JP2008543968A

JP2008543968A - 新規なピラゾロピリミジノン誘導体

Info

Publication number: JP2008543968A
Application number: JP2008519006A
Authority: JP
Inventors: ラヴィクマール・タディパラシ; シミ・プッシュパン; スリラム・ラジャゴパル; ラジブ・バリク
Original assignee: オーキッドリサーチラボラトリーズリミテッド
Priority date: 2005-06-28
Filing date: 2006-06-28
Publication date: 2008-12-04
Also published as: WO2007000655A2; EP1896476A2; US20090163521A1; WO2007000655A3

Abstract

本発明は、一般式（Ｉ）の新規なピラゾロピリミジノン類、これらの誘導体、これらの類似体、これらの薬学的に許容できる塩類およびこれらを含む薬学的に許容できる組成物に関する。本発明は、より詳しく述べると、一般式（Ｉ）の新規なピラゾロピリミジノン類誘導体を提供する。
【化１】

Description

本発明は、一般式（Ｉ）の新規なピラゾロピリミジノン類、これらの誘導体、これらの類似体、これらの薬学的に許容できる塩類およびこれらを含む薬学的に許容できる組成物に関する。本発明は、より詳しく述べると、一般式（Ｉ）の新規なピラゾロピリミジノン誘導体を提供する。

本発明は、一般式（Ｉ）の前記新規なピラゾロピリミジノン類、これらの誘導体、これらの類似体、これらの薬学的に許容できる塩類およびこれらを含む薬剤組成物を調製するプロセスも提供する。

本発明の新規なピラゾロピリミジノン類は、炎症疾患および免疫疾患の処置に有効である。特に本発明の化合物は、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１β、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＭＡＰキナーゼ、ｐ３８キナーゼおよびＣＯＸ−２、ＣＯＸ−３などのシクロオキシゲナーゼなどのサイトカイン類により媒介された炎症疾患および免疫疾患の処置に有効である。本発明の化合物は、関節リウマチ、骨粗しょう症、多発性骨髄膜、ブドウ膜炎、急性および慢性の骨髄性白血病、虚血性心疾患、アテローム性動脈硬化症、癌、虚血性誘導細胞障害、膵臓β細胞破壊、変形性関節炎、リウマチ性脊椎炎、通風性関節炎、炎症性大腸炎、成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、乾癬、クローン病、アレルギー性鼻炎、潰瘍性大腸炎、過敏症、接触性皮膚炎、ぜんそく、筋肉変性、悪液質、Ｉ型およびＩＩ型の糖尿病、骨吸収疾患、虚血再かん流傷害、アテローム性動脈硬化症、脳損傷、多発性硬化症、脳マラリア、敗血症、敗血性ショック、毒素性ショック症候群、感染による発熱および筋肉痛、および利尿薬として、およびＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、ＨＩＶ−３により媒介された疾患、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、インフルエンザ、アデノウイルス、ヘルペス・ウイルス（ＨＳＶ−１、ＨＳＶ−２を含む）および帯状疱疹ウイルスの処置にも有効である。

本発明は、サイトカインまたはシクロオキシゲナーゼにより媒介される免疫疾患または炎症の処置に関する。該免疫システムの主要な要素は、マクロファージまたは抗原提示細胞、即ちＴ細胞およびＢ細胞である。ＮＫ（ナチュラルキラー）細胞、好塩基球、マスト細胞および樹枝状細胞などの他の免疫細胞の役割は知られているが、原発性免疫不全におけるこれらの細胞の役割は不明である。マクロファージは、両炎症の重要な媒介剤であり、Ｔ細胞の刺激および増殖に対して必要な「支援」を提供している。最も重要なことは、マクロファージがＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２およびＴＮＦ−αを作ることで、これらはすべて強力な炎症促進分子であり、Ｔ細胞の支援も行う。さらに、マクロファージの活性化は、シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）およびシクロオキシゲナーゼ−３（ＣＯＸ−３）、誘導型一酸化窒素合成酵素（ｉＮＯＳ）および正常細胞を損傷しうるフリーラジカルの産生をもたらす。多くの要因が、細菌産物、超抗原およびインターフェロン・ガンマ（ＩＦＮγ）を含むマクロファージを活性化する。ホスホチロシン・キナーゼ（ＰＴＫ）および他の不明確な細胞キナーゼがこの活性化プロセスに含まれると考えられている。

サイトカインは、免疫細胞により分泌された分子であり、多数の慢性および急性状態が炎症反応の混乱と関係していると認識されている。ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８およびＴＮＦ−αを含む多数のサイトカインがこの反応に関与している。炎症の規制におけるこれらのサイトカインの活性は、少なくとも一部は、細胞シグナル経路上の酵素、ＣＳＢＰおよびＲＫとして知られたメンバーの活性化に依存していると思われる。このキナーゼは、物理化学的応力による刺激、リポ多糖体を用いた処置またはＩＬ−１およびＴＮＦなどの炎症促進性サイトカインを用いた後の二重リン酸化により活性化される。したがって、キナーゼ活性の抑制剤であるｐ３８は有効な抗炎症剤である。

サイトカインは、免疫反応を仲介する場合に重要である免疫細胞により分泌された分子である。サイトカインの産生により、他のサイトカインの分泌、細胞機能の変化、細胞の分裂または分化が生じる。炎症は、負傷または感染に対する身体の正常な反応である。しかし、リウマチ性関節炎などの炎症性疾患では、病理学的な炎症プロセスが病的状態および死亡に導くことがある。サイトカイン腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）は、炎症反応において中心的な役割を果たし、炎症疾患における介入点として標的にされてきた。ＴＮＦ−αは、活性化されたマクロファージおよび他の細胞により放出されたポリペプチド・ホルモンである。低濃度では、ＴＮＦ−αは、白血病を活性化し、炎症の血管外部位への白血病の移動を促進することにより保護炎症反応に参加する［モザーら（Ｍｏｓｅｒｅｔａｌ．），ザ・ジャーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲーション（ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ），８３，４４４−５５，１９８９］。より高い濃度では、ＴＮＦ−αは、強力な発熱物質として作用し、他の炎症促進サイトカインの産生を誘発する［ハワースら（Ｈａｗｏｒｔｈｅｔａｌ．），ユーロピアン・ジャーナル・オブ・イムノロジー（ＥｕｒＪＩｍｍｕｎｏｌ），２１，２５７５−７９，１９９１）；ブレナンら（Ｂｒｅｎｎａｎｅｔａｌ．），ランセット（Ｌａｎｃｅｔ），２，２４４−７，１９８９］。ＴＮＦ−αは、急性期たんぱく質の合成も刺激する。関節リウマチでは、慢性および進行性炎症疾患が合衆国成人人口の約１％に影響を及ぼしている。ＴＮＦ−αは、関節の損傷および破壊に導くサイトカイン・カスケードを媒介する［アレンドら（Ａｒｅｎｄｅｔａｌ．），アースリチス・アンド・リューマチズム（ＡｒｔｈｒｉｔｉｓＲｈｅｕｍ），３８，１５１−６０，１９９５）］。可溶性ＴＮＦ受容体（ｅｔａｎｅｒｃｅｐｔ）［ゴールデンバーグ（Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ），クリニカル・セラピューチックス（ＣｌｉｎＴｈｅｒ），２１，７５−８７，１９９９］および抗ＴＮＦ−α抗体（インフリキシマブ）［ルオンら（Ｌｕｏｎｇｅｔａｌ．），ジ・アナルス・オブ・ファーマコセラピー（ＡｎｎＰｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ），３４，７４３−６０，２０００］を含むＴＮＦ−αの抑制剤は、関節リウマチを処置する薬剤として、最近、合衆国食品医薬品局（ＦＤＡ）により承認された。

ＴＮＦ−αのレベルの上昇も、悪液質、敗血性ショック症候群、変形性関節炎、クローン病などの炎症性大腸炎および潰瘍性大腸炎などを含む他の多くの疾患および疾患状態に関係していた。

ＴＮＦ−αおよび／またはＩＬ−１の基礎レベルを越えたレベルの上昇は、関節リウマチ、骨粗しょう症、多発性骨髄膜、ブドウ膜炎、急性および慢性の骨髄性白血病、膵臓β細胞破壊、変形性関節炎、リウマチ性脊椎炎、通風性関節炎、炎症性大腸炎、成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、乾癬、クローン病、アレルギー性鼻炎、潰瘍性大腸炎、過敏症、接触性皮膚炎、ぜんそく、筋肉変性、悪液質、Ｉ型およびＩＩ型の糖尿病、骨吸収疾患、虚血再かん流傷害、アテローム性動脈硬化症、脳損傷、多発性硬化症、脳マラリア、敗血症、敗血性ショック、毒素性ショック症候群、感染による発熱および筋肉痛、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、ＨＩＶ−３、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、インフルエンザ、アデノウイルス、ヘルペス・ウイルス（ＨＳＶ−１、ＨＳＶ−２を含む）を含む多数の疾患状態の媒介または悪化に関係しており、および帯状疱疹ウイルスもＴＮＦ−αにより悪化する。

