JP2008505618A - 皮膚疾患を治療するためのヘポキシリンとichthyinのモデュレータ - Google Patents
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Abstract
Description
(i)ICHTHYIN遺伝子もしくはそのタンパク質を含有する生体試料の提供、
(ii)上記のようにプライマ(対)と前記試料との接触、ならびに
(iii)ICHTHYIN遺伝子もしくはmRNAの増幅
を含む。
乾燥性皮膚疾患:本発明の文脈内では、「乾燥性皮膚」疾患は、一般に、皮膚保護機能の低下に関連するか、もしくはその機能低下が原因で生じる任意の病状および/または表皮の乾燥に伴う任意の病状を表す。乾燥および皮膚保護機能障害は、単一事象ではなく、表皮における化学的特性および形態における差異によって特徴付けられる(38)。この疾患もしくは病態の特異的例として、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹、乾癬、および魚鱗癬などの角質化疾患などがあげられる。皮膚疾患には、皮膚の炎症だけでなく、化学的(酸、水酸化ナトリウムなど)、物理的(たとえばX線、UVなど)、もしくは生物学的(たとえば感染)など各種の攻撃から生じる皮膚疾患も含まれる。
常染色体劣性先天性魚鱗癬(ARCI)の臨床的及び遺伝的異種群は、通常紅斑(1−3)を伴う、皮膚の全身落屑によって特徴付けられる。患者のほとんどが、コロジオン児として生まれる。この疾患は、2種類の主要な臨床形態すなわち葉状魚鱗癬(LI)もしくは非水泡型先天性魚鱗癬様紅皮症(NCIE)へと進行する可能性がある。推定発症率は、両形態で、300,000〜500,000件に一つの割合である。LIは、大きい、癒着性がある、暗色である、色素性であるなど魚鱗癬の特徴および、皮膚紅斑の非存在などにおいて、NCIEとは異なっている。NCIEでは、魚鱗癬は紅斑を背景として微細かつ白色であるが、これらは、四肢上では大きく、灰色をしている(3)。重複表現型については報告があるが、患者の年齢および体の部位によっていると考えられる。LIは、オルソ過角化症および軽度の局所性不全角化症によって組織学的に特徴付けられる。表皮角質層の厚さの肥大、正常もしくは顕著な顆粒層、および有糸分裂の亢進を伴う過角化症は、NCIEにおける過剰増殖性表皮欠損を示唆している(3)。顕著な皮膚血管および上部リンパ球浸潤が紅斑症を裏付けると考えられる。表皮の終末分化は、両方の形態で妨害され、保護機能が劣化したり、角質層脂質組成が欠落したりする(2−5)。LIは、より過剰増殖型の疾患である(5、6)NCIEに比べ、停留性魚鱗症であると考えられる。
本発明は、皮膚疾患に罹患している(もしくは皮膚疾患を発症するリスクのある)患者では、ICHTHYIN遺伝子またはコードされたポリペプチドが、遺伝学的変化を生じていることを開示する。このように、この遺伝子およびポリペプチドは、対象における皮膚疾患の素因、存在もしくは進行状況を監視するのに好適な、貴重なバイオマーカーであることが指摘される。
さらなる局面では、本発明は、ICHTHYIN遺伝子もしくはポリペプチドを、生物活性剤、特には乾燥性皮膚疾患および/またはヘポキシリン経路に活性を有する化合物をスクリーニングするための標的として使用することにも関する。
本発明のもうひとつの態様は、ICHTHYINポリペプチドもしくは関連タンパク質に結合する抗体に関するものである。抗体は、ポリプローナル抗体もしくはモノクローナル抗体であってよい。さらに、抗体という用語には、フラグメントおよびその誘導体、特に、実質的に同じ抗原特異性を備えた該モノクローナルもしくはポリクローナル抗体のフラグメントおよび誘導体も含まれる。これらには、抗体フラグメント(たとえば、Fab、Fab‘2、CDRなど)、ヒト化抗体、多機能抗体、単鎖抗体(ScFv)などが含まれる。これらは、動物の免疫化および血清の採取(ポリクローナル)もしくは脾臓細胞の採取など、(適切な細胞株と融合させることによってハイブリドーマを産生するための)従来の方法によって産生させることができる。
