JP2008505069A - アレルギー性炎症疾患の予防及び治療用組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、アレルギー性炎症疾患の予防及び治療用組成物に係り、特に、N−ヒドロキシ−4−{5−[4−(5−イソプロピル−2−メチル−1,3−チアゾール−4−イル)フェノキシ]ペントキシ}−ベンズアミジン、4−{5−[4−(5−イソプロピル−2−メチル−1,3−チアゾール−4−イル)フェノキシ]ペントキシ}−ベンズアミジンまたはその薬学的に許容される塩を含む、アレルギー性炎症疾患の予防及び治療用組成物に関する。
各種公害による環境汚染、ストレス、または変化した衣食住を含んだ住居環境などの原因によってアレルギー性炎症疾患が日増しに増加する趨勢にある。アレルギー性炎症疾患とは、鼻の粘膜または気管支の粘膜、または皮膚が外部からの原因物質にあまりにも過敏に反応する非常にややこしい慢性的疾患であって、人体の免疫体系に異常が生じて現れる疾患をいう。アレルギーを起こす免疫異常の根本原因は、栄養素の不均衡、ストレス、血液が滞るお血などにあり、特に栄養素の不均衡にある。
本発明は、N−ヒドロキシ−4−{5−[4−(5−イソプロピル−2−メチル−1,3−チアゾール−4−イル)フェノキシ]ペントキシ}−ベンズアミジン、4−{5−[4−(5−イソプロピル−2−メチル−1,3−チアゾール−4−イル)フェノキシ]ペントキシ}−ベンズアミジンまたはその薬学的に許容される塩を含む、アレルギー性炎症疾患の予防及び治療用組成物を提供する。
本発明は、下記化学式1のベンズアミジン化合物またはその薬学的に許容される塩を含む、アレルギー性炎症疾患の予防及び治療用組成物を提供する。
化学式1のベンズアミジン化合物がアレルギー性炎症に及ぼす影響を調べるために、オボアルブミンで誘発させたマウス喘息モデルで評価した。前記ベンズアミジン化合物は、オボアルブミン感作(immunization)の際に投与を開始して18日間投与した。実験動物は、感作15日後にさらにオボアルブミンに露出させた後、3日後に犠牲させ、肺の重量、末梢血液及び肺気管支洗浄液内細胞成分の変化、並びに肺の組織学的変化を観察した。
総20匹の雌C57BL/6マウス(6週齢、BioGenomics、韓国)を6日間実験室の環境に順化させた後、本実験に使用した。実験動物は、5匹ずつマウス用プラスチック箱に収容し、温度(20〜25℃)と湿度(30〜35%)が調節された実験動物飼育室で飼育した。また、明暗周期は12時間間隔で調節し、飼料と水道水を自由に供給した。実験動物15匹はオボアルブミンで喘息を誘発し、5匹は無処置正常群として使用した。
N−ヒドロキシ−4−{5−[4−(5−イソプロピル−2−メチル−1,3−チアゾール−4−イル)フェノキシ]ペントキシ}−ベンズアミジン100mg及び200mgを無菌蒸留水5mLに完全に溶かして溶液状態の試料を投与した。前記ベンズアミジン化合物は、オボアルブミン感作日から毎日1回ずつそれぞれ実験動物体重kg当たり100mg及び200mgずつ経口投与した。この際、対照群では、同量の無菌蒸留水のみを毎日同一の方法で投与した。
オボアルブミン(Grade V;Sigma、St.Louis,MO、USA)200μgを水酸化アルミニウム(Al(OH)3、dried powder gel;Aldrich、Milwaukee、USA)180mgと生理食塩水4mLに4℃で一晩溶かして実験動物に投与(200μL、腹腔注射)して感作させた。この際、無処置正常群は、水酸化アルミニウムのみを生理食塩水に溶かして同一の方法で投与した。感作15日後、1.5%のオボアルブミン溶液を噴霧器(nubulizer)を用いて空気中に噴霧することにより10分間実験動物に露出させて喘息を誘発させた。この際、無処置正常群では、生理食塩水のみを同一の方法で露出させた。全実験動物は、露出3日後に犠牲させた。
