JP2009244109A - 標識物質 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】リンカー分子を介して複数のナノ粒子を結合したナノクラスターからなる標識物質、前記標識物質を用いた生体関連物質の標識方法、前記標識物質と検出対象物質等とからなる標識複合体およびその製造方法、前記標識複合体と被検試料とを接触させ、検出対象物質を検出する検出対象物質の検出方法、検出対象物質の検出用キット、および標識複合体と、作用極と対極とからなる一対の電極を有する電気化学検出センサーとを電解液存在下で用い、検出対象物質を検出する検出対象物質の電気化学的検出方法。
【選択図】なし
Description
(1)リンカー分子を介して複数のナノ粒子を結合してなるナノクラスターからなる標識物質、
(2)前記標識物質と生体関連物質とを接触させることを特徴とする生体関連物質の標識方法、
(3)前記標識物質と、検出対象物質または該検出対象物質に特異的に結合する特異的結合物質とを複合体化させてなる標識複合体、
(4)前記標識物質と、検出対象物質または該検出対象物質に特異的に結合する特異的結合物質とを接触させることを特徴とする標識複合体の製造方法、
(5)前記標識物質と検出対象物質または該検出対象物質に特異的に結合する第1の特異的結合物質とを複合体化させてなる標識複合体と、被検試料とを接触させ、前記標識複合体と前記被検試料に含まれる検出対象物質とからなる検出用複合体を形成させ、形成された複合体に取り込まれている標識物質の物理的性質または化学的性質により、検出対象物質を検出することを特徴とする検出対象物質の検出方法、ならびに
(6)前記標識物質と検出対象物質または該検出対象物質に特異的に結合する第1の特異的結合物質とを複合体化させてなる標識複合体と、検出対象物質、第1の特異的結合物質、該検出対象物質の前記第1の特異的結合物質とは異なる部位を認識する第2の特異的結合物質または検出対象物質の第1の特異的結合物質を特異的に認識する第3の特異的結合物質が固定された、試験片または電極とを含む検出対象物質の検出用キット
に関する。
スペーサー構造を有し、その両側に反応性に富む官能基をもつリンカー分子を用いて、銀ナノ粒子を互いに結合させて銀ナノクラスターを調製した。
モデル抗原として、ヒト絨毛性ゴナドトロピン(以下、hCGという)を選択し、hCGを認識する2種類のマウスモノクローナル抗体(抗hCG抗体A、抗hCG抗体B)を用いたアッセイ系を構築した。抗hCG抗体Aは、hCGに対するモノクローナル抗体であり、抗hCG抗体Bは、hCGのαサブユニットに対するモノクローナル抗体である。
メンブレン上に抗hCG抗体Bを塗布することにより、イムノクロマトグラフィー用試験片を作製した。hCGを含む試料と、銀ナノクラスターで標識したhCG抗体Aとを混合し、抗原抗体反応を行なった。得られた抗原抗体複合体がメンブレン上を移動するときに、抗hCG抗体Bが塗布されたテストラインで抗原抗体複合体が捕捉されることにより、hCGの濃度に応じた色つきのラインが現れた。この色を肉眼または専用のリーダーで読み取ることにより、試料中のhCG濃度を判定することができた。その具体的な方法を以下に説明する。
メンブレンの一端(以下、「上流端」という)を試料供給部とし、試料供給部よりも長手方向(メンブレンの長辺方向)の他端(以下、「下流端」という)側に、hCGのα−サブユニットを認識するモノクローナル抗体である抗hCG抗体Bをメンブレンの短辺に平行に線状となるように塗布し、テストラインを形成させた。さらに、テストラインよりも下流側に、抗マウスIgG抗体を塗布し、テストラインに捕捉されなかったhCGに結合していない抗hCG抗体を捕捉するためのコントロールラインを形成させた。その後、ウシ血清アルブミン(シグマ社製)を用いて、メンブレンのブロッキングを行なった。その後、メンブレンの洗浄および乾燥を行なった。さらに、コントロールラインの下流側に展開溶液などを吸収させる目的で、吸収パットを設け、イムノクロマトグラフィー用試験片を得た。
銀ナノクラスター標識抗hCG抗体Aを用いて、各種濃度のhCG含有溶液を分析した。また、通常のイムノクロマトグラフィーで頻用されている金ナノ粒子により標識された標識抗体である金ナノ粒子標識抗hCG抗体Aを用いて、各種濃度のhCG含有溶液を分析した。
各種濃度のhCG含有溶液のイムノクロマトグラフィーの測定結果を図4に示す。図4において、Aは、金ナノ粒子標識抗hCG抗体Aを用いたときの試験結果、Bは、銀ナノクラスター標識抗hCG抗体Aを用いたときの試験結果を示す。
表面にアミノ基が導入された白金ナノ粒子(粒子径:約5nm)のリン酸バッファー溶液300μL(白金ナノ粒子の含有率:0.01質量%)をマイクロチューブ(エッペンドルフ社製)にとり、これに20mM SPDPのジメチルスルホキシド(DMSO)溶液5μLおよび20mMジチオスレイトール(DTT)の水溶液0.5μLを加えて30分間室温で静置した。
実施例4で得られた白金ナノクラスターを用いることを除き、実施例2と同様にして抗hCG抗体Aを白金ナノクラスターで標識し、白金ナノクラスター標識抗hCG抗体を得た。得られた白金ナノクラスター標識抗hCG抗体を用い、その電気化学的検出の可能性を検討した。
