JP2010142242A - 抗肥満物質のスクリーニング方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】次の工程を含む、抗肥満物質のスクリーニング方法。
(1) 被験物質を哺乳動物由来の小腸培養組織又は細胞と接触させる工程
(2) 上記小腸培養組織又は細胞における、少なくとも1種以上の脂質代謝関連酵素遺伝子の発現量を測定する工程
(3) 被験物質を接触させない哺乳動物由来の小腸培養組織又は細胞における、対応する脂質代謝関連酵素遺伝子の発現量を測定する工程
(4) 上記(2)で測定した発現量が、上記(3)で測定した発現量より増加した被験物質を選択する工程
【選択図】なし
Description
[1] 次の(a)〜(d)の工程を含む、抗肥満物質のスクリーニング方法。
(a) 被験物質を哺乳動物由来の小腸培養組織又は細胞と接触させる工程
(b) 上記小腸培養組織又は細胞における、チトクロームP450 4A遺伝子の発現量を測定する工程
(c) 被験物質を接触させない哺乳動物由来の小腸培養組織又は細胞における、チトクロームP450 4A遺伝子の発現量を測定する工程
(d) 上記(b)で測定した発現量が、上記(c)で測定した発現量より増加した被験物質を選択する工程
(a) 被験物質を非ヒト哺乳動物に投与する工程
(b) 上記非ヒト哺乳動物から採取した小腸における、チトクロームP450 4A遺伝子の発現量を測定する工程
(c) 被験物質を投与しない非ヒト哺乳動物から採取した小腸における、チトクロームP450 4A遺伝子の発現量を測定する工程
(d) 上記(b)で測定した発現量が、上記(c)で測定した発現量より増加した被験物質を選択する工程
(N1) 配列番号15に示す塩基配列からなるポリヌクレオチド
(N2) 配列番号15に示す塩基配列からなるポリヌクレオチドと相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ、脂質代謝促進物質に応答して発現が増加するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
(a) 被験物質を哺乳動物由来の小腸培養組織又は細胞と接触させる工程
(b) 上記小腸培養組織又は細胞における、チトクロームP450 4Aタンパク質の発現量を測定する工程
(c) 被験物質を接触させない哺乳動物由来の小腸培養組織又は細胞における、チトクロームP450 4Aタンパク質の発現量を測定する工程
(d) 上記(b)で測定した発現量が、上記(c)で測定した発現量より増加した被験物質を選択する工程
(a) 被験物質を非ヒト哺乳動物に投与する工程
(b) 上記非ヒト哺乳動物から採取した小腸における、チトクロームP450 4Aタンパク質の発現量を測定する工程
(c) 被験物質を投与しない非ヒト哺乳動物から採取した小腸における、チトクロームP450 4Aタンパク質の発現量を測定する工程
(d) 上記(b)で測定した発現量が、上記(c)で測定した発現量より増加した被験物質を選択する工程
(P1) 配列番号16に示すアミノ酸配列からなるポリペプチド
(P2) 配列番号16に示すアミノ酸配列において、1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、脂質代謝促進物質に応答して発現が増加するポリペプチド
[10] [9]に記載のプローブを固定化した固定化担体。
[11] 配列番号16に示すアミノ酸配列からなるポリペプチドに対する抗体。
(i) 配列番号15に示す塩基配列を増幅するための、15塩基から40塩基の長さを有するプライマーセット
(ii) 配列番号15に示す塩基配列からなるポリヌクレオチドにストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、配列番号15に示す塩基配列の相補配列に対して90%以上の相同性を有す塩基配列からなる、該ポリヌクレオチドを検出するためのプローブ。
