JP2009523818A - 虚血性疾患からの保護方法 - Google Patents
虚血性疾患からの保護方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2009523818A JP2009523818A JP2008551445A JP2008551445A JP2009523818A JP 2009523818 A JP2009523818 A JP 2009523818A JP 2008551445 A JP2008551445 A JP 2008551445A JP 2008551445 A JP2008551445 A JP 2008551445A JP 2009523818 A JP2009523818 A JP 2009523818A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- tpo
- ischemia
- ligand
- heart
- receptor ligand
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 49
- 230000004224 protection Effects 0.000 title description 7
- 208000023589 ischemic disease Diseases 0.000 title 1
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 claims abstract description 85
- 108010041111 Thrombopoietin Proteins 0.000 claims abstract description 22
- 102000036693 Thrombopoietin Human genes 0.000 claims abstract description 21
- 101100172469 Escherichia coli (strain K12) envZ gene Proteins 0.000 claims description 252
- 101150077103 TPO gene Proteins 0.000 claims description 252
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 94
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 94
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 93
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 29
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 claims description 26
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims description 25
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 17
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 16
- 230000036765 blood level Effects 0.000 claims description 10
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 10
- 230000002411 adverse Effects 0.000 claims description 5
- 239000000829 suppository Substances 0.000 claims description 4
- 102000005763 Thrombopoietin Receptors Human genes 0.000 claims description 3
- 108010070774 Thrombopoietin Receptors Proteins 0.000 claims description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 claims description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 claims description 2
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 claims description 2
- 101000799461 Homo sapiens Thrombopoietin Proteins 0.000 claims 2
- 239000012636 effector Substances 0.000 claims 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 claims 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 claims 1
- 208000031225 myocardial ischemia Diseases 0.000 abstract description 38
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 abstract description 21
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 5
- 208000013875 Heart injury Diseases 0.000 abstract description 2
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 abstract 1
- 230000010410 reperfusion Effects 0.000 description 50
- 206010061216 Infarction Diseases 0.000 description 32
- 230000007574 infarction Effects 0.000 description 32
- 230000005961 cardioprotection Effects 0.000 description 30
- 230000003293 cardioprotective effect Effects 0.000 description 28
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 23
- 210000004351 coronary vessel Anatomy 0.000 description 22
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 22
- 108091006146 Channels Proteins 0.000 description 20
- 230000002861 ventricular Effects 0.000 description 20
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 19
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 19
- 208000037906 ischaemic injury Diseases 0.000 description 19
- FCTRVTQZOUKUIV-MCDZGGTQSA-M potassium;[[[(2r,3s,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-hydroxyphosphoryl] hydrogen phosphate Chemical compound [K+].C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)([O-])=O)[C@@H](O)[C@H]1O FCTRVTQZOUKUIV-MCDZGGTQSA-M 0.000 description 17
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 17
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 16
- 230000035487 diastolic blood pressure Effects 0.000 description 15
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 14
- 102000004257 Potassium Channel Human genes 0.000 description 13
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 13
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 13
- 108020001213 potassium channel Proteins 0.000 description 13
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 12
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 11
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 11
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 10
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 10
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 9
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 9
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 9
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 9
- 239000004792 Prolene Substances 0.000 description 8
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 8
- 230000004872 arterial blood pressure Effects 0.000 description 8
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 8
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 8
- 229960004580 glibenclamide Drugs 0.000 description 7
- ZNNLBTZKUZBEKO-UHFFFAOYSA-N glyburide Chemical compound COC1=CC=C(Cl)C=C1C(=O)NCCC1=CC=C(S(=O)(=O)NC(=O)NC2CCCCC2)C=C1 ZNNLBTZKUZBEKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000005534 hematocrit Methods 0.000 description 7
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 206010063837 Reperfusion injury Diseases 0.000 description 6
- 238000007675 cardiac surgery Methods 0.000 description 6
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 6
- 230000006870 function Effects 0.000 description 6
- 210000003593 megakaryocyte Anatomy 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 230000004044 response Effects 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- PKDBCJSWQUOKDO-UHFFFAOYSA-M 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC=CC=C1C(N=[N+]1C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 PKDBCJSWQUOKDO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- -1 carboxymethyl lysyl Chemical group 0.000 description 5
- 230000034994 death Effects 0.000 description 5
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 5
- 230000036541 health Effects 0.000 description 5
- 208000012947 ischemia reperfusion injury Diseases 0.000 description 5
- 239000003450 potassium channel blocker Substances 0.000 description 5
- 238000013222 sprague-dawley male rat Methods 0.000 description 5
- 238000012453 sprague-dawley rat model Methods 0.000 description 5
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 5
- 229940126638 Akt inhibitor Drugs 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 description 4
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 description 4
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 4
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 4
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002399 angioplasty Methods 0.000 description 4
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 4
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 4
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 4
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 description 4
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 4
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 229960001412 pentobarbital Drugs 0.000 description 4
- WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N pentobarbital Chemical compound CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 4
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 4
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 4
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 4
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 4
- 229940125422 potassium channel blocker Drugs 0.000 description 4
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 4
- 239000003197 protein kinase B inhibitor Substances 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QDLHCMPXEPAAMD-UHFFFAOYSA-N wortmannin Natural products COCC1OC(=O)C2=COC(C3=O)=C2C1(C)C1=C3C2CCC(=O)C2(C)CC1OC(C)=O QDLHCMPXEPAAMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010007559 Cardiac failure congestive Diseases 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101100519558 Rattus norvegicus Tpo gene Proteins 0.000 description 3
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 3
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 3
- 206010000891 acute myocardial infarction Diseases 0.000 description 3
- 206010003119 arrhythmia Diseases 0.000 description 3
- 230000006793 arrhythmia Effects 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 3
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 3
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 3
- 210000004413 cardiac myocyte Anatomy 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 3
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 3
- 210000001087 myotubule Anatomy 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 108010002543 polyethylene glycol-recombinant human megakaryocyte growth and development factor Proteins 0.000 description 3
- 206010043554 thrombocytopenia Diseases 0.000 description 3
- QDLHCMPXEPAAMD-QAIWCSMKSA-N wortmannin Chemical compound C1([C@]2(C)C3=C(C4=O)OC=C3C(=O)O[C@@H]2COC)=C4[C@@H]2CCC(=O)[C@@]2(C)C[C@H]1OC(C)=O QDLHCMPXEPAAMD-QAIWCSMKSA-N 0.000 description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 206010049418 Sudden Cardiac Death Diseases 0.000 description 2
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 2
- 230000004087 circulation Effects 0.000 description 2
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 2
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 230000000004 hemodynamic effect Effects 0.000 description 2
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 2
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 2
- 238000002357 laparoscopic surgery Methods 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 2
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 2
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 2
- 230000001292 preischemic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 2
- 230000037317 transdermal delivery Effects 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- SVOQIEJWJCQGDQ-UHFFFAOYSA-N 3-[3-[[2-(3,4-dimethylphenyl)-5-methyl-3-oxo-1H-pyrazol-4-yl]diazenyl]-2-hydroxyphenyl]benzoic acid Chemical compound CC1=C(C=C(C=C1)N2C(=O)C(=C(N2)C)N=NC3=CC=CC(=C3O)C4=CC(=CC=C4)C(=O)O)C SVOQIEJWJCQGDQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010001052 Acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 206010002383 Angina Pectoris Diseases 0.000 description 1
- 206010002388 Angina unstable Diseases 0.000 description 1
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000006545 Chronic Obstructive Pulmonary Disease Diseases 0.000 description 1
- 208000010833 Chronic myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 206010010904 Convulsion Diseases 0.000 description 1
- 206010014561 Emphysema Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 208000000435 Heart Rupture Diseases 0.000 description 1
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 1
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 206010048858 Ischaemic cardiomyopathy Diseases 0.000 description 1
- 208000032382 Ischaemic stroke Diseases 0.000 description 1
- 208000033761 Myelogenous Chronic BCR-ABL Positive Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 201000001068 Prinzmetal angina Diseases 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 208000006193 Pulmonary infarction Diseases 0.000 description 1
