JP2010057381A - Apparatus for recovering cell and apparatus for separating and recovering cell - Google Patents

Apparatus for recovering cell and apparatus for separating and recovering cell Download PDF

Info

Publication number
JP2010057381A
JP2010057381A JP2008223853A JP2008223853A JP2010057381A JP 2010057381 A JP2010057381 A JP 2010057381A JP 2008223853 A JP2008223853 A JP 2008223853A JP 2008223853 A JP2008223853 A JP 2008223853A JP 2010057381 A JP2010057381 A JP 2010057381A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
cell
cells
column
particles
cell suspension
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
JP2008223853A
Other languages
Japanese (ja)
Inventor
Koka Rin
孔華 林
Takahiro Ono
隆弘 大野
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Olympus Corp
Original Assignee
Olympus Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Olympus Corp filed Critical Olympus Corp
Priority to JP2008223853A priority Critical patent/JP2010057381A/en
Publication of JP2010057381A publication Critical patent/JP2010057381A/en
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M47/00—Means for after-treatment of the produced biomass or of the fermentation or metabolic products, e.g. storage of biomass
    • C12M47/04—Cell isolation or sorting

Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To recover necessary cells by a simple process without damaging the cells. <P>SOLUTION: The apparatus 2 for recovering cells includes a flow channel 4 for fluidizing a cell suspension B, and a column 5 that is arranged in an intermediate position of the flow channel 4 and circulates the cell suspension B fluidized in the flow channel 4. The column 5 is equipped with a cylinder 5a and a large number of particles 5b packed in the cylinder 5a so as to form small flow channels. A surface antigen marker CD90<SP>+</SP>antibody is supported on the surfaces of the particles 5b. <P>COPYRIGHT: (C)2010,JPO&INPIT

Description

本発明は、細胞回収装置および細胞分離回収装置に関するものである。   The present invention relates to a cell collection device and a cell separation collection device.

従来、脂肪組織等の生体組織から脂肪由来幹細胞等を回収する方法として、生体組織を消化酵素液とともに容器内において攪拌して細胞を単離させ、得られた細胞懸濁液を遠心分離する方法が知られている（例えば、特許文献１参照。）。   Conventionally, as a method for recovering adipose-derived stem cells and the like from a living tissue such as adipose tissue, a method in which a living tissue is stirred in a container together with a digestive enzyme solution to isolate cells, and the resulting cell suspension is centrifuged. Is known (for example, see Patent Document 1).

国際公開第０５／０１２４８０号パンフレットWO05 / 012480 pamphlet

しかしながら、細胞懸濁液を遠心分離することにより細胞を回収する方法では、細胞懸濁液内に存在している赤血球等の不要成分を除去するために、細胞を単離させた容器内から取り出した細胞懸濁液を遠心分離機内の遠心分離容器内に投入する作業と、細胞に大きな遠心力をかける作業と、細胞を洗浄する作業とを繰り返す必要があり、作業工程が複雑であるとともに、細胞にダメージが与えられてしまうという不都合がある。   However, in the method of recovering cells by centrifuging the cell suspension, in order to remove unnecessary components such as erythrocytes present in the cell suspension, the cells are taken out from the isolated container. The cell suspension must be repeated in the centrifuge container in the centrifuge, the operation of applying a large centrifugal force to the cells, and the operation of washing the cells. There is an inconvenience that the cells are damaged.

本発明は上述した事情に鑑みてなされたものであって、簡易な工程で細胞にダメージを与えることなく必要な細胞を回収することができる細胞回収装置および細胞分離回収装置を提供することを目的としている。   The present invention has been made in view of the above-described circumstances, and an object thereof is to provide a cell collection device and a cell separation and collection device that can collect necessary cells without damaging the cells in a simple process. It is said.

上記目的を達成するために、本発明は以下の手段を提供する。
本発明は、細胞懸濁液を流動させる流路と、該流路の途中位置に配置され、該流路を流動してきた細胞懸濁液を流通させるカラムとを備え、該カラムが、筒体と、該筒体内に小流路を形成するように充填された多数の粒子とを備え、前記粒子の表面に、表面抗原マーカＣＤ９０＋抗体が担持されている細胞回収装置を提供する。 In order to achieve the above object, the present invention provides the following means.
The present invention includes a flow path for flowing a cell suspension, and a column that is arranged in the middle of the flow path and distributes the cell suspension that has flowed through the flow path. And a large number of particles filled so as to form a small channel in the cylinder, and a cell recovery device in which a surface antigen marker CD90 + antibody is supported on the surface of the particles is provided.