(a) 被験物質を哺乳動物由来の小腸培養組織又は細胞と接触させる工程
(b) 上記小腸培養組織又は細胞における、ピルビン酸デヒロゲナーゼキナーゼ アイソザイム4遺伝子、ミトコンドリア アシル-CoA チオエステラーゼ1遺伝子、サイトソル アシル-CoAチオエステラーゼ1遺伝子、3-ケトアシル-CoAチオラーゼB遺伝子、3-ヒドロキシ-3-メチルグルタリル-CoA シンターゼ2遺伝子、及び脂肪酸トランスロカーゼ遺伝子の中から選ばれる少なくとも1種以上の脂質代謝関連酵素遺伝子の発現量を測定する工程
(c) 被験物質を接触させない哺乳動物由来の小腸培養組織又は細胞における、対応する脂質代謝関連酵素遺伝子の発現量を測定する工程
(d) 上記(b)で測定した発現量が、上記(c)で測定した発現量より増加した被験物質を選択する工程
(a) 被験物質を非ヒト哺乳動物に投与する工程
(b) 上記非ヒト哺乳動物から採取した小腸における、ピルビン酸デヒロゲナーゼキナーゼ アイソザイム4遺伝子、ミトコンドリア アシル-CoA チオエステラーゼ1遺伝子、サイトソル アシル-CoAチオエステラーゼ1遺伝子、3-ケトアシル-CoAチオラーゼB遺伝子、3-ヒドロキシ-3-メチルグルタリル-CoA シンターゼ2遺伝子、及び脂肪酸トランスロカーゼ遺伝子の中から選ばれる少なくとも1種以上の脂質代謝関連酵素遺伝子の発現量を測定する工程
(c) 被験物質を投与しない非ヒト哺乳動物から採取した小腸における、対応する脂質代謝関連酵素遺伝子の発現量を測定する工程
(d) 上記(b)で測定した発現量が、上記(c)で測定した発現量より増加した被験物質を選択する工程
(N1)配列番号3、5、7、9、11、及び13のいずれかに示す塩基配列からなるポリヌクレオチド
(N2) 配列番号3、5、7、9、11、及び13のいずれかに示す塩基配列からなるポリヌクレオチドと相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ、脂質代謝促進物質に応答して発現が増加するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
(a) 被験物質を哺乳動物由来の小腸培養組織又は細胞と接触させる工程
(b) 上記小腸培養組織又は細胞における、ピルビン酸デヒロゲナーゼキナーゼ アイソザイム4、ミトコンドリア アシル-CoA チオエステラーゼ1、サイトソル アシル-CoAチオエステラーゼ1、3-ケトアシル-CoAチオラーゼB、3-ヒドロキシ-3-メチルグルタリル-CoA シンターゼ2、及び脂肪酸トランスロカーゼの中から選ばれる少なくとも1種以上の脂質代謝関連酵素タンパク質の発現量を測定する工程
(c) 被験物質を接触させない哺乳動物由来の小腸培養組織又は細胞における、対応する脂質代謝関連酵素タンパク質の発現量を測定する工程
(d) 上記(b)で測定した発現量が、上記(c)で測定した発現量より増加した被験物質を選択する工程
(a) 被験物質を非ヒト哺乳動物に投与する工程
(b) 上記非ヒト哺乳動物から採取した小腸における、ピルビン酸デヒロゲナーゼキナーゼ アイソザイム4、ミトコンドリア アシル-CoA チオエステラーゼ1、サイトソル アシル-CoAチオエステラーゼ1、3-ケトアシル-CoAチオラーゼB、3-ヒドロキシ-3-メチルグルタリル-CoA シンターゼ2、及び脂肪酸トランスロカーゼの中から選ばれる少なくとも1種以上の脂質代謝関連酵素タンパク質の発現量を測定する工程
(c) 被験物質を投与しない非ヒト哺乳動物から採取した小腸における、対応する脂質代謝関連酵素タンパク質の発現量を測定する工程
(d) 上記(b)で測定した発現量が、上記(c)で測定した発現量より増加した被験物質を選択する工程
(a) 配列番号4、6、8、10、12、及び14のいずれかに示すアミノ酸配列からなるポリペプチド
(b) 配列番号4、6、8、10、12、及び14のいずれかに示すアミノ酸配列において、1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、脂質代謝促進物質に応答して発現が増加するポリペプチド
