JP2009538898A

JP2009538898A - 糖尿病の進行を遅らせるためのｇｐｃｒアゴニストの使用

Info

Publication number: JP2009538898A
Application number: JP2009512684A
Authority: JP
Inventors: マシュー・コリン・ソーア・ファイフ; ピーター・ウィドウソン
Original assignee: Prosidion Ltd
Current assignee: Prosidion Ltd
Priority date: 2006-06-01
Filing date: 2007-06-01
Publication date: 2009-11-12
Also published as: EP2029124A1; US20090258816A1; WO2007138362A1; GB0610746D0

Abstract

本発明は、β細胞変性の処置のためのＧタンパク質共役型レセプターアゴニストの使用に関する。

Description

本発明はＧタンパク質共役型レセプター（ＧＰＣＲ）アゴニストの使用に関する。具体的には、本発明は、β細胞変性の処置および前糖尿病状態もしくは２型糖尿病の進行を遅延させるためのＧＰＲ１１９のアゴニストの使用に関する。

肥満は、体格に対して相対的に過剰な脂肪組織量により特徴付けられる。臨床では、体脂肪量はボディ・マス・インデックス（ＢＭＩ；体重（ｋg）／身長（ｍ）²）または腰回りから推定される。ＢＭＩが３０を超える人は肥満とされ、太り過ぎという医学的結果が出される。かなり以前から、体重の増加は、特に腹部の体脂肪の結果として、糖尿病の危険性を増加させるという医学的見解が受け入れられている。

糖尿病は、高血糖状態（血中グルコース濃度の上昇）の存在により特徴付けられる慢性的な代謝性疾患である。２型糖尿病または非インスリン依存性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）の罹患率は高く、憂慮すべき速度で増加している。糖尿病の全世界における疾病負担は、２００５年までに３億ドルに達すると予想され、２型糖尿病を有する患者が９０％を超える。

しばしば耐糖能障害あるいは空腹時血糖異常とも称される前糖尿病状態（Definition and Classification of Diabetes Mellitus and its Complications: Report of a WHO Consultation. Geneva, 1999, WHO/NCD/NCS 99.2を参照）は、血糖値が正常値を超えているが２型糖尿病と診断されるほど高くない状態である。

２型糖尿病における高血糖につながる主な病態生理学的異常は、インスリンの働きが悪いこと（インスリン抵抗性）とインスリンの分泌が悪い（β細胞機能障害）ことである。多尿症（過剰な排尿）、多渇症（過剰な口渇）等の血中グルコース濃度の上昇によって引き起こされる症状を予防するために、そして糖尿病の合併症の危険性を低減するために、高血糖を処置することは、糖尿病の治療として重要である。糖尿病の慢性的な高血糖状態は、眼、腎臓、神経および血管における、重大な、しばしば深刻で長期間の合併症を伴う。２型糖尿病における薬物療法の最も大規模な試験であるUnited Kingdom Prospective Diabetes Study（ＵＫＰＤＳ）［Database 44:1249-1258, 1995］はまた、２型糖尿病において、時間の経過と共にβ細胞機能の容赦ない低下が起こっていることを実証した。β細胞変性は、患者の大部分において、経時的な血糖コントロールの悪化につながり、ひいてはその患者がインスリンの投与に依存するようになることにつながる疾患の進行につれて、ますます治療を追加する必要がある。このβ細胞機能の低下は、通常、前糖尿病状態の間に、その患者が２型糖尿病と診断されるよりもずっと前に始まる。診断時には、患者はβ細胞機能を既に４０％喪失していることもある。しかしながら、この時点で、患者は、血糖降下剤が処方される高血糖と診断されるに過ぎない。

２型糖尿病を処置するための現在入手可能な経口薬は数多く存在する。一般に処方される薬剤は、メトホルミンとスルホニルウレアである。メトホルミンは、肝臓からのグルコース放出を減少させることにより作用し、多くの患者において消化器症状の副作用を伴い、経時的なβ細胞機能の低下に対しては効果がない。スルホニルウレアは、インスリンの分泌を増加させることにより作用し、体重増加と低血糖（低い血中グルコース濃度）の副作用を伴い、メトホルミンと同様、経時的なβ細胞機能の低下に対しては効果がない（ＵＫＰＤＳ参照）。

