JP2009545626A

JP2009545626A - Ｃｄ４受容体由来ペプチドとその製法

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Publication number: JP2009545626A
Application number: JP2009523259A
Authority: JP
Inventors: バルゥ、フランソワーズ; ボナーフ、ダビド; ロルタ−ジャコブ、ユーグ
Original assignee: Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Current assignee: Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Priority date: 2006-08-04
Filing date: 2007-08-03
Publication date: 2009-12-24
Anticipated expiration: 2027-08-03
Also published as: FR2904627B1; CA2659149A1; ATE511517T1; CN101516909A; JP5479095B2; ES2367400T3; CA2659149C; US20110015368A1; FR2904627A1; WO2008015273A1; WO2008015273A8; EP2054439A1; ZA200900816B; AU2007280351A1; EP2054439B1

Abstract

本発明は、ＣＤ４受容体由来活性化ペプチドに関する。このＣＤ４受容体由来活性化ペプチドは、共有結合によって有機分子に結合可能であり、その結果、抗ウイルス活性を有する可能性のある種々の誘導体を生じうる。本発明はまた、前記ＣＤ４受容体由来ペプチドと、有機分子（好ましくはＧＰＲ１ペプチド又は多価アニオン）とを含有する複合分子に関する。このような複合分子は、抗ウイルス治療、特にＡＩＤＳの治療に用いることができる。本発明はさらに、ＣＤ４受容体由来活性化ペプチドの製法並びに複合分子の製法に関する。

Description

本発明は、ＣＤ４受容体由来活性化ペプチドに関する。前記ＣＤ４受容体由来活性化ペプチドは、共有結合によって有機分子に結合可能であり、その結果、抗ウイルス活性を有する可能性のある各種誘導体を生ずる。本発明はまた、前記ＣＤ４受容体由来ペプチドと、有機分子、好ましくはＧＰＲ１ペプチド又は多価アニオン、とからなる複合分子に関する。このような複合分子は、抗ウイルス治療、特にＡＩＤＳの治療に用いることができる。本発明はさらに、ＣＤ４受容体由来活性化ペプチドの製法並びに複合分子の製法に関する。

核酸系逆転写酵素阻害剤（ＮＲＴＩ）、非核酸系逆転写酵素阻害剤（ＮＮＲＴＩ）及び／又はプロテアーゼ阻害剤（ＰＩ）を組み合わせた三剤併用療法は、ＨＩＶの血清陽性患者の多くにおいて、ウイルス量を検出限界以下に減少させる。この効果によって、ＨＩＶ感染に起因する死亡数が実質的に減少する。残念ながら、患者の８０％に抗ウイルス剤に対する耐性を有する遺伝子型が認められ、更に憂慮すべきことに、ウイルス集団の４５．５％がＮＲＴＩ／ＰＩ併用療法に耐性を有し、また、２６％が抗ＨＩＶ剤三剤併用療法に対して耐性を有している(非特許文献１参照)。この報告はとりわけ憂慮すべきものである。というのは、三剤併用療法による長期治療を受けている患者の７０％に副作用（脂肪萎縮症、脂肪異栄養症、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、神経障害等）が認められるが、これらの副作用はコンプライアンスの低下をもたらし、また、薬剤耐性を誘導しやすい「突然の」治療中止という結果になる。従って、現在多くの有効薬剤が市販されているにも拘わらず、より副作用が少なく且つ交差耐性を伴わない、より穏やかな治療形態の開発が優先事項である。このことを考慮に入れると、逆転写やタンパク質分解以外のＨＩＶの複製過程をターゲットとすることが不可欠となる。

ＣＸＣＲ４及びＣＣＲ５というコレセプター（補助受容体）の発見（非特許文献２参照）は、宿主細胞への感染機序を解明するための道を開いた。まず、ＨＩＶの糖タンパクｇｐ１２０と標的細胞のＣＤ４受容体との相互作用によって、ＨＩＶが細胞表面に付着する。次に、ｇｐ１２０において構造変化が起こり、予めマスクされたＣＤ４ｉ（ＣＤ４誘発性エピトープ）と呼ばれるエピトープ（抗原決定基）とコレセプター結合部位の一部とが露出する。ｇｐ１２０／コレセプター相互作用は、さらに別の構造変化を引き起こし、ｇｐ４１が露出し、その結果、膜融合プロセスが開始する。この機序が解明されたことにより新しいタイプの薬剤の開発が可能となった。これらの薬剤は、ｇｐ１２０／ＣＤ４相互作用（ブリストール・マイヤーズ・スクイブ社のＢＭＳ−４８８０４３、臨床第ＩＩａ相）又はｇｐ１２０／ＣＣＲ５相互作用（シュリング・プラウ社のＳＣＨ−Ｄ及びファイザー社のＵＫ−４２７、６５７、第ＩＩＩ相、２００４−０５及びグラクソ・スミスクライン社のＧＳＫＧＷ８７３１４０／ＡＫ６０２、第Ｉ相）のいずれかを阻害するか、又は、ｇｐ４１に結合することにより膜融合フェーズを阻害する（ロシュ社のＴ２０、Ｆｕｚｅｏｎ（登録商標））。

これらの極めて明確な結果から、ＨＩＶの細胞への侵入の各段階のいずれかを阻害するためのアプローチは互いに関連しているということが判る。しかしながら、現在臨床的に開発されているｇｐ１２０／コレセプター相互作用の阻害剤のうち、ＣＣＲ５との相互作用に対する阻害剤だけが研究されてきた。ＣＸＣＲ４へ結合する化合物の開発は中止された。例えばＡＭＤ８６６４が挙げられるが、この化合物は、その作用機序に関連して心血管系の副作用を引き起こしてしまう（非特許文献３参照）。ｇｐ１２０／ＣＸＣＲ４相互作用を阻害する治療法が存在しないがために、ＣＣＲ５をターゲットとした治療が結果的に失敗する可能性がある。というのは、ＣＣＲ５をターゲットとした治療が、ウイルス集団のＸ４指向性（ＣＸＣＲ４を介したＨＩＶ感染）への変化を惹起し、それに伴い、多くの場合ＣＤ４陽性Ｔリンパ球の消耗が促進されてしまうからである。興味深いことに、コレセプター結合部位は、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２及びＳＩＶにおいて高度に保護されているが（非特許文献４、５参照）、これを治療上のターゲットとした研究はあまり行われていないようである。この結合部位は、ｇｐ１２０がＣＤ４に結合して初めて露出する。このことが、結合部位に対する分子レベルでの取り組みを困難にしている。

本発明は、保護されているコレセプター結合部位とＶ３ループとに結合可能な化合物を化学的合成によって調製することにより、前記問題を解決することを提案する。このような化合物は、ＨＩＶ株の種類の種類を問わず、ｇｐ１２０／ＣＤ４相互作用及びｇｐ１２０／コレセプター相互作用を阻害する活性を概ね有しているはずである。

ヘパリン（ＨＰ）や硫酸デキストラン（ＤＳ）等のある種の多価アニオン類（但しコンドロイチン硫酸（ＣＳ）は除く）が、ＨＩＶによる細胞感染を阻害する機能を有することは長年にわたって知られてきた（非特許文献６参照）。それにもかかわらず、これらの多価アニオン類は抗凝固作用を有するために（非特許文献７参照）、臨床的には用いられていない。この阻害の分子レベルでの機序が、多価アニオンとＶ３ループとの相互作用に結びつくことが近年判明した（非特許文献８参照）。

さらに、様々な研究で、ＨＩＶの標的細胞の表面に発現するＣＤ４とＨＩＶとの相互作用を阻害するための可溶型ＣＤ４の利用が探求されている。しかし、この解決手法は、ウイルスへの結合の際に、可溶型ＣＤ４がＣＤ４ｉエピトープを露出させ、コレセプターのＣＣＲ５又はＣＸＣＲ４とウイルスとの相互作用を促進し、これが場合によっては感染を増大させるため、効果的ではないことが分かった（非特許文献９参照）。

特許文献１には、多価アニオンと接触すると、ＣＤ４受容体由来ペプチドが抗ＨＩＶ活性を示すようになることが記載されている。この文献では特に、ペプチドと多価アニオンとが結合してなる化合物は、ナジャンエス（Najjam S）等の論文（非特許文献１０参照）（実施例１−１参照）に記載の方法によって調製することが推奨されている。

本発明において、本発明者等はＣＤ４受容体由来の活性化ペプチド類を得た。これらの活性化ペプチドは、ＣＤ４受容体由来ペプチド（ｍｉｎｉＣＤ４）と共に抗ＨＩＶ作用において役割を果たす可能性のある多価アニオンやその他の有機分子に、直接結合及び共有結合により容易に結合する。この活性化には、未変性（天然型）のペプチドへの特定のアミノ酸残基の挿入が必要である。特に、本発明者等は、ＣＤ４受容体由来ペプチドの配列においてアミノ酸リシン残基がただ一つ存在することが、本発明の活性化ペプチドを得るために重要であることを見出した。さらに、この唯一のアミノ酸リジン残基は、ＣＤ４受容体由来ペプチドの配列中、ごく限られた位置に挿入されるべきものである。アミノ酸リジン残基をただ一つ特定の位置に有するｍｉｎｉＣＤ４ペプチドを構築すれば、所望の機能をｍｉｎｉＣＤ４に選択的且つ直接的に導入することが可能になる。