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 1
- 208000013616 Respiratory Distress Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000012288 TUNEL assay Methods 0.000 description 1
- 102100034195 Thrombopoietin Human genes 0.000 description 1
- 208000007814 Unstable Angina Diseases 0.000 description 1
- 208000009325 Variant Angina Pectoris Diseases 0.000 description 1
- 206010053648 Vascular occlusion Diseases 0.000 description 1
- 238000002679 ablation Methods 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 231100000569 acute exposure Toxicity 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 208000011341 adult acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- 201000000028 adult respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000002424 anti-apoptotic effect Effects 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 208000029028 brain injury Diseases 0.000 description 1
- 238000011685 brown norway rat Methods 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 230000009460 calcium influx Effects 0.000 description 1
- 190000008236 carboplatin Chemical compound 0.000 description 1
- 229960004562 carboplatin Drugs 0.000 description 1
- 230000002612 cardiopulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 206010008118 cerebral infarction Diseases 0.000 description 1
- 208000026106 cerebrovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 229940110456 cocoa butter Drugs 0.000 description 1
- 235000019868 cocoa butter Nutrition 0.000 description 1
- 238000007887 coronary angioplasty Methods 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 238000011461 current therapy Methods 0.000 description 1
- 102000003675 cytokine receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010057085 cytokine receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000000254 damaging effect Effects 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 230000010437 erythropoiesis Effects 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 125000005456 glyceride group Chemical group 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 230000010247 heart contraction Effects 0.000 description 1
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 description 1
- 210000004536 heart mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 230000001146 hypoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 201000004332 intermediate coronary syndrome Diseases 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 210000005240 left ventricle Anatomy 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000000155 melt Substances 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 239000002991 molded plastic Substances 0.000 description 1
- 208000037891 myocardial injury Diseases 0.000 description 1
- 229940037525 nasal preparations Drugs 0.000 description 1
- 239000006199 nebulizer Substances 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 230000007971 neurological deficit Effects 0.000 description 1
- 230000007959 normoxia Effects 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000006072 paste Substances 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000002985 plastic film Substances 0.000 description 1
- 229920006255 plastic film Polymers 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 230000007575 pulmonary infarction Effects 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 238000005932 reductive alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 230000033764 rhythmic process Effects 0.000 description 1
- 108010017584 romiplostim Proteins 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 description 1
- 125000005629 sialic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000002885 thrombogenetic effect Effects 0.000 description 1
- 229960000103 thrombolytic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000002537 thrombolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001361 thrombopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 230000004218 vascular function Effects 0.000 description 1
- 208000021331 vascular occlusion disease Diseases 0.000 description 1
- 210000005166 vasculature Anatomy 0.000 description 1
- 230000002747 voluntary effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/196—Thrombopoietin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P41/00—Drugs used in surgical methods, e.g. surgery adjuvants for preventing adhesion or for vitreum substitution
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/06—Antiarrhythmics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Surgery (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
Abstract
トロンボポエチンを単独または他の薬剤と組み合わせて、心筋虚血などの心臓傷害を患う、またはそのリスクのある患者に投与することにより、心筋梗塞によるものなどの虚血の治療的または予防的処置法。トロンボポエチンは、被験者の血小板総数または血小板の産生が有意な影響を受けないような濃度で投与される。
Description
本願は２００６年１月２３日出願の米国仮出願第６０／７６１，１５０号の利益を主張するものである。
本発明は、国立衛生研究所(the National Institutes of Health(MH))、国立心臓肺研究所(the National Heart and Lung Institute (NHLI))、ＮＩＨ／ＮＨＬＩ助成第ＨＬ５４０７５号からの政府支援を受けて行われたものである。米国政府は本発明において一定の権利を有する。
ほとんどの急性心筋梗塞、うっ血性心不全、不整脈および突然心臓死の基礎にある原因である虚血性心疾患は、全工業国の死亡および罹患の主因である。米国では、虚血性心疾患は全死亡数の２０％近くの原因となっている（年間約６０００００人の死亡）。本年、推計千百万人の米国人が新たなまたは再発性の急性心筋梗塞を起こし、多くの生存者が長期罹患し、心不全や死亡へと進行すると思われる。人口が高齢化し、肥満や糖尿病などの併発罹患が増えるので、虚血性心疾患により引き起こされる莫大な公衆衛生負荷はさらに一層増大するものと思われる(Bolli, et al., Circ. Res. 95:125-134, 2004)。
トロンボポエチン（Ｔｐｏ）は身体に見られる、骨髄を刺激して血小板を産生し、それらの発達を助けるタンパク質である。ペグ化（pegylated）組換えヒト巨核球増殖および発達因子（ＰＥＧ−ｒＨｕＭＧＤＦ）は、受容体結合領域のみを含み、ＰＥＧの付加により化学的に修飾（Ｎ末端還元的アルキル化）された末端切断型タンパク質（アミノ酸１６３個）であり、ＰＥＧ−ｒＨｕＭＧＤＦはＡｍｇｅｎにより開発された。Ｔｐｏのペグ化は血漿半減期をさらに１０倍引き延ばす。両形態のＴｐｏは包括的な臨床研究を経たが、これら両形態のタンパク質の生物活性は同じである。両形態とも巨核球増殖および血小板産生の強力な刺激因子であることが示され、非骨髄アブレーション的化学療法の血小板減少症軽減において生物的に活性である。全身投与から３〜５日後に、血小板総数が増え始める。
心臓手術および移植（心筋全虚血）および心臓発作（局部的心筋虚血）の状況を含む虚血により引き起こされる傷害に対する心臓の耐性を有効に高める療法および治療製品を提供することが望まれる。
一態様において、本発明は、哺乳類の組織および器官、特に心臓を虚血の有害作用から保護する方法を提供し、また、このような方法に用いるための、Ｔｐｏ受容体リガンドを配合した医薬組成物を提供する。
本発明者らは、本発明の方法に従ってＴｐｏを哺乳類患者に投与することが、特に虚血に対する心臓の耐性を高める上で、心臓に対して有益な即時型および遅延型の心臓保護作用をもたらすことを見い出した。本発明によれば、Ｔｐｏ受容体リガンド、好ましくはＴｐｏは心臓保護のための治療剤として、虚血−再潅流作用により引き起こされる傷害を含む虚血症の治療において投与される。本発明の最も好ましい形態では、この治療は血小板総数を１０％を超えて、最も好ましくは１％を超えて増加させない。
本発明は、ヒトまたは他の哺乳類において心筋虚血の影響を即時に軽減し、心臓に対する損傷を予防または軽減する方法を提供する。本方法はＴｐｏを医薬組成物として、心筋虚血の損傷作用を軽減するのに有効な量で投与することを含む。
一実施形態では、本方法は、患者にＴｐｏ受容体リガンドを、このような傷害をその発生時に実質的に即時に予防または軽減するのに有効な濃度および時間で投与することにより、心筋虚血（虚血性傷害）に対して患者を前処置（precondition）することを含む。例えば、本方法は、外科手術などの予定または計画された虚血イベントの前にＴｐｏを患者に投与して患者を前処置することを含み得る。好ましくは、Ｔｐｏ受容体リガンド組成物を投与して短時間内（好ましくは１〜２０分以内）にＴｐｏ受容体リガンド血中レベル約０．０１〜１０．０ｎｇ／ｍｌをもたらすのに有効なＴｐｏ受容体リガンド量を含有する組成物が、虚血イベント前、一般にイベントの１〜６０分前、好ましくは５〜１５分前に患者に投与される。好ましい用量は、約０．０１〜１．０マイクログラム／ｋｇ患者体重のＴｐｏ受容体リガンドである。
本発明の実施形態では、ドナー器官（例えば心臓）に、移植前にＴｐｏ受容体リガンドが血管系を通じて、移植手順からの虚血および再潅流の影響による傷害を予防または軽減するのに有効な濃度および時間で投与することができる。好ましくは、有効量のＴｐｏ受容体リガンドを、好ましくは約０．０１〜１０．０ｎｇ／ｍｌ濃度のＴｐｏ受容体リガンドを含有する溶液を移植１〜６０分前、好ましくは５〜２０分前に器官に投与して、器官内に約１．０ｎｇ／ｍｌ濃度のＴｐｏ受容体リガンドをもたらす。これはＴｐｏ受容体リガンドを器官採取前に体全体に全身投与するか、または器官のみに投与することにより達成することができる。
別の実施形態では、Ｔｐｏは、心臓に対する損傷を治療、予防または軽減するために虚血イベントの発生時および／または虚血イベントの後に投与することができる。このようなイベントの例としては、心臓または他の器官の手術などの器官または組織の再潅流時に虚血再潅流傷害が起こり得る外科手術、移植手術などが挙げられる。さらに、例えば心筋梗塞などの病態の症候を受けている患者に、Ｔｐｏ受容体リガンドを投与して、心臓に対する虚血性傷害を実質的に即時に軽減することができる。Ｔｐｏ受容体リガンドは、虚血イベントによって引き起こされる心臓に対する損傷を実質的に即時に軽減または予防するのに有効な治療量のＴｐｏ受容体リガンドを含有する医薬組成物として患者に投与することができる。好ましくは、Ｔｐｏ受容体リガンド血中レベル約０．１〜１０．０ｎｇ／ｍｌをもたらすのに有効量のＴｐｏ受容体リガンドを含有する組成物が、患者に、虚血イベントの発生時もしくは虚血イベントの発生時付近に、かつ／または虚血イベント後の短時間内に有効期間で投与され、実施的に即時に、好ましくは投与１〜２０分以内に心臓保護および減少した虚血性傷害をもたらす。好ましい用量はＴｐｏ受容体リガンド０．０１〜１．０マイクログラム／ｋｇである。
本発明を限定するものではないが、Ｔｐｏが虚血により引き起こされる傷害を軽減し、実質的に即時に心臓保護作用をもたらし得る１つの方法はカリウムチャネルを活性化することによると考えられる。よって、本発明はまた、例えばカリウムチャネル（例えばＫＡＴＰ）を活性化させて心臓保護作用を得るために心臓保護シグナル伝達経路を活性化させる方法も提供する。好ましくは、投与後実質的に即時に、好ましくは約１〜２０分以内にＴｐｏ受容体リガンド血中レベル約０．０５〜０．５ｎｇ／ｍｌをもたらすのに有効な量のＴｐｏ受容体リガンドを含有する組成物の好ましい用量は、Ｔｐｏ受容体リガンド約０．０１〜１．０マイクログラム／ｋｇである。
本発明はさらに、生理学上許容される担体中にＴｐｏを含んでなる医薬組成物を提供する。これらの組成物は、例えば心臓および／または他の組織または器官に対する虚血の影響を軽減するために実質的に即時に心臓保護作用をもたらすのに有効な量のＴｐｏを提供するよう、好ましくは投与約１〜２０分以内に、好ましくは血中レベル約０．１〜１０．０ｎｇ／ｍｌ、または好ましくは約１．０ｎｇ／ｍｌをもたらすＴｐｏ受容体リガンド濃度で処方される。好ましい医薬組成物はＴｐｏ受容体リガンド約０．０１〜１．０マイクログラム／ｋｇ、好ましくはＴｐｏ受容体リガンド０．０５マイクログラム／ｋｇの用量を好ましくは１回の処置でもたらすように処方される。典型的な患者では、これはＴｐｏ受容体リガンド０．８〜８０マイクログラム、好ましくは２〜６マイクログラムを含んでなる組成物である。
本発明の方法は有利には、虚血により引き起こされる傷害に対して実質的に即時型（および遅延型）の心臓保護作用をもたらす。心臓発作、脳卒中もしくは他の病態と共存する場合、または例えば器官移植を行う際は、虚血性傷害に対する即時の心臓保護または脳保護が遅効性の作用よりも望ましい。本発明は心臓保護作用までにかかる待機時間をなくす、または実質的に短縮する。
概要
トロンボポエチン（Ｔｐｏ、ｃ−ｍｐｌリガンド、巨核球増殖分化因子、血小板新生刺激因子としても知られる）は、分子量およそ７０，０００ダルトンのホルモンである。ｃ−ｍｐｌリガンドであるＴｐｏは巨核球および血小板の発達の主要な生理学的レギュレーターである。Ｔｐｏは主として肝臓で産生される。ｒｈＴｐｏおよびＰＥＧ−ｒＨｕ ＭＥＤＦをはじめとするいくつかの組換えＴｐｏが臨床評価のために開発されている。ｒｈＴｐｏ(Genentech, South San Francisco, CA)のアミノ酸配列は、内因性のＴｐｏと同じ全長ポリペプチドである。ｒｈＴｐｏは哺乳類細胞で産生され、グリコシル化される。ＰＥＧ−ｒＨｕ ＭＧＤＦは大腸菌(Escherichia coli)で産生される。
トロンボポエチン（Ｔｐｏ、ｃ−ｍｐｌリガンド、巨核球増殖分化因子、血小板新生刺激因子としても知られる）は、分子量およそ７０，０００ダルトンのホルモンである。ｃ−ｍｐｌリガンドであるＴｐｏは巨核球および血小板の発達の主要な生理学的レギュレーターである。Ｔｐｏは主として肝臓で産生される。ｒｈＴｐｏおよびＰＥＧ−ｒＨｕ ＭＥＤＦをはじめとするいくつかの組換えＴｐｏが臨床評価のために開発されている。ｒｈＴｐｏ(Genentech, South San Francisco, CA)のアミノ酸配列は、内因性のＴｐｏと同じ全長ポリペプチドである。ｒｈＴｐｏは哺乳類細胞で産生され、グリコシル化される。ＰＥＧ−ｒＨｕ ＭＧＤＦは大腸菌(Escherichia coli)で産生される。
Ｔｐｏの受容体が心臓に存在するかどうか、またはＴｐｏが心臓において生理学的役割を果たすかどうか、または虚血／再潅流から起こる傷害から器官／組織を保護し得るかどうかは分かっていない。
虚血は、心臓または脳（心虚血；虚血性心筋症）など、身体のある部位に血流および酸素が低下または欠損することから起こる症状であり、遮断部から遠位の組織に損傷を起こす。心臓手術および器官移植などのある種の外科手術中では、血流は一時的に停止され、その後、再開（再潅流）されるが、その結果、虚血−再潅流傷害が起こる。心臓発作中、心臓に供給されていた血液は停止され、この場合にも虚血が起こり、梗塞を招くことがある。心臓発作を救済する現行の処置には、血栓溶解薬および経皮経管冠動脈形成術を用いて心臓の虚血領域を再潅流することが必要である。
ＴｐｏはＭｐｌサイトカイン受容体のリガンドであり、巨核球成熟の主要なレギュレーターである。Ｔｐｏは肝臓、腎臓および骨髄で産生され、血漿中に通常５０〜２５０ｐｇ／ｍｌの濃度で循環している。このＭｐｌ受容体は血小板、巨核球、およびＣＤ３４＋再構築幹細胞を含むあらゆる段階の巨核球前駆体で発現する。Ｔｐｏ血中レベルの減少と心疾患の間の関連はまだ結論が出ていない。
一態様において、本発明は、Ｔｐｏを使用して心筋虚血により引き起こされる傷害から患者の心臓または脳を即時に保護する方法を対象とする。「即時に」とは、ＴｐｏまたはＴｐｏ受容体リガンドを含んでなる組成物を投与した後即座に、または短時間内に、好ましくは投与後少なくとも３５分以内、より好ましくは１〜２０分以内、より好ましくは１〜１５分以内、より好ましくは１〜１０分以内、最も好ましくは１〜５分以内に虚血に対する心臓保護作用が生じることを意味する。
別の実施形態において、Ｔｐｏはまた、不安定狭心症の処置に適切な遅効性の心臓保護を与える。「遅効性」とは、ＴｐｏまたはＴｐｏ受容体リガンドを含有する組成物を投与した後、一定の時間の後に虚血に対する心臓保護作用が現れる、好ましくは、心臓保護が２４時間後、好ましくは９６時間後に現れることを意味する。
好適なＴｐｏ調製物
本発明の方法で用いるための好適なＴｐｏ調製物（「Ｔｐｏ受容体リガンド」または「トロンボポエチン受容体リガンド」）としては、天然Ｔｐｏ（例えば、ヒト尿から抽出され、精製されたＴｐｏ）または組換えヒトＴｐｏ（ｒｈＴｐｏ）、および哺乳類Ｔｐｏ、特にヒトＴｐｏおよびｒｈＴｐｏのものに実質的に匹敵する生理学的および生物学的特性（最も好ましくは、血小板総数／血小板数増加能）を有するその改変物がある。血小板総数／血小板数の増加については、Somlo, et al,. Blood 93:2798-7806, 1999およびVadhan-Raj et al., Ann. Intern. Med. 126:673-681, 1997に例示されている。
本発明の方法で用いるための好適なＴｐｏ調製物（「Ｔｐｏ受容体リガンド」または「トロンボポエチン受容体リガンド」）としては、天然Ｔｐｏ（例えば、ヒト尿から抽出され、精製されたＴｐｏ）または組換えヒトＴｐｏ（ｒｈＴｐｏ）、および哺乳類Ｔｐｏ、特にヒトＴｐｏおよびｒｈＴｐｏのものに実質的に匹敵する生理学的および生物学的特性（最も好ましくは、血小板総数／血小板数増加能）を有するその改変物がある。血小板総数／血小板数の増加については、Somlo, et al,. Blood 93:2798-7806, 1999およびVadhan-Raj et al., Ann. Intern. Med. 126:673-681, 1997に例示されている。
本発明で用いるのに好適なＴｐｏ調製物は、以下の参照文献に例示されているように血小板総数／血小板数を、上記の参照文献の方法で測定した場合に少なくとも２０％増加させる。
Ｔｐｏは商業的に得られるか、または米国特許第５，８３０，６４７号(Eaton, et al.)および同第５，８７９，６７３号(Thomas, et al.)に記載されているように得ることができる。組換えヒトＴｐｏ（ｒｈＴｐｏ）はGenentech (South San Francisco, CA)およびPfizer (New York, NY)から市販されている。末端切断型分子がAmgen Inc. (Thousand Oaks, CA)により開発されている。
本発明に包含される好適なＴｐｏ受容体リガンドはまた、その分子の血小板新生活性を向上させることに対して活性を有するＴｐｏ誘導分子を含み、限定されるものではないが、例えば、カルボキシ末端にアミノ酸を有するもの；１分子当たり種々の数のシアル酸残基を有するＴｐｏアイソフォーム；米国特許第５，８６９，４５１号、同第５，９３２，５４６号、同第６，０８３，９１３号、同第６，１２１，２３８号、同第５，８６９，４５１号、同第６，２５１，８６４６号、同第５０６，３６２号および同第６，４６５，４３０号ならびに米国特許公開番号ＵＳ２００３／０１５８１１６に記載され、Glaxo Smith Klineからの化合物４９７１１５で例示される、Ｔｐｏ受容体と結合するペプチド、米国特許公開番号ＵＳ２００３／０１９５２３１、ＵＳ２００３／０１６２７２４、ＵＳ２００４／００６３７６４、ＵＳ２００４／００８２６２６に記載されている小分子ミメティクス；Elliot, et al. (Nature Biotechnology 21:414-421, 2003)に記載されているようなグリコシル化により修飾されたポリエチレングリコールＴｐｏで修飾されたＴｐｏ、ＡＭＧ５３１(Amgen, Thousand Oaks, CA)ならびにAlexion Pharmaceuticals (Cheshire, CT)およびXoma (Berkeley, CA)に記載され、米国特許公開番号ＵＳ２００４／０１３６９８０に記載されているＴｐｏアゴニスト抗体を含む。さらなる修飾型としては、限定されるものではないが、カルボニル化Ｔｐｏ、スクシニル化Ｔｐｏ、アセチル化Ｔｐｏ、ビオチニル化Ｔｐｏ、ヨウ素化ＴｐｏおよびカルボキシメチルリシルＴｐｏなどが挙げられる。他の好適なＴｐｏ受容体リガンドは米国特許第６，８８７，８９０号、同第５，９８９，５３８、同第５，７５６，０８３号、同第５，４９８，５９９号および同第６，８６６，９９８号に記載され、特許請求されている。
