JP2008540560A - スチルベン誘導体並びにがん細胞増殖及び微生物増殖の阻害方法 - Google Patents

Abstract

本発明は、抗新生物活性及び／又は抗微生物活性を有するスチルベン由来化合物を提供する。本発明の好ましい化合物には、式（Ｉ）の化合物（式中：ＲはＤａｐ、Ｄａｐ−Ｄｉｌ、Ｄａｐ−Ｄｉｌ−Ｖａｌ、又はＤａｐ−Ｄｉｌ−Ｖａｌ−Ｄｏｖであり；Ｒ_１はＨ、ＯＨ、又はＰＯ_３Ｎａ_２であり；そしてＲ_２及びＲ_３は連帯して−ＣＨ_２−であるか、又はそれぞれ独立してＨ、ＯＨ、ＣＨ_３、若しくはＰＯ_３Ｎａ_２である）；及び式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）の化合物、並びにそれらの塩（式中：Ｒ及びＲ_１は独立してＨ又はＰ（Ｏ）（ＯＨ）である）が含まれる。更に、本発明は、がん細胞増殖及び／又は微生物増殖の阻害方法、並びにそれとともに用いる組成物にかかるものである。

Description

関連出願の相互参照
本願は、２００５年５月１２日出願の米国仮特許出願第６０／６８０，２８９号に基づいて優先権を主張するものであり、その開示は本明細書にその全体が援用される。

連邦支援研究の明示
本発明への財政援助は国立衛生研究所の助成番号５Ｒ０１ ＣＡ０９０４４１を通して米国政府によって提供されたものである。したがって、米国政府は本発明に対し一定の権利を有することができる。

発明の分野
本発明は、抗新生物活性及び／又は抗微生物活性を有する、スチルベン由来化合物にかかるものである。更に、本発明は、それに苦しむ宿主において、スチルベン由来化合物を苦しむ宿主へ投与することにより、がん細胞増殖及び／又は微生物増殖を阻害する方法にかかるものである。

発明の背景
本発明者らは、近年、コンブレタスタチンＡ−４リン酸塩プロドラッグ（ＣＡ４Ｐ）（２ｈ）（参考文献５〜１０）によって生ずる強力ながん血管標的化の顕著な成功（参考文献２〜４）に力を得て、コンブレタスタチンＡ−２（参考文献１）（２ｃ）の３’−アミノ誘導体（１ａ〜ｂ、１ｄ〜ｊ）の合成を完了した（以下の構造を参照されたい）。その後、チロシンスチルベンアミド（１ｉ）の２つのリン酸誘導体（３ａ、ｂ）の合成と初期抗がん評価に着手した。コンブレタスタチンＡシリーズとＢシリーズ（参考文献１、１１〜１３）における３’−フェノール位へのリン酸基の結合については詳細に調査されている。本研究では、リン酸基の結合（３ａ）に関し、チロシンアミド（１ｉ）の４”−フェノール基を用いることを選択するとともに、チロシンアミド（１ｉ）をアミン基（参考文献１４）及びフェノール基でリン酸化することによってジホスホリル誘導体（３ｂ）を得ることにした。

本発明の同等に重要な目的は、３’−アミノ基（１ｂ）へ結合するためにドラスタチン１０（４ａ）のテトラペプチドセグメントを利用することを含んでいた。インド洋アメフラシ タツナミガイから単離されたドラスタチン１０（Ｄ−１０、４ａ）は（参考文献１５〜１７）、優れた抗新生物剤として（参考文献１９〜２２）、前臨床（参考文献１８）及び臨床開発を通して進歩し続けている。ドラスタチン１０（４ａ）及び各種合成誘導体はクリプトコッカス・ネオフォルマンスに対する特異的抗真菌活性も有する（参考文献２３〜２６）。先のＳＡＲ研究により、Ｄ−１０（４ａ）が、ビンカ部位近傍のβ−チューブリンサブユニットへ結合することにより、微小管重合を阻害することが確認されている。更なるＳＡＲ研究により、ｄｅｓ−Ｄｏｅテトラペプチドユニット（４ｂ、Ｄｏｖ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ）が強力な抗がん活性に必要であることが示されている（参考文献２５〜２６）。本発明者らは、本明細書において、Ｄｏｖ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ（４ｂ）を含むスチルベン誘導体の合成の成功について報告する。

参考文献及び
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発明の概要
本発明は、癌性細胞株に対する抗新生物活性及び／又は抗微生物活性を有する特定の新規スチルベン誘導体にかかるものである。本発明は、式：

を有する化合物又はその塩を提供するものであり、式中：ＲはＤａｐ、Ｄａｐ−Ｄｉｌ、Ｄａｐ−Ｄｉｌ−Ｖａｌ、又はＤａｐ−Ｄｉｌ−Ｖａｌ−Ｄｏｖであり；Ｒ_１はＨ、ＯＨ、又はＰＯ_３Ｎａ_２であり；そしてＲ_２及びＲ_３は連帯して−ＣＨ_２−であるか、又はそれぞれ独立してＨ、ＯＨ、ＣＨ_３、又はＰＯ_３Ｎａ_２である。好ましい態様では、ＲはＤａｐ又はＤａｐ−Ｄｉｌ−Ｖａｌ−Ｄｏｖであり、Ｒ_１はＨである。

他の態様では、本発明は、式：

の化合物及びその塩に関するものであり、式中：Ｒ及びＲ_１は独立してＨ又はＰ（Ｏ）（ＯＨ）である。この態様では、ＲはＰ（Ｏ）（ＯＨ）であることが好ましい。
更に他の態様では、本発明は、以下の化合物を提供する。

更に、本発明は、がん細胞増殖及び／又は微生物増殖の阻害方法にかかるものである。好ましい態様では、本方法は、少なくとも１つの本明細書に開示のスチルベン誘導体をがん又は微生物感染に苦しむ宿主へ投与することを含む。本化合物は、具体的には、宿主におけるがん細胞増殖又は微生物増殖の阻害に十分な治療的有効量である。

本発明は医薬組成物も包含する。本発明の組成物は、少なくとも１つの本明細書に開示のスチルベン誘導体化合物及び医薬的に許容可能な担体を含む。
したがって、本発明の第１の目的は、抗新生物活性が改善されたスチルベン由来化合物を提供することである。好ましい目的は、チューブリンのビンカドメイン及びコルヒチン部位への結合能を有するスチルベン由来化合物を提供することである。本発明の更なる目的は、抗微生物活性、好ましくは広範囲の抗微生物活性を有するスチルベン由来化合物を提供することである。

発明の詳細な説明
上記のように、本発明は、新規スチルベン誘導体にかかるものである。新規スチルベン誘導体は抗新生物活性及び／又は抗微生物活性を有することが好ましい。具体的には、本発明の１つの態様では、スチルベン誘導体は、式：

を有するものであり、式中：ＲはＤａｐ、Ｄａｐ−Ｄｉｌ、Ｄａｐ−Ｄｉｌ−Ｖａｌ、又はＤａｐ−Ｄｉｌ−Ｖａｌ−Ｄｏｖであり；Ｒ_１はＨ、ＯＨ、又はＰＯ_３Ｎａ_２であり；そしてＲ_２及びＲ_３は連帯して−ＣＨ_２−であるか、又はそれぞれ独立してＨ、ＯＨ、ＣＨ_３、又はＰＯ_３Ｎａ_２である。好ましい態様では、ＲはＤａｐであり、Ｒ_１はＨである；ＲはＤａｐ−Ｄｉｌ−Ｖａｌ−Ｄｏｖであり、Ｒ_１はＨである；そしてＲはＤａｐ又はＤａｐ−Ｄｉｌ−Ｖａｌ−Ｄｏｖであり、Ｒ_２及びＲ_３はＣＨ_３である。

本明細書において、本発明の化合物への言及は、特に示されていない限り、その塩への言及を含むことが理解される。本明細書において「塩」という用語は、無機及び／又は有機の酸及び塩基とともに形成される酸性及び／又は塩基性の塩を意味する。本発明の化合物の塩は、例えば塩が沈殿するような媒体又は水性媒体中で、化合物をある量、例えば等量の酸又は塩基と反応させ、凍結乾燥させることによって形成することができる。塩の形成は、十分に、当該技術分野に熟練した者の能力の範囲内である。本発明の化合物の具体的な塩の例を本明細書に提供するが、それらに限定されることを意図するものではない。

本発明の好ましい化合物は、がん細胞増殖及び／又は寄生微生物増殖を阻害する。好ましい態様では、化合物は２重標的活性を有し、例えば本化合物は、コルヒチンとチューブリンのビンカ領域とを標的とする。本化合物は、白血病、膵臓癌、乳癌、ＣＮＳの癌、肺ＮＳＣ癌、大腸癌、又は前立腺癌から成る群より選択されるがん細胞を阻害することが好ましい。

他の態様では、宿主においてがん細胞の増殖を阻害するための方法が提供される。本方法は、少なくとも１つの本明細書に開示のスチルベン誘導体をがんに苦しむ宿主へ投与することを含む。本化合物は医薬組成物で投与されることが好ましい。好ましい医薬組成物を以下に詳細に考察する。投与される化合物は、典型的には宿主においてがん細胞増殖を阻害するのに十分な治療的有効量である。宿主は動物であることが好ましく、より好ましくは哺乳動物であり、最も好ましくはヒトである。

いくつかの態様では、本方法は、有効量の本発明の化合物、及び少なくとも１つの追加の治療剤をそれを必要とする宿主へ投与することを含む。１つの態様では、追加の治療剤は、限定されるものではないが、メトトレキサート、タキソール、メルカプトプリン、チオグアニン、ヒドロキシウレア、シタラビン、シクロホスファミド、イホスファミド、ニトロソウレア、シスプラチン、カルボプラチン、マイトマイシン、ダカルバジン、プロカルバジン、エトポシド、ｃａｍｐａｔｈｅｃｉｎｓ、ブレオマイシン、ドキソルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、プリカマイシン、ミトキサントロン、アスパラギナーゼ、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、パクリタキセル、ドセタキセル、及びそれらの混合物を含めた化学療法剤である。

他の態様では、本発明は、好ましくは上記のような宿主において、微生物増殖を阻害する方法にかかるものである。本方法は、少なくとも１つの本明細書に開示のスチルベン誘導体を宿主において微生物増殖を阻害するのに十分な治療的有効量で宿主へ投与することを含む。本発明の化合物は、真菌感染や細菌感染のような微生物感染、又はそのような感染の組み合わせを治療するために、単独で投与することも、１以上の追加の抗微生物剤と組み合わせて投与することもできる。

