JP2009544954A - 体液中のアミロイド−βオリゴマーの検出方法 - Google Patents
体液中のアミロイド−βオリゴマーの検出方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2009544954A JP2009544954A JP2009521170A JP2009521170A JP2009544954A JP 2009544954 A JP2009544954 A JP 2009544954A JP 2009521170 A JP2009521170 A JP 2009521170A JP 2009521170 A JP2009521170 A JP 2009521170A JP 2009544954 A JP2009544954 A JP 2009544954A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- epitope
- antibody
- amyloid
- demasking
- oligomers
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 40
- 102000013455 Amyloid beta-Peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 28
- 108010090849 Amyloid beta-Peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 28
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 title claims description 18
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 title claims description 17
- 238000002866 fluorescence resonance energy transfer Methods 0.000 claims abstract description 31
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims abstract description 19
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 claims description 43
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 claims description 18
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 16
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 6
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 claims description 6
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 claims description 4
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 claims description 4
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 claims description 4
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 claims description 4
- 239000003945 anionic surfactant Substances 0.000 claims description 4
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 claims description 4
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000005375 photometry Methods 0.000 claims description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims description 4
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 3
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 claims description 3
- 239000012445 acidic reagent Substances 0.000 claims description 3
- 239000012491 analyte Substances 0.000 claims description 3
- 239000003093 cationic surfactant Substances 0.000 claims description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 3
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 claims description 3
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 claims description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 claims description 3
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 3
- BHNQPLPANNDEGL-UHFFFAOYSA-N 2-(4-octylphenoxy)ethanol Chemical compound CCCCCCCCC1=CC=C(OCCO)C=C1 BHNQPLPANNDEGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 3-[(3-cholamidopropyl)dimethylammonio]propane-1-sulfonate Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 0.000 claims description 2
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 2
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 claims description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 claims description 2
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 claims description 2
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 claims description 2
- 229960000789 guanidine hydrochloride Drugs 0.000 claims description 2