上記のように、本発明では、(R)−キラリティを有するヘポキシリンをもたらす新規な代謝経路ならびに、皮膚疾患におけるその予想外の関与および未公開の関与について開示する。このように本発明の適用により、この代謝経路から得られる化合物、さらにはその類似体、もしくは作用薬ないしは本代謝経路に関与する遺伝子の発現をモデュレーションする化合物を用いて、特定の皮膚の病態を治療もしくは予防するための新規な治療法の計画を可能にする(図5を参照)。
12−(R)−HXA−3は、12−(R)−ヘポキシリン A−3、すなわち8−(R,S)−ヒドロキシ−(11R,12R)−エポキシエイコサ−(5Z,9E,14Z)−トリエン酸(化式C20H32O4)を表す。
12−(R)−HXA−3−Cは、12−(R)−ヘポキシリン A−3−C、すなわち8−(R,S)−ヒドロキシ−(11S)−グルタチオニル−(12R)−ヒドロキシエイコサ−(5Z,9E,14Z)−トリエン酸(化式C30H49N3O10S)を表す。
12−(R)−HXA−3−Dは、12−(R)−ヘポキシリン A−3−D、すなわち8−(R,S)−ヒドロキシ−(11S)−システイニルグリシニル−(12R)−ヒドロキシエイコサ−(5Z,9E,14Z)−トリエン酸(化式C25H42N2O7S)を表す。
12−(R)−HXA−3−Eは、12−(R)−ヘポキシリン A−3−E、すなわち8−(R,S)−ヒドロキシ−(11S)−システイニル−(12R)−ヒドロキシエイコサ−(5Z,9E,14Z)−トリエン酸(化式C23H39NO6S)を表す。
材料と方法
対象と試料
皮膚科専門医が、家族の臨床データと血統情報を記録した。文書によるインフォームドコンセントを取得した後に、各協力家族から血液試料を採取した。抹消血の白血球からのDNA抽出および細胞株の樹立を、標準の手順を用いて実施した。
遺伝子型特定は、ABIパネル(Linkage Mapping Set2, LMS2, Applied Biosystems)および全ゲノムワイドスキャン用MegaBaseキャピラリーシーケンサーからの400個の高多様型マイクロサテライトマーカーを用いて実施した。公に入手可能なマイクロサテライトによる精細マッピングに、ABI377シーケンサーを使用した。必要最低限の連鎖相を想定して、ハプロタイプを構築した。常染色体劣性遺伝、完全浸透度(full penetrance)、一般母集団における1/500,000の発症率を仮定して、連鎖プログラムを使用した。血統ファイルに血縁関係を組み込んだLINKAGE5.1パッケージ(36)のMLINKプログラムで、対合LODの得点を算出した。
突然変異分析は、14家族のうちの罹患患者および両親、ならびに両親がいない場合には補足的に罹患してない兄弟姉妹で実施した。発明者らは、Primer3プログラム(http://www-genome.wi.mit.edu/genome_software/other/primer3.html)(37)を使用して増幅のためのエクソンに隣接し、ICHTHYIN遺伝子(表2)の配列を決定するイントロンオリゴヌクレオチドプライマを設計した。表2に示されているPCR条件セットを使用した。Hot MasterTM Taq DNAポリメラーゼ(Eppendorf)により、50ngのゲノムDNA(5μl中に)を含む45μlの体積中で、タッチダウンPCR反応を実施した。すなわち、95℃で5分間の初期変性ステップ、94℃で40秒間および68℃で30秒間からなる増幅を6サイクル、そして72℃で30秒間の伸張ステップ、続いて94℃で40秒間、最適なアニーリング温度で30秒間および72℃で30秒間の処理を30サイクル、および5分間の最終伸長ステップを実施した。1〜2μlの精製PCR産物を、体積15μl中で、0.5μlのセンスもしくはアンチセンスプライマ(20μM)および2μlのBigDyeターミネータ混合液(Applied Biosystems)に添加した。線形増幅は、96℃での初期5分間の変性ステップ、96℃で10秒間の変性を25サイクル、および56〜60℃での4分間のアニーリング/伸張ステップからなっていた。反応産物を精製し、Applied Biosystems Sequencer 3700上で配列を決定した。コード領域全体およびエクソン/イントロン間境界に関する、すべての患者およびコントロールから得たフォワード鎖およびリバース鎖の配列を決定した。配列は、Unix上でPhred Phrapプログラムを用いて解析した。