Ｔｐｏ受容体と結合し、「Ｔｐｏ受容体リガンド」である他の新規な化合物は下記に記載されている（全て引用することにより本明細書の一部とされる）。
1. Wang. B. et al., Clin. Pharmacol. Ther. 73:628-638, 2004.
2. Orita, T., et al., Blood 105:562-566, 2005.
3. Inagaki, K., et al., Blood 104:58-64, 2004.
4. de Serres, M., et al., Stem Cells 17:203-209, 1999.
5. de Serres, M., et al., Stem Cells 17:316-326, 1999.
6. Cwirla, S.E., et al., Science 276:1696-1699, 1997.
7. Case, B.C., et al., Stem Cells 18:360-365, 2000.
8. Erickson-Miller, C.L., et al.. Exp. Hematol. 33:85-93, 2005.
1. Wang. B. et al., Clin. Pharmacol. Ther. 73:628-638, 2004.
2. Orita, T., et al., Blood 105:562-566, 2005.
3. Inagaki, K., et al., Blood 104:58-64, 2004.
4. de Serres, M., et al., Stem Cells 17:203-209, 1999.
5. de Serres, M., et al., Stem Cells 17:316-326, 1999.
6. Cwirla, S.E., et al., Science 276:1696-1699, 1997.
7. Case, B.C., et al., Stem Cells 18:360-365, 2000.
8. Erickson-Miller, C.L., et al.. Exp. Hematol. 33:85-93, 2005.
医薬組成物
本発明では、Ｔｐｏ受容体リガンドは、Ｔｐｏ受容体リガンドを患者の心筋虚血を軽減して心臓に対する損傷を少なくするのに有効な治療量で薬学上許容される担体と合わせることにより、医薬組成物として処方される。
本発明では、Ｔｐｏ受容体リガンドは、Ｔｐｏ受容体リガンドを患者の心筋虚血を軽減して心臓に対する損傷を少なくするのに有効な治療量で薬学上許容される担体と合わせることにより、医薬組成物として処方される。
この医薬組成物は経口、静脈内、皮下、筋肉内、腹膜内、経皮、鼻腔または坐剤により投与することができる。一般に、全身投与が好ましい。
心筋虚血の軽減のための有効成分としてのＴｐｏ受容体リガンドは、無菌蒸留水、生理食塩水、リンゲル溶液、デキストロース溶液またはハンクス溶液などのように、Ｔｐｏと適合し、実質的に無毒かつ非治療性であり、かつ、患者に生理学的に許容される、注射投与用の便宜な薬学上許容される非経口担体を用いて処方することができる。非経口投与では、Ｔｐｏは溶液または懸濁液、好ましくは緩衝溶液または懸濁液に配合することができる。
鼻腔用処方物は、患者が吸入するための例えばネブライザーまたはアトマイザーを用いて液滴またはスプレーの形態で送達するための溶液または懸濁液としての非経口調製物として調製することができる。非経口用または鼻腔用調製物は、アンプル、バイアル、使い捨てシリンジおよび他の好適な容器に無菌滴に封入することができる。
経皮送達系では、Ｔｐｏ受容体リガンドは、ローション、クリーム、軟膏、ゲル、ペースト、溶液または懸濁液などの液体または半液体状で局所用組成物として調製することができる。皮膚浸透にＴｐｏの経皮送達は、皮膚に含水させ、皮膚温度を高める密封技術（例えば、ラップまたは不透性プラスチックフィルム）の使用により、あるいは好適な浸透剤（例えば、水、グリセリンやプロピレングリコールなどのポリオール類）の使用により促進することができる。
坐剤投与形は、Ｔｐｏ受容体リガンドと、室温（約２０℃）で固体であり、体温で融解するココアバター基剤、またはポリエチレングリコールおよびグリセリドなどの水溶性もしくは水分散性基剤を含む担体を合わせることにより調製することができる。坐剤は一般に個々にホイル包装するか、または成形プラスチック容器に湿度から密閉する。
本発明の方法を用いた患者の治療は、その意図する目的に好適な用量を提供するのに有効な量でＴｐｏ受容体リガンドを含有する治療量のＴｐｏ受容体リガンド医薬組成物を投与することを含む。
好ましい組成物および調製物は、単位投与形が投与後即時にＴｐｏ受容体リガンド血中濃度０．０１〜１０．０ｎｇ／ｍｌ、好ましくはＴｐｏ受容体リガンド０．０５〜０．５ｎｇ／ｍｌ、好ましくはＴｐｏ受容体リガンド０．５〜５．０ｎｇ／ｍｌ、好ましくはＴｐｏ受容体リガンド約１．０ｎｇ／ｍｌをもたらすのに有効な量のＴｐｏ受容体リガンドを含有するように調製される。好ましくは、この組成物は、投与後少なくとも３５分以内、好ましくは１〜２０分以内、好ましくは１〜１５分以内、好ましくは１〜１０分以内、好ましくは１〜５分以内に所望のＴｐｏ受容体リガンド血中濃度をもたらすのに有効な量でＴｐｏ受容体リガンドを含む。
投与されるＴｐｏ受容体リガンドの有効用量は投与経路、患者の年齢、体重および／または健康状態、ならびに治療される症状などの他の因子によって異なり得る。
これらの医薬組成物は等張性、生理学的安定性およびｐＨ安定性を維持するためのバッファーや保存剤のような少量のアジュバントを含むことができ、これらのものはＴｐｏ受容体リガンド組成物の有効性に悪影響を及ぼさない。
好ましい実施形態では、患者は、実質的に即時の心臓保護作用を得るためのＴｐｏ受容体リガンド約０．０１〜１．０マイクログラム／ｋｇ、好ましくはＴｐｏ受容体リガンド０．０５マイクログラム／ｋｇの（例えば、多回または反復処置ではなく）１回処置を受ける。
本発明のＴｐｏ受容体リガンドの好ましい用量は典型的な患者では０．６〜６０マイクログラムの間である。最も好ましくは、用量は２〜６マイクログラムの間である。
方法
方法
本発明の方法は、虚血により引き起こされる傷害から患者の影響を受ける組織、好ましくは心臓または脳を保護するためにＴｐｏを利用する。この方法は、Ｔｐｏ受容体リガンドを含んでなる医薬組成物をヒトまたは他の哺乳類に、虚血発生により引き起こされる心筋傷害および／または脳傷害を処置する上で所望の作用を達成するのに有効な量で投与することを含む。
Ｔｐｏ受容体リガンドの投与時間は一般に、Ｔｐｏ受容体リガンド組成物の処方および所望の投与量によって異なる。投与時間を変動させ得る他の因子としては、他の因子の中でも、例えば、提供される処置の種類または実施される手順、例えば、移植される器官の調製、移植（ドナー）器官の前処置、心臓発作または脳卒中患者の処置、心臓手術前、手術中および手術後の処置、虚血−再潅流傷害の予防など；ならびに実施される処置または手順の所望の、または必要な時間が挙げられる。
本発明の方法による虚血性傷害に対する実質的に即時の心臓保護の利益のためには、Ｔｐｏ受容体リガンド組成物が１〜６０分、好ましくは３０分まで、好ましくは２０分まで、好ましくは５〜１５分の間投与されることが好ましい。投与時間は、必要に応じて、患者の正常血小板総数を１０％、または最も好ましくは１％（すなわち、増加が見られない）を超えて増加させずに心臓保護を付与し、かつ／または付加的治療効果をもたらすよう、必要に応じて例えば２４時間まで、またはそれを超えて延長することができる。
虚血性傷害に対する（例えば、狭心症に対する）遅延型心臓保護の利益のためには、Ｔｐｏ受容体リガンド組成物が１〜６０分、好ましくは３０分まで、好ましくは２０分まで、好ましくは５〜１５分の間投与される。
本方法の一実施形態では、Ｔｐｏ受容体リガンドを、虚血イベントを軽減するのに有効な量で含有する医薬組成物を虚血イベントの前、例えば、予定された外科手術前に投与して、患者を虚血性傷害に対して前処置する。例えば、虚血性傷害に至り得る外科手術としては、心臓手術、心臓移植、血管形成術および腹腔鏡手術などが挙げられる。別の例として、Ｔｐｏ受容体リガンドはまた、移植用ドナー器官（例えば、心臓移植物）の保存および器官の虚血−再潅流傷害の予防のためにドナー患者に有益に投与することができる。好ましくは、Ｔｐｏ受容体リガンド組成物は、実質的に即時の心臓保護のためのＴｐｏ受容体リガンド血中濃度が得られるよう、好ましくは、１〜３５分以内にＴｐｏ受容体リガンド血中レベル約０．１〜１０．０ｎｇ／ｍｌが得られるように、虚血イベント前に患者に投与される。Ｔｐｏ受容体リガンド組成物は好ましくはイベント前少なくとも１〜６０分、好ましくは１〜３０分、好ましくは約１〜２０分、好ましくは５〜１５分の間投与される。
さらなる例としては、器官移植レシピエントにおける心筋虚血の影響を軽減するため、例えば心臓などの被移植器官を、薬学上許容される処方物中の、移植時に器官に対する虚血および再潅流の影響を軽減するのに有効な量のＴｐｏに曝すことができる。移植器官は例えば、有効量のＴｐｏを含有する溶液を血管から被移植器官へ注入することによりＴｐｏに曝すことができる。好ましくは、このＴｐｏ受容体リガンドの器官への注入は、１〜３５分以内にＴｐｏ受容体リガンド約０．５〜５．０ｎｇ／ｍｌという血中Ｔｐｏ受容体リガンド濃度をもたらす。この移植器官のＴｐｏ曝露は移植までの時間継続することができ、好ましくは移植前１〜６０分、好ましくは移植前１〜３０分、好ましくは移植前５〜１５分である。
本発明の別法は、例えば外科手術中または病態の症候を受けている際などの虚血イベントの発生時または発生後に、心臓に対する虚血性傷害を実質的に即時に処置、予防または軽減して、心筋虚血症の重篤度を軽減し、さらなる損傷を予防するのに有効な治療量でＴｐｏ受容体リガンドを投与することを含む。虚血性傷害、特に虚血−再潅流傷害に至り得る外科手術の例としては、心臓手術、心臓移植、血管形成術および腹腔鏡手術などが挙げられる。例えば、Ｔｐｏ受容体リガンドは、処置中の虚血および再潅流により引き起こされる損傷を軽減するために心臓手術中に患者に投与することができる。別の例としては、Ｔｐｏ受容体リガンドは再潅流の開始時、再潅流中、またはその双方に投与することができる。症候の発現時に心臓の虚血性傷害に対して実質的に即時の心臓保護を提供するために本方法が適用可能な病態の例としては、例えば、心筋梗塞、肺梗塞、末梢血閉塞疾患、脳卒中、脳梗塞、血管閉塞、出生前または出生後酸素欠乏、外科手術および放射線療法を含む外傷、慢性閉塞性肺疾患、気腫、成人性呼吸窮迫症候群、敗血性ショック、鎌形赤血球性発作、律動異常、窒素麻酔および心肺バイパス術により引き起こされる神経欠損が挙げられる。
好ましくは、Ｔｐｏ受容体リガンド組成物は、虚血イベントの発生時および／または虚血イベントの発生後短時間のうちに患者に、１〜３５分以内にＴｐｏ受容体リガンド約０．１〜１０．０ｎｇ／ｍｌという血中Ｔｐｏ受容体リガンド濃度が得られるように投与される。Ｔｐｏ受容体リガンドを患者に投与するタイミングは、イベント後有効な時間、好ましくは約１〜６０分、好ましくは１〜３０分、好ましくは約５〜１５分であり得る。
本発明のさらに別の方法は、心臓保護シグナル伝達経路を活性化するのに有効な量のＴｐｏ受容体リガンドを投与することである。一実施形態では、本方法は、Ｔｐｏ−Ｒを活性化させて虚血性傷害に対して実質的に即時の心臓保護作用をもたらすのに有効な量および時間で、医薬組成物（好ましくは、１〜３５分間患者（ヒトまたは他の哺乳類）に送達した際にＴｐｏ受容体リガンド血中レベル約０．１〜１０．０ｎｇ／ｍｌを達成するための組成物）としてのＴｐｏを投与することを含む。Ｔｐｏ受容体リガンドを患者に投与するタイミングは、イベントの前または後の有効な時間、好ましくは約１〜６０分、好ましくは１〜３０分、好ましくは約５〜１５分であり得る。
別の実施形態では、Ｔｐｏは、ＫＡＴＰなどのカリウムチャネルを活性化して、虚血性傷害に対して実質的に即時の心臓保護を達成する、好ましくは、１〜３５分間患者に送達した際にＴｐｏ受容体リガンド血中レベル約０．１〜１０．０ｎｇ／ｍｌを達成するのに有効な量および時間で医薬組成物として投与される。このＴｐｏ受容体リガンド組成物は、虚血性傷害に対して実質的に即時の心臓保護作用をもたらすよう、イベントの前または後の有効な時間、好ましくは約１〜６０分、好ましくは１〜３０分、好ましくは５〜１５分の間患者に投与される。
本発明に従って予防または軽減され得る心筋虚血性傷害としては、例えば、冠動脈疾患、心筋梗塞、冠動脈性心疾患、プリンズメタル型狭心症(Prinzmetal angina)、心破裂およびうっ血性心不全が挙げられる。本組成物およびその投与の有効性は、心酵素漏出、心収縮タンパク質漏出、左心室圧および右心室圧、不整脈ならびにＳ−Ｔ上昇(S-T segment elevation)などの標準的な方法を用い、心筋虚血性傷害の重篤度が無いか、または軽減されていることでモノタリングすることができる。Ｔｐｏ受容体リガンド組成物の作用は、医薬組成物の投与して１〜４８時間後に評価することができる。
以下、詳細な実施例を示して本発明をさらに説明し、その中で方法論を記載する。これらの実施例は、以上の記載に示された本発明の範囲を限定するものではない。本発明の精神および範囲に留まりつつ、本発明の概念の範囲内の変更および改変を行うことができると理解すべきである。本願中に引用された参照文献、特許および特許出願の開示は引用することにより本明細書の一部とされる。
実施例１：in vitro全虚血に対するトロンボポエチンおよびカリウムチャネルの活性化による媒介の即時心臓保護作用
虚血性心疾患は、ほとんどの急性心筋梗塞、うっ血性心不全、不整脈および心臓突然死の基礎にある原因であり、全工業国の死亡および罹患の主因である(Bolli et al., Circ. Res. 95:125-134, 2004)。虚血からの心臓の保護は、依然として心臓病専門医および心臓外科医のチャレンジであり続けている。しかしながら、ヒトにおいて虚血の悪影響から心臓を直接保護することが分かっている現行療法はない。最近の研究では、赤血球産生を刺激するために用いられるサイトカインであるエリスロポエチンも、カリウム依存性カリウム（ＫＡＴＰ）チャネルの活性化を含んだ機構により、虚血性傷害から心臓を保護することが示されている(Shi, et al., Basic Res. Cardiol. 99:173-182, 2004)。エリスロポエチンと限定された相同性を有する別のサイトカイン、Ｔｐｏは、細胞移植後の血小板の産生を促進するために臨床使用されている。しかしながら、Ｔｐｏが心筋において生理学的機能を果たすかどうかは現在のところまだ分かっていない。本発明者らは、Ｔｐｏは、虚血／再潅流により引き起こされる傷害から心臓を保護することができ、その結果、梗塞サイズおよびアポトーシスを軽減し、虚血後の血管機能の回復を増強すると仮説を立てた。
