JP2009511446A - インスリンレセプターアンタゴニストと、関連した組成物、使用及び方法 - Google Patents

Abstract

新規のペプチドインスリンレセプターアンタゴニスト(ＰＩＲＡ)及び関連の化合物及び組成物が提供される。また、ＰＩＲＡの新規の使用方法及びＰＩＲＡの入手方法も提供する。

Description

（発明の分野）
本発明は、インスリンレセプターアンタゴニスト活性を有する分子、関連した薬剤的組成物、それに関する更なる組成物、このような組成物及び分子の使用、及び様々な他の関連した方法に関する。

（発明の背景）
インスリンは、グルコースホメオスタシスを維持する際に重要であるために最も研究されたペプチドホルモンのうちの一つである。この５１ａａホルモンは、結晶及び溶液の両方においてその構造に非常に特徴がある。

インスリンに対する細胞性応答はインスリンレセプターが媒介しており、そのレセプターは、インスリンを結合する２つの同一の細胞外α-サブユニットと細胞内チロシンキナーゼ活性を有する２つの同一の膜貫通β-サブユニットからなる四量体タンパク質である。Goldfine, Endocr. Rev., 8:235 (1987)。インスリンがα-サブユニットと結合すると、β-サブユニットチロシンキナーゼが活性化され、インスリン作用が生じる(細胞内シグナル伝達現象のカスケードが生じる)。

高インスリン血症は、血中の異常に高いレベルのインスリンによって定められる状態である。高インスリン血症の原因は、インスリノーマ及びインスリン耐性が含まれ、先天的な高インスリン血症ないしは他の症状、例として、活動の欠如、肥満ないしは多嚢胞性卵巣症候群によって生じうる。インスリノーマは、過剰な量のインスリンを生産する膵臓の腫瘍である。高いインスリンレベルによって、低血糖又は低血液グルコース(糖質)が生じる。高インスリン血症は、生まれて最初の数時間後に生じる新生児低血糖の一般的な原因である。このような症状の治療は、発作及び神経性後遺症の発症を予防するために必要であることが多い。

通常は、低血糖は軽度であるかもしれず、不安及び空腹感のような症状が引き起こされるが、患者は重度の低血糖のリスクにも曝され、その低血糖により発作、昏睡及び死までもが生じうる。患者が訴える低血糖と関係している代表的な症状には、疲労、脱力感、震え及び空腹などがある。多くの患者は、頻繁に食餌を摂り、低血糖による症状を防がなくてはならない。患者の中には、低血糖であるために精神学的な症状を起こすものもいる。

現在、インスリノーマ又は他の重度の高インスリン血症を有する患者は、部分的膵臓切除のような手術によって、又は、場合によってインスリン産生を低減するジアゾキシド又はソマトスタチンなどの薬剤の投与によって治療される。場合によってグルコースが連続的に注入されなければならない。循環するインスリンの効果を低減する既存の治療はない。

特定のインスリンレセプター抗体を除いて(例としてRoth等, J Biol Chem. 1983 Oct 25;258(20): 12094-7；Morgan等, Proc Natl Acad Sci U S A. 1986 Jan;83(2): 328-32；Taylor等, Biochem J. 1987 Feb 15;242(1): 123-9；Nagy等, Endocrinology. 1990 Jan;126(1): 45-52；及びFujita等, Acta Diabetol. 2002 Dec;39(4): 221-7を参照)、ほんのわずかなインスリンレセプター(ＩＲ)アンタゴニストが既に記載されている。例として、米国特許第２００３０２３６１９０号、同第２００３０１９５１４７号及び同第２００４００２３８８７号及びPillutla等, J. Biol. Chem. 277 (25): 22590-22594, 2002及びSchaffer等, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100 (8): 4435-4439, 2003を参照のこと。

（本発明の簡単な概要）
本明細書に記載の発明に関していくつかの態様がある。ある例示的な態様では、本発明は、インスリンレセプターアンタゴニスト活性を有する新規のペプチド、タンパク質及びタンパク質誘導体を提供する。他の態様では、本発明は、このような新規のペプチド分子を含んでなる薬剤的組成物を提供する。さらに他の態様では、本発明は、様々な更なる有用な組成物(例えばこのようなペプチドをコードする配列を含む核酸、このような核酸を含んでなるベクター及び細胞、このようなペプチド及びタンパク質などに対する抗体)を提供する。さらに他の態様では、本発明は、このような組成物及び分子の(例えば、疾患又は症状についてのスクリーニング／試験における、様々な疾患及び症状の治療における、治療用及び診断用の適用のための抗体の産生における、タンパク質模倣物質などの調製のための)新規の使用、及び様々な他の関連する方法に関する。これら及び更なる例示的な発明の態様及び本発明の特徴を、更に詳細に本明細書中で記述する。

（発明の詳細な説明）
とりわけ、本発明は、特定のアミノ酸配列を含むなどのある物理的な特徴を有する特定の新規の非抗体ペプチド、タンパク質及び関連タンパク質誘導体(「ペプチド分子」)がペプチドインスリンレセプター(ＩＲ)アンタゴニストとして有用でありうるという発見に関する(このようなペプチド分子は本明細書中で「ペプチドインスリンレセプターアンタゴニスト」又は「ＰＩＲＡ」と称することが多い)。

さらに、本発明は、本発明の一又は複数のＰＩＲＡの治療的有効量を含有してなる新規の薬学的に受容可能な組成物に関する(唯一の活性な薬剤として、又は、一又は複数の「二次」薬剤又は「第二活性薬剤」と組み合わせて)。

また、本発明は、このようなＰＩＲＡの新規な使用、例えばこのようなＰＩＲＡを用いた医薬の産生、及びＩＲ活性の減少が有益又は有用であると考えられうる症状や疾患の治療方法に関する。

しかしながら、本発明の有益な態様がいくつかある。これらの及び他の態様は、本明細書中に示す本発明の説明により当業者に明らかである。

通常、ＰＩＲＡは、(a) 式１又は式１様(「式１タイプ」又は「Ｆ１Ｔ」)アミノ酸配列(「Ｆ１ＴＳ」)、及び(b) 式６又は式６様(「式６タイプ」又は「Ｆ６Ｔ」)アミノ酸配列(「Ｆ６ＴＳ」)を含む少なくとも一の「コアモチーフ」を含むペプチド分子とみなすことができ、このＦ１ＴＳ及びＦ６ＴＳはＰＩＲＡ内に包含される(又はＰＩＲＡを組成する)ペプチド鎖において互いに近接して配位しており、ＰＩＲＡがＩＲに結合してＩＲアンタゴニストとして作用するようになっている。Ｆ１Ｔ及びＦ６Ｔ配列は本明細書中でさらに詳述する。ＰＩＲＡは、このＦ１ＴＳ／Ｆ６ＴＳ「コアモチーフ」の多くの繰り返しを含みうるか、又は１より多いＦ１ＴＳ又はＦ６ＴＳを含んでもよいが、一般的に、ＰＩＲＡは単一の「コアモチーフ」に包含される単一のＦ１ＴＳ及び単一のＦ６ＴＳを含んでなる。通常は、本明細書中で提供されるＦ１Ｔ及びＦ６Ｔ配列の考察は「コアモチーフ」に含有されるＦ１Ｔ及びＦ６Ｔ配列に関するものである。

ＰＩＲＡは一又は複数のＩＲに対して任意の適切なレベルの親和性を表しうる(好ましくは、ＰＩＲＡはヒトのＩＲに親和性を表すであろう)。一態様では、本発明は、ヒトＩＲに対してインスリンが示す親和性と同等であるヒトＩＲに対する親和性を有するＰＩＲＡを提供する(例えば、ＰＩＲＡは、インスリンの少なくともおよそ３５％、少なくともおよそ４０％、少なくともおよそ４５％、少なくともおよそ５０％、少なくともおよそ６０％、少なくともおよそ７０％、少なくともおよそ８０％、少なくともおよそ９０％、およそ１００％の親和性であるヒトＩＲへの親和性を有する)。

ＰＩＲＡは他の機能的なドメインがないと特徴付けても、特徴付けなくてもよい。
ゆえに、ある態様では、ＰＩＲＡは、生理反応(例えばＩＲ以外のレセプターの結合及び調節)を誘導するか又は促進する少なくとも一の第二ペプチドドメインを含む融合タンパク質として特徴付けてもよい。他の態様では、本発明は、このような更なるドメインがないＰＩＲＡを提供する。ある態様では、本発明は、基本的に単一の式１配列(又はＦ１ＴＳ)と単一の式６配列又はＦ６ＴＳとからなるＰＩＲＡを提供する(場合によって、適切なリンカーで分かれている及び／又は適切なＴＤＭと結合している)。

本発明において「拮抗作用(アンタゴニズム)」は、インスリン及びＩＲの存在下でインスリンの効果を検出できる程度に低減する化合物(例えばＰＩＲＡ)の能力を指す。アンタゴニストは、ＩＲへのインスリンの結合を遮断(ブロック)するか、インスリン結合の際に一又は複数のインスリン媒介性のＩＲ活性を低減するか(そのいくつかの例が十分に述べられている)、又はその両方である。通常、ＰＩＲＡは任意の検出可能なＩＲ拮抗作用を表しうる。一態様では、本発明は、インスリン媒介性のＩＲ活性を少なくともおよそ１０％、少なくともおよそ２０％、少なくともおよそ３０％、少なくともおよそ４０％、少なくともおよそ５０％、少なくともおよそ６０％以上低減するＰＩＲＡを提供する。

ある態様では、本発明は、少なくともおよそ４時間、少なくともおよそ５時間、少なくともおよそ６時間、少なくともおよそ７時間、少なくともおよそ８時間又はさらに少なくともおよそ９時間の期間、哺乳動物の宿主の血中グルコースを増加する能力及び／又はインスリンの効果を低減する能力を有するＰＩＲＡを提供する。

典型的に、ＰＩＲＡコアモチーフのＦ６ＴＳは、関連のＦ１ＴＳのＣ末端に位置しており(すなわち、Ｆ６ＴＳのＮ末端部分がＦ１ＴＳのＣ末端部分の最も近くに位置するように、コアモチーフＦ６ＴＳはＦ１ＴＳとの関連でコアモチーフ内に配位される)、ＰＩＲＡは典型的には式１、式６-定位(又はＦ１／Ｆ６定位)であると言える。

ＰＩＲＡは、一般に任意の適切なサイズ、高次構造などでありうる。ＰＩＲＡは、およそ５０アミノ酸又はそれ未満の長さ、例えばおよそ３０〜４５アミノ酸長(例えば３５〜４４アミノ酸長)の単一鎖ペプチドに特徴がありうる(典型的にはそうであり、有利なことが多い)。しかしながら、前記のサイズのＰＩＲＡ部位ないしは配列及び組成物を含むより大きなＩＲＡ含有タンパク質、多量体タンパク質、マルチペプチド鎖タンパク質誘導体又は複合のタンパク質などは、標準的な技術を用いて生成することもでき、本発明の他の特徴とみなされる。ＰＩＲＡは、ＩＲ抗体の特徴を欠いていることが特徴であるといえる。ゆえに、例えばＰＩＲＡは、典型的に、ＩＲ抗体にみられるＣＤＲ配列及びフレームワーク領域を含んでいない。さらに、ＰＩＲＡは典型的に、公知の抗ＩＲ抗体の構造を欠いている(例えば、ＩｇＧ分子の標準的な四量体構造を欠いている)。

式１配列は、配列GSLDESFYDWFERQLG(Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｐｈｅ Ｔｙｒ Ａｓｐ Ｔｒｐ Ｐｈｅ Ｇｌｕ Ａｒｇ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｙ)(配列番号：１)(式１)を含むアミノ酸配列として定められる。式１様配列は、配列番号：１と非常に類似しており(すなわち、配列番号：１に少なくともおよそ６０％、少なくともおよそ６５％、少なくともおよそ７０％、少なくともおよそ７５％、少なくともおよそ８０％、少なくともおよそ８５％、少なくともおよそ９０％、又は少なくともおよそ９５％、１００％未満の同一性を有する配列(このような類似の配列は式１様配列と称してもよい))、ＰＩＲＡ産生のためにコアモチーフ内でＦ６ＴＳと組み合わすことができる配列として定められうる。一態様では、本発明は、式１のおよそ１〜６のＮ末端残基が欠失している及び／又は置換されている(例えば、残基１〜５が欠失している、残基２〜６が欠失している、残基１〜４が欠失している、そして残基５及び６が他の適切な残基に置換されるなど)、ＰＩＲＡを提供する。ゆえに、例えば、一態様では、本発明は、基本的に配列FYDWFERQLG(配列番号：２)からなるＦ１ＴＳを含んでなるＰＩＲＡを提供する。他の態様では、本発明は、単にモチーフFYDWF(配列番号：３)を含有する配列を含むことに特徴があるＰＩＲＡを提供する。他の態様では、本発明は、式１のＡｓｐ_９残基(又はこれに相当する残基)のＧｌｙ残基(又は類似の等価残基)への置換を伴う配列を有することにも特徴があるか又はそのことに特徴があり、例えば基本的にFYGWFERQLG(配列番号：５)又はGSLDESFYGWFERQLG(配列番号：６)からなるＦ１ＴＳにおいて、ＰＩＲＡがモチーフFYGWF(配列番号：４)を含む。さらに他の態様では、本発明は、(前述の特徴の一又は複数に加えて)式１残基Ｇｌｙ_１６(又はそれに相当する残基)の欠失又はその置換にも特徴があるか、又はそれに特徴があるＦ１ＴＳを含んでなるＰＩＲＡを提供する。GSLDESFYDWFERQL(配列番号：７)、GSLDESFYGWFERQL(配列番号：８)、FYDWFERQL(配列番号：９)及びFYGWFERQL(配列番号：１０)は、前記のＦ１ＴＳの例である。さらに他の態様では、本発明は、(前述の特徴の一又は複数に加えて)式１のＡｒｇ１３(又はそれに相当する残基)の置換にも特徴があるか、又はそれに特徴があるＦ１ＴＳを含んでなるＰＩＲＡを提供する。既に示したように、これらの様々な特定の修飾が組み合わされてもよく、本発明は、例えば、式Ｘａａ_２２ Ｘａａ_２３ Ｘａａ_２４ Ｘａａ_２５ Ｘａａ_２６ Ｘａａ_２７ Ｐｈｅ Ｔｙｒ Ｘａａ_３０ Ｔｒｐ Ｐｈｅ Ｇｌｕ Ｘａａ_３４ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｘａａ_３７(配列番号：１１)に記載のＦ１ＴＳを含むことに特徴があり、このときのＸａａ_２２が場合によって本Ｇｌｙ残基である；Ｘａａ_２３が場合によって本Ｓｅｒ残基である；Ｘａａ_２４が場合によって本Ｌｅｕ残基である；Ｘａａ_２５が場合によって本Ａｓｐ残基である；Ｘａａ_２６が場合によって本Ｇｌｕ残基である；Ｘａａ_２７が場合によって本Ｓｅｒ残基である；Ｘａａ_３０がＡｓｐ又はＧｌｙ残基である；Ｘａａ_３４が任意の適切なアミノ酸残基である(ある態様では、Ｘａａ_３４は、Ｇｌｎ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ａｓｐ及びＳｅｒから選択される；他の態様では、Ｘａａ_３４が、Ａｌａ、Ｃｙｓ、Ｐｈｅ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、Ｔｒｐ及びＴｙｒから選択される；そして、さらに他の態様ではＸａａ_３４が、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｓｐ及びＧｌｕから選択される)が、典型的にはＡｒｇである(ある態様では、Ａｒｇでないことが特徴でもある)；そして、Ｘａａ_３７が場合によって本Ｇｌｙである(式１Ａ)、ＰＩＲＡを提供する。