ＴＮＦ−αの抑制剤は、多種多様な疾患の処置に極めて有効であることが判明している。ＴＮＦ−αを抑制する化合物は、いくつかの特許に記載されている。

ＩＬ−６の過剰産生は、いくつかの疾患状態に関係しており、ＩＬ−６の分泌を抑制する化合物の開発が強く望まれている。ＩＬ−６を抑制する化合物は、米国特許第６，００４，８１３；５，５２７，５４６号明細書および米国特許第５，１６６，１３７号明細書に記載されている。

サイトカインＩＬ−１βも炎症反応に関与している。該サイトカインは、胸腺細胞の増殖、線維芽細胞増殖因子活性および滑膜細胞からのプロスタグランジンの放出を刺激する。サイトカインＩＬ−１βのレベルの上昇または未制御は、多数の炎症疾患および成人呼吸窮迫症候群、アレルギー、アルツハイマー病などを含むがこれらに限定されない他の疾患状態と関係していた。ＩＬ−１βの過剰産生は多数の疾患状態と関係があるので、ＩＬ−１βの産生または活性を抑制する化合物の開発が望まれている。

動物の関節リウマチ・モデルでは、ＩＬ−１の多関節内注入は関節を急速に破壊した［チャンドラセカールら（Ｃｈａｎｄｒａｓｅｋｈａｒｅｔａｌ．），クリニカル・イムノロジー・アンド・イムノパソロジー（ＣｌｉｎｉｃａｌＩｍｍｕｎｏｌＩｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．），５５，３８２，１９９０］。培養リウマチ滑膜細胞を用いた試験において、ＩＬ−１は、ＴＮＦ−αよりもストロメライシンのより強力な誘発剤である［ファイアスタイン（Ｆｉｒｅｓｔｅｉｎ），ジ・アメリカン・ジャーナル・オブ・パソロジー（Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．），１４０，１３０９，１９９２］。局注の部位において、好中球、リンパ球、および単球の移動が観察された。この移動は、ケモカイン（例えば、ＩＬ−８）の誘導および接着分子の上方調節によるものであった［ジナレロ（Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ），ユーロピアン・サイトカイン・ネットワーク（Ｅｕｒ．ＣｙｔｏｋｉｎｅＮｅｔｗ．），５，５１７−５３１，１９９４］。

関節リウマチでは、ＩＬ−１とＴＮＦ−αの両方が、滑膜細胞と軟骨細胞とを誘発し、コラゲナーゼと中性プロテアーゼとを産生し、該プロテアーゼにより関節炎関節内で組織破壊が生じる。関節炎のモデル（ラットおよびマウスのコラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ））において、ＣＩＡの注入の前か後のいずれかのＴＮＦ−αの関節内投与により関節炎の発症が加速され、より重篤な疾患になった［ブラーンら（Ｂｒａｈｎｅｔａｌ．），リンホカイン・アンド・サイトカイン・リサーチ（ＬｙｍｐｈｏｋｉｎｅＣｙｔｏｋｉｎｅＲｅｓ，），１１，２５３，１９９２；クーパー（Ｃｏｏｐｅｒ），クリニカル・アンド・イクスペリメンタル・イムノロジー（Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．），８９８，２４４．１９９２］。

ＩＬ−８は、多くの病状を発症および／または悪化させることに関与しており、該病状では炎症または傷害（例えば、虚血）の部位への大量の好中球の浸入が、ぜんそく、炎症性大腸炎、乾癬、成人呼吸窮迫症候群、心臓および腎臓再かん流傷害、血栓症および糸球体腎炎を含むがこれらに限定されないＩＬ−８の走化性に媒介される。好中球に対する走化性作用に加えて、ＩＬ−８は好中球を活性化する能力も有する。したがって、ＩＬ−８レベルの低下は、好中球の浸入を低下させる。

シクロオキシゲナーゼ酵素は、３つのアイソフォーム、即ち、ＣＯＸ−１、ＣＯＸ−２およびＣＯＸ−３として存在することが報告されている。ＣＯＸ−１酵素は、必須で、主として胃液の制御をしており、一方、ＣＯＸ−２酵素は基礎レベルにて存在し、炎症反応のプロスタグランジンの合成において大きな役割を果たしていると報告されている。これらのプロスタグランジンは、体内で炎症を生じることが知られている。したがって、これらのプロスタグランジンの合成がＣＯＸ−２酵素を抑制することにより停止されるならば、炎症および炎症に関連した障害は処置することができる。ＣＯＸ−３は、グリコシル化依存性シクロオキシゲナーゼ活性を有する。マウスのＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２と犬のＣＯＸ−３活性とを比較して、この酵素は、アセトアミノフェン、フェナセチン、アンチピリン、およびジピロンなどの鎮痛剤／解熱薬により選択的に抑制され、非ステロイド系抗炎症薬により強力に抑制されることが証明された。したがって、ＣＯＸ−３の抑制は、これらの薬剤が痛みとおそらく熱を下げる第１の中心的メカニズムを表しているように思われる。ｃｏｘｉｂが開発される前の昔のレポートは、ＣＯＸ−１酵素の抑制剤は胃潰瘍を生じ、選択的なＣＯＸ−２とＣＯＸ−３酵素抑制剤はこの機能に欠けているので安全であることを証明している。しかし、最近のレポートは、選択的なＣＯＸ−２抑制剤（ＣＯＸＩＢ）は心血管系リスクと関係していることを示している。したがって、ＣＯＸ−１の抑制により心血管系リスクおよび胃潰瘍を生じることなくＣＯＸ−２を抑制することは、安全であることが証明され、本発明の関心事である。

最も密接な関係にある化合物を開示している二三の先行技術文献をここで示す。

ｉ）米国特許第５，７２６，１２４号明細書および米国特許第５，３００，４７７号明細書は、化学式（ＩＩａ）の新規な除草剤化合物を開示しており、

式中、Ｒ_２は置換または非置換のアリール基または置換または非置換のヘテロ芳香族（例えば、４〜５個の炭素原子と窒素、硫黄および酸素からなる群から選択された１個のヘテロ原子を有するヘテロ芳香族環構造）であり、Ｒ_３はアルキル、ハロアルキル、ポリハロアルキル、ハロアルケニル、ポリハロアルケニル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキニル、ポリハロアルキニル、アルコキシアルキル、ジアルコキシアルキル、ハロアルコキシアルキル、オキソアルキル、トリメチルシリルアルキニル、シアノアルキルまたはアリール基であり、Ｒ_５は水素、ハロ、アシル、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルチオ、アルコキシアルキル、アルコキシイミノ、アルコキシカルボニルアルキル、ジアルコキシアルキル、ホルミル、ハロアルキル、ハロアルケニル、ハロアルキニル、ハロアルコキシ、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシイミノ、ポリハロアルキル、ポリハロアルケニル、ポリハロアルキニル、ポリハロアルコキシ、トリメチルシリルアルキニル、アルコキシアルコキシ、アミノカルボニルアルキル、アルキルアミノカルボニルアルキル、ジアルキルアミノカルボニルアルキル、シアノアルキル、ヒドロキシまたはシアノ基であり、Ｒ_６は水素、ハロ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルチオ、アルコキシアルキル、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアルキル、ハロアルキル、ハロアルケニル、ハロアルキニル、ハロアルコキシ、ハロアルキルチオ、ポリハロアルキル、ポリハロアルケニル、ポリハロアルキニル、ポリハロアルコキシ、ポリハロアルキルチオ、シクロアルキル、アリール、アリールオキシ、ヘテロシクリル、アルアルキル、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ジアルキルアミノカルボニル、またはシアノ基であり、さらにＸは酸素または硫黄である。

これらの化合物の一例は化学式（ＩＩｂ）に示している。

ｉｉ）米国特許第５，４７４，９９６号明細書は化学式（ＩＩｃ）の新規な化合物を開示している。

式中、

は

または

であり、

Ｒ_５は単結合または−（ＣＨ_２）−、−ＮＨ−、などであり、ｍは０〜４の整数であり、ＹはＹ_１−Ｂ−Ｙ_２であり、５〜６員環の単環アリールまたは酸素、窒素および硫黄から選択された少なくとも１つのヘテロ原子を含む、任意ではあるが、８〜１０員環の縮合環であり、Ｒ_１０およびＲ_１１は共にオキソ基を形成し、Ｒ_２は水素、ハロゲン、ヒドロキシル、メルカプト、シアノ、ニトロ、ホルミル、ベンゾイル、１〜６原子のアシル、アルキル、アルケニル、アルコキシ、炭素原子数１０個までのアルキルチオ、フェニル、フェノキシ、ナフチル、ベンジル、フェニルチオ、ビフェニル、ビフェニルメチルおよびインドールからなる群から選択され、Ｒ_３はカルボキシまたはエステル化カルボキシで置換されたアルキルである。

これらの化合物の一例を化学式（ＩＩｄ）に示す。

ｉｉｉ）米国特許第６，４２０，３８５号明細書および米国特許第６，４１０，７２９号明細書は化学式（ＩＩｅ）の新規な化合物を開示しており、

式中、

は

または

を表し、

ＸはＯ、ＳまたはＮＲ_５であり、Ｒ_１およびＲ_２は各々独立に−Ｙまたは−Ｚ−Ｙを表し、Ｒ_３およびＲ_４は各々独立に−Ｚ−Ｙであり、またはＲ_３は水素ラジカルであり、ただしＲ_４が置換アリール、（置換アリール）メチルまたは（置換アリール）エチル・ラジカル以外のものであれば、各Ｚは任意ではあるが独立に置換アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロシクリル、アリールまたはヘテロアリールであり、Ｙは独立に水素、ハロ、シアノ、ニトロ、などであり、Ｒ_５は独立に水素、任意ではあるが置換アルキル、アルケニル、アルキニルなどであり、Ｒ_１１およびＲ_１２は各々独立に任意ではあるが置換アリールまたはヘテロアリールを表す。