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 239000000693 micelle Substances 0.000 claims description 2
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000001138 tear Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims description 2
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 claims 1
- 241000282324 Felis Species 0.000 claims 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- PLMFYJJFUUUCRZ-UHFFFAOYSA-M decyltrimethylammonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCC[N+](C)(C)C PLMFYJJFUUUCRZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- 239000002888 zwitterionic surfactant Substances 0.000 claims 1
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 abstract description 16
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 abstract description 9
- 101000746373 Homo sapiens Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Proteins 0.000 abstract description 4
- 230000027455 binding Effects 0.000 abstract description 3
- 239000000370 acceptor Substances 0.000 description 23
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 23
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 21
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 21
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 17
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 15
- 239000012110 Alexa Fluor 594 Substances 0.000 description 10
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 10
- 239000012103 Alexa Fluor 488 Substances 0.000 description 9
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 9
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 8
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 6
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 4
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 4
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 4
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- FHHPUSMSKHSNKW-SMOYURAASA-M sodium deoxycholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 FHHPUSMSKHSNKW-SMOYURAASA-M 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- QAPSNMNOIOSXSQ-YNEHKIRRSA-N 1-[(2r,4s,5r)-4-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O[Si](C)(C)C(C)(C)C)C1 QAPSNMNOIOSXSQ-YNEHKIRRSA-N 0.000 description 2
- CXRFDZFCGOPDTD-UHFFFAOYSA-M Cetrimide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C CXRFDZFCGOPDTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N N-tris(hydroxymethyl)methylglycine Chemical compound OCC(CO)(CO)[NH2+]CC([O-])=O SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000003920 cognitive function Effects 0.000 description 2
- 238000004163 cytometry Methods 0.000 description 2
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 2
- -1 ethylphenyl Chemical group 0.000 description 2
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 101710095339 Apolipoprotein E Proteins 0.000 description 1
- 102100029470 Apolipoprotein E Human genes 0.000 description 1
- 108010039627 Aprotinin Proteins 0.000 description 1
- VGGGPCQERPFHOB-MCIONIFRSA-N Bestatin Chemical compound CC(C)C[C@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](O)[C@H](N)CC1=CC=CC=C1 VGGGPCQERPFHOB-MCIONIFRSA-N 0.000 description 1
- VGGGPCQERPFHOB-UHFFFAOYSA-N Bestatin Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 VGGGPCQERPFHOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N Leupeptin Natural products CC(C)CC(NC(C)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 description 1
