JP2008067605A - Method for diagnosing onychomycosis - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、起因菌を正確に同定することのできる爪真菌症の診断法に関する。 The present invention relates to a method for diagnosing onychomycosis capable of accurately identifying the causative bacteria.
爪真菌症は、爪白癬を含む爪の真菌感染症であり、重症になると爪が白又は黄褐色に変色し、肥厚し、爪床から離れていく。原因となる真菌は皮膚糸状菌だけでなく、スコプラリオプシス、アスペルギルス、フサリウム、カンジダなど広範囲に及ぶ。爪真菌症の治療には、グリセオフルビン、テルビナフィン、イトラコナゾール等の経口抗真菌薬やイミダゾール系、ベンジルアミン系、アリルアミン系、チオカルバミン酸系等の外用抗真菌薬が用いられている。 Onychomycosis is a fungal infection of the nail including onychomycosis, and when it becomes severe, the nail turns white or tan, thickens, and moves away from the nail bed. The causative fungi are not only dermatophytes but also a wide range such as scoprariopsis, Aspergillus, Fusarium, Candida. For the treatment of onychomycosis, oral antifungal agents such as griseofulvin, terbinafine and itraconazole and external antifungal agents such as imidazole, benzylamine, allylamine and thiocarbamic acid are used.
しかしながら、爪真菌症は、通常の皮膚真菌症に比べて完治し難く、特に外用の抗真菌薬の有効性が低いという問題がある。この原因は、主に、通常の外用抗真菌薬の爪内部への浸透性が低いことによるとされている。 However, onychomycosis is difficult to cure compared to normal dermatomycosis, and there is a problem that the effectiveness of an external antifungal agent is particularly low. This cause is mainly due to the low penetration of normal external antifungal drugs into the nail.
一方、爪真菌症を含む真菌症の診断は、患部から爪や角層等の試料を採取し、顕微鏡で観察して菌要素の有無を確認する直接鏡検と、選択培地上で数週間培養して、コロニーや菌の微細構造を観察することにより菌種を同定する培養検査がある。しかし、培養には数週間という長い時間を要し、培養陽性率も低い。また真菌の中には形態学的に類似するものもあり、その同定は容易ではなく熟練を必要とする(非特許文献1)。
本発明の目的は、完治が困難といわれている爪真菌症の起因菌を正確に同定することができ、治療方針の策定に有用な爪真菌症の診断法を提供することにある。 An object of the present invention is to provide a diagnostic method for onychomycosis that can accurately identify the causative bacteria of onychomycosis, which is said to be difficult to cure completely, and is useful for formulating a treatment policy.
そこで本発明者は、爪真菌症の遺伝子診断法について種々検討してきたところ、nested−PCR法を採用し、第1回PCRのプライマーとして真菌の28SrDNA由来の真菌共通プライマーを用い、かつnested−PCRのプライマーとして皮膚糸状菌に特異的なプライマーだけでなく、スコプラリオプシス、アスペルギルス及びフサリウムに特異的なプライマーを組み合せて用いることにより、94%以上もの高率で爪真菌症の起因菌を検出できること、さらには、皮膚糸状菌だけでなくスコプラリオプシス、アスペルギルス、フサリウム、カンジダ等の非皮膚糸状菌も爪真菌の原因となっていることを見出し、本発明を完成した。 Therefore, the present inventor has made various studies on genetic diagnosis methods for onychomycosis, adopting a nested-PCR method, using a fungal common primer derived from fungal 28S rDNA as a primer for the first PCR, and nested-PCR. By using not only primers specific to dermatophytes but also scoprariopsis, Aspergillus, and Fusarium as primers, it is possible to detect causative fungi of onychomycosis at a high rate of 94% or more. Furthermore, it was found that not only dermatophytes but also non-dermatophytes such as scoprariopsis, Aspergillus, Fusarium, Candida, etc. cause nail fungus, and the present invention was completed.
すなわち、本発明は、爪検体から抽出したDNAに対し第1回PCR及びnested−PCRを行う爪真菌症の診断法であって、第1回PCRのプライマーとして真菌の28SrDNA由来の真菌共通プライマーセットを用い、nested−PCRのプライマーとして皮膚糸状菌の28SrDNAに特異的なプライマーセット並びにスコプラリオプシス、アスペルギルス及びフサリウムの非皮膚糸状菌の28SrDNAに特異的なプライマーセットを用いることを特徴とする爪真菌症の診断法を提供するものである。 That is, the present invention is a method for diagnosing onychomycosis by performing first PCR and nested-PCR on DNA extracted from a nail specimen, and a fungal common primer set derived from fungal 28SrDNA as a primer for the first PCR And a primer set specific for 28SrDNA of dermatophytes, and a primer set specific for 28SrDNA of non-dermatophytes of scoprariopsis, Aspergillus and Fusarium as primers for nested-PCR It provides a method for diagnosing the disease.