これらの化合物の一例は化学式（ＩＩｆ）に示している。

ｉｖ）米国特許第４，７７１，０４０号明細書は６−オキソピリミジニル（チオノ）ホスフェート農薬化合物および化学式（ＩＩｇ）の中間体を開示している。

式中、Ｒ_２は水素、任意ではあるが置換アルキル、またはアルコキシ、アルキルチオ、ジアルキルアミノまたはアリールを表し、Ｒ_３はアルキルまたはアリールを表し、Ｒ_４は水素、ハロゲンまたはアルキルを表す。

これらの化合物の一例は化学式（ＩＩｈ）に示している。

ｖ）独国特許出願公開第２１４２３１７号明細書は化学式（ＩＩｉ）の催眠作用のあるウラシル誘導体を開示している。

式中、Ｒ_１はＨ、アルキル、アルケニル、ジアルキルアミノアルキルまたはアラルキルであり、Ｒ_２はＨ、アルキル、アリールまたはハロゲンであり、Ｒ_３はアルキル、アルケニル、シクロアルキル、アラルキルまたはアリールであり、Ｒ_４はアルキル、アルケニル、シクロアルキル、アラルキル、アリールなどである。

これらの化合物の一例は化学式（ＩＩｉ）に示している。

ｖｉ）米国特許第５，４７０，９７５号明細書は化学式（ＩＩｋ）のジヒドロピリミジン誘導体を開示している。

Ｒ_１はアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ＮＲ_４Ｒ_５などであり、Ｒ_２はＨ、ハロゲン、ＳＲ_４、などであり、Ｒ_３はＲ_４、−ＣＯＯＲ、−ＣＯＮＨ_２、ＣＮ、などであり、Ｒ_４、Ｒ_５は水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキルなどから独立に選択され、またはＲ_４およびＲ_５はこれらが結合している炭素原子と共にカルボニルまたはチオカルボニル基を形成し、Ｒ_６は−ＣＮ、アルキル、アシロキシ、ＳＯ_２ＮＨ_２、アリール、フリルであり、Ｒ_７はＨ、ハロゲン、などであり、Ｒ_８はＨ、ハロゲン、アルキル、アルコキシなどである。

これらの化合物の一例は化学式（ＩＩｌ）に示している。

（ｖｉｉ）欧州特許出願公開第１４６００７７号明細書。この発明は、新規なピラゾロピリミドン、ピラゾロピリミドンを含む組成物、並びにこれらの化合物の使用および勃起不全の処置のためなどのＰＤＥ抑制剤として作用する薬剤を作るための組成物に関する。構造式の１つにより表された化合物、またはこれらの混合物である。

式中、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、およびＲ_４は、独立に、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、ハロアルキル、アルキルアリール、アリール、アラルキル、アルコキシ、カルボキシまたはヘテロシクリルであり、これらの置換基のすべては、置換または非置換であるが、Ｒ_１が水素、Ｃ_１−Ｃ_４アルキル、Ｃ_１−Ｃ_４ハロアルキル、ピペリジノメチル、メトキシメチル、Ｎ−メチルピペリジノメチル、カルボエトキシ、ｐ−クロロフェノキシメチルまたはＡｒ−（ＣＨ_２）ｎ−（式中ｎは０−４である）である化学式（ＸＩ）を例外とする。

米国特許第５，７２６，１２４号明細書米国特許第５，３００，４７７号明細書米国特許第５，４７４，９９６号明細書米国特許第６，４２０，３８５号明細書米国特許第６，４１０，７２９号明細書米国特許第４，７７１，０４０号明細書独国特許出願公開第２１４２３１７号明細書米国特許第５，４７０，９７５号明細書欧州特許出願公開第１４６００７７号明細書欧州特許出願公開第１４６００７７号明細書モザーら（Ｍｏｓｅｒｅｔａｌ．），ザ・ジャーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲーション（ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ），８３，４４４−５５，１９８９ハワースら（Ｈａｗｏｒｔｈｅｔａｌ．），ユーロピアン・ジャーナル・オブ・イムノロジー（ＥｕｒＪＩｍｍｕｎｏｌ），２１，２５７５−７９，１９９１）；ブレナンら（Ｂｒｅｎｎａｎｅｔａｌ．），ランセット（Ｌａｎｃｅｔ），２，２４４−７，１９８９アレンドら（Ａｒｅｎｄｅｔａｌ．），アースリチス・アンド・リューマチズム（ＡｒｔｈｒｉｔｉｓＲｈｅｕｍ），３８，１５１−６０，１９９５）ゴールデンバーグ（Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ），クリニカル・セラピューチックス（ＣｌｉｎＴｈｅｒ），２１，７５−８７，１９９９ルオンら（Ｌｕｏｎｇｅｔａｌ．），ジ・アナルス・オブ・ファーマコセラピー（ＡｎｎＰｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ），３４，７４３−６０，２０００チャンドラセカールら（Ｃｈａｎｄｒａｓｅｋｈａｒｅｔａｌ．），クリニカル・イムノロジー・アンド・イムノパソロジー（ＣｌｉｎｉｃａｌＩｍｍｕｎｏｌＩｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．），５５，３８２，１９９０ファイアスタイン（Ｆｉｒｅｓｔｅｉｎ），ジ・アメリカン・ジャーナル・オブ・パソロジー（Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．），１４０，１３０９，１９９２ジナレロ（Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ），ユーロピアン・サイトカイン・ネットワーク（Ｅｕｒ．ＣｙｔｏｋｉｎｅＮｅｔｗ．），５，５１７−５３１，１９９４ブラーンら（Ｂｒａｈｎｅｔａｌ．），リンホカイン・アンド・サイトカイン・リサーチ（ＬｙｍｐｈｏｋｉｎｅＣｙｔｏｋｉｎｅＲｅｓ，），１１，２５３，１９９２；クーパー（Ｃｏｏｐｅｒ），クリニカル・アンド・イクスペリメンタル・イムノロジー（Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．），８９８，２４４．１９９２

我々は、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）と通常関係している何らかの副作用に欠けている腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）の抑制を介して主として作用するサイトカイン抑制剤を識別することを研究の焦点にした。不断の努力を続けた結果、化学式（Ｉ）の新規な化合物が得られた。これらの誘導体は、炎症および免疫疾患の処置に効く可能性がある。特に本発明の化合物は、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１β、ＩＬ−８、ＩＬ−１２などのサイトカイン類により媒介された免疫疾患および炎症の処置に有効である。本発明の化合物は、関節リウマチ、骨粗しょう症、多発性骨髄膜、ブドウ膜炎、急性および慢性の骨髄性白血病、虚血性心疾患、アテローム性動脈硬化症、癌、虚血性誘導細胞障害、膵臓β細胞破壊、変形性関節炎、リウマチ性脊椎炎、通風性関節炎、炎症性大腸炎、成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、乾癬、クローン病、アレルギー性鼻炎、潰瘍性大腸炎、過敏症、接触性皮膚炎、ぜんそく、筋肉変性、悪液質、骨吸収疾患、虚血再かん流傷害、アテローム性動脈硬化症、脳損傷、多発性硬化症、敗血症、敗血性ショック、毒素性ショック症候群、感染による発熱および筋肉痛の処置にも有効である。

本発明は、化学式（Ｉ）の新規なピラゾロピリミジノン誘導体、これらの誘導体、これらの薬学的に許容できる塩類およびこれらの薬学的に許容できる組成物に関する。

式中Ａｒ_１およびＡｒ_２は同じであっても異なっていてもよく、独立にアリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル基から選択された置換または非置換の基を表し、Ｒ_１は水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ホルミル、アミノ、ヒドラジン、アルキルアミノ、アリールアミノ、アシルアミノ、スルホニルアミノ、置換（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル、アシル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、ヘテロシクリル、−ＮＨＣＨ_２ＣＮ、−ＮＨＣＨ_２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨＯＨ、−ＮＨＣＯＮＨ_２、−ＮＨＣＳＮＨ_２、−ＮＨＣＯＮＨ−アルキル、−ＮＨＣＯＮＨ−アリール、−ＮＨＣＳＮＨ−アルキル、−ＮＨＣＳＮＨ−アリール、−ＮＨＣＯ−アリール、−ＮＨＣＯ−ヘテロアリール、−ＮＨＣＯ−ピペラジン、−ＮＨＣＳ−ピペラジンから選択された置換または非置換の基を表し、Ｒ_２は水素、ヒドロキシ、ニトロ、ニトロソ、アルキル、アジド、ハロゲン、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、ホルミル、およびハロアルキル、アルコキシ、アリールオキシ、アラルキル、アラルコキシ、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、アシル、アシルオキシ、シクロアルキル、アミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アシルアミノ、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アルキルスルフィニル、アリールスルフィニル、アルキルチオ、アリールチオ、アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、アルコキシアルキル、スルファモイル、カルボン酸およびその誘導体から選択された置換または非置換の基を表す。