β細胞変性を処置し、前糖尿病状態または２型糖尿病の進行を遅らせることが可能な薬剤が依然として必要とされている。

ＧＰＲ１１９は、ヒトおよびラットのレセプターを開示するＷＯ００／５０５６２、またマウスレセプターを開示する米国特許第６，４６８，７５６号において、ＳＮＯＲＦ２５として示されるＧＰＣＲである（アクセスナンバー：ＡＡＮ９５１９４（ヒト）、ＡＡＮ９５１９５（ラット）およびＡＡＮ９５１９６（マウス））。ヒトにおいて、ＧＰＲ１１９は、インスリン、インクレチンおよび食品摂取の調節の標的部位である、膵臓、小腸、大腸および脂肪細胞において発現している。ヒトＧＰＲ１１９レセプターの発現プロファイルは、肥満症および糖尿病の処置の標的としての潜在的な有用性を示している。

国際特許出願、ＷＯ２００４／０６５３８０、ＷＯ２００４／０７６４１３、ＷＯ２００５／００７６４７、ＷＯ２００５／００７６５８、ＷＯ２００５／１２１１２１、ＷＯ２００５／０６１４８９、ＷＯ２００６／０６７５３１、ＷＯ２００６／０６７５３２、ＷＯ２００６／０７０２０８、ＷＯ２００６／０８３４９１、ＷＯ２００７／００３９６０、ＷＯ２００７／００３９６１、ＷＯ２００７／００３９６２、ＷＯ２００７／００３９６４およびＷＯ２００７／０３５３５５は、小分子ＧＰＲ１１９アゴニストを開示している。

本発明は、β細胞変性の処置および前糖尿病状態もしくは２型糖尿病の進行を遅らさせるためのＧＰＲ１１９のアゴニストの使用に関する。

本発明は、必要とする患者に有効量のＧＰＲ１１９アゴニストを投与することを含んでなるβ細胞変性の処置のための方法を提供する。

β細胞変性には、β細胞機能の悪化（β細胞機能不全）および／またはアポトーシスまたはネクローシスによるβ細胞の喪失が含まれる。

ＧＰＲ１１９アゴニストは、β細胞機能の悪化を阻害または低減することによりβ細胞変性を処置する。

ＧＰＲ１１９アゴニストは、また、β細胞の数またはサイズを増大させることによりβ細胞変性を処置し得る。β細胞の数および／またはサイズは、膵細胞をランゲルハンス島の機能的に活性な細胞に増殖させることにより、および／または非感受性のまたは傷害を受けた膵細胞をランゲルハンス島の機能的に活性な細胞に転換することにより、増大させることができる。

このように、本発明の更なる態様によれば、必要とする患者に有効量のＧＰＲ１１９アゴニストを投与することを含んでなる、β細胞の数またはサイズを増大させる方法を提供する。

ＧＰＲ１１９アゴニストはβ細胞変性を処置するので、前糖尿病状態から２型糖尿病への進行を遅らせるのに有用であり、また、２型糖尿病が、例えば患者が適切な血糖コントロールを達成するためにインスリンの投与に依存するようになるところまで進行するのを遅らせるのにも有用である。

