JP2010115647A - 磁性粒子に結合された成分を、遠心力付与により分離する方法およびその装置 - Google Patents
磁性粒子に結合された成分を、遠心力付与により分離する方法およびその装置 Download PDFInfo
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Abstract
【解決手段】1つ以上の平らな室を持ち、各室は区画の外側部分25に上る傾斜底と、流体10をトラップする手段とを含み、該手段は、コンテナー11の区画の外部の内側に置かれている室と、磁性粒子21と磁性粒子に結合された重要な成分を捕獲するための磁石12とを持つコンテナー装置を提供する工程と、コンテナーの内部の外側でかつ磁石に隣接して置かれている軸19の周りに、コンテナーは、回転しながら、重要な成分を含む溶液を、室の内部に配置する工程と、重要な成分を固定する反応成分で塗布された磁性粒子を添加する工程と、磁性粒子と溶液を混合し、磁性粒子と上澄み液体とからなる混合物を生成する工程と、コンテナーを回転させることにより、遠心力によってトラップ手段中トラップされ、かつ磁性粒子が、内部の内側に固定されるように磁場が付与される。
【選択図】図3
Description
(a)1つ以上の平らな室(I)を持ち、各室は、内部容積と、区画の外側部分に上る傾斜底(8)と、流体(10)をトラップする手段とを含み、該傾斜底は、1゜〜85゜の間の角度を持つことが好ましく、該手段は、コンテナーの区画の外部の内側に置かれていることを特徴とする室と、(II)磁性粒子と該磁性粒子に結合された重要な成分を捕獲するためのコンテナーの区画の内部(4)の外側に置かれた磁石とを持つコンテナー装置を提供する工程と、
(b)該コンテナーの内部の外側でかつ磁石に隣接して置かれている軸の周りに、該コンテナーは、回転する前に、重要な成分を含む該溶液の一部および必要なら、可能な追加の試薬とを、該室の内部容積中に配置する工程と、
(c)該コンテナーの内部の外側に置かれている軸の周りに、該コンテナーが回転する前に、重要な成分を含む溶液に該重要な成分を固定する反応成分で塗布された非常に多数の磁性粒子を添加する工程と、
(d)非常に多数の塗布された磁性粒子と該溶液を混合し、それにより該磁性粒子と上澄み液体とからなる混合物を生成する工程と、その後、
(e)該コンテナーを回転させることにより、該コンテナー内の磁性粒子と液体の混合物を回転させ、その結果、該液体の少なくとも一部が、該コンテナーの外部に放出され、そこでは、該液体が、遠心力(13)によってトラップ手段中に押しやられる間に、該液体の一部または全部が、コンテナーの外側部分において内部容積中に集積された手段によってトラップされ、かつ磁性粒子が、該内部容積の内部の内側に固定されるように磁場が付与されることを特徴とする、該磁性粒子と該液体を分離する工程と、からなることを特徴とする方法に向けられている。
該コンテナー装置は、
(1)1つ以上の室を持つコンテナーであって、各室は内部容積と室の外部に上がっていく傾斜底と流体をトラップするための手段とを持ち、該手段は該コンテナーの室の外部の内側に置かれていることを特徴とするコンテナーと、
(2)磁性粒子と該磁性粒子に結合された該重要な成分を捕獲するためのコンテナーの室の内部壁の外側に置かれた磁石と、
(3)該磁石に隣接した該コンテナーの中央に置かれた回転軸と、
(4)磁性粒子に対して、磁場たとえば、磁力(14)を付与するための手段と該コンテナーを回転するためのエンジンとからなることを特徴とするコンテナー装置に向けられている。
(1)1つのコンテナーは、1つ以上の室を持ち、各室は、内部容積と、区画の外部に上がっていく傾斜底と、流体(10)をトラップするための手段とを持ち、該手段は、該コンテナーの区画の外壁(25)の内側に置かれていることを特徴とするコンテナーと、
(2)磁性粒子(21)と該磁性粒子に結合された重要な成分を捕獲するためのコンテナーの区画の内部壁(4)の外側に置かれた磁石(12)と、
(3)該磁石(12)に隣接した該円形コンテナーの中央に置かれた回転軸(19)と、
(4)磁性粒子に対して磁場、たとえば磁力を付与するための手段と該コンテナーを回転するためのエンジンとからなることを特徴とする円形コンテナー装置である。
COBAS AmpliPrep/COBAS TaqManテストを用いたウイルスDNAの単離と精製
製造業者の処方にしたがって試薬を使用した。
使用した試薬:
溶解緩衝液:1.6ml
クエン酸ナトリウム・2水和物 pH=4.8
42.5%グアニジン チオシアン酸エステル
<14%ポリドカノール
0.9%ジチオスレイトール
プロテイナーゼ溶液:100μl
トリス緩衝液 pH=5.2
<0.05%EDTA
塩化カルシウム
酢酸カルシウム
7.8%プロテイナーゼ
グリセロール
結合緩衝液:820μl
クエン酸ナトリウム・2水和物 pH=4.8
42.5%グアニジン チオシアン酸エステル
<14%ポリドカノール
0.9%ジチオスレイトール
磁性粒子の懸濁液:120μl
磁性ガラス粒子
93%イソプロパノール
洗浄緩衝液:1×2.0mlおよび1×500μl
トリスベース緩衝液 pH=6.8
0.2%メチルパラベン
溶出緩衝液:65μl
トリスベース緩衝液 pH=7.6
0.2%メチルパラベン
吸着性材料:2.7g HySorbTM BASF,Ludwigshafen,ドイツ
重要な化合物:HBVウイルスDNA
生体サンプル:860μl血漿
2 内部ピペット採取開口部
3 排出口
4 室の内部壁
5 室の下部
6 内部バリア