本発明のアミノ酸配列に関する同一性は、ニードルマン−バンスク・アラインメント分析法(Needleman-Wunsch alignment analysis、Needleman and Wunsch,J.Mol.Biol.(1970)48:443-453を参照)により、例えば、初期ギャップペナルティを−１２、伸長ペナルティを−２としたＢＬＯＳＵＭ５０スコアマトリックスを使用したＡＬＩＧＮ２．０(ALIGNプログラムに組み込まれる包括的なアラインメント技術の考察については、Myers and Miller, CABIOS(1989)4:11-17を参照されたい)により決定することができる。ＡＬＩＧＮ２．０プログラムのコピーは、San Diego Supercomputer (SDSC) Biology Workbenchから入手可能である。ニードルマン−バンスク・アラインメントが２つの配列の間の総括的又は包括的な同一性を測定するので、より大きなペプチド配列の一部又は続きであり得る標的配列が完全な配列に類似した方法に使用されてよく、あるいは、局所的なアラインメント値を用いて、入手可能なプログラムにより得られる、例えば、スミス−ウォーターマン・アラインメント(J.Mol.Biol.(1981)147:195-197)などにより決定されるサブシーケンス間の関係を評価することが可能である(同一性を分析するために適切な他の局所的なアラインメント方法には、ヒューリスティック・ローカル・アラインメントアルゴリズムを利用するプログラム、例えば、ＦａｓｔＡ及びＢＬＡＳＴプログラムなどが含まれる)。例えば、同一性を評価するための更なる関連の方法は、国際特許出願公開第０３／０４８１８５号に記述される。

Ｆ１ＴＳを有することに加えて、ＰＩＲＡは、式Ｘａａ Ｌｅｕ Ｘａａ Ｘａａ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ａｌａ Ｘａａ Ｘａａ Ｇｌｎ Ｃｙｓ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｘａａ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｘａａ(配列番号：１２)に記載の少なくとも一の(そして典型的にはただ１つの)アミノ酸配列を含むことにさらに特徴があり、このときのＸａａは任意の適切なアミノ酸残基(式６)を表す。

本発明の特定の態様では、ＰＩＲＡのＦ１Ｔ配列及びＦ６Ｔ配列は互いに直接接触する。

本発明の特定の有益なことが多い態様では、本発明は、Ｆ１Ｔ配列とＦ６Ｔ配列とを含んでなり(このＦ６Ｔ配列はＦ１Ｔ配列のＣ末端に配位している)、このＦ１Ｔ配列とＦ６Ｔ配列がリンカーによって分かれるものであるＰＩＲＡを提供する。一態様では、リンカーは非アミノ酸成分(moiety)である。このような成分の例には、脂肪族ないしは芳香族の炭素鎖及び一又は複数のポリエチレングリコール(ＰＥＧ)ユニットをベースとするリンカーなどが含まれる(このような化学的なリンカー及び他の適切なリンカー成分の例は、例えば米国公開特許２００３０１９５１４７号、同第２００３０２３６１９０号、同第２００４００２３８８７号及び国際特許第ＰＣＴ／ＥＰ２００５／０５４０９５号及び国際公開第２００５０８２４０４号に見られる)。特定の有益なことが多い態様では、本発明は、Ｆ１Ｔ配列とＦ６Ｔ配列とを(式１、式６-定位で)含んでなり、Ｆ１Ｔ配列及びＦ６Ｔ配列が一又は複数のアミノ酸残基によって分かれるものであるＰＩＲＡを提供する。特定の態様では、Ｆ１Ｔ配列(Ｆ１ＴＳ)とＦ６Ｔ配列(Ｆ６ＴＳ)は、１〜１０のアミノ酸残基、例として１〜８アミノ酸残基、例として１〜７、２〜７、２〜６、１〜６、２〜５、１〜５、３〜６、３〜７又は３〜５のアミノ酸残基によって、又はこの範囲内に含まれる任意の数の残基(例えば１、２、３、４、５、６又は７の残基)によって分かれる。特に明記しない限り、任意の適切なアミノ酸配列リンカーをＦ１ＴＳ及びＦ６ＴＳを結合させるために用いることができる。適切なリンカー配列の特性は当分野で公知であるので、本明細書中で詳述する必要はない。通常、アミノ酸配列リンカーは、典型的に主に「可動性の(フレキシブルな)」アミノ酸残基からなる(少なくとも５０％、少なくとも７０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％などを構成する)。可動性であるとみなし、リンカー配列として単独で又は組み合わせて用いられることの多い天然に生じるアミノ酸残基には、セリン残基、グリシン残基などが含まれる(例えば、ある態様では、本発明は、式Ｘａａ_Ｌ１ Ｘａａ_Ｌ２ Ｘａａ_Ｌ３ Ｘａａ_Ｌ４ Ｘａａ_Ｌ５ Ｘａａ_Ｌ６に記載の配列を含むリンカーを含んでなり、Ｘａａ_Ｌ１ Ｘａａ_Ｌ２ Ｘａａ_Ｌ３ Ｘａａ_Ｌ４ Ｘａａ_Ｌ５ Ｘａａ_Ｌ６の各々は独立してＧｌｙ又はＳｅｒであるＰＩＲＡを提供する(このようなリンカーの例は配列Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｓｅｒ(配列番号：１３)を含むリンカーに具体化される))。しかしながら、Ｇｌｎ、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、Ａｓｐ、Ｐｈｅ及びＡｒｇ残基も、十分に「可動性である」と考えられうるが、典型的にはこれらの残基の多くの包含は、あったとしてもあまり好ましくない。類似の「可動性」を有する合成して修飾したアミノ酸残基も用いられうる。また、例えばリンカーが他の生物学的機能によって与えられるものである場合、リンカー内のある割合の残基は「非可動性の」残基から生じうる。この文脈及び他の文脈でＰＩＲＡに好適に組み込まれうる様々な非共通のアミノ酸残基は当分野で公知であり、本明細書中で援用される参考文献に記載されており、望ましい特性を有する残基の選別は所定の試験のみを用いて当業者の技術の範囲内である。例えば、α螺旋形のリンカーが望ましい場合、例えばＡｉｂ(アミノイソ酪酸)などの非天然のアミノ酸を用いることができ、βターンが望ましい場合、リンカーはＧｌｙ−Ｐｒｏ配列又は非天然の配列のいずれかを含有しうる。通常、アミノ酸配列リンカーはアミノ酸に限られていて、非アミノ酸リンカー成分を全く含んでいない。代替的な態様では、一又は複数のアミノ酸残基と非アミノ酸連結成分からなるリンカーが用いられうる。

一態様では、本発明は、Ｆ１Ｔ配列とＦ６Ｔ配列とを(式１、式６-定位で)含んでなり、終末誘導体化成分(terminal derivatizing moiety)(「ＴＤＭ」)を含むことを特徴とするＰＩＲＡを提供する。通常、終末誘導体化成分は、インビボで(すなわち、哺乳動物宿主内で)ＰＩＲＡの安定性を促す及び／又は溶解性の向上や薬剤安定性の向上などの他の所望の特性を有するＰＩＲＡを提供する任意の誘導体化成分でありうる。このような特性の測定値は慣習的に用いられる方法によって達成されうる。

典型的なＴＤＭには、アシル(例えばアセチル)及びアミド基が含まれる(言い換えれば、典型的なＴＤＭ関連ＰＩＲＡは、少なくとも一(典型的にはただ１つ又は２つの)アシル誘導体化アミノ酸残基又はアミド誘導体化アミノ酸残基を含んでなる)。また、ＴＤＭ含有ＰＩＲＡは場合によって、Ｆ１ＴＳとＦ６ＴＳを分けるリンカー、例えばアミノ酸配列リンカーを含むという特徴があってもよい。典型的に、ＴＤＭを含む任意のタイプのＰＩＲＡは、(直接又はリンカー(アミノ酸配列リンカー又は非アミノ酸配列リンカーのいずれか)を介してのいずれかであるが、典型的には直接)Ｆ６ＴＳのＣ末端に配位したＴＤＭを含んでなり(通常、ＰＩＲＡは、上記のように配位するただ１つのＴＤＭを含んでなる)、通常、このＦ６ＴＳの末端はＰＩＲＡの末端を構成する。

特定の態様では、本発明は、Ｆ１ＴＳとＦ６ＴＳとを式１、式６-定位で含んでなるＰＩＲＡであって、該Ｆ１ＴＳとＦ６ＴＳはアミノ酸配列リンカーによって結合されるか又は分離され、該Ｆ６ＴＳはWLDEEWAQVQCEVYGRGCPS(配列番号：１４)から選択されていないことを特徴とするＰＩＲＡを提供する。他の態様では、本発明は、このような特徴を有するＰＩＲＡであって、該Ｆ６ＴＳはWLDEEWAQVQCEVYGRGCPS又はWLDQEWAWVQCEVYGRGCPS(配列番号：１５)から選択されていないことを特徴とするＰＩＲＡを提供する。さらに別の態様では、本発明は、ＦＴ６配列を有するＰＩＲＡであって、配列番号：１４、配列番号：１５又は配列番号：１４及び配列番号：１５の両方におよそ９５％以下、およそ９０％以下、およそ８５％以下、およそ８０％以下又はさらにおよそ７５％以下の同一性を有するという特徴があるＰＩＲＡを提供する。より具体的な態様では、本発明は、配列番号：１４又は配列番号：１５に７０〜９５％、７５〜９５％、８０〜９５％、８５〜９５％、９０〜９５％、７０〜９０％、７５〜９０％、７５〜８５％、７５〜８０％、８０〜９０％、８０〜８５％、およそ８０％又はおよそ８５％の同一性を有するＦ６ＴＳを含んでなるＰＩＲＡを提供する。場合によって、このようなＰＩＲＡは、一又は複数のＴＤＭを含むことにさらに特徴があってもよい。

他の態様では、本発明は、SLEEEWAQIQCEVWGRGCPSY(配列番号：１６)におよそ７０〜９５％の同一性、例としておよそ７５〜９５％、８０〜９５％、８５〜９５％、９０〜９５％、９０％、９５％、８５％、８０％、７５％、７５〜９０％又は８０〜９０％の同一性を有すると特徴付けられるＦ６ＴＳを含んでなるＰＩＲＡを提供する。場合によって、このようなＰＩＲＡはＦ１ＴＳとＦ６ＴＳとの間のリンカーにより結合されてもよく、このリンカーは典型的にはアミノ酸配列リンカーである。このようなＰＩＲＡは、一又は複数のＴＤＭとも結合してよいし、あるいは一又は複数のＴＤＭと結合してもよい。例えば、このようなＰＩＲＡは、Ｆ６ＴＳのＣ末端のＴｙｒ残基(このＣ末端残基は通常、ＰＩＲＡのＣ末端となる)又はＴｙｒ残基と置換する残基又は他の近接する終末残基(例えばＦ６ＴＳがＴｙｒ_２１を欠失しているＦ６ＴＳの場合にＳｅｒ_２０に「相当する」と考えられうる残基)に配位する単一のＴＤＭを含みうる。

一態様では、本発明は、式６に包含されるＣｙｓ残基の一又は両方(又は、Ｆ６ＴＳの相当するＣｙｓ残基)が欠損しているか又は置換されているＦ６ＴＳを含んでなるＰＩＲＡを提供する。また、このようなＦ６ＴＳはＦ６ＴＳに関して本明細書に記載のいずれかの特徴又は複数の特徴の組合せを表しうる(例えば、他の場合では式６ａ(後述)に記載の配列を含む−すなわち、本発明は、式６ａに記載の配列を含むが、その一又は両方のＣｙｓ残基はそれぞれ(両方のＣｙｓ残基が影響する場合)欠損しているか又は他の好適な残基や成分に置換されているＰＩＲＡを提供する)。

他の態様では、本発明は、式６のＣｙｓ残基と同様に配位する２つのＣｙｓ残基の保持に特徴があるＰＩＲＡを提供する。このようなＦ６ＴＳは、Ｆ６ＴＳに関して本明細書に記載のいずれかの特徴又は複数の特徴の組合せを表しうる。

他の例示的で特定の態様では、本発明は、式Ｘａａ_１ Ｌｅｕ Ｘａａ_３ Ｘａａ_４ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ａｌａ Ｘａａ_８ Ｘａａ_９ Ｇｌｎ Ｃｙｓ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｘａａ_１４ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｘａａ_２１(配列番号：１７)に記載のＦ６ＴＳを含んでなり、このときのＸａａ_１が任意の適切なアミノ酸残基である；Ｘａａ_３がＡｓｐ、Ｇｌｕ又は他の適切な酸性の残基である；Ｘａａ_４が任意の適切なアミノ酸残基である(典型的には、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ及びＴから選択される残基；より典型的には、Ｎ、Ｅ、Ｑ、Ｈ、Ｒ及びＫから選択した残基；そして、さらにより典型的にはＮ、Ｅ、Ｑ及びＫから選択される残基)；Ｘａａ_８が任意の適切なアミノ酸残基である；Ｘａａ_９が任意の適切なアミノ酸残基である(典型的にはＩ、Ｌ、Ｖ、Ｍ、Ｆ、Ｇ及びＡから選択される；より典型的にはＩ、Ｌ、Ｖ及びＭから選択される；そして、さらにより典型的にはＩ、Ｌ又はＶから選択される)；Ｘａａ_１４がシクロアルケニル結合性のアミノ酸残基である(例えば、Ｗ、Ｆ、Ｙ又はＨ；典型的にはＷ、Ｆ又はＹ)；そして、Ｘａａ_２１が欠失しているか、非荷電性の親水性又は極性のアミノ酸残基(例えばＳ、Ｔ、Ｎ、Ｑ、Ｙ、Ｃ又はＧ)である(式６ａ)、ＰＩＲＡを提供する。式６ａ配列を含んでなるＰＩＲＡは、上記のように、ＴＤＭを含む、及び／又はＦ１ＴＳと式６ａ配列(上記に記載)との間にリンカー(例えばアミノ酸配列リンカー)を含むという特徴があってもよい。式６ａ ＰＩＲＡは、式６ａ配列がWLDEEWAQVQCEVYGRGCPS(すなわち、配列番号：１４)、WLDQEWAWVQCEVYGRGCPS(すなわち、配列番号：１５)又はSLEEEWAQIQCEVWGRGCPSY(すなわち、配列番号：１６)ではないという限定に特徴があり得、より具体的な態様ではこのようなＰＩＲＡは、ここで包含される式６ａ配列が、配列番号：１４−１６の一又は複数におよそ７０〜９５％、例としておよそ７５〜９０％、例としておよそ７５〜８５％、例としておよそ７５〜８０％、例としておよそ８０〜９０％、例としておよそ７５％、８０％、８５％又は９０％の同一性であるという事実に特徴があってもよい。

さらに別の例示的で具体的な態様では、本発明は、式Ｘａａ_１ Ｌｅｕ Ｘａａ_３ Ｘａａ_４ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ａｌａ Ｘａａ_８ Ｘａａ_９ Ｇｌｎ Ｃｙｓ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｘａａ_１４ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｘａａ_２１(配列番号：１８)に記載のＦ６ＴＳを含んでなり、このときのＸａａ_１がＴｒｐ又はＳｅｒである、Ｘａａ_３がＧｌｕ又はＡｓｐである；Ｘａａ_４がＧｌｕ又はＧｌｎである；Ｘａａ_８がＧｌｎ又はＴｒｐである；Ｘａａ_９がＩｌｅ又はＶａｌである；Ｘａａ_１４がＴｒｐ又はＴｙｒである；そして、Ｘａａ_２１が欠失しているか又はＴｙｒである(式６ｂ)、ＰＩＲＡを提供する。

式６ｂ配列を含むＰＩＲＡは、上記のように、ＴＤＭを含む、及び／又はＦ１ＴＳと式６ｂ配列(上記に記載)との間にリンカー(例えばアミノ酸配列リンカー)を含むという特徴があってもよい。式６ｂ ＰＩＲＡは、式６ｂ配列がWLDEEWAQVQCEVYGRGCPS(すなわち、配列番号：１４)、WLDQEWAWVQCEVYGRGCPS(すなわち、配列番号：１５)又はSLEEEWAQIQCEVWGRGCPSY(すなわち、配列番号：１６)ではないという限定に特徴があり得、より具体的な態様ではこのようなＰＩＲＡは、ここで包含される式６ｂ配列が、配列番号：１４−１６の一又は複数におよそ７０〜９５％、例としておよそ７５〜９０％、例としておよそ７５〜８５％、例としておよそ７５〜８０％、例としておよそ８０〜９０％、例としておよそ７５％、８０％、８５％又は９０％の同一性であるという事実に特徴があってもよい。

