JP2009526049A5

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Publication number: JP2009526049A5
Application number: JP2008554254A
Authority: JP
Filing date: 2007-01-25
Publication date: 2010-02-25

Claims

(ａ)安定小胞形成体であるリン脂質；及び
(ｂ)少なくとも１つの不安定小胞形成部材
を含んでなり、該不安定小胞形成部材が安定小胞形成体でない極性脂質、PEG、ラフト形
成体及び融合タンパク質からなる群より選択される、小胞。
前記安定小胞形成体であるリン脂質又は前記安定小胞形成体でない極性脂質が式(Ｉ)の構造：
Ｘ-Ｌ-(Ｚ)₂ (Ｉ)
［式中、ＸはＨ、Ａであるか又は式(II)の構造：

を有し、
Ｂはカチオン又はアルキル基であり；
ＡはＨ又はアルキル基であり；
Ｌは更に２つの水素を欠いているアルキル基であり；
各Ｚは独立してＨ、Ｅ又は式(XI)の構造

であり、Ｅはアルキル又はアルケニルであり、一方のＺがＨであるとき、他方のＺはＨではない］
を有する、請求項１に記載の小胞。
ＡがＨであるか、又は式(III)、(IV)、(Ｖ)、(VI)及び(VII)

［式中、ｎは０〜４の整数である］
からなる群より選択される構造を有し；
Ｌは式(VIII)、(IX)又は(Ｘ)

からなる群より選択される構造を有し；
Ｅは、イソ-分枝鎖脂肪酸、アンテイソ-分枝鎖脂肪酸、15-メチル脂肪酸、トランス-不飽和若しくはシス-不飽和脂肪酸、a-ヒドロキシル脂肪酸、b-ヒドロキシル脂肪酸、a-ヒ
ドロキシル-b-メチル脂肪酸、a,b-ジヒドロキシル脂肪酸、シクロヘキシル脂肪酸、(Z,Z)-不飽和脂肪酸、a-ヒドロキシル-(bE)-エン及び2-ヘキシルシクロプロパンデカン酸からなる群より選択される細菌性脂肪酸であるか、又はＥは(XII)、(XIII)、(XIV)、(XV)、(XVI)、(XVII)、(XVIII)、(XIX)、(XX)、(XXI)及び(XXII)

からなる群より選択される構造を有する、請求項２に記載の小胞。
前記安定小胞形成体であるリン脂質がホスファチジルコリンである、請求項１に記載の小胞。
前記ホスファチジルコリンが、ダイズホスファチジルコリン、卵ホスファチジルコリン、イー．コリ抽出物ホスファチジルコリン、1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン(DOPC)、1-パルミトイル-2-ドコサヘキサエノイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン(PDPC)、ジミリストイルホスファチジルコリン(DMPC)、ジパルミトイルホスファチジルコリン(DPPC)、ジステアロイルホスファチジルコリン(DSPC)又はこれらの混合物である、請求項４に記載の小胞。
前記不安定小胞形成部材が式(XXIV)、(XXV)、(XXVI)、(XXVII)、(XXIX)、(XXXI)、(XXXII)、(XXXIII)及び(XXXIV)：