[23] 配列番号4、6、8、10、12、及び14のいずれかに示すアミノ酸配列からなるポリペプチドに対する抗体。
(i) 配列番号3、5、7、9、11、及び13のいずれかに示す塩基配列を増幅するための、15塩基から40塩基の長さを有するプライマーセット
(ii) 配列番号3、5、7、9、11、及び13のいずれかに示す塩基配列からなるポリヌクレオチドにストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、配列番号3、5、7、9、11、及び13のいずれかに示す塩基配列の相補配列に対して90%以上の相同性を有す塩基配列からなる、該ポリヌクレオチドを検出するためのプローブ。
[25] 配列番号4、6、8、10、12、及び14のいずれかに示すアミノ酸配列からなるポリペプチドに対する抗体と該抗体に対する二次抗体を含む、抗肥満物質のスクリーニング用キット。
(a) 被験物質を哺乳動物由来の小腸培養組織又は細胞と接触させる工程
(b) 上記小腸培養組織又は細胞における、少なくとも1種以上の脂質代謝関連酵素遺伝子の発現量を測定する工程
(c) 被験物質を接触させない哺乳動物由来の小腸培養組織又は細胞における、対応する脂質代謝関連酵素遺伝子の発現量を測定する工程
(d) 上記(b)で測定した発現量が、上記(c)で測定した発現量より増加した被験物質を選択する工程
(a) 被験物質を非ヒト哺乳動物に投与する工程
(b) 上記非ヒト哺乳動物から採取した小腸における、少なくとも1種以上の脂質代謝関連酵素遺伝子の発現量を測定する工程
(c) 被験物質を投与しない非ヒト哺乳動物から採取した小腸における、対応する脂質代謝関連酵素遺伝子の発現量を測定する工程
(d) 上記(b)で測定した発現量が、上記(c)で測定した発現量より増加した被験物質を選択する工程
本発明のスクリーニング方法に用いる脂質代謝関連酵素遺伝子はいずれも公知であり、それぞれの塩基配列情報も入手可能である。
プライマー(セット)は、前記の指標遺伝子の各塩基配列に基づき設計し、合成・精製の各工程を経て調製することができる。プライマーのサイズ(塩基数)は、鋳型DNAとの間の特異的なアニーリングが可能とするために、15〜40塩基、好ましくは20〜30塩基である。プライマーの設計は、センス鎖(5'末端側)とアンチセンス鎖(3'末端側)からなる1組あるいは1対(2本)のプライマーが互いにアニールしないよう、両プライマー間の相補的配列を避けると共に、プライマー内のヘアピン構造の形成を防止するため自己相補配列をも避けるようにする。さらに、鋳型DNAとの安定な結合を確保するため、GC含量を約50%にし、プライマー内においてGC-richあるいはAT-richが偏在しないようにする。アニーリング温度はTm(melting temperature)に依存するので、特異性の高いPCR産物を得るため、Tm値が55〜65℃で互いに近似したプライマーを選定する。また、PCRにおけるプライマー使用の最終濃度が約0.1〜1μMになるよう調整する等を留意することも必要である。また、プライマー設計用の市販のソフトウェア、例えばOligoTM[National Bioscience Inc.(米国)製]、GENETYX[ソフトウェア開発(株)(日本)製]等を用いることもできる。
肥満モデルマウス(BKS.Cg-+Leprdb/+Leprdb/Jcl(db/dbマウス))に、下記表1に示すコントロール食(10% TG)、又は魚油食(6%TG+4%FO)を与えて飼育した。
ME遺伝子増幅用プライマー:
5'側:CTATCCTCCTTTGAATACCATTCGA(配列番号17)
3'側:CTTCTGCAGGCCACGGATAACAATC(配列番号18)
PDK4遺伝子増幅用プライマー:
5'側:GATCAGGGCAGTGACTTTCACAG(配列番号19)
3'側:TCAGAGCTGAAATTTCAATGGAAAC(配列番号20)
MTE-1遺伝子増幅用プライマー:
5'側:AGTGCCTATGAAGGACTGAGGA(配列番号21)
3'側:GGCAGAAAGCACCTTTACCA(配列番号22)
CTE-1遺伝子増幅用プライマー:
5'側:GGCTGGGAATGGAGTTTCAT(配列番号23)
3'側:CCTGGCACTTTTCTTGGATAGC(配列番号24)
HMGCS2遺伝子増幅用プライマー:
5'側:TGTCCCCTGAGGAATTCACAGAA(配列番号25)
3'側:CGATGCATCTCATCCACTCGTT(配列番号26)
THIO遺伝子増幅用プライマー:
5'側:TAATTGCAGCATGGGTACACGT(配列番号27)
3'側:ACCGTCCCACAGAAATGAATGT(配列番号28)
FAT遺伝子増幅用プライマー:
5'側:GCAAAGAAGGAAAGCCTGTGT(配列番号29)
3'側:GCCACAGTATAGGTACAATGT(配列番号30)
CYP4A遺伝子増幅用プライマー:
5'側:AAAGCTCCAAGATAGTTTTCCCATC(配列番号31)
3'側:CAATGATGTTCAGGCCTTGGAT(配列番号32)
ACO遺伝子増幅用プライマー:
5'側:CTCTCTATGGGATCAGCCAGAA(配列番号33)
3'側:CCACTCAAACAAGTTTTCATACACA(配列番号34)
MCAD遺伝子増幅用プライマー:
5'側:TGCTCGCAGAAATGGCGATGA(配列番号35)
3'側:CAATGTGCTCACGAGCTATGA(配列番号36)
UCP-2遺伝子増幅用プライマー:
5'側: TCTCCTGAAAGCCAACCTCAT(配列番号37)
3'側:GCTGCTCATAGGTGACAAACAT(配列番号38)
食餌依存性肥満モデルマウス (C57BL/6、雄性、6週齢)に、前記表1に示すコントロール食(10% TG)、又は魚油食(6%TG+4%FO)を与えて飼育した。
肥満抵抗性健常マウス (A/Jマウス、雄性、12週齢)に、水と固形飼料を与えて飼育した。このマウスに1.25% ベザフィブラート(シグマ社製)、1.67% ウシ血清アルブミン、0.1%タウロコール酸ナトリウム、3.5%植物油を含む脂質エマルジョン溶液(フィブラート溶液)、又は、上記エマルジョン溶液の組成物の内、ベザフィブラートを含まない脂質エマルジョン溶液(コントロール)を1日につき400μl、5日間経口投与した(ぞれぞれ、フィブラート投与群、コントロール群)。各群のマウスについて、最後の経口投与の6時間後に、ジエチルエーテルによる麻酔下で開腹し、小腸を採取した。
水及び固形飼料を自由に与えて飼育したC57BL/6マウス(9週齢、雄性)を用い、Mallordyらの方法(Mol. Cell. Biochem. 1993, 123, 85-92)に準じた器官培養法により、小腸脂質代謝活性評価を実施した。15時間絶食させたマウスをジエチルエーテルによる麻酔下で開腹し、空腸部(幽門より10-11,11-12,12-13 cm)の小腸片を採取した。得られた小腸片は、縦方向に切り開き、実体顕微鏡を使って漿膜を取り除いた後、粘膜を上にした状態でアルミメッシュの上に広げた。器官培養ディッシュ(イワキ株式会社製)の内側のウェルに、小腸片をのせたアルミメッシュをセットし、組織が浸る程度(0.9 ml) の培地を添加して、80% O2, 5% CO2存在下で培養した。外側のウェルには、乾燥防止のため、PBSを適当量加えた。培地には、600 μM ドコサヘキサエン酸 (DHA)又は600 μM オレイン酸と、250 μM 脂肪酸不含ウシ血清アルブミン、10% NCTC-135(シグマ社製)、10%ウシ胎児血清、0.1% Fungizone、0.1mg/ml Gentamycin、25mM HEPES (2-[4-(2-Hydroxyethyl)-1-piperazinyl]ethanesulfonic acid; pH7.5)を含むDulbecco's Modified Eagle Medium培地を用いた。