従って、本発明はまた、必要とする患者に有効量のＧＰＲ１１９アゴニストを投与することを含んでなる、前糖尿病状態から２型糖尿病への進行を遅らせる方法を提供する。

本発明はさらに、必要とする患者に有効量のＧＰＲ１１９アゴニストを投与することを含んでなる、２型糖尿病の進行を遅らせる方法を提供する。

本発明はさらに、上で定義した状態の処置において使用するためのＧＰＲ１１９アゴニストを提供する。

本発明はさらに、上で定義した状態の処置のための医薬の製造におけるＧＰＲ１１９アゴニストの使用を提供する。

本発明の方法において、「処置」なる用語には治療的処置と予防的処置が含まれる。

本発明に従って処置される患者は好ましくはヒトである。

本発明の方法において使用するためのアゴニストとしては、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、酵素、抗体、ならびに非ペプチド、例えば小分子が挙げられる。ＧＰＲ１１９アゴニストは、好ましくは経口で作用する小分子、例えば、好ましくは分子量８００未満、より好ましくは分子量６００未満、特に５００未満の有機小分子である。ＧＰＲ１１９アゴニストは、ＷＯ２００４／０６５３８０、ＷＯ２００４／０７６４１３、ＷＯ２００５／００７６４７、ＷＯ２００５／００７６５８、ＷＯ２００５／１２１１２１、ＷＯ２００５／０６１４８９、ＷＯ２００６／０６７５３１、ＷＯ２００６／０６７５３２、ＷＯ２００６／０７０２０８、ＷＯ２００６／０８３４９１、ＷＯ２００７／００３９６０、ＷＯ２００７／００３９６１、ＷＯ２００７／００３９６２、ＷＯ２００７／００３９６４またはＷＯ２００７／０３５３５５に記載の化合物であってよい。

本発明の方法における使用に関して、ＧＰＲ１１９アゴニストは通常医薬組成物の形態で投与される。

本発明はさらに、製薬的に許容し得る担体および治療上有効量のＧＰＲ１１９アゴニストを含有する、β細胞変性の処置のための医薬組成物を提供する。

医薬組成物は、場合により、その他の治療成分または助剤を含有していてもよい。組成物としては、経口、直腸、局所および非経口投与（皮下、筋肉内および静脈内を含む）が挙げられるが、与えられた症例における最も適当な経路は、その活性成分が投与される具体的な宿主、およびその病状の性質と重篤度に依存する。医薬組成物は便宜上、単位投与形態で提供することができ、調剤技術分野における周知の任意の方法により製造することができる。

実際には、ＧＰＲ１１９アゴニストは、慣用の製薬配合技術にしたがって製薬的な担体と緊密に混和された活性成分として混合される。担体は、投与に所望の調製物の形態（例えば経口または非経口（静脈内を含む））に依存して様々な形態であってよい。

従って、医薬組成物は、カプセル、カシェ、または錠剤等の、各々予め決められた量の活性成分を含有する経口投与に適した個々の単位として提供することができる。さらに、組成物は、粉末、顆粒、溶液、水性の液体中の懸濁液、非水性の液体、水中油エマルジョンまたは油中水液体エマルジョンとして提供することができる。上記の一般的な形態に加え、ＧＰＲ１１９アゴニストは、制御された放出手段および／またはデリバリーデバイスによって投与することもできる。組成物は調剤技術の任意の方法によって調製することができる。一般に、そのような方法としては、活性成分を１またはそれ以上の必要な成分から構成される担体と合する工程が挙げられる。一般に、組成物は、活性成分と、液体の担体または微細な固体の担体またはその両方とを、均一におよび緊密に混和することにより調製される。次いで、生成物を所望の形に成形する。

ＧＰＲ１１９アゴニストは、１またはそれ以上の他の治療的に活性な化合物と組み合わせて医薬組成物に含有させることもできる。

用いられる製薬的な担体は、例えば、固体、液体または気体である。固体の担体としては、ラクトース、白土、スクロース、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アカシア、ステアリン酸マグネシウムおよびステアリン酸が挙げられる。液体の担体としては、シュガーシロップ、ピーナッツオイル、オリーブオイル、および水が挙げられる。気体の担体としては、二酸化炭素および窒素が挙げられる。

経口投与剤型用の組成物の調製においては、任意の慣用の製薬的な媒体を用いることができる。例えば、水、グリコール、油、アルコール、香料、保存料、着色料等を用い、懸濁液、エリキシルおよび溶液等の経口液体調製物を形成することができる。一方、デンプン、糖、微晶性セルロース等の担体、希釈剤、造粒剤、滑沢剤、結合材、崩壊剤等を用い、粉末、カプセルおよび錠剤等の経口の固体調製物を形成することができる。投与が容易であることから、錠剤およびカプセル剤は、それにより固体の製薬的担体が用いられる好ましい経口投与単位である。場合により、錠剤に標準的な水性または非水性の技術によるコーティングを施してよい。