妊娠診断用マーカーであるヒトゴナドトロピン(hCG)を測定するために、一次抗体として抗hCG抗体Aを作用極表面に固定化した平板型印刷電極と、二次抗体として白金ナノクラスター標識抗hCG抗体Bとを用いて、イムノセンサーを構築した。構築されたイムノセンサーを用いて、サンドイッチ法によるイムノアッセイを行ない、白金ナノクラスター標識抗hCG抗体Bの白金ナノクラスターを電気化学的に検出することにより、検出対象物質であるhCGを電気化学的に検出することができた。その具体的な方法を以下に説明する。
Claims (18)
- リンカー分子を介して複数のナノ粒子を結合してなるナノクラスターからなる標識物質。
- リンカー分子が、スペーサーを有し、このスペーサーの一方の末端にナノ粒子と結合する基を有し、他端にナノ粒子または他のリンカー分子と結合する基を有する化合物である請求項1に記載の標識物質。
- リンカー分子が、一方の末端にジスルフィド基を有し、他端に置換基を有していてもよいスクシンイミジル基を有するエステル化合物である請求項1または2に記載の標識物質。
- ナノ粒子が、金、銀、白金、銅およびアルミニウムからなる群より選ばれた少なくとも1種の金属を含む請求項1〜3のいずれかに記載の標識物質。
- ナノ粒子の粒子径が、3〜100nmである請求項1〜4のいずれかに記載の標識物質。
- ナノクラスターの粒子径が、10〜1000nmである請求項1〜5のいずれかに記載の標識物質。
- 請求項1〜6のいずれかに記載の標識物質と生体関連物質とを接触させることを特徴とする生体関連物質の標識方法。
- 請求項1〜6のいずれかに記載の標識物質と、検出対象物質または該検出対象物質に特異的に結合する特異的結合物質とを複合体化させてなる標識複合体。
- 請求項1〜6のいずれかに記載の標識物質と、検出対象物質または該検出対象物質に特異的に結合する特異的結合物質とを接触させることを特徴とする標識複合体の製造方法。
- 請求項1〜6のいずれかに記載の標識物質と検出対象物質または該検出対象物質に特異的に結合する第1の特異的結合物質とを複合体化させてなる標識複合体と、被検試料とを接触させ、前記標識複合体と前記被検試料に含まれる検出対象物質とからなる検出用複合体を形成させ、形成された複合体に取り込まれている標識物質の物理的性質または化学的性質により、検出対象物質を検出することを特徴とする検出対象物質の検出方法。
- 第1の特異的結合物質が、抗体である請求項10に記載の検出方法。
- 検出対象物質、検出対象物質に特異的に結合する第1の特異的結合物質、および該第1の特異的結合物質によって認識される検出対象物質の部位とは異なる検出対象物質の部位を認識する第2の特異的結合物質のうちのいずれか1つを固定した固相を用いて、検出用複合体から該検出複合体に未結合の標識複合体を分離する請求項10または11に記載の検出方法。
- 固相が、イムノクロマトグラフィー試験紙または電極である請求項12に記載の検出方法。
- 電極が、絶縁基板上に導電性材料を所定のパターンで印刷することによって形成された印刷電極である請求項13に記載の検出方法。
- 標識物質の物理的性質または化学的性質が、光学的性質または電気化学的性質である請求項10〜14のいずれかに記載の検出方法。
- 電気化学的性質が、標識物質の酸化還元反応における触媒活性である請求項15に記載の検出方法。
- 触媒活性が、プロトンが還元されて水素分子が生成するときの化学反応に対する触媒活性であり、その化学反応の際に流れる電荷量を指標として標識物質の検出を行なう請求項16に記載の検出方法。
- 請求項1〜6のいずれかに記載の標識物質と検出対象物質または該検出対象物質に特異的に結合する第1の特異的結合物質とを複合体化させてなる標識複合体と、検出対象物質、第1の特異的結合物質、該検出対象物質の前記第1の特異的結合物質とは異なる部位を認識する第2の特異的結合物質または検出対象物質の第1の特異的結合物質を特異的に認識する第3の特異的結合物質が固定された、試験片または電極とを含む検出対象物質の検出用キット。
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Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2011162837A (ja) * | 2010-02-09 | 2011-08-25 | Shinko Kagaku Kogyosho:Kk | 金属ナノ粒子クラスター、金属ナノ粒子クラスターを用いた標識材料、金属ナノ粒子クラスターを用いたイムノクロマトグラフィーキット、金属ナノ粒子クラスターの製造方法、金属ナノ粒子クラスターを用いた標識材料の製造方法および金属ナノ粒子クラスターを用いたイムノクロマトグラフィーキットの製造方法。 |
WO2014163126A1 (ja) * | 2013-04-03 | 2014-10-09 | 株式会社ソフセラ | 銀粒子の粒子径の制御方法、銀粒子、銀粒子を含む抗菌剤、およびその利用 |
CN106596676A (zh) * | 2016-12-22 | 2017-04-26 | 安阳师范学院 | 一种用于microRNAs检测的电化学方法 |