Ａｒ_１およびＡｒ_２により表された適切な基は、フェニルまたはナフチルなどのアリール基から選択され、アリール基は置換されてもよく、ヘテロアリール基は、ピリジル、チエニル、フリル、ピロリル、オキサゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、テトラゾリル、ピリミジニル、ピラジン、ピペラジン、ベンゾピラニル、ベンゾフラニル、ベンズイミダゾリル、ベンズオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾピロリル、ベンズオキサゾリル、ベンズチアジアゾリルなどの単環系または縮合環でよく、ヘテロアリール基は置換されてよく、ピロリジニル、チアゾリジニル、オキサゾリジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、ピペリジニル、ピペラジニル、などのヘテロシクリル基であって、ヘテロシクリル基は置換されてよい。

Ａｒ_１およびＡｒ_２により表された基の置換基は、ヒドロキシ、ニトロ、ニトロソ、ホルミル、アジド、ハロまたはアルキル、ハロアルキル、アルコキシ、アリール、アリールオキシ、アラルキル、アラルコキシ、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、アシル、アシルオキシ、シクロアルキル、アミノ、ヒドラジン、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アシルアミノ、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アルキルスルフィニル、アリールスルフィニル、アルキルチオ、アリールチオ、アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、アルコキシアルキル、スルファモイル、−ＳＯ_２Ｎ_３、−ＳＯ_２ＮＨＮＨ_２、−ＳＯ_２ＮＨＲ_３、−ＳＯ_２ＮＨＣＯＲ_３、−ＳＯ_２ＮＨＮＨＣＯＲ_３から選択され、Ｒ_３はアルキル、ハロアルキル、アリール、ヘテロアリール、−カルボン酸およびその誘導体でよい。

Ｒ_１により表される適切な基は、水素、ヒドロキシル、アミノ、アルキルアミノ、アリールアミノ、アシルアミノ、スルホニルアミノ、ヒドラジン、およびフッ素、塩素、臭素またはヨウ素などのハロゲン原子、ホルミル、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ヘキシルなどの置換または非置換の線状または分岐（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ_３、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ_２Ｈ_５、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ_３Ｈ_７、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ_６Ｈ_１３、−Ｃ（＝Ｓ）ＣＨ_３、−Ｃ（＝Ｓ）Ｃ_２Ｈ_５、−Ｃ（＝Ｓ）Ｃ_３Ｈ_７、−Ｃ（＝Ｓ）Ｃ_６Ｈ_１３、ベンゾイルなどのアシル基であって、これらのアシル基は置換されてよく、−ＮＨＣＨ_２ＣＮ、−ＮＨＣＨ_２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨＯＨ、ＮＨＣＯＮＨ_２、−ＮＨＣＳＮＨ_２、−ＮＨＣＯＮＨ−アルキル、−ＮＨＣＯＮＨ−アリール、−ＮＨＣＳＮＨ−アルキル、−ＮＨＣＳＮＨ−アリール、−ＮＨＣＯ−アリール、−ＮＨＣＯ−ヘテロアリール、−ＮＨＣＯ−ピペラジン、−ＮＨＣＳ−ピペラジン、フェニルまたはナフチルなどのアリール基であって、該アリール基は置換されてもよく、ベンジル、フェニルエチル、フェニルプロピルなどのアラルキル基であって、該アラルキル基は置換されてもよく、ヘテロアリール基は、ピリジル、チエニル、フリル、ピロリル、オキサゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、テトラゾリル、ピリミジニル、ピラジン、ピペラジン、ベンゾピラニル、ベンゾフラニル、ベンズイミダゾリル、ベンズオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾピロリル、ベンズオキサゾリル、ベンズチアジアゾリル、などの単環系または縮合環であってよく、該ヘテロアリール基は置換されてよく、ピロリジニル、チアゾリジニル、オキサゾリジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、ピペラジニル、ピペラジニル、などのヘテロシクリル基であって、該ヘテロシクリル基は置換されてよく、ヘテロアリール基が上で規定されたとおりであるヘテロアラルキルから選択される。

Ｒ_２により表される適切な基は、水素、ヒドロキシ、ニトロ、ニトロソ、ホルミル、アジド、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素などのハロゲン原子、またはメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ヘキシルなどの置換または非置換の線状または分岐（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基、クロロメチル、クロロエチル、トリフルオロメチル、トリフルオロエチル、ジクロロメチル、ジクロロエチル、などのハロアルキルであって、該ハロアルキルは置換されてもよく、フェニルまたはナフチルなどのアリール基であって、該アリール基は置換されてもよく、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどのシクロ（Ｃ_３−Ｃ_６）アルキル基であって、該シクロアルキル基は置換されてもよく、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ_３、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ_２Ｈ_５、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ_３Ｈ_７、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ_６Ｈ_１３、−Ｃ（＝Ｓ）ＣＨ_３、−Ｃ（＝Ｓ）Ｃ_２Ｈ_５、−Ｃ（＝Ｓ）Ｃ_３Ｈ_７、−Ｃ（＝Ｓ）Ｃ_６Ｈ_１３、ベンゾイルなどのアシル基であって、該アシル基は置換されてよく、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシなどの線状または分岐（Ｃ_１−Ｃ_６）アルコキシ基、フェノキシ、ナフトキシなどのアリールオキシ基であって、該アリールオキシ基は置換されてもよく、ＭｅＣＯＯ−、ＥｔＣＯＯ−、ＰｈＣＯＯ−などのアシルオキシ基であって、該アシルオキシ基は置換されてもよく、ピロリジニル、モルホリニル、チアゾリジニル、チオモルホリニル、ピペリジニル、ピペラジニル、などのヘテロシクリル基であって、該ヘテロシクリル基は置換されてよく、ヘテロアリール基は、ピリジル、チエニル、フリル、ピロリル、オキサゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、テトラゾリル、ピリミジニル、ピラジン、ピペラジン、ベンゾピラニル、ベンゾフラニル、ベンズイミダゾリル、ベンズオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾピロリル、ベンズオキサゾリル、ベンズチアジアゾリル、ベンゾピロリル、ベンゾキサジアゾリル、ベンゾチアジアゾリルなどの単環系または縮合環であってよく、該ヘテロアリール基は置換されてよく、ベンジル、フェニルエチル、フェニルプロピルなどのアラルキル基であって、該アラルキル基は置換されてもよく、置換されてもよいアミノ、置換されてもよいヒドラジン、−ＮＨＣＨ_３、−ＮＨＣ_２Ｈ_５、−ＮＨＣ_３Ｈ_７、−ＮＨＣ_６Ｈ_１３などのモノアルキルアミノであって、該モノアルキルアミノは置換されてもよく、−Ｎ（ＣＨ_３）_２、−ＮＣＨ_３（Ｃ_２Ｈ_５）、−ＮＣ（Ｃ_２Ｈ_５）_２などのジアルキルアミノであって、該ジアルキルアミノは置換されてもよく、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ_３、−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｃ_２Ｈ_５、−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｃ_３Ｈ_７、−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｃ_６Ｈ_１３などのアシルアミノ基であって、アシルアミノ基は置換されてもよく、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、ｎ−プロポキシカルボニル、イソプロポキシカルボニルなどのアルコキシカルボニル基であって、該アルコキシカルボニル基は置換されてもよく、フェノキシカルボニル、ナフトキシカルボニル、アリールオキシカルボニルなどのアリールオキシカルボニル基は置換されてもよく、メチルスルホニル、エチルスルホニル、ｎ−プロピルスルホニル、イソプロピルスルホニルなどのアルキルスルホニル基であって、該アルキルスルホニル基は置換されてもよく、フェニルスルホニルまたはナフチルスルホニルなどのアリールスルホニル基であって、該アリールスルホニル基は置換されてもよく、メチルスルフィニル、エチルスルフィニル、ｎ−プロピルスルフィニル、イソプロピルスルフィニルなどのアルキルスルフィニルであって、該アルキルスルフィニル基は置換されてもよく、フェニルスルフィニルまたはナフチルスルフィニルなどのアリールスルフィニル基であって、該アリールスルフィニル基は置換されてもよく、メチルチオ、エチルチオ、ｎ−プロピルチオ、イソプロピルチオなどのアルキルチオ基であって、該アルキルチオ基は置換されてもよく、フェニルチオまたはナフチルチオなどのアリールチオ基であって、該アリールチオ基は置換されてもよく、メトキシメチル、エトキシメチル、メトキシエチル、エトキシエチルなどのアルコキシアルキル基であって、該アルコキシアルキル基は置換されてもよく、スルファモイル、カルボン酸およびエステル、アミドおよび酸ハライドなどのカルボン酸誘導体から選択される。

Ｒ_１基、Ｒ_２基が置換される場合、置換基は、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、アジド、ニトロソ、アミノ、ヒドラジン、ホルミル、アルキル、アリール、シクロアルキル、アルコキシ、アリールオキシ、アシル、アシロキシアシル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アシルアミノ、アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アルキルスルフィニル、アリールスルフィニル、アルキルチオ、アリールチオ、スルファモイル、アルコキシアルキル基またはカルボン酸およびその誘導体から選択され、これらの置換基は上で規定されたとおりである。