虚血性心疾患は、ほとんどの急性心筋梗塞、うっ血性心不全、不整脈および心臓突然死の基礎にある原因であり、全工業国の死亡および罹患の主因である(Bolli et al., Circ. Res. 95:125-134, 2004)。虚血からの心臓の保護は、依然として心臓病専門医および心臓外科医のチャレンジであり続けている。しかしながら、ヒトにおいて虚血の悪影響から心臓を直接保護することが分かっている現行療法はない。最近の研究では、赤血球産生を刺激するために用いられるサイトカインであるエリスロポエチンも、カリウム依存性カリウム（ＫＡＴＰ）チャネルの活性化を含んだ機構により、虚血性傷害から心臓を保護することが示されている(Shi, et al., Basic Res. Cardiol. 99:173-182, 2004)。エリスロポエチンと限定された相同性を有する別のサイトカイン、Ｔｐｏは、細胞移植後の血小板の産生を促進するために臨床使用されている。しかしながら、Ｔｐｏが心筋において生理学的機能を果たすかどうかは現在のところまだ分かっていない。本発明者らは、Ｔｐｏは、虚血／再潅流により引き起こされる傷害から心臓を保護することができ、その結果、梗塞サイズおよびアポトーシスを軽減し、虚血後の血管機能の回復を増強すると仮説を立てた。
心臓保護およびその基礎にある機構におけるＴｐｏの可能性のある役割を調べるため、成体ラットの心臓を虚血前にヒト組換えＴｐｏで処置した。この試験の目的は、心臓のＴｐｏ急性曝露（慢性曝露に対して）がその後の虚血に対する耐性を高めるかどうか、心臓の最適な保護を与えるＴｐｏ濃度および心臓保護の媒介におけるカリウムチャネルの役割を調べることであった。
本試験は、Ｔｐｏ（０．０１〜１０．０ｎｇ／ｍｌ）がラット心臓において即時心臓保護を与えるかどうか、および基礎にある機構へのカリウムチャネルの寄与を調べることを目的とした。正常酸素の８週齢のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラット（ｎ＝８／群）の心臓を単離し、Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆモードで潅流した。２５分血液停止全虚血および１８０分再潅流前の定常条件下で血流力学的機能を記録した。
方法
動物 本試験に用いたラットは、the National Research Council, 1996により作成された「Guide for the Care and Use of Laboratory Animals」に準拠して人の世話を受けた。８週齢のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙを正常酸素（ＳａＯ２＞９５％）または環境で維持した。
動物 本試験に用いたラットは、the National Research Council, 1996により作成された「Guide for the Care and Use of Laboratory Animals」に準拠して人の世話を受けた。８週齢のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙを正常酸素（ＳａＯ２＞９５％）または環境で維持した。
試薬 組換えヒトＴｐｏはCell Science, Inc. (Norwood, Mass.)から得た。グリベンクラミドはCalbiochem (San Diego, Calif.)から得た。５−ＨＤはSigma-Aldrich (St. Louis, Mo.)から購入した。Ｔｐｏ受容体に対する抗体はSanta Cruz Biotechnologyから得た。二次抗体はZymed (South San Francisco, Calif.)から得たセイヨウワサビペルオキシダーゼであった。
単離心臓の潅流 単離されたラット心臓を、重炭酸バッファーを用い、低圧逆行様式で潅流し、Baker, et al., Am. J. Physiol. Heart Circulat. Phvsiol. 278:1395-1400, 2000に記載のように装備し、必要に応じてこの潅流液にカリウムチャネル遮断薬を加えた。カニューレ部位のすぐ上にある三方向蛇口は、全潅流液を心臓からそらせて、血流停止全虚血をもたらすことを可能とする。再潅流は、潅流液を心臓へ送達させる蛇口の位置を変えることにより達成した。左心室機能は、Baker, et al.,前掲, 2000に記載されているような各実施例により継続的にモニタリングした。終末拡張期圧は最初は２分間、ｍｍＨｇに設定した。次に、バルーンを段階的にマイクロシリンジで膨らませ、左心室では終末拡張期圧を８ｍｍＨｇに設定した（定常条件での拡張期圧および心拍率を記録した）。冠動脈流速は、心臓の右側からの冠動脈流出をメスシリンダーに一定時間採取することにより試験中測定した。冠動脈流速はｍｌ／分／湿重ｇで表した。
心筋虚血に対する耐性 成体ラットの心臓を重炭酸バッファーで潅流し、Baker, et al., 前掲, 2000に記載されているように両心室機能を各実験中、継続的にモニタリングした。濃度応答試験では、次に、心臓を２５分虚血および１８０分再潅流前に１５分間、Ｔｐｏ（０．０１〜１０．０ｎｇ／ｍｌ）で潅流した。用いた試験プロトコールを図２に示す。カリウムチャネル遮断薬を用いる機構試験では、心臓を虚血前、薬剤単独で１５分間、その後Ｔｐｏと組み合わせて１５分間潅流した。虚血前３０分間、Ｔｐｏの不在下、カリウムチャネル遮断薬単独で潅流した心臓をこれらの試験の非処置対照として用いた。虚血後の右心室拡張期圧の回復を、その薬剤前、虚血前の値のパーセンテージとして表した。
心室機能の評価 Baker, et al., 前掲, 2000に記載されているように、左心室機能を各試験中、継続的にモニタリングした。虚血後の左心室圧の回復を用い、虚血に対する耐性を評価した。
３時間再潅流時に梗塞サイズ／リスク面積の評価を用い、心筋虚血に対する耐性を評価した。梗塞サイズの同定のため、心臓を３７℃にて、トリフェニルテトラゾリウムクロリド（ＳＩＧＭＡ）を含有する重炭酸バッファー１０ｍｌで潅流した。
３時間再潅流時に梗塞サイズ／リスク面積の評価を用い、心筋虚血に対する耐性を評価した。梗塞サイズの同定のため、心臓を３７℃にて、トリフェニルテトラゾリウムクロリド（ＳＩＧＭＡ）を含有する重炭酸バッファー１０ｍｌで潅流した。
心臓を頂部から房室溝へと横断面として２ｍｍの切片にした。各切片を記録し、ホルマリンに入れた。２４時間後、マウントカメラでこの標本のデジタル写真を撮り、標本とレンズの距離をノーマライズした。次に、各写真をＡｄｏｂｅ Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐ（Ａｄｏｂｅ（商標））に追加し、非梗塞面積に対する梗塞面積の画素密度を測定した。各スライドの梗塞のパーセンテージを全心臓面積のパーセンテージとして表した。全ての標本のパーセンテージを合計すると、各動物の全梗塞パーセンテージとなる。
アポトーシスの測定
Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットの心臓を重炭酸バッファーで２４５分間潅流し、非虚血対照とした（図５）。心臓を有気的に３５分間潅流し、２５分の全虚血、その後３時間の再潅流を行い、虚血−再潅流対照群とした。心臓を、虚血および再潅流前に２０分間バッファーで有気的に潅流し、次いで１５分間Ｔｐｏ（１ｎｇ／ｍｌ）で潅流し、Ｔｐｏ処置群とした。各心臓を潅流の終了時に液体窒素中で急速凍結させた。各心臓（全部で７２切片）から４つの凍結切片（１０ミクロン厚）に対し、製造業者のプロトコール(Roche)に従い、ＴＵＮＥＬアッセイを行った。これらのスライドを蛍光顕微鏡（４００倍、励起４９０ｎｍ、発光５１５ｎｍ）で観察した。各心臓サンプルから２２の無作為な高出力視野を選択し、盲険として定量した。ＴＵＮＥＬ結果は％（１視野当たりの陽性核／１視野当たりの全核×１００％）として表す。
Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットの心臓を重炭酸バッファーで２４５分間潅流し、非虚血対照とした（図５）。心臓を有気的に３５分間潅流し、２５分の全虚血、その後３時間の再潅流を行い、虚血−再潅流対照群とした。心臓を、虚血および再潅流前に２０分間バッファーで有気的に潅流し、次いで１５分間Ｔｐｏ（１ｎｇ／ｍｌ）で潅流し、Ｔｐｏ処置群とした。各心臓を潅流の終了時に液体窒素中で急速凍結させた。各心臓（全部で７２切片）から４つの凍結切片（１０ミクロン厚）に対し、製造業者のプロトコール(Roche)に従い、ＴＵＮＥＬアッセイを行った。これらのスライドを蛍光顕微鏡（４００倍、励起４９０ｎｍ、発光５１５ｎｍ）で観察した。各心臓サンプルから２２の無作為な高出力視野を選択し、盲険として定量した。ＴＵＮＥＬ結果は％（１視野当たりの陽性核／１視野当たりの全核×１００％）として表す。
統計分析 報告されたデータは平均値±ＳＤである。統計分析は、Ｉ型誤差の膨張リスクを補正するのに用いられるグリーンハウス−ガイザー調整法(Greenhouse-Geisser adjustment)とともに反復測定ＡＮＯＶＡを用いて行った(Baker, et al., Circulation 99:1249-1254, 1999)。有意であれば、どの群が有意に異なるかを特定するため第二段階としてマン−ホイットニー(Mann- Whitney)検定を用いた。ＡＮＯＶＡの後、多重比較に関する差異についてデータを分析した(Baker, et al, 前掲, 1999)。有意性をＰ＜０．０５に設定した。
試験および結果
心臓におけるトロンボポエチン受容体（ｃ−ｍｐｌ）の存在（図１）
Ｔｐｏ受容体に対するプライマー（フォワードプライマー＝５’−ＣＴＡ ＧＣＴ ＣＣＣ ＧＡＧ ＧＣＴ ＴＣＴ ＴＣ−３’；リバースプライマー＝５’−ＧＧＣ ＴＣＣ ＡＧＣ ＡＣＣ ＴＴＣ ＣＡＧ ＴＣＣ−３’）をRouleau, et al.およびＧｅｎＢａｎｋに寄託されているラットのＴｐｏ受容体ｍＲＮＡ配列（ＧＩ番号：３４８７１０７７）に従ってデザインした。
心臓におけるトロンボポエチン受容体（ｃ−ｍｐｌ）の存在（図１）
Ｔｐｏ受容体に対するプライマー（フォワードプライマー＝５’−ＣＴＡ ＧＣＴ ＣＣＣ ＧＡＧ ＧＣＴ ＴＣＴ ＴＣ−３’；リバースプライマー＝５’−ＧＧＣ ＴＣＣ ＡＧＣ ＡＣＣ ＴＴＣ ＣＡＧ ＴＣＣ−３’）をRouleau, et al.およびＧｅｎＢａｎｋに寄託されているラットのＴｐｏ受容体ｍＲＮＡ配列（ＧＩ番号：３４８７１０７７）に従ってデザインした。
成体ラット心室心筋細胞を雄Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットから、従前に記載されているように(Konorev, et al., Arch. Biochem. Biophys. 368:421-428, 1999)単離した。
ラットのＴｐｏ受容体配列に基づいたプライマーを用い、本発明者らは、ＲＴ−ＰＣＲを用い、ラットの心臓ホモジネートおよび心筋細胞中のＴｐｏ受容体に関するメッセージをサブクローニングした。ラットＴｐｏ受容体の配列はＧｅｎＢａｎｋに寄託されている（登録番号はＤａｈｌ ＳラットではＤＱ０１３３４５、Ｂｒｏｗｎ ＮｏｒｗａｙラットではＤＱ０１３３４４、Ｓｐｒａｇｕｅ ＤａｗｌｅｙラットではＤＱ０１３３４３）。ウサギＴｐｏ受容体の配列もＧｅｎＢａｎｋに寄託されている（登録番号ＤＱ０１３３４２）。次に、Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットから得られた心臓ホモジネートおよび心筋細胞中のＴｐｏ受容体タンパク質の存在をウエスタンブロット法により検出した。ヒト慢性骨髄性白血病細胞を陽性対照として用いた（図１）。
ラットのＴｐｏ受容体配列に基づいたプライマーを用い、本発明者らは、ＲＴ−ＰＣＲを用い、ラットの心臓ホモジネートおよび心筋細胞中のＴｐｏ受容体に関するメッセージをサブクローニングした。ラットＴｐｏ受容体の配列はＧｅｎＢａｎｋに寄託されている（登録番号はＤａｈｌ ＳラットではＤＱ０１３３４５、Ｂｒｏｗｎ ＮｏｒｗａｙラットではＤＱ０１３３４４、Ｓｐｒａｇｕｅ ＤａｗｌｅｙラットではＤＱ０１３３４３）。ウサギＴｐｏ受容体の配列もＧｅｎＢａｎｋに寄託されている（登録番号ＤＱ０１３３４２）。次に、Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットから得られた心臓ホモジネートおよび心筋細胞中のＴｐｏ受容体タンパク質の存在をウエスタンブロット法により検出した。ヒト慢性骨髄性白血病細胞を陽性対照として用いた（図１）。
Ａ．トロンボポエチン濃度応答試験 エリスロポエチンは、カリウムチャネル活性化を含む機構により、虚血傷害から心臓を保護する(Shi, Y., et al., Basic Res. Cardiol. 99:173-182, 2004)。ＴｐｏはＮ末端ドメインにおいてエリスロポエチンとアミノ酸配列でおよそ２５％の相同性を有する。
８週齢のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットの心臓を単離し、２５分全虚血および１８０分再潅流の前に１５分間、０．０１、０．１、１．０および１０ｎｇ／ｍｌのＴｐｏで潅流した（図２）。Ｔｐｏ（１．０ｎｇ／ｍｌ）を虚血前に冠動脈流速を６±１ｍｌ／分／ｇから５±１ｍｌ／分／ｇに低下させ、左心室拡張期圧を１１９±１５ｍｍＨｇから１５１±１９ｍｍＨｇに上昇させ、心拍数を２４０±３４拍／分から２２８±１７拍／分に低下させた。表１（上記）は、正常酸素状態の心臓におけるＴｐｏ濃度応答試験の血流力学的数値を示す（図３および４参照）。
Ｔｐｏは、虚血および再潅流後の左心室拡張期圧の回復を釣り鐘型の濃度依存様式で高めた。虚血後左心室および右心室拡張期圧の最大回復をもたらした最適濃度は１．０ｎｇ／ｍｌで見られた（図３）。
Ｔｐｏは、虚血および再潅流後の梗塞サイズを「Ｕ」型の濃度依存様式で軽減した。梗塞サイズの最大軽減をもたらしたＴｐｏの最適濃度は１．０ｎｇ／ｍｌで見られた。Ｔｐｏは、虚血前に１．０ｎｇ／ｍｌ濃度で投与した場合、虚血および再潅流後のアポトーシスを軽減した（図４）。
Ｔｐｏ（１．０ｎｇ／ｍｌ）は、虚血および再潅流後のアポトーシスを軽減した（図５）。Ｔｐｏが梗塞サイズを軽減し、ＬＶＤＰの回復を高めたことから、本発明者らはまた、Ｔｐｏが虚血心筋をアポトーシスから保護するかどうかを調べた。２５分全虚血、３時間再潅流の後の左心室切片のＴＵＮＥＬ標識により、ＴＵＮＥＬ陽性細胞は非虚血心臓の場合（１．９１±０．５４％）の２倍観察された（３．５６±０．７５％）。Ｔｐｏ処置群では、有意に低い染色が見られた（１．９４±０．５５％、Ｐ＜０．０５）。代表的なＴＵＮＥＬ染色切片を図５に示すが、これはＴｐｏで処置された心臓ではアポトーシス陽性細胞が少ないことを示す。
Ｂ．心拍数の回復は非処置心臓の虚血前値９４±６％から１．０ｎｇ／ｍｌのＴｐｏで処置した心臓の８５±７％まで低下した 冠動脈流速の回復は１．０ｎｇ／ｍｌによっては影響を受けなかった。これらのデータは、Ｔｐｏが濃度依存様式で虚血性傷害から心臓を即時に保護することを示した。