全実験動物の体重を投与1、7、14、16及び17日後にそれぞれ測定した。飼料摂取による個体別差異を減らすために、投与開始日と最終剖検日に、全実験動物を体重測定の前に18時間以上絶食させた。また、実験動物の個体差異による体重変化を最小化するために、それぞれ感作期間、露出後の喘息誘発期及び全実験期間の体重増加量、すなわち増体量を計算した。
全実験動物は、最終犠牲日に肺を周囲組織とよく分離して摘出し、摘出された肺の絶対重量値をg単位で測定した。また、動物個体の体重差異による誤差を最小化するために、体重に対する肺の比率である相対重量値を下記数式1を用いてパーセントで計算した。
肺の相対重量値(%)={(肺の絶対重量値/最終犠牲日の体重)×100}
その結果は表2に示した。
最終犠牲日に、全実験動物はエチルエーテルで麻酔した後、開腹して腹大静脈を露出させた。その後、露出した腹大静脈から1mL程度の血液を採取した。採取された血液中の白血球の総数を白血球用血球計算板を用いて×103/1mm3の単位で計算した。採取した血液を採血し次第スライドガラス(slide glass)に塗抹した後、メタノールで固定し、Giemsa染色を施した。その後、塗抹組織標本に存在する総200個の白血球のうち、リンパ球、好酸球、好中球、単球及び好塩基球が占める割合をそれぞれパーセントで計算した。
最終犠牲日に、気管支と肺胞内に存在する分泌物の細胞学的構成を観察するために、エチルエーテルで麻酔させ、頚部と胸部を開いて頚静脈から放血した後、気管に挿管し、2回にわたってリン酸緩衝液(phosphate buffered saline)3mLを注入し、30秒間胸部をマッサージした後、肺から細胞浮遊液を得た。得られた細胞浮遊液を3000rpmで30分間遠心分離し、DPBS(Gibco BRL、NY、USA)に再び浮遊させた後、細胞をスライドガラス上に塗抹し、Giemsa染色した後、塗抹組織内に存在する細胞の数及び好中球、好酸球、好塩基球、マクロファージ及び類上皮細胞などに対する分別計算を行い、百分率を計算した。
その結果は表4に示した。
喘息を誘発した後に摘出した肺を10%中性ホルマリンに固定した後、パラフィン包埋を行い、3〜4μmの組織切片を製作し、ヘマトキシリン−エオシン(Hematoxylin-eosin)またはマッソン・トリクローム(Masson's trichrome)染色を行い、光学顕微鏡を用いて観察した。
全ての数値は、平均標準偏差で表示し、正常群または対照群と比較してSPSS(Release 6.1.3.、SPSS Inc.、USA)を用いてMann−Whitney U−Wilcoxon Rank Sum法で有意性を検証した。
本発明の組成物は、喘息の際に誘発される肺気管支洗浄液内好酸球の増加、血中総白血球数及び好酸球の増加、気管支上皮の粘液生産細胞の増加による肥厚または増生、肺胞壁の肥厚による肺胞面積の減少及び炎症細胞の浸潤などの典型的な慢性炎症を減少させることにより、アレルギー性炎症疾患の予防及び治療に有用に使用することができる。
Claims (5)
- 前記塩がメタンスルホン酸塩または塩酸塩である、請求項1に記載の組成物。
- 前記アレルギー性炎症疾患が、アレルギー性鼻炎、喘息、アレルギー性結膜炎、アレルギー性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎及び蕁麻疹よりなる群から選択される、請求項1に記載の組成物。
- 前記アレルギー性炎症疾患が喘息またはアレルギー性鼻炎である、請求項3に記載の組成物。
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