JP2009537165A5

JP2009537165A5 -

Info

Publication number: JP2009537165A5
Application number: JP2009511529A
Authority: JP
Filing date: 2007-05-24
Publication date: 2010-07-15

Description

有利なことに、前記のＣＴ、ＴＭＤ及び／又はＳＲ又はＳＲ断片をコードするヌクレオチド配列は、好ましくは合成由来である。

また、本発明は前記で定義した遺伝子配列の少なくとも１つを含むベクター、例えば、プラスミド、ウイルス又は細菌のベクターに関する。

図１はグリコシルトランスフェラーゼの膜トポロジー（ｔｏｐｏｌｏｇｙ）を示す。グリコシルトランスフェラーゼは、細胞質Ｎ末端尾部（ＣＴ）、膜貫通（ＴＭＤ）アンカーシグナル、続くステム領域（ＳＲ）及び大きなＣ末端触媒ドメイン（ＣＤ）を含むＩＩ型膜タンパク質である。図２は２０個のヒトのシアリルトランスフェラーゼにおけるシアリルモチーフＬ、Ｓ、及びＶＳのアミノ酸配列。全てのシアリルトランスフェラーゼの共通アミノ酸残基は太字で示される。図３はラットのＳＴ６ＧａｌＩのＣＴ、ＴＭＤ、ＳＲ及びＣＤの分布を図示し、鍵となる残基であるｔｙｒ１２３及び７個の保存されたｃｙｓを示す。ＣＴ：細胞質尾部（９アミノ酸）；ＴＭＤ：膜貫通ドメイン（１７ａａ）；ＳＲ：ステム領域（７０ａａ）；ＣＤ：触媒ドメイン（３０７ａａ）；Ｌ：シアリルモチーフＬ；Ｓ：シアリルモチーフＳ及びＶＳ：シアリルモチーフＶＳ図４はそれぞれの２つの酵素イソ型（ｒＳＴ６ＧａｌＩのＴｙｒ又はＣｙｓ１２３）におけるキメラ調製及び細胞質尾部、膜貫通ドメインの評価のためのＤＮＡ構築物を示す（Fenteany & Colley, 2005）。図５はラット及びヒトＳＴ６ＧａｌＩの配列アラインメントを示す。ＣＴ（１〜９）、ＴＭＤ（１０〜２６）を含むN末端配列は完全に保存されている一方で、膜近傍ペプチド、特にリジン及びシステイン残基は積極的に良く保存されているが、膜近傍のＳＲ部分（２７〜８９）はより変化に富んでいることを指摘することができる。図６は総合的細胞グリコシル化の関連におけるヒト細胞でのシアル酸経路を示す。この連続的工程に関与する酵素は次の通りである：（ａ及びｂ）ＵＤＰ−Ｎ−アセチルグルコサミン／２−エピメラーゼ／Ｎ−アセチルマンノサミンキナーゼ（ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ２−エピメラーゼ／ＭａｎＮＡｃ６−キナーゼ）−反応：（ａ）エピメラーゼ及び（ｂ）キナーゼ、（ｃ）Ｎ−アセチルノイラミン酸ホスフェート合成酵素；（ＮＡＮＳＳＡＳ；Ｎ−アセチルノイラミン酸ホスフェート合成酵素）-反応及びホモ・サピエンスＮ−アセチルノイラミネート・ピルベート・リアーゼ（ＮＰＬ；Ｎ−アセチルノイラミネート・ピルベート・リアーゼ）−反応、（ｄ）ＮｅｕＡｃ９−ホスファターゼ、（ｅ）シチジン５’−モノホスフェートＮ−アセチルノイラミン酸合成酵素、（ＣＭＰ−ＮｅｕＡｃ合成酵素）、（ｆ）シチジンモノホスフェート−シアル酸トランスポータ（ゴルジＣＭＰ−ＮｅｕＡｃトランスポータ）、及び（ｇ）シアリルトランスフェラーゼ。特記すべきは、本略図で示されるシアル酸誘導体、すなわち、“Ｎｅｕ５Ａｃ”は、広く「ヒト型」のシアル酸であると考えられてきた。鶏を除く他の全ての動物では経路において追加のステップ（本略図に示されている）があり、ここではＣＭＰ−Ｎｅｕ５Ａｃは更に水酸化されて、ＣＭＰ−Ｎ−アセチルノイラミン酸水酸化酵素による酵素反応によりＣＭＰ−Ｎｅｕ５Ｇｃに変換される。図７は本発明により創出された種々の合成キメラ構築物の全体像を図示する。図７Ａは、合成キメラの一般的な構築物を示し、これは付加された制限酵素サイトを通じて最小触媒ドメイン（ＣＤ）に融合したＦＬＡＧエピトープで標識されたＮ末端合成ドメインを含む。図７Ｂは、ＢａｍＨＩ制限酵素サイトを使用したN末端合成ドメイン及び触媒ドメインの間のライゲーションを示す。構築物はベクターに、ライゲーション部位とは異なる制限酵素サイト、すなわち、ＡｆｌＩＩ及びＸｂａＩ、を使用してベクターに挿入されたことを特記したい。図８はｐｃＤＮＡ３．１（＋）ベクター（インビトロジェン）の構造と性質を示す。図９はＦＬＡＧ−ｈＳＴ６ＧａｌＩのＣＤ及び他の種々の長さのシアリルトランスフェラーゼのいくつかのＮ末端断片にこのＣＤを融合させたキメラ体の構造を示す。図９ＡはＦＬＡＧ−ＣＤに対応する。図９ＢはｈＳＴ８ＳｉａＩＩ−７９／ＣＤに対応する。図９ＣはｈＳＴ８ＳｉａＩＶ−６７／ＣＤに対応する。図９ＤはｈＳＴ６ＧａｌＮＡｃＩ−２５８／ＣＤに対応する。図９Ｅはｒ／ｈＳＴ３ＧａｌＩＩＩ−４６／ＣＤに対応する。図１０は合成キメラの各構築物に使用されたｈＳＴ６ＧａｌＩの消化した最少触媒ドメイン及びその増幅したＰＣＲ産物を示す。試料は１．５％アガロースゲルの上にスマートラダー（ＳＬ）核酸マーカーとともにロードした。図１０ＡはＣＭＶベクター由来のｈＳＴ６ＧａｌＩの消化した最少触媒ドメインを示し、これは研究室においてクローニングされたものに由来する。図１０Ｂは９６６ｂｐの最小触媒ドメインのＰＣＲ産物を示す。