本発明に記載の代表的化合物は下記を含む：
３−アミノ−５−（４−メチルフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−５−（３，４−ジメチルフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−５−（４−フルオロフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−５−［（４−メチルチオ）フェニル］−６−（４−フルオロフェニル）−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−５−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−５−（４−イソプロピルフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−５−［（４−メチルチオ）フェニル］−６−（４−クロロフェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−５−（４−クロロフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−５−（４−エチルフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−５−［（４−メチルチオ）フェニル］−６−フェニル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−５−（４−フルオロフェニル）−６−フェニル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−５−［（４−メチルチオ）フェニル］−６−（４−（メチルフェニル）−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−５−（４−メチルフェニル）−６−［４−（メチルスルホニル）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−５−（４−エトキシフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−５−（４−メチルフェニル）−６−フェニル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−５−［（４−メチルチオ）フェニル］−６−（４−トリフルオロメチルフェニル）−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
４［３−アミノ−５−（４−メチルフェニル）−４−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］ベンゼンスルホンアミド、
３−アミノ−５−（４−ブロモフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−５−（３，４−ジメチルフェニル）−１−メチル−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−５−（４−エトキシフェニル）−１−メチル−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−５−（４−イソプロピルフェニル）−１−メチル−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−５−（２，４−ジメチルフェニル）−１−メチル−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−５−（４−クロロフェニル）−１−メチル−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−５−（４−フルオロフェニル）−１−メチル−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−５−（４−メチルフェニル）−１−メチル−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−５−（４−メトキシフェニル）−１−メチル−６−ピリジン−４−イル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−５−（４−エトキシフェニル）−１−メチル−６−ピリジン−３−イル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−５−（４−メトキシフェニル）−１−メチル−６−ピリジン−３−イル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−５−（４−ブロモフェニル）−１−メチル−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−６−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−５−（４−メトキシフェニル）−１−メチル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−５−（２，４−ジメチルフェニル）−１−（２−ヒドロキシエチル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−１−（２−ヒドロキシエチル）−５−（４−メトキシフェニル）−６−ピリジン−３−イル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−６−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−１−メチル−５−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
Ｎ−［５−（３，４−ジメチルフェニル）−４−オキソ−６［−４−（メチルチオ）フェニル］−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−イル］アセトアミド、
１−アセチル−３−アミノ−５−（３，４−ジメチルフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−５−（４−メトキシフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
Ｎ−（４−オキソ−５−（２，４−ジメチルフェニル）−１−メチル−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−イル）−４−（トリフルオロメチル）ベンズアミド、
Ｎ−｛５−（２，４−ジメチルフェニル）−１−メチル−６［−４−（メチルチオ）フェニル］−４−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−イル｝アセトアミド、
２，２，２−トリフルオロ−Ｎ−｛５−（２，４−ジメチルフェニル）−１−メチル−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−４−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−イル｝アセトアミド、
２，２，２−トリフルオロ−Ｎ−［５−（４−メトキシフェニル）−１−メチル−４−オキソ−６−ピリジン−３−イル−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−イル］アセトアミド、
Ｎ−（４−オキソ−５−（４−クロロフェニル）−１−メチル−６−［（４−メチルチオ）フェニル］−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−イル）−３−フルオロベンズアミド、
３−アミノ−５−（４−メトキシフェニル）−６−［４−メチルフェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−５−（４−メトキシフェニル）−６−［４−メトキシフェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−５−（４−メトキシフェニル）−６−［４−クロロフェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−５−（４−クロロフェニル）−６−［４−クロロフェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−５−（４−クロロフェニル）−６−［４−メトキシフェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−５−（４−クロロフェニル）−６−［４−メチルフェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−５−（４−フルオロフェニル）−６−［４−クロロフェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−５−（４−フルオロフェニル）−６−［４−メトキシフェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−５−（４−フルオロフェニル）−６−［４−メチルフェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−５−（４−トリフルオロメチルフェニル）−６−［４−クロロフェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−５−（４−トリフルオロメチルフェニル）−６−［４−メトキシフェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−５−（４−トリフルオロメチルフェニル）−６−［４−メチルフェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−５−（４−トリフルオロメチルフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−５−（４−メチルスルホニル）−６−［４−クロロフェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−５−（４−メチルスルホニル）−６−［４−メトキシフェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−５−（４−メチルスルホニル）−６−［４−メチルフェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−５−（４−メチルスルホニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−５−（４−（メチルチオ）フェニル）−６−ピリジン−４−イル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３−アミノ−５−（４−エトキシフェニル）−１−メチル−６−ピリジン−４−イル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
１−｛１−メチル−５−［４−（メチルチオ）フェニル］−４−オキソ−６−フェニル−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−イル｝尿素および
１−｛５−［４−（メチルチオ）フェニル］−４−オキソ−６−フェニル−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−イル｝尿素。

本発明の別の実施形態によると、化学式（Ｉ）の新規なピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン誘導体を調製するプロセスが提示されている。式中、Ｒ_１はアミノを表し、他のすべての記号は下に提示されたスキーム１に示されているように以前に規定されたとおりである。
スキーム−１

化学式（Ｉｂ）の化合物と化学式（Ｉａ）の化合物との反応は、トルエン、キシレン、テトラヒドロフラン、ジオキサン、クロロホルム、ジクロロメタン、ジクロロエタン、ｏ−ジクロロベンゼン、アセトン、酢酸エチル、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキサイド、エタノール、メタノール、イソプロピルアルコール、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール、酢酸、プロピオン酸、これらの混合物のような溶媒を用いて、またはアルカリ金属およびアルカリ土類金属の炭酸塩、重炭酸塩、水素化物、水酸化物、アルコキシドなどの塩基存在下で同様のものを用いて、または反応物のみの反応により行える。該反応は、２０〜１５０℃の範囲の温度で１〜１２ｈの範囲の間に行われる。

上記反応のいずれかにおいて、基質分子のいずれかの反応性基が普通の化学的操作により保護されることは認識されている。上記反応における適切な保護基は、当該技術分野において普通に使われるものである。このような保護基の形成および除去の方法は、保護される分子に対して適切な方法である。

該薬剤組成物は、通常、錠剤、カプセル、粉末、シロップ、溶液、エアロゾル、懸濁液などの形態で使われ、香料、甘味剤を含んでもよく、適切な固体または液体担体または希釈剤中または適切な滅菌媒体において注入可能な溶液または懸濁液を形成する。

本発明は、以下実施例により提示され、該実施例は説明のためにのみ提示され、本発明の範囲を限定するものと考えてはならない。

３−アミノ−５−（４−メチルフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オンの合成

室温で撹拌しながらトルエン（７０ｍｌ）中の５−シアノ−１−（４−メチルフェニル）−４−メチルチオ−２−（４−メチルチオフェニル）−１，６−ジヒドロ−ピリミジン−６−オン（５．０ｇ，１３ｍｍｏｌ）（我々の国際公開第０３／８４９３８号で開示された操作に従って調製した）に、ヒドラジン水和物（０．６５８ｇ，１３ｍｍｏｌ）を添加した。この反応物に無水炭酸カリウム（０．１ｇ，０．７ｍｍｏｌ）を添加し、７０℃で３ｈ加熱した。分離された固体をろ過し、トルエン、水で洗浄し、乾燥し、標記化合物（２．０８ｇ，４３．５％，ｍｐ＞２８５℃，ＨＰＬＣによる純度９８．４％）を得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯＤ_６）：δ２．２５（ｓ，３Ｈ），２．４１（ｓ，３Ｈ），５．３１（ｂｓ，２Ｈ，Ｄ_２Ｏ交換可能），７．０４−７．０９（ｍ，６Ｈ），７．２３−７．２５（ｄ，２Ｈ），１２．５（ｂｓ，１Ｈ，Ｄ_２Ｏ交換可能）。ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１：３３７９，３２９６，３１６４，１７０１。ＭＳｍ／ｚ：３６４（Ｍ^＋＋１）。

３−アミノ−５−（３，４−ジメチルフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オンの合成

室温で撹拌しながらトルエン（７０ｍｌ）中の５−シアノ−１−（３，４−ジメチルフェニル）−４−メチルチオ−２（４−メチルチオフェニル）−１，６−ジヒドロ−ピリミジン−６−オン（４．０ｇ，１０．１ｍｍｏｌ）（我々の国際公開第０３／８４９３８号で開示された操作に従って調製した）の懸濁液に、ヒドラジン水和物（１．０２ｇ，２０．３ｍｍｏｌ）を添加した。この反応物に無水炭酸カリウム（０．１ｇ，０．７ｍｍｏｌ）を添加し、７０℃で３ｈ加熱した。分離された固体をろ過し、水で洗浄し、乾燥した。このようにして得られた粗生成物を溶離液として酢酸エチルとヘキサンとの混合物を用いてカラム・クロマトグラフィ（シリカゲル６０−１２０メッシュ）により精製し、標記化合物（１．０ｇ，２６．３％，ｍｐ２６３−２６６℃，ＨＰＬＣによる純度９８．６％）を得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１．７５（ｂｓ，２Ｈ，Ｄ２Ｏ交換可能），２．１５−２．１９（ｄ，６Ｈ）２．４１（ｓ，３Ｈ），５．５（ｂｓ，１Ｈ，Ｄ_２Ｏ交換可能），６．８９−６．９（ｄ，１Ｈ），６．９９−７．０（ｄ，１Ｈ），７．０１−７．０２（ｍ，３Ｈ）７．２０−７．２２（ｄ，２Ｈ）。ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１：３３０６，３１９３，２９１８，１６９３。ＭＳｍ／ｚ：３７８．３（Ｍ^＋＋１）。