したがって、１つの特定の態様では、本発明は、真菌感染がフルコナゾールなどのアゾール抗真菌剤に対して耐性であるか、又は感受性である微生物感染を治療するための方法である。本発明の方法は、第２の抗微生物剤との共投与を更に含むことができ、追加の抗真菌剤及び／又は抗細菌剤を投与する。

真菌感染には、皮膚、皮下、又は全身性であり得る真菌感染（真菌症）が含まれる。表在性真菌症には、頭部白癬、体部白癬、足白癬、爪甲真菌症、爪囲真菌症、癜風、口腔カンジダ症、並びに膣、気道、胆管、食道、及び尿道のカンジダ症などの他のカンジダ症が含まれる。全身性真菌症には、全身性及び皮膚粘膜性のカンジダ症、クリプトコッカス症、アスペルギルス症、ムコール菌症（藻菌症）、パラコクシジオイデス症、北アメリカ分芽菌症、ヒストプラズマ症、コクシジオイデス症、並びにスポロトリクム症が含まれる。真菌感染には、特にＡＩＤＳを伴う者のような免疫不全の患者における、日和見真菌感染が含まれる。真菌感染は髄膜炎及び肺疾患又は気道疾患の原因となる。

病原体には、皮膚糸状菌（例えば犬小胞子菌及び他の小胞子菌種；並びに紅色白癬菌及び毛瘡白癬菌などの白癬菌種）、酵母（例えばカンジダ・アルビカンス、カンジダ・トロピカリス、又は他のカンジダ種）、トルロプシス・グラブラータ、エピデルモフィトン・フロコスム（Epidermophyton floccosum）、癜風菌（ピチロスポルム・オルビクラーレ又はピチロスポルム・オバーレ）、クリプトコッカス・ネオフォルマンス、アスペルギルス・フミガーツス、及び他のアスペルギルス種、接合菌類（例えばクモノスカビ、ケカビ）、パラコシジオイド・ブラシリエンシス、ブラストミセス・デルマチチジス、ヒストプラズマ・カプスラーツム、コクシジオイデス・イミティス、並びにスポロトリクス・シェンキーが含まれる。真菌感染には、クラドスポリウム・ククメリヌム、エピデルモフィトン・フロコスム、及びＭｉｃｒｏｓｐｅｒｍｕｍ ｙｐｓｅｕｍが含まれる。最新の抗真菌薬の例としては、ニスタチン、クロトリマゾール、アンフォテリシンＢ、ケトコナゾール、フルコナゾール、及びイトラコナゾールが挙げられる。

細菌感染は、菌血症、肺炎、髄膜炎、骨髄炎、心内膜炎、静脈洞炎、関節炎、尿路感染症、破傷風、壊疽、大腸炎、急性胃腸炎、気管支炎、及びさまざまな腫瘍などの疾患、院内感染、並びに日和見感染を生ずる。病原菌には、黄色ブドウ球菌、化膿連鎖球菌（Ａ群）、連鎖球菌種（ビリダンス群）、連鎖球菌（Ｂ群）、ストレプトコッカス・ボービス、連鎖球菌（嫌気性種）、肺炎連鎖球菌、及び腸球菌種などのグラム陽性球菌；淋菌、髄膜炎菌、及びブランハメラ・カタラーリスなどのグラム陰性球菌；炭疽菌、ジフテリア菌及び類ジフテリア菌であるコリネバクテリウム種（好気性及び嫌気性）、リステリア・モノサイトゲネス、破傷風菌、クロストリジウム・ディフィシルなどのグラム陽性桿菌、大腸菌、エンテロバクター種、プロテウス・ミラビリス、並びに他の種、緑膿菌、肺炎桿菌、サルモネラ菌、赤痢菌、セラチア菌、及びカンピロバクター・ジェジュニが含まれる。

用いる化合物は、ナイセリア属、腸球菌属、連鎖球菌属、又はクリプトコッカス属由来の微生物を阻害することが好ましく、淋菌；大便連鎖球菌；肺炎連鎖球菌；及びクリプトコッカス・ネオフォルマンスから成る群より選択される微生物を阻害することがより好ましい。

医薬組成物及び剤形
医薬組成物は、単一剤形の調製に用いることができる。必然的に、本発明の医薬組成物及び剤形は、本明細書に開示の活性成分を含む。「活性成分」という表記は、本明細書に記載の本発明の化合物又はその塩を意味する。本発明の医薬組成物及び剤形は、医薬的に許容可能な担体を更に含むことができる。

１つの態様では、「医薬的に許容可能な」という用語は、動物、より具体的にはヒトにおける使用に関して、連邦政府又は州政府の監督官庁によって認証されているか、米国薬局方又は他の一般に認識されている薬局方に記載されていることを意味する。「担体」という用語は、希釈剤、アジュバント、賦形剤、又はビヒクルを表し、それとともに活性成分を投与する。そのような医薬担体は、ピーナッツ油、ダイズ油、ミネラルオイル、ゴマ油などのような、石油、動物油、植物油、又は合成由来のものを含めた水及びオイルなどの液体であり得る。医薬担体は、生理食塩水、アカシアゴム、ゼラチン、デンプンペースト、タルク、ケラチン、コロイド状シリカ、尿素などであり得る。更に、他の賦形剤を用いることができる。

本発明の単位剤形は、患者への経口投与、粘膜投与（例えば鼻腔、舌下、膣内、口腔、又は直腸）、非経口（例えば皮下、静脈内、ボーラス注入、筋肉内、又は動脈内）、又は経皮投与に好適である。剤形の例としては、限定されるものではないが、錠剤；カプレット；軟ゼラチンカプセルのようなカプセル；カシェ（cachet）；トローチ；ロゼンジ；分散剤；坐薬；軟膏；パップ剤（湿布）；ペースト；粉末；包帯剤；クリーム；こう薬；液剤；パッチ；エアロゾル（例えば鼻腔用スプレー又は吸入器）；ジェル；懸濁液（例えば水性又は非水性の液体懸濁液、水中油型乳剤、又は油中水型乳剤）、液剤、及びエリキシル剤を含めた患者への経口投与又は粘膜投与に好適な液体剤形；患者への非経口投与に好適な液体剤形；並びに患者への非経口投与に好適な液体剤形を提供するために再構成され得る滅菌固体（例えば結晶性固体又は無定形固体）が挙げられる。

本発明の剤形の組成、形状、及び種類は、具体的にはその用途に応じて変更されるであろう。例えば、腫瘍性疾患又は細菌感染の急性期治療に用いる剤形は、それが含む１以上の活性成分を、同一疾患の長期治療に用いられる剤形よりも多量に含有することができる。同様に、非経口剤形は、それが含む１以上の活性成分を、同一疾患を治療するために用いられる経口剤形よりも少量含有することができる。本発明に包含される特定剤形が互いに変更されるこれら及び他の方法は、当該技術分野に熟練した者には容易に明らかであろう。例えばレミントンの薬学、第１８版、Ｍａｃｋ出版社、イーストン、ペンシルバニア州（１９９０）を参照されたい。

典型的な医薬組成物及び剤形は、１以上の賦形剤を含む。好適な賦形剤は、製薬分野に熟練した者には周知であり、好適な賦形剤の非限定的な例を本明細書に提供する。特定の賦形剤が医薬組成物又は剤形への取り込みに好適であるかどうかは、限定されるものではないが、剤形を患者に投与する方法を含めた当該技術分野において周知のさまざまな要因に依存する。例えば、錠剤のような経口剤形は、非経口剤形における使用に好適でない賦形剤を含有することができる。特定賦形剤の好適性は剤形中の特定活性成分にも依存し得る。例えば、いくつかの活性成分の分解が、乳糖などのいくつかの賦形剤によって、又は水に曝露されたとき加速され得る。

本発明は、活性成分の分解速度を低下させる１以上の化合物を含む医薬組成物及び剤形を更に包含する。本明細書において「安定化剤」と称するそのような化合物には、限定されるものではないが、アスコルビン酸、ｐＨ緩衝剤、又は塩緩衝液などの抗酸化剤が含まれる。

本明細書において、「治療的有効量」とは、腫瘍若しくは悪性血液疾患の形成を阻害し（部分的に又は全体的に）、又はその更なる進行を軽減させるか、あるいは目的微生物の増殖を阻害するために十分な量である。用量は、処置の特定の条件又は方法に対して公知の方法を用いて経験的に決定され、用いる特定化合物の生物活性、投与手段、宿主の年齢、健康状態、及び体重；症状の性質及び程度；治療頻度；他の療法の投与及び所望の効果などの事実に依存するであろう。以下に各種の可能な用量及び投与方法を記載するが、以下は説明することのみを意図するものであることが理解される。実際の用量及び投与又は送達方法は、当該技術分野に熟練した者によって決定することができる。

本発明の典型的な具体的剤形は、本発明の化合物又は化合物の混合物を活性成分として、約１ｍｇ〜約２０００ｍｇ、より好ましくは約２５ｍｇ〜約１０００ｍｇ、更により好ましくは約５０ｍｇ〜約７５０ｍｇ、最も好ましくは約１００ｍｇ〜約５００ｍｇの量で含む。

具体的な目的のために投与される活性成分の投与量レベルは：宿主体重に対し、静脈内で０．０１〜約２０ｍｇ／ｋｇ；筋肉内で０．１〜約５０ｍｇ／ｋｇ；経口で０．０５〜約１００ｍｇ／ｋｇ；鼻腔内点滴で０．５〜約１００ｍｇ／ｋｇ；エアロゾルで０．５〜約１００ｍｇ／ｋｇであり得る。

濃度で表現すると、本発明の組成物中に活性成分は、皮膚、鼻腔内、咽頭、気管支、膣内、直腸内、又は眼内の局所用途で組成物の約０．０１〜約５０％ｗ／ｗの濃度、好ましくは約１〜約２０％ｗ／ｗの濃度；非経口用途で組成物の約０．０５〜約５０％ｗ／ｖの濃度、好ましくは約５〜約２０％ｗ／ｖの濃度で存在し得る。

抗新生物剤又は抗微生物剤として用いるべき活性成分は、それ自体が当該技術分野で利用可能な製薬材料の利用により、そのような単位剤形で容易に調製することができ、また、確立された手順によって調製することができる。以下の調製は本発明の剤形の調製を例証するものであり、それらに限定されるものではない。

経口剤形
経口投与に好適な本発明の医薬組成物は、限定されるものではないが、錠剤（例えばチュアブル錠）、カプレット、カプセル、及び液剤（例えば香りのするシロップ）などの別個の剤形として提供することができる。そのような剤形は所定量の活性成分を含有することができ、当該技術分野に熟練した者に周知の製薬方法によって調製することができる。一般に、レミントンの薬学、第１８版、Ｍａｃｋ出版社、イーストン、ペンシルバニア州（１９９０）を参照されたい。

