JP2010081931A - セロトニン6受容体リガンドの高効率検出のための、ha−5−ht6rを安定的に発現する細胞株 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】本発明は、セロトニン6受容体リガンドの高効率検出方法に関するもので、HA-5-HT6Rを安定的に発現する細胞株を使用したセロトニン6受容体リガンドの高効率検出方法に関するものである。本発明の細胞株は、HA-5-HT6Rを安定的に発現することにより、HT6Rに選択的に作用するリガンドの検出効率を増加させて、HT6Rと結合するタンパク質研究に有用に使用することができる。したがって、HT6Rが関わる欝病及びアルツハイマー病などの脳疾患及び精神疾患の予防及び診断ならびに治療剤の開発に有用である。
【選択図】図12
Description
Grimaldi B等., Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol., 1999年, 第357(4)巻, 393-400頁 Garcia-Alloza M等., Neuropsychopharmacology, 2004年, 第29(2)巻, 410-416頁 Lorke D等., BMC Neurosci., 2006年, 第27巻, 7-36頁 Greengard等., J Neurosci., 2007年, 第27(15)巻, 4201-4209頁
(1)本発明のHA-5-HT6Rを安定的に発現する細胞株に被検化合物を処理する工程;
(2)前記処理された細胞株の5-HT6R活性を測定する工程;及び
(3)未処理の細胞株と比較して、前記細胞株から5-HT6R活性が増加または減少した被検化合物を選別する工程を含む、
5-HT6Rリガンドの高効率検出方法を提供する。
(1)本発明のHA-5-HT6Rを安定的に発現する細胞株に被検化合物を処理する工程;
(2)前記処理された細胞株のタンパク質を精製する工程;
(3)前記精製されたタンパク質の5-HT6R活性を測定する工程;及び
(4)未処理の細胞株と比較して、前記細胞株から5-HT6R活性が増加または減少した被検化合物を選別する工程を含む、
5-HT6Rリガンドの高効率検出方法を提供する。
(1)本発明のHA-5-HT6Rを安定的に発現する細胞株に被検化合物を処理する工程;
(2)前記処理された細胞株の5-HT6R活性を測定する工程;及び
(3)未処理の細胞株と比較して、前記細胞株から5-HT6R活性が増加または減少した被検化合物を選別する工程を含む、
5-HT6Rリガンドの高効率検出方法を提供する。
(1)本発明のHA-5-HT6Rを安定的に発現する細胞株に被検化合物を処理する工程;
(2)前記処理された細胞株のタンパク質を精製する工程;
(3)前記精製されたタンパク質の5-HT6R活性を測定する工程;及び
(4)未処理の細胞株と比較して、前記細胞株から5-HT6R活性が増加または減少した被検化合物を選別する工程を含む、
5-HT6Rリガンドの高効率検出方法を提供する。
本発明(2)は、寄託番号KCLRF-BP-00187で寄託されたことを特徴とする、本発明(1)の細胞株である。
本発明(3)は、形質導入が、リポフェクタミン、Dojindo社のHilymax、Fugene、jetPEI、Effectene、及びDreamFectからなる群より選択されるいずれか一つの常用化された形質導入用試薬;リン酸カルシウム、陽電荷性高分子、リポソーム、ナノ粒子、ヌクレオフェクション(nucleofection)、電気穿孔法、熱ショック、マグネットフェクション(magnetofection)を使用する方法;ならびにレトロウイルスを使用する方法からなる群より選択されるいずれか一つを使用して遂行されることを特徴とする、本発明(1)の細胞株である。
本発明(4)は、宿主細胞が、HEK293、COS7、CHO-K1、及びCHO-G5Aからなる群より選択されることを特徴とする、本発明(1)の細胞株である。
本発明(5)は、
(1)本発明(1)の細胞株に被検化合物を処理する工程;
(2)前記処理された細胞株の5-HT6R活性を測定する工程;及び
(3)未処理の細胞株と比較して、前記細胞株から5-HT6R活性が増加または減少した被検化合物を選別する工程を含む、
5-HT6Rリガンドの高効率検出方法である。