図１０Ｃはゲルに載せた５μＬのｈＳＴ６ＧａｌＩの最少触媒ドメインの濃縮ＰＣＲ産物を示す。図１１は再構成した合成ｈＳＴ３ＧａｌＩＩＩのN末端領域のＤＮＡバンドを示すアガロースゲル（２％）を示す。レーン１は１７４ｂｐのＰＣＲ産物に対応する；レーン２はスマートラダーＳＦに対応する；レーン３は５μＬのサイズ１７４ｂｐの濃縮ＰＣＲ産物に対応する。図１２はｈＳＴ３ＧａｌＩＩＩ／ＣＤの再構築した酵素遺伝子全体を示す。図１２Ａでは、アガロースゲル（１．５％）はＰＣＲで増幅した再構成した合成ｈＳＴ３ＧａｌＩＩＩ／ＣＤのＤＮＡバンドを示す。図１２Ｂはサイズが約１２００ｂｐの５μＬの濃縮ＰＣＲ産物に対応する。図１２Ｃは、ＡｆｌＩＩ及びＸｂａＩの制限酵素による組換えベクターの消化産物を示し、キメラ遺伝子（予想サイズは１２００ｂｐ）の挿入を示している。図１３は再構成し合成ｈＳＴ６ＧａｌＮＡｃＩ−７４のＮ末端領域のＤＮＡバンドを示すアガロースゲル（２％）を示す。レーン１は２７０ｂｐのＰＣＲ産物に対応する；レーン２はスマートラダーＳＦに対応する；レーン３はサイズ２７０ｂｐの５μＬの濃縮ＰＣＲ産物に対応する。図１４はｈＳＴ６ＧａｌＮＡｃＩ−７４／ＣＤの完全に再構築した合成遺伝子を示す。図１４Ａは再構成した合成ｈＳＴ６ＧａｌＮＡｃＩ−７４／ＣＤのＰＣＲで増幅したＤＮＡバンドのアガロースゲル（１．５％）を示す。図１４Ｂはサイズが約１２００ｂｐのキメラの５μＬの濃縮ＰＣＲ産物を示す。図１４Ｃは、ＡｆｌＩＩ及びＸｂａＩの制限酵素による組換えベクターの消化産物を示し、キメラ遺伝子（期待されるサイズは１２２５ｂｐ）の挿入を示している。図１５は再構成した合成ｈＳＴ６ＧａｌＮＡｃＩ−１４０のＮ末端領域のＤＮＡバンドを示すアガロースゲル（１．５％）を示す。レーン１：スマートラダーＳＦ；レーン２：４６８ｂｐのＰＣＲ産物。図１６はｈＳＴ３ＧａｌＩＩＩ−２９／３７−ｈＳＴ６ＧａｌＮＡｃＩ−７４で構成される再構成した合成ハイブリッド遺伝子のＤＮＡバンドを示すアガロースゲル（１．５％）を示す。レーン１はスマートラダーＳＦに対応する；レーン２は２４９ｂｐのＰＣＲ産物に対応する。図１７はＣＤと連結したｈＳＴ３ＧａｌＩＩＩ−２９／３７−ｈＳＴ６ＧａｌＮＡｃＩ−７４で構成される再構成した合成ハイブリッド遺伝子のＤＮＡバンドを示すアガロースゲル（１．５％）を示す。レーン１はスマートラダーＳＦに対応する；レーン２は１１９７ｂｐのＰＣＲ産物に対応する。図１８は６−結合型シアル酸に結合したＦＩＴＣ−ＳＮＡ及び抗ＦＬＡＧｍＡｂによる二重標識及び共焦点顕微鏡法の使用に基づきなされたＣＨＯ細胞におけるｈＳＴ６ＧａｌＩの最少触媒ドメイン（ＣＤ）の発現（パネルＡ）を示す。ＣＤのトランジエントな発現は抗ＦＬＡＧ標識（パネルＢ）で分析し、ＳＮＡ−ＦＩＴＣ結合（パネルＣ）についても分析した。パネルＤはパネルＢ及びＣからのシグナルを重ね合わせた部位を示す（Donadio et al., 2003）。図１９はＣＨＯ細胞における２つのキメラ酵素、ｈＳＴ８ＳｉａＩＶ−６７／ＣＤ、ｈＳＴ８ＳｉａＩＩ−７９／ＣＤの発現を示す。トランスフェクションされた細胞は抗ＦＬＡＧｍＡｂ（Ａ及びＤ）、及びＦＩＴＣ−ＳＮＡ（Ｂ及びＥ）で二重標識した。重ね合わせた像はＣ及びＦに示した。図２０はＣＨＯ細胞におけるＳＴ３ＧａｌＩＩＩ／ＣＤ及びＳＴ３ＧａｌＩＩＩ−ｈＳＴ６ＧａｌＮＡｃＩ−７４／ＣＤの発現を示す。トランスフェクションされた細胞は抗ＦＬＡＧｍＡｂ（Ａ及びＤ）、及びＦＩＴＣ−ＳＮＡ（Ｂ及びＥ）で二重標識した。重ね合わせた像はＣ及びＦに示した。図２１はＣＨＯ細胞におけるｈＳＴ６ＧａｌＮＡｃＩ−７４／ＣＤ及び２５８／ＣＤの発現を示す。トランスフェクションされた細胞は抗ＦＬＡＧｍＡｂ（Ａ及びＤ）、及びＦＩＴＣ−ＳＮＡ（Ｂ及びＥ）で二重標識した。重ね合わせた像はＣ及びＦに示した。図２２は再構成した合成ｈＳＴ３ＧａｌＩＩＩ／ｈＳＴ８ＳｉａＩＩ／ｈＳＴ６ＧａｌＮＡｃＩのＮ末端領域のＤＮＡバンドを示すアガロースゲル（２％）を示す。レーン１は２４０ｂｐのＰＣＲ産物に対応する；レーン２はスマートラダーＳＦに対応する；レーン３は３μＬの２４０ｂｐ濃縮のＰＣＲ産物に対応する。図２３は制限酵素ＸｂａＩ及びＢａｍＨＩによる組換えベクターの消化産物を示し、触媒ドメイン遺伝子（期待されるサイズ９６０ｂｐ）の挿入を示している。試料はＳＬ核酸マーカーとともに１．５％アガロースゲルに載せた。図２４はｈＳＴ３ＧａｌＩＩＩ／ｈＳＴ８ＳｉａＩＩ／ｈＳＴ６ＧａｌＮＡｃＩ／ＣＤの再構築された酵素遺伝子を示す。図２４ａでは、アガロースゲル（１．５％）は制限酵素ＸｂａＩ及びＡｆｌＩＩによる組換えベクターの消化産物を示し、キメラ遺伝子（期待されるサイズ１２００ｂｐ）の挿入を示している。図２４ｂは少量調製試料の増幅後に得られたＰＣＲ産物を示し、キメラ遺伝子の挿入を確認している。図２５はＣＨＯ細胞におけるキメラ酵素ｈＳＴ３ＧａｌＩＩＩ／ｈＳＴ８ＳｉａＩＩ／ｈＳＴ６ＧａｌＮＡｃＩ／ＣＤの発現を示す。トランスフェクションされた細胞は抗ＦＬＡＧｍＡｂ（Ａ）及びＦＩＴＣ−ＳＮＡ（Ｂ）で二重標識した。重ね合わせた像はＣに示す。

Claims

請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法であって、
−第二の核酸に含まれるＣＴ領域をコードするヌクレオチド配列が、
