JP2008531547A - キナゾリノン誘導体であるハロフジノンの単離されたｄ−エナンチオマーの医薬組成物 - Google Patents

Abstract

本発明は、有効成分としてキナゾリノン誘導体であるハロフジノンの単離されたキラル的に純粋なＤ−エナンチオマーを含み、対応するラセミ混合物と比較して増加した治療活性および減少した副作用を有し、本組成物が実質的にＬ−エナンチオマーを含有せず、線維性状態もしくは細胞増殖と関連する疾患もしくは障害の治療において有用である医薬組成物に関する。

Description

本発明は、有効成分としてキナゾリノン誘導体であるハロフジノンの単離されたキラル的に純粋なＤ−エナンチオマーを含み、対応するラセミ混合物と比較して増加した治療活性および減少した副作用を有する医薬組成物であって、実質的にＬ−エナンチオマーを含有せず、線維性状態もしくは細胞増殖と関連する疾患もしくは障害の治療において有用である医薬組成物に関する。

キナゾリノン誘導体
コクシジウム症を治療するためのキナゾリノン誘導体は、米国特許第３，３２０，１２４号に開示され、かつ権利が請求されている。７−ブロモ−６−クロロ−３−［３−（３−ヒドロキシ−２−ピペリジニル）−２−オキソプロピル］−４（３Ｈ）−キナゾリノン（キナゾリノン誘導体の１つ）としても知られるハロフジノンは、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｙａｎａｍｉｄ社への上記特許で最初に開示され、かつ権利が請求され、上記特許により教示された好ましい化合物であり、上記特許で記載され、かつ権利が請求された誘導体の中から市販された１つである。
その後、米国特許第４，８２４，８４７号；第４，８５５，２９９号；第４，８６１，７５８号および第５，２１５，９９３号は、ハロフジノンの殺コクシジウム特性に関する。米国特許第４，３４０，５９６号は、ウシにおけるタイレリア症を治療するためのキナゾリノン誘導体の乳酸塩の使用を教示している。ハロフジノン臭化水素酸は、獣医学的に使用されるためにＳｔｅｎｏｒｏｌ（登録商標）として市販されており、鶏飼料の添加物として使用されている。ハロフジノンの化学的特性解析、毒物学および薬物動態は、明確に証明されている（ＮＡＤＡ文書番号１３０−９５１（ＳＢＡ）、１９８５）。

米国特許第５，４４９，６７８号は、キナゾリノン誘導体が硬皮症および移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）などの線維性状態を治療するために有効であることを教示している。‘６７８号特許の開示は、治療有効量の一般式Ｉ：

（式中：ｎ＝１〜２であり；および
Ｒ^１は、各発生時に同一であっても相違していてもよく、水素、ハロゲン、ニトロ、低級アルキル、フェニルおよび低級アルコキシからなる群の一要素であり；
Ｒ_２はヒドロキシ、アセトキシおよび低級アルコキシからなる群の一要素であり；および
Ｒ_３は、水素および低級アルケンオキシ−カルボニルからなる群の一要素である）を有する製薬学的に活性な化合物を含む線維症阻害剤の組成物を提供する。
これらの化合物群中、ハロフジノンは、特に有効であることが分かった。

米国特許第６，０２８，０７５号および第６，０９０，８１４号は、それぞれ悪性腫瘍を治療し、血管新生を予防するために、キナゾリノン類、特にハロフジノンを含む医薬組成物の使用を開示している。国際特許出願ＷＯ０３／０５９３５５は、これらの化合物が抗腫瘍療法の有効性を改善することに有用であり、また放射線療法によって誘導される損傷を予防することにも有用であることを教示している。
肝硬変、肺線維症および腎線維症、硬皮症ならびに他の様々な重篤な疾患などの進行性線維増殖性疾患は、正常組織の構成および機能の破壊を生じさせる結合組織の過剰産生を示す。線維性反応は、結果として増加した増殖ならびに細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の沈着を生じさせる組織細胞の刺激反応を含むと考えられている。コラーゲンは、線維性病変で合成される主要ＥＣＭ分子であることが分かった。ハロフジノンは、低濃度でコラーゲンＩ型遺伝子発現を阻害することに有効であり、したがって抗線維症薬としてのハロフジノンは、広範囲の治療有用性を提供することが証明されている。

米国特許第５，８９１，８７９号は、再狭窄を治療することに有効なキナゾリノン誘導体を開示している。線維症および再狭窄は、どちらもハロフジノンによって阻害できる、過度のコラーゲン沈着が結び付いている状態である。再狭窄は、血管傷害に反応して罹患血管の管腔内での平滑筋増殖および細胞外マトリックス蓄積を特徴とする（Ｃhoi et al., Arch. Surg., 130:257-261, 1995）。増殖性平滑筋細胞の表現型変化は、ハロフジノンによって遮断できるコラーゲンＩ型によって調節できることが証明されている（Choi et al, ibid 1995；米国特許第５，４４９，６７８号）。米国特許第６，１５９，４８８号は、冠動脈内ステントのためのコーティング剤としてのハロフジノンの使用を開示している。
過剰なコラーゲン沈着を伴う線維性疾患に加えて、通常の創傷治癒も大部分がコラーゲン微小線維からなる結合組織の形成を含んでいる。創傷修復では、中等度の線維性組織は、有益であるが、過剰な線維性物質が蓄積することが多く、罹患組織の正常な機能を損なわせる。このようなコラーゲンの過剰な蓄積は、熱傷または傷害後の皮膚の瘢痕化、過形成性瘢痕およびケロイドにおいて重大な事象となる。ＰＣＴ公開特許公報ＷＯ０１／１７５３１は、ハロフジノンが創傷治癒において有効であることを教示している。

組織外傷に対する病理生理学的反応は、様々な組織タイプにおいて相違する可能性があるが、頻繁に瘢痕または元の器官組織の機能性が欠如するその他のタイプの結合組織の形成を生じさせるため、その結果として組織外傷の修復は、器官の能力および機能の完全な回復を導くことはない。欧州特許第１１０９５５９号は、キナゾリノン誘導体、特にハロフジノンが、正常組織修復のメカニズムを保持しながら組織外傷の病原性態様を予防することに有効であることを開示している。
ハロフジノンは、肝硬変（米国特許第６，５６２，８２９号）、腎線維症（ＰＣＴ国際特許出願ＷＯ０２／０９４１７８）、肺線維症（ＰＣＴ国際特許出願ＷＯ９８／４３６４２）、創傷（国際特許出願ＷＯ０１／１７５３１）および癒着（米国特許第５，８５２，０２４号）を含む様々な組織障害の治療において使用するための有効な物質であることが証明されている。米国特許第６，２１１，１８８号は、乾癬、過形成性瘢痕およびケロイドを含む皮膚障害を治療するためのハロフジノンの使用を開示している。
国際特許出願ＷＯ０３／０７０１５３は、ハロフジノンの安定化組成物ならびに前記医薬組成物へ酸性成分を添加することによってハロフジノンのトランス異性体からシス異性体へ異性体化する速度を減少させるための方法を開示している。

立体異性体
立体異性体は、同一結合配列によって結合された同一原子から構築されているが、互換可能ではない相違する三次元構造を有する化合物である。１つ以上のキラル原子を有する光学活性化合物は、エナンチオマーと呼ばれる２つ以上の異性体として存在する。エナンチオマーは、相互の鏡像であり、それらが右旋性異性体については（＋）時計回りに、そして左旋性異性体については（−）半時計回りの反対方向に偏光の平面を回転させるという事実を除いて、同一の物理的特性を有する。同様に、それらは立体特異的化合物と相互作用する場合を除いて、同一の化学特性を有する。各エナンチオマーが他のキラル化合物と反応もしくは相互作用する速度が十分に相違する場合は、活性における明白な相違が観察され、そして生物活性である多数の化合物は、不活性エナンチオマーを有する。
今日ハロフジノンは、合成されており、ラセミ混合物であるＳｔｅｎｏｒｏｌ（登録商標）として市販で入手できる。米国特許第４，２５２，９４７号は、コクシジウム症を治療するためのハロフジノンの活性右旋性エナンチオマーを合成するためのプロセスを教示している。右旋性化合物は、ラセミ化合物の３倍のコクシジウム症抑制活性を有することが証明されたが、約２倍以上毒性が高いことが分かった。その特許は、選択的合成によって得られる、上記で得られた右旋性エナンチオマーの純度は開示していない。‘９４７号特許は、有効成分ならびに賦形剤の十分に高い高純度レベルを必要とする、ヒト使用のために適合する右旋性ハロフジノンの医薬品等級の組成物を開示していない。ハロフジノンの右旋性エナンチオマーは、ニワトリのための抗寄生虫栄養補助食品として使用した場合に、より活性なエナンチオマーであることは証明されているが、そこから推測して、特に試験したＤ−エナンチオマーの純度が記載されなかったため、どのエナンチオマーが哺乳動物における線維性および増殖性疾患にハロフジノンが及ぼす治療作用を発揮するかを予測することは不可能であった。

