JP2009501136A - シュウ酸オキシダーゼ結晶の投与による、シュウ酸塩濃度を低下させるための方法 - Google Patents
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Abstract
Description
シュウ酸は、HO2C−CO2Hという化学式をもつジカルボン酸である。シュウ酸は、主に、シュウ酸エステルとして、すなわち、シュウ酸の塩形態で生体内に存在している。シュウ酸は、例えば、ホウレンソウ、ルバーブ、イチゴ、クランベリー、ナッツ、ココア、チョコレート、ピーナッツバター、ソルガム、および茶などの食物中に見られる。また、シュウ酸は、ヒトおよび他の哺乳動物においては代謝最終産物でもあり、腎臓によって尿の中に排出される。カルシウムに結合すると、シュウ酸は不溶性産物であるシュウ酸カルシウムを生成するが、これは、腎臓結石中に見られる最も一般的な化合物である。
本発明は、例えば、結晶性シュウ酸オキシダーゼの経口投与によってシュウ酸塩関連疾患を可能にするための治療法および処方剤に役立つシュウ酸オキシダーゼの結晶を提供する。また、シュウ酸オキシダーゼの結晶は、例えば、シュウ酸塩濃度を調節したり、個体におけるシュウ酸カルシウムの蓄積によって起こる損傷を最小限に抑えたりするのに有効な方法に使用することもできる。また、本発明は、架橋したシュウ酸オキシダーゼ結晶、およびこれらの結晶を含む組成物も提供する。特に、実施形態において、これらの架橋剤は多官能性であり、一定の実施形態において、本剤は、グルタルアルデヒドなどの二官能性剤である。
本発明は、一部において、シュウ酸オキシダーゼ(OXO)の結晶を投与すると高シュウ酸尿症が治療できるとの発見および実証に基づいている。本明細書で説明するように、経口で、または直接胃に投与された結晶性シュウ酸オキシダーゼは、食物中のシュウ酸を消費していない人など、個体内のシュウ酸レベルを低下させることができる。様々なシュウ酸塩関連疾患を治療するためにOXO結晶を投与する方法が本明細書に記載されている。さらに、OXO結晶および架橋された結晶(CLEC)が、これらを含みかつ使用する組成物と同様に提供される。
本発明がより容易に理解できるよう、まず、いくつかの用語を定義しておく。それ以外の定義も、詳細な説明全体の中に示されている。
本明細書において、シュウ酸オキシダーゼ(OXO)は、シュウ酸:酸素酸化還元酵素を意味する。シュウ酸オキシダーゼは、以下の反応にしたがって、酸素分子(O2)依存性酸化によって、シュウ酸が二酸化炭素および過酸化水素になるのを触媒することができる明確に定義された酵素群である:
HO2C−CO2H+O2→2CO2+H2O2。
シュウ酸オキシダーゼは以前から単離されているため、オオムギの幼植物体、根、および葉、ビートの茎、ビートの葉、コムギの胚、ソルガムの葉、およびバナナの皮など、多くの源から利用することができる。また、OXOは、例えば、Sigma社などの供給業者から購入することもできる。天然源からOXOを単離する方法は、例えば、以下の文献に既に記載されている:Liuら、Zhi Wu Sheng Li Yu Fen Zi Sheng Wu Xue Xue Bao 30:393−8(2004)(Engl.Abst.at PMID 15627687);Rodriguiez−Lopezら、FEBS Lett.9:44−48(2001);Pundirら、Chin.J.Biotechnol.15:129−138(1999);およびAguilarら、Arch.Biochem.Biophys.366:275−82(1999)。これらの単離シュウ酸オキシダーゼを用いて、本発明の結晶、架橋結晶、および組成物を生成させることができる。そして、これらの結晶、架橋結晶、および組成物を、本明細書に記載する方法に使用することができる。
あるいは、組換えOXOを用いて、本明細書に記載の結晶および方法を形成することができる。いくつかの例において、組換えOXOは、天然のOXO配列から得た配列に含まれるか、コードされている。さらに、天然型配列に相同であるか、実質的に同一であるアミノ酸配列を含むOXOが、本明細書に記載されている。また、天然のOXOコード核酸に相同であるか、実質的に同一である核酸も提供されているため、本明細書に記載されているように結晶化および/または投与することができる。