本発明の典型的な経口剤形は、慣用の医薬配合技術にしたがい、緊密な混合剤中で活性成分を少なくとも１つの賦形剤と組み合わせることによって調製する。賦形剤は、投与に望ましい製剤の形態に応じて広範な形態を採ることができる。例えば経口用の溶液又はエアロゾル剤形における使用に好適な賦形剤には、限定されるものではないが、水、グリコール、オイル、アルコール、着香料、保存料、及び着色料が含まれる。固体経口剤形（例えば粉末、錠剤、カプセル、及びカプレット）における使用に好適な賦形剤の例としては、限定されるものではないが、デンプン、糖、微晶性セルロース、希釈剤、造粒剤、潤滑剤、結合剤、及び崩壊剤が挙げられる。

投与の容易性により、錠剤及びカプセルが最も有益な経口単位剤形であり、この場合、固体賦形剤が使用される。所望により、錠剤は標準の水性又は非水性技術によりコーティングすることができる。そのような剤形は如何なる製薬方法によっても調製することができる。一般に、医薬組成物及び剤形は、活性成分を液体担体、微粉固体担体、又は両方と均一且つ緊密に混合し、必要ならば産物を所望の形態に形成することによって調製する。

例えば、錠剤は圧縮又は成形によって調製することができる。圧縮錠剤は、好適な機械で活性成分を粉末や顆粒などのフリーフロー型に圧縮し、場合により賦形剤と混合することによって調製することができる。成形錠剤は、不活性液体希釈剤で湿らせた粉末化化合物の混合物を好適な機械で成形することによって作製することができる。

本発明の経口剤形に使用できる賦形剤の例としては、限定されるものではないが、結合剤、充填剤、崩壊剤、及び潤滑剤が挙げられる。医薬組成物及び剤形における使用に好適な結合剤には、限定されるものではないが、コーンスターチ、ジャガイモデンプン、又は他のデンプン、ゼラチン、アカシアなどの天然ゴム又は合成のゴム、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸、他のアルギン酸塩、トラガカント粉末、グァーガム、セルロース及びその誘導体（例えばエチルセルロース、酢酸セルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム）、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、プレゼラチン化デンプン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（例えばＮｏ．２２０８、Ｎｏ．２９０６、Ｎｏ．２９１０）、微晶性セルロース、及びそれらの混合物が含まれる。

微晶性セルロースの好適な形態には、限定されるものではないが、ＡＶＩＣＥＬ−ＰＨ−１０１、ＡＶＩＣＥＬ−ＰＨ−１０３、ＡＶＩＣＥＬ ＲＣ−５８１、ＡＶＩＣＥＬ−ＰＨ−１０５（ＦＭＣ社、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｖｉｓｃｏｓｅ Ｄｉｖｉｓｉｏｎ、Ａｖｉｃｅｌ Ｓａｌｅｓ、マーカスフック、ペンシルバニア州から市販されている）として販売される材料、又はそれらの混合物が含まれる。特定の結合剤は、ＡＶＩＣＥＬ ＲＣ−５８１として販売される微晶性セルロースとカルボキシメチルセルロースナトリウムとの混合物である。好適な無水若しくは低水分の賦形剤又は添加剤には、ＡＶＩＣＥＬ−ＰＨ−１０３．ＴＭ．及びＳｔａｒｃｈ １５００ＬＭが含まれる。

本明細書に開示の医薬組成物及び剤形における使用に好適な充填剤の例としては、限定されるものではないが、タルク、炭酸カルシウム（例えば顆粒又は粉末）、微晶性セルロース、セルロース粉末、デキストラン酸塩（dextrate）、カオリン、マンニトール、ケイ酸、ソルビトール、デンプン、プレゼラチン化デンプン、及びそれらの混合物が挙げられる。本発明の医薬組成物中の結合剤又は充填剤は、典型的には医薬組成物又は剤形の約５０〜約９９重量％で存在する。

崩壊剤は、水性環境に曝露させると分解する錠剤を提供するために本発明の組成物中に使用する。過剰量の崩壊剤を含有する錠剤は保存中に分解し得るが、過少量含有するものは所望の速度で又は所望の条件下で分解し得ない。したがって、活性成分の放出を有害に変更するような過剰量でも過少量でもない十分量の崩壊剤を用いて、本発明の固体経口剤形を形成する必要がある。用いる崩壊剤の量は製剤の種類に基づいて変化し、当該技術分野において通常の技術を有する者に容易に認識されるものである。典型的な医薬組成物は、約０．５〜約１５重量％、好ましくは約１〜約５重量％の崩壊剤を含む。

本発明の医薬組成物及び剤形に使用できる崩壊剤には、限定されるものではないが、寒天、アルギン酸、炭酸カルシウム、微晶性セルロース、クロスカルメロースナトリウム、クロスポピドン、ポラクリリンカリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、ジャガイモ又はタピオカデンプン、他のデンプン、プレゼラチン化デンプン、他のデンプン、粘土、他のアルギン、他のセルロース、ゴム、及びそれらの混合物が含まれる。

本発明の医薬組成物及び剤形に使用できる潤滑剤には、限定されるものではないが、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、ミネラルオイル、ライトミネラルオイル、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、ポリエチレングリコール、他のグリコール、ステアリン酸、ラウリル硫酸ナトリウム、タルク、硬化植物油（例えばピーナッツ油、綿実油、ヒマワリ油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油、及びダイズ油）、ステアリン酸亜鉛、オレイン酸エチル、ラウリン酸エチル、アガー、及びそれらの混合物が含まれる。更なる潤滑剤には、例えば、ｓｙｌｏｉｄシリカゲル（ＡＥＲＯＳＩＬ ２００、Ｗ．Ｒ．Ｇｒａｃｅ社製、ボルティモア、メリーランド州）、合成シリカの凝固エアロゾル（Ｄｅｇｕｓｓａ社販売、プレーノー、テキサス州）、ＣＡＢ−Ｏ−ＳＩＬ（発熱性の二酸化ケイ素製品、Ｃａｂｏｔ社販売、ボストン、マサチューセッツ州）、及びそれらの混合物が含まれる。仮に使用する場合、潤滑剤は、典型的には、それらが組み込まれる医薬組成物又は剤形の約１重量％未満の量で用いられる。

本発明の好ましい固体経口剤形は、活性成分、無水乳糖、微晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、ステアリン酸、コロイド状無水シリカ、及びゼラチンを含む。
遅延放出剤形
本発明の活性成分は、当該技術分野において通常の技術を有する者に周知の制御放出手段によって又は送達装置によって投与することができる。例として、限定されるものではないが、それぞれ本明細書に援用される米国特許第３，８４５，７７０号；第３，９１６，８９９号；第３，５３６，８０９号；第３，５９８，１２３号；及び第４，００８，７１９号、第５，６７４，５３３号、第５，０５９，５９５号、第５，５９１，７６７号、第５，１２０，５４８号、第５，０７３，５４３号、第５，６３９，４７６号、第５，３５４，５５６号、及び第５，７３３，５６６号に記載のものが挙げられる。そのような剤形は、１以上の活性成分の徐放性又は制御放出を提供するために用いることができ、例えば、ヒドロプロピルメチルセルロース、他のポリマーマトリックス、ゲル、透過性膜、浸透圧システム、多層コーティング、マイクロ粒子、リポソーム、マイクロスフェア、又はそれらの組み合わせを用いて、さまざまな割合で所望の放出プロファイルを提供する。本明細書に記載のものを含めた、当該技術分野において通常の技術を有する者に公知の好適な制御放出製剤は、本発明の活性成分を用いた使用のために容易に選択することができる。このように、本発明は、限定されるものではないが、制御放出に適応した錠剤、カプセル、ジェルキャップ、及びカプレットなどの、経口投与に好適な単位剤形を包含する。

全ての制御放出医薬製品は、非制御製品によって達成されるよりも改善された薬物療法という共通のゴールを有する。理想的には、最適にデザインされた制御放出製剤の医療における使用は、最短時間で病態を治療又は制御するために使用される薬物物質が最小量であることを特徴とする。制御放出製剤の利点には、長時間の薬物活性、投薬頻度の減少、及び患者の薬剤服用順守の向上が含まれる。更に、制御放出製剤は、作用又は血中薬物レベルのような他の特徴の開始時間に影響を及ぼすために使用することができ、したがって、副作用（例えば有害作用）の発生に影響を及ぼすことができる。

多くの制御放出製剤は、所望の治療効果を早期に生ずる所定量の薬物（活性成分）を最初に放出し、この治療効果又は予防効果のレベルを長期間にわたって維持するために他の量の薬物を徐々にそして継続的に放出するようにデザインされている。体内で薬物のこの一定レベルを維持するには、薬物は、代謝されて体内から排泄される薬物の量に置き代わる速度で剤形から放出される必要がある。活性成分の制御放出は、限定されるものではないが、ｐＨ、温度、酵素、水、若しくは他の生理条件、又は化合物を含めたさまざまな条件によって刺激することができる。

非経口剤形
非経口剤形は、限定されるものではないが、皮下、静脈内、ボーラス注入、筋肉内、及び動脈内を含めたさまざまな経路で患者に投与することができる。それらの投与は典型的には汚染物質に対する患者の自然防御を回避するため、非経口剤形は、滅菌されているか又は患者へ投与する前に滅菌可能であることが好ましい。非経口剤形の例としては、限定されるものではないが、直ちに注射できる溶液、注射用に医薬的に許容可能なビヒクルにすぐに溶解又は懸濁できる乾燥産物、直ちに注射できる懸濁液、及び乳剤が挙げられる。

本発明の非経口剤形を提供するために使用できる好適なビヒクルは、当該技術分野に熟練した者に周知である。例として、限定されるものではないが：注射用水ＵＳＰ；限定されるものではないが塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、ブドウ糖注射液、ブドウ糖及び塩化ナトリウム注射液、並びに乳酸加リンゲル注射液などの水性ビヒクル；限定されるものではないがエチルアルコール、ポリエチレングリコール、及びポリプロピレングリコールなどの水混和性ビヒクル；並びに限定されるものではないがコーン油、綿実油、ピーナッツ油、ゴマ油、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、及び安息香酸ベンジルなどの非水性ビヒクルが挙げられる。

本明細書に開示の１以上の活性成分の溶解性を高める化合物を、本発明の非経口剤形へ組み込むこともできる。
経皮剤形、局所剤形、及び粘膜剤形
本発明の経皮剤形、局所剤形、及び粘膜剤形には、限定されるものではないが、点眼液、スプレー、エアロゾル、クリーム、ローション、軟膏、ゲル、溶液、乳剤、懸濁液、又は当該技術分野に熟練した者に公知の他の形態が含まれる。例えばレミントンの薬学、第１６版及び第１８版、Ｍａｃｋ出版社、イーストン、ペンシルバニア州（１９８０及び１９９０）；並びに医薬剤形序論、第４版、Ｌｅａ＆Ｆｅｂｉｇｅｒ、フィラデルフィア（１９８５）を参照されたい。口腔内の粘膜組織の治療に好適な剤形は、うがい薬として又は経口ゲルとして処方することができる。更に、経皮剤形には、「リザーバー型」又は「マトリックス型」のパッチが含まれ、これらは、所望量の活性成分の浸透を可能にするように皮膚に適用し、特定期間装着することができる。