＊配列番号４５のヌクレオチド配列（これは配列番号１の部位１及び２７に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列に対応し、前記の配列番号４５のヌクレオチド配列は配列番号２の部位１〜９に位置するアミノ酸で区切られたｈＳＴ６ＧａｌＩのＣＴ領域に対応する配列番号４６のポリペプチド配列をコードする）、
＊配列番号４７のヌクレオチド配列（これは配列番号３の部位１及び３０に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列に対応し、前記の配列番号４７のヌクレオチド配列は配列番号４の部位１〜１０に位置するアミノ酸で区切られたｈＳＴ６ＧａｌＩＩのＣＴ領域に対応する配列番号４８のポリペプチド配列をコードする）、
＊配列番号４９のヌクレオチド配列（これは配列番号５の部位１及び４２に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列に対応し、前記の配列番号４９のヌクレオチド配列は配列番号６の部位１〜１４に位置するアミノ酸で区切られたｈＳＴ６ＧａｌＮＡｃＩのＣＴ領域に対応する配列番号５０のポリペプチド配列をコードする）、
＊配列番号５１のヌクレオチド配列（これは配列番号７の部位１及び２１に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列に対応し、前記の配列番号５１のヌクレオチド配列は配列番号８の部位１〜７に位置するアミノ酸で区切られたｈＳＴ６ＧａｌＮＡｃＩＩのＣＴ領域に対応する配列番号５２のポリペプチド配列をコードする）、
＊配列番号５３のヌクレオチド配列（これは配列番号９の部位１及び２４に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列に対応し、前記の配列番号５３のヌクレオチド配列は配列番号１０の部位１〜８に位置するアミノ酸で区切られたｈＳＴ６ＧａｌＮＡｃＩＩＩのＣＴ領域に対応する配列番号５４のポリペプチド配列をコードする）、
＊配列番号５５のヌクレオチド配列（これは配列番号１１の部位１及び１８に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列に対応し、前記の配列番号５５のヌクレオチド配列は配列番号１２の部位１〜６に位置するアミノ酸で区切られたｈＳＴ６ＧａｌＮＡｃＩＶのＣＴ領域に対応する配列番号５６のポリペプチド配列をコードする）、
＊配列番号５７のヌクレオチド配列（これは配列番号１３の部位１及び２４に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列に対応し、前記の配列番号５７のヌクレオチド配列は配列番号１４の部位１〜８に位置するアミノ酸で区切られたｈＳＴ６ＧａｌＮＡｃＶのＣＴ領域に対応する配列番号５８のポリペプチド配列をコードする）、
＊配列番号５９のヌクレオチド配列（これは配列番号１５の部位１及び１２９に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列に対応し、前記の配列番号５９のヌクレオチド配列は配列番号１６の部位１〜４３に位置するアミノ酸で区切られたｈＳＴ６ＧａｌＮＡｃＶＩのＣＴ領域に対応する配列番号６０のポリペプチド配列をコードする）、
＊配列番号６１のヌクレオチド配列（これは配列番号１７の部位１及び３９に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列に対応し、前記の配列番号６１のヌクレオチド配列は配列番号１８の部位１〜１３に位置するアミノ酸で区切られたｈＳＴ３ＧａｌＩのＣＴ領域に対応する配列番号６２のポリペプチド配列をコードする）、
＊配列番号６３のヌクレオチド配列（これは配列番号１９の部位１及び１８に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列に対応し、前記の配列番号６３のヌクレオチド配列は配列番号２０の部位１〜６に位置するアミノ酸で区切られたｈＳＴ３ＧａｌＩＩのＣＴ領域に対応する配列番号６４のポリペプチド配列をコードする）、
＊配列番号６５のヌクレオチド配列（これは配列番号２１の部位１及び２４に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列に対応し、前記の配列番号６５のヌクレオチド配列は配列番号２２の部位１〜８に位置するアミノ酸で区切られたｈＳＴ３ＧａｌＩＩＩのＣＴ領域に対応する配列番号６６のポリペプチド配列をコードする）、
＊配列番号６７のヌクレオチド配列（これは配列番号２３の部位１及び２４に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列に対応し、前記の配列番号６７のヌクレオチド配列は配列番号２４の部位１〜８に位置するアミノ酸で区切られたｈＳＴ３ＧａｌＩＶのＣＴ領域に対応する配列番号６８のポリペプチド配列をコードする）、