従って、本発明は、抗ウイルス活性を有する可能性のある各種誘導体の製造を可能にする、活性化化合物を提供する。これらの誘導体は複合分子からなり、複合分子は、多価アニオンなどの有機分子にリンカーを介して特異的に結合したＣＤ４ペプチドを含有する。

このアプローチは、細胞に対するウイルスの付着を阻害するにあたり、治療上有利である。というのは、このアプローチは細胞自体ではなくウイルスを直接標的としているからである。そのため、コレセプターに結合する薬剤に見られる細胞レベルでの副作用が、一見したところ認められない。さらに、各種ウイルスの指向性に関与する部位が高度に保護されていることを考慮すると、本発明の化合物は各種ウイルス分離株のｇｐ１２０と相互作用するはずである。また、耐性が全く生じないとの誤解を生むおそれがあるが、この新しいタイプの化合物は、耐性が生じにくいはずである。実際に、ＣＤ４への結合活性を維持するためには、ｇｐ１２０のＣＤ４結合部位は変化することなく保存される必要がある。このことは、前記コレセプターと相互作用する際の多価アニオンへの結合に関与する塩基性残基においても同様である。これら二つの部位のうちの一方に変異が起きると、ウイルスの機能が低下する。本発明によれば、このような化合物が全く合成的な手法で得られ、それにより、前記化合物が、大量、均一、且つ完全に明確な製法で得られることとなった。この化合物を得るための結合方法は、簡単且つ迅速に行え、且つ定量的である。

本発明の第一の態様は、ＣＤ４受容体由来活性化ペプチドの製法に関する。この製法において、該ペプチドは、活性化されると共有結合によって有機分子に結合可能であり、且つ、前記ＣＤ４受容体由来ペプチドは、下記一般配列（Ｉ）：
Ｘａａ^ｆ−Ｐ１−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−Ｐ２−Ｃｙｓ−Ｐ３−Ｃｙｓ−Ｘａａ^ｇ−Ｘａａ^ｈ−Ｘａａ^ｉ−Ｘａａ^ｊ−Ｃｙｓ−Ｘａａ^ｋ−Ｃｙｓ−Ｘａａ^ｌ−Ｘａａ^ｍ，（Ｉ）
（式中：
Ｐ１は３〜６個のアミノ酸残基を表し、
Ｐ２は２〜４個のアミノ酸残基を表し、
Ｐ３は６〜１０個のアミノ酸残基を表し、
Ｘａａ^ｆはＮ−アセチルシステイン（Ａｃ−Ｃｙｓ）又はチオプロピオン酸（ＴＰＡ）を表し、
Ｘａａ^ｇはＡｌａ又はＧｌｎを表し、
Ｘａａ^ｈはＧｌｙ、（Ｄ）Ａｓｐ又はＳｅｒを表し、
Ｘａａ^ｉはＳｅｒ、Ｈｉｓ又はＡｓｎを表し、
Ｘａａ^ｊはビフェニルアラニン（Ｂｉｐ）、フェニルアラニン又は［β］−ナフチルアラニンを表し、
Ｘａａ^ｋはＴｈｒ又はＡｌａを表し、及び
Ｘａａ^ｌはＧｌｙ、Ｖａｌ又はＬｅｕを表し、
Ｘａａ^ｍは−ＮＨ_２又は−ＯＨを表し、
Ｐ１、Ｐ２及びＰ３のアミノ酸残基は天然でも非天然でも、同一でも異なっていてもよく、Ｐ１、Ｐ２及びＰ３の残基はいずれもＬｙｓ残基とは異なり、Ｐ１、Ｐ２及びＰ３は共通の配列を有していてもよい）を有しており、
前記製法は、一般配列（Ｉ）のＣＤ４受容体由来ペプチドを、二つの反応性官能基を有する二価性化合物（但し二つの官能基のうち少なくとも一方は、一般配列（Ｉ）のアミノ酸Ｌｙｓ残基の遊離アミノ基（−ＮＨ_２）と共有結合を形成可能である）と接触させる工程を含むことを特徴とする。

Ｐ３は、少なくとも１種の塩基性アミノ酸を含有することが好ましく、該塩基性アミノ酸は、さらに好ましくはアルギニンである。ＣＤ４受容体フラグメントのこの部分に存在する塩基性アミノ酸残基が、ＣＤ４受容体のｇｐ１２０タンパク質への結合に寄与する。従って、本発明においては、少なくとも１種の塩基性アミノ酸、より望ましくはアルギニンをＰ３内へ導入することが好ましい。これによりＰ３において塩基性を示す電荷が保持される。この塩基性電荷は、ｐＨ７〜８における誘導では反応性を示さないが、ｍｉｎｉＣＤ４ペプチドがｇｐ１２０タンパク質に結合する際には有効に作用することが判明している。

本願において、用語「ｍｉｎｉＣＤ４ペプチド」、「ＣＤ４ペプチド」及び「ｍｉｎｉＣＤ４」は、前記に定義した一般配列（Ｉ）を有するＣＤ４受容体由来ペプチドを示すために用いられ、いずれも同義である。

本発明においては、ＣＤ４受容体由来ペプチドが、一般配列（Ｉ）中の特定の位置に唯一のアミノ酸リシン残基（Ｌｙｓ）を含有する必要がある。

一般配列（Ｉ）中に複数のＣｙｓ残基が存在することによって、ｍｉｎｉＣＤ４ペプチドの折り返しに必要な三本のジスルフィド架橋が形成される。

チオプロピオン酸（ＴＰＡ）が一般配列（Ｉ）のペプチドのＮ末端部に存在すると、Ｎ末端におけるアミン基の存在に起因する（立体）障害が軽減される。

従って、好ましい実施態様によれば、一般配列（Ｉ）におけるＸａａ^ｆがＴＰＡを表す。

一般配列（Ｉ）において、Ｘａａ^ｊはＢｉｐ、Ｐｈｅ又は［β］−ナフチルアラニンを表す。ビフェニルアラニンは、ＣＤ４受容体のＰｈｅ-４３残基が収容されている空洞部における糖タンパクｇｐ１２０との接触率を高める。ところが、Ｘａａ^ｊがＰｈｅである場合の本発明のｍｉｎｉＣＤ４ペプチドは、よりＣＤ４に類似している。このことは、ｍｉｎｉＣＤ４／ｇｐ１２０複合体の構造解析により明らかになった（ファンシーシー他（Huang CC et al.,）著，ストラクチャー（ Structure）誌，2005年5月第13巻第5号；755-68頁）。

従って、他の好ましい実施態様において、Ｘａａ^ｊはＰｈｅを表す。

一般配列（Ｉ）のＣＤ４受容体由来ペプチドは、αらせん構造及びそれに続くβシート構造を有している。アミノ酸Ｘａａ^ｇ−Ｘａａ^ｈ−Ｘａａ^ｉ−Ｘａａ^ｊ−Ｃｙｓ−Ｘａａ^ｈ−Ｃｙｓ−Ｘａａ^ｌは、主にｇｐ１２０への結合に関与している。これらのペプチドは、ｓＣＤ４（可溶型ＣＤ４）のＣＩ５０（ｇｐ１２０に対する親和性）と同様のＣＩ５０を有している。

一般配列（Ｉ）のＣＤ４受容体由来ペプチドは、例えばＦｍｏｃ（９−フルオレニルメチルオキシカルボニル）固相ペプチド合成法（"Fmoc solid phase peptide synthesis, a practical approach", W.C. Chan及びP.D. White編, オクスフォード大学出版局, 2000年）など従来の固相化学合成法及び／又は遺伝的組換えによって調製できる。

好ましくは、一般配列（Ｉ）のＣＤ４受容体由来ペプチドの配列は、配列番号１及び配列番号２の配列からなる群より選択される。より好ましくは、配列番号１の配列である。

本願における用語「二価性化合物」とは、二つの反応性官能基を有する化合物であって、これら二つの官能基のうち少なくとも一方は、一般配列（Ｉ）中のアミノ酸Ｌｙｓ残基の遊離アミノ基（−ＮＨ_２）と共有結合を形成することが可能である化合物をいう。