ハロフジノンは、いかなるヒトに対する使用についても未だ承認されていない。しかし、前臨床試験および早期ヒト臨床試験では、ハロフジノン臭化水素酸は、広範囲の様々な疾患および障害の治療において高度に有効であることが証明されているが、悪心および嘔吐を含む副作用は、一部の被験者には、特に高用量では認容不能である。
線維症および他の疾患のための治療として使用するために、ラセミ組成物に関連する副作用を回避しながらハロフジノンの活性製剤を有することは有益であろう。そこで、ラセミ混合物に関連する副作用が減少していながら有益な生物活性を保持している、ハロフジノンの単離された実質的に純粋なエナンチオマーを含む医薬組成物は、非常に望ましいであろう。
米国特許第３，３２０，１２４号 米国特許第４，８２４，８４７号 米国特許第４，８５５，２９９号 米国特許第４，８６１，７５８号 米国特許第５，２１５，９９３号 米国特許第４，３４０，５９６号 米国特許第５，４４９，６７８号 米国特許第６，０２８，０７５号 米国特許第６，０９０，８１４号 ＷＯ０３／０５９３５５ 米国特許第５，８９１，８７９号 米国特許第６，１５９，４８８号 ＷＯ０１／１７５３１ 欧州特許１１０９５５９号 米国特許第６，５６２，８２９号 ＷＯ０２／０９４１７８ ＷＯ９８／４３６４２ 米国特許第５，８５２，０２４号 米国特許第６，２１１，１８８号 ＷＯ０３／０７０１５３ 米国特許第４，２５２，９４７号 ＮＡＤＡ文書番号１３０−９５１（ＳＢＡ）、１９８５ Choi et al., Arch. Surg., 130:257-261, 1995

本発明は、臨床用途のための医薬組成物中の有効成分として使用するための、エナンチオマー的に純粋なキナゾリノン誘導体、特にハロフジノンを提供する。本発明は、一部には、ハロフジノンの実質的に精製されたＤ−エナンチオマーを含む医薬組成物は、線維性状態を治療するため、ならびに新生腫瘍疾患を含む有害な細胞増殖に関連する疾患または障害を治療するために有用であるという予想外の発見に基づいている。
本発明では、ハロフジノンのＤエナンチオマーおよびＬエナンチオマーは、少なくとも９５％、好ましくは９８％、より好ましくは９９％以上のエナンチオマー純度を有するように精製された。本明細書において初めて開示したように、ハロフジノンの精製されたＤ−エナンチオマーは、ラセミ混合物に比較して細胞増殖およびコラーゲン合成を阻害することに２倍以上活性であるが、精製されたＬ−エナンチオマーは、実質的に不活性である。さらに、予想外にも、ハロフジノンのラセミ混合物を含む医薬組成物に関連する有害な副作用の一部は、ハロフジノンのキラル的に純粋なＤ−エナンチオマーを含む医薬組成物を用いて治療された被験者においては減少することが分かった。
高いキラル純度を有して実質的に逆エナンチオマーが欠けている、ハロフジノンの単離された生物活性エナンチオマーは、ハロフジノンおよびその誘導体を用いた治療に感受性である様々な障害の治療において非常に望ましいが、このときラセミ体ハロフジノンを用いた治療は、ラセミ化合物を用いて治療されたヒト被験者における悪心および嘔吐を含む有害な副作用を含んでいる。本発明の医薬組成物は、少なくとも９５％のキラル純度を有するＤ−エナンチオマーを含む。そこで、本発明は、様々な最終製剤形にある実質的にＬ−エナンチオマーを欠いており、ラセミ混合物の有益な生物活性と減少した副作用を有するキナゾリノン誘導体の単離されたキラル的に純粋なＤ−エナンチオマーを含む医薬品等級の組成物、およびその使用方法を提供する。

一態様によれば、本発明は、線維性状態もしくは細胞増殖に関連する疾患および障害を治療するための医薬組成物であって、有効成分として、(2''R,3''S)トランス配列を有して本質的に(2''S,3''R)トランスエナンチオマーを含まない一般式（Ｉａ）：

（式中、
ｎ＝１〜２であり、
Ｒ_１は、各発生時に水素、ハロゲン、ニトロ、低級アルキル、フェニルおよび低級アルコキシからなる群から独立して選択され；
Ｒ_２は、ヒドロキシ、アセトキシおよび低級アルコキシからなる群の一要素であり；および
Ｒ_３は、水素および低級アルケンオキシ−カルボニルからなる群の一要素である）を有する単離されたキナゾリノン誘導体、およびその医薬上許容される塩、そして医薬上許容される担体もしくは希釈剤をさらに含み、前記キナゾリノン誘導体は、キラル的に少なくとも９５％純粋な(2''R,3''S)トランスエナンチオマーである医薬組成物を提供する。

本明細書で使用する「Ｄ−エナンチオマー」は、式Ｉａのキナゾリノンの(2''R,3''S)トランス配列を意味し、「Ｌ−エナンチオマー」は、(2''S,3''R)トランス配列を意味する。
いくつかの実施形態によれば、本組成物は、キラル的に少なくとも９８％純粋な(2''R,3''S)トランスエナンチオマー、好ましくは少なくとも９９％以上の(2''R,3''S)トランスエナンチオマーを含んでいる。
本活性化合物は、好ましくは式（Ｉａ）（式中、ｎ＝２；Ｒ_１＝ＢｒおよびＣｌ；Ｒ_２＝ＨＯならびにＲ_３＝Ｈ）の化合物であるハロフジノンのＤ−エナンチオマー、その誘導体、またはハロフジノンの医薬上許容される塩である。
いくつかの好適な実施形態によれば、本発明は、本質的にＬ−エナンチオマーを含まない、ハロフジノンの単離されたＤ−エナンチオマーを含む医薬組成物であって、このときハロフジノンがキラル的に少なくとも９５％純粋、好ましくはキラル的に９８％純粋、より好ましくはキラル的に少なくとも９９％以上純粋なＤ−エナンチオマーである医薬組成物を提供する。

いくつかの実施形態によれば、キナゾリノン誘導体のキラル的に純粋なＤ−エナンチオマーを含む医薬組成物は、キナゾリノン誘導体のラセミ混合物を含む医薬組成物を投与すると現れる副作用に比較して減少した副作用を示す。
いくつかの実施形態では、減少した副作用には、悪心、嘔吐、唾液過多、下痢、無感動、低精子数、視覚問題、高血圧、低血圧、低体温症および正常血液検査値からの偏差から選択される少なくとも１つの減少した副作用が含まれる。
いくつかの実施形態では、本組成物のｐＨは、約３．５〜約８．５の範囲内にある。ここでの１つの好適な実施形態によれば、本組成物のｐＨは、７．０未満、好ましくは６．５未満、より好ましくは６．０未満、最も好ましくは５．５未満である。
いくつかの実施形態では、式Ｉａの化合物は、経口、局所および／または非経口投与のために調製される。１つの実施形態によれば、本医薬組成物は、経口投与のために液体もしくは固形で調製される。液体形は、水性もしくは非水性であってもよい。ここで本発明の好適な実施形態は、錠剤、カプセル剤、サシェ剤、散剤、顆粒剤およびトローチ剤からなる群から選択される固形医薬組成物に関する。

ここでいくつかの好適な実施形態によれば、キナゾリノン誘導体は、ハロフジノンであり、本組成物中のハロフジノンの単離されたキラル的に純粋なＤ−エナンチオマーの濃度は、約０．０００１％〜約３０％（ｗ／ｗ）の範囲内にある。他の実施形態では、本組成物中のハロフジノンの単離されたＤ−エナンチオマーの濃度は、約０．００１％〜約１０％の範囲内にある。
いくつかの実施形態では、本発明の医薬組成物は、局所使用のために調製され、本製剤は、クリーム剤、軟膏、ローション剤、ゲル剤、懸濁剤、水溶液もしくは補助溶剤、ロウ膏、リポソームおよびその他の薬物を局所投与するために適宜な医薬上許容される担体からなる群から選択される。ここで好ましい局所製剤は、エマルション、水で洗い流せない（油中水型）クリーム剤または水で洗い流せる（水中油型）クリーム剤、ローション剤、ロウ膏、ゲル剤などからなる群から選択される。