＊配列番号６９のヌクレオチド配列（これは配列番号２５の部位１及び１５に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列に対応し、前記の配列番号６９のヌクレオチド配列は配列番号２６の部位１〜５に位置するアミノ酸で区切られたｈＳＴ３ＧａｌＶのＣＴ領域に対応する配列番号７０のポリペプチド配列をコードする）、
＊配列番号７１のヌクレオチド配列（これは配列番号２７の部位１及び１２に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列に対応し、前記の配列番号７１のヌクレオチド配列は配列番号２８の部位１〜４に位置するアミノ酸で区切られたｈＳＴ３ＧａｌＶＩのＣＴ領域に対応する配列番号７２のポリペプチド配列をコードする）、
＊配列番号７３のヌクレオチド配列（これは配列番号２９の部位１及び２４に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列に対応し、前記の配列番号７３のヌクレオチド配列は配列番号３０の部位１〜８に位置するアミノ酸で区切られたラットＳＴ３ＧａｌＩＩＩのＣＴ領域に対応する配列番号７４のポリペプチド配列をコードする）、
＊配列番号７５のヌクレオチド配列（これは配列番号３１の部位１及び８７に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列に対応し、前記の配列番号７５のヌクレオチド配列は配列番号３２の部位１〜２９に位置するアミノ酸で区切られたｈＳＴ８ＳｉａＩのＣＴ領域に対応する配列番号７６のポリペプチド配列をコードする）、
＊配列番号７７のヌクレオチド配列（これは配列番号３３の部位１及び１８に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列に対応し、前記の配列番号７７のヌクレオチド配列は配列番号３４の部位１〜６に位置するアミノ酸で区切られたｈＳＴ８ＳｉａＩＩのＣＴ領域に対応する配列番号７８のポリペプチド配列をコードする）、
＊配列番号７９のヌクレオチド配列（これは配列番号３５の部位１及び２７に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列に対応し、前記の配列番号７９のヌクレオチド配列は配列番号３６の部位１〜９に位置するアミノ酸で区切られたｈＳＴ８ＳｉａＩＩＩのＣＴ領域に対応する配列番号８０のポリペプチド配列をコードする）、
＊配列番号８１のヌクレオチド配列（これは配列番号３７の部位１及び２１に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列に対応し、前記の配列番号８１のヌクレオチド配列は配列番号３８の部位１〜７に位置するアミノ酸で区切られたｈＳＴ８ＳｉａＩＶのＣＴ領域に対応する配列番号８２のポリペプチド配列をコードする）、
＊配列番号８３のヌクレオチド配列（これは配列番号３９の部位１及び５１に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列に対応し、前記の配列番号８３のヌクレオチド配列は配列番号４０の部位１〜１７に位置するアミノ酸で区切られたｈＳＴ８ＳｉａＶのＣＴ領域に対応する配列番号８４のポリペプチド配列をコードする）、
＊配列番号８５のヌクレオチド配列（これは配列番号４１の部位１及び９に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列に対応し、前記の配列番号８５のヌクレオチド配列は配列番号４２の部位１〜３に位置するアミノ酸で区切られたｈＳＴ８ＳｉａＶＩのＣＴ領域に対応する配列番号８６のポリペプチド配列をコードする）、
の中から選択され、
−第二の核酸に含まれるＴＭＤ領域をコードするヌクレオチド配列が、
＊配列番号８７のヌクレオチド配列（これは配列番号１の部位２８及び７８に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列に対応し、前記の配列番号８７のヌクレオチド配列は配列番号２の部位１０〜２６に位置するアミノ酸で区切られたｈＳＴ６ＧａｌＩのＴＭＤ領域に対応する配列番号８８のポリペプチド配列をコードする）、
＊配列番号８９のヌクレオチド配列（これは配列番号３の部位３１及び９０に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列に対応し、前記の配列番号８９のヌクレオチド配列は配列番号４の部位１１〜３０に位置するアミノ酸で区切られたｈＳＴ６ＧａｌＩＩのＴＭＤ領域に対応する配列番号９０のポリペプチド配列をコードする）、
＊配列番号９１のヌクレオチド配列（これは配列番号５の部位４３及び１０５に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列に対応し、前記の配列番号９１のヌクレオチド配列は配列番号６の部位１５〜３５に位置するアミノ酸で区切られたｈＳＴ６ＧａｌＮＡｃＩのＴＭＤ領域に対応する配列番号９２のポリペプチド配列をコードする）、
＊配列番号９３のヌクレオチド配列（これは配列番号７の部位２２及び８４に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列に対応し、前記の配列番号９３のヌクレオチド配列は配列番号８の部位８〜２８に位置するアミノ酸で区切られたｈＳＴ６ＧａｌＮＡｃＩＩのＴＭＤ領域に対応する配列番号９４のポリペプチド配列をコードする）、