Ｃ．トロンボポエチン誘導性の心臓保護におけるＡｋｔの役割 Ａｋｔは重要な心臓保護のメディエーターである。Ｔｐｏ誘導性の心臓保護の媒介におけるＡｋｔの役割を調べるため、正常酸素状態のラットにおいて次の試験を行った。
虚血前、心臓をＡｋｔ阻害剤単独で１５分間、その後、Ｔｐｏ（１．０ｎｇ／ｍｌ）と組み合わせてさらに１５分間潅流した。
特異的Ａｋｔ阻害剤ワートマニン（１００ｎＭ）は、Ｔｐｏ（１．０ｎｇ／ｍｌ）の心臓保護作用を完全に無効にした（図６Ａ／Ｂ）。ワートマニン単独では心臓保護に効果は無かった（図６Ａ／Ｂ）。
よって、Ｔｐｏの心臓保護作用はＡｋｔにより媒介されることが示された。
Ｄ．トロンボポエチン誘導性心臓保護におけるＫ ＡＴＰ チャネルの役割 心筋筋線維膜で発現が高く、心筋ミトコンドリアで発現すると思われるＡＴＰ感受性Ｋ＋（ＫＡＴＰ）チャネルは、心臓保護のメディエーターとして働くことが分かっている。Ｔｐｏ誘導性の心臓保護の媒介におけるＫＡＴＰチャネルの役割を調べるため、正常酸素状態のラットにおいて次の試験を行った。
虚血前、心臓をＫＡＴＰチャネル遮断薬単独で１５分間、その後、Ｔｐｏ（１．０ｎｇ／ｍｌ）と組み合わせてさらに１５分間潅流した。
非特異的ＫＡＴＰチャネル遮断薬グリベンクラミド（３μＭ）は、Ｔｐｏ（１．０ｎｇ／ｍｌ）の心臓保護作用を完全に無効にした（図７Ａ／Ｂ）。グリベンクラミド単独では心臓保護に効果は無かった（図７Ａ／Ｂ）。
よって、Ｔｐｏの心臓保護作用はＫＡＴＰチャネルにより媒介されることが示された。
考察
虚血直前に１５分間Ｔｐｏを投与すると、壊死およびアポトーシスが軽減され、心筋虚血後の心臓の心室機能の回復が高まる。拡張期圧の最大回復をもたらしたＴｐｏの最適濃度は１．０ｎｇ／ｍｌで見られた。
虚血直前に１５分間Ｔｐｏを投与すると、壊死およびアポトーシスが軽減され、心筋虚血後の心臓の心室機能の回復が高まる。拡張期圧の最大回復をもたらしたＴｐｏの最適濃度は１．０ｎｇ／ｍｌで見られた。
この試験は、Ｔｐｏが、カリウムチャネルより媒介される心筋虚血に対する耐性の増強をともなって濃度依存性の心臓保護作用を即時に発揮することを示した。心筋虚血に対する耐性の増強はＴｐｏで処置した直後に見られ、このことはその心臓保護作用の発現に新たな遺伝子の誘導は必要でないことを示唆している。この試験は、Ｔｐｏの生物学的作用は、１つのカリウムチャネルであるＫＡＴＰチャネルの即時の活性化をもたらすシグナル経路により媒介されることを示す。
これらの結果はまた、Ｔｐｏがカリウムチャネル（ＫＡＴＰ）を活性化することにより即時の心臓保護を与えることも示す。心臓にはいくつかの異なるタイプのカリウムチャネルが存在し、その１つであるＫＡＴＰチャネルは低酸素および虚血などの酸素欠乏の症状から心臓を保護する働きをする。これらの結果は、虚血に対するＴｐｏ誘導性の保護が非特異的ＫＡＴＰチャネル遮断薬グリベンクラミドにより完全に妨げられることを示す。グリベンクラミド単独では心臓保護に効果は無かったが、このことはＫＡＴＰチャネルがＴｐｏに曝されていない心臓では活性化されないことを示した。このＫＡＴＰチャネルは、Ｔｐｏ誘導性の心臓保護の媒介において中枢的な役割を果たすと思われる。このカリウムチャネルは細胞内の２つの部位、すなわち筋線維膜とミトコンドリアに存在すると考えられる。一度活性化されると、筋線維膜ＫＡＴＰチャネルはサイトゾルから細胞外へとカリウムの流出を促進し、ミトコンドリアＫＡＴＰチャネルが活性化されると、サイトゾルからミトコンドリアへとカリウムの流入が起こる。筋線維膜ＫＡＴＰチャネルの活性化は、虚血中、細胞内へのカルシウム流入を低下させる働きもする可能性がある。さらに、筋線維膜ＫＡＴＰチャネルはまた、ミトコンドリアＫＡＴＰチャネルの開口も担っている可能性もある。これに対し、ミトコンドリアＫＡＴＰチャネルの活性化はエネルギー特性の改良により心臓保護を媒介する可能性がある(Eells, et al., Circ, Res. 87:915-921, 2000)。
Ｔｐｏが虚血により引き起こされる心臓傷害から保護するシグナル伝達経路は、一部はＡｋｔおよびＫＡＴＰチャネルにより媒介される。Ａｋｔの活性化は心臓の虚血／再潅流傷害を軽減すること、および抗アポトーシス遺伝子のｂｃｌファミリーをアップレギュレーションすることが知られている。このことの裏付けとして、これらの結果は、Ｔｐｏが心臓において虚血および再潅流により誘導されるアポトーシスの程度を軽減したことを示す。また、ＫＡＴＰチャネルの活性化は虚血および薬理的前処置により付与される心筋虚血耐性の増強と関連している。
Ｔｐｏは、虚血の発生後、すなわち症候の発生後に与えた場合、傷害からの保護をもたらす。心筋梗塞の症候を受けている患者または心臓手術を受ける前後の患者においては、心臓に対する虚血性傷害を軽減するためにＴｐｏを急性投与することができる。このように、Ｔｐｏは即時に心臓保護を増強するための重要かつ強力な薬剤であると言える。
Ｔｐｏにより達成される心臓保護のレベルは虚血前処置によって付与されるものに匹敵する(Baker, et al., Circulation 99:1249-1254, 1999)。虚血前処置は強力な内因性の現象であり、有害に至らない虚血性発作の短時間の挿入がより長期の致死的虚血に対する大きな保護を誘導する。虚血前処置の基礎にある分子機構はまだ解明されておらず、虚血前処置の臨床適用はまだどちらとも言えず、治療戦略として広く受け入れられるに至っていない。
虚血に対する薬理学的前処置は、心臓保護の増強を担う分子機構を利用するより実用的な方法を与える。本試験は、Ｔｐｏによる薬理学的前処置が有効であり、心臓手術や血管形成術中に遭遇するような随意的な心筋虚血の状況での新規な心臓保護戦略となることを示した。有利なことに、Ｔｐｏは現在、ヒトの臨床使用に認可されており、利用可能である。この十分許容される化合物は、遺伝子に基づく多くの療法で必要であるような精密な薬物送達系を必要としない。
これらの結果は、Ｔｐｏが虚血に対して心臓を薬理学的に前処置するための好適な外因性薬剤であることを示す。これらの結果はさらに、心臓保護を付与するために、Ｔｐｏは、例えば、心臓手術、血管形成術または移植用ドナー心臓の保存などの計画的虚血イベントを含む虚血発作前に与えるのが有利である。
実施例２：虚血発生前に与えた場合の、局部的心筋虚血に対するトロンボポエチンの即時心臓保護作用に関するin vivo試験
冠動脈結紮モデルを用いてＴｐｏの即時保護作用を示した。本試験に用いた動物は成体雄Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラット（２００〜３５０ｇ、一般に３００ｇ）であった。動物は標準的な条件下で飼育し、餌は自由に摂取させた。The Animal Care and Use Committee of the Medical College of Wisconsinは、国立衛生研究所が採択した規制に従って行った全ての手順を認可した。
冠動脈結紮モデルを用いてＴｐｏの即時保護作用を示した。本試験に用いた動物は成体雄Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラット（２００〜３５０ｇ、一般に３００ｇ）であった。動物は標準的な条件下で飼育し、餌は自由に摂取させた。The Animal Care and Use Committee of the Medical College of Wisconsinは、国立衛生研究所が採択した規制に従って行った全ての手順を認可した。
ラットをナトリウムペントバルビタール（５０ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｐ．）で麻酔した。ヘパリン（１５０Ｕ／ｋｇ ｉ．ｐ．）を投与して、冠動脈中の血栓の形成を防いだ。６−０プロレン縫合糸を用いて左主動脈を結紮することで心筋梗塞を起こした（例えば、Clements-Jewerv, et al., Br. J. Pharmacol. 135:807-815, 2002; Farkas, et al., J. Cardiovasc. Pharmacol. 39:412-424, 2002参照）。左主冠動脈を特定し、オクルダーとして働かせるため、ポリエチレンチューブに通した５−０プロレン縫合糸で結紮した。対照群は、左主冠動脈に縫合糸を通しただけの擬似手術心臓を含んだ。
動物を虚血発生前１５分間、Ｔｐｏ（０．００５〜０．５マイクログラム／ｋｇ）の静脈投与で処置した。オクルダーを締め、それを緩めることで局部的虚血と再潅流を誘発した。次に、心臓に対して３０分の局部的虚血と続いて３時間の再潅流を行った。３時間再潅流時に左心室拡張期圧の回復および梗塞サイズ／リスク面積を用い、心筋虚血に対する耐性を評価した。梗塞サイズの同定のため、心臓を３７℃にて、トリフェニルテトラゾリウムクロリド（ＳＩＧＭＡ）を含有する重炭酸バッファー１０ｍｌで潅流した。
心臓を頂部から房室溝へと横断面として２ｍｍの切片にした。各切片を記録し、ホルマリンに入れた。２４時間後、マウントカメラでこの標本のデジタル写真を撮り、標本とレンズの距離をノーマライズした。次に、各写真をＡｄｏｂｅ Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐ（Ａｄｏｂｅ（商標））に追加し、非梗塞面積に対する梗塞面積の画素密度を測定した。各スライドの梗塞のパーセンテージを全心臓面積のパーセンテージとして表した。全ての標本のパーセンテージを合計すると、各動物の全梗塞パーセンテージとなる。
各群間で体重、心臓重またはリスク領域に有意な差はなかった。心拍数、平均動脈圧、心拍数×血圧(rate pressure product)をベースライン、虚血１５分および再潅流２時間で定量し、各群について非処置擬似手術ラットと比較した（表２）。擬似手術と比べた際、いくつかの群で平均動脈圧および心拍数×血圧に有意な差が見られた。各群について全左動脈重と比較してリスク面積を算出した。群間で有意差は見られなかった（データは示されていない）。
図８は、左主冠動脈の結紮により誘発されるin vivo局部的心筋虚血の１５分前にＴｐｏを投与した際の心筋梗塞サイズの軽減を示す。Ｔｐｏは「Ｕ」型濃度依存様式で虚血後梗塞サイズを軽減した。梗塞サイズの最大の軽減をもたらした最適濃度は０．０５μｇ／ｋｇで見られた（図８）。
実施例３：虚血発生後に投与した場合の、局部的心筋虚血に対するトロンボポエチンの即時心臓保護作用に関するin vivo試験
冠動脈結紮モデルを用いてＴｐｏの即時保護作用を示した。本試験に用いた動物は成体雄Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラット（２００〜３５０ｇ、一般に３００ｇ）であった。動物は標準的な条件下で飼育し、餌は自由に摂取させた。The Animal Care and Use Committee of the Medical College of Wisconsinは、国立衛生研究所が採択した規制に従って行った全ての手順を認可した。
冠動脈結紮モデルを用いてＴｐｏの即時保護作用を示した。本試験に用いた動物は成体雄Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラット（２００〜３５０ｇ、一般に３００ｇ）であった。動物は標準的な条件下で飼育し、餌は自由に摂取させた。The Animal Care and Use Committee of the Medical College of Wisconsinは、国立衛生研究所が採択した規制に従って行った全ての手順を認可した。
６−０プロレン縫合糸を用いて左主動脈を結紮することで心筋梗塞を起こした（例えば、Clements-Jewerv, et al., 前掲, 2002; Farkas, et al., 前掲, 2002参照）。ラットをナトリウムペントバルビタール（５０ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｐ．）で麻酔した。左主冠動脈を特定し、オクルダーとして働かせるため、ポリエチレンチューブに通した５−０プロレン縫合糸で結紮した。対照群は、左主冠動脈に縫合糸を通しただけの擬似手術心臓を含んだ。
オクルダーを締め、それを緩めることで局部的虚血と再潅流を誘発した。次に、心臓に対して３０分の局部的虚血と続いて３時間の再潅流を行った。３時間再潅流時に左心室拡張期圧の回復および梗塞サイズ／リスク面積を用い、心筋虚血に対する耐性を評価した。梗塞サイズの同定のため、心臓を３７℃にて、トリフェニルテトラゾリウムクロリド（ＳＩＧＭＡ）を含有する重炭酸バッファー１０ｍｌで潅流した。
心臓を頂部から房室溝へと横断面として２ｍｍの切片にした。各切片を記録し、ホルマリンに入れた。２４時間後、マウントカメラでこの標本のデジタル写真を撮り、標本とレンズの距離をノーマライズした。次に、各写真をＡｄｏｂｅ Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐ（Ａｄｏｂｅ（商標））に追加し、非梗塞面積に対する梗塞面積の画素密度を測定した。各スライドの梗塞のパーセンテージを全心臓面積のパーセンテージとして表した。全ての標本のパーセンテージを合計すると、各動物の全梗塞パーセンテージとなる。
各群間で体重、心臓重またはリスク領域に有意な差はなかった。心拍数、平均動脈圧、心拍数×血圧(rate pressure product)をベースライン、虚血１５分および再潅流２時間で定量し、各群について非処置擬似手術ラットと比較した（表２）。擬似手術と比べた際、いくつかの群で平均動脈圧および心拍数×血圧に有意な差が見られた。各群について全左動脈重と比較してリスク面積を算出した。群間で有意差は見られなかった（データは示されていない）。
図９は、左主冠動脈の結紮により誘発されるin vivoにおける３０分の局部的心筋虚血後の潅流１５分前にＴｐｏ（０．０５μｇ／ｋｇ）を投与した際の心筋梗塞サイズの軽減を示す。
実施例４：再潅流後に投与した場合の、局部的心筋虚血に対するトロンボポエチンの即時心臓保護作用に関するin vivo試験
冠動脈結紮モデルを用いてＴｐｏの即時保護作用を示した。本試験に用いた動物は成体雄Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラット（２００〜３５０ｇ、一般に３００ｇ）であった。動物は標準的な条件下で飼育し、餌は自由に摂取させた。The Animal Care and Use Committee of the Medical College of Wisconsinは、国立衛生研究所が採択した規制に従って行った全ての手順を認可した。
冠動脈結紮モデルを用いてＴｐｏの即時保護作用を示した。本試験に用いた動物は成体雄Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラット（２００〜３５０ｇ、一般に３００ｇ）であった。動物は標準的な条件下で飼育し、餌は自由に摂取させた。The Animal Care and Use Committee of the Medical College of Wisconsinは、国立衛生研究所が採択した規制に従って行った全ての手順を認可した。