- 206010029350 Neurotoxicity Diseases 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 238000003646 Spearman's rank correlation coefficient Methods 0.000 description 1
- UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N Syringetin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010044221 Toxic encephalopathy Diseases 0.000 description 1
- 239000007997 Tricine buffer Substances 0.000 description 1
- 201000004810 Vascular dementia Diseases 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002280 amphoteric surfactant Substances 0.000 description 1
- 229960004405 aprotinin Drugs 0.000 description 1
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N argon Substances [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 229940009976 deoxycholate Drugs 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N dihydrochrysin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2)=C1 KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 235000013861 fat-free Nutrition 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000001506 fluorescence spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000001215 fluorescent labelling Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N leupeptin Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(C)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- 108010052968 leupeptin Proteins 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000009593 lumbar puncture Methods 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000626 neurodegenerative effect Effects 0.000 description 1
- 230000003955 neuronal function Effects 0.000 description 1
- 231100000189 neurotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002887 neurotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007135 neurotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000228 neurotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 229920002114 octoxynol-9 Polymers 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 1
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000003956 synaptic plasticity Effects 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 229950009811 ubenimex Drugs 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
- G01N33/6896—Neurological disorders, e.g. Alzheimer's disease
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/536—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase
- G01N33/542—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase with steric inhibition or signal modification, e.g. fluorescent quenching
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/28—Neurological disorders
- G01N2800/2814—Dementia; Cognitive disorders
- G01N2800/2821—Alzheimer
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Neurology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
Abstract
【選択図】図1
Description
a)アミロイド−βペプチドオリゴマーの存在に関する被検体液のサンプルを準備する工程と、
b)前記アミロイド−βペプチドオリゴマーに結合する抗体に関与するエピトープをデマスキングする工程と、
c)前記デマスキング工程後の前記サンプルを、前記アミロイド−βペプチドオリゴマーのエピトープと結合する抗体集団を含む1つの抗体に接触させるとともに、前記抗体集団の一部分が第1蛍光マーカーで標識され、前記抗体集団のその他の部分が第2蛍光マーカーで標識される工程、又は
前記デマスキング工程後の前記サンプルを、前記アミロイド−βペプチドオリゴマーの少なくとも2つの異なるエピトープと結合する少なくとも2つの抗体に接触させるとともに、第1抗体が第1蛍光マーカーで標識され、少なくとも第2抗体が第2蛍光マーカーで標識される工程のいずれかを備え、
前記第1蛍光マーカーが、そのエネルギーを前記第2蛍光マーカーに移す供与体として作用し、前記第2蛍光マーカーは受容体として作用し、
前記方法はさらに、
d)前記蛍光標識されたサンプルから放射される蛍光共鳴エネルギー移動信号の強度を測定することにより前記体液サンプルに存在するアミロイド−βペプチドオリゴマーを検出する工程を備える。
<溶液1>
4〜0.6、好ましくは0.5重量% NP-40
2〜0.3、好ましくは0.25重量% デオキシコール酸ナトリウム
01〜0.5、好ましくは0.05重量% SDS
100〜200、好ましくは150mM 塩化ナトリウム
20〜100、好ましくは50mM Hepes