他の態様では、本発明は、WLDEEWAQVQCEVYGRGCPS(すなわち、配列番号：１４)、WLDQEWAWVQCEVYGRGCPS(すなわち、配列番号：１５)及びSLEEEWAQIQCEVWGRGCPS(すなわち、配列番号：１６)から選択されるＦ６ＴＳを含んでなるＰＩＲＡを提供する。本明細書において記述される他のＰＩＲＡのように、前記のＰＩＲＡは、Ｆ１ＴＳとＦ６ＴＳとの間にリンカー(例えばアミノ酸配列リンカー)及び／又はＴＤＭ(典型的には、Ｆ６ＴＳのＣ末端に配位するか、又はＦ６ＴＳの端の近くに位置する残基に配位する)を含みうる。

他の態様では、本発明は、既に述べた特徴の一又は複数を含むことを特徴とし、ＰＩＲＡの式６タイプ配列は、配列SLEEEWAQIQCEVWGRGCPS(配列番号：１９)を含まないＰＩＲＡを提供する。

より具体的な例示的な態様では、本発明は、式GSLDESFYDWFERQL-Z₁-SLEEEWAQIQCEVWGRGCPS-Z₂(配列番号：２０)に記載のアミノ酸配列(コアモチーフ配列)を含んでなり、Ｚ_１はアミノ酸リンカーを表し、Ｚ_２は場合によって本終末誘導体化成分、アミノ酸ないしはアミノ酸配列(例えば、安定している配列、例として、アルブミン又はアルブミン由来の配列)、誘導体化アミノ酸残基、又はＣ末端誘導体化アミノ酸残基を含むアミノ酸配列を表す、ＰＩＲＡを提供する。

本発明によって提供される具体的な例示的なＰＩＲＡは、GSLDESFYDWFERQLGGGSGGSSLEEEWAQIQCEVWGRGCPSY-アミド(「Ｓ６６１」)である。

さらに他の態様では、本発明は、GSLDESFYDWFERQLGGGSGGSSLEEEWAQIQCEVWGRGCPSY(配列番号：１９)におよそ６５〜９５％の同一性、例としておよそ７０〜９５％、７５〜９５％、８０〜９５％、８５〜９５％、９０〜９５％、６５〜９０％、７０〜９０％、７５〜９０％、８５〜９０％、６５〜８５％、７０〜８５％、７５〜８５％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％又は９０％の同一性を有するコアモチーフを含んでなるＰＩＲＡを提供する。このような「Ｓ６６１様ＰＩＲＡ」は、典型的にはＣ末端Ｔｙｒ残基(又は、それに「相当する」と考えられうる残基−例えば配列アラインメント分析によって決定される)と結合しているＴＤＭを含むことに特徴があってもよい。

ＰＩＲＡは任意の適切な方法により調製される。例えば、ＰＩＲＡ、特に、非誘導のＰＩＲＡは、何れかの適切な発現系において融合タンパク質として産生されうる。組換え融合タンパク質の産生に関する方法及び原理は当該分野において十分に周知であり、ここに詳しく記載する必要はない。また、標準的なペプチド合成(例えば、固相ペプチド合成)をＰＩＲＡを生成するために使用することもできる。そのような組換え産生又は合成されたペプチドは更に誘導、コンジュゲーション、多量体化などに供され、更に、本発明の範囲内の複雑な分子を形成することも可能である。ＰＩＲＡは同様に、何れかの適切な技術により精製されてもよい。例えば、特定の精製「タグ」(精製容易化配列又は成分)を含む「ＰＩＲＡ融合タンパク質」を公知の方法により生じることが可能であり、また、そのような分子を得るために使用されてもよい。非融合タンパク質ＰＩＲＡを直接精製するために、ディファレンシャル電気泳動、クロマトグラフィ、遠心分離などの方法が使用されてもよく、同様に、非融合タンパク質ＰＩＲＡの特徴に向けられる親和性(例えば、抗体ベース)の方法も可能である。

また、ＰＩＲＡは、限定するものではないが、上記のＴＤＭ-結合ＰＩＲＡを含む、タンパク質「誘導体」(又は「ＰＩＲＡ誘導体」)を含む。「誘導体」なる用語は、一般的に、含有される一又は複数のアミノ酸残基が化学的に修飾(例えば、アルキル化、アシル化、エステル形成、アミド形成又は他の同様な種類の修飾など)された、又は共有結合的に一又は複数の他の異種置換基(例えば、親油性置換基、ＰＥＧ成分、適切な有機成分リンカーにより連結されているペプチド側鎖など)と結合しているタンパク質又はペプチドを指す。

一般的に、ここに記載のＰＩＲＡは、何れかの適切な数のこのように修飾されたアミノ酸の包含により、及び／又はこのようにコンジュゲートされた置換基との結合により修飾される。この文脈において適合性は一般に、対応する「ネイキッド」(すなわち、非誘導体の)相当物ＰＩＲＡに関してＩＲアンタゴニストとして作用する誘導体の能力によって決定される。一又は複数の修飾されたアミノ酸の包含は、例えば(a)ポリペプチドの血清半減期の増大、(b)ポリペプチドの抗原性の減少、又は(c)ポリペプチドの貯蔵安定性の増加の場合に有利でありうる。アミノ酸は、例えば、翻訳と同時に、又は翻訳後の組換え産生の間に修飾されるか(例えば、哺乳類細胞における発現中のＮ−Ｘ−Ｓ／ＴモチーフでのＮ−連結グリコシル化など)、又は合成手段により修飾される。修飾されたアミノ酸の非限定的な例には、グリコシル化アミノ酸、硫酸化アミノ酸、プレンリー化(prenlyated)(ファルネシル化、ゲラニルゲラニル化など)アミノ酸、アセチル化アミノ酸、アシル化アミノ酸、ＰＥＧ化アミノ酸(PEGylated amino acid)、ビオチン化アミノ酸、カルボキシル化アミノ酸、リン酸化アミノ酸などを含む。当該アミノ酸の修飾において当業者に指針となるために十分な参考が、文献の至るところにある。例示的なプロトコールは、例えば、Walkerの文献に見ることができる(Walker(1998)PROTEIN PROTOCOLS ON CD-ROM Humana Press, Towata, NJ.)。典型的に当該修飾されたアミノ酸は、グリコシル化アミノ酸、ＰＥＧ化アミノ酸、ファルネシル化アミノ酸、アセチル化アミノ酸、ビオチン化アミノ酸、脂肪成分にコンジュゲートしたアミノ酸及び有機誘導体化剤にコンジュゲートしたアミノ酸から選択される。

ＰＩＲＡは、ポリマーに共有結合的にコンジュゲートすることにより化学的に修飾され、例えば、それらの循環半減期を増大する。そのようなポリマーをペプチドに対して付着させるための例示的なポリマー及び方法は、例えば、米国特許第４７６６１０６号；同第４１７９３３７号；同第４４９５２８５号；及び同第４６０９５４６号などに説明されている。更なる例示的なポリマーは、ポリオキシエチル化ポリマー及びポリエチレングリコール(ＰＥＧ)成分を含む(例えば、ＰＩＲＡは分子量がおよそ１０００からおよそ４００００、例えばおよそ２０００からおよそ２００００、例えばおよそ３０００〜１２０００、更に詳細にはおよそ５０００のＰＥＧにコンジュゲートされうる)。

したがって、本発明のペプチドは、当分野に公知の一又は複数の修飾に供してもよく、それは、貯蔵安定性、薬物動態、及び／又は当該ペプチドの生理活性の何れかの態様、例えば、力価、選択性及び薬物相互作用などを操作するために有用であってもよい。当該ペプチドが供されうる化学的修飾には、これに限定するものではないが、一又は複数のポリエチレングリコール(ＰＥＧ)、モノメトキシ−ポリエチレングリコール、デキストラン、ポリ-(N-ビニルピロリドン)ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリプロピレングリコール、ポリオキシエチル化ポリオール(例えば、グリセロールなど)及びポリビニルアルコール、コロミン酸又は他の炭化水素ベースのポリマー、アミノ酸のポリマー、及びビオチン誘導体の、ペプチドへのコンジュゲートが含まれる。タンパク質のＣｙｓ残基でのＰＥＧコンジュゲートは、例えば、Goodson, R. J. & Katre, N. V. (1990)Bio/Technology 8, 343 及び Kogan, T. P. (1992) Synthetuc Comm. 22, 2417に開示される。

他の有用な修飾には、限定するものではないがアシル化が含まれ、例えば米国特許継続第６２５１８５６号及び国際公開第００／５５１１９号に記載のような方法及び組成物を用いるなど、標準的な公知の方法を用いて行われうる。一態様では、本発明は、長時間作用性の(安定性が高い)ＰＩＲＡ誘導体の調製方法及びその誘導体化ＰＩＲＡを提供する。ある面では、長時間作用性のＰＩＲＡは、インビボ安定性の増加に関連するドメイン、配列などを含む「ＰＩＲＡ部」及び一又は複数の「融合パートナー部」を含む融合タンパク質を調製することによって得られる。このような融合パートナー配列の例には、アルブミン、トランスフェリン由来の配列、及び抗体配列が含まれる。アルブミン融合タンパク質、該融合タンパク質の産生方法及び適切なアルブミン融合パートナー配列の例は、例えば米国特許第５８７６９６９号及び同第５７６６８８３号に記述される。他の面では、長時間作用性のＰＩＲＡは、例えばアルブミンに結合したままでＰＩＲＡとして作用しうる、強力なアルブミン結合が生じるアシル化(適当なリンカーを介する)のような化学修飾によってＰＩＲＡを誘導体化して得られる。また、後者は、ペプチド配列を修飾するか又はより大きなタンパク質(α２-マクログロビンに結合する、例えば骨原性成長ペプチド(ＯＧＰ)など)に結合することができる配列によってペプチド配列を伸長することによって達成されうる。

ＰＩＲＡは、同種の組成物中、又は、他の活性な及び／又は不活性な成分と組み合わせて提供されうる。

ＰＩＲＡは典型的に、少なくとも実質的に純粋な形態で使用及び提供される。「実質的に純粋な」分子は、属する分子の種類に関して見出される、組成物中の主な種(species)である分子である(例えば、実質的に純粋なタンパク質は見出される組成物中の主なタンパク質種である)。実質的に純粋な種は、組成物中の分子の種類の重量で少なくもおよそ５０％を構成し、及び典型的には、組成物中の分子種の少なくともおよそ７０％、少なくともおよそ８０％、少なくともおよそ８５％、少なくともおよそ９０％、少なくともおよそ９５％又はそれ以上を構成するであろう。通常、ＰＩＲＡを含んでなる組成物は、組成物中に存在するすべてのペプチド種との関係で、又は少なくとも提案した使用に関して実質的に活性なペプチド種の関係でＰＩＲＡについて少なくともおよそ９８％、９８％又は９９％の均一性を示す。例えば、ペプチド安定剤／緩衝剤、例えばアルブミンなどは、意図的に最終薬学的製剤に、当該ＰＩＲＡの活性を妨げることなく含まれてよく、したがって、そのような純度計算から除外してよい。基本的な活性を妨げない不純物の存在もまた、実質的に純粋な組成物という面において許容されうる。純度は、当該化合物に適切な方法により測定される(例えば、クロマトグラフィー法；アガロース及び／又はポリアクリルアミドゲル電気泳動；ＨＰＬＣ分析；など)。

ある態様では、本発明は「単離された」ＰＩＲＡを含んでなる組成物に関する。「単離された分子」は、有意なレベル(例えば、およそ１％以上、およそ２％以上、およそ３％以上又はおよそ５％以上など)の任意の外来及び望ましくない生物学的分子、例えば細胞、細胞培養物、化学培地、又はＰＩＲＡを産生する動物に含まれる非ＰＩＲＡ生物学的分子などに結合しない分子を指す。また、単離された分子は、有意に長い時間(例えば、少なくともおよそ１０分、少なくともおよそ２０分、少なくともおよそ１時間又はそれ以上)に亘るヒトの介入(自動、手動又はその両方)によってそのような精製段階を経た任意の分子をいう。本発明により提供される多くの種類の組成物において、例えば、一又は複数の薬学的に許容される担体を含む組成物において、ＰＩＲＡは、当該組成物中の総分子種の数に関して比較的小さい量で存在する(例えば、多くの量の薬学的に許容される担体、安定剤及び／又は保存剤を含んでなる組成物の場合など)。ある場合では、更なるペプチド、例えばウシ血清アルブミン(ＢＳＡ)は、予め精製されたＰＩＲＡとともに該組成物に含まれる。しかしながら、当該組成物の更なる成分が意図されるＰＩＲＡの適用に許容される場合、該組成物はなお、単離されたＰＩＲＡを含むと記述することが可能である。言い換えれば、「単離された」なる用語は、他の化合物又は物質を伴う人工又は合成の混合物、例えば、薬学的に許容される製剤の一部分を形成しうる混合物などを除外することを意味するものではない。

ある態様では、本発明は、他のＩＲ結合分子を実質的に含まない一又は複数のＰＩＲＡを含んでなる組成物を提供する。

他の態様では、本発明は異なる特徴を有する多くのＰＩＲＡを含んでなる組成物を提供する(例えば本発明はある態様において、異なる特徴を有するＰＩＲＡの「カクテル(混合)」を提供する)。

医薬品への使用のためのＰＩＲＡ組成物は、ＰＩＲＡ、ＰＩＲＡの組み合わせ又は一又は複数のＰＩＲＡ及び更なる活性／治療薬を一般的に望ましくは治療的有効量で含み、典型的には少なくとも生理学的な有効量で含む。

「治療的有効量」などの用語は、生物学的に活性な化合物又は組成物の量をいい、適切な用量で、適切な期間に亘り、典型的に化合物又は組成物に応答性の宿主に対して送達される場合に、宿主において所望の治療結果を達成するために十分である、及び／又は典型的に実質的に同様な宿主(例えば、治療されるべき患者と同様な特徴を有する患者など)においてそのような治療結果を達成できる。ＰＩＲＡの治療的有効量は、個々の疾病の状態、年齢、性別及び体重、並びに当該ＰＩＲＡの個々における所望の応答を引き出す能力などの因子に従って変わる。また、治療的有効量は、作用薬の任意の有毒性又は有害性の効果よりも、その治療上の有益な効果の方が上回るものである。代表的な治療効果は、例えば(a)特定の対象又は実質的に同様な対象の集団における疾患、疾病又は関連する状態の重症度の低減；(b)一又は複数の症状又は疾患、疾病又は状態と関連する生理的な状態の減少；及び／又は(c)予防的な効果などがある。疾患の重症度の低減は、例えば(a)疾病の広がりにおける測定可能な減少；(b)対象における正の結果の機会の増加(例えば、少なくともおよそ５％、１０％、２０％、２５％以上など)；(c)生存又は寿命を増やす変化；及び／又は(d)疾患状態の存在に関連する一又は複数の生物マーカーにおける測定可能な減少(例えば、症状の量及び／又は重症度の減少など)などがある。治療的有効量は、個々の対象との関係において、より一般的には実質的に同様な対象の集団(ＰＩＲＡ組成物にかかわる臨床試験に登録された同様の疾病を有する多くのヒト患者、又は、前臨床試験との関連でＰＩＲＡを試験するために使用される同様な一連の特徴を有する多くの非ヒト哺乳動物)との関係において、測定される。