本発明(6)は、工程(1)の被検化合物が、天然化合物、合成化合物、RNA、DNA、ポリペプチド、酵素、タンパク質、リガンド、抗体、抗原、バクテリアまたは真菌の代謝産物、及び生物活性分子からなる群より選択されるいずれか一つであることを特徴とする、本発明(5)の高効率検出方法である。
本発明(7)は、5-HT6R活性の測定が、前記5-HT6Rによる細胞内カルシウム濃度流入を測定する方法によって遂行されることを特徴とする、本発明(5)の方法である。
本発明(8)は、細胞内カルシウム濃度流入が測定される対象細胞株は、被検化合物を処理前にGα15タンパク質を発現させることができるベクターとリポフェクタミンで形質感染されることを特徴とする、本発明(7)の方法である。
本発明(9)は、
(1)本発明(1)の細胞株に被検化合物を処理する工程;
(2)前記処理された細胞株のタンパク質を精製する工程;
(3)前記精製されたタンパク質の5-HT6R活性を測定する工程;及び
(4)未処理の細胞株と比較して、前記細胞株から5-HT6R活性が増加または減少した被検化合物を選別する工程を含む、
5-HT6Rリガンドの高効率検出方法である。
本発明(10)は、工程(1)の被検化合物が、天然化合物、合成化合物、RNA、DNA、ポリペプチド、酵素、タンパク質、リガンド、抗体、抗原、バクテリアまたは真菌の代謝産物、及び生物活性分子からなる群より選択されるいずれか一つであることを特徴とする、本発明(9)の高効率検出方法である。
本発明(11)は、5-HT6R活性の測定が、前記5-HT6Rによってリン酸化されたERKを測定する方法によって行なわれることを特徴とする、本発明(9)の方法である。
本発明(12)は、本発明(1)の細胞株を含む5-HT6Rリガンドの高効率検出用組成物である。
本発明(13)は、細胞株が、寄託番号KCLRF-BP-00187で寄託されたことを特徴とする、本発明(12)の高効率検出用組成物である。
本発明(14)は、組成物が、Gα15タンパク質を発現させることができるベクター、リポフェクタミン、蛍光性カルシウム標識物、及び洗浄緩衝溶液をさらに含むことを特徴とする、本発明(12)の高効率検出用組成物である。
1-1 野生型細胞株の培養
HEK293細胞株(ATCC CRL1573)を10%牛胎児血清及び1%ペニシリン/ストレプトマイシン(v/v)が含まれたDMEM培地(ダルベッコ修飾イーグル培地)で37℃、5%CO2の加湿条件で培養した。前記培養液は、3〜4日に一回ずつ交換し、細胞は毎週間継代培養した。前記HEK293細胞株を、10cm培養皿に5.0×106程度塗布して12時間培養した。
HA-5-HT6R-pcDNA3.1(+)プラスミド(図1;Missouri S&T cDNA Resource Center、米国)をBglII 制限酵素で処理して線形化した後、リポフェクタミン2000(Invitrogen, 米国)と1:3の割合(線形化されたHA-5-HT6R-pcDNA3.1(+)12μg、リポフェクタミン36μl)でOpti-MEM(Invitrogen, 米国)培地に入れて5分間混合して30分後、培養皿に前記混合液を入れて細胞株を形質感染させた。6時間後に培地をDMEM培地に交換し、さらに24時間細胞を培養した後、800μg/mlのG418(Invitrogen, 米国)を添加して形質転換された細胞を選別した。14日間選択培養した後、コロニーを形成した細胞群をそれぞれ24ウェルプレートで継代培養して成長させて、最も早い成長を示した細胞群を選別した結果、HA-5-HT6Rを安定的に発現する細胞株を得た。安定的な細胞株を得た後、漸次にG418濃度を下げて400μg/ml添加された培地で培養した。
5-HT6R-pcDNA3.1(+)プラスミド(Missouri S&T cDNA Resource Center, 米国)を使用して、実施例1-2の方法で形質転換された細胞株を得た。
2-1 形質転換細胞株の選別
実施例1-2で得た形質転換細胞株をコロニー別にDMEM培地で37℃、5%CO2細胞培養器で培養した後、トリゾール試薬(商品名)を使用してRNAを分離した。AMV逆転写酵素を使用してcDNAを作って、配列番号1で記載される正方向プライマー(5'-CCACTCTTCATGCGGGACTTC-3)及び配列番号2で記載される逆方向プライマー(5'-TCAGTTCGTGGGGATGCCAAG-3')を使用して、HA-5-HT6R遺伝子を増幅した。対照群には配列番号3で記載される正方向プライマー(5'-GTCACCAACTGGGACGACATG-3')及び配列番号4で記載される逆方向プライマー(5'-GCCGTCAGGCAGCTCGTAGC-3')を使用して、β-アクチン遺伝子を増幅した。PCR条件は、95℃で4分間予備変性させた後、95℃で1分、60℃で30秒、72℃で30秒間を30回反復して、最後に72℃で10分間反応させた後、4℃に冷却した。