本発明によれば、流路内を流動させられた細胞懸濁液がカラム内に入ると、カラムを構成する筒内に充填されている多数の粒子により形成されている小流路内を通過させられる。粒子の表面には表面抗原マーカＣＤ９０＋抗体が担持されているので、表面抗原マーカＣＤ９０＋を発現している細胞が表面抗原マーカＣＤ９０＋抗体に吸着されてカラム内に残り、赤血球等の他の粒子はそのままカラムを通過させられる。 According to the present invention, when the cell suspension fluidized in the flow path enters the column, it passes through the small flow path formed by a large number of particles filled in the cylinder constituting the column. Be made. Since the surface antigen marker CD90 + antibodies on the surface of the particles are supported, cells expressing the surface antigen marker CD90 + remains in the column are adsorbed on the surface antigen marker CD90 + antibodies, other erythrocyte etc. The particles are allowed to pass through the column as is.

したがって、細胞懸濁液内に存在している脂肪由来細胞、血管内皮細胞、血管周細胞、血管周前駆細胞および繊維芽細胞等の表面抗原マーカＣＤ９０＋を発現している細胞のみを吸着して分離し、他の細胞をカラムから放出することができる。これにより、細胞に過大な遠心力を作用させることもなく、カラム内に流通させるという簡易な操作のみによって必要な細胞を回収することができる。 Therefore, only cells expressing the surface antigen marker CD90 + such as adipose-derived cells, vascular endothelial cells, vascular pericytes, perivascular progenitor cells and fibroblasts present in the cell suspension are adsorbed. They can be separated and other cells released from the column. Thereby, it is possible to collect necessary cells only by a simple operation of circulating in the column without applying excessive centrifugal force to the cells.

上記発明においては、前記粒子が、磁気ビーズからなり、前記筒体外部に、前記粒子を磁気的に吸着させる磁石が配置されていてもよい。
このようにすることで、表面抗原マーカＣＤ９０＋を発現している細胞を吸着した粒子は、筒体の外部に配置されている磁石からの磁力によって筒体内に保持されているので、磁石からの磁力を取り除くことによって容易に筒体内から取り出すことができる。すなわち、表面抗原マーカＣＤ９０＋を発現している細胞は、粒子への吸着後に磁力を取り除いて、粒子を筒体外に取り出すことにより、粒子とともに簡易に回収することができる。 In the above invention, the particles may be made of magnetic beads, and a magnet that magnetically attracts the particles may be disposed outside the cylindrical body.
In this way, the particles adsorbing the cells expressing the surface antigen marker CD90 + are held in the cylinder by the magnetic force from the magnet arranged outside the cylinder, By removing the magnetic force, it can be easily taken out from the cylinder. That is, cells expressing the surface antigen marker CD90 + can be easily collected together with the particles by removing the magnetic force after adsorption to the particles and taking the particles out of the cylinder.

また、上記発明においては、前記粒子が、所定の温度で流動化する温度感受性材料からなるビーズであってもよい。
このようにすることで、カラム内の粒子に表面抗原マーカＣＤ９０＋を発現している細胞を吸着させた状態で、粒子の温度を変化させて流動化させることにより、筒体内から簡易に流出させて細胞を回収することができる。 Moreover, in the said invention, the bead which consists of a temperature sensitive material which fluidizes at the predetermined temperature may be sufficient as the said particle | grain.
By doing so, the particles expressing the surface antigen marker CD90 + are adsorbed on the particles in the column, and the particles are changed in temperature to be fluidized to easily flow out of the cylinder. Cells can be collected.

また、本発明は、生体組織を消化液とともに容器内に収容して攪拌することにより、細胞を単離させる細胞分離部と、該細胞分離部の外部に配置された循環流路と、該循環流路の途中位置に配置され、該循環流路を流動してきた細胞懸濁液を流通させるカラムとを備え、該カラムが、筒体と、該筒体内に小流路を形成するように充填された多数の粒子とを備え、前記粒子の表面に、表面抗原マーカＣＤ９０＋抗体が担持されている細胞分離回収装置を提供する。 The present invention also provides a cell separation part for isolating cells by containing a living tissue in a container together with a digestion solution and stirring, a circulation channel disposed outside the cell separation part, and the circulation A column disposed in the middle of the flow path and through which the cell suspension that has flowed through the circulation flow path is circulated, and the column is packed to form a cylindrical body and a small flow path in the cylindrical body A cell separation / recovery device having a surface antigen marker CD90 + antibody supported on the surface of the particles.