本発明の組成物を含有する錠剤は、場合により１またはそれ以上の副成分または助剤とともに圧縮または成形することにより調製することができる。圧縮錠剤は、適当な機械にて、場合により結合剤、滑沢剤、不活性な希釈剤、表面活性剤または分散剤と混合した、粉末または顆粒等の自由に流動する形態の活性成分を圧縮することにより製造することができる。成形錠剤は、粉末化された化合物を不活性な液体の希釈剤で湿らせ、適当な機械にて成型することにより製造することができる。各々の錠剤は、好ましくは約０．０５ｍg〜約５ｇの活性成分を含有し、カシェまたはカプセルは、各々、好ましくは約０．０５ｍg〜約５ｇの活性成分を含有する。

例えば、ヒトへの経口投与を企図する製剤は、組成物全体の約５〜約９５％の間で変更できる適切で便利な量の担体物質と組み合わせて、約０．５ｍg〜約５ｇの活性成分を含有することができる。単位投与形態は、一般に約１ｍg〜約２g、典型的には２５ｍg、５０ｍg、１００ｍg、２００ｍg、３００ｍg、４００ｍg、５００ｍg、６００ｍg、８００ｍgまたは１０００ｍgの活性成分を含有する。

非経口投与に適当な本発明の医薬組成物は、水中の活性成分の溶液又は懸濁液として製造することができる。適当な表面活性剤としては、例えば、ヒドロキシプロピルセルロースが挙げられる。また、分散剤は、グリセリン、液体のポリエチレングリコールおよび油中のそれらの混合物中にて調製することができる。さらに、保存料を含有させて有害な微生物の繁殖を防止することができる。

注射用として適当な本発明の医薬組成物としては、滅菌された水溶液または水性分散液が挙げられる。さらに、組成物は、そのような滅菌された水溶液または水性分散液をその場で調製するための滅菌された粉末の形態であってよい。すべての場合において、最終の注射可能な形態は無菌であり、注射を容易にするのに有効な流動性を有していなければならない。医薬組成物は、製造および保存の際に安定でなければならない；従って、好ましくは細菌や真菌等の微生物の汚染を防止すべきである。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（グリセリン、プロピレングリコール、および液体のポリエチレングリコール）、植物油、およびその適当な混合物等の溶媒または分散媒体であってよい。

本発明の医薬組成物は、例えば、エアロゾル、クリーム、軟膏、ローション、散布剤等の局所使用に適当な形態であってよい。さらに、組成物は、経皮デバイスにおける使用に適当な形態であってよい。これらの製剤は、ＧＰＲ１１９アゴニストを用いて、慣用の加工法を介して調製することができる。一例として、クリームまたは軟膏は、親水性の物質と水とを、約５重量％〜約１０重量％の化合物とともに混合し、所望の粘度を有するクリームまたは軟膏とすることによって調製することができる。

本発明の医薬組成物は、担体が固体の直腸投与に適当な形態であってよい。混合物が単位用量の坐剤を形成するのが好ましい。適当な担体としては、ココアバターや他の物質が挙げられる。坐剤は、最初に組成物を軟らかくしたまたは溶融した担体と混合した後、型に入れて冷却し成形することにより、便利に形成することができる。

上記の担体成分に加え、上記の医薬製剤は、適宜、希釈剤、緩衝剤、香料、結合剤、表面活性剤、増粘剤、滑沢剤、保存料（酸化剤を含む）等の１又はそれ以上のさらなる担体成分を含有してもよい。さらに、他の助剤も含有させて、意図する受容者の血液に対する等張性を製剤に与えることができる。また、ＧＰＲ１１９アゴニストを含有する組成物は、粉末または液体の濃縮形態に調製することができる。

一般に、投与量レベルは、一日あたり、０．０１ｍg／ｋg体重のオーダーから約１５０ｍg／ｋg体重、或いは、患者一人あたり１日に約０．５ｍg〜約７gが、上で示された状態の処置に有用である。例えば、肥満症は、１日に体重１ｋｇあたり約０．０１〜５０ｍg、或いは１日に患者一人あたり約０．５ｍg〜約３．５ｇのＧＰＲ１１９アゴニストの投与によって効果的に処置することができる。

但し、特定の患者についての具体的な投与量レベルは、年齢、体重、一般的な健康状態、性別、食事、投与の時間、投与経路、排泄の頻度、薬物の組み合わせおよび治療を受けている具体的な疾患の重篤度を含む様々な要因に依存することは理解される。