本発明に包含される経皮剤形、局所剤形、及び粘膜剤形を提供するために使用できる好適な賦形剤（例えば担体及び希釈剤）及び他の材料は、製薬分野に熟練した者に周知であり、所定の医薬組成物又は剤形が適用される特定組織に依存する。その事実を踏まえて、典型的な賦形剤には、限定されるものではないが、水、アセトン、エタノール、エチレングリコール、プロピレングリコール、ブタン−１，３−ジオール、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、ミネラルオイル、及びそれらの混合物が含まれ、非毒性であって医薬的に許容可能なローション、チンキ剤、クリーム、乳剤、ゲル、又は軟膏を形成する。保湿剤又は湿潤剤を必要に応じて医薬組成物及び剤形に適用することもできる。そのような追加成分の例は当該技術分野において周知である。例えばレミントンの薬学、第１６版及び第１８版、Ｍａｃｋ出版社、イーストン、ペンシルバニア州（１９８０及び１９９０）を参照されたい。

処置すべき特定組織に応じて、処置の前、同時に、又はその後、本発明の活性成分とともに追加成分を用いることができる。例えば、活性成分を組織に送達する際の助けとなるように浸透促進剤を用いることができる。好適な浸透促進剤には、限定されるものではないが：アセトン；各種アルコール、例えばエタノール、オレイル、及びテトラヒドロフリル；アルキルスルホキシド、例えばジメチルスルホキシド；ジメチルアセトアミド；ジメチルホルムアミド；ポリエチレングリコール；ピロリドン、例えばポリビニルピロリドン；Ｋｏｌｌｉｄｏｎ ｇｒａｄｅ（ポビドン、ポリビドン）；尿素；並びに各種水溶性又は非水溶性の糖エステル、例えばＴｗｅｅｎ８０（ポリソルベート８０）及びＳｐａｎ６０（モノステアリン酸ソルビタン）が含まれる。

医薬組成物若しくは剤形のｐＨ、又は医薬組成物若しくは剤形を適用する組織のｐＨを調整して、１以上の活性成分の送達を改良することもできる。同様に、溶媒担体の極性、そのイオン強度、又は等張性を調整して送達を改良することができる。ステアリン酸塩などの化合物を医薬組成物又は剤形に加えて、１以上の活性成分の親水性又は親油性を有利に変更し、送達を改良することもできる。これに関し、ステアリン酸塩は、製剤の脂質ビヒクルとして、乳化剤又は界面活性剤として、及び送達促進剤又は浸透促進剤として役立つことができる。活性成分のさまざまな塩を用いて、得られた組成物の特性を更に調整することができる。

本発明を、以下の非限定的な実施例によって説明する。

スチルベン誘導体の合成
チロシンスチルベンアミド１ｉ（参考文献２７）の合成は、コンブレタスタチンシリーズの２つの更なるリン酸塩プロドラッグ３ａ及び３ｂを開発する機会を与えた（以下の化学構造を参照されたい）。

それに応じて、４”−フェノール及びα−アミノ基を、亜リン酸ジベンジルを用いて１工程でリン酸化した（１ｉ→５）（スキーム１）。

得られたリン酸ジエステル（５）の脱ベンジル化は、ブロモトリメチルシランを用いて達成し、遊離酸（３ｂ）を提供し、続いてこれをナトリウムメトキシドのメタノール溶液を用いてナトリウム塩６へ変換した（参考文献１１〜１２）。４”-フェノール位のみのリン酸化は、ＰｙＢｒｏＰをカップリング試薬として用いた３’−アミノスチルベン１ａとＯ−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ^α−Ｚ−Ｌ−Ｔｙｒとのカップリングにより達成し（参考文献２８）、アミド７を提供した（スキーム２）。

ＴＦＡのＤＣＭ溶液を用いてｔｅｒｔ−ブチルを除去し、その後リン酸化することにより、ジベンジルエステル８を提供した。エステルにおける脱ベンジル化と、アミンにおけるベンジルオキシカルボニルの除去は同時に達成し、アセトニトリル中のヨウ化ナトリウムとクロロトリメチルシランとの反応からヨウ化トリメチルシリル（ＴＭＳＩ）をｉｎ ｓｉｔｕで生成した（参考文献２９〜３０）。この方法は、リン酸塩プロドラッグ３ａを即時沈殿させた。驚くべきことに、リン酸及び対応のナトリウム塩はともに水に難溶性であることが証明された。第１に１ｉの塩酸塩を作製し（スキーム３）、第２にアミン１ａとアスパラギン酸とをカップリングさせてβ−アスパラギン酸ナトリウム塩１１（スキーム４）に変換することによって、可溶性アミド誘導体を作製する可能性について更に調査した。

アミド形成はＰｙＢｒｏＰを用いて達成し、続いて、トリエチルシランの存在下、β−ｔｅｒｔ−ブチル保護基を除去した（参考文献３１）。得られたカルボン酸を、その後ナトリウムメトキシドのメタノール溶液で処理し、ナトリウム塩１１を生じた。塩酸塩９及びナトリウム塩１１は、ともに本質的に水に不溶性であった（＜０．１ｍｇ／ｍＬ）。本発明者らは、コンブレタスタチンＡ−２のリン酸塩プロドラッグ（２ｄ）は、そのコンブレタスタチンＡ−１（２ｂ）及びＡ−３対応物（２ｆ）と比較して水溶性が低下したことを以前に発見していた（参考文献１１〜１２）が、新規ＣＡ２修飾（１ｂ、３ａ、６、９、及び１１）が、おそらくスチルベンによって作り出された疎水性により、ほんのわずかな水溶性を示すことを発見したことに驚いた（表１）。興味深いことに、リン酸基をチロシンアミド１ｉに付加して３ａを生ずることにより、抗癌活性が低下した（表２）。

表２に記載したそれぞれの物質について得たがん細胞株の結果は溶液中で得たため、おそらくわずかな水溶性はあまり細胞株の結果及び有効性に影響を及ぼさなかった。しかしながら、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの水素結合能の低下は重要であろう。

１９８４年に単離された強力な抗がん剤ドラスタチン１０（Ｄ−１０、４ａ）のｄｅｓ−Ｄｏｅテトラペプチド単位（４ｂ）（参考文献１５）を選択して、アミン１ａとカップリングさせた。Ｄ−１０のＤｏｅ部分をアミン１ａと置換することにより、コルヒチン及び／又はチューブリンのビンカ領域と結合する可能性を有するスチルベンペプチドを合成することを計画した。公開された方法により、トリペプチドＤｏｖ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ ＴＦＡ塩（１５）及びＢｏｃ−Ｄａｐ（１２）を得た（参考文献３２、３３）。アミン１ａをＢｏｃ−Ｄａｐ（１２）とＰｙＢｒｏＰカップリングさせ、続いてＴＦＡのＤＣＭ溶液でＢｏｃ脱保護することにより、化合物１４を提供した（スキーム５）。

更なるカップリングによりｄｅｓ−Ｄｏｅ Ｄ−１０スチルベンアミド１６を生じた。以下に考察するアミド１４の抗微生物作用が広範囲であったように、潜在的に２重機能性の抗がん剤１６のがん細胞阻害活性は注目に値するものであった（上記表２）。

スチルベン誘導体の抗微生物性評価
臨床研究所規格委員会による液体微量希釈アッセイ（参考文献４３〜４４）で化合物をスクリーニングした。アッセイは別の日に少なくとも２回繰り返した。化合物１４は、クリプトコッカス・ネオフォルマンスＡＴＣＣ９０１１２（ＭＩＣ＝６４μｇ／ｍＬ）；病原菌の淋菌ＡＴＣＣ４９２２６（ＭＩＣ＝１６μｇ／ｍＬ）；及び日和見菌の肺炎連鎖球菌ＡＴＣＣ６３０３（ＭＩＣ＝８〜１６μｇ／ｍＬ）；大便連鎖球菌ＡＴＣＣ２９２１２（ＭＩＣ＝３２〜６４μｇ／ｍＬ）の増殖を阻害することを発見した。プロドラッグ３ａは、淋菌ＡＴＣＣ４９２２６（ＭＩＣ＝０．１２５μｇ／ｍＬ）；及び大便連鎖球菌ＡＴＣＣ２９２１２（ＭＩＣ＝６４μｇ／ｍｌ）を阻害した。プロドラッグ６は、淋菌ＡＴＣＣ４９２２６（ＭＩＣ＝４μｇ／ｍＬ）を阻害した。化合物８は、大便連鎖球菌ＡＴＣＣ２９２１２（ＭＩＣ＝６４μｇ／ｍＬ）を阻害した。化合物１３は、クリプトコッカス・ネオフォルマンスＡＴＣＣ９０１１２（ＭＩＣ＝６４μｇ／ｍＬ）を阻害した。

スチルベン誘導体の抗新生物性評価
先の研究は、Ｄ−１０（４ａ）が例外的に細胞障害性の抗微生物剤であり、チューブリンのビンカドメイン内で固く結合することによってチューブリン重合を阻害することを示した（チューブリンへのビンブラスチン結合の阻害は大きいが非競合的である）（参考文献３４〜３５）。逆に、コンブレタスタチンＡ−４（２ｇ）はコルヒチン部位薬に対してかなり強力であるが、Ｄ−１０（４ａ）よりも約１００倍細胞障害性が低く、スチルベンはコルヒチン部位にどん欲に結合することによってチューブリン重合を競合的に阻害する（参考文献３６〜３７）。これらの発見は、以下の表３及び表４に提示した研究において確認された。４ａ及び２ｇのチューブリン重合に対する類似の阻害効果、放射性標識されたビンブラスチン及びコルヒチンの結合の阻害に対するそれらの対照的な効果、及び２ｇよりも１００倍も増大した、４ａによるＭＣＦ−７細胞の増殖阻害に注目されたい。

Ｄ−１０（参考文献２４）（４ａ）の構造改変による先のＳＡＲ研究は、そのＣ端単位Ｄｏｅの喪失が細胞増殖に顕著な効果を示し、チューブリンへのリガンド結合に対する阻害効果は、チューブリン重合に対する阻害効果よりも大きいことを示した。したがって、Ｄｏｖ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ（４ｂ）は、重合阻害剤としては４ａよりも２倍活性が低いのみであるが、ＭＣＦ−７細胞増殖阻害剤としては少なくとも６倍活性が低い（表４）。これらのＳＡＲ研究は、細胞学アッセイ及び生化学アッセイにおいて、Ｄｏｅ残基をさまざまな芳香族誘導体に置換することにより、Ｄ−１０（４ａ）の活性のいくらか又は全てを回復できるであろうことも示している（参考文献２３〜２４）。