ヒトの治療用途／投薬計画に適するＰＩＲＡの用量は、およそ１〜２００ｎｍｏｌ／ｋｇの範囲、例えばおよそ１〜１００ｎｍｏｌ／ｋｇであると思われる。

また、ＰＩＲＡは予防的有効量で宿主に送達されてもよく、疾患／疾病予防プログラムの一環として、さもなければ一般的な健康を増進のためであってよい。「予防的有効量」は、該化合物又は組成物に典型的に応答する宿主において必要な用量且つ時間に亘って有効であり、宿主において所望の予防結果が達成される、又は実質的に同様な宿主において該結果が典型的に達成できる、活性化合物又は組成物の量を指す。例示的な予防効果は、当該予防療法を受けていない同様の患者などと比較して、疾病の進行の可能性を低下すること、疾病の強さ又は広がりを低下すること、切迫した疾病の間の生存の可能性を増加すること、疾患状態の発症を遅らせること、切迫した状態の広がりを減少することなどを含む。典型的には、予防用量は、疾患に先駆けて又は疾患早期段階で使用されるため、当該予防的有効量は、特定のＰＩＲＡの治療的有効量よりも少ないであろう。予防効果はまた、ＰＩＲＡ組成物を受けていない実質的に同様な被検体と比較して、発病を予防すること、発病時間を遅らせること、当該疾患の結果的な重症度を低下することなどを含む。

他の態様では、ＰＩＲＡは、「生理学的に有効な」量で宿主又は細胞に対して送達される。生理学的に有効な量は、該薬剤に正常に応答する宿主への投与により、ＩＲアンタゴニスト作用に関連する少なくとも一の生理学的な効果が誘導、促進及び／又は増強する活性な薬剤の量である。

ＰＩＲＡは、一又は複数の意図される投与経路に適切な一又は複数の担体(希釈剤、賦形剤など)と組み合わせて、一又は複数のＰＩＲＡを含んでなる薬学的に受容可能な組成物を調製する状況において、薬学的に許容される組成物を提供しうる。

ＰＩＲＡは、通常の投与のために、例えば、乳糖、ショ糖、パウダー(例えば、デンプンパウダーなど)、アルカン酸のセルロースエステル、ステアリン酸、タルク、ステアリン酸マグネシウム、酸化マグネシウム、リン酸ナトリウム及びリン酸カルシウム、硫酸ナトリウム及び硫酸カルシウム、アラビアゴム、ゼラチン、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン及び／又はポリビニルアルコールなどと混合されてもよく、並びに任意に更に錠剤化されてもよく、又はカプセルに包まれてもよい。あるいは、ＰＩＲＡは生理食塩水、水、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、カルボキシメチルセルロースコロイド水溶液、エタノール、トウモロコシ油、ピーナッツ油、綿実油、トラガカントゴム、及び／又は種々のバッファーに溶解されてもよい。他の担体、補助剤及び投与様式は医薬品の分野において周知である。担体又は希釈剤は、時期を遅らせる物質、例えば、グリセリルモノステアレート又はグリセリルジステアレート単独又はワックスあるいは他の機能的に同様な物質と共に含んでもよい。

薬学的に受容可能な担体は、一般的に何れか及び全ての適切な溶媒、分散媒、コーティング、抗菌性及び抗真菌性の薬剤、等張性及び吸収遅延剤など、生理的にＰＩＲＡに適合するものが含まれる。薬学的に許容される担体は、水、生理食塩水、リン酸バッファー食塩水(ＰＢＳ)、デキストロース、グリセロール、エタノールなど、並びにその何れかの組み合わせを具組む。多くの場合において、望ましくは等張性剤、例えば、糖、ポリアルコール、例えば、マンニトール、ソルビトール又は塩化ナトリウムなどをそのような組成物中に含む。薬学的に受容可能な物質、例えば、湿潤剤又は少量の補助剤、例えば、湿潤剤又は乳化剤、保存剤又はバッファー、望ましくは当該ＰＩＲＡ、関連する組成物又は組み合わせの貯蔵寿命又は有効性を高める。薬剤的組成物の担体及び他の成分に対する適合性は、当該ＰＩＲＡ、関連する組成物又は組み合わせの所望の生物学的性質に対して有意に負の影響がないことに基づいて決定できる(例えば、およそ２０％、１５％、１０％、５％又は１％未満のＩＲアンタゴニスト作用の低下)。

本発明に係るＰＩＲＡ組成物、関連する組成物及び組み合わせは、種々の適切な形態で与えられ、製造され及び／又は投与されてよい。そのような形態は、例えば、液体、半固体及び固体投与量形態、例えば、液体溶液(例えば、注射可能及び注入可能な溶液)など、分散系又は懸濁液、乳液、ミクロエマルジョン、錠剤、丸剤、パウダー、リポソーム、デンドリマー(dendrimers)及び他のナノ粒子(例えば、Baek等,Methods Enzymol.2003;362:240-9；Nigaverkar等,Pharm Res.2004 Mar;21(3):476-83を参照されたい)、微小粒子及び坐薬を含む。任意のＰＩＲＡ関連組成物のための最適な形態は、意図される投与様式、その組成物又は組み合わせの性質、及び治療学的な適用又は他の意図される使用に依存する。剤形はまた、例えば、パウダー、ペースト、軟膏、ゼリー、蝋、油、脂質、脂質(陽イオン又は陰イオン)含有ベシクル、ＤＮＡ複合体、無水吸水ペースト、水中油形及び油中水形乳液、乳液、カーボワックス(種々の分子量のポリエチレングリコール)、カーボワックスを含む半固体ゲル及び半固体混合物などを含む。前述の混合物はいずれも、ＰＩＲＡによるＩＲのアンタゴニスト作用がその剤形により著しく阻害されず、その剤形が生理学的に適合し、投与経路に耐えられるとの条件で、本発明に係る処置及び療法に適切であってよい。例えば、Powell等の文献(Powell等"Compendium of excipients for parenteral formulation" PDA J Pharm Sci Technol.52:238-311(1998))、及びその中の製薬化学者に周知の賦形剤及び担体に関する更なる情報のための引用を参照されたい。具体的な態様では、ＰＩＲＡは製剤化されリポソーム中で投与される。他の態様では、ＰＩＲＡは、リポソーム中で一又は複数の第二薬剤と共に投与される。

また、ＰＩＲＡ組成物はＰＩＲＡペプチド及び関連する塩の何れかの適切な組み合わせを含んでなる組成物を含む。何れかの適切な塩、例えば、何れかの適切な形態(例えば、バッファー塩など)のアルカリ土塁金属塩をＰＩＲＡの安定化において使用される(好ましくは、典型的に塩の総計は、当該ＰＩＲＡの酸化及び／又は沈殿が回避されるような量である)。適切な塩は典型的に、塩化ナトリウム、コハク酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、塩化カリウム、塩化マグネシウム、硫酸マグネシウム、及び塩化カルシウムを含む。塩基及び一又は複数のＰＩＲＡを含んでなる組成物もまた提供される。

ＰＩＲＡ組成物の送達の典型的な様式は、非経口投与(例えば、静脈内、皮下、腹腔内及び／又は筋肉内投与など)による。ある態様では、ＰＩＲＡはヒト患者に対して静脈内注入、により投与される。他の態様では、ＰＩＲＡは筋肉内又は皮下注射により投与される。また、腫瘍内投与もある治療計画(例えば、インスリノーマの治療の場合)において有用でありうる。

ＰＩＲＡは、例えば、固体製剤(例えば、顆粒、パウダー、噴出性粒子、又は坐薬などを含む)、半固体形態(ゲル、クリームなど)、又は液体形態(例えば、溶液、懸濁液又は乳液など)に製剤化されてもよい。ＰＩＲＡは多様な溶液に適用されてもよい。本発明に係る使用に適切な溶液は、典型的に、滅菌、溶解された十分な量のＰＩＲＡ及び当該組成物の他の成分で、製造及び貯蔵のための条件下において安定なものであり、提案された適用のための被検体に対して有害ではない。ＰＩＲＡは、通常の製薬操作、例えば、滅菌などに供してもよく、及び／又は通常の補助剤、例えば、保存剤、湿潤剤、乳化剤、バッファー等を含んでもよい。組成物はまた、溶液、マイクロエマルジョン、分散系、パウダー、マクロエマルジョン、リポソーム又は他の要求される高薬物濃度のために適切な構造として製剤化される。溶液の所望の流動特性は、例えば、コーティング、例えば、レクチンの使用により、分散系の場合において必要とされる粒子サイズを維持することにより、及び界面活性剤の使用によって維持されてよい。注射可能な組成物の吸収の延長は、当該組成物に吸収を遅らせる薬剤、例えば、モノステアレート塩及びゼラチンなどを含ませることにより達成されうる。本発明の薬学的に許容される組成物のこれら及び他の成分が、有利な特性、例えば、改善された移行、送達、耐久力などを与える。

医薬使用のための一又は複数のＰＩＲＡを含んでなる組成物は、種々の希釈剤、充填剤、塩、バッファー、界面活性剤(例えば、非イオン性界面活性剤、例えば、Ｔｗｅｅｎ-８０など)、安定剤(例えば、糖又はタンパク非含有アミノ酸など)、保存剤、組織固定剤(tissue fixatives)、可溶化剤及び／又は医薬市長のための組成物への包含に適切な他の物質を含む。適切な成分の例はまた、以下の文献、例えば、Berge等, J. Pharm. Sci.,6661)1-19(1977); Wang and Hanson, J. Parenteral. Sci. Tech: 42, S4-S6(1988)；米国特許第６１６５７７６号及び同第６２２５２８９号；及びここで引用される他の文献に記載される。そのような医薬組成物生物はまた、保存剤、酸化防止剤又は当業者に公知の他の添加剤を含む。更なる薬学的に許容される担体は、当該分野において公知であり、例えば、次の文献に記載される；Urquhart等, Lancet,16,367(1980), Lieberman等, Pharmaceutical Dosage Forms-Disperse Systems(2nd ed., vol. 3,1998)；Ansel等, Pharmaceutical Dosage Forms & Drug Delivery Systems(7th ed. 2000); Martindale, The Extra Pharmacopeia(31st edition),Remington's Pharmaceutical Sciences(16th-20th editions); The Pharmacological Basis Of Therapeutics, Goodman and Gilman, Eds.(9th ed.-1996)；Wilson and Gisvolds'TEXTBOOK OF ORGANIC MEDICINAL AND PHARMACEUTICAL CHEMISTRY, Delgado and Remers, Eds.(10th ed. -1998) 及び米国特許第５７０８０２５号及び同第５９９４１０６号。薬学的に許容される組成物を製剤化するときの原則も、例えば、以下の例に記載される；Platt, Clin. Lab Med., 7:289-99(1987), Aulton, Pharmaceutics: The Science Of Dosage Form Design, Churchill Livingstone(New York)(1988), EXTEMPORANEOUS ORAL LIQUID DOSAGE PREPARATIONS, CSHP(1998),及び"Drug Dosage", J. Kans. Med. Soc,. 70(1), 30-32(1969)。ＰＩＲＡ組成物及び関連する組成物(例えば、ＰＩＲＡをコードする核酸又はＰＩＲＡをコードする核酸を含むベクターを含む組成物)の特に投与に適切な更なる薬学的に受容可能な担体は、例えば、国際公開第９８／３２８５９号に記載される。

ＰＩＲＡ組成物は、迅速な放出を防ぐであろう担体、例えば、制御された放出製剤、例えば、インプラント、経皮的パッチ、及びマイクロカプセルに入れられた送達系などと共に製造される。生分解性のある生物的適合性のポリマーも使用され、それらは例えば、エチレンビニルアセテート、ポリ無水物(polyanhydrides)、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル(polyorthoesters)及びポリ乳酸、並びにそのような組成物を提供するようなその何れかの組み合わせである。そのような組成物の製造方法は公知である。例えばSustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J. R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978を参照のこと。

他の態様では、本発明の組成物は、経口投与のための賦形剤、例えば、不活性希釈剤又は同化可能な食用担体(特定の経口投与製剤及び方法はまた、本明細書の他の場所に個々に記載される)と共に製剤化される。ＰＩＲＡ化合物(及び、もし所望なら他の成分)もまた、硬ゼラチンカプセル又は軟シェルゼラチンカプセルに封入されてもよく、錠剤に加圧されてもよく、対象の食事に直接に混ぜてもよい。治療上の経口投与のために、当該化合物が賦形剤と共に組み込まれて、摂取可能な錠剤、バッカル錠、トローチ、カプセル、エリキシル剤、懸濁液、シロップ、カシュ剤などの形態で使用される。本発明の化合物を非経口投与により投与するために、当該化合物をそれの不活性化を予防するための物質でコートする、又はそれの不活性化を予防するための物質と当該化合物を共投与することが必要かもしれない。

他の態様では、ＰＩＲＡ組成物は注射可能な液体溶液又は懸濁液の何れにでも調整されるが、注射に先駆けて液体に、溶液又は懸濁に適切な固体形態に調整されてもよい。また、調整は乳液化されてもよい。当該活性治療用成分は、多くの場合、薬学的に(即ち、生理学的に)許容され、当該活性成分に適合する賦形剤と混合される。適切な賦形剤は、例えば、水、生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなど、及びその組み合わせである。加えて、もし所望であれば、当該組成物は少量の補助物質、例えば、潤滑剤又は乳化剤、ｐＨ緩衝剤を含み、これらは当該活性成分の効力を高める。

あるいは、ＰＩＲＡは薬剤的組成物に対して中和された生理学的に許容される塩形態として配合される。適切な塩は、酸付加塩(すなわち、当該ペプチド分子の遊離型のアミノ基と形成される)を含み、無機酸、例えば、塩化水素酸又はリン酸、又は有機酸、例えば、酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸などと形成された酸付加塩を含む。遊離型のカルボキシル基から形成された塩はまた、無機塩基、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウム又は水酸化第二鉄など、及び有機塩基、例えば、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、２-エチルアミンエタノール、ヒスチジン、プロカインなどから誘導されうる。(ここにおいて更に考察する)組み合わせ組成物の場合では、ＰＩＲＡは一又は複数の更なる治療剤と共に製剤化されても、及び／又は共に投与されてもよい。そのような組み合わせ療法は、より低用量の当該ＰＩＲＡ及び／又は共投与される薬剤が必要とされ、これは多様な単剤療法に関連する可能な毒性又は合併症を回避するためである。

他の面では、本発明はＰＩＲＡコード核酸(すなわち、一又は複数の好適な宿主細胞でのＰＩＲＡの発現のために共に又は別々にコードする一又は複数の核酸を含む核酸)を提供する。ＰＩＲＡコード核酸は、何れか適切な特質を有し、何れか適切な特徴を含む。したがって、例えば、ＰＩＲＡコード核酸は、ＤＮＡ、ＲＮＡ又はそのハイブリッドの形態であってもよく、非天然塩基又はヌクレオチド類似体、糖部分の置換、更なる部分(例えば、取り込み促進分子など)の複合、二次構造プロモーティング配列又はそのような特徴の組み合わせを含んでもよい。核酸は典型的に有利に、標的宿主細胞における所望の発現、複製及び／又は選択を促す特徴を含む。そのような特徴の例は、複製成分の起源、選択遺伝子成分、プロモーター成分、エンハンサーエレメント成分、ポリアデニル化配列成分、ターミネーション成分などを含み、その多数の適切な例が知られている。

