JP2008525427A - NF−κB活性と関連する疾患を治療するための医薬組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
NIKは20SプロテアソームのHC8サブユニットと相互作用する
材料および実験手順
構築物:NIK−N末端6mycタグを有するpCS3MTNIK、aly NIK、キナーゼdead NIK、NIK K670A、およびSniP NIK H674Yの構築物を、pCS3MTNIKから、pfu DNAポリメラーゼを使用する部位特異的変異誘発によって、製造業者のプロトコール(ストラタジーン)を使用して生成した。
酵母2ハイブリッドスクリーニングを、プレイとして、インタクトなNIK cDNA(GenBank Accession No.Yl0256;配列番号5)、NIK−C末端(配列番号5のアミノ酸624〜947)、またはNIK−N末端(アミノ酸1〜367)を使用して行った。これらのスクリーニングにおいて見出された最も優勢なプレイはα7サブユニット(HC8)(GenBank Accession No.XM_050947)であった。これらの相互作用は、異種酵母株、SFY526において確証され、ここで、NIK−C末端またはNIK−N末端とのHC8相互作用は、全長NIKとのHC8相互作用よりも実質的にはるかに強いことが見出された(以下の表1を参照のこと)。
NIKはそのC末端の2つのセリン残基においてHC8をリン酸化する
HC8は2つの保存性セリン残基、S243およびS250を含み、これは、カゼインキナーゼ2(CK2)リン酸化の標的である(Castanoら、Biochemistry 35:3782-789, 1996)。NIKがHC8をリン酸化する能力を試験するために、インビトロキナーゼアッセイを行った。
インビトロキナーゼアッセイおよびウェスタンブロッティングを、本質的にRamakrishnanら、(Immunity 21:477-489, 2004)によって記載されるように実施した。
図2a〜bに示されるように、HC8は、インビトロキナーゼアッセイにおいて、NIKリン酸化のための基質であることが見出された。HC8上の2つのセリン残基(アミノ酸243および250)のアラニンによる置き換えは、HC8のNIK誘導性リン酸化を完全に消失させた(図2a)。しかし、HC8変異体はNIKに結合したのに対し(野生型HC8と類似)、これはaly NIKには結合しなかった(図2b)。
図面の説明は以下の通りである:
Claims (35)
- NF−κB活性と関連する疾患の治療方法であって、それを必要とする対象に、NIK−HC8結合を調節することが可能である薬剤の治療有効量を与え、それによって、該対象におけるNF−κB活性と関連する疾患を治療する工程を包含する方法。
- 前記NIK−HC8結合を調節することが、NIK−HC8複合体を破壊すること、またはその形成を妨害することによってもたらされる請求項1記載の方法。
- 前記薬剤が前記HC8またはNIKをコードする内因性核酸配列に相補的なオリゴヌクレオチドである請求項2記載の方法。
- 前記薬剤が抗体または抗体フラグメントである請求項2記載の方法。
- 前記薬剤が、NIKを結合可能であるHC8由来アミノ酸配列を含むペプチドであり、該ペプチドが少なくとも5アミノ酸でかつ50アミノ酸以下の長さである請求項2記載の方法。
- 前記薬剤が、HC8を結合可能であるNIK由来アミノ酸配列を含むペプチドであり、該ペプチドが5アミノ酸でかつ200アミノ酸以下の長さである請求項2記載の方法。
- 前記NIK−HC8結合を調節することが、NIK−HC8複合体を安定化すること、またはその形成を増強することによってもたらされる請求項1記載の方法。
- 前記薬剤が、NIKまたはHC8の少なくとも活性部分を発現することが可能なポリヌクレオチドである請求項7記載の方法。
- 前記薬剤が、NIKまたはHC8の少なくとも活性部分を含むポリペプチドである請求項7記載の方法。
- 前記薬剤がNIKインヒビターである請求項1記載の方法。