コンブレタスタチンＡ４（参考文献２７、３６）（２ｇ）の構造操作によるＳＡＲ研究は、Ａ環のメチレンジオキシ架橋を２つの隣接メトキシ基に置換するか、又はＢ環のアミノ基をヒドロキシル基に置換すると、細胞障害性及びチューブリン相互作用に対して比較的小さな効果が観察されることを示した。これらの発見を表３及び表４に再度明示し、これらの変化をともに組み込んだアミン塩酸塩１ｂをＣＡ４（２ｇ）と比較する。更に、本発明者らは、アミン１ａから形成されるさまざまなアミノ酸アミドは、チューブリンに基づいた生化学アッセイにおいて活性を激しく低下させるが、アミンの細胞障害活性は保持することを発見した（参考文献２７）。これらの化合物は薬物処理細胞の分裂指数を顕著に増加させたため、最も妥当な説明は、アミドの細胞外加水分解か細胞内加水分解によってアミン１ａが再生されたということである。

ドラスタチン１０−コンブレタスタチンアミンのハイブリッド１６について評価すると、［^３Ｈ］コルヒチンの結合に対する効果は比較的弱いが、全ての生化学アッセイにおいて活性であり（表３及び表４）、１ａのアミノ酸アミドによって先に観察された弱い活性（参考文献２７）と調和することがわかった。逆に、化合物ペプチド１６の活性は、チューブリン重合及びチューブリンへの［^３Ｈ］ビンブラスチンの結合の阻害剤としてはＤ−１０（４ａ）の約半分であった。ペプチド１６は最初にＤ−１０（４ａ）類似体として作用するが、２重活性を有するコンブレタスタチン類似体は、先行技術のスチルベン化合物によって提供されない独特の利点及び特性を有することは明らかである。

ＭＣＦ−７細胞を用いた詳細な比較により、ペプチド１６の活性はＤｏｖ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ（４ｂ）の約２倍であり、塩酸塩１ｂの４倍であるが、Ｄ−１０（４ａ）のわずか１／２００であることがわかった。更に、４ｂと１ｂとを等モル量で混合すると、１６が完全に加水分解された場合に起こるように、ＭＣＦ−７細胞の増殖阻害に関し、ペプチド１６について得られたものとほとんど同一のＩＣ_５０値が得られた（１４対１７ｎＭ）。１６、４ｂ、及び１ｂについて得られたＩＣ_５０値は同一範囲にあるため、１６の細胞障害性が、比較的弱いＤ−１０（４ａ）類似体として最初に作用することに由来するのか、比較的強力なコンブレタスタチンＡ−４（２ｇ）類似体として最初に作用することに由来するのかを決定することは不可能である。１６によって得られたＩＣ_５０値と、その成分４ｂと１ｂとの混合物によって得られたＩＣ_５０値との類似性は、先に研究されたアミド（参考文献２７）と同様に、少なくとも部分的な細胞外加水分解か細胞内加水分解を受けることを示している。最後に、１６、４ｂ、１ｂ、及び４ｂ＋１ｂ混合物に関するＩＣ_５０値の類似性は、４ｂと１ｂとを単一分子内で結合させたものから得られた相乗的で明らかなｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞障害効果がほとんどがないことを示している。しかしながら、化合物１６及び類似のスチルベン誘導体は、有効性、投与、用量、及びｉｎ ｖｉｖｏ送達に関して利点を有するかもしれない。

結論として、３，４−メチレンジオキシ−５，４’−ジメトキシ−３’−アミド−Ｚ−スチルベン チロシンアミド及びアスパラギン酸アミドシリーズから非常に水溶性の誘導体を合成する初期の試みは報いられないことが証明されたが、上で考察したように、ヒトがん細胞株の小さな一団を強力に阻害する３つの新規スチルベン誘導体（９、１４、及び１６）が発見された。最も重要なのは、潜在的に複数を標的とする化合物（アミド１４及びペプチド１６）から得られた予備的な生物学的結果は、広範囲の抗微生物活性及び２重抗癌活性に関して更なる調査に値するということである。

材料及び方法：
エーテルはジエチルエーテルを表し、Ａｒはアルゴンガスを表す。ブロモ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウム ヘキサフルオロリン酸（ＰｙＢｒｏＰ）、Ｏ^β−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ^α−Ｂｏｃ−Ｌ−アスパラギン酸、及びＯ−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ^α−Ｚ−Ｌ−チロシンは、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ−Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ社（サンディエゴ、カリフォルニア州）から入手した。ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）、無水メタノール、ナトリウムメトキシド、トリエチルシラン（ＴＥＳ）、及びトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）は、Ａｃｒｏｓ Ｏｒｇａｎｉｃｓ（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ピッツバーグ、ペンシルバニア州）から入手した。他の全ての試薬はシグマ−アルドリッチ・ケミカル社（ミルウォーキー、ウィスコンシン州）から購入した。

短波ＵＶ照射下で可視化するＡｎａｌｔｅｃｈシリカゲルＧＨＬＦ Ｕｎｉｐｌａｔｅｓを用いた薄層クロマトグラフィで反応をモニターした。水溶液の溶媒抽出物を、無水硫酸マグネシウム又は硫酸ナトリウムで乾燥させた。必要に応じて、Ｅ．メルク製フラッシュ（２３０〜４００メッシュ ＡＳＴＭ）シリカ、Ｅ．メルク製グラビティ（７０〜２３０メッシュ ＡＳＴＭ）シリカ、又はセファデックスＬＨ−２０によるカラムクロマトグラフィで粗産物を分離した。

融点は補正せず、電熱９１００装置を用いて測定した。パーキン−エルマー２４１偏光計で旋光度を測定した。［α］_Ｄ値は１０^−１ｄｅｇ・ｃｍ^２・ｇ^−１で示す。重水素化溶媒を用いたＶａｒｉａｎ Ｇｅｍｉｎｉ ３００、Ｖａｒｉａｎ Ｕｎｉｔｙ ４００、又はＶａｒｉａｎ Ｕｎｉｔｙ ５００機器によって^１Ｈ−ＮＭＲ及び^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを記録し、ＴＭＳ又は溶媒を基準とした。ＪＥＯＬ ＬＣｍａｔｅ質量分光計にてＨＲＭＳデータを記録した。元素解析は、Ｇａｌｂｒａｉｔｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社、ノックスビル、テネシー州によって行われた。

３，４−メチレンジオキシ−５，４’−ジメトキシ−３’−［Ｏ，Ｎ ^α −ジ（ビス−ベンジルホスホリル）−Ｌ−Ｔｙｒ］−アミド−Ｚ−スチルベン（５）
アミン１ｉ（参考文献２７）（７１ｍｇ、０．１５ミリモル）のアセトニトリル（１ｍＬ）撹拌溶液に、アセトン／氷浴中、−１０℃にて、Ａｒ下、四塩化炭素（０．１５ｍｌ、１．６ミリモル、１１当量）を加えた。１０分後、ＤＩＰＥＡ（０．１２ｍＬ、０．６６ミリモル、４．４当量）及び４−ジメチルアミノピリジン（３．８ｍｇ、０．０３１ミリモル、０．２１当量）を加え、１分後、亜リン酸ジベンジル（０．１１ｍＬ、０．４７ミリモル、３．１当量）を滴下した。１時間後、反応物を室温まで温め、０．５Ｍ ＫＨ_２ＰＯ_４水溶液を加えた。混合物をＥｔＯＡｃ（３×１０ｍＬ）で抽出し、一緒にした抽出物をブライン（１５ｍＬ）及び水（１５ｍＬ）で洗浄した。真空内で乾燥及び濃縮させ、生成物をグラビティカラムクロマトグラフィ（４：１、ＤＣＭ：ＥｔＯＡｃ）で分離し、無色オイル５を提供した（９７ｍｇ、６５％）：Ｒ_ｆ ０．１２（４：１、ＤＣＭ：ＥｔＯＡｃ）；［α］^２５ _Ｄ −４５．１°（ｃ ０．７２、ＣＨＣｌ_３）；Ｐ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）δ５．６９３，−８．１１３；^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）δ２．８９（１Ｈ，ｍ，−ＣＨ_２−），３．１８（１Ｈ，ｍ，−ＣＨ_２−），３．５６（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_３），３．７１（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_３），４．０５（１Ｈ，ｍ，αＨ），４．９６（８Ｈ，ｍ，４×−ＣＨ_２−），５．８７（２Ｈ，ｓ，−ＯＣＨ_２Ｏ−），６．３９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，ｖｉｎｙｌ Ｈ），６．４５（３Ｈ，ｍ，ｖｉｎｙｌ Ｈ，２×ＡｒＨ），６．５９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，ＡｒＨ），６．９７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．４，１．６Ｈｚ，ＡｒＨ），６．９９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２×ＡｒＨ），７．０３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２×ＡｒＨ），７．２９（２０Ｈ，ｍ，２０×ＡｒＨ），８．２７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．６，ＡｒＨ），８．３６（１Ｈ，ｓ）；及びＨＲＭＳ ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ_５４Ｈ_５３Ｎ_２Ｏ_１２Ｐ_２［Ｍ＋Ｈ］^＋９８３．３０７４，ｆｏｕｎｄ ９８３．３１１５．Ａｎａｌ，ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ_５４Ｈ_５２Ｎ_２Ｏ_１２Ｐ_２；Ｃ，６５．９８；Ｈ，５．３３；Ｎ，２．８５．Ｆｏｕｎｄ：Ｃ５，６５．５１；Ｈ，５．５５；Ｎ，２．８４．