シュウ酸オキシダーゼのタンパク質またはポリペプチドは、結晶化する前に、天然源または組換え体源などの源から精製することができる。本明細書において「単離された」と言われるポリペプチドとは、その本来の由来源(例えば、細胞、組織(すなわち、植物組織)、または液体もしくは媒体(分泌されるポリペプチドの場合)であるタンパク質、脂質、および/または核酸など、天然の環境から実質的に切り離されているポリペプチドのことである。単離されたポリペプチドには、本明細書記載の方法、またはその他適当な方法によって得られるポリペプチなどがあり、実質的に純粋または本質的に純粋なポリペプチドを含み、また、化学合成法、組換え製造法、または生物学的方法と化学的方法とを組み合わせたものによって産生されたポリペプチドなどがある。任意には、単離されたタンパク質は、精製工程によるなどして、それが産生された後に更なる処理を受けた。
シュウ酸オキシダーゼの結晶は、上記したような六量体などのOXOポリペプチドを用いて調製することができる。Wooら、FEBS Letters 437:87−90(1998);Wooら、Nature Struct.Biol.7:1036−1040(2000)参照。例えば、蒸気拡散法(例えば、ハンギングドロップ法およびシッティングドロップ法など)、および結晶化のバッチ法を用いることができる。シュウ酸オキシダーゼ結晶は、タンパク質の制御結晶化法によって、水溶液、または有機溶媒を含む水性溶液から成長することができる。制御される条件は、例えば、溶媒の蒸発速度、適当な共存溶質の存在、ならびにバッファー、pH、および温度などである。
適当な媒体中でシュウ酸オキシダーゼが成長したところで、任意には、架橋するなどして安定化させることができる。架橋によって、結晶の構成タンパク質分子の間に共有結合が導入されることにより、結晶格子の安定化がもたらされる。こうすることによって、これ以外では結晶格子の存在に不適合であるか、さらには、本来のタンパク質が存在するのにも不適合であるかもしれない代替環境にタンパク質を移入することが可能になる。シュウ酸オキシダーゼ結晶は、例えば、リジンアミン基、チオール(スルフヒドリル)基、および炭水化物成分を介して架橋することができる。架橋された結晶も、本明細書ではCLEC OXOまたはCLCと呼ぶ。
I.反応性アシル供与体、例えば:カルボン酸エステルRCOOR’、アミドRCONHR’、アジ化アシルRCON3、カルボジイミドR−N=C=N−R’、N−ヒドロキシイミドエステル、RCO−O−NR’、イミドエステルR−C=NH2+(OR’)、無水物RCO−O−COR’、炭酸RO−CO−O−R’、ウレタンRNHCONHR’、酸ハロゲン化物RCOHal(但し、Hal=ハロゲン)、アシルヒドラジドRCONNR’R’’、およびO−アシルイソウレアRCO−O−C=NR’(−NR’’R’’’)など。
III.アルキル供与体またはアリール供与体、例えば:ハロゲン化アリキルまたはハロゲン化アリールR−Hal、アジドR−N3、硫酸エステルRSO3R’、リン酸エステルRPO(OR’3)、アルキルオキソニウム塩R3O+、スルホニウムR3S+、硝酸エステルRONO2、マイケル受容体RCR’CR’’’COR’’、フッ化アリールArF、イソニトリルRN+≡C−、ハロアミンR2N−Hal、アルケン、およびアルキン;
IV.硫黄含有基、例えば:ジスルフィドRSSR’、スルフヒドリルRSH、およびエポキシド
架橋結晶などのOXO結晶は、医薬組成物などの組成物として提供される(例えば、タンパク質の結晶の製剤および組成物について記載されている、米国特許第6,541,606号参照)。OXO結晶を含む医薬組成物は、OXO結晶を、糖類および生体適合性ポリマーなど、一つ以上の成分または賦形剤とともに含む。賦形剤の例は、American Pharmaceutical Associationとthe Pharmaceutical Society of Great Britainによって共同出版されたHandbook of Pharmaceutical Excipientsに記載されているが、さらなる例を下記に示す。