12ウェルプレートに、ウェル当たり3x106個のヒト由来小腸様培養細胞Caco-2細胞(American Type Culture Collection HTB37)を播種し、10%ウシ胎児血清、1%非必須アミノ酸、2mMグルタミン酸を含むMEMアール液体培地中で培養した。細胞がコンフレントに達した後、14日間培養を行い、小腸様細胞に分化したCaco-2細胞を評価に使用した。
ME遺伝子増幅用プライマー:
5'側:GTTATTCTTGGCCTGAAGAGGTG(配列番号41)
3'側:AGGCAAAGTGAAGCAAAATTGTC(配列番号42)
PDK4遺伝子増幅用プライマー:
5'側:GGTGGCCTAGTGTTGTGGTG(配列番号43)
3'側:ATCAGAAATG CATGAGCTGG ACTC(配列番号44)
HMGCS2遺伝子増幅用プライマー:
5'側:CGTCCCGTCTAAAGGTGTTCT(配列番号45)
3'側:CGCTAGAGATGGCTCCTCACT(配列番号46)
Claims (25)
- 次の(a)〜(d)の工程を含む、抗肥満物質のスクリーニング方法。
(a) 被験物質を哺乳動物由来の小腸培養組織又は細胞と接触させる工程
(b) 上記小腸培養組織又は細胞における、チトクロームP450 4A遺伝子の発現量を測定する工程
(c) 被験物質を接触させない哺乳動物由来の小腸培養組織又は細胞における、チトクロームP450 4A遺伝子の発現量を測定する工程
(d) 上記(b)で測定した発現量が、上記(c)で測定した発現量より増加した被験物質を選択する工程 - 次の(a)〜(d)の工程を含む、抗肥満物質のスクリーニング方法。
(a) 被験物質を非ヒト哺乳動物に投与する工程
(b) 上記非ヒト哺乳動物から採取した小腸における、チトクロームP450 4A遺伝子の発現量を測定する工程
(c) 被験物質を投与しない非ヒト哺乳動物から採取した小腸における、チトクロームP450 4A遺伝子の発現量を測定する工程
(d) 上記(b)で測定した発現量が、上記(c)で測定した発現量より増加した被験物質を選択する工程 - チトクロームP450 4A遺伝子が、下記のポリヌクレオチドのうち、少なくとも1種以上のポリヌクレオチドである、請求項1又は2に記載のスクリーニング方法。
(N1) 配列番号15に示す塩基配列からなるポリヌクレオチド
(N2) 配列番号15に示す塩基配列からなるポリヌクレオチドと相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ、脂質代謝促進物質に応答して発現が増加するタンパク質をコードするポリヌクレオチド - 次の(a)〜(d)の工程を含む、抗肥満物質のスクリーニング方法。
(a) 被験物質を哺乳動物由来の小腸培養組織又は細胞と接触させる工程
(b) 上記小腸培養組織又は細胞における、チトクロームP450 4Aタンパク質の発現量を測定する工程
(c) 被験物質を接触させない哺乳動物由来の小腸培養組織又は細胞における、チトクロームP450 4Aタンパク質の発現量を測定する工程
(d) 上記(b)で測定した発現量が、上記(c)で測定した発現量より増加した被験物質を選択する工程 - 次の(a)〜(d)の工程を含む、抗肥満物質のスクリーニング方法。
(a) 被験物質を非ヒト哺乳動物に投与する工程
(b) 上記非ヒト哺乳動物から採取した小腸における、チトクロームP450 4Aタンパク質の発現量を測定する工程
(c) 被験物質を投与しない非ヒト哺乳動物から採取した小腸における、チトクロームP450 4Aタンパク質の発現量を測定する工程
(d) 上記(b)で測定した発現量が、上記(c)で測定した発現量より増加した被験物質を選択する工程 - チトクロームP450 4Aタンパク質が、下記のポリペプチドのうち、少なくとも1種以上のポリペプチドである、請求項4又は5に記載のスクリーニング方法。
(P1) 配列番号16に示すアミノ酸配列からなるポリペプチド