３，４−メチレンジオキシ−５，４’−ジメトキシ−３’−（Ｌ−Ｔｙｒ）−アミド−Ｚ−スチルベン ３’−Ｏ，Ｎ ^α −二リン酸ナトリウム（６）
リン酸ベンジル５（７６ｍｇ、０．０７７ミリモル）のＤＣＭ（１ｍＬ）撹拌溶液に、０℃にて、Ａｒ下、ブロモトリメチルシラン（３５μＬ、０．３３ミリモル、４．３当量）を加えた。反応混合物を３０分間撹拌し、真空下で濃縮した。残渣をＥｔＯＨ（１ｍＬ）に溶解させ、ナトリウムメトキシド（２０ｍｇ、０．３６ミリモル、４．７当量）を加えて沈殿物を得、これを回収してＥｔＯＡｃ及びエーテルで洗浄した。生成物（６）を無色粉末として得た（５２ｍｇ、９５％）；融点（分解）１８８−１９０℃；［α］_Ｄ −３０．６℃（ｃ ０．７２、ＤＭＳＯ）；Ｐ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ６．２６２，０．５８５；^１３Ｃ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ１４３．８，１３２．３，１３０．４，１３０．２，１２９．７，１２９．４，１２７．４，１２７．２，１２６．３，１２２．１，１１９．７，１１６．５，１１５．１，１１１．０，１０６．８，１０１．２，９９．５，５６．６，５６．２，５５．９；^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ２．６３（１Ｈ，ｍ，−ＣＨ_２−），３．１０（１Ｈ，ｍ，−ＣＨ_２−），３．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），３．５６（１Ｈ，ｍ），３．８６（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_３），３．８７（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_３），６．００（２Ｈ，ｓ，−ＯＣＨ_２Ｏ−），６．５５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，ＡｒＨ），６．９９（８Ｈ，ｍ，２×ｖｉｎｙｌ Ｈ，６×ＡｒＨ），７．１１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，ＡｒＨ），７．２３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．８，１．６Ｈｚ，ＡｒＨ），１０．１２（１Ｈ，ｂｒ ｓ）．Ａｎａｌ．ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ_２６Ｈ_２５Ｎ_２Ｎａ_３Ｏ_１２Ｐ_２・３Ｈ_２Ｏ：Ｃ，４２．０６；Ｈ，４．２１；Ｎ，３．７７．Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，４１．６８；Ｈ，４．６５；Ｎ，３．４５．

３，４−メチレンジオキシ−５，４’−ジメトキシ−３’−（Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ ^α −Ｚ−Ｌ−Ｔｙｒ−アミド−Ｚ−スチルベン（７）
アミン１ａ（０．１９ｇ、０．６３ミリモル）、Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ^α−Ｚ−Ｌ−Ｔｙｒ（０．４５ｇ、１．２ミリモル、１．９当量）、及びＰｙＢｒｏＰ（０．５７ｇ、１．２ミリモル、１．９当量）のＤＣＭ（２ｍＬ）撹拌混合溶液に、０℃にて、Ａｒ下、ＤＩＰＥＡ（０．５５ｍｌ、３．２ミリモル、５．１当量）（参考文献３２〜３３）を加えた。反応混合物を４５分間室温で撹拌し、真空内で濃縮した。生成物をグラビティカラムクロマトグラフィ（４：１、ＤＣＭ：ＥｔＯＡｃ）によって無色オイルとして得た（７、０．３８ｇ、９３％）；Ｒ_ｆ ０．７４（４：１、ＤＣＭ：ＥｔＯＡｃ）；［α］^２４ _Ｄ ＋１．９°（ｃ １．０４、ＣＨＣｌ_３）；^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ１．３０（９Ｈ，ｓ，ｔＢｕ），３．０５（２Ｈ，ｍ，−ＣＨ_２−），３．６３（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_３），３．６８（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_３），４．４７（１Ｈ，ｍ，αＨ），５．０５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，−ＣＨ_２−），５．６０（１Ｈ，ｂｒ），５．８５（２Ｈ，ｓ，−ＯＣＨ_２Ｏ−），６．３３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，ｖｉｎｙｌ Ｈ），６．４０（３Ｈ，ｍ，ｖｉｎｙｌ Ｈ，２×ＡｒＨ），６．５９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，ＡｒＨ），６．８３（２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ），６．９１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．１，１．５Ｈｚ，ＡｒＨ），７．０５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２×ＡｒＨ），７．２６（５Ｈ，ｍ，５×ＡｒＨ），７．９２（１Ｈ，ｓ），８．２２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，ＡｒＨ）；及びＨＲＭＳ ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ_３８Ｈ_４１Ｏ_８Ｎ_２［Ｍ＋Ｈ］^＋ ６５３．２８６３，ｆｏｕｎｄ ６５３．２８７６．Ａｎａｌ．ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ_３８Ｈ_４０Ｎ_２Ｏ_８：Ｃ，６９．９２；Ｈ，６．１８；Ｎ，４．２９．Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，６９．４５：Ｈ，６．３７；Ｎ，４．２１．

３，４−メチレンジオキシ−５，４’−ジメトキシ−３’−（Ｏ−ビス−ベンジルホスホリル−Ｎ ^α −Ｚ−Ｌ−Ｔｙｙ−アミド−Ｚ−スチルベン（８）
アミド７（０．２６ｇ、０．４０ミリモル）のＤＣＭ（２ｍＬ）撹拌溶液に、ＴＦＡ（２ｍＬ）を加えた。反応混合物を２０分間撹拌し、溶液を真空下で濃縮し、グラビティカラムクロマトグラフィ（４：１、ＤＣＭ：ＥｔＯＡｃ）によって得た遊離フェノールを、Ａｒ下、アセトニトリル（４ｍＬ）中に置いた。混合物を−１０℃まで冷却し、四塩化炭素（０．２１ｍｌ、２．１ミリモル、５．３当量）を加えた。１０分後、ＤＩＰＥＡ（０．１６ｍＬ、０．８９ミリモル、２．２当量）及び４−ジメチルアミノピリジン（５ｍｇ、０．０４１ミリモル、０．１０当量）を加え、１分後、亜リン酸ジベンジル（０．１５ｍＬ、０．６５ミリモル、１．６当量）を滴下した。２時間後、反応混合物を室温まで温め、０．５Ｍ ＫＨ_２ＰＯ_４（１６ｍＬ）水溶液を加えた。リン酸塩５と同一手順を行い、生成物８を無色オイルとして得た（０．２４ｇ、７１％）；Ｒ_ｆ ０．６０（４：１、ＤＣＭ：ＥｔＯＡｃ）；［α］^２３ _Ｄ −５．１°（ｃ ０．２５、ＣＨＣｌ_３）；Ｐ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）δ−８．０９５；^１Ｈ−ＮＭＲ（ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ３．０８（２Ｈ，ｍ，−ＣＨ_２−），３．６６（１Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_３），３．７２（１Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_３），４．５１（１Ｈ，ｍ，αＨ），５．０８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，−ＣＨ_２−），５．１１（４Ｈ，ｍ，２×−ＣＨ_２−），５．４４（１Ｈ，ｂｒ ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），５．９０（２Ｈ，ｓ，−ＯＣＨ_２Ｏ−），６．３９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，ｖｉｎｙｌ Ｈ），６．４６（３Ｈ，ｍ，ｖｉｎｙｌ Ｈ，２×ＡｒＨ），６．６２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，ＡｒＨ），６．９８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．４，１．８Ｈｚ，ＡｒＨ），７．０４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，２×ＡｒＨ），７．１４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，２×ＡｒＨ），７．３１（１５Ｈ，ｍ，１５×ＡｒＨ），７．９０（１Ｈ，ｓ），８．２４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，ＡｒＨ）；及びＨＲＭＳ ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ_４８Ｈ_４６Ｎ_２Ｏ_１１Ｐ［Ｍ＋Ｈ］^＋ ８５７．２８４０，ｆｏｕｎｄ ８５７．２８５３．Ａｎａｌ．ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ_４８Ｈ_４５Ｎ_２Ｏ_１１Ｐ；Ｃ，６７．２８；Ｈ，５．２９；Ｎ，３．２７．Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，６６．８９；Ｈ，５．２７；Ｎ，３．１７．

３，４−メチレンジオキシ−５，４’−ジメトキシ−３’−（Ｏ−ホスホリル−Ｎ ^α −Ｌ−Ｔｙｒ）−アミド−Ｚ−スチルベン（３ａ）
ベンジルエステル８（９８ｍｇ、０．１１ミリモル）のアセトニトリル撹拌溶液に、Ａｒ下、ヨウ化ナトリウム（６０ｍｇ、０．４０ミリモル、３．６当量）を加え、続いてクロロトリメチルシラン（５１μＬ、０．４１ミリモル、３．７当量）を加えた。反応混合物を２０分間撹拌しながら白色沈殿を形成させた。沈殿物を回収する前に（１％）チオ硫酸ナトリウム水溶液（０．５ｍＬ）を混合物へ加え、酢酸エチル、水、及びアセトンで洗浄した。生成物を無色非晶質固体として得た（３ａ、３５ｍｇ、５８％）：融点（分解）１７５−１７７℃；［α］^２５ _Ｄ −６．３°（ｃ ０．３５、ＤＭＳＯ）；Ｐ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ−２．０４３；^１３Ｃ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ１７０．６，１５６．１，１４９．０，１４８．８，１４３．３，１３６．９，１３４．２，１３２．３，１２９．７，１２９．６，１２８．９，１２８．３，１２７．７，１２７．２，１２７．０，１２６．４，１２２．８，１１９．５，１１８．９，１１１．３，１０６．８，１０１．２，９９．５，６５．４，５７．０，５６．２，３６．４；^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ２．７８（２Ｈ，ｍ，−ＣＨ_２−），３．０６（１Ｈ，ｍ，−ＣＨ_２−），３．８２（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_３），３．８６（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_３），４．４９（１Ｈ，ｍ，αＨ），５．９８（２Ｈ，ｓ，−ＯＣＨ_２Ｏ−），６．８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，ｖｉｎｙｌ Ｈ），６．９４（１Ｈ，ｓ，ＡｒＨ），７．０７（２Ｈ，ｍ，ｖｉｎｙｌ Ｈ，ＡｒＨ），７．２２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，ＡｒＨ），７．２８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．６，２×ＡｒＨ），７．３２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．６，２×ＡｒＨ），７．７４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４，ＡｒＨ），８．２２（１Ｈ，ｓ），９．２５（１Ｈ，ｓ）．

３，４−メチレンジオキシ−５，４’−ジメトキシ−３’−（Ｎ ^α −Ｌ−Ｔｙｒ）−アミド−Ｚ−スチルベン塩酸塩（９）
アミン１ｉ（２７ｍｇ、ミリモル）の酢酸エチル（１ｍＬ）撹拌溶液に、エーテルＨＣｌ（１Ｍ）を過剰量加えた。白色固体を直ちに形成し、溶媒を真空内で除去し、得られた固体をエタノール−酢酸エチルから再結晶させ、オフホワイトの粉末を生じた（９、２９ｍｇ、定量的）：融点１６９−１７０．５℃；［α］^２５ _Ｄ ８２．５°（ｃ ０．７３、ＣＨ_３ＯＨ）；^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）δ３．０７（２Ｈ，ｍ，−ＣＨ_２−），３．７０（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_３），３．７９（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_３），４．２７（１Ｈ，ｍ，αＨ），５．９３（２Ｈ，ｓ，−ＯＣＨ_２Ｏ−），６．３７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，ＡｒＨ），６．４２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，ｖｉｎｙｌ Ｈ），６．４６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．６Ｈｚ，ｖｉｎｙｌ Ｈ），６．４９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，ＡｒＨ），６．７５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２×ＡｒＨ），６．９０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，ＡｒＨ），７．０３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．１，２．１Ｈｚ，ＡｒＨ），７．０９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２×ＡｒＨ），７．９２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，ＡｒＨ）；Ａｎａｌ，ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ_２６Ｈ_２６ＣｌＮ_２Ｏ_６：Ｃ，５９．３２；Ｈ，５．７５；Ｎ，５．３３．Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，５９．５３；Ｈ，５．５６；Ｈ，５．２６．