また、本発明は、nested−PCRによる爪真菌症の診断薬であって、第1回PCRのプライマーとして真菌の28SrDNA由来の真菌共通プライマーセットを含有し、nested−PCRのプライマーとして皮膚糸状菌の28SrDNAに特異的なプライマーセット並びにスコプラリオプシス、アスペルギルス及びフサリウムの非皮膚糸状菌の28SrDNAに特異的なプライマーセットを含有することを特徴とする爪真菌症診断薬を提供するものである。 The present invention also relates to a diagnostic agent for onychomycosis by nested-PCR, comprising a fungal common primer set derived from fungal 28S rDNA as a primer for the first PCR, and a dermatophytic fungus as a primer for nested-PCR. The present invention provides a diagnostic agent for onychomycosis characterized by containing a primer set specific to 28SrDNA and a primer set specific to 28SrDNA of non-dermatophytes of Scoprariopsis, Aspergillus and Fusarium.
本発明の診断法により、従来爪真菌症の起因菌は、トリコフィトン・ルブルム、トリコフィトン・メンタグロファイテス等の皮膚糸状菌とされていたが、非皮膚糸状菌であるスコプラリオプシス、アスペルギルス、フサリウム等が原因となる場合も少なからずあることが判明した。これにより、従来の抗真菌薬が有効でなかった爪真菌症の起因菌が明確になり、当該起因菌に有効な新たな治療薬を投与することにより治療が可能となる。 According to the diagnostic method of the present invention, the causative bacteria of onychomycosis have been conventionally dermatophytes such as Trichophyton rubrum, Trichophyton mentagrophytes, etc. It has been found that there are not a few cases where fusarium is the cause. Thereby, the causative bacteria of the onychomycosis for which the conventional antifungal drugs were not effective are clarified, and treatment is possible by administering a new therapeutic drug effective for the causative bacteria.
本発明の爪真菌症の診断方法は、患者又は患者の疑いのあるヒトの爪を検体とする。爪検体は、ニッパー、爪切り等で切り取ればよい。爪検体からDNAを抽出するには、例えば爪を粉砕し、100℃で10分間煮沸等により殺菌した後、フェノール抽出し、エタノール沈澱することにより行うことができる。 The method for diagnosing onychomycosis of the present invention uses a patient or a human nail suspected of being a patient as a specimen. The nail specimen may be cut out with a nipper, a nail clipper or the like. DNA can be extracted from the nail specimen by, for example, crushing the nail, sterilizing it by boiling at 100 ° C. for 10 minutes, extracting with phenol, and precipitating with ethanol.
本発明の診断法は、第1回PCRを行い、そのPCR産物の内側の塩基配列を増幅し得るプライマーで第2回PCRを行う、nested−PCRにより行う。ここで、第1回PCRのプライマーとして真菌の28SrDNA由来の真菌共通プライマーセットを用い、nested−PCRのプライマーとして皮膚糸状菌の28SrDNAに特異的なプライマーセットだけでなく、スコプラリオプシス、アスペルギルス及びフサリウムの非皮膚糸状菌の28SrDNAに特異的なプライマーセットを用いる。 The diagnostic method of the present invention is performed by nested-PCR, in which the first PCR is performed and the second PCR is performed with a primer capable of amplifying the base sequence inside the PCR product. Here, a fungal common primer set derived from fungal 28SrDNA was used as a primer for the first round PCR, and not only a primer set specific for dermatophyte 28SrDNA as a nested-PCR primer, but also scoprariopsis, Aspergillus and Fusarium A primer set specific for the 28S rDNA of non-dermatophytes is used.
第1回PCRのプライマーセットとしては、真菌の28SrDNA由来の共通プライマーセットであればよいが、真菌の28SrDNAの塩基番号1−635を増幅し得るプライマーが好ましい。特に配列番号1及び2で示されるプライマーセットが好ましい。当該プライマーセットを用いれば、ほとんど全真菌が検出できる。 The primer set for the first round PCR may be a common primer set derived from fungal 28S rDNA, but is preferably a primer capable of amplifying base numbers 1-635 of fungal 28S rDNA. In particular, the primer set shown by SEQ ID NOs: 1 and 2 is preferable. If the primer set is used, almost all fungi can be detected.