ＧＰＲ１１９アゴニストは、肥満症および／または糖尿病の処置のための他の活性な化合物、例えばインスリンおよびインスリンアナログ、胃リパーゼ阻害剤、膵リパーゼ阻害剤、スルホニルウレアおよびアナログ、ビグアニド、例えばメトホルミン、α２アゴニスト、グリタゾン、ＰＰＡＲ−α／γアゴニスト、ＲＸＲアゴニスト、脂肪酸酸化阻害剤、α−グルコシダーゼ阻害剤、グルコキナーゼアクチベーター、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ阻害剤、ＧＬＰ−１アゴニスト、例えばＧＬＰ−１アナログおよび模擬体、β−アゴニスト、ホスホジエステラーゼ阻害剤、脂質低下薬、グリコーゲンホスホリラーゼ阻害剤、抗肥満薬、例えば膵リパーゼ阻害剤、ＭＣＨ−ＩアンタゴニストおよびＣＢ−Ｉアンタゴニスト（または逆作動薬）、アミリンアンタゴニスト、リポキシゲナーゼ阻害剤、ソモスタチンアナログ、グルコキナーゼアクチベーター、グルカゴンアンタゴニスト、インスリンシグナル伝達アゴニスト、ＰＴＰｌＢ阻害剤、糖新生阻害剤、抗脂肪分解剤、ＧＳＫ阻害剤、ガラニンレセプターアゴニスト、食欲抑制剤、ＣＣＫレセプターアゴニスト、レプチン、セロトニン作動性／ドーパミン作動性抗肥満薬、再取り込み阻害剤、例えばシブトラミン、ＣＲＦアンタゴニスト、ＣＲＦ結合タンパク質、甲状腺ホルモン様化合物、アルドースレダクターゼ阻害剤、グルココルチコイドレセプターアンタゴニスト、ＮＨＥ−Ｉ阻害剤またはソルビトール脱水素酵素阻害剤と共に投与することができる。

ＧＰＲ１１９アゴニストおよび他の薬剤は、同時投与（co-administered）してよく、または逐次に（sequentally）もしくは別々に（separately）投与してもよい。

同時投与としては、ＧＰＲ１１９アゴニストおよび他の薬剤の両方を含有する製剤の投与、または各薬剤の異なる製剤の同時のまたは別々の投与が挙げられる。ＧＰＲ１１９アゴニストおよび他の薬剤の薬理学的プロファイルが許容するならば、その２つの薬剤の同時投与（coadministration）が好ましい。

本明細書に引用した、特許および特許出願を含みこれに限定されないすべての刊行物は、個々の刊行物が具体的におよび独立して全体が記載されるとして本明細書の一部を構成する。

本発明はここに、以下の実施例を例示を目的として参考のために記載するが、本発明の限定と解釈されるものではない。

若年ｄｂ／ｄｂマウスの糖尿病予防におけるＧＰＲ１１９アゴニストの効果を示す。

ＧＰＲ１１９アゴニストとしての化合物の活性は、以下のアッセイ系において試験することができる。
１）酵母レセプターアッセイ
酵母細胞ベースのレセプターアッセイについては既に文献に記載されている（例えば、Miret J. J. et al, 2002, J. Biol. Chem., 277:6881-6887; Campbell R. M. et al, 1999, Bioorg. Med. Chem. Lett, 9:2413-2418; King K. et al, 1990, Science, 250:121-123)；ＷＯ９９／１４３４４；ＷＯ００／１２７０４；および米国特許第６,１００,０４２号参照）。簡潔に言えば、酵母細胞を操作して内因性の酵母Ｇ−α（ＧＰＡ１）を除去し、複数の技術を用いて構築されたＧタンパク質キメラで置き換えた。さらに、内因性の酵母α細胞ＧＰＣＲ、Ｓｅｔ３を除去し、選択した哺乳類ＧＰＣＲの相同的発現を可能にした。酵母においては、真核細胞において保存されているフェロモンシグナル伝達経路のエレメント（例えば、マイトジェン活性化タンパクキナーゼ活性）は、Ｆｕｓ１の発現を指揮する。ガラクトシダーゼ（ＬａｃＺ）をＦｕｓ１プロモーター（Ｆｕｓ１ｐ）の制御下に置くことによって、レセプターの活性化が酵素の読み出しにつながるような系を開発した。