リンパ芽球様細胞株は、標準の手順を用いて樹立した。リンパ球から得た全RNAを、製造元の指示に従って、RNA-PLUS(Quantum-Appligene)キットを使用して抽出した。正常固体の日常的成形外科手術で除去された皮膚から、ヒト角化細胞および線維芽細胞を取得した。皮膚試料を初代角化細胞培養のために処理し、ウシ下垂体抽出物(25μg/ml)および組換表皮生長因子(0.1ng/ml)を補足した無血清角化細胞培地で、Invitrogen Life Technology提供の製品を使用してInvitrogen Life Technologyが記述している標準の手順に従って細胞を成長させた。初代線維芽細胞培養では、発明者らは、10%のウシ胎児血清および2%L−グルタミンを含むDMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium)を使用した。2代にわたって培養物を成長させ、90%の密集度に達した時点で収穫した。製造元の指示に従い、培養細胞(QIAGEN)から全RNAを単離するため、QIAamp RNA Mini Protocolを用いて全RNAを単離した。製造元(QIAGEN)提供のOligotex direct mRNAプロトコルに従って、mRNAを単離した。
製造元の指示に従って、Advantage 2 Polymerase Mix(Clontech)を使用し、メラノーマ、胎盤、および胃に由来するMarathon-Ready cDNA(Clontech)により、5’RACEを実施した。APIプライマおよび、cDNA配列から発明者らが設計した5個の遺伝子特異的アンチセンスプライマのひとつを用いて、94℃で1分間の初期変性ステップから、94℃で30秒間および68℃で4分間の処理30サイクルで、PCRを実施した。PCR産物を可視化するため、2%のアガロースゲル上にこれらを負荷した。
オリゴdTプライマとRT−PCRキット(Life Technologies)を用いてRT−PCRを実施し、cDNAの第一鎖を生成した。全コーディング領域、3’UTRおよび5’UTR領域に渡る、4個のプライマ対(表2)で角化細胞、線維芽細胞、胎盤、およびリンパ球からのcDNAの増幅を実施した。
製造元の指示(Rapid-Scan, OriGene Technologies)に従い、ICHTHYIN転写産物に特異的なプライマ対RT_4を用いて、24のヒト組織を含む遺伝子発現パネルの試験を行った。角化細胞、線維芽細胞、胎盤、およびリンパ球における発現の試験も行った。
Online Mendelian Inheritance in Man(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Omim):アブヒドロラーゼドメインに含まれる以下の5つ(ABHD5);前述のCGI58、Comparative Gene Identification 58[CGI58;MIM 604780];アラキド酸リポキシゲナーゼ3[ALOXE3;MIM607206];アラキド酸塩12−リポキシゲナーゼ,R型[ALOX12B;MIM603741];ATP結合カセット、サブファミリA、メンバー12[ABCA12;MIM607800];キャナリン−ドルフマン症候群[CDS;MIM275630];;および非葉状非紅斑性先天性魚鱗症[NNCI;MIM604781];葉状魚鱗癬[LI;MIM242300];葉状魚鱗癬1[LI1;MIM604777];葉状魚鱗癬2[LI2;MIM601277];葉状魚鱗癬3[LI3;MIM604777];葉状魚鱗癬5[LI5;MIM606545];非水泡性魚鱗癬様紅皮症[NCIE1,MIM242100];非水泡性魚鱗癬様紅皮症[NCIE2,MIM604780];プラダー・ウィリー症候群/アンジェルマン症候群染色体領域における非刷り込み遺伝子1[NIPA1 MIM6008145];プラダー・ウィリー症候群/アンジェルマン症候群染色体領域における非刷り込み遺伝子2[NIPA2 MIM6008146];プレセニリン1[PSEN1;MIM104311];トランスグルタミナーゼ1[TGM1;MIM190195];痙性対麻痺6、常染色体優性[SPG6;MIM600363]。
臨床的特徴と患者の出身地