６−０プロレン縫合糸を用いて左主動脈を結紮することで心筋梗塞を起こした（例えば、Clements-Jewerv, et al., 前掲, 2002; Farkas, et al., 前掲, 2002参照）。ラットをナトリウムペントバルビタール（５０ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｐ．）で麻酔した。左主冠動脈を特定し、オクルダーとして働かせるため、ポリエチレンチューブに通した５−０プロレン縫合糸で結紮した。対照群は、左主冠動脈に縫合糸を通しただけの擬似手術心臓を含んだ。
オクルダーを締め、それを緩めることで局部的虚血と再潅流を誘発した。次に、心臓に対して３０分の局部的虚血と続いて３時間の再潅流を行った。３時間再潅流時に左心室拡張期圧の回復および梗塞サイズ／リスク面積を用い、心筋虚血に対する耐性を評価した。梗塞サイズの同定のため、心臓を３７℃にて、トリフェニルテトラゾリウムクロリド（ＳＩＧＭＡ）を含有する重炭酸バッファー１０ｍｌで潅流した。
各群間で体重、心臓重またはリスク領域に有意な差はなかった。心拍数、平均動脈圧、心拍数×血圧(rate pressure product)をベースライン、虚血１５分および再潅流２時間で定量し、各群について非処置擬似手術ラットと比較した（表２）。擬似手術と比べた際、いくつかの群で平均動脈圧および心拍数×血圧に有意な差が見られた。各群について全左動脈重と比較してリスク面積を算出した。群間で有意差は見られなかった（データは示されていない）。
図１０は、左主冠動脈の結紮により誘発されるin vivoにおける３０分の局部的心筋虚血後の潅流の後１０秒でＴｐｏを投与した際の心筋梗塞サイズの軽減を示す。
実施例５：局部的心筋虚血に対するトロンボポエチンの遅延型心臓保護作用に関するin vivo試験
冠動脈結紮モデルを用いてＴｐｏの遅延型保護作用を示した。本試験に用いた動物は成体雄Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラット（２００〜３５０ｇ、一般に３００ｇ）であった。動物は標準的な条件下で飼育し、餌は自由に摂取させた。
冠動脈結紮モデルを用いてＴｐｏの遅延型保護作用を示した。本試験に用いた動物は成体雄Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラット（２００〜３５０ｇ、一般に３００ｇ）であった。動物は標準的な条件下で飼育し、餌は自由に摂取させた。
ラットをナトリウムペントバルビタール（５０ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｐ．）で麻酔した。ヘパリン（１５０Ｕ／ｋｇ ｉ．ｐ．）を投与して、冠動脈中の血栓の形成を防いだ。６−０プロレン縫合糸を用いて左主動脈を結紮することで心筋梗塞を起こした（例えば、Clements-Jewerv, et al., 前掲, 2002; Farkas, et al., 前掲, 2002参照）。左主冠動脈を特定し、オクルダーとして働かせるため、ポリエチレンチューブに通した５−０プロレン縫合糸で結紮した。対照群は、左主冠動脈に縫合糸を通しただけの擬似手術心臓を含んだ。
動物をＴｐｏ（０．０５マイクログラム／ｋｇ）の腹膜内投与で処置し、これらの動物を虚血の発生前に２４時間回復させた。オクルダーを締め、それを緩めることで局部的虚血と再潅流を誘発した。次に、心臓に対して３０分の局部的虚血と続いて３時間の再潅流を行った。３時間再潅流時に左心室拡張期圧の回復および梗塞サイズ／リスク面積を用い、心筋虚血に対する耐性を評価した。梗塞サイズの同定のため、心臓を３７℃にて、トリフェニルテトラゾリウムクロリド（ＳＩＧＭＡ）を含有する重炭酸バッファー１０ｍｌで潅流した。
各群間で体重、心臓重またはリスク領域に有意な差はなかった。心拍数、平均動脈圧、心拍数×血圧(rate pressure product)をベースライン、虚血１５分および再潅流２時間で定量し、各群について非処置擬似手術ラットと比較した（表２）。擬似手術と比べた際、いくつかの群で平均動脈圧および心拍数×血圧に有意な差が見られた。各群について全左動脈重と比較してリスク面積を算出した。群間で有意差は見られなかった（データは示されていない）。
図１１は、左主冠動脈の結紮により誘発されるin vivoにおける３０分の局部的心筋虚血の２４時間前にＴｐｏを投与した際の心筋梗塞サイズの軽減を示す。
実施例６：トロンボポエチン処置は血小板総数およびヘマトクリットの増加をもたらさない
in vivoにおいて即時型および遅延型の心臓保護を付与するＴｐｏの単回投与が血小板総数の増加をもたらしたかどうかを調べるため、ラットをＴｐｏ（０．０５μｇ／ｋｇ ｉ．ｖ．）で前処置した。処置前の未処置ラットの血小板総数は８５０±９６ １０３／μｌであり、未処置ラットのヘマトクリットは４３．８±１．８％であった。図１２Ａ／Ｂは、Ｔｐｏ処置の後、血小板総数およびヘマトクリットの値は１４日の追跡期間の間変化しなかった。
in vivoにおいて即時型および遅延型の心臓保護を付与するＴｐｏの単回投与が血小板総数の増加をもたらしたかどうかを調べるため、ラットをＴｐｏ（０．０５μｇ／ｋｇ ｉ．ｖ．）で前処置した。処置前の未処置ラットの血小板総数は８５０±９６ １０３／μｌであり、未処置ラットのヘマトクリットは４３．８±１．８％であった。図１２Ａ／Ｂは、Ｔｐｏ処置の後、血小板総数およびヘマトクリットの値は１４日の追跡期間の間変化しなかった。
本発明者らの試験に用いた即時型および遅延型の心臓保護を付与するための０．０５μｇ／ｋｇというＴｐｏ用量は癌患者で血小板の産生を刺激するため(Vadhan-Raj, et al., Ann. Intern. Med. 126:673-681, 1997)、また末梢血前駆体細胞を可動化するため(Gajewski, et al., Biol. Blood Marrow Transplant. 8:550-556, 2002; Linker, et al, Biol. Blood Marrow Transplant. 9:405-413, 2003)にヒトで用いられるもののおよそ１０倍少ない。最初のヒト試験では、１〜５μｇ／ｋｇのＴｐｏ用量は血小板産生を健常個体の、また、悪性腫瘍の化学療法を受けようとしている人の５〜１０倍増強した。同様にラットでも、その用量のペグ化Ｔｐｏを用いて血小板減少症を軽減し（１００μｇ／ｋｇ）(Harada, et al., J. Pharm. Pharmacol. 52:321-325, 2000)、カルボプラチン処置ラットの血小板減少症を緩和し（１〜３０μｇ／ｋｇ）、Ide, et al., Int. J. Hematol. 70:91-96, 1999もまた、本発明者らが用いた用量よりもかなり高い。本発明者らが用いたＴｐｏ（０．０５μｇ／ｋｇ）の１回投与では、１４日の追跡期間の間、血小板総数およびヘマトクリットを上昇させなかった。
図１３Ａ／Ｂは、血小板総数およびヘマトクリットに対するＴｐｏ（１．０μｇ／ｋｇ ｉ．ｖ．）の１回投与を評価した追加データのプロットである（平均値±標準偏差、ｎ＋６／群）。
法に従い、本発明を構造的特徴および方法論的特徴について言語で記載した。しかしながら、本明細書に開示される手段は本発明を達成する好ましい形態を含むので、本発明は、示され、記載されている特定の特徴に限定されるものではないと理解すべきである。従って、本発明は、均等性の原則に従って適宜解釈される付属の特許請求の範囲の適切な範囲内にあるそのいずれかの形態または改変形においても請求される。
法に従い、本発明を構造的特徴および方法論的特徴について言語で記載した。しかしながら、本明細書に開示される手段は本発明を達成する好ましい形態を含むので、本発明は、示され、記載されている特定の特徴に限定されるものではないと理解すべきである。従って、本発明は、均等性の原則に従って適宜解釈される付属の特許請求の範囲の適切な範囲内にあるそのいずれかの形態または改変形においても請求される。
Claims (18)
- 虚血の有害作用から哺乳類組織または器官を保護する方法であって、
（ａ）トロンボポエチン受容体リガンドを哺乳類患者に虚血の有害作用の軽減に有効な量で投与することを含んでなり、患者の血小板総数の上昇が１０％未満である、方法。 - 上昇が１％未満である、請求項１に記載の方法。
- リガンドがヒトトロンボポエチンである、請求項１に記載の方法。
- ０．８〜８０マイクログラムのＴｐｏ受容体リガンドが投与される、請求項１に記載の方法。
- 有効量のリガンドがＴｐｏ受容体リガンド血中レベル０．１〜１０．０ｎｇ／ｍｌをもたらす、請求項３に記載の方法。
- リガンドが天然に存在するトロンボポエチン、組換えトロンボポエチンおよび哺乳類トロンボポエチンの改変体に実質的に匹敵する生理学的および生物学的特性を有するトロンボポエチンの改変体からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
- ２〜６マイクログラムのＴｐｏ受容体リガンドを含んでなる医薬投与量が投与される、請求項１に記載の方法。
- リガンドが薬学上許容される担体をさらに含んでなる、請求項１に記載の方法。
- リガンドがドナー器官に供給される、請求項１に記載の方法。
- リガンドが虚血イベントの発生時または虚血イベントの後に投与される、請求項１に記載の方法。
- リガンドが虚血イベントの前に投与される、請求項１に記載の方法。
- リガンドが経口、静脈内、皮下、筋肉内、腹腔内、経皮、鼻腔または坐剤からなる群から選択される方法で投与される、請求項１に記載の方法。
- （ｂ）患者の血小板総数を評価することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
- （ｂ）虚血の有害作用の軽減を評価することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
- 哺乳類組織器官を虚血の有害作用から保護する量のＴｐｏ受容体リガンドエフェクターを含んでなり、０．６〜６０マイクログラムのＴｐｏ受容体リガンドを含む、医薬組成物。
- 組成物が３〜５マイクログラムのＴｐｏ受容体リガンドを含む、請求項１５に記載の組成物。
- Ｔｐｏ受容体リガンドが天然トロンボポエチンおよび組換えトロンボポエチンからなる群から選択される、請求項１５に記載の組成物。
- Ｔｐｏ受容体リガンドがヒトトロンボポエチンからなる群から選択される、請求項１５に記載の組成物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US76115006P | 2006-01-23 | 2006-01-23 | |
| PCT/US2007/001591 WO2007087241A2 (en) | 2006-01-23 | 2007-01-22 | Treatment of ischemic disease using thrombopoietin |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2009523818A true JP2009523818A (ja) | 2009-06-25 |
Family
ID=38191083
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2008551445A Pending JP2009523818A (ja) | 2006-01-23 | 2007-01-22 | 虚血性疾患からの保護方法 |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US7879318B2 (ja) |
| EP (1) | EP1996219A2 (ja) |
| JP (1) | JP2009523818A (ja) |
| KR (1) | KR20080091375A (ja) |
| AU (1) | AU2007208415A1 (ja) |
| BR (1) | BRPI0707197A2 (ja) |
| CA (1) | CA2636426A1 (ja) |
| MX (1) | MX2008009208A (ja) |
| WO (1) | WO2007087241A2 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2017119152A (ja) * | 2010-08-12 | 2017-07-06 | ハートフロー， インコーポレイテッド | 患者固有の血流のモデリングのための方法およびシステム |
| US10354050B2 (en) | 2009-03-17 | 2019-07-16 | The Board Of Trustees Of Leland Stanford Junior University | Image processing method for determining patient-specific cardiovascular information |
| US11107587B2 (en) | 2008-07-21 | 2021-08-31 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Method for tuning patient-specific cardiovascular simulations |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20090143453A1 (en) * | 2003-04-29 | 2009-06-04 | Connie Erickson-Miller | Methods for treating degenerative diseases/injuries |
| US20090298179A1 (en) * | 2003-04-29 | 2009-12-03 | Connie Erickson-Miller | Methods For Treating Degenerative Diseases/Injuries |
| US20090048318A1 (en) * | 2003-04-29 | 2009-02-19 | Connie Erickson-Miller | Methods for treating degenerative diseases/injuries |
| US20100004302A1 (en) * | 2003-04-29 | 2010-01-07 | Connie Erickson-Miller | Methods for Treating Degenerative Diseases/Injuries |
| US7879318B2 (en) * | 2006-01-23 | 2011-02-01 | Mcw Research Foundation, Inc. | Method of reducing the effects of ischemia by administration of a thrombopoietin receptor ligand |