一般的な操作：
等モルまたは等モルより多い量の１，２−ジアリール−５−シアノ−４−メチルチオ−１，６−ジヒドロ−ピリミジン−６−オン（我々の国際公開第０３／８４９３８号で開示された操作に従って調製した）およびヒドラジン水和物または置換または非置換のアルキルヒドラジンを、トルエン中半分のモル量の無水炭酸カリウムの存在下で６０−７０℃にて３−４時間加熱した。分離した得られた固体をろ過し、トルエン、水で洗浄し、乾燥して標記化合物を得た。カラム・クロマトグラフィまたは再結晶法により精製した。

表−Ｉに載せた次の化合物は、実施例３で説明した一般的な操作により調製する。

[実施例３５]
一般的な操作：
合成した化合物は、報告された普通の方法により適切な溶媒中で塩化アセチルまたは無水酢酸を用いて、さらにアシル誘導体に変え、標記化合物を得た。再結晶法により精製した。

表−ＩＩに載せた次の化合物は、実施例３５で説明した一般的な操作により調製する。

本発明の化合物の効能を調べるために用いた薬理学的アッセイの実施例を下で説明する。ここで、これらのプロトコルおよび結果を提示する。

シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）抑制活性のインビトロ評価：
本発明の化合物は、ＣＯＸ−２のインビトロ抑制を示した。実施例で説明したこれらの化合物のＣＯＸ−２抑制活性は、次の方法により決めた。

ヒト全血アッセイ：
ヒトの全血は、選択的なＣＯＸ−２抑制剤などの抗炎症化合物の生化学的効能の研究に適切なたんぱく質および細胞に富む環境を提供する。これらの研究により、正常なヒトの血液はＣＯＸ−２酵素を含まないことが判明した。これは、ＣＯＸ−２抑制剤は、正常な血液においてプロスタグランジンＥ_２（ＰＧＥ_２）に対して効果がないという観察と相関関係がある。これらの抑制剤は、血液中にＣＯＸ−２の産生を誘発するリポ多糖類（ＬＰＳ）を用いたヒトの血液を培養後のみ活性であった。

健康な男性ボランティアから静脈穿刺によるヘパリン・ナトリウムを含むチューブに新鮮な血液を集めた。被験者は、見かけ上炎症状態にはなく、採血前の少なくとも７日間は非ステロイド系抗炎症薬を服用してはならない。血液は、ＣＯＸ−１を失活させるためにインビトロでアスピリン（１２μｇ／ｍｌ，時間ゼロにおいて）とともに６時間予備培養した。次いで、テスト化合物（種々の濃度で）または媒体を血液に添加した。その後、血液はＬＰＳＢ：４（１０μｇ／ｍｌ）で刺激し、さらに、３７℃の水浴で１８時間培養した。その後、血液は遠心分離し、血漿を分離し、−８０℃で貯蔵した［ザ・ジャーナル・オブ・ファーマコロジー・アンド・イクスペリメンタル・セラピューチックス（Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ），２７１，１７０５，１９９４；プロシーディングス・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・サイエンシズ・オブ・ザ・ユナイテッド・ステーツ・オブ・アメリカ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ），９６，７５６３，１９９９］。血漿は、製造者［米国、アンアーバー、ケイマン・ケミカルズ（ＣａｙｍａｎＣｈｅｍｉｃａｌｓ，ＡｎｎＡｒｂｏｒ，ＵＳＡ）］が説明した手順どおりにケイマン・エリザ（ＣａｙｍａｎＥＬＩＺＡ）を用いてＰＥＧ２について調べた。ＰＥＧ２抑制の代表的な結果を表Ｉに示す。

ＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２酵素をベースとするアッセイ：
ＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２酵素をベースとするアッセイは、精製組み換えＣＯＸ−１／ＣＯＸ−２酵素によるプロスタグランジンの産生に対するテスト化合物の抑制能力をチェックするために行った［プロシーディングス・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・サイエンシズ・オブ・ザ・ユナイテッド・ステーツ・オブ・アメリカ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ），８８，２６９２−２６９６，１９９１；ザ・ジャーナル・オブ・クリニカル・イムノアッセイ（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ），１５，１１６−１２０，１９９２］。このアッセイでは、アラキドン酸（基質）からのＣＯＸ−１またはＣＯＸ−２のいずれかによるプロスタグランジンの産生を抑制するテスト化合物の能力を測定した。これは、再現性のよい選択的ＣＯＸ抑制を評価するための酵素ベースのインビトロ・アッセイであった。

アラキドン酸は、テスト化合物の有無いずれにおいてもＣＯＸ−１／ＣＯＸ−２によりＰＧＨ２（中間体）に変換された。この反応は３７℃で行われ、２分後に１ＭのＨＣｌを添加して停止された。中間体ＰＧＨ２は、ＳｎＣｌ_２還元により安定なプロスタノイド産物ＰＧＦ２αに変換された。この反応で産生されたＰＧＦ２αの量は、テスト化合物のＣＯＸ抑制能力に逆比例した。プロスタノイド産物は、製造者［米国、アンアーバー、ケイマン・ケミカルズ（ＣａｙｍａｎＣｈｅｍｉｃａｌｓ，ＡｎｎＡｒｂｏｒ，ＵＳＡ）］が説明した手順どおりにケイマン・エリザ（ＣａｙｍａｎＥＬＩＺＡ）キットを用いて、プロスタグランジンの主要形態のすべてに結合する広範に特異的な抗体を用いて酵素免疫アッセイ（ＥＩＡ）により計量した。抑制の代表的結果は、表ＩＩに示している。

腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）のインビトロ測定：
このアッセイは、ヒト末梢血中単核細胞（ＰＢＭＣ）におけるＴＮＦ−αの産生に対するテスト化合物の作用を決める。これらの化合物は、ヒトＰＢＭＣにおけるＴＮＦ−αの活性を抑制するこれらの化合物の能力をテストされた。ＰＢＭＣは、商標ＢＤＶａｃｕｔａｉｎｅｒＣＰＴ（ＢＤＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ，細胞調製チューブ）を用いて、血液（健康なボランティアからの）から単離し、ＲＰＭＩ媒体［フィジオロジカル・リサーチ（Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｓ．），５２：５９３−５９８，２００３］中に懸濁させた。テスト化合物は、ＰＢＭＣ（５００，０００／培養ウエル）を用いて３７℃で１５分間予備培養し、次いで、リポ多糖類（大腸菌、Ｂ４、１μｇ／ｍｌ）を用いて、５％ＣＯ_２中３７℃で１８ｈ刺激した。細胞培養媒体中のＴＮＦ−αの濃度は、製造者［米国、アンアーバー、ケイマン・ケミカルズ（ＣａｙｍａｎＣｈｅｍｉｃａｌｓ，ＡｎｎＡｒｂｏｒ，ＵＳＡ）］が説明した手順どおりに９６ウエル形式において行われた酵素免疫測定吸着法を用いて推定した。ＴＮＦ−α抑制の代表的な結果を表ＩＩＩに示している。

インターロイキン−６（ＩＬ−６）のインビトロ測定：
このアッセイは、ヒトＰＢＭＣにおけるＩＬ−６の産生に対するテスト化合物の作用を決める［フィジオロジカル・リサーチ（Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｓ．），５２：５９３−５９８，２００３］。これらの化合物は、ヒトＰＢＭＣにおけるＩＬ−６の活性を抑制するこれらの化合物の能力についてテストされた。ＰＢＭＣは、商標ＢＤＶａｃｕｔａｉｎｅｒＣＰＴ細胞調製チューブ（ＢＤＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ）を用いて、血液から単離し、ＲＰＭＩ媒体中に懸濁させた。テスト化合物は、ＰＢＭＣ（５００，０００／培養ウエル）を用いて３７℃で１５分間予備培養し、次いで、リポ多糖類（大腸菌、Ｂ４、１μｇ／ｍｌ）を用いて、５％ＣＯ_２中３７℃で１８ｈ刺激した。細胞培養媒体中のＩＬ−６の濃度は、製造者［米国、アンアーバー、ケイマン・ケミカルズ（ＣａｙｍａｎＣｈｅｍｉｃａｌｓ，ＡｎｎＡｒｂｏｒ，ＵＳＡ）］が説明した手順どおりに９６ウエル形式において行われた酵素免疫測定吸着法を用いて推定した。ＩＬ−６抑制の代表的な結果は、表ＩＶに示している。