(P2) 配列番号16に示すアミノ酸配列において、1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、脂質代謝促進物質に応答して発現が増加するポリペプチド - 前記タンパク質の発現量を、チトクロームP450 4A活性を測定することにより行なう、請求項4〜6のいずれか1項に記載の抗肥満物質のスクリーニング方法。
- 配列番号15に示す塩基配列を増幅するための、15塩基から40塩基の長さを有するプライマーセット。
- 配列番号15に示す塩基配列からなるポリヌクレオチドにストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、配列番号15に示す塩基配列の相補配列に対して90%以上の相同性を有す塩基配列からなる、該ポリヌクレオチドを検出するためのプローブ。
- 請求項9に記載のプローブを固定化した固定化担体。
- 配列番号16に示すアミノ酸配列からなるポリペプチドに対する抗体。
- 下記の(i)又は(ii)の少なくとも1種を含む、抗肥満物質のスクリーニング用キット。
(i) 配列番号15に示す塩基配列を増幅するための、15塩基から40塩基の長さを有するプライマーセット
(ii) 配列番号15に示す塩基配列からなるポリヌクレオチドにストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、配列番号15に示す塩基配列の相補配列に対して90%以上の相同性を有す塩基配列からなる、該ポリヌクレオチドを検出するためのプローブ。 - 配列番号16に示すアミノ酸配列からなるポリペプチドに対する抗体と該抗体に対する二次抗体を含む、抗肥満物質のスクリーニング用キット。
- 次の(a)〜(d)の工程を含む、抗肥満物質のスクリーニング方法。
(a) 被験物質を哺乳動物由来の小腸培養組織又は細胞と接触させる工程
(b) 上記小腸培養組織又は細胞における、ピルビン酸デヒロゲナーゼキナーゼ アイソザイム4遺伝子、ミトコンドリア アシル-CoA チオエステラーゼ1遺伝子、サイトソル アシル-CoAチオエステラーゼ1遺伝子、3-ケトアシル-CoAチオラーゼB遺伝子、3-ヒドロキシ-3-メチルグルタリル-CoA シンターゼ2遺伝子、及び脂肪酸トランスロカーゼ遺伝子の中から選ばれる少なくとも1種以上の脂質代謝関連酵素遺伝子の発現量を測定する工程
(c) 被験物質を接触させない哺乳動物由来の小腸培養組織又は細胞における、対応する脂質代謝関連酵素遺伝子の発現量を測定する工程
(d) 上記(b)で測定した発現量が、上記(c)で測定した発現量より増加した被験物質を選択する工程 - 次の(a)〜(d)の工程を含む、抗肥満物質のスクリーニング方法。
(a) 被験物質を非ヒト哺乳動物に投与する工程
(b) 上記非ヒト哺乳動物から採取した小腸における、ピルビン酸デヒロゲナーゼキナーゼ アイソザイム4遺伝子、ミトコンドリア アシル-CoA チオエステラーゼ1遺伝子、サイトソル アシル-CoAチオエステラーゼ1遺伝子、3-ケトアシル-CoAチオラーゼB遺伝子、3-ヒドロキシ-3-メチルグルタリル-CoA シンターゼ2遺伝子、及び脂肪酸トランスロカーゼ遺伝子の中から選ばれる少なくとも1種以上の脂質代謝関連酵素遺伝子の発現量を測定する工程
(c) 被験物質を投与しない非ヒト哺乳動物から採取した小腸における、対応する脂質代謝関連酵素遺伝子の発現量を測定する工程
(d) 上記(b)で測定した発現量が、上記(c)で測定した発現量より増加した被験物質を選択する工程 - 脂質代謝関連酵素遺伝子が、下記のポリヌクレオチドのうち、少なくとも1種以上のポリヌクレオチドである、請求項14又は15に記載のスクリーニング方法。
(N1)配列番号3、5、7、9、11、及び13のいずれかに示す塩基配列からなるポリヌクレオチド
(N2) 配列番号3、5、7、9、11、及び13のいずれかに示す塩基配列からなるポリヌクレオチドと相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ、脂質代謝促進物質に応答して発現が増加するタンパク質をコードするポリヌクレオチド - 次の(a)〜(d)の工程を含む、抗肥満物質のスクリーニング方法。