| US20150031623A1 (en) * | 2011-09-29 | 2015-01-29 | Mcw Research Foundation, Inc. | Thrombopoietin receptor ligands for neuroprotection |
| US10531655B2 (en) | 2011-12-02 | 2020-01-14 | The Regents Of The University Of California | Reperfusion protection solution and uses thereof |
| RU2480152C1 (ru) * | 2012-03-20 | 2013-04-27 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Тверская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения Российской Федерации" | Способ оценки снижения коронарного резерва у пациентов с безболевой ишемией миокарда |
| KR20160083705A (ko) | 2015-01-02 | 2016-07-12 | 서영임 | 반응형 이모티콘을 이용한 이모티콘 송수신 방법 |
Family Cites Families (34)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU4190893A (en) | 1992-07-17 | 1994-01-20 | Suntory Limited | Megakaryocyte differentiation factor |
| IL139335A (en) | 1994-01-03 | 2005-08-31 | Genentech Inc | Mpl ligand polypeptides, nucleic acids encoding them, vectors and host cells comprising such nucleic acids, processes for producing such polypeptides pharmaceutical compositions containing them and use thereof in the preparation of medicaments for treating thrombocytopenia |
| US5498599A (en) | 1994-01-21 | 1996-03-12 | Amgen Inc. | Methods for stimulating platelet production |
| WO1995021626A1 (en) | 1994-02-14 | 1995-08-17 | University Of Washington | Methods for stimulating erythropoiesis using thrombopoietin |
| US5593666A (en) * | 1994-08-16 | 1997-01-14 | The University Of Tennessee Research Corp. | Methods and compositions for treating thrombocytopenia |
| US5986049A (en) * | 1994-12-30 | 1999-11-16 | Zymogenetics, Inc. | Purified thrombopoietin and method of making it |
| US5696250A (en) | 1995-02-15 | 1997-12-09 | Amgen Inc. | DNA encoding megakaryocyte growth and development factor analogs |
| US5989538A (en) | 1995-02-15 | 1999-11-23 | Amgen Inc. | Mpl ligand analogs |
| US5869451A (en) | 1995-06-07 | 1999-02-09 | Glaxo Group Limited | Peptides and compounds that bind to a receptor |
| PL188795B1 (pl) | 1995-06-07 | 2005-04-29 | Glaxo Group Ltd | Związek wiążący się z receptorem trombopoetyny, kompozycja farmaceutyczna i zastosowanie związku wiążącego się z receptorem trombopoetyny |
| US6790439B1 (en) | 1995-06-07 | 2004-09-14 | Zymogenetics, Inc. | Thrombopoietin compositions |
| US6251864B1 (en) | 1995-06-07 | 2001-06-26 | Glaxo Group Limited | Peptides and compounds that bind to a receptor |
| US5744587A (en) * | 1995-06-07 | 1998-04-28 | Zymogenetics, Inc. | Method for purifying thrombopoietin |
| US5879673A (en) | 1996-01-25 | 1999-03-09 | Genentech, Inc. | Administration of thrombopoietin on a single day only |
| US7091311B2 (en) | 1996-06-07 | 2006-08-15 | Smithkline Beecham Corporation | Peptides and compounds that bind to a receptor |
| US5932546A (en) | 1996-10-04 | 1999-08-03 | Glaxo Wellcome Inc. | Peptides and compounds that bind to the thrombopoietin receptor |
| RU2230751C2 (ru) | 1997-11-26 | 2004-06-20 | Чугаи Сейяку Кабусики Кайся | Пептид mpi без сигнальной последовательности, днк, его кодирующая, вектор, способ определения способности к секретированию тестируемого пептида, способ выделения кднк |
| US6776984B1 (en) * | 1999-08-20 | 2004-08-17 | George R. Schwartz | Induced regeneration and repair of damaged neurons and nerve axon myelin |
| TWI284639B (en) * | 2000-01-24 | 2007-08-01 | Shionogi & Co | A compound having thrombopoietin receptor agonistic effect |
| JP3966816B2 (ja) | 2000-05-30 | 2007-08-29 | 中外製薬株式会社 | トロンボポエチン様活性を有する化合物 |
| EP1339680A1 (en) | 2000-09-01 | 2003-09-03 | Glaxo Group Limited | Substituted oxindole derivatives as tyrosine kinase inhibitors |
| US6531121B2 (en) * | 2000-12-29 | 2003-03-11 | The Kenneth S. Warren Institute, Inc. | Protection and enhancement of erythropoietin-responsive cells, tissues and organs |
| EP1354880A4 (en) | 2001-01-26 | 2004-08-25 | Shionogi & Co | HALOGEN COMPOUNDS HAVING AGONISM TOWARDS THROMBOPOIETIN RECEPTOR |
| WO2002059099A1 (fr) | 2001-01-26 | 2002-08-01 | Shionogi & Co., Ltd. | Composes cycliques presentant un agonisme envers le recepteur de thrombopoietine |
| PL363520A1 (en) | 2001-02-26 | 2004-11-29 | Merck Patent Gmbh | Modified thrombopoietin with reduced immunogenicity |
| US20040136980A1 (en) | 2002-04-02 | 2004-07-15 | Soltis Daniel A | Thrombopoietin(tpo) synthebody for stimulation of platelet production |
| WO2003101276A2 (en) * | 2002-05-22 | 2003-12-11 | Virginia Commonwealth University | Protective effects of pde-5 inhibitors |
| US20040198663A1 (en) | 2003-04-04 | 2004-10-07 | Baker John E. | Method of treating cardiac ischemia by using erythropoietin |
| US20070105824A1 (en) | 2003-04-29 | 2007-05-10 | Erickson-Miller Connie L | Methods for treating degenerative diseases/injuries |
| TW200526638A (en) | 2003-10-22 | 2005-08-16 | Smithkline Beecham Corp | 2-(3,4-dimethylphenyl)-4-{[2-hydroxy-3'-(1H-tetrazol-5-yl)biphenyl-3-yl]-hydrazono}-5-methyl-2,4-dihydropyrazol-3-one choline |
| WO2006062240A1 (en) * | 2004-12-08 | 2006-06-15 | Nissan Chemical Industries, Ltd. | 3-ethylidenehydrazino substituted heterocyclic compounds as thrombopoietin receptor activators |
| AU2006270801B2 (en) | 2005-07-15 | 2011-12-22 | Nissan Chemical Industries, Ltd. | Thiophene compounds and thrombopoietin receptor activators |
| US7960425B2 (en) | 2005-07-20 | 2011-06-14 | Nissan Chemical Industries, Ltd. | Pyrazole compounds and thrombopoietin receptor activators |
| US7879318B2 (en) * | 2006-01-23 | 2011-02-01 | Mcw Research Foundation, Inc. | Method of reducing the effects of ischemia by administration of a thrombopoietin receptor ligand |
-
2007
- 2007-01-17 US US11/624,030 patent/US7879318B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2007-01-22 KR KR1020087020551A patent/KR20080091375A/ko not_active Application Discontinuation
- 2007-01-22 MX MX2008009208A patent/MX2008009208A/es not_active Application Discontinuation
- 2007-01-22 JP JP2008551445A patent/JP2009523818A/ja active Pending
- 2007-01-22 CA CA002636426A patent/CA2636426A1/en not_active Abandoned
- 2007-01-22 BR BRPI0707197-3A patent/BRPI0707197A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2007-01-22 WO PCT/US2007/001591 patent/WO2007087241A2/en active Application Filing
- 2007-01-22 AU AU2007208415A patent/AU2007208415A1/en not_active Abandoned
- 2007-01-22 EP EP07716862A patent/EP1996219A2/en not_active Withdrawn
-
2010
- 2010-12-17 US US12/971,678 patent/US8518883B2/en not_active Expired - Fee Related
Cited By (33)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US11107587B2 (en) | 2008-07-21 | 2021-08-31 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Method for tuning patient-specific cardiovascular simulations |