JP2019501407A (ja) * | 2015-12-14 | 2019-01-17 | オスラム オプト セミコンダクターズ ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツングOsram Opto Semiconductors GmbH | 変換要素、それが設けられたオプトエレクトロニクス部品、および変換要素を製造する方法 |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2003510065A (ja) * | 1999-09-27 | 2003-03-18 | アレイ バイオサイエンス コーポレイション | 分析物検出のためのレセプターを有する粒子構造体 |
JP2003139775A (ja) * | 2001-07-19 | 2003-05-14 | Sony Internatl Europ Gmbh | 化学センサ及び化学センサの製造方法、並びに検体検出方法 |
JP2006525803A (ja) * | 2003-03-27 | 2006-11-16 | ピーティーシー セラピューティクス,インコーポレーテッド | tRNAスプライシングエンドヌクレアーゼに標的化する化合物の同定方法、および該化合物の抗真菌剤としての使用 |
JP2007513334A (ja) * | 2003-12-01 | 2007-05-24 | ダコ デンマーク アクティーゼルスカブ | 免疫組織化学的検出のための方法および組成物 |
JP2007514169A (ja) * | 2003-12-29 | 2007-05-31 | インテル・コーポレーション | 合成有機無機ナノクラスター |
-
2008
- 2008-03-31 JP JP2008091041A patent/JP2009244109A/ja active Pending
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2003510065A (ja) * | 1999-09-27 | 2003-03-18 | アレイ バイオサイエンス コーポレイション | 分析物検出のためのレセプターを有する粒子構造体 |
JP2003139775A (ja) * | 2001-07-19 | 2003-05-14 | Sony Internatl Europ Gmbh | 化学センサ及び化学センサの製造方法、並びに検体検出方法 |
JP2006525803A (ja) * | 2003-03-27 | 2006-11-16 | ピーティーシー セラピューティクス,インコーポレーテッド | tRNAスプライシングエンドヌクレアーゼに標的化する化合物の同定方法、および該化合物の抗真菌剤としての使用 |
JP2007513334A (ja) * | 2003-12-01 | 2007-05-24 | ダコ デンマーク アクティーゼルスカブ | 免疫組織化学的検出のための方法および組成物 |
JP2007514169A (ja) * | 2003-12-29 | 2007-05-31 | インテル・コーポレーション | 合成有機無機ナノクラスター |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
JPN6012024404; Phys Status Solidi A Appl Mater Sci Vol.203, No.6, Page.1194-1200, 2006 * |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2011162837A (ja) * | 2010-02-09 | 2011-08-25 | Shinko Kagaku Kogyosho:Kk | 金属ナノ粒子クラスター、金属ナノ粒子クラスターを用いた標識材料、金属ナノ粒子クラスターを用いたイムノクロマトグラフィーキット、金属ナノ粒子クラスターの製造方法、金属ナノ粒子クラスターを用いた標識材料の製造方法および金属ナノ粒子クラスターを用いたイムノクロマトグラフィーキットの製造方法。 |
WO2014163126A1 (ja) * | 2013-04-03 | 2014-10-09 | 株式会社ソフセラ | 銀粒子の粒子径の制御方法、銀粒子、銀粒子を含む抗菌剤、およびその利用 |
JPWO2014163126A1 (ja) * | 2013-04-03 | 2017-02-16 | 株式会社ソフセラ | 銀粒子の粒子径の制御方法、銀粒子、銀粒子を含む抗菌剤、およびその利用 |
JP2019501407A (ja) * | 2015-12-14 | 2019-01-17 | オスラム オプト セミコンダクターズ ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツングOsram Opto Semiconductors GmbH | 変換要素、それが設けられたオプトエレクトロニクス部品、および変換要素を製造する方法 |
CN106596676A (zh) * | 2016-12-22 | 2017-04-26 | 安阳师范学院 | 一种用于microRNAs检测的电化学方法 |
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