査領域に設定されており、蛍光画像領域R1の全体を解析する場合には、このステップは不要である。
式(1)と式(2)の所望パラメータηをゼロとして式(3)と式(4)を得る。
ステップS2で設定した解析領域R2に基づいて、1フレーム目の蛍光画像の解析領域R2のピクセルのデータを抽出する。抽出したデータとステップS3の式(3)と式(4)(RICSの相関解析)から拡散定数を算出する。そして、算出された拡散定数を用いて、式(5)から、その拡散時間を推定する。
推定した拡散時間と式(6)と式(7)を用いて所望パラメータηを算出する。
算出した所望パラメータηを式(1)と式(2)に代入して新たなRICSの空間相関計算式を得る。
ステップS5で算出した所望パラメータηに基づいて解析に利用する蛍光画像を選定する。より具体的には、1フレーム目からη+1フレーム目までの連続して取得された画像を選定する。また、ステップS2で設定した解析領域R2に基づいて、解析に利用する蛍光画像の解析領域R2のピクセルのデータを抽出する。抽出したデータとステップS6で得た新たなRICSの空間相関計算式により相関解析を行なう。
ステップS7で算出した結果を輝度値によるイメージ画像で表示する。
Claims (22)
- 各画像のピクセルのデータが時系列的に取得された複数のピクセルからなる複数フレームの画像を時系列的に取得する画像取得ステップと、
前記画像に対して解析領域を設定する解析領域設定ステップと、
前記画像の中から解析に利用する1フレーム以上の選定画像を選定する画像選定ステップと、
前記選定画像の解析領域内のピクセルのデータに基づいて相関値を算出する計算ステップを有している画像解析方法。 - 前記計算ステップは、前記選定画像中の時系列的に先の画像の解析領域内のピクセルのデータと、このピクセルよりも遅れて取得された、前記選定画像の解析領域内のピクセルのデータとの間の相関値を算出する、請求項1に記載の画像解析方法。
- 推定拡散時間を推定する推定ステップをさらに有し、
前記選定画像の選定は、前記推定拡散時間に基づいて行なう、請求項1または請求項2に記載の画像解析方法。 - 前記選定画像は、前記画像のすべてからなる、請求項1ないし請求項3のいずれかひとつに記載の画像解析方法。
- 前記選定画像は、前記画像の時系列において連続している前記画像の一部からなる、請求項1ないし請求項3のいずれかひとつに記載の画像解析方法。
- 前記画像はKフレームの画像からなり、ここでKは2以上の整数であり、
前記選定画像の選定および相関値の算出は次式(1)と次式(2)を用いて行なう、
- 励起光を走査しながら試料に照射する光照射ステップをさらに有し、
前記画像は前記試料の蛍光画像であり、前記ピクセルのデータは、前記励起光の照射に応じて前記試料から発せられた蛍光強度に対応している、請求項1ないし請求項8のいずれかひとつに記載の画像解析方法。 - 前記データは蛍光強度の統計値であり、前記統計値は、前記蛍光強度の平均値、最大値、最小値、相対差、絶対差のいずれかである、請求項1ないし請求項9のいずれかひとつに記載の画像解析方法。
- 前記画像は、走査型顕微鏡によって得られたものである、請求項1ないし請求項10のいずれかひとつに記載の画像解析方法。
- 各画像のピクセルのデータが時系列的に取得された複数のピクセルからなる複数フレームの画像を時系列的に取得する画像取得部と、
前記画像に対して解析領域を設定する解析領域設定部と、
前記画像の中から解析に利用する1フレーム以上の選定画像を選定する画像選定部と、
前記選定画像の解析領域内のピクセルのデータに基づいて相関値を算出する計算部を有している画像解析装置。 - 前記計算部は、前記選定画像中の時系列的に先の画像の解析領域内のピクセルのデータと、このピクセルよりも遅れて取得された、前記選定画像の解析領域内のピクセルのデータとの間の相関値を算出する、請求項12に記載の画像解析装置。
- 推定拡散時間を推定する推定部をさらに有し、
前記選定画像の選定は、前記推定拡散時間に基づいて行なわれる、請求項12または請求項13に記載の画像解析装置。 - 前記選定画像は、前記画像のすべてからなる、請求項12ないし請求項14のいずれかひとつに記載の画像解析装置。
- 前記選定画像は、前記画像の時系列において連続している前記画像の一部からなる、請求項12ないし請求項14のいずれかひとつに記載の画像解析装置。
- 前記画像はKフレームの画像からなり、ここでKは2以上の整数であり、
前記選定画像の選定および相関値の算出は次式(1)と次式(2)を用いて行なう、
- 励起光を走査しながら試料に照射する光照射部をさらに有し、
前記画像は前記試料の蛍光画像であり、前記ピクセルのデータは、前記励起光の照射に応じて前記試料から発せられた蛍光強度に対応している、請求項12ないし請求項19のいずれかひとつに記載の画像解析装置。 - 前記データは蛍光強度の統計値であり、前記統計値は、前記蛍光強度の平均値、最大値、最小値、相対差、絶対差のいずれかである、請求項12ないし請求項20のいずれかひとつに記載の画像解析装置。
- 前記画像は、走査型顕微鏡によって得られたものである、請求項12ないし請求項21のいずれかひとつに記載の画像解析装置。
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