第1回PCRは、鋳型DNAを含む検体に、プライマー、耐熱性DNAポリメラーゼ及びヌクレオチド及び反応バッファーを加え、変性、アニール、DNA伸長のそれぞれの温度条件でインキュベーションすればよい。例えば94℃4分の予備加熱、94℃1分、55℃2分、72℃1.5分を30サイクルで増幅反応を行い、72℃10分で停止反応を行うことができる。第1回PCRにより増幅されたDNAは、例えば電気泳動後、染色することにより確認できる。 In the first PCR, a primer, a heat-resistant DNA polymerase, a nucleotide, and a reaction buffer are added to a sample containing a template DNA, and incubated at each temperature condition of denaturation, annealing, and DNA extension. For example, the amplification reaction can be performed in 30 cycles of preheating at 94 ° C. for 4 minutes, 94 ° C. for 1 minute, 55 ° C. for 2 minutes, and 72 ° C. for 1.5 minutes, and the stop reaction can be performed at 72 ° C. for 10 minutes. The DNA amplified by the first PCR can be confirmed by staining after electrophoresis, for example.
第1回PCRで増幅された遺伝子産物には、検体中の真菌のほとんどが含まれると考えられる。次いで、nested−PCRを行えば、当該真菌の遺伝子産物中の、特定の菌種の遺伝子のみが増幅される。従って、真菌28SrDNAの塩基番号1−635の範囲内の塩基配列中の、各真菌に特異的な配列を増幅し得るプライマーセットが必要になる。本発明者は、当該28SrDNAの塩基番号1−635の塩基配列中から、(1)皮膚糸状菌の28SrDNAに特異的なプライマーセット、(2)スコプラリオプシスの28SrDNAに特異的なプライマーセット、(3)アスペルギルスの28SrDNAに特異的なプライマーセット、(4)フサリウムの28SrDNAに特異的なプライマーセット及び(5)カンジダの28SrDNAに特異的なプライマーセットを見出し、かつ、このうち少なくとも(1)〜(4)の4種を組み合せてnested−PCRを行うことにより、ほとんどの爪真菌症の起因菌が検出同定できることを見出したのである。これらのnested−PCRに用いるプライマーは、各菌種の28SrDNAの塩基番号1−635の内側にあって、各菌種に特異的な塩基配列を増幅できるプライマーである。 The gene product amplified by the first PCR is considered to contain most of the fungi in the specimen. Next, if nested-PCR is performed, only the gene of a specific bacterial species in the gene product of the fungus is amplified. Therefore, a primer set capable of amplifying a sequence specific to each fungus in the base sequence within the range of base numbers 1 to 635 of fungal 28SrDNA is required. The present inventor has (1) a primer set specific to 28S rDNA of dermatophytes, (2) a primer set specific to 28S rDNA of scoprariopsis, among the base sequences of base numbers 1 to 635 of the 28S rDNA ( 3) A primer set specific to Aspergillus 28SrDNA, (4) a primer set specific to Fusarium 28SrDNA, and (5) a primer set specific to Candida 28SrDNA, and at least (1) to ( It was found that most of the causative fungi of onychomycosis can be detected and identified by performing nested-PCR by combining the four types of 4). The primers used for these nested-PCR are primers that are inside the base numbers 1-635 of 28S rDNA of each bacterial species and can amplify a base sequence specific to each bacterial species.
(1)皮膚糸状菌の28SrDNAに特異的なプライマーとしては、トリコフィトン・ルブルム(Trichophyton rubrum)の28SrDNAに特異的なプライマー及びトリコフィトン・メンタグロファイテス(Trichophyton mentagrophytes)の28SrDNAに特異的なプライマーが挙げられる。トリコフィトン・ルブルムの28SrDNAに特異的なプライマーセットとしては、配列番号3及び4で示されるプライマーが好ましい。トリコフィトン・メンタグロファイテスの28SrDNAに特異的なプライマーセットとしては、配列番号5及び6で示されるプライマーが好ましい。 (1) Primers specific for 28S rDNA of dermatophytes include primers specific for Trichophyton rubrum 28S rDNA and primers specific for Trichophyton mentagrophytes 28S rDNA. Is mentioned. As a primer set specific to 28S rDNA of Trichophyton rubrum, the primers represented by SEQ ID NOs: 3 and 4 are preferable. As a primer set specific for 28S rDNA of Trichophyton mentagrophytes, the primers shown in SEQ ID NOs: 5 and 6 are preferable.