本発明の方法は、シュウ酸レベルの増加に関連する症状を治療または予防し、またはそのような症状が発生するリスクを低下させるために、シュウ酸オキシダーゼを哺乳動物被検体に投与することを含む。シュウ酸レベルの上昇は、例えば、尿、血液、血清、または血漿などの体液など、被検体から得た生体試料で検出することができる。一定の実施形態において、尿中シュウ酸レベルを検出する。結晶および/または結晶含有組成物を、本明細書記載の方法で投与することができる。
多くの方法が、シュウ酸塩関連疾患またはシュウ酸レベルの増加に関連した症状の発症または進行を判定するために利用できる。このような疾患には、上記したような症状、病気、または疾患が含まれるが、それらに限定されない。シュウ酸塩関連疾患の発症または進行は、例えば、尿中シュウ酸、血漿中シュウ酸を測定することによって、腎臓または肝臓の機能を測定することによって、または、シュウ酸カルシウムの沈着を検出することによって判定することができる。
本発明の方法に従ってシュウ酸オキシダーゼを投与するのは、特定の送達系に限られるものではなく、上部消化管、例えば、口(例えば、カプセル、懸濁液、錠剤にして、または食物と一緒に)もしく胃を経由して、または上部腸を経由して(例えば、チューブまたは注射によって)投与して、各個体のシュウ酸レベルを低下させることを含む。一定の実施形態では、内生シュウ酸レベルおよび/または濃度を低下させるためにOXOを投与する。また、OXOは、透析装置、または各個体からの生体試料に接触する構造物ないし装置などの体外装置によって提供することもできる。
ヒト胎児腎臓(HEK293)細胞において:OXOをコードするDNAを適当な発現ベクターにクローニングする。配列を確認した後、ベクターを直鎖状にし、予め播種しておいてHEK293細胞への、直鎖状にしたベクターの形質転換を、直径6cmの培養皿の中で、商標Lipofectamine 2000トランスフェクション試薬を用いて行うことができる。適当な媒体で形質転換を行った後ほぼ一晩培養してから、0.5g/Lのネオマイシンを添加した培地の中で形質転換体を選択する。ネオマイシン含有媒体の中で最長3週間増殖させた後、安定的に形質転換されたHEK293細胞のクローンを同定する。そして、クローンを単離して増殖させ、OXO発現に用いる。
5Lのプールした発現媒体[由来は?]からOXOを精製し、20mMのリン酸バッファー(pH7.0)に対して濾過透析した。発現培地を10倍に濃縮した後、100mlのDE52陰イオン交換樹脂の50%スラリーを加えて、混合物を4℃で1時間撹拌した。シュウ酸オキシダーゼは、遠心分離によって分離したDE52樹脂には結合しない。次に、この培地を50mMのコハク酸バッファー(pH4.5)に対して濾過透析した。そして、濾過透析された調製物を、SPセファロース(商標)陽イオン交換カラムに充填して、そこから、50mMコハク酸バッファー中の1M硫酸アンモニウムの直線的濃度勾配によって結合OXOを溶出させた。シュウ酸オキシダーゼ活性について各画分を測定し、活性画分をプールした。表1参照。
方法A:400Lの酵母培養物からの発現媒体を、20mMのリン酸バッファー(pH7.0)に対して濾過透析して、約20Lの容量に濃縮した。濃縮した媒体は、精製するまで凍結して保存した。シュウ酸オキシダーゼの精製は、9560mlの濃縮した発現媒体を50mlのクエン酸リン酸バッファー(pH4.0)に対して濾過透析し、その後の濃度を2520mlの容量になるよう実施した。この工程で沈殿するタンパク質の混入物を遠心分離によって除去した。この上清を0.22μmのフィルターで濾過した後に5×45cmのSPセファロース(商標)陽イオン交換カラムに充填した。結合したOXOを、総容量の6倍を超える50mMクエン酸リン酸バッファー(pH8.0)の0〜100%の直線的濃度勾配によって溶出させた。この2段階処理法によって、53%の收率で、4.7gを上回る精製シュウ酸オキシダーゼが得られた。この精製処理を表2に要約した。精製されたOXOは、10.7U/mgの比活性を有する。
