JP2009291679A - 油含有土壌の浄化方法およびそれに用いる微生物 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 Novosphingobium sp. No.2株(FERM AP−21566)、Pseudomonas sp. No.5株(FERM AP−21567)およびRhodococcus sp. No.10株(FERM AP−21568)のうち、少なくとも1種の微生物を油含有土壌に添加する。
【選択図】 図4
Description
〔1〕 Novosphingobium sp. No.2株(FERM AP−21566)、Pseudomonas sp. No.5株(FERM AP−21567)およびRhodococcus sp. No.10株(FERM AP−21568)のうち、少なくとも1種の微生物を油含有土壌に添加することを特徴とする油含有土壌の浄化方法、
〔2〕 Novosphingobium sp. No.2株(FERM AP−21566)、Pseudomonas sp. No.5株(FERM AP−21567)およびRhodococcus sp. No.10株(FERM AP−21568)を油含有土壌に添加する、前記〔1〕記載の油含有土壌の浄化方法、
〔3〕 油含有土壌が、鉱油類を含有するものである、前記〔2〕記載の油含有土壌の浄化方法、
〔4〕 鉱油類が、炭素数C12〜C28の油分を含有するものである、前記〔3〕記載の油含有土壌の浄化方法、
〔5〕 前記〔1〕〜〔4〕のいずれか記載の方法に用いられる、Novosphingobium sp. No.2株(FERM AP−21566)、Pseudomonas sp. No.5株(FERM AP−21567)およびRhodococcus sp. No.10株(FERM AP−21568)のうち、少なくとも1種の微生物。
1−1. 単離菌1(Novosphingobium sp. No.2株)の単離
単離菌1は、新潟県柏崎市の油田を分離源とし、重油を唯一の炭素源とした集積培養を経た後、寒天培地よりコロニーを単離することにより得られた。単離菌1の16S rRNA遺伝子塩基配列を比較した結果(図1参照)、単離菌1(図1において、「No.2」と表記)は、Novosphingobium属細菌との相同性が高く、最近縁種はNovosphingobium capsulatumであった(相同性98%)。以上の結果より、単離菌1はNovosphingobium属に属する細菌であることを確認した。単離菌1はNovosphingobium sp. No.2株と命名され、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターにFERM AP−21566として寄託されている。
単離菌2は、新潟県北蒲原郡の油田を分離源とし、重油を唯一の炭素源とした集積培養を経た後、寒天培地よりコロニーを単離することにより得られた。単離菌2の16S rRNA遺伝子塩基配列を比較した結果(図2参照)、単離菌2(図2において「No.5」と表記)は、Pseudomonas 属細菌との相同性が高く、最近縁種はPseudomonas citronellolisであった(相同性99%)。以上の結果より、単離菌2はPseudomonas属に属する細菌であることを確認した。単離菌2はPseudomonas sp. No.5株と命名され、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターにFERM AP−21567として寄託されている。
単離菌3は、神奈川県川崎市の土壌を分離源とし、重油を唯一の炭素源とした集積培養を経た後、寒天培地よりコロニーを単離することにより得られた。単離菌3の16S rRNA遺伝子塩基配列を比較した結果(図3参照)、単離菌3(図3において「No.10」と表記)は、Rhodococcus 属細菌との相同性が高く、最近縁種はRhodococcus erythropolisであった(相同性99%)。以上の結果より、単離菌3はRhodococcus属に属する細菌であることを確認した。単離菌3はRhodococcus sp. No.10株と命名され、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターにFERM AP−21568として寄託されている。
AP120NE及びATB BET(ともに bioMerieux社)を用いて単離菌1〜3の保持酵素、同化性及び抗生物質感受性を調べた。結果を表1及び表2に示す。
油分濃度(C6〜C44の全成分濃度)0.43〜0.49%の油含有土壌に上記で単離したNovosphingobium sp. No.2株(単離菌1)、Pseudomonas sp. No.5株(単離菌2)、Rhodococcus sp. No.10株(単離菌3)のうち、1種または3種を投入し、水分と栄養塩を供給し、上記土壌中の油分濃度の経時変化を調べた。油分濃度は、赤外分光分析法(IR法)により定量した(実施例1〜4)。
(1)試験方法:某地油汚染土壌0.7kg(油分濃度0.43〜0.49%)をアルミバット(縦40cm×横30cm×高さ5cm)中に四角錘台状に盛り上げ、含水比が常に15%に保たれるよう、適宜加水した。
(2)試験温度:室内、20℃
(3)菌株の投入量:単離菌1〜3のうち、1種のみを投入する場合は、各菌株をそれぞれ2×106cell/g(乾土)で投入した。上記3種の単離菌を混合投入する場合は、各菌株をそれぞれ0.67×106cell/g(乾土)(合計2×106cell/g(乾土))ずつ投入した。
(4)栄養塩類の種類:窒素(硫安)、リン(過リン酸石灰)
(5)栄養塩類の添加量:窒素250ppm、リン50ppm
(6)油分濃度の測定日:試験開始時、5、8、14日後
また、単離菌1〜3を全て投入した実施例4は、実施例1〜3に比べて油分濃度の低減率が大きく、油分の分解がさらに促進されることが分かった。具体的には、実施例4では、油分の低減率が、8日後で約30%であり、14日後で約43%であった。
Claims (5)
- Novosphingobium sp. No.2株(FERM AP−21566)、Pseudomonas sp. No.5株(FERM AP−21567)およびRhodococcus sp. No.10株(FERM AP−21568)のうち、少なくとも1種の微生物を油含有土壌に添加することを特徴とする油含有土壌の浄化方法。
- Novosphingobium sp. No.2株(FERM AP−21566)、Pseudomonas sp. No.5株(FERM AP−21567)およびRhodococcus sp. No.10株(FERM AP−21568)を油含有土壌に添加する、請求項1記載の油含有土壌の浄化方法。
- 油含有土壌が、鉱油類を含有するものである、請求項2記載の油含有土壌の浄化方法。
- 鉱油類が、炭素数C12〜C28の油分を含有するものである、請求項3記載の油含有土壌の浄化方法。
- 請求項1〜4のいずれか記載の方法に用いられる、Novosphingobium sp. No.2株(FERM AP−21566)、Pseudomonas sp. No.5株(FERM AP−21567)およびRhodococcus sp. No.10株(FERM AP−21568)のうち、少なくとも1種の微生物。
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