＊配列番号９５のヌクレオチド配列（これは配列番号９の部位２５及び８４に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列に対応し、前記の配列番号９５のヌクレオチド配列は配列番号１０の部位９〜２８に位置するアミノ酸で区切られたｈＳＴ６ＧａｌＮＡｃＩＩのＴＭＤ領域に対応する配列番号９６のポリペプチド配列をコードする）、
＊配列番号９７のヌクレオチド配列（これは配列番号１１の部位１９及び８１に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列に対応し、前記の配列番号９７のヌクレオチド配列は配列番号１２の部位７〜２７に位置するアミノ酸で区切られたｈＳＴ６ＧａｌＮＡｃＩＶのＴＭＤ領域に対応する配列番号９８のポリペプチド配列をコードする）、
＊配列番号９９のヌクレオチド配列（これは配列番号１３の部位２５及び８７に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列に対応し、前記の配列番号９９のヌクレオチド配列は配列番号１４の部位９〜２９に位置するアミノ酸で区切られたｈＳＴ６ＧａｌＮＡｃＶのＴＭＤ領域に対応する配列番号１００のポリペプチド配列をコードする）、
＊配列番号１０１のヌクレオチド配列（これは配列番号１５の部位１３０及び１１７に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列に対応し、前記の配列番号１０１のヌクレオチド配列は配列番号１６の部位４４〜５９に位置するアミノ酸で区切られたｈＳＴ６ＧａｌＮＡｃＶＩのＴＭＤ領域に対応する配列番号１０２のポリペプチド配列をコードする）、
＊配列番号１０３のヌクレオチド配列（これは配列番号１７の部位４０及び１０２に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列に対応し、前記の配列番号１０３のヌクレオチド配列は配列番号１８の部位１４〜３４に位置するアミノ酸で区切られたｈＳＴ３ＧａｌＩのＴＭＤ領域に対応する配列番号１０４のポリペプチド配列をコードする）、
＊配列番号１０５のヌクレオチド配列（これは配列番号１９の部位１９及び８１に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列に対応し、前記の配列番号１０５のヌクレオチド配列は配列番号２０の部位７〜２７に位置するアミノ酸で区切られたｈＳＴ３ＧａｌＩＩのＴＭＤ領域に対応する配列番号１０６のポリペプチド配列をコードする）、
＊配列番号１０７のヌクレオチド配列（これは配列番号２１の部位２５及び８４に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列に対応し、前記の配列番号１０７のヌクレオチド配列は配列番号２２の部位９〜２８に位置するアミノ酸で区切られたｈＳＴ３ＧａｌＩＩＩのＴＭＤ領域に対応する配列番号１０８のポリペプチド配列をコードする）、
＊配列番号１０９のヌクレオチド配列（これは配列番号２３の部位２５及び７８に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列に対応し、前記の配列番号１０９のヌクレオチド配列は配列番号２４の部位９〜２６に位置するアミノ酸で区切られたｈＳＴ３ＧａｌＩＶのＴＭＤ領域に対応する配列番号１１０のポリペプチド配列をコードする）、
＊配列番号１１１のヌクレオチド配列（これは配列番号２５の部位１６及び７８に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列に対応し、前記の配列番号１１１のヌクレオチド配列は配列番号２６の部位６〜２６に位置するアミノ酸で区切られたｈＳＴ３ＧａｌＶのＴＭＤ領域に対応する配列番号１１２のポリペプチド配列をコードする）、
＊配列番号１１３のヌクレオチド配列（これは配列番号２７の部位１３及び７５に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列に対応し、前記の配列番号１１３のヌクレオチド配列は配列番号２８の部位５〜２５に位置するアミノ酸で区切られたｈＳＴ３ＧａｌＶｌのＴＭＤ領域に対応する配列番号１１４のポリペプチド配列をコードする）、
＊配列番号１１５のヌクレオチド配列（これは配列番号２９の部位２５及び８４に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列に対応し、前記の配列番号１１５のヌクレオチド配列は配列番号３０の部位９〜２８に位置するアミノ酸で区切られたラットＳＴ３ＧａｌＩＩＩのＴＭＤ領域に対応する配列番号１１６のポリペプチド配列をコードする）、
＊配列番号１１７のヌクレオチド配列（これは配列番号３１の部位８８及び１４４に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列に対応し、前記の配列番号１１７のヌクレオチド配列は配列番号３２の部位３０〜４８に位置するアミノ酸で区切られたｈＳＴ８ＳｉａＩのＴＭＤ領域に対応する配列番号１１８のポリペプチド配列をコードする）、