<溶液2>
10〜50、好ましくは25mM Tris-HCl pH8
4〜0.6、好ましくは0.5重量% Triton X-100
4〜0.6、好ましくは0.5重量% NP-40
<脳脊髄液(CSF)の採取>
CSFは、多発性硬化症等の診断を受けた神経疾患の患者174人(平均年齢49.3歳、範囲8−89歳)から得た。全てのサンプルは腰椎穿刺によって得て、分析前に2時間以内で冷凍し、−85℃で保存したものである。冷凍/解凍のサイクルを反復することは避けた。
抗Aβ抗体4GB及び6E10(Chemicon International社)は、蛍光色素Alexa Fluor 488又はAlexa Fluor594を用いて、製品の取扱説明書に基づき標識された(各モノクローナル抗体標識キット(Monoclonal Antibody Labelling Kits;Invitrogen社)を利用した)。
200μlのCSFを、200μlの1倍溶液1(5倍溶液1は、250mMのHEPES、750mM塩化ナトリウム、0.25%SDS、1.25%デオキシコール酸ナトリウム、2.5%NP-40Alternative(Calbiochem社)及び1錠剤のプロテアーゼ阻害剤カクテルComplete(商標)Mini(Roche Applied Science社)を2mlの5倍溶液1中に含むものである)で希釈した。そして、蛍光標識抗体を、供与体抗体(4G8 Alexa Fluor 488で標識)及び受容体抗体(6E10 Alexa Fluor 594で標識)それぞれに2nM及び8nM濃度添加した。培養後(室温で90分、遮光下)、サンプルは、後述する如く、FACS Calibur (BD Biosciences社)で分析された。
Aβオリゴマーを検出するために、15mWの488nmの空冷アルゴンイオンレーザーを備えるFACS Caliburフローサイトメーター(BD Biosciences社)が使用された。オリゴマー粒子は、対数表示の前方/側方散乱のドットプロットにゲート設定された(FSC対SSC)。色素Alexa Fluor488及びAlexa Fluor594の緑色又は赤色蛍光は、対応するFL1及びFL3(対数目盛)光電子増倍管によって夫々検出された。このFL1及びFL3光電子増倍管は、530/30又は670LPの帯域通過フィルターを通過したものである。CSFサンプルの差異による測定誤差を回避するために、全てのサンプルはTruCountTube(BD Biosciences社)を用いて測定され、28,000個ビーズを数えた後分析を終了した。
オリゴマー特異的領域のソーティングは、FACS Vantageセルソーター(BD Biosciences社)によって行い、閾値をFL1チャネルに設定した。対象となる集団は、FL1対FL3のドットプロットにゲート設定された。そして、FRET信号に関連する事象のみがソートされた。
20μlのCSFサンプル又は25μlのソートされたCSFを、16%のトリシンゲル(Invitrogen社)に添加し、2時間経った後、tPVDF膜上に移動させた。膜をPBS内で5分間煮沸し、TBS-T(10mM Tris-HCl、pH7.6(150mMの塩化ナトリウム及び0.1%のTween20を含む))の5%脱脂粉乳中で2時間遮断した。そして、モノクローナル抗Aβ抗体6E10を添加し、一晩培養した。この膜をTBS-Tで洗浄した後、結合した抗体を、HRP接合した第2抗マウス抗体及びECL検出(SuperSignal West Femto Subsrate、Pierce社)を用いて視覚化した。
ドットブロットアッセイにおいて、サンプルをニトロセルロース膜に直接的に添加し、空気乾燥させた。その後、この膜を処理し、抗オリゴマー特異的抗体A−11(Biosource社)を製品の取扱説明書に基づいて用い、Aβオリゴマーの存在を判定した。
対照群人物及びAD患者の前頭側頭脳組織は、ドイツの脳バンクにより誠意を持って提供されたものを使用した。対照群とADの脳から、Wiltfangらの方法(非特許文献19)に基づき、オリゴマーが単離された。
統計分析は、MedCalcソフトウェア及びスピアマンの順位相関係数を用いて実施した。
Aβ(1−42)はBachem社から購入したものであり、Dahlgrenら(Dahlgren, K.N. et al, Oligomeric and fibrillar species of amyloid-beta peptides differentially affect neuronal viability. J. Biol.Chem. 277, 32046-32035 (2002))の記述に基づき、シードレス処理をした。その後、RP-HPLC(コラム:Source 5RPC 4.6/150 ST Amersham; 溶媒A:H2O中0.1%NH4OH(25%) pH9.0; 溶媒B:60%アセトニトリル 40%溶媒A; 勾配:25−56%溶媒Bを31分間;流量:1.0ml/分)によって精製し、凍結乾燥した。
シードレスAβ(1−42)をDMSO(Sigma-Aldrich社)に溶解させて1mMとし、10mMの塩酸で希釈して100μmとし、24時間37℃で培養した(Dahlgrenら2002)。保管するために、原線維調製物は、100mMのHepes、2.5mMのDTT、5mMのEDTA、250mM塩化ナトリウム、2%グリセリン(pH7.6)で希釈して5μMとし、−80℃で冷凍した。
アッセイの感度は、インビトロで集合したAβ原線維(1nM以下から0.0025nMの範囲)の滴定によって測定された。この範囲において、アッセイは線形である。原線維の濃度は、原線維を集合させるために用いた開始モノマー濃度から推定したものであり、1つの原線維が100−1000モノマーに相当する。したがって、測定された原線維の実濃度は、検出限界をフェムトモル範囲まで下げるものとなる(図2)。
Aβのモノマーがフローサイトメトリーによって検出可能か否かを検査するために、Dahlgrenら(非特許文献15)に記載された方法に基づいて処理されたAβモノマー1−42(Bachem社)1mMを、供与体/受容体抗体対とともに培養した後、フローサイトメトリーを用いて分析した。どの事例においても信号は検出されなかった(FSC対SC;FL1対FL3ドットプロット;図3a、b)。Aβモノマーとは対照的に、1nMのインビトロで集合したAβ原線維 [シードレスアミロイド−(1−42)をDMSO(Sigma-Aldrich社)に溶解させて100μMとし、PBSで希釈して0.5μMとし、37℃で72時間培養した。この原線維の使用濃度は開始モノマー濃度に基づく。] において、FRET事象が検出された(FSC対SCC;FL1対FL3)。これらは、本アッセイがモノマーAβ(検出不可能)とAβオリゴマーとを判別可能であることを示している(図3c、d)。
フローサイトメトリー法に用いるために、CSFを異なるバッファ溶液に溶解させた。幾つかの特定量の界面活性剤を含むバッファにCSFを希釈した場合のみ、アミロイドβオリゴマーを最適に検出することが可能であった(溶液1及び2)。したがって、前処理工程は、アミロイドβオリゴマーを測定するために必須であり、非常に重大な工程である。図4に示す如く、CSFを希釈するために水又は一般的なバッファ(PBS、HEPES)を使用すると、サンプル内に存在するオリゴマーの微小部分しか検出することができない。このようにオリゴマーが非効率的に検出される理由は、抗体結合と競合する、いわゆるエピトープ−マスキングとなるからである。