| US10354050B2 (en) | 2009-03-17 | 2019-07-16 | The Board Of Trustees Of Leland Stanford Junior University | Image processing method for determining patient-specific cardiovascular information |
| US10166077B2 (en) | 2010-08-12 | 2019-01-01 | Heartflow, Inc. | Method and system for image processing to determine patient-specific blood flow characteristics |
| US12029494B2 (en) | 2010-08-12 | 2024-07-09 | Heartflow, Inc. | Method and system for image processing to determine blood flow |
| US10492866B2 (en) | 2010-08-12 | 2019-12-03 | Heartflow, Inc. | Method and system for image processing to determine blood flow |
| US10149723B2 (en) | 2010-08-12 | 2018-12-11 | Heartflow, Inc. | Method and system for image processing and patient-specific modeling of blood flow |
| US10154883B2 (en) | 2010-08-12 | 2018-12-18 | Heartflow, Inc. | Method and system for image processing and patient-specific modeling of blood flow |
| US10159529B2 (en) | 2010-08-12 | 2018-12-25 | Heartflow, Inc. | Method and system for patient-specific modeling of blood flow |
| JP2017119152A (ja) * | 2010-08-12 | 2017-07-06 | ハートフロー， インコーポレイテッド | 患者固有の血流のモデリングのための方法およびシステム |
| US10179030B2 (en) | 2010-08-12 | 2019-01-15 | Heartflow, Inc. | Method and system for patient-specific modeling of blood flow |
| US10321958B2 (en) | 2010-08-12 | 2019-06-18 | Heartflow, Inc. | Method and system for image processing to determine patient-specific blood flow characteristics |
| US10327847B2 (en) | 2010-08-12 | 2019-06-25 | Heartflow, Inc. | Method and system for patient-specific modeling of blood flow |
| US10080613B2 (en) | 2010-08-12 | 2018-09-25 | Heartflow, Inc. | Systems and methods for determining and visualizing perfusion of myocardial muscle |
| US10376317B2 (en) | 2010-08-12 | 2019-08-13 | Heartflow, Inc. | Method and system for image processing and patient-specific modeling of blood flow |
| US10441361B2 (en) | 2010-08-12 | 2019-10-15 | Heartflow, Inc. | Method and system for image processing and patient-specific modeling of blood flow |
| US10478252B2 (en) | 2010-08-12 | 2019-11-19 | Heartflow, Inc. | Method and system for patient-specific modeling of blood flow |
| US10092360B2 (en) | 2010-08-12 | 2018-10-09 | Heartflow, Inc. | Method and system for image processing and patient-specific modeling of blood flow |
| US10682180B2 (en) | 2010-08-12 | 2020-06-16 | Heartflow, Inc. | Method and system for patient-specific modeling of blood flow |
| US10080614B2 (en) | 2010-08-12 | 2018-09-25 | Heartflow, Inc. | Method and system for image processing to determine patient-specific blood flow characteristics |
| US10702339B2 (en) | 2010-08-12 | 2020-07-07 | Heartflow, Inc. | Method and system for patient-specific modeling of blood flow |
| US10702340B2 (en) | 2010-08-12 | 2020-07-07 | Heartflow, Inc. | Image processing and patient-specific modeling of blood flow |
| US11033332B2 (en) | 2010-08-12 | 2021-06-15 | Heartflow, Inc. | Method and system for image processing to determine blood flow |
| US11083524B2 (en) | 2010-08-12 | 2021-08-10 | Heartflow, Inc. | Method and system for patient-specific modeling of blood flow |
| US11090118B2 (en) | 2010-08-12 | 2021-08-17 | Heartflow, Inc. | Method and system for image processing and patient-specific modeling of blood flow |
| US10052158B2 (en) | 2010-08-12 | 2018-08-21 | Heartflow, Inc. | Method and system for image processing to determine patient-specific blood flow characteristics |
| US11116575B2 (en) | 2010-08-12 | 2021-09-14 | Heartflow, Inc. | Method and system for image processing to determine blood flow |
| US11135012B2 (en) | 2010-08-12 | 2021-10-05 | Heartflow, Inc. | Method and system for image processing to determine patient-specific blood flow characteristics |
| US11154361B2 (en) | 2010-08-12 | 2021-10-26 | Heartflow, Inc. | Method and system for image processing to determine blood flow |
| US11298187B2 (en) | 2010-08-12 | 2022-04-12 | Heartflow, Inc. | Method and system for image processing to determine patient-specific blood flow characteristics |
| US11583340B2 (en) | 2010-08-12 | 2023-02-21 | Heartflow, Inc. | Method and system for image processing to determine blood flow |
| US11793575B2 (en) | 2010-08-12 | 2023-10-24 | Heartflow, Inc. | Method and system for image processing to determine blood flow |
| US12016635B2 (en) | 2010-08-12 | 2024-06-25 | Heartflow, Inc. | Method and system for image processing to determine blood flow |
| US10531923B2 (en) | 2010-08-12 | 2020-01-14 | Heartflow, Inc. | Method and system for image processing to determine blood flow |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20070173449A1 (en) | 2007-07-26 |
| US7879318B2 (en) | 2011-02-01 |
| US8518883B2 (en) | 2013-08-27 |
| BRPI0707197A2 (pt) | 2011-04-26 |
| KR20080091375A (ko) | 2008-10-10 |
| AU2007208415A1 (en) | 2007-08-02 |
| US20110218144A1 (en) | 2011-09-08 |
| EP1996219A2 (en) | 2008-12-03 |
| CA2636426A1 (en) | 2007-08-02 |
| WO2007087241A3 (en) | 2007-09-13 |
| MX2008009208A (es) | 2008-10-09 |
| WO2007087241A2 (en) | 2007-08-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2009523818A (ja) | 虚血性疾患からの保護方法 | |
| US7829097B2 (en) | Use of HMGB1 for protection against ischemia reperfusion injury | |
| CA1341060C (en) | Use of amylin agonists in the treatment of diabetes mellitus | |
| JPH11511174A (ja) | 血管形成の促進方法 | |
| US20100272684A1 (en) | Hyperbaric treatment in wound healing | |
| US20060094648A1 (en) | Methods for treating or preventing ischemic injury | |
| US7504379B2 (en) | Protection of cardiac myocardium | |
| CA2539440A1 (en) | Tissue protective cytokines for the treatment and prevention of sepsis and the formation of adhesions | |
| US8361966B2 (en) | Use of interleukin-11 as therapeutic agent for heart disease | |
| JP5329729B2 (ja) | 脈管形成に有効な単位用量のｆｇｆ−２および使用方法 | |
| CA2304956C (en) | Pharmaceutical composition for preventing or treating ischemic diseases | |
| CA2625888C (en) | Method of treating acute renal failure with thrombomodulin variant | |
| US20040198663A1 (en) | Method of treating cardiac ischemia by using erythropoietin | |
| US8106009B2 (en) | Pharmaceutical composition for preventing or treating ischemic diseases | |
| AU2003200309B2 (en) | Pharmaceutical Composition for Preventing or Treating Ischaemic Diseases | |
| US20100099602A1 (en) | Pharmaceutical compositions and methods of use for the prevention and treatment of hypoxic injury | |
| WO2024189056A1 (en) | Annexin a1 administration regime | |
| JPH083065A (ja) | 肝臓障害に対する治療剤 | |
| US20170072012A1 (en) | Use of gsmtx4 to reduce ischemia reperfusion injury |