＊配列番号１１９のヌクレオチド配列（これは配列番号３３の部位１９及び６９に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列に対応し、前記の配列番号１１９のヌクレオチド配列は配列番号３４の部位７〜２３に位置するアミノ酸で区切られたｈＳＴ８ＳｉａＩＩのＴＭＤ領域に対応する配列番号１２０のポリペプチド配列をコードする）、
＊配列番号１２１のヌクレオチド配列（これは配列番号３５の部位２８及び９９に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列に対応し、前記の配列番号１２１のヌクレオチド配列は配列番号３６の部位１０〜３３に位置するアミノ酸で区切られたｈＳＴ８ＳｉａＩＩＩのＴＭＤ領域に対応する配列番号１２２のポリペプチド配列をコードする）、
＊配列番号１２３のヌクレオチド配列（これは配列番号３７の部位２２及び６０に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列に対応し、前記の配列番号１２３のヌクレオチド配列は配列番号３８の部位８〜２０に位置するアミノ酸で区切られたｈＳＴ８ＳｉａＩＶのＴＭＤ領域に対応する配列番号１２４のポリペプチド配列をコードする）、
＊配列番号１２５のヌクレオチド配列（これは配列番号３９の部位５２及び１１４に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列に対応し、前記の配列番号１２５のヌクレオチド配列は配列番号４０の部位１８〜３８に位置するアミノ酸で区切られたｈＳＴ８ＳｉａＶのＴＭＤ領域に対応する配列番号１２６のポリペプチド配列をコードする）、
＊配列番号１２７のヌクレオチド配列（これは配列番号４１の部位１０及び７２に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列に対応し、前記の配列番号１２７のヌクレオチド配列は配列番号４２の部位４〜２４に位置するアミノ酸で区切られたｈＳＴ８ＳｉａＶＩのＴＭＤ領域に対応する配列番号１２８のポリペプチド配列をコードする）、
の中から選択され、
−第二の核酸に含まれるＳＲ領域をコードするヌクレオチド配列、又はそれの少なくとも２個のアミノ酸断片をコードするヌクレオチド配列が、
＊配列番号１において、５’末端が部位７９に位置するヌクレオチド及び３’末端が部位２６７〜３２７に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列であり、前記ヌクレオチド配列は、ｈＳＴ６ＧａｌＩのＳＲ領域に対応する、配列番号２においてＮ末端が部位２７に位置するアミノ酸及びＣ末端が部位８９〜１０９に位置するアミノ酸により区切られたポリペプチド配列をコードするヌクレオチド配列、
＊配列番号３において、５’末端が部位９１に位置するヌクレオチド及び３’末端が部位３０６〜３３６に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列であり、前記ヌクレオチド配列は、ｈＳＴ６ＧａｌＩＩのＳＲ領域に対応する、配列番号４においてＮ末端が部位３１に位置するアミノ酸及びＣ末端が部位１０２〜１１２に位置するアミノ酸により区切られたポリペプチド配列をコードするヌクレオチド配列、
＊配列番号５において、５’末端が部位１０６に位置するヌクレオチド及び３’末端が部位８１３〜８７３に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列であり、前記ヌクレオチド配列は、ｈＳＴ６ＧａｌＮＡｃＩのＳＲ領域に対応する、配列番号６においてＮ末端が部位３６に位置するアミノ酸及びＣ末端が部位２７１〜２９１に位置するアミノ酸により区切られたポリペプチド配列をコードするヌクレオチド配列、
＊配列番号７において、５’末端が部位８５に位置するヌクレオチド及び３’末端が部位１７１〜２３１に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列であり、前記ヌクレオチド配列は、ｈＳＴ６ＧａｌＮＡｃＩＩのＳＲ領域に対応る、配列番号８においてＮ末端が部位２９に位置するアミノ酸及びＣ末端が部位５７〜７７に位置するアミノ酸により区切られたポリペプチド配列をコードするヌクレオチド配列、
＊配列番号９において、５’末端が部位８５に位置するヌクレオチド及び３’末端が部位１０２〜１３２に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列であり、前記ヌクレオチド配列は、ｈＳＴ６ＧａｌＮＡｃＩＩＩのＳＲ領域に対応する、配列番号１０においてＮ末端が部位２９に位置するアミノ酸及びＣ末端が部位３４〜４４に位置するアミノ酸により区切られたポリペプチド配列をコードするヌクレオチド配列、
＊配列番号１１において、５’末端が部位８２に位置するヌクレオチド及び３’末端が部位９０〜１２０に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列であり、前記ヌクレオチド配列は、ｈＳＴ６ＧａｌＮＡｃＩＶのＳＲ領域に対応する、配列番号１２においてＮ末端が部位２８に位置するアミノ酸及びＣ末端が部位３０〜４０に位置するアミノ酸により区切られたポリペプチド配列をコードするヌクレオチド配列、