追加的な実施形態は、非経口使用のために調製された式Ｉａの化合物を含む医薬組成物を提供する。非経口投与用の医薬組成物は、好ましくは無菌注射液、無菌注射用懸濁液、使用直前に賦形剤と結合することによって復元できる無菌可溶性凍結乾燥粉末、無菌エマルション、マイクロエマルション、分散液、リポソーム送達形、ならびにコレステロール誘導体およびリン脂質を含むような脂質複合体からなる群から選択される。
非経口投与用の医薬組成物は、静脈内注射、静脈内注入、皮内、病変内、筋内、および皮下注射もしくはデポー剤のために適宜な形状で調製される；またはそれらは、例えば腹腔鏡視下で、もしくは小胞内へ注射以外の手段によって非経口的に投与することができる。
いくつかの実施形態によれば、有効成分として一般式Ｉａによる化合物を有する医薬組成物は、ハロフジノンなどのキナゾリノン化合物を用いた治療に応答性である線維性状態および増殖性疾患もしくは障害の治療において有用である。関連する適応症には、乾癬、ケロイド、過形成性瘢痕、アクネ、脂漏症および脱毛症を含む皮膚疾患が含まれる。好ましくは、皮膚障害は、乾癬、ケロイドおよび過形成性瘢痕からなる群から選択される。その他の適応症には、硬皮症、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、肝硬変、肺線維症、および腎線維症などの線維性疾患が含まれる。増殖性適応症には、再狭窄ならびに悪性および非悪性腫瘍が含まれる。

また別の実施態様によれば、本発明は、それを必要とする被験者を治療する方法であって、前記被験者に、(2''R,3''S)トランス配列を有して本質的に(2''S,3''R)トランスエナンチオマーを含まない治療有効量の一般式（Ｉａ）：

（式中、
ｎ＝１〜２であり、
Ｒ_１は、各発生時に水素、ハロゲン、ニトロ、低級アルキル、フェニルおよび低級アルコキシからなる群から独立して選択され；
Ｒ_２は、ヒドロキシ、アセトキシおよび低級アルコキシからなる群の一要素であり；および
Ｒ_３は、水素および低級アルケンオキシ−カルボニルからなる群の一要素である）を有する単離されたキナゾリノン誘導体、その医薬上許容される塩、および医薬上許容される担体もしくは希釈剤を含む医薬組成物を投与する工程を含み、前記組成物は、キナゾリノン誘導体のキラル的に少なくとも９５％純粋な(2''R,3''S)トランスエナンチオマーを含む方法を提供する。
１つの実施形態によれば、式Ｉａによる単離されたキナゾリノン誘導体は、ハロフジノン、その誘導体、またはハロフジノンの医薬上許容される塩である。
別の実施形態によれば、必要とする被験者は、ヒト被験者である。
上記およびそれ以外の本発明の利点および特徴は、添付の図面および非限定的な実施形態と共に以下の詳細な説明を参照することにより、当業者にはより明確に理解できよう。

以下、発明の例示を目的として、本発明を添付の図面を参照しつつ説明する。
本発明は、線維性および増殖性の疾患および障害を治療するための医薬組成物であって、有効成分としてキナゾリノン誘導体、好ましくはハロフジノンの単離された、キラル的に純粋なＤ−エナンチオマーを含む医薬組成物に関する。
用語の定義
本明細書で使用する用語「低級アルキル」は、Ｃ_１からＣ_６の直鎖もしくは分枝鎖アルキル基、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ヘキシル、イソヘキシルなどに関する。用語「アルケニル」は、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する基を意味する。
用語「アルコキシ」および「アルケンオキシ」は、−ＯＲを意味するが、ここでＲは、それぞれアルキルもしくはアルケニルを意味する。
本明細書で使用する用語「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素もしくはヨウ素を意味する。
本明細書で使用する「Ｄ−エナンチオマー」は、式Ｉａのキナゾリノン誘導体の(2''R,3''S)トランス配列を意味し、「Ｌ−エナンチオマー」は、(2''S,3''R)トランス配列を意味する。
本明細書で使用する用語「本質的にＬ−エナンチオマーを含まない」または「本質的に(2''S,3''R)トランスエナンチオマーを含まない」は、約５％未満のＬ−エナンチオマー、好ましくは約２％未満のＬ−エナンチオマー、より好ましくは１％未満のＬ−エナンチオマーを有するキナゾリノン化合物を意味する。
用語「エナンチオマー的に純粋」、「エナンチオマー純度」、「キラル純度」、および「キラル的に純粋」は、１つのエナンチオマー、一般にはＤ−エナンチオマー［式（Ｉａ）の化合物について言及する場合は(2''R,3''S)トランス］がその鏡像に関して大きな比率で組成物中に見いだされるという事実を反映するために使用されている。２つのエナンチオマー間の比率は、Ｄ−エナンチオマーの少なくとも９５％、好ましくは９８％、およびより好ましくは９９％以上である絶対比率によって表される。

１つの態様によれば、本発明は、線維性状態もしくは細胞増殖に関連する疾患および障害を治療するための医薬組成物であって、有効成分として、(2''R,3''S)トランス配列を有して本質的に(2''S,3''R)トランスエナンチオマーを含まない一般式（Ｉａ）：

（式中、
ｎ＝１〜２であり、
Ｒ_１は、各発生時に水素、ハロゲン、ニトロ、低級アルキル、フェニルおよび低級アルコキシからなる群から独立して選択され；
Ｒ_２は、ヒドロキシ、アセトキシおよび低級アルコキシからなる群の一要素であり；および
Ｒ_３は、水素および低級アルケンオキシ−カルボニルからなる群の一要素である）を有する単離されたキナゾリノン誘導体、およびその医薬上許容される塩を含み、そしてさらに医薬上許容される担体もしくは希釈剤を含み、前記組成物は、キラル的に少なくとも９５％純粋な(2''R,3''S)トランスエナンチオマーである組成物を提供する。
ここでの１つの好適な実施形態によれば、本活性化合物は、ハロフジノン、またはハロフジノンの医薬上許容される塩である。

ハロフジノンのエナンチオマー
図１に示すように、ハロフジノンは、ケトン架橋によってピペリジン環へ結合されているキナゾリン−４−オン成分を含有するアルカロイドである。ピペリジン環は、３’’位でヒドロキシル基と置換されている。
ピペリジン環の２’’および３’’位にある分子内には２つのキラル原子が存在するが、他方ハロフジノンは、３’’位でラセミ酸塩として合成される。炭素２’’での配列は、アルカリ性ｐＨを備える溶液中において自然に徐々に相互転換するため、これらの置換基の配列は、下記のスキームに記載するようにシスとトランスとの間で相互転換する。

その内容が参照として本明細書に全体として組み込まれるＰＣＴ国際特許公開ＷＯ０３／０７０１５３は、トランス異性体が医薬上活性な異性体であること、そしてトランス異性体からシス異性体への異性体化の速度は、酸性成分を医薬組成物に加えて本薬物にとって酸性環境を作り出すことによって低下することを開示している。ここで本発明は、キラル的に純粋な(2''R,3''S)トランスエナンチオマーが抗線維性および抗増殖性生物活性を有するエナンチオマーであることを開示する。従って、ここでのある好適な実施形態によれば、本発明の医薬組成物は、Ｄ−エナンチオマーのトランス配列を安定化させるように７．０未満のｐＨを有する。
有効成分のエナンチオマー純度は、当技術分野において知られているタイプの試験によって決定できる。典型的には、本発明によるハロフジノンエナンチオマーのキラル純度は、分析的キラルＨＰＬＣによって決定される。

いくつかの実施形態によれば、本発明の医薬組成物において使用されたハロフジノンは、少なくとも９５％のキラル純度、好ましくは少なくとも９８％、より好ましくは少なくとも９９％のキラル純度を特徴とする。
本発明は、ハロフジノンの単離されたＤ−エナンチオマーが、哺乳動物の細胞増殖およびコラーゲン合成を阻害する際の活性エナンチオマーであることを証明している。予想外であるが、一部の被験者では、ハロフジノンの単離されたＤ−エナンチオマーは、ラセミ混合物の投与後に頻繁に見られる望ましくない副作用の減少を証明する。そこで、いくつかの実施形態によれば、本発明の組成物および方法は、ハロフジノンのラセミ混合物の投与に関連する被験者における副作用の減少を提供する。
本明細書を通して特異的キナゾリノン誘導体である「ハロフジノン」について言及しているが、その代わりに式Ｉ（ａ）による他のキナゾリノン誘導体を使用できることは理解されている。

医薬組成物
ある好適な実施形態では、本発明は、局所、非経口または経口投与用の医薬組成物を提供する。医薬組成物の調製に当たり、ハロフジノンに敏感に応答する適応症における、Ｄ−エナンチオマーの使用は、増加した活性ならびに高活性を同時に保持しながら減少した副作用に起因して望ましい。
ここでのいくつかの好適な実施形態によれば、本組成物中のハロフジノンの単離されたＤ−エナンチオマーの濃度は、０．０００１〜３０％（ｗ／ｗ）の範囲内、好ましくは０．００１〜１０％（ｗ／ｗ）の範囲内にある。
適応症
ハロフジノンの抗線維性および抗増殖性特性によって、本発明による組成物がそれらの病因もしくは病気の発生に関係する線維性もしくは増殖性メカニズムを有する適応症を治療するために有用であることは理解されるであろう。本発明の医薬組成物は、ハロフジノンの単離されたキラル的に純粋なＤ−エナンチオマーを含み、ハロフジノンのラセミ混合物によって誘導される副作用に敏感なそれを必要とする被験者を治療するのに特に有用である。