発明者らは、23名の患者(女性12名、男性11名)および50名の罹患していない家族構成員からなる14家族について分析を行った。DNAを入手できた個人は、図1に示すとおりである。両親がまたいとこ同士(F1)および一世代離れたまたいとこ同士(F14)である2家族を除き、すべてが、いとこ同士の婚姻からの血縁家族である(表1)。ほとんどの家族が、地中海沿岸地域の諸国出身で(アルジェリア出身8家族、トルコ出身4家族、シリア出身1家族)、コロンビア出身が1家族であった。
患者の大多数(60%)が、NCIEに似た臨床像を呈したアルジェリア出身の4家族(F2、F4、F9、F14)およびトルコ出身の2家族(F6、F8)の患者を除き、コロジオン児として生まれた。彼らは、顔面および体躯における紅斑、微細な白い剥落および頚部、臀部および脚部上の大きな茶色の剥落を伴う一般的な魚鱗癬を呈していた(図2を参照)。ただし、これら家族の一部は、さらに葉状の発現型を示していた。患者すべてが掌蹠角皮症を発症しており、ほとんどが皮膚が黄色く、ひび割れており、一部は爪の湾曲を伴っていた。
発明者らは、先ず、罹患した患者が3人および4人いる2組の血縁家族(F1とF14)における同型接合性マッピングによって染色体5q33.2−q34上のICHTHYIN遺伝子の場所を特定した。この新しい遺伝子座に魚鱗癬が連鎖しているさらに多くの家族を特定するため発明者らが、われわれのDNAコレクションをスクリーニングする前に、マーカーD5S410(AFM191xd8)とD5S422(AFM211yc7)との間の同型接合性領域をいくつかの追加マイクロサテライトマーカーで確認した。合計81家族について分析を行った。そのうち64家族は血縁関係にあり、17家族は血縁関係になかったが、罹患した家族の構成員は複数であった。これら家族のすべてで、染色体2q33−35、3p2、14q11、17p13、19p12−q12、および19p13.2−p13.1(7−11)上の遺伝子座を網羅する30のマイクロサテライトマーカーパネルを用いて、既知の6つの魚鱗癬の個所を事前に排除しておいた。これら家族のうちの12家族(F2〜F13)で、新しい個所に対する魚鱗癬の連鎖が認められた。次に、発明者らは、マーカーAFM336xe9(D5S2077)とAFMb351xf9(D5S2050)との間の15.1Mbの区間で合計29個のマイクロサテライトにより精細マッピングを実施した(図2)。D5S378に関するΘ=0.00での最大対LODスコアは、16.38であった。1Mbの共分離領域は、すべての患者で同型接合型であり、動原体のマーカーAFMa083xb9(D5S2112)に関しては家族5の患者1名、テロメアのマーカーAFMb343xe9(D5S2049)に関しては家族14の患者1名で、同型接合性の欠損を伴う組換事象によって定義された。遺伝子型決定の結果は、図3に示すとおりである。7家族(F5〜F11)の中の患者が遺伝子を含む区間内で2〜5のマーカー(2−7−4−4−3)のハプロタイプを共有していた。出身地が異なる(アルジェリア、コロンビア、およびトルコ)これら7家族は、同じミスセンス突然変異を継承していることが後に明らかとなった。アルジェリア出身の他の3家族(F2〜F4)は、同じナンセンス突然変異を呈していたが、同じハプロタイプを共有していたのはそのうちの2家族だけであった。
マーカーUT2159とAFMb343xe9(LOC91937、HAVCR1、HAVCR2、CRSP9、MGC26988)との間における初期2.3Mb区間における5つの遺伝子の配列を決定し、7つの既知の遺伝子すべてを精製された1Mbの区間(CYFIP2、PRO133 ADAM19、SOX30、FLJ20546、FLJ38273、およびENTH)で特定した。これら12の遺伝子のコーディング領域もしくはエクソン−イントロン境界では、突然変異は認められなかった。したがって、発明者らは、マーカーAFMa083xb9(D5S212)と、AFMb343xe9(D5S2049)との間のGenBankからのヒトmRNAおよびESTの分析に着手した。ひとつのmRNA(AK026158、AF131815)は、皮膚および角化細胞をはじめとする表皮組織に高頻度に発現するので、特に関心が持たれた。対応する遺伝子の配列決定により、6種類の突然変異が明らかとなった。