酵母細胞を、Agatepら（Agatep, R. et al, 1998, Transformation of Saccharomyces cerevisiae by the lithium acetate/single-stranded carrier DNA/polyethylene glycol (LiAc/ss-DNA/PEG) protocol. Technical Tips Online, Trends Journals, Elsevier）によって記載された酢酸リチウム法を適用することによって形質転換した。簡潔に言えば、酵母細胞を酵母トリプシンプレート（ＹＴ）にて一晩培養した。キャリアー１本鎖ＤＮＡ（１０μg）、２種類のＦｕｓ１ｐ−ＬａｃＺレポータープラスミド各２μg（１つはＵＲＡ分泌マーカーを有し、もう一方はＴＲＰを有する）、酵母発現ベクター（２μg複製起点）中のＧＰＲ１１６（ヒトまたはマウスレセプター）２μg、および酢酸リチウム／ポリエチレングリコール／ＴＥ緩衝液をエッペンドルフチューブにピペットで加えた。レセプターを含む／含まない（対照）酵母発現プラスミドは、ＬＥＵマーカーを有する。酵母細胞をこの混合物中でインキュベーションし、反応を３０℃にて６０分間行った。次いで、酵母細胞を４２℃にて１５分間ヒートショック処理した。次いで、細胞を洗浄し、選択プレートに広げた。選択プレートは、ＳＤ酵母培地（マイナスＬＥＵ、ＵＲＡ、およびＴＲＰ（ＳＤ−ＬＵＴ））である。３０℃にて２〜３日間インキュベーションした後、選択プレート上で増殖したコロニーをＬａｃＺアッセイにおいて試験した。

β−ガラクトシダーゼについて蛍光エンザイムアッセイを行うために、ヒトまたはマウスＧＰＲ１１９レセプターを有する酵母細胞を液体のＳＤ−ＬＵＴ培地中で不飽和の濃度（即ち、細胞がまだ分裂しており定常期に達していない）まで一晩培養した。それらを新鮮な培地で最適な分析濃度まで希釈し、酵母細胞９０μLを９６ウェルの黒いポリスチレンプレート（Costar）に加えた。ＤＭＳＯに溶解し、１０％ＤＭＳＯ溶液で１０倍に希釈した化合物をプレートに加え、プレートを３０℃に４時間静置した。４時間後、β−ガラクトシダーゼの基質を各ウェルに加えた。これらの実験では、フルオレセインを放出する酵素の基質であるフルオレセインジ（β−Ｄ−ガラクトピラノシド）（ＦＤＧ）を用い、蛍光読み出しを可能にした。５００μＭＦＤＧ／２．５％ＴｒｉｔｏｎＸ１００をウェルあたり２０μL加えた（細胞を透過性にするために洗剤が必要であった）。細胞と基質を６０分間インキュベーションした後、１Ｍ炭酸ナトリウムを加えて反応を止め、蛍光シグナルを増強した。次いで、プレートを蛍光光度計にて４８５／５３５ｎｍで読み取った。

ＧＰＲ１１９アゴニストは、一般に、少なくともバックグラウンドシグナル（即ち、化合物なしで１％ＤＭＳＯの存在下で得られたシグナル）の約１．５倍の蛍光シグナルの増大を示す。

２）ｃＡＭＰアッセイ
組換えヒトＧＰＲ１１９を発現する安定な細胞系を確立し、この細胞系をサイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）の細胞内レベルに対する化合物の効果を調べるために用いた。単層細胞をリン酸緩衝生理食塩水で洗浄し、１％ＤＭＳＯを加えた刺激バッファー中の種々の濃度の化合物で３７℃にて３０分間刺激した。次いで、細胞を溶解し、ｃＡＭＰ含量をPerkin Elmer AlphaScreen^TM（Amplified Luminescent Proximity Homogeneous Assay）ｃＡＭＰキットを用いて測定した。バッファーおよびアッセイ条件は、製造元のプロトコルに記載のとおりにした。