本発明の範囲内で使用可能な二価性化合物は、当業者であれば、二価性架橋（クロスリンカー）試薬として熟知しているものである。すなわち、本発明に係る二価性化合物は、下記のリストから選択できるが、これらに限定されるものではない：ＮＨＳ−ＰＥＯｎ−マレイミド（式中、ｎは２〜２４、好ましくはｎは２、４、８又は１２）、ＳＭＰＴ（４−スクシニミジルオキシカルボニル−メチル−α−［２−ピリジルジチオ］トルエン）、スルホ−ＬＣ−ＳＭＰＴ（４−スルホスクシニミジル−６−メチル−α−（２−ピリジルジチオ）トルアミド］ヘキサノエート））、スルホ−ＫＭＵＳ（Ｎ−［κ−マレイミドウンデカノイルオキシ］スルホスクシンイミドエステル）、ＬＣ−ＳＭＣＣ（スクシニミジル−４−［Ｎ−マレイミドメチル］シクロヘキサン−１−カルボキシ−［６−アミドカプロエート］）、ＫＭＵＡ（Ｎ−κ−マレイミドウンデカン酸）、スルホ−ＬＣ−ＳＰＤＰ（スルホスクシニミジル６−（３'−［２−ピリジルジチオ］−プロピオンアミド）ヘキサノエート）、ＬＣ−ＳＰＤＰ（スクシニミジル６−（３−［２−ピリジルジチオ］−プロピオンアミド）ヘキサノエート）、ＳＭＰＢ（スクシニミジル４−［ｐ−マレイミドフェニル］ブチレート）、スルホ−ＳＭＰＢ（スルホスクシニミジル４−［ｐ−マレイミドフェニル］ブチレート）、スルホ−ＳＩＡＢ（Ｎ−スルホスクシニミジル［４−ヨードアセチル］アミノベンゾエート）、ＳＩＡＢ（Ｎ−スクシニミジル［４−ヨードアセチル］アミノベンゾエート）、スルホ−ＥＭＣＳ（［Ｎ−ε−マレイミドカプロイルオキシ］スルホスクシンイミドエステル）、ＥＭＣＡ（Ｎ−ε−マレイミドカプロン酸）、ＥＭＣＳ（［Ｎ−ε−マレイミドカプロイルオキシ］スクシンイミドエステル）、ＳＭＣＣ（スクシニミジル４−［Ｎ−マレイミドメチル］シクロヘキサン−１−カルボキシレート）、スルホ−ＳＭＣＣ（スルホスクシニミジル４−［Ｎ−マレイミドメチル］シクロヘキサン−１−カルボキシレート）、ＭＢＳ（ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）、スルホ−ＭＢＳ（ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミドエステル）、ＧＭＢＳ（Ｎ−［γ−マレイミドブチリルオキシ］スクシンイミドエステル）、スルホ−ＧＭＢＳ（Ｎ−［γ−マレイミドブチリルオキシ］スルホスクシンイミドエステル）、ＳＰＤＰ（Ｎ−スクシニミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート）、ＳＢＡＰ（スクシニミジル３−［ブロモアセトアミド］プロピオネート）、ＢＭＰＳ（Ｎ−［［β］−マレイミドプロピルオキシ］スクシンイミドエステル）、ＢＭＰＡ（Ｎ−［β］−マレイミドプロピオン酸）、ＡＭＡＳ（Ｎ−（α−マレイミドアセトキシ）スクシンイミドエステル）、ＳＩＡ（Ｎ−スクシニミジルヨードアセテート）、ＳＭＰＨ（スクシニミジル−６−［β−マレイミドプロピオンアミド］ヘキサノエート）、ＳＡＴＡ（Ｎ−スクシニミジル−Ｓ−アセチルチオアセテート）、ＳＡＴＰ（Ｎ−スクシニミジル−Ｓ−アセチルチオプロピオネート）。

本発明において、ｎ＝２であるＮＨＳ−ＰＥＯ_ｎ−マレイミドを、スクシニミジル−［（Ｎ−マレイミドプロピオンアミド）−ジエチレングリコール］エステルと称する場合がある。ｎ＝４であるＮＨＳ−ＰＥＯ_ｎ−マレイミドを、スクシニミジル−［（Ｎ−マレイミドプロピオンアミド）−テトラエチレングリコール］エステルと称する場合がある。ｎ＝８であるＮＨＳ−ＰＥＯ_ｎ−マレイミドを、スクシニミジル−［（Ｎ−マレイミドプロピオンアミド）−オクタエチレングリコール］エステルと称する場合がある。ｎ＝１２であるＮＨＳ−ＰＥＯ_ｎ−マレイミドを、スクシニミジル−［（Ｎ−マレイミドプロピオンアミド）−ドデカエチレングリコール］エステルと称する場合がある。

一般配列（Ｉ）に示されたアミノ酸Ｌｙｓ残基の遊離アミノ基（−ＮＨ_２）と共有結合を形成可能な官能基は、いずれの活性エステル基であってもよい。

好ましくは、一般配列（Ｉ）に示されたアミノ酸Ｌｙｓ残基の遊離アミノ基（−ＮＨ_２）と共有結合を形成可能な官能基は、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＮＨＳ）活性基である。

さらに好ましくは、二価性化合物の二つの反応性官能基は互いに異なり（ヘテロ二官能基）、且つ前記二つの官能基の一方がＮＨＳ活性基である。

特に好ましい好ましい実施態様によれば、二価性化合物がスクシニミジル−６−［β−マレイミドプロピオンアミド］ヘキサノエート（ＳＭＰＨ）である。

ＳＭＰＨの分子構造は下記の式（１）に示した通りである。

他の特に好ましい実施態様によれば、二価性化合物が、Ｎ−スクシニミジル−Ｓ−アセチルチオアセテート（ＳＡＴＡ）及びＮ−スクシニミジル−Ｓ−アセチルチオプロピオネート（ＳＡＴＰ）からなる群より選択される。

ＳＡＴＡの分子構造は下記の式（２）に示す通りである：

ＳＡＴＰの分子構造は下記の式（３）に示す通りである：

さらに他の好ましい実施態様によれば、二価性化合物が、スクシニミジル−［（Ｎ−マレイミドプロピオンアミド）−ジエチレングリコール］エステル（ＮＨＳ−ＰＥＯ_２−マレイミドとも称する）、スクシニミジル−［（Ｎ−マレイミドプロピオンアミド）−テトラエチレングリコール］エステル（ＮＨＳ−ＰＥＯ_４−マレイミドとも称する）、スクシニミジル−［（Ｎ−マレイミドプロピオンアミド）−オクタエチレングリコール］エステル（ＮＨＳ−ＰＥＯ_８−マレイミドとも称する）、スクシニミジル−［（Ｎ−マレイミドプロピオンアミド）−ドデカエチレングリコール］エステル（ＮＨＳ−ＰＥＯ_１２−マレイミドとも称する）である。より好ましくは、二価性化合物がＮＨＳ−ＰＥＯ_２−マレイミドである。

ＮＨＳ−ＰＥＯ_２−マレイミドの分子構造は下記の式（４）に示す通りである：

これらの二価性化合物は、ピアス（ＰＩＥＲＣＥ；米国イリノイ州、ロックフォード）社から入手できる。

また好ましくは、本発明の活性化ペプチドの製法が、一般配列（Ｉ）（但し、Ｘａａ^ｆはＴＰＡを表す）のＣＤ４受容体由来ペプチドの調製のための予備工程を含み、前記予備工程において、下記一般配列（ＩＩ）：
Ｐ１−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−Ｐ２−Ｃｙｓ−Ｐ３−Ｃｙｓ−Ｘａａ^ｇ−Ｘａａ^ｈ−Ｘａａ^ｉ−Ｘａａ^ｊ−Ｃｙｓ−Ｘａａ^ｋ−Ｃｙｓ−Ｘａａ^ｌ−Ｘａａ^ｍ，（ＩＩ）
（式中Ｐ１〜Ｐ３及びＸａａ^ｇ〜Ｘａａ^ｍは一般配列（Ｉ）に定義したとおりである）、で表されるＣＤ４受容体由来ペプチドをＮ−スクシニミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）と接触させ、該一般配列（ＩＩ）のＣＤ４受容体由来ペプチドのＮ末端にＴＰＡを導入する。

ＳＰＤＰの分子構造は下記の式（５）に示す通りである：

第二の態様によれば、本発明は、一般配列（Ｉ）を含むか又は一般配列（Ｉ）からなるＣＤ４受容体由来活性化ペプチドに関し、前記アミノ酸Ｌｙｓ残基が、有機分子に共有結合可能な反応性官能基（以下、活性基という）を備えた化合物と、有利にはアミン結合によって、結合するものであることを特徴とする。

共有結合によって有機分子に結合可能な活性基の例として、下記のものが挙げられる：マレイミド、ブロモアセチル、Ｓ−Ｓ−ピリジニウム。ｍｉｎｉＣＤ４が、保護されたチオール基（例えばチオアセチル）で活性化されている場合、例えばマレイミド基を有する有機分子へ結合させることができる。多糖類（又は多価アニオン）にチオール基又はチオアセチル基を官能基として導入すると問題が生じる場合に、上記手法を用いることができる。この手法を「逆結合」という。

好ましくは、有機分子に共有結合可能な活性基はマレイミド基である。

二価性化合物としてＳＭＰＨを用いることによって、ＳＭＰＨのＣＤ４受容体由来ペプチドと共有結合する一方の官能基に対する他方の官能基からなる前記有機分子に共有結合可能な活性基としてマレイミドを有する本発明の活性化ペプチドが得られる。この有機分子に共有結合可能な活性基が二価性化合物等を介して結合されたＣＤ４受容体由来ペプチドが活性化ペプチドである。この活性基としてマレイミド基を有する活性化ペプチドの分子構造は下記の式（６）に示す通りである：

本願において、用語「ＳＭＰＨ活性化ｍｉｎｉＣＤ４ペプチド」とは、本発明の活性化ペプチドであって、そのアミノ酸Ｌｙｓ残基が、ＳＭＰＨ由来のリンカーを介して（ＳＭＰＨの一方の反応性官能基との）、共有結合、望ましくはアミン結合によって、マレイミド活性基と結合している活性化ペプチドをいう。

他の有利な実施態様によれば、本発明の活性化ペプチドは、その活性基がマレイミド基であり、二価性化合物としてＮＨＳ−ＰＥＯ_２−マレイミドを用いたものである。その分子構造は下記の式（７）に示す通りである：