更なる態様では、本発明は一又は複数のＰＩＲＡコード核酸を含むベクターを提供する。「ベクター」はデリバリー媒体と呼ばれ、ＰＩＲＡコード核酸の発現、ＰＩＲＡペプチドの産生、標的細胞のトランスフェクション(形質移入)／トランスフォーメーション(形質転換)、ＰＩＲＡコード核酸の複製を促進したり、当該核酸及び／又はトランスフォーム／トランスフェクションされた細胞の検出を促進したり、又は他に、有利な生物学的及び／又は生理化学的な機能を当該ＰＩＲＡコード核酸に与えたりする。本発明の状況におけるベクターは、任意の適切なベクターであればよく、染色体性、非染色体性、及び合成核酸ベクター(発現制御エレメントの適切なセットを含む核酸配列)を含む。そのようなベクターの例は、ＳＶ４０の誘導体、細菌プラスミド、ファージＤＮＡ、バキュロウイルス、酵母プラスミド、プラスミド及びファージＤＮＡに由来するベクター、及びウイルス核酸(ＲＮＡ又はＤＮＡ)ベクターを含む。ある例示的な態様では、ＰＩＲＡコード核酸は、ネイキッドＤＮＡ又はＲＮＡベクターに含まれてもよく、それは、例えば、線状発現エレメント(a linear expression element、例えば、Sykes and Johnston (1997) Nat Biotech 17: 355-59に記載される)、コンパクト核酸ベクター(compacted nucleic acid vector、例えば、米国特許第６０７７８３５号及び／又は国際公開第００／７００８７号などに記載される)、プラスミドベクター、例えば、ｐＢＲ３２２、ｐＵＣ１９／１８又はｐＵＣ１１８／１１９、「ユスリカ」最小サイズ核酸ベクター("midge" minimally-sized nucleic acid vector、例えば、Schakowski等,(2001) Mol Ther 3:793-800に記載)、又は沈殿核酸ベクター構成物(precipitated nucleic acid vector construct)、例えば、ＣａＰＯ_４沈殿構成物(例えば、以下に記載される；国際特許出願 WO 00/46147、Benvenisty and Reshef(1986)Proc Natl Acad Sci USA 83:9551-55、Wiglerら(1978), Cell 14:725 及びCoraro and Pearson (1981)Somatic Cell Genetics 7:603)を含む。そのような核酸ベクター及びその使用は当該分野において周知である(例えば、米国特許第５５８９４６６号及び同第５９７３９７２号を参照されたい)。ある態様では、本発明は、細菌細胞におけるＰＩＲＡの発現に適切である、ＰＩＲＡコード核酸を含むベクターを提供する。そのようなベクターの例には、例えば、容易に精製される融合タンパク質の高レベルの発現に関するベクター(例えば、BLUESCRIPT(Stratagene)などの多機能大腸菌クローニング及び発現ベクター、ｐＩＮベクター(Van Heeke & Schuster, J Biol Chem 264:5503-5509(1989)；ｐＥＴベクター(Novagen, Madison WI)；など)が含まれる。好適なＰＩＲＡ発現ベクターは、例えば、酵母系において発現するために適切なベクターでもあってよいか、あるいはそれでもよい。酵母系における発現に適切な何れのベクターも使用される。例えば、サッカロミセス・セレビシアエ(Saccharomyces cerebisiae)などにおいて使用するために適切なベクターは、例えば、恒常的又は誘導性のプロモーター、例えば、アルファファクター、アルコールオキシダーゼ及びＰＧＨなどを含むベクターを含む(例えば、上掲のAusubel, 及び Grantら, Methods in Enzymo 153: 516-544(1987)に概説されている)。

また、核酸及び／又はベクターは、分泌／局在化配列をコードする核酸配列を含んでよく、それらはポリペプチド、例えば、新生ポリペプチド鎖などを所望の細胞コンパートメント、膜又はオルガネラに向ける、又はポリペプチド分泌を細胞膜周辺腔に対して又は細胞培養の培地に方向付ける。そのような配列は当該分野において公知であり、分泌リーダー又はシグナルペプチド、オルガネラターゲッティング配列(例えば、核局在化配列、ER保持シグナル、ミトコンドリアトランジット配列、クロロプラストトランジット配列など)、膜局在化／アンカー配列(例えば、ストップトランスファー配列、ＧＰＩアンカー配列など)、などを含む。

ＰＩＲＡ発現ベクターは、何れか適切なプロモーター、エンハンサー及び他の発現促進エレメントを含んでも、又は関連付けてもよい。そのようなエレメントの例は、強い発現プロモーター(例えば、ヒト ＣＭＶ ＩＥプロモーター／エンハンサー、ＲＳＶプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＳＬ３-３プロモーター、ＭＭＴＶプロモーター又はＨＩＶ ＬＴＲプロモーターなど)、有効ポリ(Ａ)ターミネーション配列、大腸菌におけるプラスミド生成物のための複製の起源、選択可能なマーカーとしての抗生物質耐性遺伝子、及び／又は簡便なクローニングサイト(例えば、ポリリンカーなど)を含む。一つの側面においてある態様では、本発明は、ＰＩＲＡコード配列を含む核酸を提供し、当該ＰＩＲＡは組織特異的プロモーターに機能可能に連結される。

他の態様では、当該核酸は、宿主細胞又はウイルスベクターを介してホスト動物に位置し、及び／又は宿主細胞又はウイルスベクターを介して宿主動物に送達される。何れかの適切なウイルスベクターはこの点で使用され、そのいくつかが当該技術分野において公知である。ウイルスベクターは、幾らかのウイルス性ポリヌクレオチドを単独、又は一又は複数のウイルスタンパク質と組み合わせて含まれ、所望のホスト細胞における本発明の核酸の送達、複製及び／又は発現を促進する。当該ウイルスベクターは全て又は一部分のウイルスゲノム、ウイルスタンパク質／核酸複合体、ウイルス様粒子(ＶＬＰ)、米国特許第５８４９５８６号及び国際公開第９７/０４７４８号に記載されるものと同じベクター、ウイルス核酸及び本発明の当該核酸を含むインタクトなウイルス粒子を含むポリヌクレオチドである。ウイルス粒子ウイルスベクターは、複製及び／又は発現のためのもう一つのベクター又は野生型ウイルス(すなわち、ウイルスベクターはヘルパー依存性ウイルスである)、例えば、アデノウイルスベクター単位複製配列など、の存在を要求するベクターである。典型的には、そのようなウイルスベクターは、本質的に野生型ウイルス粒子、又はそのタンパク質及び／又は核酸内容物において修飾されて、導入遺伝子の能力又は当該核酸のトランスフェクション及び／又は発現における援助を増大するウイルス粒子を含む(そのようなベクターの例は、ヘルペスウイルス／ＡＡＶ単位複製配列を含む)。典型的に、ウイルスベクターは正常にヒトに感染するウイルスに同じ、又はそれに由来する。この点で適切なウイルスベクター粒子は、例えば、アデノ関連ウイルスベクター粒子(ＡＡＶベクター粒子)又は他のパルボウイルスベクター粒子、パピローマウイルスベクター粒子、フラビウイルスベクター、アルファウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、ポックスウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター(lentiviral vectors)を含むベクターなどを含む。そのようなウイルス及びウイルスベクターは、例えば、以下の文献に記載される；Fields等, eds., VIROLOGY RAVAN Press, Ltd., New York(3^rded., 1996 and 4^thed.,2001);FUNDAMENTAL VIROLOGY, Fields等, eds., Lippincott-Raven(3^rded.,1995), Levine,"Viruses," Scientific American Library No.37(1992), MEDICAL VIROLOGY, D.O. White等,eds., Acad. Press(2nd ed. 1994), and INTRODUCTION TO MODERN VIROLOGY, Dimock, N.J.等, eds., Blackwell Scientific Publication, Ltd.(1994)。したがって、本発明のポリヌクレオチド及び他の核酸並びにここで記載された方法と共に使用できるウイルスベクターには、例えば、アデノウイルスウイルスベクター；アデノ関連ウイルス(ＡＡＶ)ベクター；パピローマウイルスベクター；ヘルペスウイルスベクター；レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、ポックスウイルスベクター(例えば、ワクシニアウイルスベクター)を含む；などが含まれる。

本発明はまた、組換え細胞、例えば、酵母、細菌及び哺乳類細胞(例えば、不死化された哺乳類細胞など)などであって、ＰＩＲＡコード核酸、ベクター又はその何れか又は両方の組み合わせを含む組換え細胞を提供する。例えば、ある例示的な態様では、本発明は、本発明のＰＩＲＡの発現のためにコードする配列を含む細胞のゲノムに安定に統合された核酸を含む細胞を提供する。他の態様では、本発明は、非統合の核酸、例えば、プラスミド、コスミド、ファージミド、又は線状発現エレメントなど、を含み、ＰＩＲＡの発現のためにコードする配列を含む細胞を提供する。

核酸、ベクター及び細胞を、本発明のＰＩＲＡタンパク質の代わりに、本明細書中に記載の大半の本発明の方法に用いて、例えば一又は複数のＰＩＲＡを培養物又は宿主に「送達(deliver)」してもよい(上記の他の方法によるＰＩＲＡの「投与」(例えばペプチド化合物組成物の注入、吸入など)の対語)。したがって、例えば、本発明は、哺乳動物の細胞においてＩＲをアンタゴナイズする方法であって、ＰＩＲＡコード核酸を適切な細胞に対して当該核酸の発現及びＰＩＲＡの産生に適切な条件下で導入し、それによって発現されたＰＩＲＡをＩＲ活性をアンタゴナイズするようにＩＲ反応性を含む細胞に接触させることを含んでなる方法を提供する。

また、本発明は、トランスジェニック生物体であって、ＰＩＲＡコード核酸又はそれと同じ物を含むベクターを含むトランスジェニック生物体を提供する。適切なトランスジェニック生物体は、マウス、ラット、ニワトリ、植物、ウシ、ヤギ、モルモット、サル及び他のヒト以外の霊長類を含む。トランスジェニック動物は、ＰＩＲＡコード核酸の標準的な技術による安定した導入により産生される。

本発明の別の態様は、ＰＩＲＡの新たな使用、ＰＩＲＡ組成物、及び関連した分子及び組成物(例えばＰＩＲＡコード核酸、関連するベクターなど)において表される。

一態様では、本発明は、ＩＲのアンタゴニスト作用が有益である被検体(例えば、哺乳類宿主、例えば愛玩動物、家畜又はヒト患者)の疾患、疾病又は症状の治療方法であって、疾患、疾病又は症状を治療するために被検体に治療的有効量のＰＩＲＡを投与する(又は送達する、特に言及しなければ一般に本明細書中で交換可能である用語)ことを含んでなる方法を提供する。「治療」などの用語は、任意の症状又は疾患状態が生じるのを阻止することを目的として、又は既に生じた症状や疾患状態を和らげる、寛解する又は根絶する(治癒する)ことを目的として、本発明の治療的活性を持つＰＩＲＡ化合物又は組成物の有効量の送達(例えば投与)を指す。したがって、「治療」なる用語は通常、予防治療を含むはずである。しかしながら、本発明の治療的投薬計画及び予防的投薬計画は本発明の別々の独立した態様とみなしうることが理解されるであろう。他の態様では、本発明は、このような疾患及び症状の治療に有用な医薬の産生におけるＰＩＲＡの使用を提供する。上記のように、ＰＩＲＡは、別々に投与されても、又は他の薬剤活性のある薬剤と組み合わせて投与されてもよい。このような併用療法は、限定されるものではないが、複数の薬剤を単一の投与形態で、又は異なるここの用量形態で投与することを含む、異なる治療的投薬計画を包含することが理解されるであろう。薬剤が異なる用量形態で存在する場合、投与は同時又はほぼ同時でも、又は異なる薬剤の投与を包含する任意のある投薬計画に続いてもよい。

一態様では、本発明は、状態を治療するためにＰＩＲＡの有効量を被検体に供給することを含んでなる被検体の高インスリン血症を治療する方法を提供する。一態様では、本発明は、集団群(例えば正常なグルコース耐性を持ち、糖尿病歴を持たないか又は薬物使用のない非肥満男性集団)の少なくともおよそ７５パーセンタイルの空腹時インスリンレベル(例えば、少なくともおよそ８０パーセンタイル、８５パーセンタイル、９０パーセンタイル、９５パーセンタイルなど)に相当する血中インスリンレベルを有するとみなす高インスリン血症を患う被検体(例えばヒト患者)の治療方法を提供する。一態様では、高インスリン血症を有する被検体は、およそ１０μＵ／ｍＬ(６０ｐｍｏｌ／Ｌ)以上、例としておよそ１２μＵ／ｍＬ(７２ｐｍｏｌ／Ｌ)以上(例えば少なくともおよそ１３μＵ／ｍＬ(７８ｐｍｏｌ／Ｌ)、少なくともおよそ１４μＵ／ｍＬ(８４ｐｍｏｌ／Ｌ)、少なくともおよそ１５μＵ／ｍＬ(９０ｐｍｏｌ／Ｌ)、少なくともおよそ１６μＵ／ｍＬ(９６ｐｍｏｌ／Ｌ)、少なくともおよそ１７μＵ／ｍＬ(１０２ｐｍｏｌ／Ｌ)、少なくともおよそ１８μＵ／ｍＬ(１０８ｐｍｏｌ／Ｌ)、少なくともおよそ１９μＵ／ｍＬ(１１４ｐｍｏｌ／Ｌ)、少なくともおよそ２０μＵ／ｍＬ(１２０ｐｍｏｌ／Ｌ)、又は２０μＵ／ｍＬ(１２０ｐｍｏｌ／Ｌ)より多く)の空腹時インスリンレベルを有するヒト患者として定義される。

ある態様では、本発明は、被検体の高インスリン血症に関連した疾患及び症状、例として、不安、異常な空腹感、異常な疲労、過食、低血糖と関係している精神医学的な症状、及び／又は低血糖(低血糖関連の発作、昏睡及び死を含む)の可能性を低減する方法を提供する。本発明の方法は、様々な種類の持続的な高インスリン血症症状、例として、膵島細胞増殖症(ＫＡＴＰ-ＨＩびまん性疾患、ＫＡＴＰ-ＨＩ限局性疾患、又は「ＰＨＨＩ」)、ＧＤＨ-ＨＩ(高インスリン症／高アンモニア血症症候群(ＨＩ／ＨＡ)、ロイシン感受性低血糖、又はジアゾキシド感受性低血糖)、膵島細胞調節不全症候群、乳児期の特発性低血糖、乳児期の持続性高インスリン性低血糖症(ＰＨＨＩ)、先天性高インスリン症、及びインスリノーマを治療するために応用されうる。他の態様では、高インスリン血症を治療又は予防するためにＰＩＲＡを投与又は送達する本発明の方法は、高インスリン血症と関係していることが多い多嚢胞性卵巣症候群(ＰＣＯＳ)を患っている被検体又は該疾患を発症する差し迫ったリスクにある被検体に実施されうる。

他の特定の態様では、本発明は、被検体に有効量のＰＩＲＡを投与することによって被検体の高インスリン血症関連の低血糖の発症(及び／又は最終的な重症度)を生じさせる及び／又は遅延させる可能性を低減する方法を提供する。

さらに他の特定の態様では、本発明は、症状を治療するため、又は発作及び神経性後遺症などの関連症状の可能性を阻止、低減、又はその症状の発症を遅らせるために、新生被検体に有効量のＰＩＲＡを送達することを含んでなる、高インスリン血症によって生じた新生児の低血糖(又は、他の「一過性の高インスリン血症」)を治療する(治療法を提供する及び／又は予防する)方法を提供する。

他の態様では、本発明は、高インスリン血症関連の症状を患っている患者の低血糖の重症度を低減する方法を提供する。

さらに他の態様では、本発明は、ＰＩＲＡの有効量(治療的有効量又は予防的有効量)を宿主に送達することを含んでなる、インスリノーマを有すると診断された患者又はインスリノーマを発症する実質的なリスクにある患者の健康を改善する又は維持する方法を提供する。

さらに他の態様では、本発明は、生理学的有効量(例えば予防的有効量)のＰＩＲＡを個体に投与(又は送達)することを含んでなる、高インスリン血症の高いリスクに関連した特徴を有する個体(例えば、高インスリン血症関連の症状の家族歴がある、又は民族的に日本起源の男性といった高インスリン血症を相対的に高く発症する集団群に属する)などの個体の健康を維持する又は改善する(及び／又は個体のＩＲ活性を調節する)ための方法を提供する。

他の態様では、本発明は、生理学的有効量のＰＩＲＡを細胞に送達することを含んでなる、細胞(例えば、適当なインビトロの細胞集団又は適切な脊椎動物(例えば脊索動物)の宿主)におけるＩＲ活性をアンタゴナイズする方法を提供する。

更なる他の態様では、本発明は、生理学的有効量のＰＩＲＡを被検体に送達することを含んでなる、被検体の循環インスリンの効果を低減する方法を提供する。

他の態様では、本発明は、高インスリン血症又は高インスリン血症関連の症状(例えば高インスリン血症関連の低血糖)のための治療方法であって、類似の治療効果を達成するためにＰＩＲＡを用いない場合に用いる量と比較して、相対的に少ない量の二次薬剤(例えばグルカゴン)とともに有効量のＰＩＲＡを送達することを含む治療方法に関する。