ＧＰＲ１１９アゴニストは、一般に、細胞内ｃＡＭＰレベルの濃度依存的な増大を示し、例えば、ＥＣ_５０は＜１０μＭである。

若齢ｄｂ／ｄｂマウスの糖尿病の予防におけるＧＰＲ１１９アゴニストの効果は、以下のとおり実証することができる。
ＧＰＲ１１９アゴニストを前糖尿病状態の６週齢のｄｂ／ｄｂマウスを用いて調べた。マウスを１２時間の明暗周期（７時に点灯）で飼育した。毎日９時にビークル（２５％ａｇ．Gelucire 44/14、p.o.）またはＧＰＲ１１９アゴニスト（１００ｍg／ｋg p.o.(２５％ａｇ．Gelucire 44/14中)）を２１日間投与した。０、７、および２１日目にグルコース（Ｇlｃ）投与（１．５ｇ／ｋg p.o.）による経口グルコース耐性試験（ＯＧＴＴ）を行った。同日、ＯＧＴＴ（１１時）後に化合物を投与した。ＯＧＴＴ中、血液サンプル（２０μL）をＧlｃ投与から２５、５０、８０および１２０分後に採取した。Ｇｌｃレベルの測定用に血液サンプル２０μLを尾から採取し、使い捨てのマイクロピペット（Dade Diagnosis Inc., Puerto Rico）に入れ、サンプルを４８０μLの溶血剤に加えた。次いで、希釈した溶血血液のアリコート２０μL（２本）を、９６ウェルアッセイプレートの１８０μLのトリンダーグルコース試薬（Sigma酵素（Trinder）比色法）に加えた。混合後、サンプルを室温にて３０分間静置し、Ｇｌｃ標準（Sigmaグルコース／尿素窒素混合標準セット）に対して読み取った。Ｇｌｃ投与から３０分後にインスリン試験用に血液サンプルを採取した。２２日目に食後血糖値（Fed blood glucose level）を測定した。血漿５μLを用い、インスリン濃度を使用説明書にしたがって９６ウェルＥＬＩＳＡキット（Crystal Chem. Inc. #INSKR020 ９６アッセイ）を用いて測定した。

血漿グルコースおよびインスリンレベルの結果を、平均±ＳＥＭ（それぞれ、ｍＭおよびｐＭ）で示した。各時点について、ｔ検定と組み合わせた一元配置分散分析からなる統計学的解析を行った。差は、ｐ＜０．０５を有意とした。ＯＧＴＴ試験については、ＡＵＣ（０〜１２０分）を計算し、デルタ値を求めた。

２１日間の処置にわたって、ＧＰＲ１１９アゴニストを投与したマウスは、前糖尿病状態のｄｂ／ｄｂマウスと同等の経口グルコース耐性プロファイルを示したが、ビークルを投与した対照マウスは空腹時血糖値の上昇と一定の耐糖能異常を示した。これらのデータは、ビークルを投与した動物における糖尿病の進行と一致するが、ｄｂ／ｄｂマウスが糖尿病になる境界期間のＧＰＲ１１９アゴニストによる処置によって、糖尿病の状態が阻止または遅延されている（図１）。さらに、２１日間の治療後に、ビークルで処置した糖尿病ｄｂ／ｄｂマウスとの比較で、ＧＰＲ１１９アゴニストで処置したｄｂ／ｄｂマウスがインスリン分泌を有意に増大させる能力によって、ＧＰＲ１１９レセプターの持続的な活性化がグルコース投与に応答して膵β細胞機能を増大することができることが示されており、β細胞機能低下の抑制を示している。