- 前記NIK−HC8結合を調節することが、NIK−HC8複合体を安定化すること、またはその形成を増強することによってもたらされる請求項1記載の方法。
- 前記薬剤が、NIKの少なくとも活性部分を発現することが可能なポリヌクレオチドである請求項11記載の方法。
- 前記薬剤が、NIKの少なくとも活性部分のポリペプチドである請求項11記載の方法。
- 前記NF−κB活性と関連する疾患が、免疫疾患、炎症性疾患または癌である請求項1記載の方法。
- NIK−HC8複合体を破壊すること、またはその形成を妨害することが可能である抗体または抗体フラグメント。
- 前記抗体または抗体フラグメントの抗原認識ドメインが、配列番号5に示されるアミノ酸配列のアミノ酸1〜180または650〜947によって含まれる請求項15記載の抗体または抗体フラグメント。
- 200アミノ酸以下を含み、配列番号5の座標1〜180または650〜947によって示されるアミノ酸配列を含む単離されたポリペプチドであって、NIK−HC8複合体を破壊すること、またはその形成を妨害することが可能である単離されたポリペプチド。
- 26Sプロテアソームの異常な活性と関連する疾患の治療方法であって、それを必要とする対象に、NIK−HC8結合を減少することが可能な治療有効量の薬剤を与え、それによって、該対象における26Sプロテアソームの異常な活性と関連する疾患を治療する工程を包含する方法。
- 前記薬剤が、NIKのキナーゼ活性を阻害することが可能な分子、HC8のリン酸化変異体、およびNIKの非機能的誘導体からなる群より選択される請求項18記載の方法。
- NF−κB活性または異常なプロテアソーム活性と関連する疾患を治療するために適切な薬物候補を同定する方法であって、NIK−HC8結合を調節することが可能な分子を同定する工程を包含し、該分子が薬物候補である方法。
- 前記分子が、低分子化学物質、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、アプタマー、ポリペプチド、ペプチドおよび抗体からなる群より選択される請求項20記載の方法。
- NF−κB活性と関連する疾患を治療するための医薬の製造のための、NIK−HC8結合を調節することが可能な薬剤の使用。
- 前記NIK−HC8結合が、NIK−HC8複合体を破壊すること、またはその形成を妨害することによってもたらされる請求項22記載の使用。
- 前記薬剤が、前記HC8またはNIKをコードする内因性核酸配列に相補的であるオリゴヌクレオチドである請求項23記載の使用。
- 前記薬剤が抗体または抗体フラグメントである請求項23記載の使用。
- 前記薬剤がNIKを結合可能であるHC8由来のアミノ酸配列を含むペプチドであり、該ペプチドが少なくとも5アミノ酸でかつ50アミノ酸以下の長さである請求項23記載の使用。
- 前記薬剤がHC8を結合可能であるNIK由来のアミノ酸配列を含むペプチドであり、該ペプチドが5アミノ酸でかつ200アミノ酸以下の長さである請求項23記載の使用。
- 前記NIK−HC8結合を調節することが、NIK−HC8複合体を安定化すること、またはその形成を増強することによってもたらされる請求項22記載の使用。
- 前記薬剤がNIKまたはHC8の少なくとも活性部分を発現することが可能であるポリヌクレオチドである請求項28記載の使用。
- 前記薬剤がNIKまたはHC8の少なくとも活性部分を含むポリペプチドである請求項28記載の使用。
- 前記薬剤がNIKインヒビターである請求項22記載の使用。
- NIK−HC8結合を調節することが、NIK−HC8複合体を安定化すること、またはその形成を増強することによってもたらされる請求項22記載の使用。
- 前記薬剤がNIKの少なくとも活性部分を発現することが可能であるポリヌクレオチドである請求項32記載の使用。
- 前記薬剤がNIKの少なくとも活性部分のポリペプチドである請求項32記載の使用。
- NF−κB活性に関連する疾患が免疫疾患、炎症性疾患または癌である請求項22に記載の使用。
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