更なる態様では、本発明は、生理学的有効量のＰＩＲＡを被検体に送達することを含んでなる、被検体の血中グルコースレベルを低下する方法を提供する。

さらに他の態様では、生理学的有効量のＰＩＲＡを被検体に投与することを含んでなる、被検体におけるインスリンの効果を低減する方法を提供する。

他の態様では、本発明は、被検体のインスリン分泌を増やすために生理学的有効量のＰＩＲＡを被検体に投与又は送達することを含んでなる、被検体のインスリン分泌を増加する方法を提供する。何か特定の理論に限定されるものではないが、試験動物におけるＰＩＲＡの投与と関係する実験的所見から、おそらくＩＲが媒介するフィードバックシステムの遮断によって、インスリン分泌が増加することが示唆される。他の態様では、本発明は、I型糖尿病、II型糖尿病、肥満、グルコース耐性不良、及び／又は空腹時グルコース耐性不良の治療方法であって、被検体(例えば必要であると診断されたヒト患者)に予防的又は治療的な有効量のＰＩＲＡを、場合によっては治療する疾患の治療に適する一又は複数の他の治療活性を持つ薬剤(例えば抗糖尿病薬)と組み合わせて投与する(又は送達する)ことを含んでなる方法を提供する。他の態様では、本発明は、I型糖尿病、II型糖尿病、肥満、グルコース耐性不良、及び／又は空腹時グルコース耐性不良の治療のための医薬の調製におけるＰＩＲＡ(又はＰＩＲＡをコードする核酸などの関連した化合物／組成物)の使用に関する。

他の態様では、本発明は、場合によっては本明細書に記載の他の二次薬剤とともに一又は複数のＰＩＲＡを使用することによる、上記のいずれかの治療計画又は本明細書に記載の他の治療目的のための医薬の調製に関する。ゆえに、例えば、ある態様では、本発明は、高インスリン血症の治療のための医薬の調製におけるＰＩＲＡの使用を提供する。

本明細書中の他のところで示すように、本明細書中に記載の治療方法の実施には、ＰＩＲＡ(一又は複数)は、必要に応じて二次薬剤とともに同時投与又は二次薬剤と組み合わせて投与されうる(このような薬剤の組合せを含む組成物も本発明の特徴である)。この二次薬剤には、例えば、一又は複数の抗高インスリン症(例えばインスリン産生-減少)剤及び／又は抗低血糖剤、例としてジアゾキシド、オクトレオチド、ニフェジピン、サンドスタチン、グルカゴン、又はこれらのいずれかないしはすべての組合せが含まれうる。また、ＰＩＲＡ投与は、高インスリン血症関連の症状を治療するために用いる外科的手技、例えば膵臓切除と組み合わせて提供されうる。

一般的に、ＰＩＲＡは、本明細書に記載の本発明の方法の実施において、何れかの適切な方法、例えば、標的宿主細胞における当該ＰＩＲＡの産生のためにコードする核酸からの発現により(例えば、ＰＩＲＡコード核酸から、誘導プロモーターの調節下で、適切な遺伝子導入ベクター、例えば、標的化及び複製を欠く遺伝子導入ベクターなどに含まれての発現などにより)送達できる。典型的には、ＰＩＲＡはレシピエント宿主に対してＰＩＲＡ又はＰＩＲＡ組成物を直接投与することにより送達される。したがって、ＰＩＲＡ及びＰＩＲＡ組成物は、タンパク質及びペプチドを送達するための当該技術分野で公知の標準的な担体を含む薬剤的組成物として投与されてもよく、及び／又は遺伝子治療により送達されてもよい。一般的に及び適切である場合、用語、投与及び送達は、ここでは、もう一方に対する補助を提供すると解釈されるべきであるが(例えば、一般的にはＰＩＲＡコード核酸はネイキッドＰＩＲＡを標的宿主組織に送達するために使用でき、同様に或いは、ＰＩＲＡタンパク質を投与するために使用できると認められるべきであるが)、しかしながら、またそれぞれのそのような方法は、何れかの特定の分子に関して独特であること、及び幾つかの分子(例えば、分解抵抗性有機部分を含むコンジュゲートＰＩＲＡなど)は唯一、送達／投与の一定の形態に対して受け入れられることが認められるべきである。タンパク質、核酸及び関連する組成物(例えば、ベクター及び宿主細胞など)を投与するための方法は周知であり、適宜、簡単にのみここでは記載する。

ＰＩＲＡ組成物、関連する組成物、及び組み合わせ組成物は、何れかの適切な経路、例えば、経口、粘膜、頬側、鼻腔内、吸入、静脈内、皮下、筋肉内、非経口、又は局所的な経路などを経て投与されてよい。そのようなタンパク質はミニポンプ又は他の適切な装置を介して連続的に投与されてもよい。

ＰＩＲＡ又は他のＰＩＲＡは一般的に、当該疾患状態がある限り、当該タンパク質が当該状態の悪化を止める又は改善させるという条件で、投与されるであろう。当該ＰＩＲＡは一般的に、薬学的に許容される組成物の一部分として、例えば、ここの他の場所において詳細に記載する通りに、投与されるであろう。一般的に、ＰＩＲＡ又は関連する化合物／組成物は何れかの適切な経路により投与されてよいが、典型的には、非経口的に、通常の薬学的に許容される担体、補助剤など(安定剤、崩壊剤、抗酸化剤など)を含む投与量単位製剤で投与される。ここで使用される場合、用語「非経口的」は、皮下、静脈内、動脈内、筋肉内、胸骨内、腱内(intratendinous)、脊髄内、頭蓋内、胸腔内、注入技術及び腹腔内送達を含む。したがって、ある態様では、ＰＩＲＡ組成物は静脈内又は皮下で、本発明の治療方法の実行において投与される。注射の経路はまた、筋肉への注射(筋肉内 ＩＭ)；皮膚の下への注射(皮下(ｓ.ｃ.))；静脈への注射(静脈内(ＩＶ))；腹腔への注射(腹腔内(ＩＰ))；及び他の皮膚への／皮膚を通じた送達(通常は多様な注射による皮内送達、これは微粒子銃注射を含んでよい)を含む。

ある態様では、本発明は、宿主におけるＩＲ活性を調節する方法であって、混合物中に薬学的に(すなわち、生理学的に)許容される担体、賦形剤、又は希釈剤、及び一又は複数のＩＲアゴニストＰＩＲＡを活性剤成分(これは更に第二の活性薬剤と他の箇所に記載された通りに組み合わされてもよい)として含む組成物の投与を含んでなる方法を提供する。

本発明の薬剤的組成物は、経口又は非経口経路により全身的に投与されてもよい。非限定的な非経口経路の投与は、皮下、筋肉内、腹腔内、静脈内、経皮的に、吸入、鼻腔内、動脈内、くも膜下腔内、経腸、舌下又は直腸内を含む。典型的なアミノ酸配列は不安定な性質であるため、非経口投与が都合がよい。有利な投与方法は、例えば、鼻用又は気管支吸収用のエアロゾル；静脈内、筋肉内、胸骨内又は皮下注射；及び経口投与のための化合物などを含む。

静脈内投与は、例えば、単位投与量の注射により行うことができる。当該用語「単位投与量」は、本発明の医薬組成物に対する言及において使用される場合、ヒトのための１単位用量として適切な物理的に分離された単位をいい、各単位は、必要とされる希釈剤；すなわち、濃縮された又は純粋な物質を希釈し、当該物質を使用のために正しい(希釈された)濃度にするために使用される液体；に関して所望の治療効果を生じるために計算され予め決められた量の活性物質を含む。注射剤投与のために、当該組成物は、滅菌溶液又は懸濁液中にあり、又は薬学的及び生理学的に許容される水性又は油性の溶媒で乳化されてもよく、これらは保存剤、安定剤及び当該溶液又は懸濁液に当該レシピエントの生体流体(すなわち、血液)との等張性を与えるための物質を含んでよい。

使用のために適切な賦形剤は、水、リン酸バッファー生理食塩水、水性塩化ナトリウム溶液、デキストロース、グリセロール、希エタノールなど、及びその混合物である。例示的な安定剤はポリエチレングリコール、タンパク質、糖類、アミノ酸、無機酸及び有機酸、これらはそれら自身で又は混合物として使用されてもよい。使用される投与の総量及び量並びに経路は、個々を基準に決定され、当業者に公知の同様な種類の出願又は記載において使用される当該各量に一致する。

薬剤的組成物は典型的には投与量剤形に適する方法で、治療上有効な量で投与される。投与されるべき量は、治療されるべき対象、及び所望のＩＲの程度(例えば、所望の治療的又は予防的な結果又は効果)に依存する。投与されるべき必要な活性成分の正確な量は、医師の判断に依存し、各々の個体特有であってよい。しかしながら、適切な投与量は、１日当たり個体の体重１ｋｇ当たりおよそ１〜２００ｎｍｏｌ(例えば、およそ１０〜２００、例えばおよそ１〜１００、例えばおよそ１０〜１００)ｎｍｏｌの活性ペプチドの範囲であってよく、投与経路に依存してよい。最初の投与及びブースター注射のために適切な投与計画はまた可変的であるが、しかしながら、１時間以上の間隔での最初の投与とそれに続く繰り返し投与により、続く注射又は他の投与により、代表されてよい。或いは、血中でピコモーラー濃度(例えば、およそ１ｐＭ〜１０ｎＭ)を維持するのに十分な継続的な静脈内注入が考えられる。

他の具体的な態様では、ＰＩＲＡ又はＰＩＲＡ組成物は、注射用ポンプにより液体中又はそのような装置に使用するために適切な製剤中で送達される。ＰＩＲＡはまた、ペン、例えば、現在インスリン製品を送達するために使用されているようなペンにより投与される。経皮性パッチ(例えば、マトリックスパッチ中の薬物など)の使用も、ＰＩＲＡの送達のために使用できる(例えば、受動性送達により、又はイオン注入送達などを介して)。

医薬製剤の製造における更なる手引きを、例えば以下の文献に見ることができる；Gilman等(eds),1990,Goodman and Gilman's: The Pharmacological Basis of Therapeutics, 8th ed., Pergamon Press；及び Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., 1990, Mack Publishing Co., Easton, PA; Avis等(eds), 1993, Pharmaceutical Dosage Forms: Publishing Co., Easton, PA；Avis等(eds), 1993, Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications, Dekker, New York；Lieberman等(eds), 1990, Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems, Dekker, New York.

より具体的な態様を示すために、用量原則の詳細な考察をここでさらに示す。

一態様では、本発明の方法は、第一ＰＩＲＡの第一送達の後、又は宿主において第一ＰＩＲＡへの有意な免疫応答が生じ第一ＰＩＲＡの連続使用が患者にとって有害になる任意のときの、およそ１〜３週間後に第二ＰＩＲＡを開始するという治療で始める、１か月間の２つの異なるＰＩＲＡの投与又は送達を含む。

本発明の特に有利な態様は、治療上及び／又は予防上有効な量の一以上の消化酵素安定化ＰＩＲＡ(一又は複数の通常の分解抵抗性アミノ酸残基及び／又は分解抵抗性部分を上述通り含む)を含み、経口投与のために製剤化された薬学的に許容される組成物生物、及び組成物のような組成物生物のＩＲ活性の調節における使用(例えば、糖尿病又は関連する状態、例えば、ＩＲ媒介代謝障害などを治療する面において)において例示される。比較的小さいサイズの典型的なＰＩＲＡ及びそれ自身おける及びそれ自身の簡単な構造(例えば、多くのＰＩＲＡの場合にはおよそ４０アミノ酸残基の単鎖)は、抗体などのより大きなタンパク質(数百残基のアミノ酸の大きさであり、少なくとも２つのアミノ酸鎖を越えて広がる)に比べて、そのようなタンパク質の経口送達を助けると考えられる。Ｎ及び／又はＣ末端ブロッキング修飾の追加(特に、例えば、それぞれアセチル化(又は他のアシル化)及びアミド化)が、そのような分子の経口で送達される能力を増加すると考えられる。分解抵抗性特殊アミノ酸残基及び／又は有機成分もまた、又は或いは、顕著にそのようなペプチドの経口経路による送達される能力を、現在公知のインスリン及びインスリン類似体に比べて増大すると考えられる。そのような特徴を有する組み合わせを含むＰＩＲＡは特に抗糖尿病薬に適切な経口送達のために遊離であると考えられる。ある態様では、本発明はＰＩＲＡ経口製剤であって、少なくともおよそ１％、少なくともおよそ５％、少なくともおよそ１０％、少なくともおよそ１５％、少なくともおよそ２０％、よりも多い、非経口注射に比べての経口投与における相対的生物学的利用能を表しうるＰＩＲＡ経口製剤を提供する。ＰＩＲＡの本来備わっている経口送達能力は、ＰＩＲＡと当該分野において公知の方法の経口送達増強組成物との配合により増強でき、それは経口送達及び小型ペプチドの有効性を増強する上で有効であることが示されている。典型的に、経口製剤は、タンパク分解活性の阻害又は調節；当該ペプチドを分解する；当該ペプチドのパラセルラー及び／又はトランスセルラーの輸送を増強する；粘膜障壁(特に迅速溶解形態及びエアロゾル送達又はスプレー送達経口投与形態)を通過するペプチドの浸透を改善する；及び／又は循環における当該ペプチドの半減期を増加する(特にペプチドは、治療学的効果のために持続して存在することを求める)；ことを求める。装置がそのような送達を助ける。例えば、ＰＩＲＡ組成物は、頬側粘膜及び咽頭中央部領域、ここにおいて当該製剤の吸収が起こる、に対して当該組成物を送達可能にするエアロゾルスプレー装置により送達するように製剤化できる。例えば、インスリンなどの小型ペプチドの送達のために使用されるそのような装置の例は、当該分野で公知である。

ある態様では、本発明は、ＰＩＲＡ経口製剤組成物であって、ここで、ＰＩＲＡは担体分子に対して複合しているか、又はカプセルに包まれており、それにより当該ＰＩＲＡは当該安定化複合又はカプセル化物質なしのＰＩＲＡの安定性に比べて安定性が改善される。ＰＥＧ複合体及び典型的な安定化及び送達増強複合物質の例。ＰＩＲＡは、例えば、ＧＩ吸収の増加及び／又はタンパク分解性の当該ＰＩＲＡの分解を減少するＰＥＧベースの両親媒性のオリゴマーに対して複合される。他の例示的態様では、ＰＩＲＡを内包するカルシウムホスフェート-ＰＥＧ-インスリン-カゼイン(ＣＡＰＩＣ)粒子の組成物は、経口送達形態として使用される(微粒子及びナノ粒子形態を更にこの説明の他の場所に記載する)。ある態様では、ＰＩＲＡは、受動的なトランスセルラー輸送を容易にする送達剤又は担体に対して複合化する。望ましくは、そのような担体又は薬剤は、循環中の(例えば、低いｐＨ状態への曝露をあるレベルに到達することにおいて)ＰＩＲＡと結合しないように操作される。

他の態様では、ＰＩＲＡは、一以上の経口送達促進賦形剤、例えば、コール酸ナトリウム及び／又はトリプシンインヒビターなどを含む腸溶性のコートをされたマイクロカプセル又は錠剤に製剤化される。更なる態様では、ＰＩＲＡ経口製剤は、当該ペプチドの溶解性を増加し、腸粘膜との相互作用を減少し、及び／又はパラセルラー輸送を増強する界面活性剤成分の有効量を含んで提供される。更なる他の態様では、ＰＩＲＡは、経口送達を促進する一又は複数の(典型的には幾つかの)低分子量(ＬＭＷ)ポリマー複合体に複合し、例えば、関連／同様のネイキッドＰＩＲＡに関する酵素分解に対して抵抗性を付与する、及び／又は(例えば、胃腸管経路に沿って、及び血流へ吸収するための障壁を構成する細胞及び組織の水及び脂肪質部分を通過しての拡散を改善して)よりよい胃腸管輸送を可能にする。経口送達増大小型ペプチド複合体の構造のための組成物、方法及び関連した原理は、米国特許第５３５９０３０号；同第５４３８０４０号；同第５６８１８１１号；及び同第６３０９６３３号に提供される。他の態様では、本発明は、アミノ酸を基礎とするカプセル系を含む経口送達ＰＩＲＡ製剤であって、当該ＰＩＲＡの腸の裏打ち輸送(intestinal lining passage)を促進し、酵素分解を阻害する製剤を提供する。