本発明の組成物の好ましい服用量、治療期間、投与レジメンおよび投与様式は、治療すべき状況に関連するパラメーターならびに治療される被験者の特性（治療される被験者の年齢、身長、性別、および全身状態）に依存するであろう。いくつかの実施形態によれば、投与すべきハロフジノンの総用量は、約０．００５〜約０．２０ｍｇ／Ｋｇ（体重）／日であってもよい。ハロフジノンのラセミ混合物の経口投与に関連して報告された最も一般的な有害事象は、悪心および嘔吐であった（その内容は本明細書に全体として組み込まれるＰＣＴ国際特許公開ＷＯ２００５／０７９７０３）。そのＰＣＴ国際特許出願の開示によれば、これらの有害作用は、ハロフジノンの分割投与レジメンによって克服することができる。しかし、１日３回以上の投与レジメンは非常に望ましくないことであり、それは典型的には極めて低い患者のコンプライアンスを生じさせる。有益にも、本発明は、以下において、その有害な副作用を回避しつつ、ハロフジノンのラセミ混合物の生物活性を維持している、ハロフジノンの高度に純粋なＤ−エナンチオマーを含む医薬組成物を開示する。

いくつかの実施形態によれば、本発明の組成物は、乾癬、ケロイド、過形成性瘢痕、アクネ、脂漏症および脱毛症を含む皮膚の疾患および障害を治療するのに有用である。好ましくは、皮膚障害は、乾癬、ケロイドおよび過形成性瘢痕からなる群から選択される。本発明の組成物を使用するためのその他の適応症には、硬皮症、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、肝硬変、肺線維症、および腎線維症などの線維性疾患が含まれる。増殖性の適応症には、再狭窄、血管新生関連疾患ならびに悪性腫瘍および非悪性腫瘍を含む癌が含まれる。本発明は、創傷治癒の誘導および癒着防止のための医薬組成物の使用をさらに含むことを意図している。
本発明の１つの実施形態では、一般式（Ｉａ）の化合物は、血管新生関連疾患、特に腫瘍血管新生および腫瘍進行を含む増殖性の疾患もしくは障害を予防および治療するための薬剤を調製するために有用である。本発明の別の実施形態では、本化合物は、悪性細胞増殖性疾患もしくは障害を予防、治療、または阻害するために有用である。これら２つの実施形態によれば、本化合物は、例えば全タイプの白血病およびリンパ腫を含むがそれらに限定されない造血性悪性腫瘍を含む非充実性癌、ならびに乳癌、卵巣癌、前立腺癌、結腸癌、子宮頸癌、胃癌、食道癌、乳頭癌、甲状腺癌、膵臓癌、膀胱癌、大腸癌、黒色腫、小細胞肺癌および非小細胞肺癌、顆粒状細胞癌、移行細胞癌、血管癌、全タイプの肉腫、例えば骨肉腫、軟骨肉腫、カポジ肉腫、筋肉種、血管肉腫、および膠芽細胞腫を含むがそれらに限定されない充実性腫瘍の治療もしくは予防のために有用である。
用語「細胞増殖に関連する疾患もしくは障害を治療する工程」または「増殖性疾患もしくは障害を治療する工程」は、腫瘍、再狭窄および線維症を含むことを理解されたい。さらに、用語「非充実性癌を治療もしくは阻害する工程」および「腫瘍を治療もしくは阻害する工程」は、腫瘍形成、原発性腫瘍、腫瘍進行もしくは腫瘍転移を含むことを意図している。

投与方法
経口投与
経口投与用の医薬組成物は、液体または固形製剤として調製できる。
いくつかの実施形態では、経口投与用の医薬組成物は、無菌溶液、無菌懸濁液、使用直前に賦形剤と結合することによって復元できる無菌可溶性凍結乾燥粉末、無菌エマルション、マイクロエマルション、分散液、リポソーム製剤、ならびにコレステロール誘導体およびリン脂質を含むような脂質複合体からなる群から選択される形状に調製される。
いくつかの実施形態では、溶液および賦形剤は、水性および非水性溶液から選択される。好ましくは、経口液剤のための水性賦形剤は、無菌水および塩化ナトリウムからなる群から選択される。
経口製剤は、グリコール酸、乳酸、リンゴ酸、マレイン酸、クエン酸、アスコルビン酸、安息香酸からなる群から選択される酸性化合物をさらに含むように調製できる。１つの好適な実施形態では、水性の経口液剤もしくは賦形剤は、緩衝剤をさらに含む。１つの実施形態では、水性経口液剤のｐＨは、３．５〜８．５の範囲内である。ここで１つの好適な実施形態によれば、経口製剤のｐＨは、７．０未満、好ましくは６．５未満、より好ましくは６．０未満、および最も好ましくは５．５未満である。

他の実施形態では、水性経口賦形剤は、エチルアルコール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールおよびそれらの混合物などの共溶媒をさらに含んでもよい。
１つの実施形態では、無菌製剤は、水性賦形剤によって復元できる凍結乾燥粉末を含んでもよい。このような凍結乾燥粉末は、キナゾリノン誘導体のＤ−エナンチオマーおよび固形の医薬上許容される緩衝剤もしくは水溶性有機酸を含んでいる。本組成物において使用される緩衝剤もしくは有機酸は、経口使用のために承認されている非毒性緩衝剤もしくは有機酸であってもよい。
任意で、保存剤、酸化防止剤および張度調整剤からなる群から選択された少なくとも１つの追加の成分を本製剤に加えることができる。１つの実施形態では、保存剤は、ベンジルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、メチルパラベンのナトリウム塩からなる群から選択される。

別の実施形態では、張度調整剤は、塩化ナトリウム、マンニトール、デキストロース、グルコース、ラクトースおよびスクロースを含む群から選択される。
他の実施形態では、本発明は、錠剤、カプセル剤、サシェ剤、散剤、顆粒剤およびトローチ剤からなる群から選択された経口投与用の固形医薬組成物に関する。
いくつかの実施形態では、本発明は、活性化合物に加えて、デンプン、アラビアゴム、ケイ酸塩カルシウム、微結晶セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップ、およびメチルセルロースを含むがそれらに限定されない、適宜な賦形剤を含有する錠剤として調製された固形医薬組成物に関する。本製剤は、追加して、例えばタルク、ステアリン酸塩マグネシウムおよび鉱油などの潤滑剤；湿潤剤、乳化剤および懸濁化剤；ヒドロキシ安息香酸塩メチルおよびヒドロキシ安息香酸塩プロピルなどの保存剤；甘味剤；または香味剤を含むことができる。ポリオール、緩衝剤、および不活性充填剤もまた使用できる。ポリオールの例には、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、スクロース、マルトース、グルコース、ラクトース、デキストロースなどが含まれるが、それらに限定されない。適宜な緩衝剤には、リン酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩などが含まれるが、それらに限定されない。使用できるその他の不活性充填剤には、当技術分野において知られていて様々な製剤の製造において有用である充填剤を含むことができる。希望すれば、固形医薬組成物には増量剤および／または造粒剤などの他の成分を含むことができる。本発明の組成物は、当技術分野においてよく知られている手法を使用することにより、患者へ投与後に有効成分の迅速放出、持続性放出、または遅延放出を提供するように調製できる。
他の実施形態では、固形製剤は、アスコルビン酸、クエン酸、マレイン酸およびステアリン酸からなる群から選択される酸性化合物をさらに含むことができる。

局所投与
局所使用のために調製された本発明の医薬組成物は、クリーム剤、軟膏、ローション剤、ゲル剤、フォーム剤、懸濁剤、水溶液もしくは共溶媒溶液、ロウ膏およびリポソーム、ならびにその他の薬物を局所投与するために適宜な医薬上許容される担体からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、局所製剤は、エマルション、水で洗い流せない（油中水型）クリーム剤または水で洗い流せる（水中油型）クリーム剤、ローション剤、ロウ膏などからなる群から選択される。
当技術分野においてよく知られているように、担体の物理化学的特性は、増粘剤、ゲル化剤、湿潤剤、凝固剤、懸濁化剤などを含むが、それらに限定されない様々な賦形剤の添加によって操作することができる。これらの任意の賦形剤は、投与がより快適または便宜的であるように結果として生じる製剤の物理的特徴を決定するであろう。選択された賦形剤が製剤の保管安定性を好ましくは増強し、またいかなる場合においても、それを妨害してはならないことは、当業者であれば認識できよう。
局所用組成物中のハロフジノン濃度は、０．０００１〜１０％（ｗ／ｗ）の範囲内であり、最も好ましくは０．００１〜２％（ｗ／ｗ）の範囲内である。