＊配列番号１３において、５’末端が部位８８に位置するヌクレオチド及び３’末端が部位１２０〜１８０に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列であり、前記ヌクレオチド配列は、ｈＳＴ６ＧａｌＮＡｃＶのＳＲ領域に対応する、配列番号１４においてＮ末端が部位３０に位置するアミノ酸及びＣ末端が部位４０〜６０に位置するアミノ酸により区切られたポリペプチド配列をコードするヌクレオチド配列、
＊配列番号１５において、５’末端が部位１７８に位置するヌクレオチド及び３’末端が部位１８３に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列であり、前記ヌクレオチド配列は、ｈＳＴ６ＧａｌＮＡｃＶＩのＳＲ領域に対応しする、配列番号１６においてＮ末端が部位６０に位置するアミノ酸及びＣ末端が部位６１に位置するアミノ酸により区切られたポリペプチド配列をコードするヌクレオチド配列、
＊配列番号１７において、５’末端が部位１０３に位置するヌクレオチド及び３’末端が部位１４４〜２０４に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列であり、前記ヌクレオチド配列は、ｈＳＴ３ＧａｌＩのＳＲ領域に対応する、配列番号１８においてＮ末端が部位３５に位置するアミノ酸及びＣ末端が部位４８〜６８に位置するアミノ酸により区切られたポリペプチド配列をコードするヌクレオチド配列、
＊配列番号１９において、５’末端が部位８２に位置するヌクレオチド及び３’末端が部位１７４〜２３４に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列であり、前記ヌクレオチド配列は、ｈＳＴ３ＧａｌＩＩのＳＲ領域に対応する、配列番号２０においてＮ末端が部位２８に位置するアミノ酸及びＣ末端が部位５８〜７８に位置するアミノ酸により区切られたポリペプチド配列をコードするヌクレオチド配列、
＊配列番号２１において、５’末端が部位８５に位置するヌクレオチド及び３’末端が部位１９８〜２５８に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列であり、前記ヌクレオチド配列は、ｈＳＴ３ＧａｌＩＩＩのＳＲ領域に対応する、配列番号２２においてＮ末端が部位２９に位置するアミノ酸及びＣ末端が部位６６〜８６に位置するアミノ酸により区切られたポリペプチド配列をコードするヌクレオチド配列、
＊配列番号２３において、５’末端が部位７９に位置するヌクレオチド及び３’末端が部位１０８〜１３８に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列であり、前記ヌクレオチド配列は、ｈＳＴ３ＧａｌＩＶのＳＲ領域に対応する、配列番号２４においてＮ末端が部位２７に位置するアミノ酸及びＣ末端が部位３６〜４６に位置するアミノ酸により区切られたポリペプチド配列をコードするヌクレオチド配列、
＊配列番号２５において、５’末端が部位７９に位置するヌクレオチド及び３’末端が部位１３５〜１９５に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列であり、前記ヌクレオチド配列は、ｈＳＴ３ＧａｌＶのＳＲ領域に対応する、配列番号２６においてＮ末端が部位２７に位置するアミノ酸及びＣ末端が部位４５〜６５に位置するアミノ酸により区切られたポリペプチド配列をコードするヌクレオチド配列、
＊配列番号２７において、５’末端が部位７６に位置するヌクレオチド及び３’末端が部位１０２〜１３２に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列であり、前記ヌクレオチド配列は、ｈＳＴ３ＧａｌＶＩのＳＲ領域に対応する、配列番号２８においてＮ末端が部位２６に位置するアミノ酸及びＣ末端が部位３４〜４４に位置するアミノ酸により区切られたポリペプチド配列をコードするヌクレオチド配列、
＊配列番号２９において、５’末端が部位８５に位置するヌクレオチド及び３’末端が部位１０５〜１６５に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列であり、前記ヌクレオチド配列は、ラットＳＴ３ＧａｌＩＩＩのＳＲ領域に対応する、配列番号３０においてＮ末端が部位２９に位置するアミノ酸及びＣ末端が部位３５〜５５に位置するアミノ酸により区切られたポリペプチド配列をコードするヌクレオチド配列、
＊配列番号３１において、５’末端が部位１４５に位置するヌクレオチド及び３’末端が部位１６２〜１９２に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列であり、前記ヌクレオチド配列は、ｈＳＴ８ＳｉａＩのＳＲ領域に対応する、配列番号３２においてＮ末端が部位４９に位置するアミノ酸及びＣ末端が部位５４〜６４に位置するアミノ酸により区切られたポリペプチド配列をコードするヌクレオチド配列、