404個のアミノ酸からなるタンパク質をコードする3094bp(ポリ−Aテールを含む)のcDNA(AK026158、FLJ22505)に対応する3077bpの新規に予測された配列(XM_371777)を提起した。このmRNAとBAC配列AC008676との間におけるBLAST分析の結果が、他の公開データベースに記載されている6個のエクソンの存在を裏付けた。発明者らは、5種類のプライマで5’RACEを実施し、これら5’RACEの産物の一部をサブクローン化したが、発明者らは、5’末端の伸長を同定できなかった。重複RT−PCRによって配列を確認し、産物の配列を決定し、公開データベースの配列と比較した。BLAST分析の結果、1匹のマウス(NM_172524)および1匹のラットmRNAのオルソログ(XM_220330)は、ヌクレオチド配列の相同性が83%および84%で、タンパク質配列の相同性が74%および75%であることが明らかとなった。3299bpのマウスmRNAが、全長であると報告されている一方で、ラットmRNAは、わずか1272bp長である。ヒト、マウス、およびラットから取得したオルソログの複数のヌクレオチド配列(http://prodes.toulouse.inra.fr/multalin/)は、相同性92%の高度に保存された配列を示していた。
ICHTHYIN遺伝子の6個のエクソンおよびエクソン−イントロン間の境界の配列決定から、14組の血縁家族における6種類の異なる同型接合性突然変異が明らかとなった(表1)。1つがナンセンス突然変異で、5つがミスセンス突然変異であった。エクソン2における247C→T(R83X)および239G→T(G80V)、エクソン4における341C→A(A114N)、エクソン5における437C→T(S146F)および523C→G(H175N)、ならびにエクソン6における703G→A(G235R)である。突然変異はすべて、マウス、ラット、およびヒト間で高度に保存されている遺伝子の部分に存在していた。これらの配列の変化はいずれも、地中海沿岸地域のコントロール母集団由来の100の正常な染色体には認められなかった。
発明者らは、RAPID−SCANTM遺伝子発現パネルおよび培養された角化細胞、繊維芽細胞、胎盤、およびリンパ球(データ表示せず)由来のRNAを用い、1111bpのフラグメントに対するプライマ対RT_4(表2)でICHTHYIN特異的RT−PCRにより組織の発現を分析した。ICHTHYIN転写産物がほとんどの被検組織で発現することが明らかとなった。これは、脳、肺、胃、皮膚、および白血球で高度に発現し、他の組織では低度の発現が認められたが、肝臓、甲状腺、および胎児の脳は例外で、発現は検出されなかった。ICHTHYIN転写産物の強固な発現が、正常な皮膚生検から得られた培養角化細胞で認められた。同じ皮膚生検由来の培養繊維芽細胞、胎盤、およびリンパ球における発現は希薄であった。
404個のアミノ酸からなる配列は、44kDaの算出分子量を有するタンパク質に相当する。この配列を、ExPASyサーバー(www.expasy.org)を介して入手可能な配列シグナル、膜透過(TM)領域、およびタンパク質の配位に関するトポロジ予測プログラム、Biology WorkBench (http://biowb.sdsc.edu/)から入手できるタンパク質解析ツール、およびタンパク質データベース(http://www.ncbi.nlm.nih.gov)を介した相同性検索にこの配列を提出した。このタンパク質は、原形質膜内に局在することが予測されるが、シグナル配列を所有していない。このタンパク質は、PSORTII、SMART、およびBPROMPTの各プログラムならびにDense Alignment Surface(DAS)法を用いて7−9TMドメインを含むと判定された。この構造は、新しいタンパク質ファミリ(PFAM:DUF803)を定義している。ProtFun2.1サーバ(http://www.cbs.dtu.dk/services/ProtFun/)を用いた分析で、輸送活性および結合活性下で機能カテゴリーおよび遺伝子オントロジーカテゴリーにICHTHYINを分類する。