いくつかの実施形態では、本発明の局所製剤に使用するための医薬組成物は、脂肪族系酸、芳香族系酸、酢酸、アスコルビン酸もしくは安息香酸、クエン酸、グリコール酸、乳酸、リンゴ酸およびマレイン酸からなる群から選択された酸性化合物をさらに含んでいる。ここでの１つの好適な実施形態によれば、本発明の局所製剤において使用するための酸性化合物は、乳酸である。
本発明のここでの１つの好適な実施形態によれば、本発明は、活性化合物に加えて、（ａ）疎水性成分；（ｂ）親水性水性成分；および（ｃ）少なくとも１つの乳化剤を含むクリーム製剤を提供するが、ここで水性成分のｐＨは、７．０未満である。
好ましくは、クリーム剤の疎水性成分は、組成物の総重量に基づいて約１０％〜約９０％（ｗ／ｗ）の量で存在し、最も好ましくは、クリーム剤の疎水性成分は、組成物の総重量に基づいて約２０％〜約８０％（ｗ／ｗ）の量で存在する。
クリーム剤の疎水性成分は、鉱油、黄色ソフトパラフィン（ワセリン）、白色ソフトパラフィン（ワセリン）、パラフィン（固形パラフィン）、重いパラフィン油、含水羊毛脂（含水ラノリン）、羊毛脂（ラノリン）、羊毛アルコール（ラノリンアルコール）、ペトロラタムとラノリンアルコール、蜜ロウ、セチルアルコール、アーモンド油、落花生油、ヒマシ油、水素化ヒマシ油ワックス、綿実油、オレイン酸塩エチル、オリーブ油、ゴマ油、およびそれらの混合物からなる群によって例示される。

クリーム剤の親水性水性成分を例示するのは、水単独、プロピレングリコールあるいはまた任意の医薬上許容される緩衝剤もしくは溶液である。好ましくは、クリーム剤の親水性成分は、組成物の総重量に基づいて約１０％〜約９０％（ｗ／ｗ）で存在し、最も好ましくは、クリーム剤の親水性成分は、組成物の総重量に基づいて約２０％〜約８０％（ｗ／ｗ）で存在する。
代表的な緩衝剤は、酢酸塩、ホウ酸塩（ホウ砂）、クエン酸塩、乳酸塩、リン酸塩およびそれらの混合物である。
クリーム剤を安定化させ、液滴の合体を防止するためには、クリーム剤に乳化剤を添加することができる。乳化剤は、表面張力を低下させて、安定性のある凝集性の界面膜を形成する。
複合乳化剤を含む適宜な親水性乳化剤は、当技術分野において知られており、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０）、ポリオキシエチレンソルビタンモノパルミテート（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）４０）、ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）６０）、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０）、ポリオキシエチレンラウリルエーテル（Ｂｒｉｊ ３５）、ポリオキシエチレンひまし油（Ａｔｌａｓ Ｇ−１７９４）、ラウリル硫酸塩ナトリウム、セトリミド、セトマクロゴールおよびそれらの混合物からなる群によって例示されるが、それらに限定されない。

複合乳化剤を含む適宜な疎水性乳化剤は、当技術分野において知られており、ソルビタントリオレエート（Ｓｐａｎ ８５、Ａｒａｃｅｌ ８５）、ソルビタントリステアレート、ソルビタンセスキオレエート（Ａｒａｃｅｌ ８３）、（Ｓｐａｎ ６５）、ソルビタンモノオレエート（Ｓｐａｎ ８０）、プロピレングリコールモノステアレート、ソルビタンセスキオレエート（Ａｒａｃｅｌ Ｃ）、グリセロールモノステアレート、プロピレングリコールモノラウレート（Ａｔｌａｓ Ｇ−９１７、Ａｔｌａｓ Ｇ−３８５１）、ソルビタンモノステアレート（Ｓｐａｎ ６０、Ａｒａｃｅｌ ６０）、ソルビタンモノパルミテート（Ｓｐａｎ ４０、Ａｒａｃｅｌ ４０）、ソルビタンモノラウレート（Ｓｐａｎ ２０、Ａｒａｃｅｌ ２０）、セトステアリルアルコール、セチルアルコール、オレイン酸、ステアリン酸およびそれらの混合物からなる群によって例示されるが、それらに限定されない。
適宜な乳化剤は、コレステロール、セトステアリルアルコール、羊毛脂肪（ラノリン）、羊毛アルコール（ラノリンアルコール）、含水羊毛脂肪（含水ラノリン）、およびそれらの混合物によって例示されるが、それらに限定されない。

１つの実施形態では、クリーム剤中の少なくとも１つの乳化剤の濃度は、組成物の総重量に基づいて約２％〜約４０％（ｗ／ｗ）の範囲内である。
別の実施形態では、本発明の医薬組成物は、水性懸濁剤の形状で調製される。好適な実施形態では、活性化合物に加えて、（ａ）水性媒体；および（ｂ）懸濁化剤もしくは増粘剤、（ｃ）酸性化合物、任意で追加の賦形剤を含む懸濁剤が、上記に詳述したように添加される。
適宜な懸濁化剤もしくは増粘剤は、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロースおよびヒドロキシプロピルセルロースなどのセルロース誘導体、アルギン酸およびその誘導体、キサンタンゴム、グアルゴム、アラビアゴム、トラガントゴム、ゼラチン、アカシア、ベントナイト、デンプン、微結晶セルロース、ポビドンおよびそれらの混合物からなる群によって例示されるが、それらに限定されない。
いくつかの実施形態では、懸濁化剤もしくは増粘剤は、組成物の総重量に基づいて約０．１％〜約１５％（ｗ／ｗ）の量で存在する。

別の実施形態では、水性懸濁剤は、湿潤剤、凝固剤、増粘剤などからなる群から選択された追加の賦形剤を任意で含有してもよい。
適宜な湿潤剤は、グリセロールポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールおよびそれらの混合物、ならびに界面活性剤からなる群によって例示されるが、それらに限定されない。懸濁剤中の湿潤剤の濃度は、湿潤剤の実現可能な最低濃度を用いて懸濁剤内の医薬粉末の最適な分散を達成するように選択されなければならない。
適宜な凝固剤は、電解質、界面活性剤、およびポリマーからなる群によって例示されるが、それらに限定されない。
懸濁化剤、湿潤剤および凝固剤は、医薬上有効な薬物の安定な懸濁剤を形成するために有効な量で提供される。

別の好適な実施形態では、本発明のゲル製剤は、活性化合物に追加して少なくとも１つのゲル化剤および酸性化合物を含んでいる。
適宜なゲル化剤は、親水性ポリマー、天然ゴムおよび合成ゴム、架橋タンパク質およびそれらの混合物からなる群によって例示されるが、それらに限定されない。好適な実施形態では、ポリマーは、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシエチルメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ならびにアミロース、デキストラン、キトサン、プルランおよびその他の類似した多糖類の誘導体；アルブミン、ゼラチンおよびコラーゲンなどの架橋タンパク質；Ｃａｒｂｏｐｏｌ、Ｅｕｄｒａｇｉｔなどのアクリルをベースとするポリマーゲル、ヒドロキシエチルメタクリレートをベースとするゲルポリマー、ポリウレタンをベースとするゲルならびにそれらの混合物からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、ゴムは、アカシア、寒天、カラゲナン、デキストリン、ゼラチン、グアルゴム、ヒアルロン酸、トラガントゴム、キサンタンゴムおよびそれらの混合物からなる群から選択される。好適な実施形態では、ゲル化剤は、組成物の総重量に基づいて約１％〜約２５％（ｗ／ｗ）の量で存在する。好適な実施形態では、ゲルの水相のｐＨは、１．０〜６．８の範囲内である。

別の実施形態では、本発明の医薬組成物は、液剤として調製される。そのような液剤は、活性化合物に追加して、水、緩衝液、有機溶剤、例えばエチルアルコール、イソプロピルアルコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、グリセリン、グリコフォロール（ｇｌｙｃｏｆｏｒｏｌ）、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）、乳酸塩エチル、乳酸塩メチル、Ｎ−メチルピロリドン、エトキシル化トコフェロールおよびそれらの混合物からなる群によって例示されるが、それらに限定されない酸性化合物および少なくとも１つの共溶媒溶液を含んでいる。
好適な実施形態では、液剤は、１〜６．８のｐＨ範囲の水溶液中に溶解または分散させた活性物質の混合液を含む。あるいはまた、ハロフジノンの共溶媒溶液は、エタノール、イソプロパノール、グリセロール、プロピレングリコール、低分子量ポリ（エチレングリコール）およびそれとプロピレングリコールとのコポリマーなどの医薬上許容される有機溶剤を使用して調製することができる。これらの溶液は、親水性成分の混合液として維持できるが、経口および全身性ならびに局所使用のための様々な量で水を含有してもよい。
液剤中のハロフジノンの好ましい濃度は、約０．０００１〜約１％（ｗ／ｗ）である。本明細書のいくつかの好適な実施形態によれば、水を含有する液剤は、薬物であるハロフジノンの刺激または分解を回避するために１〜６．８のｐＨ範囲内に維持されなければならない。