本願において、用語「ＰＥＯ_２リンカー介在マレイミド活性化ｍｉｎｉＣＤ４ペプチド」とは、本発明の活性化ペプチドであって、そのアミノ酸Ｌｙｓ残基が、ＰＥＯ_２リンカーを介して、リンカーの二つの反応性官能基の家の一方との共有結合、望ましくはアミン結合によって、リンカーの他方の反応性官能基であるマレイミド活性基に結合している活性化ペプチドをいう。

他の好ましい実施態様によれば、活性基がチオアセチル基である。

例えば、二価性化合物としてＳＡＴＡを用いることによって、活性基としてチオアセチル基を有する本発明の活性化ペプチドが得られる。この活性化ペプチドの分子構造は下記の式（８）に示す通りである：

同様に、二価性化合物としてＳＡＴＰを用いることによって、活性基としてチオアセチル基を有する本発明の活性化ペプチドが得られ、該活性化ペプチドの分子構造は下記の式（９）に示す通りである：

前記チオアセチル基は、保護された形態のチオール基である。チオール基の脱保護のために、例えばヒドロキシルアミンが用いられる。この工程は、有機分子によるマレイミド基への結合と同様に行うことができる。

本願において、用語「ＳＡＴＡ活性化ｍｉｎｉＣＤ４ペプチド」及び「ＳＡＴＰ活性化ｍｉｎｉＣＤ４ペプチド」とは、本発明の活性化ペプチドであって、そのアミノ酸Ｌｙｓ残基が、ＳＡＴＡ又はＳＡＴＰ由来リンカーを介して、リンカーの一方の反応性官能基との共有結合、望ましくはアミン結合によって、活性基として保護されたチオール基（例えばチオアセチル）に結合している活性化ペプチドをいう。

第三の態様によれば、本発明は、有機分子と、該有機分子に共有結合により結合したＣＤ４受容体由来活性化ペプチドとを含有する複合分子の製法に関する。該ＣＤ４受容体由来ペプチドは、上記に定義した一般配列（Ｉ）を有し又は一般配列（Ｉ）からなり、この製法は、上記に定義された本発明の活性化ペプチドと有機分子とを接触させる工程を含む。前記ＣＤ４受容体由来活性化ペプチドは、上記に定義された一般配列（Ｉ）を有しているが、そのアミノ酸Ｌｙｓ残基は、共有結合、望ましくはアミン結合によって、有機分子に共有結合可能な活性基を有する化合物に結合している。

ある実施態様によれば、活性基がマレイミド基であり、且つ、有機分子がチオール又はチオアセチル基を有している。

好ましくは、チオール基を有する有機分子がＧＰＲ１（Ｇタンパク質共役受容体１）ペプチドであって、該ＧＰＲ１ペプチドの配列が、配列番号３及び配列番号４の配列からなる群より選択される。より好ましくは配列番号３の配列である。

配列番号３及び配列番号４の配列を含むＧＰＲ１ペプチドは、プロテインＧに結合した受容体の細胞外Ｎ末端領域に由来する合成ペプチドＧＰＲ１である（ジンノ-オウエ他（Jinno-Oue et al.,）著，「ジャーナルオブバイオロジカル・ケミストリー（ J Biol chem）， 2005年9月2日，第280巻第35号；30924-34頁、再版2005年5月26日）。

また好ましくは、チオール基を有する有機分子が、酸性アミノ酸残基（アスパラギン酸、グルタミン酸など）を必須成分として有するペプチド類、リン酸化可能アミノ酸残基（Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒなど）を必須成分として有するペプチド類及び硫酸化可能アミノ酸残基（Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒなど）を必須成分として有するペプチド類からなる群より選択される。

また好ましくは、チオール基を有する有機分子が、チオール基又はチオアセチル基を有する変性多価アニオンである。

本発明において、多価アニオン又は多糖類は、ヘパリン、ヘパラン硫酸、及びヘパリン並びにヘパラン硫酸に等価な多価アニオンからなる群より好適に選択されうる。例えば、硫酸デキストラン（商品名；上野製薬株式会社）、カードラン硫酸（商品名；味の素株式会社）、ナフタレン−２スルホネートポリマー（商品名；プロセプト社）、ペントサンポリスルフェート（商品名；ベーカーノートンファーマシュウティカルズ社；ヘキスト社）又はレゾベン（ｒｅｓｏｂｅｎｅ）（商品名）が挙げられる。

多価アニオンはあまり長すぎないことが好ましい。何故なら、そのように長い多価アニオンは、本発明では望まれない抗凝固活性を持ち得、様々なタンパク質、特にトロンビン又はアンチトロンビンＩＩＩとの非特異的結合を形成しうるからである。その長さは以下に定める重合度を有するヘパリン鎖と同様であるのが好ましい。多価アニオンは好ましくは二糖類当たり少なくとも二つのアニオン基を有する。

本発明によれば、多価アニオンがヘパリン又はヘパラン硫酸である場合、その重合度ｄｐは好ましくは１０〜２４、有利には１２〜２４、さらに望ましくは１６〜２２である。本発明によれば、ヘパリン、ヘパラン硫酸、若しくはヘパリン又はヘパラン硫酸に等価な多価アニオンは、１２〜２０、例えば１５〜１７の重合度ｄｐを有し得る。

例えば、ヘパリンドデカサッカライド（ＨＰ_１２）が挙げられる。

ある実施態様によれば、前記チオール基又はチオアセチル基を有する変性多価アニオンが、ヘパリン及びヘパラン硫酸からなる群より選ばれるとともに、１０〜２４の重合度ｄｐを有する。

他の実施態様によれば、活性基がチオアセチル基であり、且つ、有機分子がマレイミド基又はハロゲン基を有する。

本発明によれば、多価アニオンは、酵素的方法、例えばヘパリナーゼによって、又は化学的方法、例えば亜硝酸によって、ヘパリン又はヘパラン硫酸を部分脱重合させることによって調製できる。それらが化学的に得られる場合、ヘパラン類とは、Ｎ硫酸化又はＮアセチル化グルコサミン、又は、サルフェート基を可変割合に有する、ウロン酸（グルクロン酸又はイズロン酸）に結合したＮ位が非置換のグルコサミンが存在することで定義されうる。これらのオリゴ糖の構造的な類似体は化学合成法によって得ることができる。

組換え型化合物又は天然由来の化合物を複合化する方法に比べ、上記のような合成的アプローチは多くの効果をもたらす。治療上の用途においては合成化合物が常に好ましい。何故なら、その構造が完全に明確に定まることに加え、病原体による汚染を防ぐことができるからである。特にＨＰフラグメントの場合、プリオンタンパク質による汚染を防ぐことができる。さらに、合成ＨＰフラグメントは、その天然型に比べ遙かに均一である。例えば、合成ＨＰ_１２は、ヘパリンの抗トロンビン活性の原因となる３−Ｏ−スルフェート基を全く有さない。

本発明のＣＤ４受容体由来活性化ペプチド及び複合分子の製法において、その操作条件は当業者にとって公知であり、また、必要に応じて修正できる。

第四の態様によれば、本発明は複合分子に関する。前記複合分子は、有機分子と、該有機分子に結合したＣＤ４受容体由来ペプチドとを含有し、前記ＣＤ４受容体由来ペプチドは、上記一般配列（Ｉ）を有するか又は一般配列（Ｉ）からなり、前記ＣＤ４受容体由来ペプチドと前記有機分子とがリンカーによって互いに結合するとともに、一般配列（Ｉ）のアミノ酸Ｌｙｓ残基が前記リンカーとアミノ結合を形成している。

本発明はまた、本発明の複合分子の製法によって得られる複合分子に関する。前記複合分子は、有機分子と、該有機分子に結合したＣＤ４受容体由来ペプチドとを含有し、前記ＣＤ４受容体由来ペプチドが上記一般配列（Ｉ）を有するか又は一般配列（Ｉ）からなる。

本願において、用語「リンカー」とは、本発明のｍｉｎｉＣＤ４ペプチドを有機分子に結合させる任意の媒介物をいう。該リンカーは、用いる二価性化合物によって異なる。

好ましくは、本発明の複合分子において、ＣＤ４受容体由来ペプチドの配列が、一般配列（Ｉ）（好ましくは配列番号１の配列）を含むか又は前記配列からなるとともに、チオール基を有する有機分子がＧＰＲ１ペプチドであって、前記ＧＰＲ１ペプチドの配列が、配列番号３及び配列番号４の配列からなる群より選択される配列、有利には配列番号３の配列である。

本発明によれば、一般配列（Ｉ）のＣＤ４受容体由来ペプチドにＧＰＲ１ペプチドが結合することによって得られる複合体は、ＨＩＶ糖タンパクｇｐ１２０に結合可能であり、同時に、ＨＩＶのＣＤ４への結合並びにＣＸＣＲ４及びＣＣＲ５コレセプターへの結合を阻害しうる。

配列番号３及び配列番号４の配列を含むＧＰＲ１ペプチドと、それに結合した一般配列（Ｉ）のＣＤ４受容体由来ペプチドとを含有する複合分子の分子構造は、ＳＭＰＨを結合に用いた場合、下記の式（１０）に示す通りである。