３，４−メチレンジオキシ−５，４’−ジメトキシ−３’−（Ｏ ^β −ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ ^α −Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｓｐ）−アミド−Ｚ−スチルベン（１０）
アミン１ａ（０．１３ｇ、０．４３ミリモル）、Ｏ^β−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ^α−Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｓｐ）（０．２２ｇ、０．７６ミリモル、１．８当量）、及びＰｙＢｒｏＰ（０．３５ｇ、０．７６ミリモル、１．８当量）のＤＣＭ（３ｍＬ）撹拌混合溶液に、０℃にて、Ａｒ下、ＤＩＰＥＡ（０．２１ｍＬ、１．２ミリモル、２．８当量）を加えた。反応混合物を室温で７５分間撹拌し、溶媒を真空内で除去した。生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィ（１：１、ｎ−ヘキサン：アセトン）によってオイルとして得た（１０、０．２２ｇ、８８％）；Ｒ_ｆ ０．６４（１：１、ヘキサン−アセトン）；［α］^２４ _Ｄ −１３．０°（ｃ １．４２、ＣＨＣｌ_３）；^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）δ１．４４（９Ｈ，ｓ，ｔＢｕ），１．４９（９Ｈ，ｓ，ｔＢｕ），２．８８（２Ｈ，ｍ，−ＣＨ_２−），３．７３（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_３），３．８４（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_３），４．５９（１Ｈ，ｍ，αＨ），５．８１（１Ｈ，ｂｒ），５．９２（２Ｈ，ｓ，−ＯＣＨ_２Ｏ−），６．３８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．６Ｈｚ，ｖｉｎｙｌ Ｈ），６．４４（１Ｈ，ｓ，ＡｒＨ），６．４６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．６Ｈｚ，ｖｉｎｙｌ Ｈ），６．４７（１Ｈ，ｓ，ＡｒＨ），６．７０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，ＡｒＨ），６．９７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．４，１．８Ｈｚ，ＡｒＨ），８．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，ＡｒＨ），８．７６（１Ｈ，ｓ）；及びＨＲＭＳ ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ_３０Ｈ_３９Ｎ_２Ｏ_９［Ｍ＋Ｈ］^＋ ５７１．２６５５，ｆｏｕｎｄ ５７１．２６１７．Ａｎａｌ．ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ_３０Ｈ_３８Ｎ_２Ｏ_９：Ｃ，６３．１４；Ｈ，６．７１；Ｎ，４．９１．Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，６２．６４；Ｈ，７．００；Ｎ，４．８９．

３，４−メチレンジオキシ−５，４’−ジメトキシ−３’−（Ｎ ^α −Ｌ−Ａｓｐ）−アミド−Ｚ−スチルベンナトリウム（１１）
ｔ−ブチルエステル１０（０．１３ｇ、０．２３ミリモル）のＤＣＭ（１．５ｍＬ）溶液に、ＴＦＡ（０．７１ｍＬ、９．６ミリモル、４２当量）及びＴＥＳ（０．３０ｍＬ、１．８ミリモル、７．８当量）の混合物を加え、Ａｒ下で４時間撹拌を継続した。溶媒を真空内で除去し、セファデックスＬＨ−２０カラムクロマトグラフィ（溶媒：ＭｅＯＨ）にて得たＴＦＡ塩をメタノール（１ｍＬ）中に入れた。ナトリウムメトキシド（０．２２ｍｇ、０．４１ミリモル、１．８当量）を反応混合物へ加え、形成した白色沈殿を回収し、ＤＣＭ−ＣＨ_３ＯＨから再度沈殿させて、生成物１１を無色固体として得た（６２ｍｇ、６２％）：融点１６８−１７０℃；［α］^２５ _Ｄ ＋１４．０°（ｃ １．１８、ＣＨ_３ＯＨ）；^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ２．６２（１Ｈ，ｍ，−ＣＨ_２−），２．７７（１Ｈ，ｍ，−ＣＨ_２−），２．７８（２Ｈ，ｂｒ），３．６９（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_３），３．８７（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_３），４．２９（１Ｈ，ｍ，αＨ），５．８７（２Ｈ，ｓ，−ＯＣＨ_２Ｏ−），６．３６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，ＡｒＨ），６．４０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，ｖｉｎｙｌ Ｈ），６．４５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．３Ｈｚ，ｖｉｎｙｌ Ｈ），６．５０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，ＡｒＨ），６．９１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，ＡｒＨ），７．０２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．４，１．８Ｈｚ，ＡｒＨ），７．９９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，ＡｒＨ），８．５２（１Ｈ，ｓ）；Ａｎａｌ．ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ_２１Ｈ_２１Ｎ_２ＮａＯ_７Ｈ_２Ｏ：Ｃ，５５．５１；Ｈ，５．１０；Ｎ，６．１６．Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，５５．８１；Ｈ，５．７０；Ｎ，６．１６．

３，４−メチエレンジオキシ−５，４’−ジメトキシ−３’−（Ｎ ^α −Ｂｏｃ−Ｌ−Ｄａｐ）−アミド−Ｚ−スチルベン（１３）
アミン１ａ（５１ｍｇ、０．１７ミリモル）、Ｎ^α−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｄａｐ１２（５２ｍｇ、０．１８ミリモル、１．１当量）^{３２、３３}、及びＰｙＢｒｏＰ（８７ｍｇ、０．１９ミリモル、１．１当量）の撹拌混合液に、０℃にて、Ａｒ下、ＤＩＰＥＡ（６５μＬ、０．３７ミリモル、２．２当量）を加えた。反応混合物を室温で１．５時間撹拌した。ＤＣＭ（１０ｍＬ）を加え、混合物をクエン酸水溶液（１０ｗｔ％、１０ｍＬ）で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空内で濃縮し、残渣をグラビティカラムクロマトグラフィ（８：１、ＤＣＭ：ＥｔＯＡｃ）に付し、生成物１３を無色オイルとして生じた（４０ｍｇ、４１％）：Ｒ_ｆ ０．２４（８：１、ＤＣＭ：ＥｔＯＡｃ）；［α］^２４ _Ｄ −４８．５°（ｃ １．２、ＣＨＣｌ_３）；^１３Ｃ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）δ１４８．５，１４６．９，１４３．３，１３４．２，１３１．９，１３０．１，１２９．５，１２８．８，１２７．６，１２３．８，１２０．８，１０９．６，１０８．５，１０３．０，１０１．３，５８．７，５６．３，５５．８，２８．５；^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）δ１．３０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，ＣＨ_３），１．４６（９Ｈ，ｓ，Ｂｏｃ），１．７２（１Ｈ，ｍ，Ｐｒｏ），１．９０（３Ｈ，ｍ，Ｐｒｏ），２．６２（１Ｈ，ｍ），３．２３（１Ｈ，ｍ），３．４４（１Ｈ，ｍ），３．４９（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_３），３．５８（１Ｈ，ｍ），３．７４（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_３），３．８５（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_３），３．９０（１Ｈ，ｍ），５．９２（２Ｈ，ｓ，−ＯＣＨ_２−），６．３８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．３Ｈｚ，ｖｉｎｙｌ Ｈ），６．４５（１Ｈ，ｓ，ＡｒＨ），６．４６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，ｖｉｎｙｌ Ｈ），６．４７（１Ｈ，ｓ，ＡｒＨ），６．６９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７，ＡｒＨ），６．９６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．４，１．８Ｈｚ，ＡｒＨ），８．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４，ＡｒＨ），８．４１（１Ｈ，ｂｒ）；及びＨＲＭＳ ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ_３１Ｈ_４１Ｎ_２Ｏ_８［Ｍ＋Ｈ］^＋ ５６９．２８６３，ｆｏｕｎｄ ５６９．２８８４．Ａｎａｌ．ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ_３１Ｈ_４０Ｎ_２Ｏ_８：Ｃ，６５．４８；Ｈ，７．０９；Ｎ，４．９３．Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，６４．９２；Ｈ，７．４２；Ｎ，４．９７．

３，４−メチレンジオキシ−５，４’−ジメトキシ−３’−（Ｎ ^α −Ｌ−Ｄａｐ）−アミド−Ｚ−スチルベンＴＦＡ塩（１４）
アミド１３（０．１５ｇ、０．２６ミリモル）のＤＣＭ（０．６５ｍＬ）撹拌溶液に、０℃にて、ＴＦＡ（０．２０ｍＬ、２．６ミリモル、１０当量）を加えた。反応混合物を室温で２０分間撹拌した。生成物をグラビティカラムクロマトグラフィ（２０：１、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ）にてオイルとして得た（１４、６９ｍｇ、４６％）：Ｒ_ｆ ０．５４（８：１、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ）；［α］^２４ _Ｄ −６１．９°（ｃ ０．８８、ＣＨＣｌ_３）；^１３Ｃ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）δ１７０．５，１４８．１，１４６．９，１４２．８，１３１．３，１２９．６，１２８．６，１２６．３，１２４．３，１２０．５，１０９．３，１０８．１，１０２．４，１００．８，１００．３，８０．２，６０．５，５８．６，５５．８，５５．３，４４．８，４１．５，２４．１，２３．４，１２．１；^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）δ１．２７（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９，ＣＨ_３），１．９８（４Ｈ，ｍ），２．９４（１Ｈ，ｍ），３．３３（２Ｈ，ｍ），３．５７（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_３），３．７３（１Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_３），３．７８（１Ｈ，ｍ），３．８５（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_３），３．８９（１Ｈ，ｍ），５．９１（２Ｈ，ｓ，−ＯＣＨ_２Ｏ−），６．３８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．６，ｖｉｎｙｌ Ｈ），６．４３（３Ｈ，ｍ，ｖｉｎｙｌ Ｈ，２×ＡｒＨ），６．７３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０，ＡｒＨ），７．００（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．４，１．８Ｈｚ，ＡｒＨ），８．１５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，ＡｒＨ），８．３５（１Ｈ，ｓ）；及びＨＲＭＳ ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ_２６Ｈ_３３Ｎ_２Ｏ_６ ［Ｍ＋Ｈ］^＋ ４６９．２３３９，ｆｏｕｎｄ ４６９．２３７４．Ａｎａｌ．ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ_３０Ｈ_３４Ｆ_６Ｎ_２Ｏ_１０・２Ｈ_２Ｏ：Ｃ，４９．１８；Ｈ，５．２３；Ｎ，３．８２．Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，４９．４８；Ｈ，５．２３；Ｎ，４．０９．