ハンギングドロップ結晶化法:以下の市販されている低密度マトリックス結晶化キットを用いてハンギングドロップ結晶化実験を行った:Crystal Screen(Hampton Research;Aliso Viejo,CA)、Crystal Screen 2(Hampton Research)、Wizard I(Emerald Biosystems;Bainbridge Island,WA)、Wizard II(Emerald Biosystems)、Cryo I(Emerald Biosystems)、およびCryo II(Emerald Biosystems)。
バッチ結晶化法:以下のいくつかの結晶化条件からバッチ法によってシュウ酸オキシダーゼを結晶化することができた。
グルタルアルデヒドを用いて、シュウ酸オキシダーゼの結晶[由来は?]を架橋した。結晶化後、シュウ酸オキシダーゼ結晶を20〜30mg/mlに濃縮した。3.2mlの25%グルタルアルデヒドを20mlの結晶に加えて、4%グルタルアルデヒドの溶液を作り、結晶を室温にて16℃で転倒撹拌した。架橋結晶を、100mMトリス、pH7.00で5回洗浄し、10mMトリス、pH7.00に再懸濁した。
実施例6(大規模法)に記載したように調製したシュウ酸オキシダーゼ結晶を、グルタルアルデヒド(Sigma)を加えて架橋した。シュウ酸オキシダーゼ結晶の1mlの等量液(60mg/ml)を、25℃にて12時間、pH4.2の様々な濃度のグルタルアルデヒド(最終濃度は0.05%から2%)で架橋した。架橋された結晶をエッペンドルフチューブに入れて2000rpmで遠心分離により分離し、1mlの100mMトリス、pH7.0の中で架橋された結晶を再懸濁することによって架橋を停止させた。そして、CLECをpH7.5の100mMトリスバッファーで5回洗浄した後、pH7.5の10mMトリスバッファーで3回洗浄した。
pHを7.5から3.0まで低下させた後、様々な架橋シュウ酸オキシダーゼ結晶の可溶性を調べた。架橋結晶を、50mMグリシンHCl(pH3)中で1mg/mlにしてインキュベートした。37℃で5時間撹拌しながらインキュベートした後、等量液を取り出した。非溶解の架橋結晶を2000rpmで遠心分離により分離し、上清を0.22μフィルターに通した後、OD280nmで可溶性タンパク質の濃度を測定した。結果を下記の表5に示す。
実施例7Bに記載されているようにして調製されたシュウ酸オキシダーゼの結晶を、グルタルアルデヒド(Sigma)を加えて架橋した。シュウ酸オキシダーゼ結晶の1mlの等量液(60mg/ml)を、25℃にて12時間、pH4.2の1%グルタルアルデヒド(最終濃度)で架橋した。架橋された結晶をエッペンドルフチューブに入れて2000rpmで遠心分離により分離し、1mlの100mMトリス、pH7.0の中で架橋された結晶を再懸濁することによって架橋を停止させた。そして、CLECをpH7.5の100mMトリスバッファーで5回洗浄した後、pH7.5の10mMトリスバッファーで3回洗浄した。
実施例7Bに記載されているようにして調製されたシュウ酸オキシダーゼ結晶を、グルタルアルデヒド(Sigma)を加えて架橋した。シュウ酸オキシダーゼ結晶の1mlの等量液(60mg/ml)を、25℃にて12時間、pH4.2の4%グルタルアルデヒド(最終濃度)で架橋した。架橋された結晶をエッペンドルフチューブに入れて2000rpmで遠心分離により分離し、1mlの100mMトリス、pH7.0の中で架橋された結晶を再懸濁することによって架橋を停止させた。そして、CLECをpH7.5の100mMトリスバッファーで5回洗浄した後、pH7.5の10mMトリスバッファーで3回洗浄した。以下の様々なバッファーおよびpHを用いて、実施例11に記載されているようにシュウ酸オキシダーゼの架橋結晶の活性を測定することにより、架橋シュウ酸オキシダーゼ結晶のpH活性プロフィールを調べた:pH2.0および3.0の50mMグリシンHClバッファー、pH4.0、5.0、6.0の50mMコハク酸バッファー、ならびにpH7.0の50mMトリスバッファー。これらの結果を図11に示す。比較のため、可溶性シュウ酸オキシダーゼも示されている。