本発明によれば、細胞分離部において生成された細胞懸濁液が循環流路内を流通させられる間にカラムを通過させられて、必要な細胞のみがカラム内の粒子に吸着される。これにより、細胞分離部において生体組織から細胞を単離させながら、循環流路を循環させるという簡単な動作で、必要な細胞を吸着して回収することができる。   According to the present invention, the cell suspension generated in the cell separation unit is allowed to pass through the column while being circulated in the circulation channel, and only necessary cells are adsorbed to the particles in the column. Thus, necessary cells can be adsorbed and collected by a simple operation of circulating the circulation channel while isolating the cells from the living tissue in the cell separation unit.

本発明によれば、簡易な工程で細胞にダメージを与えることなく必要な細胞を回収することができるという効果を奏する。   According to the present invention, it is possible to recover necessary cells without damaging the cells by a simple process.

以下、本発明の第１の実施形態に係る細胞回収装置２および細胞分離回収装置１について、図１〜図５を参照して以下に説明する。
本実施形態に係る細胞分離回収装置１は、生体組織から細胞を単離させる細胞分離部３と、該細胞分離部３に接続された細胞回収装置２とを備えている。細胞回収装置２は、細胞分離部３に接続された循環流路４と、該循環流路４の途中位置に配置されたカラム５と、カラム５内に洗浄液Ａを流通させる洗浄液流通手段６とを備えている。 Hereinafter, the cell recovery device 2 and the cell separation / recovery device 1 according to the first embodiment of the present invention will be described with reference to FIGS.
A cell separation / recovery device 1 according to the present embodiment includes a cell separation unit 3 for isolating cells from a biological tissue, and a cell recovery device 2 connected to the cell separation unit 3. The cell recovery device 2 includes a circulation channel 4 connected to the cell separation unit 3, a column 5 disposed in the middle of the circulation channel 4, and a cleaning liquid distribution means 6 for circulating the cleaning liquid A in the column 5. It has.

細胞分離部３は、生体組織を消化液とともに貯留する分離容器７と、該分離容器７内の生体組織および消化液を攪拌する攪拌手段８とを備えている。攪拌手段８は、例えば、分離容器７の下部に配置されたマグネチックスターラ８ａと、分離容器７の内部に配置されたプロペラ式の攪拌子８ｂとを備えている。   The cell separation unit 3 includes a separation container 7 that stores biological tissue together with digestive fluid, and an agitation unit 8 that agitates the biological tissue and digestive fluid in the separation container 7. The stirring means 8 includes, for example, a magnetic stirrer 8 a disposed at the lower part of the separation container 7 and a propeller type stirring element 8 b disposed inside the separation container 7.

マグネチックスターラ８ａが、強力な磁石（図示せず）を回転させることにより、分離容器７内に配置された攪拌子８ｂが磁力で回転させられて、分離容器７内に貯留されている生体組織と消化液とを攪拌するようになっている。分離容器７には、生体組織から分離された細胞よりも大きな生体組織片が分離容器７内から循環流路４内に排出されないように捕捉するフィルタ９が備えられている。   The magnetic stirrer 8a rotates a powerful magnet (not shown), so that the stirrer 8b disposed in the separation container 7 is rotated by a magnetic force and is stored in the separation container 7. And the digestive juice are agitated. The separation container 7 is provided with a filter 9 that captures a biological tissue piece larger than cells separated from the biological tissue so as not to be discharged from the separation container 7 into the circulation channel 4.

循環流路４は、その両端が分離容器７に接続された配管４ａと、該配管の途中位置に配置されたポンプ４ｂとを備え、ポンプ４ｂの作動によって、分離容器７内において生体組織から分離された細胞群を含みフィルタ９を通過した細胞懸濁液Ｂが流動させられるようになっている。
カラム５は、図１に示されるように、循環流路４の途中位置に配置され、循環流路４を流通してきた細胞懸濁液Ｂを流通させる筒状のカラム本体（筒体）５ａと、該カラム本体５ａ内に充填された磁気ビーズ５ｂと、カラム本体５ａに設けられ、電流のオンオフによって磁力を発生または消滅させる電磁石（磁石）５ｃとを備えている。電磁石５ｃにはそのオンオフを制御する制御部１０が接続されている。 The circulation flow path 4 includes a pipe 4a whose both ends are connected to the separation container 7 and a pump 4b disposed in the middle of the pipe, and is separated from the living tissue in the separation container 7 by the operation of the pump 4b. The cell suspension B including the cell group and having passed through the filter 9 is made to flow.
As shown in FIG. 1, the column 5 is disposed in the middle of the circulation flow path 4, and has a cylindrical column main body (cylinder) 5 a that distributes the cell suspension B that has circulated through the circulation flow path 4. The column main body 5a includes magnetic beads 5b, and the column main body 5a includes an electromagnet (magnet) 5c that generates or extinguishes magnetic force by turning on and off the current. The electromagnet 5c is connected to a controller 10 that controls on / off.