３，４−メチレンジオキシ−５，４’−ジメトキシ−３’−（Ｄｏｖ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ）−アミド−Ｚ−スチルベン（１６）
アミド１４（４１ｍｇ、０．０７０ミリモル）、Ｄｏｖ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ ＴＦＡ塩１５（６２ｍｇ、０．１１ミリモル、１．６当量）、及びＰｙＢｒｏＰ（５０ｍｇ、０．１１ミリモル、１．６当量）のＤＣＭ（０．５ｍＬ）撹拌混合溶液に、０℃にて、Ａｒ下、ＤＩＰＥＡ（９１μＬ、０．５２ミリモル、７．４当量）を加えた。反応混合物を室温で１４時間撹拌し、溶媒を真空内で除去した。生成物をグラビティカラムクロマトグラフィ（１：１、ｎ−ヘキサン：アセトン）にて無色オイルとして得た（１６、３０ｍｇ、４８％）：Ｒ_ｆ ０．３４（１：１、ｎ−ヘキサン：アセトン）；［α］^２３ _Ｄ −６２°（ｃ １．０５、ＣＨＣｌ_３）；^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）δ０．７９（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，ＣＨ_３），０．９１（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，ＣＨ_３），０．９４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），０．９４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，ＣＨ_３），１．００（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，ＣＨ_３），１．０１（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，ＣＨ_３），１．３２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，ＣＨ_３），１．３５（２Ｈ，ｍ），１．８０（１Ｈ，ｍ），２．０（３Ｈ，ｍ），２．３１（６Ｈ，ｓ，２×ＮＣＨ_３），２．３４（４Ｈ，ｍ），２．６２（１Ｈ，ｍ），３．００（３Ｈ，ｓ，ＮＣＨ_３），３．０５（１Ｈ，ｍ）３．０８（１Ｈ，ｓ），３．２０（１Ｈ，ｍ），３．２９（１Ｈ，ｍ），３．３２（３Ｈ，ＯＣＨ_３），３．３４（１Ｈ，ｍ），３．４４（１Ｈ，ｍ），３．４５（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_３），３．７２（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ_３），３．８４（３Ｈ，Ｓ，ＯＣＨ_３），４．０６（１Ｈ，ｍ），４．１２（１Ｈ，ｍ），４．２０（１Ｈ，ｍ），４．７９（１Ｈ，ｍ），５．９０（２Ｈ，ｓ，−ＯＣＨ_２Ｏ−），６．３６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，ｖｉｎｙｌ Ｈ），６．４４（３Ｈ，ｍ，ｖｉｎｙｌ Ｈ，２×ＡｒＨ），６．６８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，ＡｒＨ），６．９４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．１，１．５Ｈｚ，ＡｒＨ），８．２７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ），８．３３（１Ｈ，ｓ）；及びＨＲＭＳ ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ_４８Ｈ_７４Ｎ_５Ｏ_１０［Ｍ＋Ｈ］^＋ ８８０．５４３５，ｆｏｕｎｄ ８８０．５４２６．Ａｎａｌ．ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ_４８Ｈ_７３Ｎ_５Ｏ_１０：Ｃ，６５．５０；Ｈ，８．３６；Ｎ，７．９６．Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，６５．４２；Ｈ，８．７４；Ｎ，７．５９．

チューブリン及びがん細胞の手順
ウシ脳チューブリンを準備し、先に記載したようにチューブリン重合及びコルヒチン結合アッセイを行った。重合アッセイでは、反応混合物は、１．０ｍｇ／ｍＬ（１０μＭ）チューブリン、及びさまざまな濃度の潜在的阻害剤を含有した。コルヒチン結合アッセイでは、反応混合物は、０．１ｍｇ／ｍＬ（１．０μＭ）チューブリン、５．０μＭ［^３Ｈ］コルヒチン、及び記載のような潜在的阻害剤を含有した。ビンブラスチン結合アッセイは、ＧＨ−３．８Ａスウィング型ローターを備えたベックマンＡｌｌｅｇｒａ ６ＫＲ遠心分離機を用いてシリンジカラムを２，０００ｒｐｍにて遠心分離した（参考文献３８〜４１）以外は、ＧＴＰ結合に関して先に記載したように遠心ゲルろ過によって行った。反応混合物は、０．５ｍｇ／ｍＬ（５．０μＭ）チューブリン、５μＭ［^３Ｈ］ビンブラスチン、記載のような潜在的阻害剤、０．５ｍＭ ＭｇＣｌ_２、０．１Ｍ ４−モルホリンエタンスルホン酸（１．０Ｍの原液をＮａＯＨでｐＨ６．９に調整）、及び４％（ｖ／ｖ）ジメチルスルホキシドを含有した。インキュベーション（３０分）及び遠心ゲルろ過は、室温（２０〜２２℃）で行った。

細胞障害性アッセイは、細胞内タンパク質の形成阻害を測定するスルホローダミンＢ法（参考文献４２）で行った。ＭＣＦ−７乳癌細胞の分裂指数は、ＤＮＡ染色液を加える前に薬物の存在下で細胞を１６時間インキュベーションした以外は、先に記載したようにして決定した（参考文献２７）。

先の技術的な開示は、これら新規スチルベン誘導体化合物及びそれらの提唱される用途の具体的態様を記載するものであり、本発明をこれらの正確な態様に限定することを意図するものではない。更に、限定されるものではないが、医薬の塩誘導体を含め、関連分野において通常の技術を有する者に明らかな改変及び／又は修飾、あるいは開示の化学化合物の非機能的変化は、本発明の範囲内に包含されることを意図するものである。

Claims (26)

1. 式：
   

   

   の化合物又はその塩
   （式中、
   ＲはＤａｐ、Ｄａｐ−Ｄｉｌ、Ｄａｐ−Ｄｉｌ−Ｖａｌ、又はＤａｐ−Ｄｉｌ−Ｖａｌ−Ｄｏｖであり；
   Ｒ_１はＨ、ＯＨ、又はＰＯ_３Ｎａ_２であり；そして
   Ｒ_２及びＲ_３は連帯して−ＣＨ_２−であるか、又はそれぞれ独立してＨ、ＯＨ、ＣＨ_３、若しくはＰＯ_３Ｎａ_２である）。
2. ＲがＤａｐである、請求項１に記載の化合物。
3. Ｒ_１がＨである、請求項２に記載の化合物。
4. 化合物が式：
   

   

   である、請求項３に記載の化合物。
5. ＲがＤａｐ−Ｄｉｌ−Ｖａｌ−Ｄｏｖである、請求項１に記載の化合物。
6. Ｒ_１がＨである、請求項５に記載の化合物。
7. 化合物が式：
   

   

   である、請求項６に記載の化合物。
8. 請求項１に記載の少なくとも１つの化合物及び医薬的に許容可能な担体を含む組成物。
9. 化合物が、がん細胞の増殖を阻害するのに十分な治療的有効量である、請求項８に記載の組成物。
10. 化合物が抗クリプトコッカス活性又は抗菌活性を有し、且つ寄生微生物の増殖を阻害するのに十分な治療的有効量である、請求項８に記載の組成物。
11. 化合物が：淋菌；大便連鎖球菌；肺炎連鎖球菌；及びクリプトコッカス・ネオフォルマンスのうちの少なくとも１つの増殖を阻害する、請求項１０に記載の組成物。
12. 式：
    

    

    の化合物及びその塩
    （式中、Ｒ及びＲ_１は独立してＨ又はＰ（Ｏ）（ＯＨ）である）。
13. 化合物が式：
    

    

    である、請求項１２に記載の化合物。
14. それに苦しむ宿主においてがん細胞の増殖を阻害する方法であって、宿主のがん細胞の増殖を阻害するのに十分な治療的有効量で請求項１３に記載の化合物を宿主へ投与することを含む、前記方法。
15. 式：
    

    

    の化合物。
16. それに苦しむ宿主においてがん細胞の増殖を阻害する方法であって、宿主のがん細胞の増殖を阻害するのに十分な治療的有効量で請求項１５に記載の化合物を宿主へ投与することを含む、前記方法。
17. それに苦しむ宿主においてがん細胞の増殖を阻害する方法であって、宿主におけるがん細胞の増殖を阻害するのに十分な治療的有効量で式：
    

    

    の化合物又はその塩を宿主へ投与することを含む、前記方法
    （式中、
    ＲはＤａｐ、Ｄａｐ−Ｄｉｌ、Ｄａｐ−Ｄｉｌ−Ｖａｌ、又はＤａｐ−Ｄｉｌ−Ｖａｌ−Ｄｏｖであり；
    Ｒ_１はＨ、ＯＨ、又はＰＯ_３Ｎａ_２であり；そして
    Ｒ_２及びＲ_３は連帯して−ＣＨ_２−であるか、又はそれぞれ独立してＨ、ＯＨ、ＣＨ_３、若しくはＰＯ_３Ｎａ_２である）。
18. ＲがＤａｐ−Ｄｉｌ−Ｖａｌ−Ｄｏｖである、請求項１７に記載の方法。
19. Ｒ_１がＨである、請求項１８に記載の方法。
20. 化合物が医薬的に許容可能な担体中にあり、宿主がヒトである、請求項１７に記載の方法。
21. 阻害されるがんが、白血病、膵臓癌、乳癌、ＣＮＳの癌、肺ＮＳＣ癌、大腸癌、又は前立腺癌から成る群より選択される、請求項１７に記載の方法。
22. それに苦しむ宿主において微生物の増殖を阻害する方法であって、微生物の増殖阻害に十分な治療的有効量で式：
    

    

    の化合物又はその塩を宿主へ投与することを含む、前記方法
    （式中、
    ＲはＤａｐ、Ｄａｐ−Ｄｉｌ、又はＤａｐ−Ｄｉｌ−Ｖａｌであり；
    Ｒ_１はＨ、ＯＨ、又はＰＯ_３Ｎａ_２であり；そして
    Ｒ_２及びＲ_３は連帯して−ＣＨ_２−であるか、又はそれぞれ独立してＨ、ＯＨ、ＣＨ_３、若しくはＰＯ_３Ｎａ_２である）。
23. ＲがＤａｐである、請求項２２に記載の方法。
24. Ｒ_１がＨである、請求項２３に記載の方法。
25. 化合物が：淋菌；大便連鎖球菌；肺炎連鎖球菌；及びクリプトコッカス・ネオフォルマンスのうちの１つの増殖を阻害する、請求項２２に記載の方法。
26. 化合物が医薬的に許容可能な担体中にあり、宿主がヒトである、請求項２２に記載の方法。