実施例2-1の方法で培養した細胞株を3〜4日に一回ずつ培養液を交換し、毎週継代培養して総42日間1(P1)世代ないし6(P6)世代を得て、使用前まで-70℃に保管した。対照群には、野生型細胞株の1世代乃至6世代を使用した。
HA-5-HT6R-pcDNA3.1(+)プラスミドをリポフェクタミン2000と1:3の割合でOpti-MEM培地に入れて5分間混合し、30分後培養皿に前記混合液を入れて細胞株を形質感染させた。6時間後に培地をDMEM培地に交換し、さらに24時間細胞を培養して、HA-5-HT6Rを一時的に発現する形質転換細胞株を作製した。
3-1 5-HT6Rの活性剤であるセロトニン(5-HT)に対する反応性の確認
3-1-1 5-HT処理
無血清DMEM培地が含まれた6ウェル培養皿に、実施例2の方法で選別したHA-5-HT6Rを安定的に発現する形質転換細胞株を1×106細胞/ウェルで分注した後、培養した。3時間後、20μ M5-HT(Sigma, 米国)を0〜60分間決められた間隔(0、1、5、15、30、及び60分)で処理した。
5-HT処理時間別に試料を集めて、前記細胞を-20℃に保管してからタンパク質分解酵素抑制剤Complete Mini(Roche Diagnostics GmbH, ドイツ)を含んだ冷たいRIPA溶解緩衝溶液(upstate biotechnology, 米国)と一緒に均質器で粉砕して均質化させた。均質化した試料を13, 000rpmで10分間遠心分離した後、上澄み液と不溶性凝集体を分離した。分離した上澄み液のタンパク質濃度は、Bio-Radタンパク質分析キット(Bio-Rad, 米国)を使用して測定した。また、上澄み液を5×SDS(0.156M Tris-HCl, pH6.8, 2.5%SDS, 37.5%グリセロール, 37.5mM DTT)と1:4で混ぜて100℃で10分間沸かした。沸かした試料を10%SDS-PAGEゲルのウェルにローディングして、125Vで2時間電気泳動して分子量によって分離し、前記タンパク質を20V、400A以下の条件で1時間電気泳動してPVDF膜に移した。タンパク質が移された膜を12時間5%の脱脂乳で遮断して、1次抗体(抗-ERK/p-ERK抗体;Cell signaling, 米国)で4時間処理した後、TBST(Tris緩衝生理食塩水+0.1% tween)で10分間3回洗浄して、2次抗体(抗ウサギ-IgG-HRP;Amersham Bioscience, UK)を1時間処理した。また、TBSTで10分間4回洗浄後、ECL検出キット(Amersham Biosciences, UK)で発光反応を誘発し、Hyperfilm-MP(Amersham Biosciences, UK)に曝露して結合反応を観察した。
無血清DMEM培地を含んだ細胞株を6ウェル培養皿に、実施例2の方法で選別した、HA-5-HT6Rを安定的に発現する形質転換細胞株を1×106細胞/ウェルで分注した後、培養した。3時間後、20μM 5-HT、1μM EMD386088(Tocris, 米国)及び10μM SB258585(Tocris, 米国)を5分間決められた間隔でそれぞれ処理した。EMD386088/SB258585の場合、SB258585を30分間前処理した後、EMD386088を処理した。前記化学物質処理によるERKリン酸化を実施例3-1-2のウエスタンブロット方法で確認した。
4-1 Fyn過発現の前分析
本発明のHA-5-HT6Rを安定的に発現する細胞株で細胞膜外部に位置する5-HT6RのN末端に連結されたHAが細胞表面外に位置することを確認するため(図6)、大韓民国公開特許第2008-0004994号で5-HT6Rの結合タンパク質であることが確認されたFynを使用した。
無血清DMEM培地を含んだ100mmプレートに、実施例2の方法で選別したHA-5-HT6Rを安定的に発現する形質転換細胞株を1×106細胞/ウェルで分注して培養した後、Fyn-pcDNA3.1(+)とリポフェクタミン2000を1:3の割合でOpti-MEM培地に入れて5分間混合し、30分後に培養皿に前記混合液を入れて細胞株を形質感染させた。6時間後に培地をDMEM培地に交換し、さらに24時間細胞を培養してFynを過発現させた。