(2)スコプラリオプシスの28SrDNAに特異的なプライマーセットとしては、スコプラリオプシス・ブレビカウリス(Scopulariosis brevicaulis)の28SrDNAに特異的なプライマーセットが挙げられ、配列番号7及び8で示されるプライマーが好ましい。 (2) As a primer set specific to 28S rDNA of scoprariopsis, a primer set specific to 28S rDNA of Scopulariosis brevicaulis can be mentioned, and the primers represented by SEQ ID NOs: 7 and 8 are preferred.
(3)アスペルギルスの28SrDNAに特異的なプライマーセットとしては、アスペルギルス属(Aspergillus spp.)の28SrDNAに特異的なプライマーセットが挙げられ、具体的には配列番号9及び10で示されるプライマーが好ましい。 (3) As a primer set specific to 28SrDNA of Aspergillus, a primer set specific to 28SrDNA of the genus Aspergillus (Aspergillus spp.) Can be mentioned, and specifically, the primers represented by SEQ ID NOs: 9 and 10 are preferable.
(4)フサリウムの28SrDNAに特異的なプライマーセットとしては、フサリウム・ソラニ(Fusarium solani)、フサリウム・オキシスポルム(Fusarium oxysporum)及びフサリウム・モニリホルム(Fusarium moniliforme(正式名Gibberella fujikuroi))から選ばれる1種又は2種以上の28SrDNAに特異的なプライマーセットが挙げられる。これらのプライマーセットの具体例としては、配列番号11及び12(フサリウム・ソラニ)、配列番号13及び14(フサリウム・オキシスポルム)、配列番号15及び16(フサリウム・モニリホルム)で示されるプライマーが挙げられる。 (4) As a primer set specific to Fusarium 28SrDNA, one kind selected from Fusarium solani, Fusarium oxysporum and Fusarium moniliforme (official name Gibberella fujikuroi) or A primer set specific for two or more 28S rDNAs can be mentioned. Specific examples of these primer sets include primers represented by SEQ ID NOs: 11 and 12 (Fusarium solani), SEQ ID NOs: 13 and 14 (Fusarium oxysporum), and SEQ ID NOs: 15 and 16 (Fusarium moniliform).
また、nested−PCRにおいては、さらに(5)カンジダの28SrDNAに特異的なプライマーセットを追加することもできる。当該カンジダに特異的なプライマーセットとしては、カンジダ・アルビカンス(Candida albicans)、カンジダ・トロピカリス(Candida tropicalis)等の28SrDNAに特異的なプライマーセット、例えば配列番号17及び18(カンジダ・アルビカンス)、配列番号19及び20(カンジダ・トロピカリス)で示されるプライマーが好ましい。 In nested-PCR, a primer set specific to (5) Candida 28S rDNA can also be added. Primer sets specific to the Candida include primer sets specific to 28S rDNA such as Candida albicans, Candida tropicalis, such as SEQ ID NOs: 17 and 18 (Candida albicans), Primers indicated by numbers 19 and 20 (Candida tropicalis) are preferred.
また、nested−PCRのプライマーセットとして、皮膚糸状菌の28SrDNA由来の共通プライマーセットを追加することもできる。この皮膚糸状菌共通プライマーセットを用いることにより、第1回PCRの結果を増幅して皮膚糸状菌の有無を確認することができる。このような皮膚糸状菌共通プライマーとしては、配列番号21及び22で示されるプライマーが好ましい。 Moreover, a common primer set derived from 28S rDNA of dermatophytes can be added as a primer set for nested-PCR. By using this dermatophyte common primer set, the result of the first PCR can be amplified to confirm the presence or absence of dermatophytes. As such a dermatophyte common primer, the primers shown in SEQ ID NOs: 21 and 22 are preferable.
nested−PCRは、第1回PCRと同様に変性、アニール、DNA伸長反応を行えばよい。例えば、94℃4分の予備加熱、94℃1分、55℃15秒、72℃15秒を25サイクルで増幅反応を行い、72℃10分で停止反応を行うことができる。nested−PCRにより増幅されたDNAは、例えば電気泳動後、染色することにより、菌種特異的な遺伝子を検出することができる。 Nested-PCR may be performed by denaturation, annealing, and DNA extension reaction as in the first PCR. For example, amplification reaction can be performed in 25 cycles of preheating at 94 ° C. for 4 minutes, 94 ° C. for 1 minute, 55 ° C. for 15 seconds, and 72 ° C. for 15 seconds, and stop reaction can be performed at 72 ° C. for 10 minutes. The DNA amplified by nested-PCR can detect a bacterial species-specific gene, for example, by staining after electrophoresis.