(a) 被験物質を哺乳動物由来の小腸培養組織又は細胞と接触させる工程
(b) 上記小腸培養組織又は細胞における、ピルビン酸デヒロゲナーゼキナーゼ アイソザイム4、ミトコンドリア アシル-CoA チオエステラーゼ1、サイトソル アシル-CoAチオエステラーゼ1、3-ケトアシル-CoAチオラーゼB、3-ヒドロキシ-3-メチルグルタリル-CoA シンターゼ2、及び脂肪酸トランスロカーゼの中から選ばれる少なくとも1種以上の脂質代謝関連酵素タンパク質の発現量を測定する工程
(c) 被験物質を接触させない哺乳動物由来の小腸培養組織又は細胞における、対応する脂質代謝関連酵素タンパク質の発現量を測定する工程
(d) 上記(b)で測定した発現量が、上記(c)で測定した発現量より増加した被験物質を選択する工程 - 次の(a)〜(d)の工程を含む、抗肥満物質のスクリーニング方法。
(a) 被験物質を非ヒト哺乳動物に投与する工程
(b) 上記非ヒト哺乳動物から採取した小腸における、ピルビン酸デヒロゲナーゼキナーゼ アイソザイム4、ミトコンドリア アシル-CoA チオエステラーゼ1、サイトソル アシル-CoAチオエステラーゼ1、3-ケトアシル-CoAチオラーゼB、3-ヒドロキシ-3-メチルグルタリル-CoA シンターゼ2、及び脂肪酸トランスロカーゼの中から選ばれる少なくとも1種以上の脂質代謝関連酵素タンパク質の発現量を測定する工程
(c) 被験物質を投与しない非ヒト哺乳動物から採取した小腸における、対応する脂質代謝関連酵素タンパク質の発現量を測定する工程
(d) 上記(b)で測定した発現量が、上記(c)で測定した発現量より増加した被験物質を選択する工程 - 脂質代謝関連酵素タンパク質が、下記のポリペプチドのうち、少なくとも1種以上のポリペプチドである、請求項17又は18に記載のスクリーニング方法。
(a) 配列番号4、6、8、10、12、及び14のいずれかに示すアミノ酸配列からなるポリペプチド
(b) 配列番号4、6、8、10、12、及び14のいずれかに示すアミノ酸配列において、1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、脂質代謝促進物質に応答して発現が増加するポリペプチド - 配列番号3、5、7、9、11、及び13のいずれかに示す塩基配列を増幅するための、15塩基から40塩基の長さを有するプライマーセット。
- 配列番号3、5、7、9、11、及び13のいずれかに示す塩基配列からなるポリヌクレオチドにストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、配列番号3、5、7、9、11、及び13のいずれかに示す塩基配列の相補配列に対して90%以上の相同性を有す塩基配列からなる、該ポリヌクレオチドを検出するためのプローブ。
- 請求項21に記載のプローブを固定化した固定化担体。
- 配列番号4、6、8、10、12、及び14のいずれかに示すアミノ酸配列からなるポリペプチドに対する抗体。
- 下記の(i)又は(ii)の少なくとも1種を含む、抗肥満物質のスクリーニング用キット。
(i) 配列番号3、5、7、9、11、及び13のいずれかに示す塩基配列を増幅するための、15塩基から40塩基の長さを有するプライマーセット
(ii) 配列番号3、5、7、9、11、及び13のいずれかに示す塩基配列からなるポリヌクレオチドにストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、配列番号3、5、7、9、11、及び13のいずれかに示す塩基配列の相補配列に対して90%以上の相同性を有す塩基配列からなる、該ポリヌクレオチドを検出するためのプローブ。 - 配列番号4、6、8、10、12、及び14のいずれかに示すアミノ酸配列からなるポリペプチドに対する抗体と該抗体に対する二次抗体を含む、抗肥満物質のスクリーニング用キット。
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