I型原発性高シュウ酸尿症のマウスモデル:AGT1ノックアウトマウスは、肝臓のペルオキシゾーム酵素であるアラニン:グリオキシル酸アミノトランスフェラーゼを持たず、その欠乏の結果、I型原発性高シュウ酸尿症となる。これらのノックアウトマウスは、軽度の高シュウ酸尿症を示す。AGT1のKOマウスは、野生型マウスと比較して約5倍に上昇した尿中シュウ酸レベルを示す(毎日の排泄量は、正常な尿量である0.2mmlo/Lに対し、約1〜2mmlo/Lである)。
腸性高シュウ酸尿症のラットモデル:高シュウ酸飼料で飼養された雄のSprague Dawleyラットは、腸性高シュウ酸尿症の研究に適した動物モデルを構成する。腸内シュウ酸を分解する腸内細菌であるオキサロバクター・ホルミゲネスを除去するために1.5%の食事性シュウ酸アンモニウムを、抗生物質治療とともに投与すると、本実験で、尿中シュウ酸が5倍から10倍増加する結果となった。
シュウ酸塩関連疾患の治療または予防を必要とするヒトを、シュウ酸オキシダーゼ結晶を経口投与して治療する。シュウ酸オキシダーゼ結晶は、治療にあたる臨床医が、病状の重篤度および病気の進行に応じて決定するところにしたがって、約10μg/kgから25mg/kg、1mg/kgから25mg/kg、または5mg/kgから100mg/kgの投薬量で投与される。グルタルアルデヒドを用いて架橋されたシュウ酸オキシダーゼの結晶を毎日1回、2回、3回、4回、または5回投与するか、例えば、週に1回か2回など、より少ない頻度で投与する。シュウ酸オキシダーゼ結晶で治療すると、尿中シュウ酸レベルが少なくとも10%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、70%またはそれ以上低下する結果となる。
タンパク質濃度の測定:280nmでの吸光度を測定して、シュウ酸オキシダーゼの濃度を決定した。1光学的密度(OC)の吸光を1mg/mlとみなした。
および
U/mg固体={U/mL酵素}/{mg固体/mL酵素}}
ただし、式中、2.95=アッセイのミリリットル単位での総容量、df=希釈係数、26.4=600nmにおけるインダミン色素のミリモル吸光係数、および0.02=使用された酵素の容量をミリリットル単位で表したもの。
AGT1 KO(C57B16)マウス(実施例8に記載した表現型)をエチレングリコール(EG)で攻撃して、重度の高シュウ酸尿症を誘発した。EGは、肝臓でシュウ酸に代謝される普通のアルコールである。
AGT1 KO(129/sv)マウスをエチレングリコール(EG)で攻撃して、重度の高シュウ酸尿症と、腎実質中にてシュウ酸カルシウムの沈着を誘発した。通常、攻撃の2〜6週間後に、マウスは、多様な尿中シュウ酸排出量、腎石灰沈着の多様な程度、およびクレアチンクリアランスの低下から判断される腎機能障害の徴候を示す。
Ccr=(Ucr×V)/Pcr=mL/h。
Claims (34)
- 哺乳動物におけるシュウ酸塩濃度を低下させるための方法であって、シュウ酸オキシダーゼ結晶を該哺乳動物に投与する工程を含む、方法。
- 前記シュウ酸オキシダーゼ結晶が安定化されている、請求項1記載の方法。
- 前記シュウ酸オキシダーゼ結晶が、架橋剤によって共有結合されているシュウ酸オキシダーゼを含む、請求項2記載の方法。
- 前記架橋剤が多官能性である、請求項3記載の方法。
- 前記架橋剤が二官能性である、請求項3記載の方法。
- 前記二官能性架橋剤がグルタルアルデヒドである、請求項5記載の方法。
- 前記投与が上部消化管を介する、請求項1記載の方法。
- 前記投与が経口である、請求項7記載の方法。
- 前記投与が体外装置を介する、請求項1記載の方法。
- 前記装置が透析装置である、請求項9記載の方法。
- 前記シュウ酸オキシダーゼ結晶を、懸濁液、乾燥粉末、カプセル、または錠剤として投与する、請求項1記載の方法。
- さらに、前記哺乳動物の生体試料中のシュウ酸塩濃度を検出する工程を含む、請求項1または3記載の方法。
- 前記生体試料が尿、血液、血漿、および血清である、請求項12記載の方法。
- 前記シュウ酸オキシダーゼ結晶の投与が、結果としてシュウ酸塩濃度を少なくとも10%低下させる、請求項1または3記載の方法。
- シュウ酸オキシダーゼ結晶の投与が、結果としてシュウ酸塩濃度を少なくとも20%低下させる、請求項14記載の方法。
- シュウ酸オキシダーゼ結晶の投与が、結果としてシュウ酸塩濃度を少なくとも30%低下させる、請求項15記載の方法。