ＺＤＦラットにおける糖尿病の進行に対するＧＰＲ１１９アゴニストの効果は、以下のとおり実証することができる。

ＧＰＲ１１９アゴニストを前糖尿病状態の６週齢のＺＤＦラットにおいて調べた。ラットを１２時間の明暗周期（６時に点灯）で飼育した。毎日８時１５分にビークル（２０％ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、u.i.d.経口）またはＧＰＲ１１９アゴニスト（１０または３０ｍg／ｋg u.i.d.経口 (２０％ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン中))を５６日間投与した。１、２９および５６日目に、ビークルおよびＧＰＲ１１９アゴニストの投与から４５分後に、グルコース（Ｇlｃ）投与（２ｇ／ｋg p.o.）による経口グルコース耐性試験（ＯＧＴＴ）を行った。ＯＧＴＴの間、血液サンプル（２０μL）をＧlｃ投与から０、１５、３０、４５、６０、９０、１２０、１５０および１８０分後に採取した。血糖値の測定用に尾から採取した血液サンプル２０μLを使い捨てのマイクロピペットに入れ、溶血のため１ｍL溶液で満たした標準チューブ（血糖値測定）に、そして血漿インスリンのためにサンプルチューブに入れた。血糖値はグルコースオキシダーゼ法（Super G Glukose Analyser, Dr Muller Geratebau, Freital, Germany）を用い、血漿インスリン濃度は、ＥＬＩＳＡ（Mercodia AB, Uppsala, Sweden）により分析した。

試験の開始時では、ラットは６週齢であり、結果として糖尿病ではなかった。ビークルで処置したＺＤＦラットは、食後血糖値の急激な上昇と、尿中へのグルコース損失を伴う多尿症に伴って起こる多渇症の結果である水摂取量の顕著な増加の両方によって示されるように、間もなくして糖尿病になった。試験して３週間で、ビークルで処置した対照ＺＤＦラットの食後血糖値は２〜３倍に増加した。対照的に、ＧＰＲ１１９アゴニストで処置したラットにおける血糖値の上昇は、より緩やかであり、これらの動物が、ビークル処置した対照のラットと比較して有意により低い食後血糖値を示していることが導かれる。例えば、試験の３〜６週目の期間では、３０ｍg／ｋg／ｄのＧＰＲ１１９アゴニストを投与したラットでは、食後血糖値が、ビークルを投与したラットよりも６〜７ｍＭ低かった。ＧＰＲ１１９アゴニストは、糖尿病の進行と相関するもうひとつのパラメーターである多渇症を低減した。また、ＧＰＲ１１９アゴニストは、ビークルで処置したラットと比較して、Ｈｂ_Alcのより小さい上昇によって示されるように、長時間のグルコース暴露を有意に抑制した。ＯＧＴＴにおいて、ＧＰＲ１１９アゴニストは、８週間の投与期間にわたり強い血糖降下効果を示した。ＧＰＲ１１９アゴニストで処置したラットの糖耐能は、ビークルで処置した動物とは対照的に、反応性グルコースＡＵＣの有意の減少によって示されるように、試験期間中は同程度に維持された。

従って、ＧＰＲ１１９の持続的な活性化により、ＺＤＦラットにおいて糖尿病が発症する期間の疾患の進行を抑えると考えられる。

また、β細胞機能に対するＧＰＲ１１９アゴニストの効果を、Dipeptidyl peptidase IV inhibitor treatment stimulates beta-cells survival and islet cell neogenesis in streptozotocin-induced diabetic rats（Popisilik et al, Diabetes, 52: 741- 750, 2003）に記載されているように、動物モデルにおいても測定することができる。

Claims

必要とする患者に有効量のＧＰＲ１１９アゴニストを投与することを含んでなる、β細胞変性の処置のための方法。
ＧＰＲ１１９アゴニストが、β細胞機能の悪化および／またはアポトーシスまたはネクローシスによるβ細胞の喪失を阻害または減少させることにより、β細胞変性を処置する、請求項１記載の方法。
ＧＰＲ１１９アゴニストがβ細胞の数またはサイズを増大させる、請求項１記載の方法。
ＧＰＲ１１９アゴニストが、膵細胞をランゲルハンス島の機能的に活性な細胞に増殖させることにより、および／または非感受性のまたは傷害を受けた膵細胞をランゲルハンス島の機能的に活性な細胞に転換させる、請求項３記載の方法。
必要とする患者に有効量のＧＰＲ１１９アゴニストを投与することを含んでなる、前糖尿病状態の２型糖尿病への進行を遅らせる方法。
必要とする患者に有効量のＧＰＲ１１９アゴニストを投与することを含んでなる、２型糖尿病の進行を遅らせる方法。
処置される患者がヒトである、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
ＧＰＲ１１９アゴニストが経口で作用する小分子である、請求項１〜７のいずれかに記載の方法。