本発明の診断薬は、前記診断法に用いられるプライマーセットを含有する。また、前記のプライマーセット以外に、第1回PCR及びnested−PCRに必要な試薬、例えば耐熱性DNAポリメラーゼ(Taq DNAポリメラーゼ)、ヌクレオチド(dNTP混合物)及び反応バッファーを含有させてもよい。 The diagnostic agent of this invention contains the primer set used for the said diagnostic method. In addition to the primer set described above, reagents necessary for the first PCR and nested-PCR, such as heat-resistant DNA polymerase (Taq DNA polymerase), nucleotides (dNTP mixture), and reaction buffer may be included.
本発明の診断法によれば、従来法では検出できなかった又は検出が困難であった爪真菌症の起因菌が正確に検出でき、正確な診断が可能となる。特に、従来爪真菌症の起因菌とされていなかった、スコプラリオプシス、アスペルギルス、フサリウム、カンジダによる爪真菌症が少なからず存在することを見出した点は、治療薬の選定に極めて重要である。 According to the diagnostic method of the present invention, a causative bacterium of onychomycosis that could not be detected or difficult to detect by a conventional method can be accurately detected, and an accurate diagnosis can be made. In particular, the fact that there are not a few onychomycosis caused by scoprariopsis, Aspergillus, Fusarium, and Candida, which have not been conventionally attributed to onychomycosis, is extremely important in selecting therapeutic agents.
次に実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は何らこれら実施例に限定されるものではない。 EXAMPLES Next, although an Example is given and this invention is demonstrated further in detail, this invention is not limited to these Examples at all.
実施例1
(1)検体の調製
爪真菌症未治療の皮膚科患者に、直接鏡検を行い、感染の有無を確認した。感染が確認された患者の爪に対してエタノール消毒後、爪用の遠位側を爪切り、ニッパーで除去して回収した。回収された爪をビーズショッカーで粉砕した。粉砕した爪を、糸状菌バッファー(200mM Tris-HCl, pH 8.0, 25mM EDTA, 0.5% SDS, 250mM NaCl)中で100℃10分間煮沸後、フェノール抽出し、次いでエタノール沈澱してDNAを抽出した。DNAを50μLの超純水に溶解して保存した。得られたDNA含有液25μLを鋳型DNAサンプルとした。
Example 1
(1) Preparation of specimen A dermatological patient who had not been treated with onychomycosis was directly examined by microscopic examination to confirm the presence or absence of infection. After sterilization of ethanol on the patient's nail with confirmed infection, the nail distal side was nail cut and removed with a nipper. The collected nails were crushed with a bead shocker. The ground nail was boiled in filamentous fungus buffer (200 mM Tris-HCl, pH 8.0, 25 mM EDTA, 0.5% SDS, 250 mM NaCl) at 100 ° C. for 10 minutes, extracted with phenol, and then precipitated with ethanol to extract DNA. DNA was dissolved in 50 μL of ultrapure water and stored. 25 μL of the obtained DNA-containing solution was used as a template DNA sample.
(2)第1回PCR
総量を100μLとし、10mM Tris−HCl(pH8.3)、50mM KCl、1.5mL MgCl2、200μM dNTP混合物、各30pmolプライマー、1.0U Taq DNAポリメラーゼ(GE Health Care社製)、25μL爪抽出DNA(鋳型DNA)を含む反応液で、DNAサーマルサイクラー(TAKARA社製)により、94℃4分予備加熱後へ94℃1分、55℃2分、72℃1.5分を30回のPCR反応を行い、72℃10分の停止反応を行った。
(2) 1st PCR
The total amount is 100 μL, 10 mM Tris-HCl (pH 8.3), 50 mM KCl, 1.5 mL MgCl 2 , 200 μM dNTP mixture, each 30 pmol primer, 1.0 U Taq DNA polymerase (manufactured by GE Health Care), 25 μL nail extraction DNA (Template DNA) containing the reaction solution, 30 times PCR reaction at 94 ° C for 1 minute, 55 ° C for 2 minutes, 72 ° C for 1.5 minutes after preheating at 94 ° C for 4 minutes by DNA thermal cycler (manufactured by TAKARA) And stopped at 72 ° C. for 10 minutes.