ラットのカラギーナン誘発足浮腫テスト：
カラギーナン足浮腫テストは、［ウインターら（Ｗｉｎｔｅｒｅｔａｌ），プロシーディングス・オブ・ザ・ソサイアティ・フォー・イクスペリメンタル・バイオロジー・アンド・メディシン（Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．），１１１，５４４，１９６２）］により説明された通りに行った。オスのウイスター系ラットは、各グループ内で体重が等しくなるように選択した。これらのラットは、水は何時でも飲めるが、１８時間絶食した。これらのラットには、０．２５％のカルボキシ・メチルセルロースと０．５％のＴｗｅｅｎ８０を含む媒体内に懸濁されたテスト化合物を投与した。対照ラットには、０．２５％カルボキシメチルセルロースおよび０．５％Ｔｗｅｅｎ８０を含む媒体に懸濁したテスト化合物を経口投与した。対照ラットには、媒体のみを投与した。１時間後、０．９％食塩水の１％カラギーナン溶液を０．１ｍｌラットの右後足のサブ足底表面に注入した。足の容積は、カラギーナン注入の３時間前と後とにデジタル式プレチスモグラフを用いて測定した。薬物処置した動物の足の膨潤の平均値を、対照動物のそれと比較した。抗炎症活性は、対照群と比較した浮腫の抑制パーセンテージとして表した［Ａｒｚｎｅｉｍ−Ｆｏｒｓｃｈ／ＤｒｕｇＲｅｓ．，４３（１），１，４４−５０，１９９３；ＯｔｔｅｒｎｅｓｓａｎｄＢｌｉｖｅｎ，ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭｏｄｅｌｓｆｏｒＴｅｓｔｉｎｇＮＳＡＩＤｓ，ＩｎＮｏｎ−ＳｔｅｒｏｉｄａｌＡｎｔｉ−ＩｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙＲｒｕｇｓ，（Ｊ．Ｌｏｍｂａｒｄｉｎｏ，ｅｄ．１９８５）］。浮腫抑制の代表的結果は表Ｖに示している。

潰瘍誘発の可能性：
潰瘍形成に対する化合物の役割を評価するために、動物を屠殺し、胃を取り出し、１％ホルマリンで洗った。動物は、水はいつでも飲めるが１８時間絶食し、テスト化合物は０．５％のＴｗｅｅｎ８０と０．２５％のＣＭＣ（カルボキシメチルセルロース）との溶液に懸濁し、均一な懸濁液を作った。テスト化合物を４時間かけて経口投与した後、動物はすべて頚椎脱臼により屠殺した。胃を注意深く解剖し、滅菌食塩水で満たし、６％ホルマリン溶液に漬けた。最後に、胃を縦方向に切り、潰瘍病変を電子化された立体顕微鏡で観察した。テスト化合物処置グループを媒体処置グループと比較する。用量は、５０、１００、２００ｍｇ／ｋｇを選択した［マルコ・ロマノら（ＭａｒｃｏＲｏｍａｎｏｅｔａｌ），ザ・ジャーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲーション（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．）１９９２；２４０９−２４２１］。潰瘍罹患率の代表的な結果を表Ｖに示している。

アジュバント関節炎に対する抑制作用：
［サイセン−ポップら（Ｔｈｅｉｓｅｎ−Ｐｏｐｅｔａｌ．），エージェント・アンド・アクションズ（ＡｇｅｎｔｓＡｃｔｉｏｎｓ），４２，５０−５５，１９９４］によるラット・アジュバント誘発関節炎に対する化合物の活性を調べた。６〜７週齢のウイスター・ラットの体重を計り、マークをつけ、グループ［関節炎が誘発されない負の対照群、媒体処置関節炎対照群、テスト物質処置関節炎グループ］に割り当てた。アジュバント誘発関節炎は液体パラフィンに懸濁したＭｙｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ（Ｄｉｆｃｏ）を右の後足のサブ足底領域に注入した［ザ・ジャーナル・オブ・ファーマコロジー・アンド・イクスペリメンタル・セラピューチックス（Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ），２８４，７１４，１９９８］。体重、反対側の足の容積は、すべてのグループについて所定の日（０，４，１４，２１）に測定した。テスト化合物または媒体は、アジュバントの次の注入を開始しながら経口投与し、２１日間続けた。２１日目に、体重および左右両後足の足、脾臓の容積、および胸腺の重量を測定した。さらに、両後足の放射線写真をとり、頚骨足根骨関節の完全性を評価した。後膝関節の下の後肢を取り外し、１％ホルマリン食塩水中に置いた。実験の終わりに、血漿試料のサイトカイン、インターロイキンおよびプロスタグランジンを分析した。胃の病変の有無も観察した。

時間について測定を反復する２因子（処置および時間）分散分析を体重および足の容積の％変化に適用した。事後ダネット検定を行い、媒体への処置の効果を比較した。一元配置分散分析を胸腺および脾臓の重量に適用し、次いで、ダネット検定により媒体への処置の効果を比較した。日数４、１４および２１における足容積の％抑制に関する用量−反応曲線は、非線形最小二乗回帰を用いた４パラメータ・ロディック関数により一致した。ＩＤ_５０は、媒体から５０％低減に対応する用量として規定され、適合４パラメータ式から補間により導かれた。

マウスにおけるＴＮＦ−α抑制を測定するＬＰＳ誘発敗血症：
マウスにおけるＬＰＳ誘発敗血症モデルは、［レ・セクトら（Ｌｅｓｓｅｋｕｔｅｔａｌ），ザ・ジャーナル・オブ・ラボラトリー・アンド・クリニカル・メディシン（］に記載されたとおりに行った。スイスのアルビノマウスのメスを選択し、各グループ内の体重は同等であった。これらのマウスは、水はいつでも飲めたが２０時間絶食した。これらのマウスに、０．２５％カルボキシメチルセルロース・ナトリウム塩中に０．５％Ｔｗｅｅｎ８０を含む媒体に懸濁したテスト化合物を経口投与した。対照マウスには、媒体のみを投与した。経口投与の３０分後、マウスには、ホスフェート・バッファー食塩水溶液中５００μｇのリポ多糖類（大腸菌、ＬＰＳ：ＳｉｇｍａからのＢ４）を腹腔内に注入した。ＬＰＳ投与の９０分後、マウスは洞穿刺の逆方向の軌道を介して出血した。血液試料は４℃で一晩貯蔵した。これらの試料を４℃で１５分間４０００ｒｐｍにて遠心分離して血清試料を集めた。直ぐに、市販のマウスＴＮＦ−αＥＬＩＺＡキット［アメルシャム・バイオサイエンシズ（ＡｍｅｒｓｈａｍＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）］を用いて、試料のＴＮＦ−α濃度を分析した。アッセイは製造者の説明書に従って行った。ＴＮＦ−α抑制の代表的な結果を表ＶＩに示している。

ＤＴＰヒト腫瘍細胞系の選別：
インビトロ癌選別の手順：
多用量６０細胞系選別において不活性になるであろう化合物の大部分を識別する３細胞系、１回量の予備選別を行った。このアッセイは、合成試料のテストにおいてより大きな選別容量を生じる、３８４ウエル・プレート形式および蛍光染色技術を利用する。

細胞系：
癌選別パネルの細胞系は、５％ウシ胎仔血清および２ｍＭのＬ−グルタミンを含むＲＰＭＩ１６４０媒体中で増殖する。典型的な選別実験では、細胞は９６のウエル・マイクロタイター・プレート内に１００μＬずつ播種される。細胞播種後、マイクロタイター・プレートは、実験薬剤を添加する前に、ＣＯ２５％、空気９５％、相対湿度１００％、３７℃において２４時間培養される。これらの細胞は、５０００細胞／ウエル（ＭＣＦ７）、１０００細胞／ウエル（ＮＣＩ−Ｈ４６０）、および７５００細胞／ウエル（ＳＦ−２６８）の密度で蒔き、該細胞系の倍加時間を変えることを可能にする。各プレートには、３細胞系のすべて、一連の標準希釈剤、死滅ウエル（ｋｉｌｌｗｅｌｌ）のすべて、および適切な対照が含まれている。これらのプレートは、実験化合物または抽出物を添加する前に標準条件下で２４時間培養される。

実験薬剤（純粋な化合物）の添加
実験化合物は、望ましい最高テスト濃度である４００倍にてジメチル・スルホキサイド（ＤＭＳＯ）に可溶化され（最高０．２５％の最終ＤＭＳＯ濃度）、冷凍貯蔵される。次いで、化合物は、０．１％の硫酸ゲンタマイシンを用いて完全培地と共に希釈される（１００％ＤＭＳＯ中５μｌのテスト試料が５６５μｌの完全培地に添加される）。次いで、この溶液２０μｌを、５０μｌの細胞懸濁液を含むテストウエル内に添加し、１．００Ｅ−０４Ｍのテスト濃度を得る。

細胞系に対する活性がはっきりと実証されていることを意味している２つの標準薬剤は、各細胞系、即ち、ＮＳＣ１９８９３（５−ＦＵ）およびＮＳＣ１２３１２７（アドリアマイシン）に対してテストする。

終点測定
化合物添加後、プレートは標準条件で４８時間培養し、１０μｌ／ウエルのアラマー・ブルー（ＡｌａｍａｒＢｌｕｅ）を添加し、プレートをさらに４時間培養する。蛍光は、５３０ｎｍの励起波長および５９０ｎｍの発光波長を用いて測定する。

テスト細胞増殖／対照（未処置）細胞増殖（Ｔ／Ｃ）のパーセントの計算：
プレート毎に基づく、対照ウエルに比べたテストウエルの増殖率を計算する。増殖率は、対照ウエルの平均蛍光に対するテストウエルの蛍光の比×１００として表される。Ｔ／Ｃの代表的な結果を表ＶＩＩに示している。