磁気ビーズ５ｂは、例えば、直径約５０μｍ（Miltenyibiotec社製）の球体であり、その表面に表面抗原マーカＣＤ９０＋抗体がコーティングにより担持されている。
磁気ビーズ５ｂは、電磁石５ｃをオン状態にすることでカラム本体５ａ内に吸着状態に保持される。カラム本体５ａ内に吸着された球状の磁気ビーズ５ｂは、相互に密着するように充填されることにより、相互間に隙間を形成する。磁気ビーズ５ｂ間に形成される隙間は、相互に連絡していて、カラム本体５ａ内に多数の微小流路を形成する。 The magnetic bead 5b is, for example, a sphere having a diameter of about 50 μm (manufactured by Miltenyibiotec), and a surface antigen marker CD90 + antibody is supported on the surface thereof by coating.
The magnetic beads 5b are held in an attracted state in the column body 5a by turning on the electromagnet 5c. The spherical magnetic beads 5b adsorbed in the column main body 5a are filled so as to be in close contact with each other, thereby forming a gap therebetween. The gaps formed between the magnetic beads 5b are in communication with each other and form a large number of microchannels in the column body 5a.

これにより、上述したように、微小流路を構成している磁気ビーズ５ｂの表面には表面抗原マーカＣＤ９０＋抗体がコーティングされているので、微小流路の内面には表面抗原マーカＣＤ９０＋抗体が配置されることになる。
洗浄液流通手段６は、洗浄液Ａを貯留する洗浄液容器６ａと、該洗浄液Ａをカラム５に導く供給配管６ｂと、カラム５を通過した洗浄液Ａを排出する排出管６ｃとを備えている。供給配管６ｂおよび排出管６ｃは、循環流路４を構成する配管４ａに三方弁１１，１２によって接続されている。排出管６ｃは排出容器１３に接続されている。
また、排出管６ｃの下流側には、三方弁１４を介して回収容器１５が接続されている。 Thus, as described above, the surface antigen marker CD90 + antibodies on the surface of the magnetic beads 5b constituting the fine channel is coated, fine channel surface antigen markers CD90 + antibodies on the inner surface of Will be placed.
The cleaning liquid circulation means 6 includes a cleaning liquid container 6 a that stores the cleaning liquid A, a supply pipe 6 b that guides the cleaning liquid A to the column 5, and a discharge pipe 6 c that discharges the cleaning liquid A that has passed through the column 5. The supply pipe 6 b and the discharge pipe 6 c are connected to the pipe 4 a constituting the circulation flow path 4 by the three-way valves 11 and 12. The discharge pipe 6 c is connected to the discharge container 13.
A collection container 15 is connected to the downstream side of the discharge pipe 6c via a three-way valve 14.

このように構成された本実施形態に係る細胞分離回収装置１の作用について、以下に説明する。
本実施形態に係る細胞分離回収装置１を用いて、生体組織、例えば、脂肪組織から脂肪由来細胞等の有用な細胞を分離回収するには、分離容器７内に脂肪組織と消化液とを貯留し、攪拌手段８の作動によって攪拌する。これにより、分離容器７内に脂肪由来細胞等が単離された細胞懸濁液Ｂが生成される。 The operation of the cell separation and recovery apparatus 1 according to the present embodiment configured as described above will be described below.
In order to separate and recover useful cells such as fat-derived cells from a living tissue, for example, adipose tissue, using the cell separation and recovery apparatus 1 according to the present embodiment, the adipose tissue and digestive fluid are stored in the separation container 7. Then, stirring is performed by the operation of the stirring means 8. Thereby, the cell suspension B in which fat-derived cells and the like are isolated in the separation container 7 is generated.

この状態で、循環流路４のポンプ４ｂを作動させることにより、分離容器７内の細胞懸濁液Ｂが循環流路４の配管４ａ内に流入する。分離容器７内にはフィルタ９が配置されているので、単離された細胞よりも大きな生体組織の塊は分離容器７内からの流出が防止される。   In this state, the cell suspension B in the separation container 7 flows into the piping 4 a of the circulation channel 4 by operating the pump 4 b of the circulation channel 4. Since the filter 9 is disposed in the separation container 7, a mass of biological tissue larger than the isolated cells is prevented from flowing out from the separation container 7.