本発明の局所組成物は、保存剤、酸化防止剤、保湿剤、皮膚軟化剤、増粘剤、構造化剤、安定剤、着色剤および香料からなる群から選択された少なくとも１つの追加の成分を任意で含有してもよい。
クリーム剤、軟膏剤、ローション剤およびゲル剤は、微細に分割化もしくは粉末化形単独で、または液剤もしくは懸濁剤中、水溶液もしくは非水溶液中のハロフジノンを医薬担体へ組み込むことによって調製してもよい。
ハロフジノンは、選択された医薬担体中でのハロフジノンの溶解性によって、医薬担体中に溶解、分散、懸濁させる、または部分的に分散および部分的に溶解させることができる。

非経口投与
非経口投与用医薬組成物は、静脈内注射、静脈内注入、皮内、病変内、筋内、および皮下注射もしくはデポー剤のために調製される；またはそれらは、注射以外の手段によって非経口的に投与することができ、例えば腹腔鏡視下で、小胞内へ、または消化管と関連しないいずれかの開口部を通して導入することもできよう。
１つの実施形態では、非経口投与用の医薬組成物は、好ましくは無菌注射液、無菌注射用懸濁液、使用直前に賦形剤と結合することによって復元できる無菌可溶性凍結乾燥粉末、無菌エマルション、マイクロエマルション、分散液、リポソーム製剤、ならびにコレステロール誘導体およびリン脂質を含むような脂質複合体からなる群から選択される製剤である。
１つの好適な実施形態では、液剤および賦形剤は、水溶液または非水溶液からなる群から選択される。１つの好適な実施形態では、水性非経口液剤および賦形剤は、無菌注射用水、塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、等張性デキストロース注射液、デキストロースおよび乳酸化リンゲル注射液からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、水性非経口液剤もしくは賦形剤は、緩衝剤をさらに含む。ここでの好適な実施形態では、水性非経口液剤のｐＨは、３．５〜６．０の範囲内である。非経口製剤のための酸性化合物は、アスコルビン酸および安息香酸、クエン酸、グリコール酸、乳酸、リンゴ酸およびマレイン酸からなる群から選択される。
水性非経口賦形剤は、エチルアルコール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールおよびそれらの混合物などの水混和性溶剤とも呼ばれる共溶媒をさらに含んでもよい。
無菌注射液は、水性賦形剤によって復元できる凍結乾燥粉末を含んでもよい。このような凍結乾燥粉末は、キナゾリノン誘導体および固形の医薬上許容される緩衝剤もしくは水溶性有機酸を含んでいる。本組成物において使用される緩衝剤もしくは有機酸は、非経口使用のために承認されている非毒性緩衝剤または有機酸であってもよい。

ここでの好適な実施形態では、緩衝剤もしくは有機酸は、水もしくはその他の医薬上許容される賦形剤を用いての復元後に製剤のｐＨは、約３．５〜約６．０であるような量で存在する。
任意で、保存剤、酸化防止剤および張度調整剤からなる群から選択された少なくとも１つの追加の成分を使用できる。
保存剤は、ベンジルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、メチルパラベンのナトリウム塩からなる群から選択されてもよい。張度調整剤は、塩化ナトリウム、マンニトール、デキストロース、グルコース、ラクトースおよびスクロースからなる群から選択される。
本発明は、以下の説明で規定する成分の構造および配列の詳細に、その適用が限定されるものではないことを理解されたい。本発明にはその他の実施形態が含まれ、様々な方法で実践または実施することができる。さらに、本明細書で使用する表現および用語は、単に本発明の説明を目的とするものであり、本発明を限定するためのものとは、見なすべきでないことを理解されたい。

［実施例］
［実施例１］
ハロフジノンのエナンチオマーの精製
ハロフジノンのＤ−エナンチオマーおよびＬ−エナンチオマーは、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製のＣｈｉｒｏｂｉｏｔｉｃ Ｖ２カラム（２５０×２１．２ｍｍ、５μシリカ）上でラセミ混合物から単離した。４ｍｇのラセミ混合物をカラムに装填した。移動相は、ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ中の０．２重量％のＮＨ_４ＴＦＡ（９０／１０）であった。流量は、１６ｍｌ／分に設定した。ＵＶ吸収は、２３℃の温度で２４３ｎｍに設定した。十分な質および量の所望のエナンチオマーを入手するために、この手順を必要に応じて繰り返した。
Ｄ−エナンチオマー（エナンチオマー１）についての保持時間は、１４．２分間であった。キラル純度は、９９．８０％であると決定された。Ｌ−エナンチオマー（エナンチオマー２）についての保持時間は、１６．２分間であった。キラル純度は、９８．９７％であると決定された。単離したエナンチオマーをさらにｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏアッセイにおいて分析した。純度は、分析キラルＨＰＬＣによって決定した。

［実施例２］
Ｄ−エナンチオマーによる細胞増殖の阻害
本試験では、トランス−ハロフジノンエナンチオマーの各々が培養されて能動的に増殖している細胞の増殖に及ぼす作用をラセミ混合物と比較することを試みた。
細胞
ヒト大動脈平滑筋細胞（ｈＡｏＳＭＣ）およびヒト臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）は、Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ社から購入し、Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ社製の適宜な増殖培地中で増殖させた。ヒト皮膚線維芽細胞（Ｄｅｔｒｏｉｔ ５５１）およびヒト線維肉腫（ＨＴ １０８０）細胞株は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ）から購入し、１０％のＦＣＳ、１ｍＭピルビン酸塩ナトリウム、２ｍＭのＬ−グルタミンおよび０．２％抗生物質溶液（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ社、イスラエル国Ｂｅｉｔ−Ｈａｅｍｅｋ）を補給したＭＥＭ中で増殖させた。ヒト膀胱癌（５６３７）およびヒト乳癌（ＭＤＡ−ＭＢ−４３５Ｓ）細胞株は、ＡＴＣＣから購入し、１０％のＦＣＳおよび０．２％抗生物質溶液（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ社、イスラエル国Ｂｅｉｔ−Ｈａｅｍｅｋ）を補給したＤＭＥＭ中で増殖させた。細胞は、３７℃および５％のＣＯ_２中で増殖させた。

細胞増殖アッセイ
細胞を９６ウエルプレートに播種した。２４時間後、試験化合物は、濃度を増加させながらウエルに添加した。培養がサブコンフルエンスに達した時点（播種の７２〜９６時間後）に、細胞を２．５％グルタルアルデヒドで固定し、蒸留水で３回洗浄し、次に０．１Ｍ ホウ酸緩衝剤（ｐＨ８．５）で１回洗浄した。その後、１００μＬのメチレンブルー（ホウ酸緩衝剤中で１％、ｐＨ８．５）を各ウエルに加え、室温で６０分間培養した。細胞が結合していない染料を除去するために、細胞を蒸留水中で十分に洗浄した。次にプレートを乾燥させ、３７℃で６０分間にわたり２００μＬ／ウエルの０．１Ｎ ＨＣｌを用いてメチレンブルーを抽出した。マイクロプレート分光光度計を用いて６２０ｎｍでの光学密度を決定した。
図２は、上述したように実施例１に記載した通りに入手したハロフジノンの精製Ｄ−エナンチオマー、精製Ｌ−エナンチオマー、またはハロフジノンのラセミ混合物で処理した様々な細胞株の増殖曲線を示している。Ｄ−エナンチオマー（エナンチオマー１）は、試験した全細胞の増殖を用量依存方法で抑制し、ラセミ混合物より約２倍以上活性であった。これとは対照的に、Ｌ−エナンチオマー（エナンチオマー２）は、試験した全細胞において細胞増殖に全く作用を及ぼさなかった。

［実施例３］
Ｄ−エナンチオマーによる線維芽細胞のコラーゲン合成の阻害
肝硬変、肺線維症および腎線維症、硬皮症などの進行性線維増殖性疾患は、正常組織の構成および機能の破壊を生じさせる結合組織の過剰産生を示す。線維性反応は、結果として増加した増殖ならびに細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の沈着を生じさせる組織細胞の刺激反応を含むと考えられている。コラーゲンは、線維性病変内で合成される主要ＥＣＭ分子であることが分かった。肺線維症および腎線維症におけるようなある一部の場合には、線維芽細胞は、極めて重要な役割を果たすと思われる。
皮膚線維芽細胞（Ｄｅｔｒｏｉｔ ５５１）を９６ウエルプレートに播種した（３，０００ｃｅｌｌｓ／ウエル）。２４時間後、細胞は、７５μＭアスコルビン酸とともに試験化合物の濃度を増加させながら、さらに４８時間培養した（誘導培地は、２４時間後に交換した）。細胞培地を収集し、「ＭＥＴＲＡ」のＰｒｏｌａｇｅｎ−Ｃ ＥＬＩＳＡキットを使用してコラーゲンＩＣ’型プロペプチド（ＣＩＣＰ）の濃度を検出した。
図３は、ハロフジノンのＤ−エナンチオマー（エナンチオマー１）が、皮膚線維芽細胞のコラーゲンＩ型合成を用量依存方法で抑制し、ラセミ混合物より約２倍以上活性であることを示す。これとは対照的に、Ｌ−エナンチオマー（エナンチオマー２）は、線維芽細胞のコラーゲン合成に全く何の作用も及ぼさなかった。