からなる群より選択される構造を有する不安定小胞形成極性脂質である、請求項１に記載の小胞。
前記不安定小胞形成部材が約20〜約8000繰返し単位の重量を有するPEGである請求項１
に記載の小胞。
前記PEGが約3000〜約4000繰返し単位の重量を有する、請求項７に記載の小胞。
前記PEGが約3350繰返し単位の重量を有する、請求項８に記載の小胞。
前記不安定小胞形成部材がコレステロール及びスフィンゴミエリンからなる群より選択されるラフト形成体である、請求項１に記載の小胞。
前記不安定小胞形成部材がフェルチリン、可溶性N-エチルマレイミド感受性因子付着タンパク質レセプター(SNARE)、sec1/munc18(SM)ポリペプチド、ウイルスエンベロープ融合タンパク質及びアネキシンからなる群より選択される融合タンパク質である、請求項１に記載の小胞。
前記小胞が生体分子を更に含んでなる、請求項１に記載の小胞。
前記生体分子が脂溶性生体分子である、請求項１２に記載の小胞。
前記脂溶性生体分子がα-トコフェロール(ビタミンＥ)、レチノール(ビタミンＡ)、フ
ィロキノン(ビタミンＫ)、エルゴカルシフェロール(ビタミンＤ)、コレステロール、コレステロールエステル、ステロイド、ホパノイド、界面活性剤、脂肪酸、細菌性分枝鎖脂肪酸、イソプレノイド、長鎖アルコール、脂溶性麻酔剤、ガングリオシド、リポ多糖、ビオチン標識リン脂質、膜イオンコンダクタンスチャンネル、輸送タンパク質、グルコース輸送体、粘着タンパク質、ギャップ結合タンパク質、シナプス接合タンパク質、カスパーゼ、接着タンパク質、Ｇタンパク質、MHCタンパク質、補体タンパク質、脂溶性ウイルスタンパク質、細胞レセプター、脂溶性蛍光プローブ分子及び脂溶性放射性トレーサ分子からなる群より選択される、請求項１３に記載の小胞。
前記生体分子が水溶性生体分子である、請求項１２に記載の小胞。
前記水溶性生体分子がアミノ酸、ポリペプチド、タンパク質、単糖類、二糖類、多糖類
、ヌクレオチド、ポリヌクレオチド、水溶性ビタミン、ミネラル、高エネルギーホスフェート、解糖中間体、酸化中間体、ニコチンアデニンジヌクレオチド(NAD+/NADH)、フラビンアデニンジヌクレオチド(FAD+/FADH2)、水溶性細胞酵素、インスリン、水溶性蛍光プローブ分子、水溶性放射性トレーサ分子及び水溶性薬物からなる群より選択される、請求項１５に記載の小胞。
前記高エネルギーホスフェートがATP、ADP、AMP、アデノシン、CTP、CDP、CMP、シトシン、UTP、UDP、UMP、ウラシル、GTP、GDP、GMP、グアノシン、TTP、TDP、TMP、チミン、ITP、IDP、IMP、イノシン及びホスホクレアチンからなる群より選択される、請求項１６に記載の小胞。
前記高エネルギーホスフェート生体分子がATPである、請求項１７に記載の小胞。
前記ATPがMg-ATPである、請求項１８に記載の小胞。
前記ATPが約１Ｍ又はそれ未満の濃度で存在する、請求項１８に記載の小胞。
前記ATPが約0.001mM〜約200mMの濃度で存在する、請求項２０に記載の小胞。
前記ATPが約１mM〜約50mMの濃度で存在する、請求項２１に記載の小胞。
前記小胞が少なくとも１小胞吸収/秒/細胞の吸収速度を有する、請求項１に記載の小胞。
前記小胞が少なくとも10³小胞吸収/秒/細胞の吸収速度を有する、請求項２３に記載の
小胞。
前記小胞が少なくとも10⁶小胞吸収/秒/細胞の吸収速度を有する、請求項２４に記載の
小胞。
前記小胞が１：９〜100,000：１の前記安定小胞形成部材対前記不安定小胞形成部材
の比を有する、請求項１に記載の小胞。
前記小胞が１：１〜1,000：１の前記安定小胞形成部材対前記不安定小胞形成部材の
比を有する、請求項２６に記載の小胞。
前記小胞が単一ラメラ小胞である、請求項１に記載の小胞。
前記小胞が約20nm〜約600nmの水力学的半径を有する、請求項１に記載の小胞。
前記小胞が約100nm〜約300nmの水力学的半径を有する、請求項２９に記載の小胞。
生体分子；
ダイズホスファチジルコリン；及び
DOTAP
を含んでなる小胞。
前記生体分子がATPである、請求項３１に記載の小胞。
前記ATPが約0.01mM〜約200mMの濃度で存在する、請求項３２に記載の小胞。
前記小胞が50：１のダイズホスファチジルコリン対 DOTAPの比を有する、請求項３１
に記載の小胞。
前記小胞が約100nm〜約300nmの水力学的半径を有する、請求項３１に記載の小胞。
生体分子；
DOPC；及び
DOTAP
を含んでなる小胞。
前記生体分子がATPである、請求項３６に記載の小胞。
前記ATPが約0.01mM〜約200mMの濃度で存在する、請求項３７に記載の小胞。
前記小胞が50：１のDOPC 対 DOTAPの比を有する、請求項３６に記載の小胞。
前記小胞が約100nm〜約300nmの水力学的半径を有する、請求項３６に記載の小胞。
細胞を請求項１２に記載の小胞と接触させることを含んでなる、生体分子を細胞に送達する方法。
前記生体分子がATPである、請求項４１に記載の方法。
前記細胞に送達するATPの量が該細胞の代謝要求を満たすに十分である、請求項４２に
記載の方法。
組織を請求項１２に記載の小胞と接触させることを含んでなる、組織を保存する方法。
細胞を請求項１２に記載の小胞と接触させることを含んでなる、少なくとも１つの細胞を有するバイオリアクターの生産性を向上させる方法。