循環流路４に流入した細胞懸濁液Ｂは、図２に示されるように、カラム５に流入させられる。このとき、カラム本体５ａに設けられた電磁石５ｃへの電流をオン状態にしておく。これにより、カラム本体５ａ内に磁気ビーズ５ｂが吸着状態に維持されているので、細胞懸濁液Ｂは、磁気ビーズ５ｂ間に形成されている微小流路内を流動させられる。   The cell suspension B that has flowed into the circulation channel 4 is caused to flow into the column 5 as shown in FIG. At this time, the current to the electromagnet 5c provided in the column main body 5a is turned on. Thereby, since the magnetic beads 5b are maintained in the adsorbed state in the column main body 5a, the cell suspension B is caused to flow in the microchannel formed between the magnetic beads 5b.

磁気ビーズ５ｂの表面に表面抗原マーカＣＤ９０＋抗体がコーティングされていることにより、細胞懸濁液Ｂが微小流路内を流動する間に、細胞懸濁液Ｂ内に存在している表面抗原マーカＣＤ９０＋を発現している細胞のみが磁気ビーズ５ｂに吸着される。図３に示されるように、有用な細胞は全て表面抗原マーカＣＤ９０＋を発現している一方、他の表面抗原マーカについては常に発現しているとは限らない。 Since the surface antigen marker CD90 + antibody is coated on the surface of the magnetic bead 5b, the surface antigen marker present in the cell suspension B while the cell suspension B flows in the microchannel. Only cells expressing CD90 + are adsorbed to the magnetic beads 5b. As shown in FIG. 3, all useful cells express the surface antigen marker CD90 + , while other surface antigen markers are not always expressed.

有用な細胞は、例えば、脂肪由来細胞、血管内皮細胞、血管周細胞、血管周前駆細胞および繊維芽細胞等である。これらの細胞は磁気ビーズ５ｂに吸着され、不要な赤血球等は微小流路を通過してカラム５から排出される。排出された細胞懸濁液Ｂは、循環流路４を介して分離容器７内に戻される。   Useful cells are, for example, adipose-derived cells, vascular endothelial cells, vascular pericytes, perivascular progenitor cells and fibroblasts. These cells are adsorbed on the magnetic beads 5b, and unnecessary red blood cells and the like pass through the microchannel and are discharged from the column 5. The discharged cell suspension B is returned to the separation container 7 through the circulation channel 4.

この状態で、図４に示されるように、三方弁１１，１２を切り替えて、細胞懸濁液Ｂのカラム５内への流入を停止し、洗浄液容器６ａから洗浄液Ａをカラム５内に流入させる。これにより、カラム５内の微小流路に洗浄液Ａが流通させられて微小流路内面が洗浄される。微小流路の内面には上述したように有用な細胞が吸着されているとともに、細胞懸濁液Ｂに含有されていた消化液が付着しているので、洗浄液Ａによって消化液が押し流されて細胞のみが吸着状態に残る。微小流路の内面を洗浄した洗浄液Ａは、排出管６ｃを介して排出容器１３に回収される。   In this state, as shown in FIG. 4, the three-way valves 11 and 12 are switched to stop the flow of the cell suspension B into the column 5 and allow the washing solution A to flow into the column 5 from the washing solution container 6 a. . As a result, the cleaning liquid A is circulated through the microchannel in the column 5 to clean the inner surface of the microchannel. As described above, useful cells are adsorbed on the inner surface of the microchannel, and the digestive fluid contained in the cell suspension B adheres. Only remains adsorbed. The cleaning liquid A that has cleaned the inner surface of the microchannel is collected in the discharge container 13 via the discharge pipe 6c.

次に、図５に示されるように、三方弁１２を切り替えて、洗浄液Ａの排出管６ｃへの排出を停止した状態で、回収容器１５への三方弁１４を開いて、電磁石５ｃの電流をオフ状態に切り替える。これにより、電磁石５ｃによる磁気吸引力が消滅するので、カラム本体５ａ内に保持されていた磁気ビーズ５ｂは洗浄液Ａによって、カラム本体５内から排出させられて回収容器１５に流入し回収される。   Next, as shown in FIG. 5, with the three-way valve 12 switched and the discharge of the cleaning liquid A to the discharge pipe 6c stopped, the three-way valve 14 to the collection container 15 is opened and the current of the electromagnet 5c is increased. Switch to off state. As a result, the magnetic attractive force by the electromagnet 5c disappears, so that the magnetic beads 5b held in the column main body 5a are discharged from the column main body 5 by the cleaning liquid A, and flow into the recovery container 15 to be recovered.

このように、本実施形態に係る細胞分離回収装置１によれば、磁気ビーズ５ｂに施した表面抗原マーカＣＤ９０＋抗体のコーティングにより、有用な細胞のみを吸着し、電磁石５ｃのオンオフにより、回収するので、簡易に、有用な細胞を回収することができる。
有用な細胞は磁気ビーズ５ｂに吸着されているので、本実施形態によれば有用な細胞は磁気ビーズ５ｂごと回収されることになる。磁気ビーズ５ｂはその直径が十分に小さく、細胞の生存率や活性に与える影響が少ないので、そのまま移植材として使用することができる。 As described above, according to the cell separation / recovery device 1 according to the present embodiment, only the useful cells are adsorbed by the coating of the surface antigen marker CD90 + antibody applied to the magnetic beads 5b, and are recovered by turning on / off the electromagnet 5c. Therefore, useful cells can be easily recovered.
Since useful cells are adsorbed on the magnetic beads 5b, according to the present embodiment, useful cells are collected together with the magnetic beads 5b. Since the magnetic beads 5b have a sufficiently small diameter and have little influence on the cell survival rate and activity, they can be used as they are as transplants.

また、本実施形態によれば、細胞を回収する前に、細胞を洗浄液Ａによって洗浄するので、細胞に付着している消化液の濃度を低減し、消化液が細胞に与えるダメージを低減することができる。また、従来の遠心分離のように過大な遠心力を細胞にかける必要もなく、細胞に与えるダメージをさらに低減することができる。   In addition, according to the present embodiment, since the cells are washed with the washing solution A before the cells are collected, the concentration of the digestive fluid adhering to the cells is reduced, and the damage the digestive fluid gives to the cells is reduced. Can do. Further, it is not necessary to apply an excessive centrifugal force to the cells as in conventional centrifugation, and damage to the cells can be further reduced.

なお、本実施形態においては、磁気ビーズ５ｂに作用させる磁気をオンオフするための電磁石５ｃを採用したが、これに代えて、カラム本体５ａに対して着脱可能に設けられた永久磁石（図示略）を採用してもよい。   In the present embodiment, the electromagnet 5c for turning on and off the magnetism applied to the magnetic beads 5b is employed. Instead, a permanent magnet (not shown) provided detachably with respect to the column body 5a. May be adopted.

次に、本発明の第２の実施形態に係る細胞分離回収装置２０について、図６を参照して以下に説明する。
本実施形態の説明において、上述した第１の実施形態に係る細胞分離回収装置１と構成を共通とする箇所には同一符号を付して説明を省略する。 Next, a cell separation and recovery apparatus 20 according to a second embodiment of the present invention will be described below with reference to FIG.
In the description of the present embodiment, portions having the same configuration as those of the cell separation and recovery apparatus 1 according to the first embodiment described above are denoted by the same reference numerals and description thereof is omitted.

本実施形態に係る細胞分離回収装置２０は、図６に示されるように、カラム２１の構造において第１の実施形態に係る細胞分離回収装置１と相違している。
本実施形態においては、カラム本体５ａの内部に磁気ビーズ５ｂに代えて、温度感受性材料（例えば、Cellseed社製）からなり直径約５０〜１００μｍに加工された多数のビーズ２１ｂが充填されている。カラム本体５ａの出口には、ビーズ２１ｂが流出しないように、十分に小さい網目を有するメッシュ２１ｃが配置されている。 As shown in FIG. 6, the cell separation and recovery apparatus 20 according to the present embodiment is different from the cell separation and recovery apparatus 1 according to the first embodiment in the structure of the column 21.
In this embodiment, the column main body 5a is filled with a large number of beads 21b made of a temperature-sensitive material (for example, manufactured by Cellseed) and processed to have a diameter of about 50 to 100 μm instead of the magnetic beads 5b. A mesh 21c having a sufficiently small mesh is arranged at the outlet of the column body 5a so that the beads 21b do not flow out.

ビーズ２１ｂの表面には、第１の実施形態と同様にして、表面抗原マーカＣＤ９０＋抗体がコーティングされている。
また、カラム本体５ａには、電磁石５ｃに代えて、例えば、冷却液を流通させる冷却流路２１ｄと、該冷却流路２１ｄに冷却液を供給する冷却液供給部２２とが設けられている。冷却液は、２０℃程度の温度に設定されており、カラム本体５ａ内のビーズ２１ｂを室温から２０℃程度まで冷却することができるようになっている。 The surface antigen marker CD90 + antibody is coated on the surface of the bead 21b as in the first embodiment.
In addition, instead of the electromagnet 5c, the column main body 5a is provided with, for example, a cooling flow path 21d for circulating a cooling liquid and a cooling liquid supply unit 22 for supplying the cooling liquid to the cooling flow path 21d. The coolant is set to a temperature of about 20 ° C., and the beads 21b in the column body 5a can be cooled from room temperature to about 20 ° C.

このように構成された本実施形態に係る細胞分離回収装置２０によれば、分離容器７において単離された細胞を含む細胞懸濁液Ｂが循環流路４を介してカラム２１内に流入すると、細胞懸濁液Ｂに含まれている表面抗原マーカＣＤ９０＋を発現している有用な細胞がビーズ２１ｂに吸着される。この状態で、三方弁１１，１２を切り替えて洗浄液Ａにより細胞を洗浄した後、三方弁１２，１４を回収容器１５側に切り替える。そして、冷却流路２１ｄに冷却液を流通させることによりカラム本体５ａを冷却する。 According to the cell separation and recovery apparatus 20 according to the present embodiment configured as described above, when the cell suspension B containing the cells isolated in the separation container 7 flows into the column 21 through the circulation channel 4. Useful cells expressing the surface antigen marker CD90 + contained in the cell suspension B are adsorbed to the beads 21b. In this state, the three-way valves 11 and 12 are switched to wash the cells with the cleaning liquid A, and then the three-way valves 12 and 14 are switched to the collection container 15 side. And the column main body 5a is cooled by distribute | circulating a cooling fluid through the cooling flow path 21d.

これにより、ビーズ２１ｂを構成している温度感受性材料がゾル化して流動し、メッシュ２１ｃの網目を抜けて回収容器１５に回収される。ビーズ２１ｂには有用な細胞が吸着されているので、ゾル化したビーズ２１ｂとともに有用な細胞が回収容器１５に回収されることになる。その結果、第１の実施形態と同様に、細胞懸濁液Ｂ内の有用な細胞のみを、ダメージを与えることなく簡易に回収することができるという利点がある。
なお、上記実施形態においては表面抗原マーカＣＤ９０＋抗体をビーズ５ｂ，２１ｂにコーティングすることとしたが、これに代えて、表面抗原マーカＣＤ４５−抗体をコーティングすることにしてもよい。 Thereby, the temperature sensitive material which comprises the bead 21b is made into a sol, flows, and is recovered in the recovery container 15 through the mesh of the mesh 21c. Since useful cells are adsorbed on the beads 21b, useful cells are collected in the collection container 15 together with the sol-formed beads 21b. As a result, similar to the first embodiment, there is an advantage that only useful cells in the cell suspension B can be easily recovered without causing damage.
In the above embodiment, the surface antigen marker CD90 + antibody is coated on the beads 5b and 21b. Alternatively, the surface antigen marker CD45 - antibody may be coated.

本発明の第１の実施形態に係る細胞分離回収装置を説明する全体構成図である。It is a whole lineblock diagram explaining the cell separation collection device concerning a 1st embodiment of the present invention. 図１の細胞分離回収装置による細胞の捕捉工程を説明する全体構成図である。It is a whole block diagram explaining the capture process of the cell by the cell separation collection | recovery apparatus of FIG. 図１の細胞分離回収装置により回収される細胞と、該細胞に発現している表面抗原マーカとを示す図表である。It is a chart which shows the cell collect | recovered with the cell separation collection | recovery apparatus of FIG. 1, and the surface antigen marker currently expressed to this cell. 図１の細胞分離回収装置による洗浄工程を説明する全体構成図である。It is a whole block diagram explaining the washing | cleaning process by the cell separation collection | recovery apparatus of FIG. 図１の細胞分離回収装置による細胞回収工程を説明する全体構成図である。It is a whole block diagram explaining the cell collection process by the cell separation collection apparatus of FIG. 本発明の第２の実施形態に係る細胞分離回収装置を説明する全体構成図である。It is a whole block diagram explaining the cell separation collection | recovery apparatus concerning the 2nd Embodiment of this invention.

符号の説明Explanation of symbols

Ｂ 細胞懸濁液
１，２０ 細胞分離回収装置
２ 細胞回収装置
３ 細胞分離部
４ 循環流路（流路）
５，２１ カラム
５ａ カラム本体（筒体）
５ｂ 磁気ビーズ（粒子）
５ｃ 電磁石（磁石）
２１ｂ ビーズ（粒子） B cell suspension 1,20 cell separation / recovery device 2 cell recovery device 3 cell separation unit 4 circulation flow path (flow path)
5,21 Column 5a Column body (cylinder)
5b Magnetic beads (particles)
5c Electromagnet (Magnet)
21b Beads (particles)

Claims (4)

細胞懸濁液を流動させる流路と、
該流路の途中位置に配置され、該流路を流動してきた細胞懸濁液を流通させるカラムとを備え、
該カラムが、筒体と、該筒体内に小流路を形成するように充填された多数の粒子とを備え、
前記粒子の表面に、表面抗原マーカＣＤ９０＋抗体が担持されている細胞回収装置。 A flow path for flowing the cell suspension;
A column disposed in the middle of the flow path and for circulating a cell suspension that has flowed through the flow path,
The column includes a cylindrical body and a large number of particles packed so as to form a small channel in the cylindrical body,
A cell recovery apparatus in which a surface antigen marker CD90 + antibody is supported on the surface of the particle. 前記粒子が、磁気ビーズからなり、
前記筒体外部に、前記粒子を磁気的に吸着させる磁石が配置されている請求項１に記載の細胞回収装置。 The particles consist of magnetic beads;
The cell collection device according to claim 1, wherein a magnet for magnetically adsorbing the particles is disposed outside the cylindrical body. 前記粒子が、所定の温度で流動化する温度感受性材料からなるビーズである請求項１に記載の細胞回収装置。   The cell recovery apparatus according to claim 1, wherein the particles are beads made of a temperature-sensitive material that fluidizes at a predetermined temperature. 生体組織を消化液とともに容器内に収容して攪拌することにより、細胞を単離させる細胞分離部と、
該細胞分離部の外部に配置された循環流路と、
該循環流路の途中位置に配置され、該循環流路を流動してきた細胞懸濁液を流通させるカラムとを備え、
該カラムが、筒体と、該筒体内に小流路を形成するように充填された多数の粒子とを備え、
前記粒子の表面に、表面抗原マーカＣＤ９０＋抗体が担持されている細胞分離回収装置。 A cell separation unit for isolating cells by containing a living tissue in a container together with a digestive fluid and stirring,
A circulation channel disposed outside the cell separation unit;
A column that is arranged in the middle of the circulation channel and circulates the cell suspension that has flowed through the circulation channel;
The column includes a cylindrical body and a large number of particles packed so as to form a small channel in the cylindrical body,
A cell separation and recovery device in which a surface antigen marker CD90 + antibody is supported on the surface of the particle.
JP2008223853A 2008-09-01 2008-09-01 Apparatus for recovering cell and apparatus for separating and recovering cell Withdrawn JP2010057381A (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2008223853A JP2010057381A (en) 2008-09-01 2008-09-01 Apparatus for recovering cell and apparatus for separating and recovering cell

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2008223853A JP2010057381A (en) 2008-09-01 2008-09-01 Apparatus for recovering cell and apparatus for separating and recovering cell

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2010057381A true JP2010057381A (en) 2010-03-18

Family

ID=42184934

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2008223853A Withdrawn JP2010057381A (en) 2008-09-01 2008-09-01 Apparatus for recovering cell and apparatus for separating and recovering cell

Country Status (1)

Country Link
JP (1) JP2010057381A (en)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10323361B1 (en) * 2011-06-12 2019-06-18 Dale Karmie Synthetic turf system made with antistatic yarns and method of making

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10323361B1 (en) * 2011-06-12 2019-06-18 Dale Karmie Synthetic turf system made with antistatic yarns and method of making

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2021202347B2 (en) Cell separation devices, systems, and methods
US11912978B2 (en) Flow-through paramagnetic particle-based cell separation and paramagnetic particle removal
JP5846609B2 (en) Magnetic separation of rare cells
TWI588262B (en) Methods and compositions for separating or enriching cells
US9156037B2 (en) Microfluidic device and uses thereof
WO2013126774A2 (en) Microfluidic devices for capture of target species
JP2012510272A5 (en)
WO2015132898A1 (en) Method for dispersing magnetic particles and magnetic particle dispersing device
JP2010057381A (en) Apparatus for recovering cell and apparatus for separating and recovering cell
WO2015146415A1 (en) Separation apparatus and separation method
US10449550B2 (en) Sorting device and sorting method
JP2009136169A (en) Cell treatment device and cell treatment method
JP4353466B2 (en) Adsorbent continuous supply / discharge type high gradient magnetic separator
JP2009050826A (en) Magnetic granule separator
US10232104B2 (en) Cell filter separation system
JP2005074371A5 (en)
JP2010252635A (en) Cell-treating system
WO2016207911A4 (en) System for cytoreduction of circulating cancer cells from blood and a method thereof
Stolarski et al. Continuous selective high gradient magnetic bioseparation using novel rotating matrix centrifugation
JP2009136170A (en) Cell treatment device and cell treatment method
JP2009136171A (en) Cell treatment device
JP2009296934A (en) Method for recovering cell or virus
JP2015181406A (en) Apparatuses and methods for platelet production
JP2012239458A (en) Cell separation apparatus and cell separation method
Recktenwald E. Magnetic Separation and Separators

Legal Events

Date Code Title Description
A300 Withdrawal of application because of no request for examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300

Effective date: 20111101