Claims

化学式（Ｉ）の新規なピラゾロピリミジノン類、

これらの誘導体、これらの薬学的に許容できる塩類およびこれらの薬学的に許容できる組成物であって、式中Ａｒ_１およびＡｒ_２は同じであっても異なっていてもよく、独立にアリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル基から選択された置換または非置換の基を表し、Ｒ_１は水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ホルミル、アミノ、ヒドラジン、アルキルアミノ、アリールアミノ、アシルアミノ、スルホニルアミノ、置換（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル、およびアシル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、ヘテロシクリル、−ＮＨＣＨ_２ＣＮ、−ＮＨＣＨ_２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨＯＨ、−ＮＨＣＯＮＨ_２、−ＮＨＣＳＮＨ_２、−ＮＨＣＯＮＨ−アルキル、−ＮＨＣＯＮＨ−アリール、−ＮＨＣＳＮＨ−アルキル、−ＮＨＣＳＮＨ−アリール、−ＮＨＣＯ−ピペラジン、−ＮＨＣＳ−ピペラジン、−ＮＨＣＯ−アリール、−ＮＨＣＯ−ヘテロアリールを表し、Ｒ_２は水素、ヒドロキシ、ニトロ、ニトロソ、アルキル、アジド、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、ハロゲン、ホルミルを表すかまたはハロアルキル、アルコキシ、アリールオキシ、アラルキル、アラルコキシ、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、アシル、アシルオキシ、シクロアルキル、アミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アシルアミノ、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アルキルスルフィニル、アリールスルフィニル、アルキルチオ、アリールチオ、アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、アルコキシアルキル、スルファモイル、カルボン酸およびその誘導体から選択された置換または非置換の基を表す新規なピラゾロピリミジノン類。
Ａｒ_１およびＡｒ_２により表された基は、フェニルまたはナフチルなどのアリール基であって、置換されてもよい前記アリール基と、ピリジル、チエニル、フリル、ピロリル、オキサゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、テトラゾリル、ピリミジニル、ピラジン、ピペラジン、ベンゾピラニル、ベンゾフラニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾピロリル、ベンズオキサゾリル、ベンゾチアジアゾリル、などの単環系または縮合環系とすればよいヘテロアリール基であって、置換されてよい前記ヘテロアリール基と、ピロリジニル、チアゾリジニル、オキサゾリジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、ピペリジニル、ピペラジニル、などのヘテロシクリル基であって、置換されてよい前記ヘテロシクリル基とから選択される請求項１に記載の新規なピラゾロピリミジノン類。
１）３−アミノ−５−（４−メチルフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
２）３−アミノ−５−（３，４−ジメチルフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３）３−アミノ−５−（４−フルオロフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
４）３−アミノ−５−［（４−メチルチオ）フェニル］−６−（４−フルオロフェニル）−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
５）３−アミノ−５−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
６）３−アミノ−５−（４−イソプロピルフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
７）３−アミノ−５−［（４−メチルチオ）フェニル］−６−（４−クロロフェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
８）３−アミノ−５−（４−クロロフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
９）３−アミノ−５−（４−エチルフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
１０）３−アミノ−５−［（４−メチルチオ）フェニル］−６−フェニル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
１１）３−アミノ−５−（４−フルオロフェニル）−６−フェニル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
１２）３−アミノ−５−［（４−メチルチオ）フェニル］−６−（４−（メチルフェニル）−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
１３）３−アミノ−５−（４−メチルフェニル）−６−［４−（メチルスルホニル）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
１４）３−アミノ−５−（４−エトキシフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
１５）３−アミノ−５−（４−メチルフェニル）−６−フェニル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
１６）３−アミノ−５−［（４−メチルチオ）フェニル］−６−（４−トリフルオロメチルフェニル）−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
１７）４［３−アミノ−５−（４−メチルフェニル）−４−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］ベンゼンスルホンアミド、
１８）３−アミノ−５−（４−ブロモフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
１９）３−アミノ−５−（３，４−ジメチルフェニル）−１−メチル−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
２０）３−アミノ−５−（４−エトキシフェニル）−１−メチル−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
２１）３−アミノ−５−（４−イソプロピルフェニル）−１−メチル−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
２２）３−アミノ−５−（２，４−ジメチルフェニル）−１−メチル−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
２３）３−アミノ−５−（４−クロロフェニル）−１−メチル−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
２４）３−アミノ−５−（４−フルオロフェニル）−１−メチル−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
２５）３−アミノ−５−（４−メトキシフェニル）−１−メチル−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
２６）３−アミノ−５−（４−メトキシフェニル）−１−メチル−６−ピリジン−４−イル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
２７）３−アミノ−５−（４−エトキシフェニル）−１−メチル−６−ピリジン−３−イル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
２８）３−アミノ−５−（４−メトキシフェニル）−１−メチル−６−ピリジン−３−イル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
２９）３−アミノ−５−（４−ブロモフェニル）−１−メチル−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３０）３−アミノ−６−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−５−（４−メトキシフェニル）−１−メチル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３１）３−アミノ−５−（２，４−ジメチルフェニル）−１−（２−ヒドロキシエチル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３２）３−アミノ−１−（２−ヒドロキシエチル）−５−（４−メトキシフェニル）−６−ピリジン−３−イル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３３）３−アミノ−６−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−１−メチル−５−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３４）Ｎ−［５−（３，４−ジメチルフェニル）−４−オキソ−６［−４−（メチルチオ）フェニル］−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−イル］アセトアミド、
３５）１−アセチル−３−アミノ−５−（３，４−ジメチルフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３６）３−アミノ−５−（４−メトキシフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３７）Ｎ−（４−オキソ−５−（２，４−ジメチルフェニル）−１−メチル−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−イル）−４−（トリフルオロメチル）ベンズアミド、
３８）Ｎ−｛５−（２，４−ジメチルフェニル）−１−メチル−６［−４−（メチルチオ）フェニル］−４−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−イル｝アセトアミド、
３９）２，２，２−トリフルオロ−Ｎ−｛５−（２，４−ジメチルフェニル）−１−メチル−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−４−オキソ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−イル｝アセトアミド、
４０）２，２，２−トリフルオロ−Ｎ−［５−（４−メトキシフェニル）−１−メチル−４−オキソ−６−ピリジン−３−イル−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−イル］アセトアミド、
４１）Ｎ−（４−オキソ−５−（４−クロロフェニル）−１−メチル−６−［（４−メチルチオ）フェニル］−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−イル）−３−フルオロベンズアミド、
４２）３−アミノ−５−（４−メトキシフェニル）−６−［４−メチルフェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
４３）３−アミノ−５−（４−メトキシフェニル）−６−［４−メトキシフェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
４４）３−アミノ−５−（４−メトキシフェニル）−６−［４−クロロフェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
４５）３−アミノ−５−（４−クロロフェニル）−６−［４−クロロフェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
４６）３−アミノ−５−（４−クロロフェニル）−６−［４−メトキシフェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
４７）３−アミノ−５−（４−クロロフェニル）−６−［４−メチルフェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
４８）３−アミノ−５−（４−フルオロフェニル）−６−［４−クロロフェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
４９）３−アミノ−５−（４−フルオロフェニル）−６−［４−メトキシフェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
５０）３−アミノ−５−（４−フルオロフェニル）−６−［４−メチルフェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
５１）３−アミノ−５−（４−トリフルオロメチルフェニル）−６−［４−クロロフェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
５２）３−アミノ−５−（４−トリフルオロメチルフェニル）−６−［４−メトキシフェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
５３）３−アミノ−５−（４−トリフルオロメチルフェニル）−６−［４−メチルフェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
５４）３−アミノ−５−（４−トリフルオロメチルフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
５５）３−アミノ−５−（４−メチルスルホニル）−６−［４−クロロフェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
５６）３−アミノ−５−（４−メチルスルホニル）−６−［４−メトキシフェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
５７）３−アミノ−５−（４−メチルスルホニル）−６−［４−メチルフェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
５８）３−アミノ−５−（４−メチルスルホニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
５９）３−アミノ−５−（４−（メチルチオ）フェニル）−６−ピリジン−４−イル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
６０）３−アミノ−５−（４−エトキシフェニル）−１−メチル−６−ピリジン−４−イル−１，５−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン、
６１）１−｛１−メチル−５−［４−（メチルチオ）フェニル］−４−オキソ−６−フェニル−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−イル｝尿素、および
６２）１−｛５−［４−（メチルチオ）フェニル］−４−オキソ−６−フェニル−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−イル｝尿素、
から選択された請求項１に記載の新規なピラゾロピリミジノン類。
請求項１で規定された化学式（Ｉ）の化合物、

および薬学的に許容できる担体、希釈剤、賦形剤または溶媒和物を含む薬剤組成物。
錠剤、カプセル、粉末、シロップ、溶液、エアロゾルまたは懸濁液の形態をした請求項４に記載の薬剤組成物。
炎症、関節リウマチ、骨粗しょう症、ブドウ膜炎、急性および慢性の骨髄性白血病、アテローム性動脈硬化症、癌、膵臓β細胞破壊、変形性関節炎、リウマチ性脊椎炎、通風性関節炎、炎症性大腸炎、乾癬、成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）およびぜんそく、の予防または処置への請求項１に記載の化学式（Ｉ）の化合物の使用。
ＴＮＦ−α、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８およびＩＬ−１２から選択されたサイトカインの産生を阻害するための請求項６に記載の化合物の使用。