BLAST分析でICHTHYINの5個のヒトパラログを同定し(上に列挙)、このうち最初の3個のパラログがICHTHYINにもっとも密接に関連し、相同性が最大57%であった。これら遺伝子のうちの4個は、同じ基本構造を持っており、これらは5と8のエクソン間で、1)染色体15q11.2上のNIPA1(プラダー・ウィリー/アンジェルマン症候群における非刷り込み1)もしくはSPG6、2)同じく染色体15q11.2上のNIPA2(DUF803.0)、3)染色体4p12上のLOC152519(DUF803.3)、4)染色体8q22.2上のFLJ13955(DUF803.1)、および5)染色体1p36.12−p35.1上のdJ462023.2(DUF803.4)である。FLJ13955およびdJ462023.2遺伝子は12個のエクソンを持ち、互いに50%近い相同性および他のパラログとは25%の相同性を持つことが予測される。これらの配列の一部には、GeneWise、GenScan、Gnomonなどの自動分析パイプラインによって注釈を付けたが、さらに完全に分析を行ったNIPA1およびNIPA2を除き、長すぎるかもしくは不完全であった可能性がある(19、20a)。NIPA1には2つの転写産物が特定され、ひとつは2.2kbで、もうひとつはもっと大きくて長い3‘UTRを備えている7.5kbであり、ほとんどの組織に低レベルで、しかしニューロン組織では高レベルに存在している(19)。
シノラブディス エレガンス(Caenorhabditis elegans)、ショウジョウバエ(Drosophila)、マウス、および植物をはじめとする真核生物で52の相同体が特定された(IPR008521;http://ebi.ac.uk/interpro/)。シュードモナス・デニトリフィカンス(Pseudomonas denitrificans)(ORF6、SW:YCB6_PSEDE)(20b)における仮説輸送タンパク質およびsriファミリの7TMドメインを有するC.エレガンスケモレセプタ(WP:CE33629)との弱いBLASTP類似も、明らかになった。
複数アミノ酸配列で高い相同性およびファミリの6個のタンパク質のTM領域配置の保存性の両方を確認できる(図3)。
6個のヒトDUF803タンパク質の複数の配列の並び(CLUSTALW)およびGPCRデータベース(GPCRDB, May 2003 発表; http://www.gpcr.org/7tm/)由来の347のヒトGPCRタンパク質配列からなる系統樹(Tree Top, http://www.genebee.msu.su./services/phtree_reduced.html)では、グルタミン酸塩とフリズルド/テイスト(frizzled/taste)2受容体(21)との間の分枝としてDUF803タンパク質が特定されている。
ICHTHYINパラログの二つ、すなわちNIPA2およびFLJ13955は、角化細胞に強く発現するとして記述した(SAGE)。連鎖を試験する目的で、ARCIの形態でこれらのパラログを有している個所について、65の血縁家族(103名の罹患構成員を含む226名の個人)で遺伝子型を特定した。われわれのDNAコレクションからの残り52の血縁家族と13の新規血縁家族が対象である。染色体8q22.2もしくは15q11.2に対する連鎖が、12家族で示唆されたが、エクソンおよびエクソン/イントロン間境界に関する2個の候補遺伝子の配列を決定した段階では、突然変異は認められなかった。
1)二重鎖cDNAのクローニング:ICHTHYINの二重鎖cDNAのクローニングを、標準の方法およびキット(SuperScript Double-Stranded cDNA Synthesisキット)を用いて実施した。この二重鎖cDNAのICHTHYIN特異的プライマについて、詳細に説明する。
a.永久細胞株の樹立、
b.レポーターGPCR遺伝子を用いたコトランスフェクション実験、
c.イオン(Ca、Cl、H)流出の分析
d.ARCIで示唆された他の遺伝子の発現分析
a.(R)‐トリオキシリンA3などの代謝産物を化学合成する。
b.結合実験を実施するために、同位体で代謝産物にラベル標識する。
c.ARCIで示唆されている他の遺伝子の発現を誘導した主要調節因子としてのトリオキシリンの生物活性(TGM1、ABCA12、ALOX12B、ALOXE3、ABHD5、ICHTHYIN、STS、ALDH3A2における突然変異を有する患者の細胞由来のRNAの定量PCR)についての調査研究を行う。