- 尿、血液、血漿、および血清から選択される生体試料において前記低下を測定する、請求項14、15、または16記載の方法。
- 哺乳動物におけるシュウ酸塩濃度の上昇に関連した疾患を処置するための方法であって、シュウ酸オキシダーゼ結晶を該哺乳動物に投与する工程を含む、方法。
- 前記疾患が、腎臓疾患、骨疾患、肝臓疾患、消化管疾患、および膵臓疾患から選択される、請求項18記載の方法。
- 前記疾患が、原発性高シュウ酸尿症、腸性高シュウ酸尿症、特発性高シュウ酸尿症、エチレングリコール中毒、嚢胞性線維症、炎症性腸疾患、尿石症、および腎石症から選択される、請求項18記載の方法。
- 前記シュウ酸オキシダーゼを組換え産生する、請求項1または18記載の方法。
- 個体におけるシュウ酸塩関連疾患を処置するための方法であって、シュウ酸および酸素分子の二酸化炭素および過酸化水素への変換を触媒することができる内因性ポリペプチドを該個体に提供する工程を含み、該ポリペプチドが安定化された結晶である、方法。
- 前記ポリペプチドを、架橋剤によって共有結合的に架橋する、請求項22記載の方法。
- 前記架橋剤がグルタルアルデヒドである、請求項23記載の方法。
- 多官能性架橋剤によって架橋されている、シュウ酸オキシダーゼ結晶。
- 前記架橋剤がグルタルアルデヒドである、請求項25記載の架橋されたシュウ酸オキシダーゼ結晶。
- 前記架橋剤が、少なくとも約0.1%の最終濃度で存在するグルタルアルデヒドである、請求項26記載の架橋されたシュウ酸オキシダーゼ結晶。
- 前記架橋剤が、最終濃度4%で存在するグルタルアルデヒドである、請求項27記載の架橋されたシュウ酸オキシダーゼ結晶。
- 前記架橋剤が、最終濃度1%で存在するグルタルアルデヒドである、請求項28記載の架橋されたシュウ酸オキシダーゼ結晶。
- 前記シュウ酸オキシダーゼが、対応する可溶性シュウ酸オキシダーゼの活性の少なくとも70%を保持している、請求項25から29のいずれか一項記載の結晶。
- 前記シュウ酸オキシダーゼが、対応する可溶性シュウ酸オキシダーゼの活性の少なくとも95%を保持している、請求項25から29のいずれか一項記載の結晶。
- 前記シュウ酸オキシダーゼが、対応する可溶性シュウ酸オキシダーゼの活性の少なくとも98%を保持している、請求項25から29のいずれか一項記載の結晶。
- 請求項25から29のいずれか一項記載の結晶を含む医薬組成物。
- 請求項33記載の医薬組成物の有効量を投与する工程を含む処置方法。
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---|---|---|---|---|
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---|---|---|---|---|
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Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH08501305A (ja) * | 1992-09-21 | 1996-02-13 | ジ・アップジョン・カンパニー | 徐放性タンパク質製剤 |
JP2002512949A (ja) * | 1998-04-27 | 2002-05-08 | アルタス バイオロジックス インコーポレイテッド | 安定化されたタンパク質結晶、それを含む処方物、およびそれを作製する方法 |
JP2002531517A (ja) * | 1998-12-07 | 2002-09-24 | ユニバーシティ オブ ワシントン | 異所性石灰化を阻害する方法 |
JP2003524421A (ja) * | 2000-02-24 | 2003-08-19 | アルタス バイオロジックス インコーポレイテッド | リパーゼ含有組成物およびこれらの使用方法 |
WO2004060920A1 (en) * | 2002-12-31 | 2004-07-22 | Altus Pharmaceuticals Inc. | Complexes of protein crystals and ionic polymers |