＊配列番号３３において、５’末端が部位７０に位置するヌクレオチド及び３’末端が部位１８９〜２４９に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列であり、前記ヌクレオチド配列は、ｈＳＴ８ＳｉａＩＩのＳＲ領域に対応する、配列番号３４においてＮ末端が部位２４に位置するアミノ酸及びＣ末端が部位６３〜８３に位置するアミノ酸により区切られたポリペプチド配列をコードするヌクレオチド配列、
＊配列番号３５において、５’末端が部位１００に位置するヌクレオチド及び３’末端が部位２０４〜２６４に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列であり、前記ヌクレオチド配列は、ｈＳＴ８ＳｉａＩＩＩのＳＲ領域に対応する、配列番号３６において、Ｎ末端が部位３４に位置するアミノ酸及びＣ末端が部位６８〜８８に位置するアミノ酸により区切られたポリペプチド配列をコードするヌクレオチド配列、
＊配列番号３７において、５’末端が部位６１に位置するヌクレオチド及び３’末端が部位１４４〜２０４に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列であり、前記ヌクレオチド配列は、ｈＳＴ８ＳｉａＩＶのＳＲ領域に対応する、配列番号３８においてＮ末端が部位２１に位置するアミノ酸及びＣ末端が部位４８〜６８に位置するアミノ酸により区切られたポリペプチド配列をコードするヌクレオチド配列、
＊配列番号３９において、５’末端が部位１１５に位置するヌクレオチド及び３’末端が部位２１０〜２７０に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列であり、前記ヌクレオチド配列は、ｈＳＴ８ＳｉａＶのＳＲ領域に対応する、配列番号４０においてＮ末端が部位３９に位置するアミノ酸及びＣ末端が部位７０〜９０に位置するアミノ酸により区切られたポリペプチド配列をコードするヌクレオチド配列、
＊配列番号４１において、５’末端が部位７３に位置するヌクレオチド及び３’末端が部位２７６〜３３６に位置するヌクレオチドで区切られたヌクレオチド配列であり、前記ヌクレオチド配列は、ｈＳＴ８ＳｉａＶＩのＳＲ領域に対応する、配列番号４２においてＮ末端が部位２５に位置するアミノ酸及びＣ末端が部位９２〜１１２に位置するアミノ酸により区切られたポリペプチド配列をコードするヌクレオチド配列、
＊又は、前記ＳＲ領域に対応するポリペプチド配列をコードするヌクレオチド配列の、少なくとも６個のヌクレオチドの任意の断片であって、前記ＳＲ領域の少なくとも２個の連続するアミノ酸をコードするヌクレオチド配列、例えば：
＊＊配列番号５の部位１０６〜２２２に位置するヌクレオチドで区切られた配列番号１２９の断片であって、それは配列番号６の部位３６〜７４に位置するアミノ酸により区切られたｈＳＴ６ＧａｌＮＡｃＩのＳＲ領域の断片に対応する配列番号１３０のポリペプチド配列をコードする断片、
＊＊配列番号５の部位１０９〜２２２に位置するヌクレオチドで区切られた配列番号１３１の断片であって、それは配列番号６の部位３７〜７４に位置するアミノ酸により区切られたｈＳＴ６ＧａｌＮＡｃＩのＳＲ領域の断片に対応する配列番号１３２のポリペプチド配列をコードする断片、
＊＊配列番号５の部位１０６〜４２０に位置するヌクレオチドで区切られた配列番号１３３の断片であって、それは配列番号６の部位３６〜１４０に位置するアミノ酸により区切られたｈＳＴ６ＧａｌＮＡｃＩのＳＲ領域の断片に対応する配列番号１３４のポリペプチド配列をコードする断片、
＊＊配列番号５の部位１０６〜７７４に位置するヌクレオチドで区切られた配列番号１３５の断片であって、それは配列番号６の部位３６〜２５８に位置するアミノ酸により区切られたｈＳＴ６ＧａｌＮＡｃＩのＳＲ領域の断片に対応する配列番号１３６のポリペプチド配列をコードする断片、
＊＊配列番号２１の部位８５〜１３８に位置するヌクレオチドで区切られた配列番号１３７の断片であって、それは配列番号２２の部位２９〜４６に位置するアミノ酸により区切られたｈＳＴ３ＧａｌＩＩＩのＳＲ領域の断片に対応する配列番号１３８のポリペプチド配列をコードする断片、
＊＊配列番号２９の部位８５〜１３８に位置するヌクレオチドで区切られた配列番号１３９の断片であって、それは配列番号３０の部位２９〜４６に位置するアミノ酸により区切られたｒＳＴ３ＧａｌＩＩＩのＳＲ領域の断片に対応する配列番号１４０のポリペプチド配列をコードする断片、
＊＊配列番号３３の部位７０〜２３７に位置するヌクレオチドで区切られた配列番号１４１の断片であって、それは配列番号３４の部位２４〜７９に位置するアミノ酸により区切られたｈＳＴ８ＳｉａＩＩのＳＲ領域の断片に対応する配列番号１４２のポリペプチド配列をコードする断片、
＊＊配列番号３７の部位６１〜２０１に位置するヌクレオチドで区切られた配列番号１４３の断片であって、それは配列番号３８の部位２１〜６７に位置するアミノ酸により区切られたｈＳＴ８ＳｉａＩＶのＳＲ領域の断片に対応する配列番号１４４のポリペプチド配列をコードする断片、
で構成されるか、又は含む配列の中から選択されることを特徴とする、前記方法。