また好ましくは、本発明の複合分子において、ＣＤ４受容体由来ペプチドの配列が、一般配列（Ｉ）（好ましくは配列番号１の配列）を含むか又は前記配列からなるとともに、チオール基を有する有機分子が、チオール基又はチオアセチル基を有する変性多価アニオンである。

チオール基又はチオアセチル基を有する変性多価アニオンと、それに結合した一般配列（Ｉ）のＣＤ４受容体由来ペプチドとを含有する複合分子の分子構造は、ＳＭＰＨを結合に用いた場合、下記の式（１１）に示す通りである。

ＮＨＳ−ＰＥＯ_２−マレイミドを二価性化合物として用いた場合には、複合分子の分子構造は下記の式（１２）に示す通りとなる。

好ましくは、チオール基又はチオアセチル基を有する変性多価アニオンが、ヘパリン及びヘパラン硫酸からなる群より選択され、且つ、その重合度ｄｐが１０〜２４である。

他の実施態様によれば、本発明の複合分子は、一般配列（Ｉ）（好ましくは配列番号１の配列）を含むか又は前記配列からなるＣＤ４受容体由来ペプチドと、マレイミド基又はハロゲン基を有する有機分子とを含有する。

例えば、マレイミド基を有する有機分子と、それに結合した一般配列（Ｉ）のＣＤ４受容体由来ペプチドとを含有する複合分子の分子構造は、ＳＡＴＡを結合に用いた場合、下記の式（１３）に示す通りである。

本発明において、上記複合分子はリンカーを含むが、リンカーの長さは用いた二価性化合物により異なる。

他の実施態様によれば、本発明の複合分子は、ＣＤ４受容体由来ペプチドと、チオール基を有する有機分子とを含み、前記ＣＤ４受容体由来ペプチドが、一般配列（Ｉ）（好ましくは配列番号１の配列）を含むか又は前記配列からなり、前記チオール基を有する有機分子が、酸性アミノ酸残基（アスパラギン酸、グルタミン酸など）を必須成分として有するペプチド類、リン酸化可能アミノ酸残基（Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒなど）を必須成分として有するペプチド類及び硫酸化可能アミノ酸残基（Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒなど）を必須成分として有するペプチド類からなる群より選択される。

本発明はまた、チオール基又はチオアセチル基を有する有機分子への共有結合による結合のための、上記一般配列（Ｉ）を含むか又は前記配列からなるＣＤ４受容体由来活性化ペプチドの使用に関する。但し前記ＣＤ４受容体由来活性化ペプチドにおいて、アミノ酸Ｌｙｓ残基がマレイミド活性基を有する化合物に共有結合（望ましくはアミン結合）によって結合している。

本発明はまた、マレイミド基又はハロゲン基を有する有機分子への共有結合による結合のための、上記一般配列（Ｉ）を含むか又は前記配列からなるＣＤ４受容体由来活性化ペプチドの使用に関する。但し前記ＣＤ４受容体由来活性化ペプチドにおいて、アミノ酸Ｌｙｓ残基が保護されたチオール活性基（例えばチオアセチル）を有する化合物に共有結合（望ましくはアミン結合）によって結合している。

本発明はまた、抗ウイルス治療用の医薬品の製造のための、上記一般配列（Ｉ）を含むか又は前記配列からなるＣＤ４受容体由来活性化ペプチドの使用に関する。但し前記ＣＤ４受容体由来活性化ペプチドにおいて、アミノ酸Ｌｙｓ残基がマレイミド活性基を有する化合物に共有結合（望ましくはアミン結合）によって結合しており、前記マレイミド活性基によって、チオール基又はチオアセチル基を有する有機分子への共有結合による結合が可能となる。

さらに本発明は、抗ウイルス治療用の医薬品の製造のための、上記一般配列（Ｉ）を含むか又は前記配列からなるＣＤ４受容体由来活性化ペプチドの使用に関する。但し前記ＣＤ４受容体由来活性化ペプチドにおいて、アミノ酸Ｌｙｓ残基が保護されたチオール活性基（例えばチオアセチル）を有する化合物に共有結合（望ましくはアミノ結合）によって結合しており、前記保護されたチオール活性基によって、マレイミド基又はハロゲン基を有する有機分子への共有結合による結合が可能となる。

好ましくは、本発明は、ＡＩＤＳ治療用医薬品の製造のための上記一般配列（Ｉ）を含むか又は前記配列からなるＣＤ４受容体由来活性化ペプチドの使用に関する。但し前記ＣＤ４受容体由来活性化ペプチドにおいて、アミノ酸Ｌｙｓ残基がマレイミド活性基を有する化合物に共有結合（望ましくはアミン結合）によって結合しており、前記マレイミド活性基によって、チオール基又はチオアセチル基を有する有機分子への共有結合による結合が可能になる。

本発明はさらに、医薬品としての、本発明の複合分子の使用に関する。

他の態様によれば、本発明は、ＡＩＤＳ治療用医薬品の製造のための、本発明の複合分子の使用に関する。

本発明はまた、本発明の複合分子を使用することを特徴とする、抗ウイルス治療法、好ましくは抗ＡＩＤＳ治療法に関する。

好ましくは、本発明の複合分子は、一般配列（Ｉ）が配列番号１の配列であり、チオール基を有する有機分子がＧＰＲ１ペプチドであり、前記ＧＰＲ１ペプチドの配列が配列番号３及び配列番号４の配列からなる群より選ばれた配列、有利には配列番号３の配列、である複合分子である。

また好ましくは、本発明の複合分子は、一般配列（Ｉ）が配列番号１であり、チオール基を有する有機分子が、酸性アミノ酸残基（アスパラギン酸、グルタミン酸など）を必須成分として有するペプチド類、リン酸化可能アミノ酸残基（Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒなど）を必須成分として有するペプチド類及び硫酸化可能アミノ酸残基（Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒなど）を必須成分として有するペプチド類からなる群より選択される、複合分子である。

また好ましくは、本発明の複合分子は、一般配列（Ｉ）が配列番号１の配列であり、チオール基を有する有機分子がチオール基又はチオアセチル基を有する変性多価アニオンである、複合分子である。

上記種々の実施態様は、本発明の種々の態様にそれぞれ適用される。

以下実施例及び図面により本発明を説明するが、これらは本発明の範囲を限定するものではない。

国際公開第０３／０８９０００号パンフレット

タマレ、他（Tamalet et al.,）著，「エイズ（AIDS.）」，2003年11月7日第17巻第16号；2383-8頁ブローダーシーシーアンドコールマンアールジー（Broder CC & Collman RG）著，「ジャーナルオブロイコック・バイオロジー（ J Leukoc Biol.）」，1997年7月，第62巻第1号；20-9頁レビューゲイオゼットアンドメッツダブリュエイ（Gao Z & Metz WA）著、2003年9月，第１０３巻第９号；3733-52頁リッツートシーディー他（Rizzuto CD et al.,）著，1998年6月19日，第280号第5371巻；1949-53頁コンピーディー他（Kwong PD et al.,）著，「ネイチャー（ Nature）」，1998年6月18日，第393巻第6686号；:648-59 エステジェイエィ他（Este JA et al.,）著，「モル・ファーマコロジー（ Mol Pharmacol）」，1997年7月18日，第52巻第1号：98-104頁フレクスナーシー他（Flexner C et al.,）著，「アンチマイクロ・エージェント・ケモサー（Antimicrob agents Chemother）」，1991年12月，第35巻第12号；2544-50頁モーラードエム他（Moulard M et al.,）著，「ジャーナルオブビロロジー（ J Virol.）」，2000年2月，第74巻第4号；1948-60頁シェンテンデー他（Schenten D. et al.,）著，1999年「ジャーナルオブビロロジー（ J Virol）」第73巻；5373-80頁ナジャンエス他（Najjam S. et al.,）著，「サイトカイン（Cytokine）」，1997年第9巻第12号；1013-1022頁

ＳＭＰＨ又はＳＡＴＡ／ＳＡＴＰによって活性化されたＣＤ４受容体由来ペプチド（ｍｉｎｉＣＤ４）の合成、及びｍｉｎｉＣＤ４−ＧＰＲ１複合分子の合成を示す図である。ｍｉｎｉＣＤ４−ＧＰＲ１複合分子の最終ＨＰＬＣ溶出曲線である。ｍｉｎｉＣＤ４−ＧＰＲ１複合分子の質量スペクトルである。ＳＡＴＰ活性化ｍｉｎｉＣＤ４ペプチドの最終ＨＰＬＣ溶出曲線である。ＳＡＴＰ活性化ｍｉｎｉＣＤ４ペプチドの質量スペクトルである。ＳＭＰＨ活性化ｍｉｎｉＣＤ４ペプチドの最終ＨＰＬＣ溶出曲線である。ＳＭＰＨ活性化ｍｉｎｉＣＤ４ペプチドの質量スペクトルである。ＰＥＯ_２リンカー介在マレイミド活性化ｍｉｎｉＣＤ４ペプチドの合成を示す図である。ｍｉｎｉＣＤ４とｇｐ１２０との相互作用を示す図である。マレイミド誘導体及びｍｉｎｉＣＤ４−ＰＥＯ_２のＨＰＬＣクロマトグラフィー分析を示す図である。得られたマレイミド誘導体の質量を示す質量スペクトルである（3205.3938）。