Claims (24)
- 皮膚疾患の処置を目的とした薬剤を製造するための、12(R)−ヘポキシリン経路の代謝産物もしくはその類似体から選択される化合物の使用。
- 前記化合物が、12(R)−TXA3、12(R)−HXA3、12(R)−HXA3−C、12(R)−HXA3−Dおよび12(R)−HXA3−E、ならびにそれらのエステル誘導体もしくはアミド誘導体から選択される、請求項1記載の使用。
- 前記化合物が、ICHTHYINタンパク質のリガンドである、請求項1記載の使用。
- 前記化合物が、12(R)−TXA3またはその作用薬もしくは拮抗薬である、請求項1記載の使用。
- 皮膚疾患の処置を目的とした薬剤を製造するための、12(R)−TXA3またはその作用薬もしくは合成類似体の使用。
- 皮膚疾患が、乾燥性皮膚疾患、特にアトピー性皮膚、接触性皮膚炎、湿疹、乾癬、もしくは魚鱗癬症および掌蹠角皮症などの角質化疾患といった皮膚病、または皮膚の炎症から選択される、請求項1〜5のいずれか1項記載の使用。
- 12(R)−ヘポキシリン経路の代謝産物もしくはその類似体、および薬学的に許容可能な局所適用向け担体を含有する組成物。
- 12(R)−TXA3またはその作用薬もしくは合成類似体、および薬学的に許容可能な局所適用向け担体を含有する組成物。
- 特に局所投与向けの薬学的に許容可能なビヒクルもしくは賦形剤と組み合わせた、ICHTHYINタンパク質の作用薬もしくは拮抗薬を含有する薬剤組成物。
- 対象由来の生体試料中の、ICHTHYIN遺伝子もしくは対応するタンパク質における遺伝子変化の存在を評価することを含む、対象における皮膚疾患の存在もしくはその素因を検出、診断、もしくは特徴づけする方法であって、該遺伝子もしくはタンパク質における遺伝子変化の存在が、該対象における該皮膚疾患の存在もしくはその素因の指標となる、方法。
- 遺伝子変化が、該遺伝子もしくはコードされたタンパク質における1以上の残基の突然変異、欠失、反転、追加および/または置換である、請求項10記載の方法。
- 生体試料中のICHTHYIN遺伝子もしくはタンパク質における突然変異の存在を検出することを含む、請求項11記載の方法。
- 生体試料が、ICHTHYIN遺伝子もしくはポリペプチドを含有する組織、細胞もしくは流体を含み、試料が対象由来のゲノムDNAを含むことが好ましい、請求項10〜12のいずれか1項記載の方法。
- 試料中のICHTHYIN遺伝子の存在を検出するための、ICHTHYIN遺伝子の核酸配列の全体もしくは特徴的部分を含んでおり、標識されている、核酸プローブ。
- ICHTHYIN遺伝子の領域とハイブリダイゼーションし、ICHTHYIN遺伝子の少なくとも一部の増幅を可能にする、フォワード配列およびリバース配列を含むプライマ対。
- 遺伝子変化を含むICHTHYIN遺伝子の少なくとも一部の増幅を可能にする、請求項15記載のプライマ対。
- ICHTHYINタンパク質に特異的に結合する抗体。
- 皮膚疾患が、特にアトピー性皮膚、接触性皮膚炎、湿疹、乾癬、もしくは魚鱗癬および掌蹠角皮症などの角質化疾患といった皮膚病から選択される乾燥性皮膚疾患である、請求項10〜13のいずれか1項記載の方法。
- ICHTHYINもしくは関連タンパク質と候補化合物とを接触させることと、該化合物が、該タンパク質に結合するかもしくは該タンパク質の活性をモデュレーションするかを判定することとを含む、生物活性化合物を選択もしくは同定する方法。
- ICHTHYINもしくは関連タンパク質を発現する組換宿主細胞と試験化合物とを接触させることと、該タンパク質に結合もしくはその活性をモデュレーションする化合物を選択することとを含む、請求項19記載の方法。
- ICHTHYINもしくは関連タンパク質をコードしている遺伝子構築物を有し、膜タンパク質として該タンパク質を発現する組換宿主細胞。
- 原核細胞である、請求項21記載の組換細胞。
- 真核細胞である、請求項21記載の組換細胞。
- 異種プロモータの制御下でICHTHYINタンパク質をコードする、核酸配列を有する核酸構築物。
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