更なる他の態様では、本発明は、ＰＩＲＡ又はＰＩＲＡ組成物の脂質又はリポソームカプセル包入を含む経口送達ＰＩＲＡ製剤を提供し、これは、上皮性関門を介した伝達を促進し、及び／又は当該ＰＩＲＡを酵素分解から守る。望ましくは、そのような脂質製剤は、医薬組成物の口腔粘膜による顕著な吸収を促進し、それにより「初回通過(first pass)」効果を避ける。他のの面では、本発明は、ＰＩＲＡ経口送達製剤であって、ＰＩＲＡがマイクロカプセルに含まれる製剤を提供し、それは直接投与されても、又は直接経口投与又は経口送達装置による投与のためのカプセル、パケットなどに入れられて投与されてもよい(ここにおいて一般的に記載される他の経口送達形態は、そのような方法によって良好にホストに対して送達される)。具体的な態様では、本発明は、アルギネートミクロスフェアで構成されるＰＩＲＡ経口送達剤形を提供する。望ましくは、当該アルギネートは天然に存在するアルギネートであり、ＵＳ ＦＤＡにより安全であると一般的にみなされる通りに分類され、任意にまた、上部消化管の粘膜でのタンパク分解効果を誘導又は促進する。他の態様では、コートされた結晶製剤が提供される。突出したスフェロナイゼーション(spheronization)は、高濃度の活性物質を高薬物濃度ペレットに含ませることを可能にし、ＰＩＲＡ製剤に対して適用することが可能である。

他の態様では、ＰＩＲＡ組成物は、液体経口投与のためのボトル又は他の容器中(例えば、単位用量の容器など)のコートされた粒子のドライシロップ懸濁液として提供される。

一般的には、ここにおいて記載される製剤は、持続放出剤形、味をマスクした、又は腸溶コートの組成物である。

他の態様では、本発明は、経口投与用の比較的硬いゼラチンカプセル中の半固体マトリックス系を提供する。典型的には、そのようなカプセルは更に、送達促進剤、例えば、脂質ペプチド送達系を含む。コートされた微粒子を含む軟ペレット錠もまた、本発明により提供される。水不活性及び／又は脂肪不活性なマトリックス錠は、もう一つの潜在的に適切な経口送達形態である。典型的には、そのような錠剤はコートされた微粒子のＰＩＲＡ組成物と、任意のペプチダーゼインヒビター及び／又は浸透増強剤、又は他の適切な賦形剤を含む。適せな浸透増強剤は界面活性剤、脂肪酸、胆汁塩、クエン酸塩、及びキレーター(例えば、ＥＤＴＡなど)を含むが、他の適切な浸透増強剤もまたこれらの組成物において、又はここで記載された他の経口送達形態に含まれる。例えば、シクロデキストリンを使用して、ＰＩＲＡ微粒子、複合体又は他の薬剤形態の浸透増強してもよい。

更なる面では、本発明は、生物接着性ポリマー又は他の生物接着性物質を含むＩＲＢＰ組成物を提供し、それは典型的にＧＩ管との関連を促進にする。そのようなポリマーの例は、ポリカーボフィル及びキトサンを含む。既に言及したように、担体系、例えば、ナノ粒子、ミクロスフェア、リポソームなど(例えば、小型単層ベシクル(ＳＵＶ)；アルブミンコーティングナノ粒子；メチルメタクリレートコーティングなの粒子；及びアルブミンコーティングミクロスフェア(例えば、アルブミン／酸化鉄磁気及び目標を定めることが可能なミクロスフェア又は他の目標を定めることが可能な微粒子／ナノ粒子製剤)など)もまた、又は或いは使用し、ＰＩＲＡ組成物の患者に対する経口投与を促進する。そのような製剤はＧＩ管の種々の領域からの吸収を増強する、及び／又はＰＩＲＡ組成物の分解を防止するように工作されてもよい。

乳剤及びミクロエマルジョンもＰＩＲＡの経口送達剤形として使用される。例えば、オレイン酸、ガドレイン酸、エルカ酸、リノレン酸、リシノール酸、アラキドン酸、そのような酸のグリセリルエステル、オレイルアルコール、ｄ-アルファ−トコフェロールポリエチレングリコールスクシネート、それらの何れかの組み合わせ、又は同様な分子；断続的な水性親水性相；及び少なくとも一の界面活性剤(例えば、ポロキサマー124、ポリグリコライズされたグリセリド、ソルビタンラウリレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、又は同様な界面活性剤がそのような乳剤及び関連するプレエマルジョン濃縮物を含む)を含む疎水性相を含む油中水乳液を分散疎水性相(当該疎水性相は典型的におよそ５〜１０wt%の乳剤)のために、ＰＩＲＡを含む組成物、これはアルコール、塩溶液などを含んでよい)を油中水乳剤として、ＰＩＲＡ組成物の経口送達を促進することにおいて使用してもよい。乳剤は、腸溶コーティング物質でコーティングされてよく、これは、本発明の経口送達製剤のための適切な他のコーティング物質に関して言及したとおり酸性水性環境において溶解してもよい。

他の態様では、本発明は、チオレートポリマー薬物担体マトリックス又はポリマーと関連するＰＩＲＡを含む経口送達製剤を提供する。そのようなポリマーの例は、２-リミノチオレーンである。場合によって、酵素阻害剤(例えば、ボーマン-バーク-インヒビター及び／又はエラスタチナルなど)が当該複合物の当該キトサン組成物に対して複合される。更にまた、又はあるいは、浸透メディエーターをそのようなキトサンから形成された錠剤形態の当該ＰＩＲＡ組成物に含ませてもよい。当該ポリマーにおけるチオール基の固定は、そのような剤形の当該粘膜付着／密着する特徴を増強してよい。

カプセル包入コートは、薬学的に活性な成分、親水性界面活性剤、親油性界面活性剤、及びトリグリセライドなど、他の異なる組み合わせを含むことも可能である。持続放出経口送達系及び／又は経口投与投与量形態のための腸溶コーティングは、また、コンテンプレートされてもよく、例えば、これらは以下の文献に記載される：１９８７年１１月３日発行の米国特許第４７０４２９５号、１９８５年１２月３日発行の米国特許第４５５６５５２号、１９８２年１月５日発行の米国特許第４３０９４０４号、１９８２年１月５日発行の米国特許第４３０９４０６号。更なる例示的物質はここの他の箇所に記載される。

更なる態様では、ハイドロジェルを含むＰＩＲＡ経口送達形態が提供される。ＰＩＲＡは、ポリ(メタクリル酸-ｇ-エチレングリコール)のハイドロゲル中に組み込まれ、経口的に送達される。ＰＩＲＡはまた、ハイドロゲルトと複合してもよい。ｐＨ反応性複合体ハイドロゲル、例えば、ペンダントグルコース(Ｐ(ＭＡＡ-ｃｏ-ＭＥＧ))を含むハイドロゲル又はグラフトＬＭＷ(例えば、およそ２００ＭＮ)ＰＥＧ鎖(Ｐ(ＭＡＡ-ｇ-ＥＧ))が、ＰＩＲＡ経口送達剤として使用されてもよい。

ナノスフェア、ミクロスフェア及び他のナノ粒子／微粒子はクロスリンクしたネットワークのメタクリル酸から形成されてもよく及び／又はＰＥＧを伴うアクリル酸グラフトが有利な経口送達製剤であってもよい。そのようなナノスフェアに低いｐＨ(例えば、およそ３)で、しかしながら放出可能な薬剤は生理学的なｐＨ(例えば、およそ７)で薬物製品を閉じ込める方法は、当該分野で公知である。裸の及び複合された小型ペプチド送達及び放出方法及び原理のための更なる例示的微粒子製剤は、例えば、米国特許第６１９１１０５号に発表されている。

経口送達剤形はまた、エアロゾル、スプレー及び乾燥パウダーの群から選択される吸入用組成物として提供されてもよい。本発明のこのような製剤は、１９８６年１１月２５日に発行の米国特許第４６２４２５１号；１９７２年１１月２１日に発行の米国特許第３７０３１７３号；１９７１年２月９日に発行の米国特許第３５６１４４４号及び、１９７１年１月１３日に発行の米国特許第４６３５６２７号に記載のもののような噴霧器を用いたエアゾールの形態で投与されてもよい。エアゾール送達の中で他のシステム、加圧するものはメーターで測った例として、は吸入器(ＭＤＩ)をする及び、本発明を実践するときに、Newman, S. P. in Aerosols and the Lung, Clarke, S. W. and Davia, D. eds. pp. 197-224, Butterworths, London, England, 1984にて開示したように、乾燥粉末吸入器が用いられてもよい。

更なる態様では、ＰＩＲＡ組成物は、粘膜付着性腸用パッチとして製剤化されてもよく、それは患者の全身循環にＰＩＲＡの治療用量を送達するために設計される。そのような腸用パッチは、粘膜近くに結合するＰＩＲＡを局在化させ、タンパク分解からそれを保護するために考えられている。そのようなパッチの腸に対する安全な接着は、インスリン製剤で示されており、そのようなパッチは、ペプチド薬物送達のために有効であることが示されている。

ここに記載される当該経口送達剤形は、明確にここに記載される新規のＰＩＲＡ、その変異体(ここで記載される通り)、先の特許文書に記載されるＰＩＲＡからの誘導体(本発明の様々な態様である一又は複数の変異体により修飾される)に対して適用され、そのような非修飾及び以前に特徴付けられたＰＩＲＡを該組成物に含むことが結果として経口投与における有効性を増強する限り、更に前の特許文書に記載される非修飾のＰＩＲＡにさえも適用される。本発明の様々な方法におけるそのような組成物の使用は、本発明の更なる面である。

他の態様では、本発明は、ＰＩＲＡ又はＰＩＲＡ組成物(例えば、ＰＩＲＡの組み合わせ及び／又はＰＩＲＡと第二の薬剤を含む組成物)の肺送達のための製剤を提供する。ＰＩＲＡは直接に肺に投与されてもよく、(送達のこれらの形態のためのそのような分子の上述した有利な特徴のために)標準的な医薬製剤において肺に対して投与されてもよく、しかし更に典型的には、肺送達のために操作された剤形、例えば、吸入のためのエアロゾルとして送達される粒子などが投与される。ＰＩＲＡ組成物は、例えば、ドライパウダー(及びブリスターパックのような送達前の適切な組成物における貯蔵される)インヘラーによる投与のためのドライパウダーとして製造される。そのような系のための乾燥剤形における当該粒子の粒子サイズは、典型的に直径およそ５μｍ未満であり、そのような粒子は典型的に薬物組成物のためにおよそ９０％以上の純度である。そのような組成物は、公知の「ガラス安定化技術」を介して製造される。あるいは、ＰＩＲＡ組成物は、水性組成物に製剤化され(また、任意にブリスターパックに貯蔵され)、水性ミストインヘラー(例えば、適切な用量を確実にするように工作されたマイクロプロセッサー制御水性ミストインヘラー)により投与される。そのような装置は、従来のネブライザーよりも少なくとも５倍、例えば、およそ１０倍の送達の増加を提供する。多くのそのような装置及び同様な装置がペプチド薬物の肺送達のために開発されている。製剤もまた、送達における長時間のＩＲ調節活性のために工作され、例えば、粒子薬物の場合、増強剤を使用することにより、及び／又は長時間活性促進粒子特性(例えば、大量の、例えば、少なくともおよそ５０％のポリ(乳酸-コ-グリコール酸)；小型空気力学的サイズ(例えば、およそ１〜３μｍ)、低密度(例えば、およそ０．１ｇｍ／ｍｌ未満)及び大型形状粒子サイズ(例えば、およそ１０〜２０μｍ)の乾燥粒子を含む多孔性の粒子)を使用することによる。

ＰＩＲＡ組成物は、ＰＩＲＡ誘導体、例えば、低分子量ＰＥＧ化ＰＩＲＡを含んでもよく、それはそのような分子の肺送達を増強する。他の態様では、ＰＩＲＡ組成物は、肺に対して、ＰＥＧ粒子、リン酸カルシウム(ＣＡＰ)粒子、又はＰＥＧ−ＣＡＰ粒子(典型的には懸濁液中)の形態で送達され、そのような粒子は、標準的な技術(例えば、制御された沈殿技術など)を使用して製造される。そのような粒子組成物は、例えば、気管内の注入及び／又はスプレー注入などにより特異的に肺に対して送達される。そのような粒子はまた、場合によって一又は複数のカゼインと関連付けられる(例えば、ＰＥＧ、ＣＡＰ又はＰＥＧ−ＣＡＰ粒子のためのコーティング剤として−カゼインの溶液に対して当該粒子を加えることにより形成され、当該カゼインを当該粒子の周りに凝集及び／又は複合することを可能にする)。同様な組成物が、経口送達形態又は経鼻送達形態(例えば、経口スプレー製剤)のために利用され、及びそのような分子は他の形態(例えば、ハイドロゲル)においても使用される。

小ペプチド、例えば、インスリンなどの肺及び経口送達のための多くの戦略、組成物及び装置が、当該技術分野において開発され、記載されており、それらはまた、本発明のＰＩＲＡ及びＰＩＲＡ組成物に適用してよい(例えば、当該ＰＩＲＡをここで記載したインスリン分子に似るように修飾することにより；ＰＩＲＡ組成物をそこで記載されたインスリン製剤と似るように製剤化することにより；そこで記載されるのと同様な方法及び／又は装置を使用して当該ＰＩＲＡを投与すること)。このような方法、原理、送達デバイス、及びこのような製剤の調製に有用となりうる同種の組成物の例は、例えばGarcia-Contreras等, AAPS PharmSci 2003; 5(2) Article 9 (2003)；Steiner等, Exp Clin Endocrinol Diabetes. 2002 Jan;110(1): 17-21；Pfutzner等, Diabetes Technol Ther. 2002;4(5): 589-94；Gonda, I.等: Journal of Controlled Release 1998; 53:269-274；Schuster, J.等: Pharmaceutical Research 1997;14(3): 354-357；Farr, S.J.等, Interpharm Press Inc., Buffalo Grove, Illinois. 1996, pp. 175-184；Thippawong, J.等, Diabetes Technology & Therapeutics 2002; 4(4): 499-504；Sangwan, S.等, Journal of Aerosol Medicine. 2001;14(2): 185-195(Mudumba S.等, Respiratory Drug Delivery VII. Dalby R.N. et al (eds) Serentec Press, Raliegh, NC. 2000. pp. 329-332)；Brinda, Curr Opin Investig Drugs. 2002 May;3(5): 758-62；Brunner, G.A.等, Diabetologia 1991; 44:305-308；米国公開特許第２００４００９６４０１号；同第２００４００８９２９０号；同第２００３０２１６５４２号；同第２００３０１４８９２５号；同第２００３０１１３２７３号；同第２００２００４６７５０号；同第２００１００３９２６０号；同第２００３０１５０４４６号；及び、米国特許第６６３５６１７号；同第６５１８２３９号；同第６３４９７１９号；同第６３３５３１６号；同第６０９８６１５号；同第６０２４０９０号；同第５６７２５８１号；同第５９１５３７８号；同第５９７０２４０号；及び同第５８１３３５８号に記載される。

（他の用途）
ＰＩＲＡは、インスリンレセプターを伴う任意の化学的プロセス又は生化学的プロセスの研究に用いられてもよい。インスリンレセプターのインスリンの結合を遮断する特定のＰＩＲＡの能力によって、研究者はインスリンシグナル伝達又はインスリンクリアランス及び／又は分解を伴うインビボ及びインビトロでのインスリンレセプターの重要性を決定することができる。