7 カットオフ溝
8 室の下部の上り部分
9 ギャップ
10 流体トラップ手段、たとえば、超吸着材料
11 室のハウジング
12 磁石
13 遠心力の方向
14 磁力の方向
15 反応チューブ
16 反応チューブの開口部
17 ピペット採取出口
18 磁石の矢印運動
19 回転軸
20 室の下部の上り部分
21 磁性粒子
22 反応溶液/反応室
23 カバー
24 仕切り壁
25 室の外壁
26 鼻状細長い一片
27 チャンネル
28 蝶番
Claims (16)
- 溶液から磁性粒子に結合した重要な成分を分離する方法であって、次の工程:
(a)1つ以上の平らな室(1)を持ち、各室は内部容積と区画の外側部分(25)に上る傾斜底と、流体(10)をトラップする手段とを含み、該手段はコンテナー(11)の区画の外部(25)の内側に置かれていることを特徴とする室と、磁性粒子(21)と該磁性粒子(21)に結合された重要な成分を捕獲するためのコンテナーの区画の内部(4)の外側に置かれた磁石(12)とを持つコンテナー装置を提供する工程と、
(b)一方で該コンテナーの内部(4)の外側でかつ磁石(12)に隣接して置かれている軸(19)の周りに、該コンテナーは回転しながら重要な成分を含む該溶液の少なくとも一部を該室の内部容積中に配置する工程と、
(c)重要な成分を含む溶液に、該重要な成分を固定する反応成分で塗布された非常に多数の磁性粒子(21)を添加する工程と、
(d)非常に多数の塗布された磁性粒子と該溶液を混合し、該磁性粒子と上澄み液体とからなる混合物を生成する工程と、その後、
(e)該コンテナーを回転させることにより、該コンテナー内の磁性粒子と液体の混合物を回転させ、その結果、該液体の少なくとも一部が該コンテナーの外部(25)に放出され、そこでは該液体が遠心力によってトラップ手段(10)中に押しやられる間に、該液体の一部または全部がコンテナーの外側部分(25)において内部容積中に集積された手段(10)によってトラップされ、かつ磁性粒子が該内部容積の内部(4)の内側に固定されるように磁場が付与されることを特徴とする磁性粒子と液体を分離する工程と、からなることを特徴とする方法。 - 回転運動の速度は、磁性粒子上に作用する生成した遠心力が該混合物中の磁性粒子上に作用する遠心力と同等か、それより低くまた該混合物の非磁性液体部分を該トラップ手段に移送するのに充分になるようにすることを特徴とする請求項1記載の方法。
- 付与される遠心力が、1g〜100gであることを特徴とする請求項1または2記載の方法。
- 流体(10)をトラップする該手段が、該室の内部容積中の室のトップに到達しない物理的壁であることを特徴とする請求項1記載の方法。
- 流体(10)をトラップする該手段が、化学吸収材または超吸収材料であることを特徴とする請求項1または4記載の方法。
- 該重要な成分が、核酸、オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチド、タンパク質、抗体、抗原、またはハプテンまたは磁性粒子に直接的にまたは間接的に結合できる他の成分であることを特徴とする請求項1〜5のいずれかに記載の方法。
- 該平らな室には、以後の反応を行うための追加のチューブ(15)が設けられ、該追加のチューブが室の底を経由して接続されていることを特徴とする請求項1記載の方法。
- 該底と該平らな室の内部壁(4)の間の角度は、1゜〜85゜の間であることを特徴とする請求項1〜7に記載の方法。
- 溶液から磁性粒子に結合した重要な成分を分離するコンテナー装置であって、該コンテナー装置は、
(1)1つのコンテナーは、1つ以上の室を持ち、各室は内部容積と、室の外部(25)に上がっていく傾斜底と、流体(10)をトラップするための手段とを持ち、該手段は該コンテナーの室の外壁(25)の内側に置かれていることを特徴とするコンテナーと、
(2)磁性粒子(21)と該磁性粒子に結合された重要な成分を捕獲するためのコンテナーの室の内部壁(4)の外側に置かれた磁石(12)と、
(3)該磁石(12)に隣接したコンテナー装置の中央に置かれた回転軸(19)と、
(4)磁場を付与するための手段と該コンテナーを回転するためのエンジンとからなることを特徴とするコンテナー装置。 - 該コンテナーが、1つ以上の室を含み、各室が1ml〜50mlの範囲の容積を持っていることを特徴とする請求項9記載のコンテナー装置。
- 2つの追加の単一カセットに接続されたまたは接続可能な第1カセット中に結ばれた多数の室を含み、各カセットは2〜100室からなることを特徴とする請求項9または10記載のコンテナー装置。
- 各単一カセットは、4〜96の単一相互接続可能なコンテナーを含むことを特徴とし、線形またはリング状配列を形成する単一カセット中に配置された多数の室を含むことを特徴とする請求項9〜11のいずれかに記載のコンテナー装置。
- 1つ以上の特徴づけられたカセットが、回転軸(19)の周りのリング上に置かれていることを特徴とする請求項11または12記載のコンテナー装置。
- 1つ以上の室は、好ましくは柔軟なシートまたは膜材料を用いて覆われている少なくとも1つの入口および出口(1,2)を含んでいることを特徴とする請求項9〜13のいずれかに記載のコンテナー装置。
- 各室には、排出開口部(3)が設けられていることを特徴とする請求項1〜14のいずれかに記載のコンテナー装置。
- 請求項9〜15のいずれかに記載のコンテナー装置からなる、溶液から磁性粒子に結合した重要な成分を分離する装置。
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