実施例3から明らかである如く、溶液1はCSF内のアミロイドβオリゴマーの検出に優れている。したがって、このバッファ溶液は、さらなる測定用として選択され、その濃度を最適化した。図5(上)に示す如く、溶液1は、1倍濃縮溶液として用いた時、測定ノイズを増加させた(矢印)。バッファ濃度を0.25倍まで下げた場合にも同様の結果が得られ、殆どの検出信号は非特異的ノイズであった(図5下)。しかしながら、0.5倍濃縮溶液1は、非特異的なノイズ信号を増加させずにオリゴマーを十分にデマスキングした(図5真中)。このようにして、本実施例は、CSF内のオリゴマー検出はサンプルの前処理(即ち、適切な界面活性剤混合物の選択)に原則的に依存し、それ故にバッファ条件に依存することを実証している。
現行の設備において、200μlのCSFが200μlの溶液1で希釈され、その後、FRET抗体混合物とともに培養された。各CSFサンプルを200μl使用したが、この量に限定されず、高感度が必要な場合には量を増やしてもよい。FRET効果をより視覚化するために、まずヒトCSFを、抗体4G8−Alexa Fluor 488だけを用いて培養した。その後のフローサイトメトリー分析においては、オリゴマー特異的な集団が検出され、蛍光1チャネルのみにおいて事象が示された(図6a;FL1−H)。その後、FRET受容体抗体6E10−Alexa Fluor 594を添加すると、蛍光3チャネルにおいて追加的な蛍光信号が誘導された(図6b−c;FL3−H)。Alexa Fluor 594特異的な放射が得られるということは、両方の抗体が、互いに近接して(<10nm)結合していることを実証しており、Alexa Fluor488供与体からAlexa Fluor594受容体蛍光物質へのエネルギー移動が可能となっている。検出された信号の感度は、受容体抗体を追加することにより増えるが、特異的な事象の全体数は同時に減少する。これは、各エピトープに対する両方の抗体が立体的に競合すること、及び受容体蛍光物質のFRET誘導による蛍光性クエンチングが原因であると考えられる。両方の抗体が10nmより近い距離で非特異的に結合する確率は、非常に低いことから、これらのデータは、検出された事象が実際にはAβオリゴマーであることを意味している。本仮定をさらに立証するために、CSFのプール(6ml)を準備し、上述の如く分析した。一方、対象となる領域内に検出された事象を、FACS Vantageセルソーターによってソートし、続いてウェスタンブロット法及びドットブロット法により分析した。図6dに示す如く、モノマーからペンタマーまでの範囲のAβ集合体は、ウェスタンブロット法により検出可能であり、ソートされた粒子がAβペプチドの構成物であることが確認された(図6d、2レーン)。ソーティング由来のサンプルと、ゲル上に直接的にロードされたCSFサンプルを比較すると、高分子量型では、ソーティングによって濃縮されたサンプル(図6dの2−3レーン)のみが検出可能であることが示されている。本アッセイはAβモノマーを検出しない(図3)ため、このことは、ソーティングされた成分のモノマーバンドがオリゴマー構造から生じたものであることを示している。このように、CSFで発見されたオリゴマーの殆どが、共有結合架橋されていないか、SDS耐性ではないことが示されている。検出されたAβオリゴマーの更なる立証は、ソートされた集団をドットブロットアッセイすることによって得られ、その結果、オリゴマー特異的抗体A−11でプローブした場合に正の信号を示した(図6e)。
臨床分析性能を検査するために、私達はついに、CSFアッセイを、様々な神経疾患を有する非認知症の個体174人から得られたサンプルにまで拡大した(図7)。データの評価は、検出されたオリゴマー濃度において大きなばらつきを示した。しかしながら、個体の年齢とAβオリゴマー量との間の相関性が発見された(rho=0.22;P=0.0036)。この相関性は、Aβオリゴマー濃度が加齢に伴い増加することを初めて示したものである。この結果は、可溶性−非可溶性Aβの平衡が加齢に伴い阻害されるという仮定を支持するものであり、また、観察されるCSF中のモノマーAβが年齢に依存して減少すること、即ちオリゴマーが形成されることに対する説明を提供するものである。
CSFの冷凍/解凍のサイクルを反復することにより、Aβモノマーの濃度が減少することはよく知られている(非特許文献20)。しかしながら、確実な検出方法が欠如すると、このようなオリゴマーの研究が不可能なものとなる。したがって、私達は、冷凍/解凍サイクルの影響を、−80℃に冷凍させたCSFのプールを用いて連続的に3回解凍することにより検査した。第1の値は冷凍前に測定し、100%として設定した。Aβモノマーの観察状況(非特許文献20)とは対照的に、全ての実際に適用された冷凍/解凍サイクルのオリゴマーの総量において、有意な影響は観察されなかった(図8)。
Claims (10)
- 体液中のアミロイド−βペプチドオリゴマーを検出する方法であって、
a)アミロイド−βペプチドオリゴマーの存在に関する被検体液のサンプルを準備する工程と、
b)前記アミロイド−βペプチドオリゴマーに結合する抗体に関与するエピトープをデマスキングする工程と、
c)前記デマスキング工程後の前記サンプルを、前記アミロイド−βペプチドオリゴマーのエピトープと結合する抗体集団を含む1つの抗体に接触させるとともに、前記抗体集団の一部分が第1蛍光マーカーで標識され、前記抗体集団のその他の部分が第2蛍光マーカーで標識される工程、又は
前記デマスキング工程後の前記サンプルを、前記アミロイド−βペプチドオリゴマーの少なくとも2つの異なるエピトープと結合する少なくとも2つの抗体に接触させるとともに、第1抗体が第1蛍光マーカーで標識され、少なくとも第2抗体が第2蛍光マーカーで標識される工程のいずれかを備え、
前記第1蛍光マーカーが、そのエネルギーを前記第2蛍光マーカーに移す供与体として作用し、前記第2蛍光マーカーは受容体として作用し、
前記方法はさらに、
d)前記蛍光標識されたサンプルから放射される蛍光共鳴エネルギー移動信号の強度を測定することにより前記体液サンプルに存在するアミロイド−βペプチドオリゴマーを検出する工程を備えることを特徴とする方法。 - 前記体液が脊椎動物の体液であって、好ましくは、ヒト、ウシ、ウマ、ネコ及び齧歯類の体液であることを特徴とする請求項1記載の方法。
- 前記エピトープが、好ましくは、アミノ末端内のアミノ酸位置aa1−24内に配され、
前記エピトープが、好ましくは、aa4−13のエピトープ、aa17−24のエピトープ、aa1−5のエピトープ、aa1−11のエピトープ、aa1−7のエピトープ、aa15−24のエピトープ、aa3−9のエピトープ、aa11−26のエピトープ、aa4−10のエピトープ、aa13−28のエピトープ、aa1−10のエピトープ、aa31−40のエピトープ、aa8−17のエピトープ、aa15−30のエピトープ、aa17−24のエピトープ、aa1−28のエピトープ、aa12−28のエピトープ、aa17−42のエピトープ、aa20−40のエピトープ、aa37−42のエピトープ、aa8−17のエピトープ、aa11−28のエピトープ、aa1−6のエピトープ、aa8−17のエピトープ、aa12−28のエピトープ、aa25−35のエピトープ、aa15−30のエピトープ、aa17−26のエピトープ、aa1−12のエピトープ、aa32−40のエピトープ、aa33−42のエピトープからなる群から選択されることを特徴とする請求項1又は2に記載の方法。 - 前記デマスキングが、1以上の界面活性剤を添加することにより実施され、
前記界面活性剤が、好ましくは、SDS、デオキシコール酸ナトリウム等の陰イオン界面活性剤、Triton X-100、Tween20、Nonidet P40等の非イオン界面活性剤、CHAPS等の両性イオン界面活性剤、テトラデシルトリメチル臭化アンモニウム(TTAB)等の陽イオン界面活性剤、及び/又はその他の変性デマスキング剤であって、
前記その他の変性デマスキング剤が、好ましくは、ギ酸、塩酸グアニジンもしくは尿素等の塩基性又は酸性試薬、又はアルカリ性水酸化物であることを特徴とする請求項1乃至3いずれか1項に記載の方法。 - 前記界面活性剤が、臨界ミセル濃度よりも低い濃度で使用され、好ましくは約0.01〜2重量%、より好ましくは0.02〜1重量%で使用されることを特徴とする請求項4記載の方法。