(3)nested−PCR
鋳型DNAとして第1回PCR産物を用いる以外は第1回PCRと同じ反応液組成とした。なお、第1回PCR産物を電気泳動で確認した結果、PCR産物が存在する場合には、PCR産物を100倍希釈してその1μLを使用した。PCR産物がなかった場合は、その原液1μLを使用した。nested−PCRは、94℃4分予備加熱後、94℃1分、55℃15秒、72℃15秒を25回のPCR反応を行い、72℃10分の停止反応を行った。
(3) nested-PCR
The reaction solution composition was the same as the first PCR except that the first PCR product was used as the template DNA. As a result of confirming the first PCR product by electrophoresis, when the PCR product was present, the PCR product was diluted 100 times and 1 μL thereof was used. When there was no PCR product, 1 μL of the stock solution was used. In nested-PCR, after preheating at 94 ° C. for 4 minutes, PCR reaction was performed 25 times at 94 ° C. for 1 minute, 55 ° C. for 15 seconds and 72 ° C. for 15 seconds, and a stop reaction was performed at 72 ° C. for 10 minutes.
使用したプライマーセットを表1に示す。 The primer sets used are shown in Table 1.
各プライマーの設計は次のようにして行った。すなわち、GETYX−MAC Version 10を用い、各真菌の28SrDNAシークエンスを解析した。そして、第1回PCRのプライマーは、28SrDNAの塩基番号1−635を認識するプライマー、すなわち塩基番号1−20と618−635を認識する配列を合成した。また、各真菌の特異的なプライマーは、28SrDNAの1−635の内側から、各菌種に特異的な配列を検索して設計した。 Each primer was designed as follows. That is, 28S rDNA sequence of each fungus was analyzed using GETYX-MAC Version 10. The first PCR primer was synthesized as a primer that recognizes base numbers 1-635 of 28S rDNA, that is, a sequence that recognizes base numbers 1-20 and 618-635. Moreover, the specific primer of each fungus was designed by searching a specific sequence for each bacterial species from the inside of 1-635 of 28SrDNA.
(4)プライマーの特異性の検討
PCR反応で得られたPCR産物を電気泳動し、バンドの有無によりプライマーの各菌種のDNAとの結合を認識した。その結果、配列番号1及び2は、ほとんどの真菌のDNAを検出可能であった。また、その他のプライマーは、各真菌のDNAに特異的であった(図1〜図4)。
(4) Examination of primer specificity The PCR product obtained by the PCR reaction was electrophoresed, and the binding of the primer to the DNA of each bacterial species was recognized by the presence or absence of a band. As a result, SEQ ID NOs: 1 and 2 were able to detect most fungal DNA. The other primers were specific for each fungal DNA (FIGS. 1 to 4).
(5)未治療の爪真菌症患者の臨床検体50例に対し、本発明のPCRを施行した。その結果を表2及び表3に示す。 (5) The PCR of the present invention was performed on 50 clinical specimens of untreated onychomycosis patients. The results are shown in Tables 2 and 3.
表2及び表3より、起因菌の検出率は94%(47/50)であった。そのうち、皮膚糸状菌の検出率は83.0%(39/47)であり、非皮膚糸状菌の検出率が36.2%(17/47)であった。このうち、皮膚糸状菌と非皮膚糸状菌の重複例は19.1%(9/47)であり、非皮膚糸状菌単独例が17.0%(8/47)も存在することが判明した。また、カンジダ感染剤も存在した。 From Table 2 and Table 3, the detection rate of the causative bacteria was 94% (47/50). Among them, the detection rate of dermatophytes was 83.0% (39/47), and the detection rate of non-dermatophytes was 36.2% (17/47). Among these, it was found that the overlapping cases of dermatophytes and non-dermatophytes were 19.1% (9/47), and there were 17.0% (8/47) of non-dermatophytes alone. . There was also a Candida infectious agent.
また、各プライマー別の検出率は表4のとおりであった。 The detection rates for each primer are shown in Table 4.
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