5-1 細胞処理条件
無血清DMEM培地を含んだ100mmプレートに、実施例2の方法で選別したHA-5-HT6Rを安定的に発現する細胞株とHA-5-HT6Rを一時的に発現する細胞株、野生型HEK293細胞株、及び5-HT6Rを発現する細胞株を5×106細胞/ウェルで96ウェルプレート一つを3区域に分けて分注して培養した。24時間後、Gα15タンパク質を発現させることができるベクター(Evi Kostenis, Institute for Pharmaceutical Biology, ドイツ)とリポフェクタミン2000とを1:3の重量比で混合して前記細胞株に形質感染させた後、1%FBSを含んだDMEMで16時間以上培養した。活性の検出の一日前にポリ-L-リジン(0.05mg/ml)で処理した96ウェルプレートに前記形質感染させた細胞を一ウェル当たり5×104の密度で分注した。受容体内在化(internalization)を抑制するために血清枯渇(serum starvation)条件を使用した。前記受容体内在化が細胞質内に内在化すると、分解されたり不活性化されて受容体を下向き調節したりする。
細胞基盤HTS器機FDSS6000(Hamamatsu Photonics, 日本)を使用して蛍光カルシウムを測定した。ここで、カルシウム濃度に敏感なフルオ-4/AMと0.001%プルロニックF-127(Sigma, 米国)を蛍光性カルシウム標識物に使用した。細胞を480nmに選択的に曝露して515nmを通過する放出蛍光をCCDカメラで撮ってデータを得た。
実施例5-1でGα15タンパク質を発現させることができるベクターで形質感染させたHA-5-HT6Rを安定的に発現する細胞株と、5-HT6Rを発現する細胞株に、10μM 5-HTをそれぞれ処理した後、実施例4-2の方法で活性を測定した。陰性対照群には、HAタグのみ入っている空ベクターで形質転換された細胞株を使用した。Fは、480nmでの蛍光強度で、F0は初期値を示す。
実施例5-1でGα15タンパク質を発現させることができるベクターで形質感染させたHA-5-HT6Rを安定的に発現する細胞株に、96ウェルプレートとは別に5-HT6受容体を活性化させる相異した濃度(10-11〜10-5M)の5-HT6受容体活性剤を含んだ1個の96ウェル薬物プレートを準備した。大部分の細胞基盤HTS器機の場合、薬物注入に必要な液体アプリケーションシステムはあるが、液体吸入システムはないので検出しようとする5-HT及び他の活性剤薬物を5倍の高濃度でHEPES緩衝溶液に20μlずつ準備して最終体積である100μl(付着状態培養細胞80+5×5-HT及び他の活性剤薬物)から1/5希釈して測定した。最終的に25秒基準測定、90秒間薬物処理条件下で5-HT6受容体活性剤である5-HTを10-10〜10-5M濃度範囲で蛍光標識染料であるフルオ-4を使用して5-HT6受容体活性に対するCa2+シグナルを%で求めた。480nmで最高比率値の面積を100%にして、5-HTの活性効果を求めた後、細胞に対する濃度-依存性グラフとこれからEC50値を求めた(図11)。ここで、5-HTに対するEC50値は、y/ymax=1/(1+(K1/2/[5-HT]nH)式を使用して求めた(ymaxは最大反応、K1/2はEC50値、nHはHill定数)。
実施例5-1でGα15タンパク質を発現させることができるベクターで形質感染させたHA-5-HT6Rを安定的に発現する細胞株(S1〜S3)と、HA-5-HT6Rを一時的に発現する細胞株(T1〜T3)に、10μM 5-HTをそれぞれ処理した後、実施例4-2の方法で活性を測定し、Integration Ratio Max(Hamamatsu Photonics program, 日本)で細胞内カルシウム流入数値(Integrate ratio max values)を計算した。
Claims (14)
- N末端にHA(血球凝集素)が連結された5-HT6R遺伝子構築物を含むベクターが宿主細胞に形質導入されてHA-5-HT6Rを安定的に発現する、細胞株。
- 寄託番号KCLRF-BP-00187で寄託されたことを特徴とする、請求項1に記載の細胞株。
- 形質導入が、リポフェクタミン、Dojindo社のHilymax、Fugene、jetPEI、Effectene、及びDreamFectからなる群より選択されるいずれか一つの常用化された形質導入用試薬;リン酸カルシウム、陽電荷性高分子、リポソーム、ナノ粒子、ヌクレオフェクション(nucleofection)、電気穿孔法、熱ショック、マグネットフェクション(magnetofection)を使用する方法;ならびにレトロウイルスを使用する方法からなる群より選択されるいずれか一つを使用して遂行されることを特徴とする、請求項1に記載の細胞株。
- 宿主細胞が、HEK293、COS7、CHO-K1、及びCHO-G5Aからなる群より選択されることを特徴とする、請求項1に記載の細胞株。
- (1)請求項1に記載の細胞株に被検化合物を処理する工程;
(2)前記処理された細胞株の5-HT6R活性を測定する工程;及び
(3)未処理の細胞株と比較して、前記細胞株から5-HT6R活性が増加または減少した被検化合物を選別する工程を含む、
5-HT6Rリガンドの高効率検出方法。 - 工程(1)の被検化合物が、天然化合物、合成化合物、RNA、DNA、ポリペプチド、酵素、タンパク質、リガンド、抗体、抗原、バクテリアまたは真菌の代謝産物、及び生物活性分子からなる群より選択されるいずれか一つであることを特徴とする、請求項5に記載の高効率検出方法。
- 5-HT6R活性の測定が、前記5-HT6Rによる細胞内カルシウム濃度流入を測定する方法によって遂行されることを特徴とする、請求項5に記載の方法。
- 細胞内カルシウム濃度流入が測定される対象細胞株が、被検化合物を処理前にGα15タンパク質を発現させることができるベクターとリポフェクタミンで形質感染されることを特徴とする、請求項7に記載の方法。
- (1)請求項1に記載の細胞株に被検化合物を処理する工程;
(2)前記処理された細胞株のタンパク質を精製する工程;
(3)前記精製されたタンパク質の5-HT6R活性を測定する工程;及び
(4)未処理の細胞株と比較して、前記細胞株から5-HT6R活性が増加または減少した被検化合物を選別する工程を含む、
5-HT6Rリガンドの高効率検出方法。 - 工程(1)の被検化合物が、天然化合物、合成化合物、RNA、DNA、ポリペプチド、酵素、タンパク質、リガンド、抗体、抗原、バクテリアまたは真菌の代謝産物、及び生物活性分子からなる群より選択されるいずれか一つであることを特徴とする、請求項9に記載の高効率検出方法。
- 5-HT6R活性の測定が、前記5-HT6Rによってリン酸化されたERKを測定する方法によって行なわれることを特徴とする、請求項9に記載の方法。
- 請求項1に記載の細胞株を含む5-HT6Rリガンドの高効率検出用組成物。
- 細胞株が、寄託番号KCLRF-BP-00187で寄託されたことを特徴とする、請求項12に記載の高効率検出用組成物。
- 組成物が、Gα15タンパク質を発現させることができるベクター、リポフェクタミン、蛍光性カルシウム標識物、及び洗浄緩衝溶液をさらに含むことを特徴とする、請求項12に記載の高効率検出用組成物。
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Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2005528587A (ja) * | 2002-02-01 | 2005-09-22 | バイエル・ヘルスケア・アクチェンゲゼルシャフト | 新規ヒト5−ht6受容体に関連する疾患のための診断用および治療用物質 |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5609849A (en) * | 1994-03-11 | 1997-03-11 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Serotonin (5-HT1A) receptor ligands and imaging agents |
CN1920032A (zh) * | 2006-03-29 | 2007-02-28 | 山东中医药大学 | 猕猴5羟色胺1a受体的部分基因及其应用 |
KR100852284B1 (ko) * | 2006-07-07 | 2008-08-14 | 한국과학기술연구원 | 형광 이미징법을 이용한 5-ht6 수용체 리간드 고효율검색법 |
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2008
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