- 前記デマスキング工程(b)及び/又は前記接触工程(c)の温度が、約15〜40℃、好ましくは17〜30℃の範囲であって、
前記デマスキング剤及び/又は前記抗体を用いた培養が、好ましくは約30〜90分であることを特徴とする請求項1乃至5いずれか1項に記載の方法。 - 前記体液が、脳脊髄液、血液、尿、涙液及び唾液からなる群から選択されることを特徴とする請求項1乃至6いずれか1項に記載の方法。
- 前記蛍光共鳴エネルギー移動信号の前記強度が、フローサイトメトリー法又は測光法により測定されることを特徴とする請求項1乃至7いずれか1項に記載の方法。
- 前記工程(b)及び前記工程(c)が、1つのバッチで同時に処理されることを特徴とする請求項1記載の方法。
- 前記デマスキング溶液中及び/又は抗体を含む溶液中に、プロテアーゼ阻害剤が添加されることを特徴とする請求項1乃至9いずれか1項に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP06118062A EP1882944B1 (en) | 2006-07-28 | 2006-07-28 | Method for the detection of amyloid-beta oligomers in body fluids |
EP06118062.6 | 2006-07-28 | ||
PCT/EP2007/006677 WO2008012101A1 (en) | 2006-07-28 | 2007-07-27 | METHOD FOR THE DETECTION OF AMYLOID-β OLIGOMERS IN BODY FLUIDS |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2009544954A true JP2009544954A (ja) | 2009-12-17 |
JP5009987B2 JP5009987B2 (ja) | 2012-08-29 |
Family
ID=37189402
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2009521170A Expired - Fee Related JP5009987B2 (ja) | 2006-07-28 | 2007-07-27 | 体液中のアミロイド−βオリゴマーの検出方法 |
Country Status (9)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20100129847A1 (ja) |
EP (1) | EP1882944B1 (ja) |
JP (1) | JP5009987B2 (ja) |
AT (1) | ATE426174T1 (ja) |
AU (1) | AU2007278422A1 (ja) |
CA (1) | CA2693212A1 (ja) |
DE (1) | DE602006005806D1 (ja) |
ES (1) | ES2323725T3 (ja) |
WO (1) | WO2008012101A1 (ja) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2011092796A1 (ja) * | 2010-01-28 | 2011-08-04 | パナソニック株式会社 | アミロイドβ測定方法 |
JP2017527828A (ja) * | 2014-09-05 | 2017-09-21 | システム オブ システムズ アナリティクス インコーポレイテッド | アミロイドベータオリゴマーを検出する方法 |
JP2018537081A (ja) * | 2015-10-30 | 2018-12-20 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | D因子活性及びd因子阻害剤の力価を測定する方法 |
US11402328B2 (en) | 2015-09-29 | 2022-08-02 | Hamamatsu Photonics K.K. | Amyloid β oligomer detection method, amyloid β oligomer detection device, and amyloid β oligomer detection program |
Families Citing this family (15)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE10303974A1 (de) | 2003-01-31 | 2004-08-05 | Abbott Gmbh & Co. Kg | Amyloid-β(1-42)-Oligomere, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung |
JP5486808B2 (ja) | 2005-11-30 | 2014-05-07 | アッヴィ・インコーポレイテッド | アミロイドベータタンパク質に対するモノクローナル抗体及びその使用 |
PL1954718T3 (pl) | 2005-11-30 | 2015-04-30 | Abbvie Inc | Przeciwciała skierowane przeciwko A globulomerowi, ich reszty wiążące antygeny, odpowiednie hybrydomy, kwasy nukleinowe, wektory, komórki gospodarze, sposoby wytwarzania tych przeciwciał, kompozycje zawierające te przeciwciała, zastosowania tych przeciwciał i sposoby stosowania tych przeciwciał |
US8455626B2 (en) | 2006-11-30 | 2013-06-04 | Abbott Laboratories | Aβ conformer selective anti-aβ globulomer monoclonal antibodies |
US20100311767A1 (en) | 2007-02-27 | 2010-12-09 | Abbott Gmbh & Co. Kg | Method for the treatment of amyloidoses |
US8048420B2 (en) | 2007-06-12 | 2011-11-01 | Ac Immune S.A. | Monoclonal antibody |
US8613923B2 (en) | 2007-06-12 | 2013-12-24 | Ac Immune S.A. | Monoclonal antibody |
RS53174B (en) | 2007-10-05 | 2014-06-30 | Genentech Inc. | USE OF ANTIAMYLOID BETA ANTIBODY IN THE EVENT OF ANY DISEASE |
CN104744591B (zh) | 2010-04-15 | 2022-09-27 | Abbvie德国有限责任两合公司 | β淀粉样蛋白结合蛋白 |
ES2398646T3 (es) | 2010-07-24 | 2013-03-20 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Estabilización de la interleuquina-6 en soluciones de suero |