ＰＩＲＡのこのような用途の一例は、哺乳動物のインスリンないしはインスリン類似体のレセプター媒介性分解の程度を定量化する場合である。この方法は、注射ないしは注入によるＰＩＲＡの投与のある場合又はない場合での、連続的な注入に対するインスリンないしはインスリン類似体の定常状態血しょう中濃度を測定することを含む。ＰＩＲＡ投与のある場合とない場合の定常状態の濃度の比率から、レセプター媒介性分解又はクリアランスの関与が推定されうる。

このような方法の他の例は、他の関連した細胞表面レセプター、例として、例えばＩＧＦ１レセプターがある場合には、インスリンないしはインスリン類似体によって誘発される細胞性シグナル伝達プロセスへのインスリンレセプターの関与を定量化する際に実施される。この方法は、適当な濃度のＰＩＲＡ添加がある場合及びない場合で問題のエフェクターアッセイを行い、インスリンレセプターの活性化によって誘発された効果を遮断することを含む。ＰＩＲＡ添加のある場合とない場合で得られた結果の違いは、インスリンレセプター媒介性のシグナル伝達の関与を示す。

このような技術のさらに他の例は、組織(例えば脳)へ選択的にＰＩＲＡを投与し(例えば、局所投与によって、又は、組織特異的標的ベクターからの発現によって、場合によってこのときＰＩＲＡコード配列が組織特異的プロモーターの制御下にある)、その特定の組織におけるインスリンレセプターシグナル伝達の遮断効果を測定することである。このような方法は、インスリンの存在下でＰＩＲＡの効果がある組織に局在しているという条件下でインスリン結合を阻害するＰＩＲＡを(例えば、インビボの研究の場合に既に言及されているものなどの技術を用いて、又はインビトロ研究の場合に組織試料を採取することによって)この組織に送達することと、既知及び所望のインスリン：インスリンレセプター反応パラメーター(例として、インスリン-結合ＩＲシグナル伝達)を測定することを含む。

ＰＩＲＡを伴う更なる別の分析方法は、更なるＩＲ結合剤及びモジュレーター(アンタゴニスト又はアゴニスト)を同定する手段として、ＩＲへの結合に関してＰＩＲＡと競合する分子の同定の際に実施される。このような方法は、一又は複数のＰＩＲＡ及び一又は複数の試験化合物をＩＲを含む培地に加える競合型のアッセイを伴い、ＰＩＲＡ(一又は複数)の存在下でＩＲを結合して調節する試験化合物又は検査化合物(複数)の能力を評価することを含む。

さらに他の例では、インスリン耐性又は糖尿病を誘導するためにＰＩＲＡを哺乳動物(例えばヒトの糖尿病疾患状態の適切なモデル動物)に長期間投与(又は他の場合には供給)して、それによって限定するものではないが糖尿病及び肥満などの疾患に関する研究のための新規の有用なインビボモデルを提供する。

（例示的な実験方法及びデータ）
以下の実験方法は本明細書中に記載の本発明の方法をさらに説明するためのものであって、もちろん、いかなる場合であってもその範囲を制限するものとして解釈されるものではない。

実施例１(ＰＩＲＡアンタゴニストアッセイ)
インスリンレセプター結合ペプチドをアンタゴニスト(ＰＩＲＡ)として同定するために、候補ペプチドを、例えばＳＧＢＳ細胞(ヒトの脂肪細胞株)又は原発性齧歯目の脂肪細胞におけるグルコース取り込みアッセイにおいて試験することができる。簡単に言うと、細胞を様々な濃度のインスリンとともにインキュベートし、その後、^１４Ｃ-グルコース取り込みを測定する。ペプチドをアンタゴニスト特性について試験するために、最大下に刺激する濃度のインスリン(例えば、最大半量のインスリン応答が生じる濃度)、並びに試験するペプチドの段階希釈液を加える。ペプチドがＰＩＲＡであれば、インスリン誘導反応はＰＩＲＡの濃度が増えるにつれて基準の応答にまで又は基準の応答未満に減少し、ＰＩＲＡの作用強度は応答の減少を観察するために必要なＰＩＲＡの濃度から推定することができる。ＰＩＲＡであるＳ６６１のこのような作用強度決定の例を、図１に示す。このようなアッセイはＰＩＲＡの同定方法として他の候補ＰＩＲＡに応用することができ、このようなアッセイにおいてこのような特性を表すＰＩＲＡは本発明の他の一部と考えることができる。

実施例２ ５又は６匹の雄、およそ５８０グラムの平均体重を有する１６週齢のズッカー肥満ラット(Charles River)の９つの群を、Ｐｕｒｉｎａ５００８と飲料水を無制限に与えて飼育し、実験のために一晩断食させた。グルコースレベルは、Ｓ６６１と称するＰＩＲＡ(上記)の投与の２０分及び１０分前に試験した。

異なる量のＳ６６１含有ＰＢＳ又はベヒクルの静脈内(ｉ.ｖ.)投与の後(Ｓ６６１の投与後１０分)に、異なる量のヒトインスリン含有ＰＢＳ又はベヒクルを腹膜内(ｉ.ｐ.)投与した。インスリン注射の１０、２０、３０、４０、６０、８０、１２０及び１８０分後に血中グルコースレベルを測定した。これらの実験の結果を図２に示す。

図２に示すように、Ｓ６６１を投与したラットでは、血中グルコースレベルが、インスリン単独又はベヒクルのみを投与した場合よりも有意に高かった(３ｎｍｏｌ／ｋｇのＳ６６１、３０ｎｍｏｌ／ｋｇのインスリンにより、コントロールと比較してわずかにグルコースレベルが高くなり、インスリン単独よりも有意にグルコースレベルが高くなった；他のすべての例では、血中グルコースレベルの違いはＳ６６１が投与された場合に有意に異なる)。

この実験から、Ｓ６６１などのＰＩＲＡが哺乳類の被検体においてインスリンの効果を低減する際に有効であることが示される。

実施例３
５〜７匹の雄、およそ５５０グラムの平均体重を有する１５週齢のズッカー肥満ラット(Charles River)の８つの群を、Ｐｕｒｉｎａ５００８と飲料水を無制限に与えて飼育し、実験のために一晩断食させた。３０ｎｍｏｌ／ｋｇのＰＩＲＡであるＳ６６１含有ＰＢＳを、３０ｎｍｏｌ／ｋｇのヒトインスリン含有ＰＢＳのｉ.ｐ.投与前の様々な時間にｉ.ｖ.投与した。これらの実験の結果を図３に示す。いずれの血中グルコース測定値も、ＰＩＲＡであるＳ６６１が投与の６時間後にも以前として有効なアンタゴニストであることを示した。

実施例４
ＰＩＲＡであるＳ６６１の選択性をインスリンレセプター対関連関連レセプターであるＩＧＦ１レセプターについて試験するために、レセプターと１２５Ｉ-標識型の同族リガンドを用いて競合結合アッセイを行った。Ｓ６６１がヒトインスリン自体のリガンドの４８％の対インスリンレセプター親和性を有したのに対して、ＩＧＦ１レセプターに対する親和性は低すぎて測定することができなかった。すなわちＩＧＦ１のリガンドの少なくとも２００．０００分の１であった。これらの結果から、ＰＩＲＡであるＳ６６１は決してＩＧＦ１-レセプターによるＩＧＦ１のシグナル伝達を干渉しないことが示される。

本明細書中で引用される出版物、特許出願及び特許を含む全ての参考文献は、各参考文献が出典明記により援用されることが個々に具体的に示され、その全体が本明細書中で述べられるのと同じ程度で出典明記によりここに援用される。

発明を特定する文脈における「ａ」及び「ａｎ」及び「ｔｈｅ」なる用語並びに類似の表現の使用は、ここに特段の注記がなければ又は文脈上明らかに矛盾するということがなければ、単数と複数の双方をカバーするものとみなされる。

一又は複数の構成成分に関して「含む(comprising)」、「有する(having)」、「包含する(including)」、及び「含有する(containing)」といった用語を用いた本発明の態様ないしは任意の態様の本明細書中の記載は、特に明記しない限り又は内容と明らかに矛盾しない限り、特定の一又は複数の構成成分「からなる」、「から基本的になる」又は「を実質的に含む」本発明の態様ないしは類似の態様をサポートすることを意図する(例えば、特定の構成成分を含有するような本明細書中に記載の組成物は、特に明記しない限り又は内容と明らかに矛盾しない限り、その構成成分からなる組成物を表すとも理解されるべきである)。

ＳＧＢＳ細胞におけるインスリン刺激性グルコース取り込みと、Ｓ６６１の添加による最大下のインスリン刺激性グルコース取り込みの阻害。 異なる用量のペプチドインスリンレセプターアンタゴニストＳ６６１の静脈内(i.v.)投与後、ヒトインスリンを腹膜内(i.p.)投与したズッカー肥満(ＺＯ)雄ラットにおけるグルコース特性。 インスリンレセプターアンタゴニストＳ６６１のｉ.ｖ.投与後の異なる時間にヒトインスリンをｉ.ｐ.投与したＺＯラットにおけるグルコース特性。

Claims (20)

1. Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｐｈｅ Ｔｙｒ Ａｓｐ Ｔｒｐ Ｐｈｅ Ｇｌｕ Ａｒｇ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｙ(配列番号：１)に少なくともおよそ８０％の同一性を有する式１タイプ配列及び式Ｌｅｕ Ｘａａ Ｘａａ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ａｌａ Ｘａａ Ｘａａ Ｇｌｎ Ｃｙｓ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｘａａ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｐｒｏ Ｓｅｒに基づく式６タイプ配列とを含むアミノ酸配列を含むペプチドインスリンレセプターアンタゴニストであって、
   このときＸａａが任意のアミノ酸残基を表し、該式１タイプ配列と該式６タイプ配列がアミノ酸配列中のＮ末端からＣ末端方向に位置し、そして、(a) アミノ酸配列が該式１タイプ配列と該式６タイプ配列の間に位置する少なくとも一のアミノ酸残基のアミノ酸配列リンカーを含む、(b) アミノ酸配列がインビボでのインスリンレセプターアンタゴニストの安定性を亢進する終末誘導体化成分と結合している、又は(c) アミノ酸配列が該式１タイプ配列と該式６タイプ配列の間に位置する少なくとも一のアミノ酸残基のアミノ酸配列リンカーを含み、アミノ酸配列がインビボでのインスリンレセプターアンタゴニストの安定性を亢進する終末誘導体化成分と結合しているものである、ペプチドインスリンレセプターアンタゴニスト。
2. 式６配列がWLDEEWAQVQCEVYGRGCPS(配列番号：１４)又はWLDQEWAWVQCEVYGRGCPS(配列番号：１５)でない、請求項１に記載のインスリンレセプターアンタゴニスト。
3. 式１タイプ配列がGSLDESFYDWFERQLG(配列番号：１)である、請求項１又は２に記載のインスリンレセプターアンタゴニスト。
4. 式６タイプ配列は、SLEEEWAQIQCEVWGRGCPSY(配列番号：１６)に対して少なくともおよそ８５％同一である、請求項１から３のいずれか一に記載のインスリンレセプターアンタゴニスト。
5. 式６タイプ配列がSLEEEWAQIQCEVWGRGCPSY(配列番号：１６)である、請求項４に記載のインスリンレセプターアンタゴニスト。
6. 式６タイプ配列が式Ｌｅｕ Ｘａａ_３ Ｘａａ_４ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ａｌａ Ｘａａ_８ Ｘａａ_９ Ｇｌｎ Ｃｙｓ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｘａａ_１４ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｘａａ_２１(配列番号：１７)に含まれるものであり、このときＸａａ_３がＡｓｐ又はＧｌｕであり、Ｘａａ_４がＣｙｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ又はＴｈｒであり、Ｘａａ_８が任意のアミノ酸残基であり、Ｘａａ_９がＩｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｇｌｙ又はＡｌａであり、Ｘａａ_１４がＴｒｐ、Ｐｈｅ又はＴｙｒであり、そして、Ｘａａ_２１が欠失しているか又はＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｔｙｒ、Ｃｙｓ又はＧｌｙから選択されるものである、請求項１から５のいずれか一に記載のインスリンレセプターアンタゴニスト。
7. 式６タイプ配列が式Ｘａａ_１ Ｌｅｕ Ｘａａ_３ Ｘａａ_４ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ａｌａ Ｘａａ_８ Ｘａａ_９ Ｇｌｎ Ｃｙｓ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｘａａ_１４ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｘａａ_２１(配列番号：１８)に含まれるものであり、このときＸａａ_１がＴｒｐ又はＳｅｒであり、Ｘａａ_３がＧｌｕ又はＡｓｐであり、Ｘａａ_４がＧｌｕ又はＧｌｎであり、Ｘａａ_８がＧｌｎ又はＴｒｐであり、Ｘａａ_９がＩｌｅ又はＶａｌであり、Ｘａａ_１４がＴｒｐ又はＴｙｒであり、そして、Ｘａａ_２１が欠失しているか又はＴｙｒ(式６ｂ)である、請求項１から５のいずれか一に記載のインスリンレセプターアンタゴニスト。
8. 式６タイプ配列が、配列SLEEEWAQIQCEVWGRGCPS(配列番号：１９)を含まない、請求項１から２及び４から７のいずれか一に記載のインスリンレセプターアンタゴニスト。
9. さらに、アミノ酸配列が該式１タイプ配列と該式６タイプ配列の間に位置する１〜７のアミノ酸残基のアミノ酸リンカーを含む、請求項１から８のいずれか一に記載のインスリンレセプターアンタゴニスト。
10. リンカーを形成する大部分の残基がＧｌｙ又はＳｅｒ残基である、請求項９に記載のインスリンレセプターアンタゴニスト。
11. 前記インスリンレセプターアンタゴニストが終末誘導体化成分を含む、請求項１から１０のいずれか一に記載のインスリンレセプターアンタゴニスト。
12. 前記終末誘導体化成分が、式６タイプ配列のＣ末端を形成するか又は式６タイプ配列のＣ末端のＣ端に位置するアミド誘導体化アミノ酸残基を含む、請求項１１に記載のインスリンレセプターアンタゴニスト。
13. 式GSLDESFYDWFERQL-Z₁-SLEEEWAQIQCEVWGRGCPS-Z₂(配列番号：２０)に記載のアミノ酸配列を含むインスリンレセプターアンタゴニストであって、このときＺ_１がアミノ酸リンカーを表し、Ｚ_２が場合によって前記終末誘導体化成分、アミノ酸又はアミノ酸配列、誘導体化アミノ酸残基、又はＣ末端誘導体化アミノ酸残基を含むアミノ酸配列を表すものである、インスリンレセプターアンタゴニスト。
14. 化合物Ｓ６６１(GSLDESFYDWFERQLGGGSGGSSLEEEWAQIQCEVWGRGCPSY-アミド)を含んでなるインスリンレセプターアンタゴニスト。
15. 請求項１から１４のいずれか一に記載のインスリンレセプターアンタゴニストの治療的有効量を含有してなる薬剤的組成物。
16. 前記組成物が皮下注射、経口送達又は肺送達のために調製される、請求項１５に記載の組成物。
17. インスリンレセプター活性を低減するために請求項１から１４のいずれか一に記載のインスリンレセプターアンタゴニストの生理学的に有効な量を細胞に送達することを含んでなる、哺乳動物細胞においてインスリンレセプター活性を低減する方法。
18. 高インスリン血症を治療するために被検体に請求項１から１４のいずれか一に記載のインスリンレセプターアンタゴニストの治療的有効量を被検体に送達することを含んでなる、被検体の高インスリン血症の治療方法。
19. 請求項１から１４のいずれか一に記載のインスリンレセプターアンタゴニストの治療的有効量を被検体に送達することを含んでなる、被検体の高インスリン血症関連の低血糖の予防又は改善方法。
20. 高インスリン血症又は高インスリン血症関連の症状を治療するための医薬の生産における請求項１から１４のいずれか一に記載のインスリンレセプターアンタゴニストの使用。

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