［実施例４］
ハロフジノンのＤ−エナンチオマーの毒性試験
本試験の目的は、イヌにおいて経口チューブ投与による４週間にわたる試験においてハロフジノンの純粋Ｄ−エナンチオマーの作用なしレベルおよび毒性用量値を入手することである。
３群の純血種ビーグル犬にハロフジノンの純粋Ｄ−エナンチオマーを、４週間にわたり０．０３７５、０．０７もしくは０．１５ｍｇ／ｋｇ／日の用量で１日１回経口チューブ投与により摂取させる。第４群には、同一頻度で賦形剤単独を摂取させ、コントロールとして機能させる。
本試験を通して臨床徴候、体重および飼料摂取量のデータを記録する。間隔をあけて精子分析、心電図、血圧測定、眼科検査および臨床検査（血液学、血液化学、尿分析および便潜血検査）を実施する。試験終了の時点で生き残った全てのイヌを人道的に致死させ、肉眼的検査のために骨髄塗抹標本を採取し、選択した器官重量を記録する。身体組織は、その後の組織病理学検査のために保存する。
結果には、計画外の死亡、ならびに処置が心電図、血圧、精子数および生育性、尿分析および血液化学に及ぼす作用の記録が含まれる。眼科検査が含まれる。
軟便／液便、嘔吐、唾液過多、体重、安静時挙動および体温を含む臨床徴候を記録する。

［実施例５］
ハロフジノンのＤ−エナンチオマー製剤の調製方法
チューブ投与用のハロフジノン液剤の調製
４００μｌの乳酸を５ｍｌの二重蒸留（ＤＤ）水中に溶解させる。この混合液のｐＨは、約５００μｌの３０％（ｗ／ｖ、ＤＤ水中）のＮａＯＨを用いてｐＨ４．０〜４．５へ調整する。ＤＤ水を用いてこの液剤の容積を１０ｍｌとする。上記の実施例１に記載した通りに入手したハロフジノンの単離したＤ−エナンチオマーを最終濃度が１ｍｇ／ｍｌ（上述した溶液５ｍｌ中に５ｍｇのハロフジノン）となるように加える。次にこの溶液を完全溶解するまで１分間未満にわたり４０〜４５℃で加熱する。結果として生じたストック液は、注射前に必要な濃度までＤＤ水を用いて希釈できよう。

注射用のハロフジノン液剤の調製
４００μｌの乳酸を５ｍｌの二重蒸留（ＤＤ）水中に溶解させる。この混合液のｐＨは、約５００μｌの３０％（ｗ／ｖ、ＤＤ水中）のＮａＯＨを用いてｐＨ４．０〜４．５に調整する。ＤＤ水を用いてこの液剤の総容積を１０ｍｌとする。上記の実施例１に記載した通りに入手したハロフジノンの単離したＤ−エナンチオマーを最終濃度が１ｍｇ／ｍｌ（上述した溶液５ｍｌ中に５ｍｇのハロフジノン）となるように加える。次にこの溶液を完全溶解するまで１分間未満にわたり４０〜４５℃で加熱する。結果として生じたストック液は、生理食塩液を用いて０．２５ｍｇ／ｍｌ未満の必要な濃度へ希釈し、その後０．２μフィルターを通してフィルター滅菌する。

局所投与
局所投与製剤は、ゲル剤、懸濁剤、水溶液もしくは共溶媒溶液、ロウ膏、リポソーム剤およびクリーム剤を含んでもよい。
ハロフジノンの単離したＤ−エナンチオマーの局所投与用の予備製剤は、２つの方法で調製した：親水性ゲル剤および親油性クリーム剤。
親水性ゲル剤：ゲル剤は、ゼリー状物質：ポリエチレングリコール（Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ−Ｌｕｔｒｏｌ Ｆ １２７）または合成セルロース誘導体−ヒドロキシエチルセルロース−（Ｎａｔｒｏｓｏｌ ２５０ ＨＸ Ｐｈａｒｍ）を用いて調製する。
すべての調製物は、＋４０℃で物理的に安定性である。
親油性クリーム剤：重いパラフィン油を含有する油中水（ｗ／ｏ）型クリーム剤は、シリコーンポリマー乳化剤（セチルジメチコンコポリオールおよびポリグリセリル−４−イソステアレート、Ａｂｉｌ ＷＥ０９）を使用して調製できる。この系の長所は、工程中に加熱を必要とせず、エマルションが極めて安定性である点である。
様々な濃度（粘度）を有する上記の製剤の変種を調製する。化粧品ではシリコーンポリマーが乳化剤として広範に使用されているが、シリコーンポリマーは、いずれの薬局方にも登録されていない。このため、乳化剤は、ｗ／ｏ型エマルションに特異的な非イオン性乳化剤であるソルビタンセスキオレエート（Ａｒｌａｃｅｌ ８３）と取り替えることができる。パラフィン油を含有する油相、および合成ワックス：水素化ヒマシ油（カスターワックス）を増粘剤として使用できる。プロトタイプの安定性は、様々な条件下で測定する。

経口投与用製剤
経口投与用の錠剤の調製では、有効成分は、その乾燥形で適用される。０．５ｍｇのハロフジノン、４ｍｇのクエン酸、２ｍｇのステアリン酸塩マグネシウム（ＮＦ：米国民医薬品集）、４ｍｇのタルク（ＵＳＰ：米国薬局方）、８９．３ｍｇの微結晶セルロース（ＮＦ）、４ｍｇのクロスポビドン（ＮＦ）、０．２ｍｇのコロイド状二酸化シリコン（ＮＦ）、および９６ｍｇのラクトース一水化物（ＮＦ）を含む錠剤が調製された。

上記の特定の実施形態についての説明は、不要な実験を行わず、また一般的概念から逸脱せずに、現時点での知識を適用することによって他者がそれらの実施形態を変形および／または様々な用途に適宜に適合させることができる本発明の一般的性質を十分に解明しており、また、このためそれらの適合および変形は、本明細書に開示した実施形態の意味および同等物の範囲内に包含されることを意図している。本明細書で使用した表現または用語は、本発明を限定するためではなく説明するためのものであることを理解されたい。様々な開示された化学構造および機能を実行するための手段、材料および工程は、本発明から逸脱することなく、また別の様々な形態を採用してもよい。

ハロフジノンのＤ−エナンチオマーおよびＬ−エナンチオマーの化学構造を示す図である。 Ｄ−エナンチオマーおよびＬ−エナンチオマー（それぞれエナンチオマー１および２）およびラセミ混合物がヒト大動脈平滑筋細胞（ｈＡｏＳＭＣ）の細胞増殖を阻害する際の作用を示す図である。 Ｄ−エナンチオマーおよびＬ−エナンチオマー（それぞれエナンチオマー１および２）およびラセミ混合物がヒト臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）の細胞増殖を阻害する際の作用を示す図である。 Ｄ−エナンチオマーおよびＬ−エナンチオマー（それぞれエナンチオマー１および２）およびラセミ混合物がヒト皮膚線維芽細胞（Ｄｅｔｒｏｉｔ ５５１）の細胞増殖を阻害する際の作用を示す図である。 Ｄ−エナンチオマーおよびＬ−エナンチオマー（それぞれエナンチオマー１および２）およびラセミ混合物がヒト膀胱癌（５６３７）の細胞増殖を阻害する際の作用を示す図である。 Ｄ−エナンチオマーおよびＬ−エナンチオマー（それぞれエナンチオマー１および２）およびラセミ混合物がヒト線維肉腫（ＨＴｌ０８）の細胞増殖を阻害する際の作用を示す図である。 Ｄ−エナンチオマーおよびＬ−エナンチオマー（それぞれエナンチオマー１および２）およびラセミ混合物がヒト乳癌（ＭＤＡ−ＭＢ−４３５Ｓ）（図２Ｆ）の細胞増殖を阻害する際の作用を示す図である。 Ｄ−エナンチオマーおよびＬ−エナンチオマーならびにラセミ混合物によるコラーゲンＩ型発現の抑制のレベルを示す図である。（−）ＡＡ：アスコルビン酸によって誘導されなかった細胞。ＮＨ_４ＴＦＡ：ハロフジノンを使用せずに、そして適切な量の塩ＮＨ_４ＴＦＡを使用して誘導された細胞。

Claims (41)

1. 線維性状態もしくは細胞増殖に関連する疾患および障害を治療するための医薬組成物であって、有効成分として、（２’’Ｒ，３’’Ｓ）トランス配列を有して本質的に（２’’Ｓ，３’’Ｒ）トランスエナンチオマーを含まない一般式（Ｉａ）：
   

   

   （式中、
   ｎ＝１〜２であり、
   Ｒ_１は、各発生時に水素、ハロゲン、ニトロ、低級アルキル、フェニルおよび低級アルコキシからなる群から独立して選択され；
   Ｒ_２は、ヒドロキシ、アセトキシおよび低級アルコキシからなる群の一要素であり；および
   Ｒ_３は、水素および低級アルケンオキシ−カルボニルからなる群の一要素である）を有する単離されたキナゾリノン誘導体、およびその医薬上許容される塩を含み、そして医薬上許容される担体もしくは希釈剤をさらに含み、前記キナゾリノン誘導体は、キラル的に少なくとも９５％純粋な（２’’Ｒ，３’’Ｓ）トランスエナンチオマーである医薬組成物。
2. 前記組成物は、キラル的に少なくとも９８％純粋な（２’’Ｒ，３’’Ｓ）トランスエナンチオマーを含む、請求項１に記載の医薬組成物。
3. 前記組成物は、キラル的に少なくとも９９％純粋な（２’’Ｒ，３’’Ｓ）トランスエナンチオマーを含む、請求項１に記載の医薬組成物。
4. 前記有効成分は、ハロフジノンの単離された（２’’Ｒ，３’’Ｓ）トランスエナンチオマーもしくはハロフジノンの医薬上許容される塩である、請求項１に記載の医薬組成物。
5. 前記組成物のｐＨは、約３．５〜約８．５である、請求項１に記載の医薬組成物。
6. 前記組成物のｐＨは、７．０未満である、請求項５に記載の医薬組成物。
7. 前記組成物のｐＨは、６．０未満である、請求項６に記載の医薬組成物。
8. 前記組成物のｐＨは、５．５未満である、請求項７に記載の医薬組成物。
9. ハロフジノンの濃度は、約０．０００１％〜約３０％（ｗ／ｗ）の範囲内である、請求項４に記載の医薬組成物。
10. ハロフジノンの濃度は、約０．００１％〜約２％の範囲内である、請求項９に記載の医薬組成物。
11. 前記組成物は、キナゾリノン誘導体のラセミ混合物を含む医薬組成物を投与すると生じる副作用の減少を示す、請求項１に記載の医薬組成物。
12. 前記減少した副作用には、悪心、嘔吐、唾液過多、下痢、無感動、低精子数、視覚問題、高血圧、低血圧、低体温症および正常血液検査値からの偏差から選択される少なくとも１つの減少した副作用が含まれる、請求項１１に記載の医薬組成物。
13. 局所、非経口または経口投与するための、請求項１に記載の医薬組成物。
14. 前記局所用形態は、クリーム剤、軟膏、ローション剤、ゲル剤、懸濁剤、水溶液もしくは共溶媒溶液、ロウ膏およびリポソームからなる群から選択される、請求項１３に記載の医薬組成物。
15. 静脈内注射、静脈内注入、皮内、病変内、筋内、および皮下注射もしくはデポー剤のため、または腹腔鏡視下および小胞内に投与するために適宜な形態からなる群から選択された非経口投与用に調製された、請求項１３に記載の医薬組成物。
16. 前記医薬組成物は、無菌注射液、無菌注射用懸濁液、使用直前に賦形剤と結合することによって復元できる無菌可溶性凍結乾燥粉末、無菌エマルション、マイクロエマルション、分散液、リポソーム製剤、ならびに脂質複合体からなる群から選択される、請求項１５に記載の医薬組成物。
17. 前記経口形態は、錠剤、カプセル剤、サシェ剤、散剤、顆粒剤およびトローチ剤からなる群から選択された固形製剤である、請求項１３に記載の医薬組成物。
18. 前記経口形態は、水性製剤および非水性製剤からなる群から選択された液体製剤である、請求項１３に記載の医薬組成物。
19. 線維性状態もしくは細胞増殖に関連する疾患および障害は、乾癬、ケロイド、過形成性瘢痕、アクネ、脂漏症、脱毛症、硬皮症、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、肝硬変、肺線維症、腎線維症、再狭窄、ならびに悪性および良性腫瘍からなる群から選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
20. 線維性状態もしくは細胞増殖に関連する疾患および障害は、乾癬、ケロイド、過形成性瘢痕、アクネ、脂漏症、脱毛症、硬皮症、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、肝硬変、肺線維症、腎線維症、再狭窄、ならびに悪性および非悪性腫瘍からなる群から選択される、請求項４に記載の医薬組成物。
21. 線維性状態もしくは細胞増殖に関連する疾患もしくは障害を治療する方法であって、それを必要とする被験者に、有効成分として（２’’Ｒ，３’’Ｓ）トランス配列を有し、本質的に（２’’Ｓ，３’’Ｒ）トランスエナンチオマーを含まない一般式（Ｉａ）：
    

    

    （式中、
    ｎ＝１〜２であり、
    Ｒ_１は、各発生時に水素、ハロゲン、ニトロ、低級アルキル、フェニルおよび低級アルコキシからなる群から独立して選択され；
    Ｒ_２は、ヒドロキシ、アセトキシおよび低級アルコキシからなる群の一要素であり；および
    Ｒ_３は、水素および低級アルケンオキシ−カルボニルからなる群の一要素である）を有する治療有効量の単離されたキナゾリノン誘導体、およびその医薬上許容される塩、および医薬上許容される担体もしくは希釈剤を含む医薬組成物を投与する工程を含み、そして前記組成物は、キナゾリノン誘導体のキラル的に少なくとも９５％純粋な（２’’Ｒ，３’’Ｓ）トランスエナンチオマーを含んでいる方法。
22. 前記組成物は、キラル的に少なくとも９８％純粋な（２’’Ｒ，３’’Ｓ）トランスエナンチオマーを含む、請求項２１に記載の方法。
23. 前記組成物は、キラル的に少なくとも９９％純粋な（２’’Ｒ，３’’Ｓ）トランスエナンチオマーを含む、請求項２１に記載の方法。
24. 前記有効成分は、ハロフジノンの単離された（２’’Ｒ，３’’Ｓ）トランスエナンチオマーもしくはハロフジノンの医薬上許容される塩である、請求項２１に記載の方法。
25. 前記組成物のｐＨは、約３．５〜約８．５である、請求項２１に記載の方法。
26. 前記組成物のｐＨは、７．０未満である、請求項２５に記載の方法。
27. 前記組成物のｐＨは、６．０未満である、請求項２６に記載の方法。
28. 前記組成物のｐＨは、５．５未満である、請求項２７に記載の方法。
29. 前記ハロフジノンの濃度は、約０．０００１〜約３０％の範囲内である、請求項２４に記載の方法。
30. 前記ハロフジノンの濃度は、約０．００１％〜約２％の範囲内である、請求項２９に記載の方法。
31. 前記医薬組成物を投与する工程は、前記キナゾリノン誘導体のラセミ混合物を含む医薬組成物を投与すると生じる副作用と比較して減少した副作用を生じさせる、請求項２１に記載の方法。
32. 前記減少した副作用は、悪心、嘔吐、唾液過多、下痢、無感動、低精子数、視覚問題、高血圧、低血圧、低体温症および正常血液検査値からの偏差から選択された少なくとも１つの減少した副作用を含んでいる、請求項３１に記載の方法。
33. 前記組成物は、局所製剤、非経口製剤および経口製剤から選択される、請求項２１に記載の方法。
34. 前記局所用形態は、クリーム剤、軟膏、ローション剤、ゲル剤、懸濁剤、水溶液もしくは共溶媒溶液、ロウ膏およびリポソームからなる群から選択される、請求項３３に記載の方法。
35. 静脈内注射、静脈内注入、皮内、病変内、筋内、および皮下注射もしくはデポー剤のため、または腹腔鏡視下および小胞内に投与するために適宜な形態からなる群から選択された非経口投与用に調製される、請求項３３に記載の方法。
36. 前記医薬組成物は、無菌注射液、無菌注射用懸濁液、使用直前に賦形剤と結合することによって復元できる無菌可溶性凍結乾燥粉末、無菌エマルション、マイクロエマルション、分散液、リポソーム製剤、ならびに脂質複合体からなる群から選択される、請求項３５に記載の方法。
37. 前記経口形態は、錠剤、カプセル剤、サシェ剤、散剤、顆粒剤およびトローチ剤からなる群から選択された固形製剤である、請求項３３に記載の方法。
38. 前記経口形態は、水性製剤および非水性製剤からなる群から選択された液体製剤である、請求項３３に記載の方法。
39. 線維性状態もしくは細胞増殖に関連する疾患および障害は、乾癬、ケロイド、過形成性瘢痕、アクネ、脂漏症、脱毛症、硬皮症、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、肝硬変、肺線維症、腎線維症、再狭窄、ならびに悪性および非悪性腫瘍からなる群から選択される、請求項２１に記載の方法。
40. 線維性状態もしくは細胞増殖に関連する疾患および障害は、乾癬、ケロイド、過形成性瘢痕、アクネ、脂漏症、脱毛症、硬皮症、移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）、肝硬変、肺線維症、腎線維症、再狭窄、ならびに悪性および非悪性腫瘍からなる群から選択される、請求項２４に記載の方法。
41. 前記被験者は、ヒト被験者である、請求項２１に記載の方法。

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