WO2012016173A2 (en) | 2010-07-30 | 2012-02-02 | Ac Immune S.A. | Safe and functional humanized antibodies |
CN105348387B (zh) | 2010-08-14 | 2020-08-25 | Abbvie 公司 | β淀粉样蛋白结合蛋白 |
US9588129B2 (en) | 2013-03-15 | 2017-03-07 | Amira Medical Technologies Inc. | Methods for analyzing blood to detect diseases associated with abnormal protein aggregation |
GB201411616D0 (en) * | 2014-06-30 | 2014-08-13 | Cambridge Entpr Ltd | Diagnosis and treatment of neurodegenerative disorders |
WO2018136910A1 (en) * | 2017-01-23 | 2018-07-26 | Rensselaer Polytechnic Institute | Systems and methods for binding amyloid fibrils using fluorescent protein |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2001517800A (ja) * | 1997-09-19 | 2001-10-09 | エボテック バイオシステムズ アクチェン ゲゼルシャフト | 病原性タンパク質沈着の基礎構造の会合の測定方法 |
JP2003513294A (ja) * | 1999-11-03 | 2003-04-08 | アーツェーゲーテー プロゲノミクス アクチェンゲゼルシャフト | 分子会合体の特徴付けおよび分離方法 |
JP2007524574A (ja) * | 2003-01-31 | 2007-08-30 | アボット ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング ウント コンパニー コマンディトゲゼルシャフト | アミロイド−β(1−42)−オリゴマー、その誘導体及びその抗体、その製法及びその使用 |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6218506B1 (en) * | 1997-02-05 | 2001-04-17 | Northwestern University | Amyloid β protein (globular assembly and uses thereof) |
WO1999057566A1 (en) * | 1998-05-01 | 1999-11-11 | The University Of Tennessee Research Corporation | Flow cytometric characterization of amyloid fibrils |
US20060287337A1 (en) * | 2001-11-09 | 2006-12-21 | Proteologics, Inc. | Trans-golgi network-associated processes, methods and compositions related thereto |
JP2007527865A (ja) * | 2003-09-12 | 2007-10-04 | ザ・レジェンツ・オブ・ザ・ユニバーシティ・オブ・カリフォルニア | 種々の配列を有するタンパク質から形成されたアミロイドに共通の高分子量凝集中間体に特異的なモノクローナル抗体 |
-
2006
- 2006-07-28 DE DE602006005806T patent/DE602006005806D1/de active Active
- 2006-07-28 AT AT06118062T patent/ATE426174T1/de not_active IP Right Cessation
- 2006-07-28 ES ES06118062T patent/ES2323725T3/es active Active
- 2006-07-28 EP EP06118062A patent/EP1882944B1/en not_active Not-in-force
-
2007
- 2007-07-27 WO PCT/EP2007/006677 patent/WO2008012101A1/en active Application Filing
- 2007-07-27 JP JP2009521170A patent/JP5009987B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2007-07-27 CA CA2693212A patent/CA2693212A1/en not_active Abandoned
- 2007-07-27 AU AU2007278422A patent/AU2007278422A1/en not_active Abandoned
- 2007-07-27 US US12/375,391 patent/US20100129847A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2001517800A (ja) * | 1997-09-19 | 2001-10-09 | エボテック バイオシステムズ アクチェン ゲゼルシャフト | 病原性タンパク質沈着の基礎構造の会合の測定方法 |
JP2003513294A (ja) * | 1999-11-03 | 2003-04-08 | アーツェーゲーテー プロゲノミクス アクチェンゲゼルシャフト | 分子会合体の特徴付けおよび分離方法 |
JP2007524574A (ja) * | 2003-01-31 | 2007-08-30 | アボット ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング ウント コンパニー コマンディトゲゼルシャフト | アミロイド−β(1−42)−オリゴマー、その誘導体及びその抗体、その製法及びその使用 |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2011092796A1 (ja) * | 2010-01-28 | 2011-08-04 | パナソニック株式会社 | アミロイドβ測定方法 |
JP5400903B2 (ja) * | 2010-01-28 | 2014-01-29 | パナソニック株式会社 | アミロイドβ測定方法 |
JP2017527828A (ja) * | 2014-09-05 | 2017-09-21 | システム オブ システムズ アナリティクス インコーポレイテッド | アミロイドベータオリゴマーを検出する方法 |
US11402328B2 (en) | 2015-09-29 | 2022-08-02 | Hamamatsu Photonics K.K. | Amyloid β oligomer detection method, amyloid β oligomer detection device, and amyloid β oligomer detection program |
JP2018537081A (ja) * | 2015-10-30 | 2018-12-20 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | D因子活性及びd因子阻害剤の力価を測定する方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU2007278422A1 (en) | 2008-01-31 |