図１：ＣＤ４受容体由来ペプチド（ｍｉｎｉＣＤ４）のＳＭＰＨ又はＳＡＴＡ／ＳＡＴＰによる活性化（ＣＤ４受容体由来活性化ペプチドの合成）、及びｍｉｎｉＣＤ４−ＧＰＲ１複合分子の合成を示す図である。

図２：ｍｉｎｉＣＤ４−ＧＰＲ１複合分子の最終ＨＰＬＣ溶出曲線である。

ε ds 50μl TFA/CH₃CN 35%;注入量10μl ds 35-55
サンプル名：ＧＰＲ１−ｍＣＤ４

表面積率（％）：
ソート：シグナルによる
濃縮率：１．００００
希釈率：１．００００
内部標準に基づき濃縮率及び希釈率を用いる
シグナル１：DADI A, Sig=230.4 Ref=off

改良型積算計を用いて結果を得た。

図３：ｍｉｎｉＣＤ４−ＧＰＲ１複合分子の質量スペクトルである。
−Ｑ１多チャンネル分析（ＭＣＡ）（１３スキャン）のための一連の多価イオンスペクトル高質量算出のデータ３：ＦＢＸ１５８９９−５６／ＩｎｆＭＳ−／ｂ／１４／１２／０５より
高質量の算出基準
エージェント：、質量：１．００７９、電荷：１、エージェント：ロスト
電荷計算における許容差：０．１０００
質量計算間許容差：２０．０００

最終質量計算値：６５３７．２６
標準偏差：０．５４

図４：ＳＡＴＰ活性化ｍｉｎｉＣＤ４ペプチドの最終ＨＰＬＣ溶出曲線である。

２０分間において２５−４５
サンプル名：ＦＢＸ１３０８２−１６８−２

表面積率（％）：
ソート：シグナルによる
濃縮率：１．００００
希釈率：１．００００
内部標準に基づき濃縮率及び希釈率を用いる
シグナル１：ＤＡＤＩＡ、Ｓｉｇ＝２３０．４Ｒｅｆ＝ｏｆｆ

改良型積算計を用いて結果を得た。

図５：ＳＡＴＰ活性化ｍｉｎｉＣＤ４ペプチドの質量スペクトルである。

＋Ｑ１ＭＣＡ（１０スキャン）のための高質量算出のデータ：ＦＢＸ１３０８２−１８６−２／Ｉｎｆｐｏ／ｃ／２９／０７／０５より

高質量の算出基準
エージェント：、質量：１．００７９、電荷：１、エージェント：ゲイン
電荷計算における許容差：０．１０００
質量計算間許容差：２０．０００

最終質量計算値：３０２７．３１
標準偏差：０．４１

図６：ＳＭＰＨ活性化ｍｉｎｉＣＤ４ペプチドの最終ＨＰＬＣ溶出曲線である。

約２ｍｇ／ｍｌ
注入量５μｌｄｓ２５−４５
サンプル名：ＦＢＸ１３０８２−１９０

表面積率（％）：
ソート：シグナルによる
濃縮率：１．００００
希釈率：１．００００
内部標準に基づき濃縮率及び希釈率を用いる
シグナル１：ＤＡＤＩＡ、Ｓｉｇ＝２３０．４Ｒｅｆ＝ｏｆｆ

改良型積算計を用いて結果を得た。

図７：ＳＭＰＨ活性化ｍｉｎｉＣＤ４ペプチドの質量スペクトルである。

＋Ｑ１ＭＣＡ（１０スキャン）のための高質量算出のデータ：ＦＢＸ１３０８２−１９０／ＩｎｆＭＳｐｏ／ｃ／０３／０８／０５より

高質量の算出基準
エージェント：、質量：１．００７９、電荷：１、エージェント：ゲイン
電荷計算における許容差：０．１０００
質量計算間許容差：２０．０００

最終質量計算値：３１６０．８３
標準偏差：０．２９

図８：ＰＥＯ_２リンカー介在マレイミド活性化ｍｉｎｉＣＤ４ペプチドの合成を示す図である。

図９：ｍｉｎｉＣＤ４とｇｐ１２０との相互作用を示す図である。
合成ｍｉｎｉＣＤ４のｇｐ１２０に対する親和性をバイアコア社（Ｂｉａｃｏｒｅ）のシステムを用いて測定した。その結果から、本発明者等が「デザイン」した単一のリジンを有するｍｉｎｉＣＤ４が、ＣＤ４タンパク質の機能的類似体であることが確認された。

図１０：マレイミド誘導体及びｍｉｎｉＣＤ４−ＰＥＯ_２のＨＰＬＣクロマトグラフィー分析を示す図である。但し後者は、本明細書の実施例Ｖに述べるように、最終純度７７％で得られたものである。

図１１：得られた誘導体の質量を示す質量スペクトルである（3205.3938）。

本発明の第１の実施例として、ＣＤ４受容体由来ペプチド（ｍｉｎｉＣＤ４）を活性化し、該活性化ペプチドを用いて本発明の複合分子を得る合成法の一例を以下に示す。まず、従来の合成法として、国際公開番号ＷＯ０３／０８９０００（Najjam S et al., Cytokine 1997, 9(12):1013-1022 ）に記載の、ｍｉｎｉＣＤ４と多価アニオンとの結合方法による合成法を以下の流れ図に示す。

これに対して、本発明の結合方法による合成法は以下の流れ図に示す通りである。

上記流れ図に示した方法によって、マレイミド基導入によりｍｉｎｉＣＤ４の活性化を行えば、遊離チオール基（ＳＨ）又は保護されたチオール基（チオアセチルなど）を有する任意の化合物と結合することが可能となる。さらに、この活性化ｍｉｎｉＣＤ４を用いれば、ヘパリン（又はその他の任意の多糖類）に予めチオール基が導入されてさえいれば、ｍｉｎｉＣＤ４とヘパリンとが共有結合した複合分子を得ることができる。

本発明の第２の実施例として、ＳＭＰＨ活性化ｍｉｎｉＣＤ４又はＳＡＴＰ活性化ｍｉｎｉＣＤ４を化学合成で得る工程を以下に示す。

２−１：ｍｉｎｉＣＤ４の合成
前記Ｆｍｏｃ（９−フルオレニルメチルオキシカルボニル）固相ペプチド合成法（"Fmoc solid phase peptide synthesis, a practical approach", W.C. Chan及びP.D. White 編、オクスフォード大学出版局、2000年）に準じて、アプライド・バイオシステムズ社（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）製４３３型ペプチド合成装置を用いて、ｍｉｎｉＣＤ４ペプチドを合成した。０．１ミリモルのアミド−Ｆｍｏｃ樹脂を出発物質とし、１０当量のアミノ酸を結合させて、ペプチド鎖を伸長させた。前記アミノ酸はＦｍｏｃにより保護され、ＨＡＴＵ（Ｎ［（ジメチルアミノ）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−１−イルメチレン］−Ｎ−メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェートＮ−オキサイド：縮合剤）／ＤＩＥＡ（Ｎ−Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン）混合物により活性化されている。ペプチド−樹脂上にＳＰＤＰ（１．６当量、ＤＭＦ（Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド）溶液）をカップリングしてＮ末端にチオプロピオニル基を導入した。

ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）／Ｈ_２Ｏ／ＥＤＴ（エタンジチオール）／ＴＩＳ（トリイソプロピルシラン）を９４／２．５／２．５／１の比率で用いて切断した後、冷ジエチルエーテル中に沈殿させてペプチドを回収した。凍結乾燥後、未処理のペプチド（１５６ｍｇ）をジチオトレイトール（ＤＴＴ）の２０％酢酸溶液中で一晩還元し、逆相ＭＰＬＣ（中圧液体クロマトグラフィー）によって精製した。逆相ＭＰＬＣは、ＮｕｃｌｅｏｐｒｅｐＣ１８カラム（２０μｍ、１００Å）（２６×３１３ｍｍ））を用い、６０分間、流量２０ｍｌ／分（Ｂ＝８０％ＣＨ_３ＣＮ／２０％ＴＦＡの０．０８％水溶液；Ａ＝１００％ＴＦＡの０．０８％水溶液）で、Ｂ→Ａ：３０％→９０％の直線勾配により行った。精製された画分を集めて凍結乾燥した。ＧＳＨ（還元型グルタチオン）／ＧＳＳＧ（酸化型グルタチオン）処理を一晩行って、ペプチドの折返しを行った。折返し後のペプチドを、２０％→８０％勾配による６０分間のＭＰＬＣで精製し、８．７ｍｇのｍｉｎｉＣＤ４を得た。純度（９３．５％）は、逆相ＨＰＬＣ分析で確認した。前記逆相ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）は、ニュークレオシル（Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ）カラムＣ１８（５μｍ、３００Å（４．６×１５０ｍｍ）を用いて、ＴＦＡ０．０８％水溶液中ＣＨ_３ＣＮ２５％→３５％の直線勾配により、流量１ｍｌ／分（保持時間＝１５．４４分）で２０分間行った。ＥＳ＋ＭＳ（エレクトロスプレー質量分析、ポジティブイオンモード）：２８９６．３２±０．２３；計算値：２８９６．４９；収率：５．５％であった。

２−２：ＳＭＰＨによるｍｉｎｉＣＤ４の活性化
リン酸緩衝液（ｐＨ＝８）中でＳＭＰＨ４当量と反応させて、ｍｉｎｉＣＤ４のＬｙｓ側鎖に活性基としてマレイミド基を導入した。反応の進み具合をＨＰＬＣで確認した。１５分後に１００％の結合が達成された。セミ分取ニュークレオシル（Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ）Ｃ１８カラム（（５μｍ、３００Å（１０×２５０ｍｍ））を用いた逆相ＨＰＬＣを、ＴＦＡ０．０８％水溶液中ＣＨ_３ＣＮ２５％→４５％の直線勾配で、２０分間、流量６ｍｌ／分で行い目的物を精製した。ＳＭＰＨ活性化ｍｉｎｉＣＤ４の最終純度（９７．７％）は、直線勾配２５％→４５％（保持時間＝１３．２１分）の逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ-ＨＰＬＣ）分析で確認した。ＥＳ＋ＭＳ：３１６０．８３±０．２９；計算値：３１６０．７８；収率：１．９ｍｇ（６７％）であった。

２−３：ＳＡＴＰによるｍｉｎｉＣＤ４の活性化
リン酸緩衝液（ｐＨ＝８）中でＳＡＴＰ１当量と反応させて、ｍｉｎｉＣＤ４のＬｙｓ側鎖に活性基としてチオアセチル基を導入した。反応の進み具合をＨＰＬＣで確認した。３分後に４６％の結合が達成された。ニュークレオシル（Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ）Ｃ１８カラム（５μｍ、３００Å（１０×２５０ｍｍ））を用い、セミ分取逆相ＨＰＬＣをＴＦＡ０．０８％水溶液中ＣＨ_３ＣＮ２０％→４０％の直線勾配、２０分間、流量６ｍｌ／分で行って、ＳＡＴＰで活性化されたｍｉｎｉＣＤ４を単離した。ＳＡＴＰ活性化ｍｉｎｉＣＤ４の最終純度（１００％）は、直線勾配２５％→４５％（保持時間＝１３．８８分）の逆相ＨＰＬＣ分析で確認した。ＥＳ＋ＭＳ：３０２７．３１±０．４１；計算値：３０２７．６６であった。この結合反応は上記の如く行われたが、その後、ＳＡＴＰを２当量直接加えることによって最適化できた。

本発明の第３の実施例として、ｍｉｎｉＣＤ４−ＧＰＰ１ペプチドの複合分子を化学合成を行った工程を以下に示す。

３−１：ＧＰＲ１ペプチドの合成
前述のｍｉｎｉＣＤ４合成に関して記載した従来のＦｍｏｃ固相ペプチド合成法を用いて、ＧＰＲ１ペプチドを合成した。ＧＰＲ１配列のＣ末端にＣｙｓ残基を組み込み、それによりＳＭＰＨ活性化ｍｉｎｉＣＤ４のマレイミド官能基（活性基）への特異的結合を可能にした。ＧＰＲ１ペプチドの最終純度（９１％）は、直線勾配２０％→４０％（保持時間＝４．６４分）の逆相ＨＰＬＣ分析で確認した。ＥＳ＋ＭＳ：３３７６．４４±０．４９；計算値：３３７６．５８。収率：１２．９ｍｇ（５．８％）であった。

３−２：ＧＰＲ１のＳＭＰＨ活性化ｍｉｎｉＣＤ４への結合
ＧＰＲ１ペプチド（１．５ｍｇ；０．４μｍｏｌ）と２００μｌのリン酸緩衝液（ｐＨ＝７．４）との混合物を、ＳＭＰＨ活性化ｍｉｎｉＣＤ４（０．９５ｍｇ；０．３μｍｏｌ）水溶液２００μｌに加えた。反応の進み具合をＨＰＬＣで確認した。１５分後、ＳＭＰＨ活性化ｍｉｎｉＣＤ４に対応するピークが完全に消失した。ＧＰＲ１−ｍｉｎｉＣＤ４ペプチドの候補物質をセミ分取逆相ＨＰＬＣ用ニュークレオシル（Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ）Ｃ１８カラム（５μｍ、３００Å（１０×２５０ｍｍ））を用いて単離した。単離はＴＦＡ０．０８％水溶液中ＣＨ_３ＣＮ３５％→５５％の直線勾配で、２０分間、流量６ｍｌ／分で行った。

ＧＰＲ１−ｍｉｎｉＣＤ４ペプチドの最終純度（９４．２％）は、直線勾配３５％→５５％（保持時間＝１２．６０分）の逆相ＨＰＬＣ分析で確認した。
ＥＳ＋ＭＳ：６５３７．２６±０．５４；計算値：６５３７．３８。収率：１．９ｍｇ（９６％）であった。

本発明の第４の実施例として、唯一のリシン残基をある特定の位置に有する一般配列（Ｉ）の選択の妥当性を検討した結果を以下に示す。

ピアス（ＰＩＥＲＣＥ：米国イリノイ州、ロックフォード）社製ＥＺ−ｌｉｎｋ−ＮＨＳ−（ＰＥＯ）４−ビオチン試薬を用いて、Ｌｙｓ上に（ＰＥＯ）４−ビオチンを導入したｍｉｎｉＣＤ４ペプチドを合成し、唯一のリジン残基をある特定の位置に有する一般配列（Ｉ）の選択の妥当性を検討した。バイアコア（Ｂｉａｃｏｒｅ）社のシステムを用いた測定を行い、このように一般配列（Ｉ）の特定の位置にビオチン誘導体を導入してもｇｐ１２０のｍｉｎｉＣＤ４への結合性には影響しないことを確認した。

前記各種合成法は、最適化されたものではなかった。最適化によってより高い収率を得ることが可能であると思われる。

本発明の第５の実施例として、ＰＥＯ_２リンカー介在によるマレイミド活性化ｍｉｎｉＣＤ４の化学合成を以下に示す。

図８、１０及び１１に示すように、ｍｉｎｉＣＤ４−ＰＥＯ_２−マレイミドは、化合物ｍｉｎｉＣＤ４−ＳＭＰＨとはリンカーのタイプが異なる。すなわち、可溶性を高めるために、より水溶性の高いポリエチレンオキサイド（ＰＥＯ_２）リンカーを、ｍｉｎｉＣＤ４とマレイミド基との間に組み込んでいる。

合成：
１０ｍｇのｍｉｎｉＣＤ４（分子量：２８９７；３．４ミリモル）を１ｍｌの水Ｈ_２Ｏに溶解した溶液を、１ｍｌの０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８）で希釈した。この溶液を２０μｌのＤＭＳＯ（ジメチルスホキシド）に加えると白濁した。その白濁溶液に４．５ｍｇのＮＨＳ−ＰＥＯ_２−マレイミド（分子量：３２５；１３．８ミリモル；４当量）を攪拌下加えた。１０分後、出発原料の８５％（ＨＰＬＣ：）がマレイミド誘導体に変換された。ｐＨ８ではマレイミド基が不安定なので、前記結合反応は、０．０８％ＴＦＡ水溶液の１０％ＣＨ_３ＣＮでキャリブレイトしたセパック（ＳｅｐａＫ）Ｃ１８カラム上に直接ロードして行った。マレイミド誘導体は５０％ＣＨ_３ＣＮで溶出した。凍結乾燥後、前記化合物をセミ分取カラムで精製した。収率：５．２ｍｇ（４８％）、最終純度：７７％であった。ＥＳ＋：３２０５．３９３８（モノアイソトピック質量計算値：３２０５．４２１１）、ＱＴＯＦＭｉｃｒｏＷａｔｅｒｓＭａｘＥｎｔ１。

前記ＨＰＬＣの条件は以下の通りである。即ち、分析：ニュークレオシル（Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ）５Ｃ１８カラム（３００Å（４．６×１５０ｍｍ））；ＴＦＡ０．０８％水溶液中直線勾配２５％→４５％ＣＨ_３ＣＮ、２０分間、流量１ｍｌ／分。検出：２３０ｎｍ。ｍｉｎｉＣＤ４保持時間＝１０．７分；ｍｉｎｉＣＤ４−ＰＥＯ_２−Ｍａｌ保持時間＝１２．８分。また、前記セミ分取は以下の通りである。即ち、ニュークレオシル（Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ）５Ｃ１８カラム（３００Å（１０×２５０ｍｍ））でＴＦＡ０．０８％水溶液中直線勾配２５％→４５％ＣＨ_３ＣＮ、２０分間、流量６ｍｌ／分。検出：２３０ｎｍ。ｍｉｎｉＣＤ４−ＰＥＯ_２−Ｍａｌ保持時間＝１１．４。

Claims

ＣＤ４受容体に由来する活性化されたペプチドを製造する方法であって、該ペプチドは、活性化されると共有結合によって有機分子に結合可能であり、且つ、該ＣＤ４受容体由来ペプチドは、下記一般配列（Ｉ）：
Ｘａａ^ｆ−Ｐ１−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−Ｐ２−Ｃｙｓ−Ｐ３−Ｃｙｓ−Ｘａａ^ｇ−Ｘａａ^ｈ−Ｘａａ^ｉ−Ｘａａ^ｊ−Ｃｙｓ−Ｘａａ^ｋ−Ｃｙｓ−Ｘａａ^ｌ−Ｘａａ^ｍ，（Ｉ）
を有しており、
式中：
Ｐ１は３〜６個のアミノ酸残基を表し、
Ｐ２は２〜４個のアミノ酸残基を表し、
Ｐ３は６〜１０個のアミノ酸残基を表し、
Ｘａａ^ｆはＮ−アセチルシステイン（Ａｃ−Ｃｙｓ）又はチオプロピオン酸（ＴＰＡ）を表し、
Ｘａａ^ｇはＡｌａ又はＧｌｎを表し、
Ｘａａ^ｈはＧｌｙ、（Ｄ）Ａｓｐ又はＳｅｒを表し、
Ｘａａ^ｉはＳｅｒ、Ｈｉｓ又はＡｓｎを表し、
Ｘａａ^ｊはビフェニルアラニン（Ｂｉｐ）、フェニルアラニン又は［β］−ナフチルアラニンを表し、
Ｘａａ^ｋはＴｈｒ又はＡｌａを表し、及び
Ｘａａ^ｌはＧｌｙ、Ｖａｌ又はＬｅｕを表し、
Ｘａａ^ｍは−ＮＨ_２又は−ＯＨを表し、
Ｐ１、Ｐ２及びＰ３のアミノ酸残基は、天然あるいは非天然で、互いに同一又は異なるものであり、
Ｐ１、Ｐ２及びＰ３のアミノ酸残基はいずれもＬｙｓ残基とは異なり、Ｐ１、Ｐ２及びＰ３は共通又は共通しない配列を有しており、
前記製法は、一般配列（Ｉ）のＣＤ４受容体由来ペプチドを、二つの反応性官能基を有すると共にそのうち少なくとも一方の官能基が一般配列（Ｉ）のアミノ酸Ｌｙｓ残基の遊離アミノ基（−ＮＨ_２）と共有結合を形成可能な二価性化合物と接触させる工程を含むことを特徴とするＣＤ４受容体由来活性化ペプチドの製法。
一般配列（Ｉ）のＣＤ４受容体由来ペプチドの配列が、配列番号１及び配列番号２の配列からなる群より選択されることを特徴とする請求項１に記載のＣＤ４受容体由来活性化ペプチドの製法。
一般配列（Ｉ）に示されたアミノ酸Ｌｙｓ残基の遊離アミノ基（−ＮＨ_２）と共有結合を形成可能である官能基が、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＮＨＳ）基であることを特徴とする請求項１又は２に記載のＣＤ４受容体由来活性化ペプチドの製法。
二価性化合物の二つの反応性官能基が互いに異なるとともに、前記二つの官能基の一方がＮＨＳ基であることを特徴とする請求項３に記載のＣＤ４受容体由来活性化ペプチドの製法。
二価性化合物がスクシニミジル−６−[β−マレイミドプロピオンアミド］ヘキサノエート（ＳＭＰＨ）であることを特徴とする請求項４に記載のＣＤ４受容体由来活性化ペプチドの製法。
二価性化合物がＮ−スクシニミジル−Ｓ−アセチルチオアセテート（ＳＡＴＡ）及びＮ−スクシニミジル−Ｓ−アセチルチオプロピオネート（ＳＡＴＰ）からなる群より選択されることを特徴とする請求項４に記載のＣＤ４受容体由来活性化ペプチドの製法。
二価性化合物がＮＨＳ−ＰＥＯ_ｎ−マレイミドであり、式中のｎが２〜２４を示すものであることを特徴とする請求項４に記載のＣＤ４受容体由来活性化ペプチドの製法。
二価性化合物が、前記ｎが２であるスクシニミジル−［（Ｎ−マレイミドプロピオンアミド）−ジエチレングリコール］エステルであることを特徴とする請求項７に記載のＣＤ４受容体由来活性化ペプチドの製法。
Ｘａａ^ｆがＴＰＡを表し、前記製法が一般配列（Ｉ）のＣＤ４受容体由来ペプチドを調製するための予備工程を含み、前記予備工程において、下記一般配列（ＩＩ）：
Ｐ１−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−Ｐ２−Ｃｙｓ−Ｐ３−Ｃｙｓ−Ｘａａ^ｇ−Ｘａａ^ｈ−Ｘａａ^ｉ−Ｘａａ^ｊ−Ｃｙｓ−Ｘａａ^ｋ−Ｃｙｓ−Ｘａａ^ｌ−Ｘａａ^ｍ、（ＩＩ）で表され、式中のＰ１〜Ｐ３及びＸａａ^ｇ〜Ｘａａ^ｍは一般配列（Ｉ）の定義と同一であるＣＤ４受容体由来ペプチドをＮ−スクシニミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）と接触させ、該一般配列（ＩＩ）のＣＤ４受容体由来ペプチドのＮ末端にＴＰＡを導入することを特徴とする請求項１〜８のいずれか１項に記載のＣＤ４受容体由来活性化ペプチドの製法。
請求項１に定義された一般配列（Ｉ）を有するＣＤ４受容体由来活性化ペプチドであって、アミノ酸Ｌｙｓ残基が、望ましくはアミン結合によって、共有結合により有機分子に結合可能な反応性官能基からなる活性基を有する化合物と共有結合していることを特徴とするＣＤ４受容体由来活性化ペプチド。
活性基がマレイミドであることを特徴とする請求項１０に記載のＣＤ４受容体由来活性化ペプチド。
下記式（６）の分子構造を有することを特徴とする請求項１１に記載のＣＤ４受容体由来活性化ペプチド。
下記式（７）の分子構造を有することを特徴とする請求項１１に記載のＣＤ４受容体由来活性化ペプチド。
活性基がチオアセチル基であることを特徴とする請求項１０に記載のＣＤ４受容体由来活性化ペプチド。
下記式（８）の分子構造を有することを特徴とする請求項１４に記載のＣＤ４受容体由来活性化ペプチド。
下記式（９）の分子構造を有することを特徴とする請求項１４に記載のＣＤ４受容体由来活性化ペプチド。
有機分子と、請求項１に定義された一般配列（Ｉ）を有すると共に前記有機分子に共有結合により結合したＣＤ４受容体由来ペプチドとを含有する複合分子を製造する方法であって、
請求項１０〜１６のいずれか１項に記載のＣＤ４受容体由来活性化ペプチドを前記有機分子と接触させる工程を含むことを特徴とする複合分子の製法。
ＣＤ４受容体由来活性化ペプチドが、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載のペプチドであり、有機分子がチオール又はチオアセチル基を有していることを特徴とする請求項１７に記載の複合分子の製法。
チオール基を有する有機分子がＧタンパク質共役受容体１（ＧＰＲ１）ペプチドであり、ＧＰＲ１ペプチドの配列が配列番号３及び配列番号４の配列からなる群より選択されることを特徴とする請求項１８に記載の複合分子の製法。
チオール基を有する有機分子が、酸性アミノ酸残基を必須成分として有するペプチド類、リン酸化可能アミノ酸残基を必須成分として有するペプチド類、及び硫酸化可能アミノ酸残基を必須成分として有するペプチド類からなる群より選択されることを特徴とする請求項１８に記載の複合分子の製法。
チオール基を有する有機分子が、チオール基を有する変性多価アニオンであることを特徴とする請求項１８に記載の複合分子の製法。
チオール基を有する変性多価アニオンが、ヘパリン及びヘパラン硫酸からなる群より選ばれ、且つ、１０〜２４の重合度ｄｐを有することを特徴とする請求項２１に記載の複合分子の製法。
ＣＤ４受容体由来活性化ペプチドが請求項１４〜１６のいずれか１項に記載のペプチドであり、且つ有機分子がマレイミド基又はハロゲン基を有することを特徴とする請求項１７に記載の複合分子の製法。
有機分子と、該有機分子に結合したＣＤ４受容体由来ペプチドとを含有する複合分子であって、ＣＤ４受容体由来ペプチドが請求項１に定義された一般配列（Ｉ）を有し、ＣＤ４受容体由来ペプチドと有機分子とがリンカーによって互いに結合し、一般配列（Ｉ）のアミノ酸Ｌｙｓ残基がリンカーとアミノ結合を形成していることを特徴とする複合分子。
一般配列（Ｉ）が配列番号１の配列であり、チオール基を有する有機分子がＧＰＲ１ペプチドであって、前記ＧＰＲ１ペプチドの配列が配列番号３及び配列番号４の配列からなる群より選択されていることを特徴とする請求項２４に記載の複合分子。
一般配列（Ｉ）が配列番号１の配列であるとともに、チオール基を有する有機分子がチオール基を有する変性多価アニオンであることを特徴とする請求項２４に記載の複合分子。
チオール基又はチオアセチル基を有する有機分子への結合のための、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載のＣＤ４受容体由来活性化ペプチドの使用。
マレイミド基又はハロゲン基を有する有機分子への結合のための、請求項１４〜１６のいずれか１項に記載のＣＤ４受容体由来活性化ペプチドの使用。
抗ウイルス治療用の医薬品の製造のための、請求項１０〜１６のいずれか１項に記載のＣＤ４受容体由来活性化ペプチドの使用。
医薬品がＡＩＤＳ治療用であることを特徴とする請求項２９に記載のＣＤ４受容体由来活性化ペプチドの使用。
医薬品として用いられることを特徴とする請求項２５又は２６に記載の複合分子。
ＡＩＤＳ治療用の医薬品の製造のための、請求項２５又は２６に記載の複合分子の使用。