Family Cites Families (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
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US6355242B1 (en) | 1997-05-23 | 2002-03-12 | Ixion Biotechnology, Inc. | Materials and methods for treating or preventing oxalate-related disease |
EP2033651A1 (en) | 1997-05-23 | 2009-03-11 | OxThera, Inc., | Oxalate-degrading microorganisms or oxalate-degrading enzymes for preventing oxalate related disease |
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Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH08501305A (ja) * | 1992-09-21 | 1996-02-13 | ジ・アップジョン・カンパニー | 徐放性タンパク質製剤 |
JP2002512949A (ja) * | 1998-04-27 | 2002-05-08 | アルタス バイオロジックス インコーポレイテッド | 安定化されたタンパク質結晶、それを含む処方物、およびそれを作製する方法 |
JP2002531517A (ja) * | 1998-12-07 | 2002-09-24 | ユニバーシティ オブ ワシントン | 異所性石灰化を阻害する方法 |
JP2003524421A (ja) * | 2000-02-24 | 2003-08-19 | アルタス バイオロジックス インコーポレイテッド | リパーゼ含有組成物およびこれらの使用方法 |
WO2004060920A1 (en) * | 2002-12-31 | 2004-07-22 | Altus Pharmaceuticals Inc. | Complexes of protein crystals and ionic polymers |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
PUNDIR C S, HINDUSTAN ANTIBIOTICS BULLETIN, vol. V35 N1/2, JPN5008008361, February 1993 (1993-02-01), pages 173 - 182, ISSN: 0002106807 * |
RAMAKRISHNAN V, INDIAN JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS, vol. V34 N4, JPN5008008358, August 1997 (1997-08-01), IN, pages 373 - 378, ISSN: 0002106808 * |
SVEDRUZIC D, ARCHIVES OF BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS, vol. V433 N1, JPN5008008360, 1 January 2005 (2005-01-01), US, pages 176 - 192, ISSN: 0002106809 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2016527196A (ja) * | 2013-06-07 | 2016-09-08 | アレナ ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド | 透析のための組成物、方法、および器具 |
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