JP5009987B2 (ja) | 2012-08-29 |
WO2008012101A1 (en) | 2008-01-31 |
US20100129847A1 (en) | 2010-05-27 |
DE602006005806D1 (de) | 2009-04-30 |
ATE426174T1 (de) | 2009-04-15 |
EP1882944A1 (en) | 2008-01-30 |
CA2693212A1 (en) | 2008-01-31 |
ES2323725T3 (es) | 2009-07-23 |
EP1882944B1 (en) | 2009-03-18 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5009987B2 (ja) | 体液中のアミロイド−βオリゴマーの検出方法 | |
Wang-Dietrich et al. | The amyloid-β oligomer count in cerebrospinal fluid is a biomarker for Alzheimer's disease | |
Kulenkampff et al. | Quantifying misfolded protein oligomers as drug targets and biomarkers in Alzheimer and Parkinson diseases | |
JP7104943B2 (ja) | ミスフォールディングタンパク質の検出 | |
Walker et al. | Changes in properties of serine 129 phosphorylated α-synuclein with progression of Lewy-type histopathology in human brains | |
CN104777308B (zh) | 先兆子痫检测和治疗的方法和组合物 | |
Wilhelm et al. | Immune reactivity towards insulin, its amyloid and protein S100B in blood sera of Parkinson's disease patients | |
RU2642314C2 (ru) | Способы избирательной количественной оценки агрегатов а-бета | |
Santos et al. | Detection of amyloid-β oligomers in human cerebrospinal fluid by flow cytometry and fluorescence resonance energy transfer | |
US11175288B2 (en) | Method for detecting indicators for determining diseases | |
EP1769002A1 (en) | Monolocal antibodies that target pathological assemblies of amyloid beta; (abeta) | |
Klaver et al. | Specificity and sensitivity of the Abeta oligomer ELISA | |
Mittag et al. | Simultaneous measurement of a range of particle sizes during Aβ1–42 fibrillogenesis quantified using fluorescence correlation spectroscopy | |
KR20140069346A (ko) | 알츠하이머병 (ad)을 진단하는 방법 | |
US20020006627A1 (en) | Method for diagnosis of Alzheimer's disease | |
Funke et al. | Detection of amyloid-β aggregates in body fluids: a suitable method for early diagnosis of Alzheimer's disease? | |
US20200309796A1 (en) | Assay, method and treatment of alpha-synucleinopathies | |
Rajbanshi et al. | Localization, induction, and cellular effects of tau phosphorylated at threonine 217 1 | |
Kim et al. | Simple and specific detection of abnormal prion protein by a magnetic bead-based immunoassay coupled with laser-induced fluorescence spectrofluorometry | |
US20190293662A1 (en) | Gfap derivatives for stroke diagnostics | |
CA2656417C (en) | Process for the selective determination of pathological protein deposits | |
US20230228771A1 (en) | Determination of disease-specific protein aggregates in stool samples | |
Rajbanshi et al. | Localization, induction, and cellular effects of tau-phospho-threonine 217 | |
WO2008148489A1 (en) | Neurochondrin-1 as biomarker for alzheimer's disease | |
Riedel | A novel highly-sensitive assay for the analysis of cerebrospinal fluid and blood Visinin-like protein 1 in Alzheimer’s and other neurodegenerative diseases |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20100527 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20110824 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20110824 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20111117 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20120507 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20120531 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20150608 Year of fee payment: 3 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |