JP2007532610A - Kcnc1の神経変性疾患に関する診断的および治療的用途 - Google Patents
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Abstract
Description
(a)(i)KCNC1タンパク質をコードする遺伝子の転写産物を選択的に検出する試薬(ii)KCNC1タンパク質をコードする遺伝子の翻訳産物を選択的に検出する試薬、から成る群から選択された少なくとも1つの試薬;および(b)−前記被験者に由来する試料中の、KCNC1タンパク質をコードする遺伝子の前記転写産物および/または前記翻訳産物の、レベル、または活性、または前記レベルおよび前記活性の両方を検出する;および−神経変性疾患、特にADを診断するかまたは予測診断する、および/またはそのような疾患を発症する前記被験者の傾向または素因を判定する段階を記載することによる、神経変性疾患、特にADを診断するかまたは予測診断する、またはそのような疾患を発症する被験者の傾向または素因を判定するための指示であって、既知の健康状態を表す参照値(対照)と比較した前記転写産物および/または前記翻訳産物の、変化したレベル、または活性、または前記レベルおよび前記活性の両方、および/または、既知の疾患状態、好ましくはADの疾患状態を表す参照値と同様であるかまたは等しい、前記転写産物および/または前記翻訳産物の、レベル、または活性、または前記レベルおよび前記活性の両方が、神経変性疾患、特にADの診断または予測診断、またはそのような疾患を発症する高い傾向または素因を示す。本発明に記載のキットは、神経変性疾患、特にADを発症するリスクがある人の特定に特に有用である可能性がある。
(i)前記遺伝子配列および選択可能なマーカー配列を含む遺伝子ターゲッティング構造を提供、および(ii)前記ターゲティング構造を非ヒト動物幹細胞を非ヒト胚へ導入、および(iii)前記非ヒト動物幹細胞を非ヒト胚へ導入、および(iv)前記胚を偽妊娠非ヒト動物へ移植、および(v)前記胚を満期まで発生させること、および(vi)ゲノムが一方または両方の対立遺伝子に前記遺伝子配列の修飾を含む遺伝子操作非ヒト動物を特定すること、および(vii)段階(vi)の遺伝子操作非ヒト動物を繁殖させて、ゲノムが前記内因性遺伝子の修飾を含む遺伝子操作非ヒト動物を得ることを含む。前記遺伝子は、異所性発現、または低発現、または過剰発現であり、および、前記破壊または改変は神経変性疾患の神経病理に類似した症状、特にADに類似した神経病理の症状を発症する素因を示す前記非ヒト動物を結果として生じる。そのような動物の作製および構築のための戦略および技術は当業者に公知であり(たとえばカペッキ(Capecchi),Science 1989,244: 1288−1292 およびホーガン(Hogan)ら,『マウス胚操作:実験の手引き』(Manipulating the Mouse Embryo; A Laboratory Manual),コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー・プレス社(Cold Spring Harbor Laboratory Press),ニューヨーク州コールド・スプリング・ハーバー,1994 およびジャクソン(Jackson)およびアボット(Abbott),『マウス遺伝学および遺伝子組み換え:実践的手法』(Mouse Genetics and Transgenics; A Practical Approach),オックスフォード大学出版会,英国オックスフォード,1999を参照)。神経変性疾患、特にアルツハイマー病を調べるための動物モデルとして、そのような組み換え非ヒト動物を利用するのが好ましい。そのような動物は、神経変性疾患、特にアルツハイマー病を治療するための診断薬および治療薬の開発において、化合物、物質、および調節因子を、スクリーニング、試験、および評価するのに有用な被験動物または実験動物でありうる。
(i)AD患者由来の脳組織解剖:
AD患者および対応する年齢の対照被験者由来の脳組織を死後6時間以内に採取し、直ちにドライアイス上で凍結した。診断の組織病理的確認のため、各組織からの試料切片はパラホルムアルデヒドで固定した。発現差の分析のための脳の部分を特定し、RNA抽出を実施するまで-80℃にて保存した。
総RNAは、RNeasyキット(キアゲン(Qiagen))を取扱説明書に従って使用することによって、死後脳組織から抽出した。正確なRNA濃度およびRNA品質は、DNAラブチップ(LabChip)系を用いてアジレント(Agilent)2100バイオアナライザー(アジレント・テクノロジーズ(Agilent Technologies))を使用して測定した。調製したRNAの追加の品質試験、すなわち部分分解の排除およびDNA混入に関する試験は、特に設計したイントロンGAPDHオリゴヌクレオチドおよび参照対照としてゲノムDNAを使用して、ライトサイクラー(LightCycler)技術を取扱説明書(ロシュ(Roche))に従って用いて融解曲線を作成した。
異なる組織における遺伝子発現の変化を特定するために、我々は改変および改良したディファレンシャル・ディスプレイ(DD)スクリーニング法を使用した。元のDDスクリーニング法は当業者に公知である(リャン(Liang)およびパーディー(Pardee),Science1995,267:1186−7)。この方法は、RNAの2つの集団を比較し、および一方の集団で発現されているが他方の集団では発現されていない遺伝子のクローンを提供する。いくつかの試料を同時に分析することができ、および同一の実験でアップおよびダウンレギュレートされる遺伝子の両方を特定できる。DD法でのいくつかの段階を調整および改良し、および技術的パラメーターを修正、たとえば冗長性を増大、総RNAの逆転写のための最適化された試薬および条件を評価、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)およびその産物の分離を最適化することによって、高再現性および高感度の結果を可能にする方法が開発された。その応用および改良されたDD法はフォン・デル・カマー(von der Kammer)ら(NucleicAcids Research1999,27: 2211−2218)によって詳細に記載された。可能なすべてのRNA種の統計的に包括的な分析を達成するために、64種類の特に設計されたランダムプライマーの組が開発された(標準セット。さらに、蛍光標識化されたプライマーの使用に基づいて、本方法は修正されて調製用DDスラブゲル法を生じた。本発明では、アルツハイマー病患者および対応する年齢の対照被験者の注意深く選択された死後脳組織(前頭および側頭皮質)に由来するRNA集団を比較した。
再増幅されたcDNAをDNAラブチップ(LabChip)システム(アジレント2100バイオアナライザー、アジレント・テクノロジーズ(Agilent Technologies))で分析し、および取扱説明書に従ってPCR−ブラント(Blunt)II−TOPOベクターへライゲーションし、および大腸菌(E.coli)Top10F'細胞へ形質転換した(ゼロブラント(Zero Blunt)TOPO PCRクローニングキット、インビトロジェン(Invitrogen))。クローニングされたcDNA断片は市販の配列決定設備によって配列決定した。SULT4A1遺伝子についてのそのようなFDD実験の一つの結果を図1に示す。
側頭皮質対前頭皮質における、および海馬対前頭皮質におけるKCNC1遺伝子発現の差の裏付けを、ライトサイクラー(LightCycler)技術(ロシュ((Roche))を用いて実施した。この方法は、ポリメラーゼ連鎖反応についての迅速熱サイクリング、および増幅中の蛍光シグナルのリアルタイム測定を扱い、およびしたがって、終点計測値でなく動力学を用いたRT−PCR産物の高精度な定量を可能にする。AD患者のおよび対応する年齢の健常対照者の側頭皮質由来、AD患者のおよび対応する年齢の健常対照者の前頭皮質由来、AD患者および対応する年齢の健常対照者の海馬由来の、SULT4A1cDNAの比、およびAD患者のおよび対応する年齢の健常対照者の側頭皮質および前頭皮質由来のKCNC1cDNAの比、およびAD患者のおよび対応する年齢の健常対照者の海馬および前頭皮質由来のKCNC1cDNAの比をそれぞれ測定した(相対的定量)。
5'−TCCTGAAGCAGTCGGAGGTTT−3'(配列番号9;配列番号2のヌクレオチド2852−2872)を用いて、および、5'−CCCCACCCCACTAATTTTAGAATC−3'(配列番号10;配列番号2のヌクレオチド2975−2952)を用いて、標準曲線を作成した。
KCNC1タンパク質をコードする遺伝子について、試料の電気泳動図で124bpに、単一ピークが観察された。
10^((Ct値−切片)/傾き) [ng総脳DNA]
KCNC1側頭[ng]/シクロフィリンB側頭[ng]
比=−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
KCNC1前頭[ng]/シクロフィリンB前頭[ng]
KCNC1側頭[ng]/シクロフィリンB(P)側頭[ng]
比=−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
KCNC1(C)側頭[ng]/シクロフィリンB(C)側頭[ng]
KCNC1(P)前頭[ng]/シクロフィリンB(P)前頭[ng]
比=−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
KCNC1(C)前頭[ng]/シクロフィリンB(C)前頭[ng]
この分析に関して、別の時点での別の実験間のリアルタイム定量PCR(ライトサイクラー(Lightcycler)法)の絶対値は、キャリブレーターを使用しない定量比較に用いるのに十分に一貫性があることが証明された。シクロフィリンを、100を超える組織について、qPCR実験のどれでも正規化のための標準物質として用いた。我々の正規化実験において、中でもシクロフィリンは最も一貫して発現されたハウスキーピング遺伝子であることが見出された。したがって、シクロフィリンに関して生じた値を用いることによって概念実証が行われた。
総タンパク質抽出物を、1mlRIPA緩衝液(150mM塩化ナトリウム、50mMトリス−HCL、pH7.4、1mMエチレンジアミン−四酢酸、1mMフッ化フェニルメチルスルホニル、1%Triton X−100、1%デオキシコール酸ナトリウム、1%ドデシル硫酸ナトリウム、5μg/mlのアプロチニン、5μ/mlのロイペプチン)中での氷上でのホモジナイゼーションによって、Kv3.1b−mycを発現しているH4APPから取得した。4℃、3000rpmで5分間の遠心分離を2回行った後、上清をSDS−添加緩衝液中で5倍に希釈した。希釈試料のアリコート12μlをSDS−PAGE(8%ポリアクリルアミド)で溶解し、およびPVDFウェスタンブロッティング膜(ベーリンガーマンハイム(Boehringer Mannheim))に移した。ブロットは、ウサギポリクローナル抗myc抗体(MBL、1:5000)、続いて、ホースラディシュ・ペルオキシダーゼ−結合ヤギ抗ウサギIgG抗血清(サンタクルーズsc−2030、1:5000に希釈)でプローブし、およびECL化学発光検出キット(アマシャムファルマシア(Amersham Pharmacia)で展開した(図16)。
細胞中のkv3.1タンパク質の免疫蛍光染色のために、スウェーデン変異を有するヒトAPP695アイソフォームを安定に発現する(K670N、M671L)ヒト神経膠腫細胞株(H4細胞)を使用した(H4APPsw細胞)。H4APPsw細胞を、強いCMVプロモーターの調節下で、Kv3.1(Kv3.1 cds、1758bp、配列番号2の69から1826ヌクレオチド)のコード配列を含むpFB−Neoベクター(Stratagene(ストラタジーン)、#217561)、およびmyc−タグ(pFB−Neo−Kv3.1cds−myc、Kv.3.1−mycベクター、9036bp)で遺伝子導入した。Kv3.1−mycベクターの産生のために、Kv3.1−myc配列を、pFB−Neoベクターの多重クローニング部位(MCS)へと導入した。Kv3.1−mycベクターによるH4APPsw細胞の遺伝子導入のために、Stratagene(ストラタジーン)のレトロウイルス発現システムウィラポート(ViraPort)を用いた。
KCNC1の免疫蛍光染色のために、ヒト脳内のKv3.1bを、およびAD罹患組織と対照組織との比較のために、様々なブラーク病期(ブラーク4および5)でアルツハイマー病と臨床的に診断されおよび神経病理学的に確認された患者、ならびにアルツハイマーでない対応する年齢の対照者(ブラークおよび1)を含むドナーに由来する、死後の新鮮凍結前頭および側頭の前脳試料をクリオスタット(レイカ(Leica)CM3050S)を用いて厚さ14μmにそれぞれ切断した。組織切片を空気乾燥し、および20分間氷で冷却したアセトン中でまたは室温にて10分間4%PFA中で固定した。PBS中で洗浄した後、切片をブロッキング緩衝液(10%正常ヤギ血清、PBS中の0.2%TritonX−100)中で30分間プレインキュベートし、および次にアフィニティ精製したウサギポリクローナル抗Kv3.1b抗血清(ブロッキング緩衝液中で1:30に希釈;アロモネラボ(Alomone Labs);アミノ酸567−585)で4℃にて一夜インキュベートした。0.1%TritonX−100/PBS中で3回すすいだ後、切片をFITC−複合ヤギ抗ウサギIgG抗血清(ジャクソン(Jackson)/ディアノバ(Dianova)、No.111−096−045、1%BSA/PBS中で1:150に希釈)で室温にて2時間インキュベートし、および次に再びPBS中で洗浄した。核の染色は、切片をPBS中の5μMのDAPIで3分間インキュベーションすることによって実施した(青色のシグナル)。神経細胞の染色を、神経細胞系特異的マーカーNeuNに対するマウスモノクローナル抗体(ケミコン(Chemicon)、MAB377、1:400に希釈)および二次Cy3−複合ヤギ抗マウス抗体(ディアノバ(Dianova)、115−166−062、1:600に希釈)を用いて実施した。一般にKv3.1bの免疫活性は、大脳皮質中に、神経体細胞中に、ならびに細点線の分布をした神経網中に主としてみとめられた。Kv3.1b免疫活性は、星状細胞、CD−68陽性ミクログリア、CNPase陽性乏突起膠細胞には実質的に検出されず、およびミエリンとの関連性はない。さらなる結果を図17および18において示す。アミロイド斑の染色(Abeta沈着、神経斑、びまん性斑)を抗マウス抗体6E10(バイオソース(Biosource), 44−352, 10% NGS/0.2% Triton X−100/PBS中で1:200)を用いて実施した(図20)。異常なリン酸化タウに特異的な抗マウス抗体(AT100, イムノジェネティクス(Innogenetics BR−012, 10%NGS/0.2%Triton X−100/PBS中で1:300)を用いてタウの染色(神経絨毛糸、神経原線維変化)を実施した(図19)。星状細胞の染色は、星状細胞特異的マーカーGFAPに対する抗体を用いて実施し(アブカム(Abcam)、AB780b、1:300に希釈)、ミクログリアの染色はミクログリア特異的マーカーCD68に対する抗体を用いて実施し(ダコ(DAKO)、Mo718、1:200に希釈)、および乏突起膠細胞に対する染色は、乏突起膠細胞特異的マーカーCNPaseに対する抗体を用いて実施した(シグマ(Sigma)、C5P22、1:400に希釈)。ヒト脳内のリポフスチンの自己蛍光を遮断するために、切片を70%エタノール中の1%スーダンブラックBで室温にて2〜10分間処理し、および次に順次70%エタノール、蒸留水およびPBS中に浸漬した。切片を「ベクタシールド(Vectashield)」封入培地(ベクター・ラボラトリーズ(Vector Laboratories)、カリフォルニア州バーリンゲーム)でカバースリップした。顕微鏡画像を、暗視野エピ蛍光法および明視野 位相差照明条件(IX81、オリンパス光学(Olympus Optical))を用いて取得した。顕微鏡画像をPCOセンシカムでデジタル撮像し、および適切なソフトウェア(アナリシス、オリンパス光学(Olympus Optical))を用いて分析した(図17〜20を参照)。
Claims (16)
- 被験者においてアルツハイマー病を診断または予測診断する、または被験者が前記疾患を発症する高いリスクがあるかどうかを判定する、
前記被験者由来の試料中の
(i)KCNC1タンパク質をコードする遺伝子の転写産物、および/または
(ii)KCNC1タンパク質をコードする遺伝子の翻訳産物、および/または
(iii)前記転写または翻訳産物の断片、または誘導体、または変異体、
のレベルおよび/または活性を測定し、および前記転写産物または前記翻訳産物の前記レベルおよび/または前記活性を、既知の疾患状態を表す参照値と、および/または既知の健康状態を表す参照値と比較し、および前記レベルおよび/または前記活性が既知の健康状態を表す参照値と比較して変動し、および/または既知の疾患状態を表す参照値と同様または等しく、それによって前記被験者においてアルツハイマー病を診断または予測診断すること、または前記被験者が前記疾患を発症する高いリスクがあるかどうかを判定すること
を含む方法。 - 前記遺伝子が配列番号1を持つKCNC1をコードする、請求項1に記載の方法。
- 前記遺伝子が配列番号4を持つKCNC1をコードする、請求項1に記載の方法。
- 被験者においてアルツハイマー病を診断または予測診断する、または被験者のそのような疾患を発症する傾向または素因を判定するためのキットであって、
前記キットは、(i)配列番号1および/または配列番号4を持つKCNC1タンパク質をコードする遺伝子の転写産物を選択的に検出する試薬および(ii)配列番号1および/または配列番号4を持つKCNC1タンパク質をコードする遺伝子の翻訳産物を選択的に検出する試薬、から成る群から選択された少なくとも一つの試薬
を含み、かつそれにより、アルツハイマー病を発症する傾向または素因の診断または予測診断を下記の段階によって行う、前記キット。
(i)前記被験者に由来する試料中の、配列番号1および/または配列番号4を持つKCNC1タンパク質をコードする遺伝子の転写産物および/または翻訳産物の、レベル、または活性、または前記レベルおよび前記活性の両方を検出すること、および(ii)配列番号1および/または配列番号4を持つKCNC1タンパク質をコードする遺伝子の転写産物および/または翻訳産物の前記レベルまたは活性、または前記レベルおよび前記活性の両方を、既知の健康状態を表す参照値とおよび/または既知の疾患状態を表す参照値と比較すること、および配列番号1および/または配列番号4を持つKCNC1タンパク質をコードする遺伝子の前記転写産物および/または前記翻訳産物の前記レベル、または活性、または前記レベルおよび前記活性の両方が、既知の健康状態を表す参照値と比較して変化し、および/または既知の疾患状態を表す参照値と同様または等しい。 - (i)配列番号1および/または配列番号4を持つKCNC1タンパク質をコードする遺伝子、および/または
(ii)配列番号1および/または配列番号4を持つKCNC1タンパク質をコードする遺伝子の転写産物、および/または
(iii)配列番号1および/または配列番号4を持つKCNC1タンパク質をコードする遺伝子の翻訳産物、および/または
(iv)(i)から(iii)の断片、または誘導体、または変異体
からなる群から選択された少なくとも一つの物質の活性および/またはレベルの調整因子。 - 配列番号1および/または配列番号4を持つKCNC1タンパク質、またはその断片、または誘導体、または変異体をコードする非天然遺伝子配列を含む、遺伝子組み換え非ヒト動物であって、前記動物は
(i)前記遺伝子配列および選択可能なマーカー配列を含む遺伝子ターゲッティング構造を提供する;および
(ii)前記ターゲッティング構造を非ヒト動物の幹細胞に導入する;および
(iii)前記非ヒト動物幹細胞を非ヒト胚へ導入する;および
(iv)前記胚を偽妊娠非ヒト動物へ移植する;および
(v)前記胚を満期まで発生させる;および
(vi)ゲノムが前記遺伝子配列の修飾を両方の対立遺伝子に含む、遺伝子操作非ヒト動物を特定すること;および
(vii)段階(vi)の遺伝子操作非ヒト動物を繁殖させて、ゲノムが前記内因性遺伝子の修飾を含む遺伝子操作非ヒト動物を得ることを含み、前記破壊は神経変性疾患または関連する疾患または障害の症状を発症する素因を示す非ヒト動物を結果として生じる
ことによって得ることが可能である。 - 神経変性疾患、特にアルツハイマー病を治療するための診断薬および治療薬の開発において、化合物、物質、および調節因子を、スクリーニング、試験、および評価するための、請求項6に記載の組み換え非ヒト動物の使用。
- アルツハイマー病、または関連する疾患または障害の調節因子についての、
(i)配列番号1および/または配列番号4を持つKCNC1タンパク質をコードする遺伝子、および/または
(ii)配列番号1および/または配列番号4を持つKCNC1タンパク質をコードする遺伝子の転写産物、および/または
(iii)配列番号1および/または配列番号4を持つKCNC1タンパク質をコードする遺伝子の翻訳産物、および/または
(iv)(i)から(iii)の断片、または誘導体、または変異体
から成る群から選択された一種類以上の物質のスクリーニングのための測定法であって、
(a)細胞を被験化合物と接触させること;
(b)(i)から(iv)で列挙された一種類以上の物質の、活性および/またはレベルを測定すること;
(c)前記被験化合物と接触させていない対照細胞中の、(i)から(iv)で列挙された一種類以上の物質の、活性および/またはレベルを測定すること;および、
段階(b)および(c)の細胞中の物質のレベルおよび/または活性を比較するが、接触された細胞中の物質の活性および/またはレベルの変化は被験化合物が前記疾患または障害の調節因子であることを示すこと
を含む前記方法。 - アルツハイマー病、または関連する疾患または障害の調節因子についての、
(i)配列番号1および/または配列番号4を持つKCNC1タンパク質をコードする遺伝子、および/または
(ii)配列番号1および/または配列番号4を持つKCNC1タンパク質をコードする遺伝子、の転写産物、および/または
(iii)配列番号1および/または配列番号4を持つKCNC1タンパク質をコードする遺伝子、の翻訳産物、および/または
(iv)(i)から(iii)の断片、または誘導体、または変異体
から成る群から選択された一種類以上の物質のスクリーニングのための測定法であって、
(a)(i)から(iv)で列挙された一種類以上の物質に関して、神経変性疾患または関連する疾患または障害の症状を発症する素因があるかまたは既に発症している非ヒト被験動物に、被験化合物を投与すること;
(b)(i)から(iv)で列挙された一種類以上の物質の、活性および/またはレベルを測定すること;
(c)(i)から(iv)で列挙された一種類以上の物質に関して、およびそのような被験化合物が投与されていない、神経変性疾患または関連する疾患または障害の症状を発症する素因があるかまたは既に発症している対応する対照動物において、(i)または(iv)で列挙された一種類以上の物質の活性および/またはレベルを測定すること;
(d)段階(b)および(c)の動物における物質の活性および/またはレベルを比較するが、被験動物における物質の活性および/またはレベルの変化は被験化合物が前記疾患または障害の調節因子であることを示すこと
を含む前記方法。 - 前記非ヒト被験動物および/または前記非ヒト対照動物が、天然のKCNC1遺伝子転写調節要素ではない転写調節要素の調節下にある、配列番号1および/または配列番号4を持つKCNC1タンパク質遺伝子、またはその断片、または誘導体、または変異体を発現する組み換え動物である、請求項9に記載の方法。
- 化合物の試験のための、好ましくは複数の化合物のスクリーニングのための、配列番号1および/または配列番号4を持つKCNC1タンパク質へのまたはその断片、または誘導体、または変異体への前記化合物の結合の程度を決定するための分析法であって、
(i)配列番号1および/または配列番号4を持つKCNC1タンパク質、またはその断片、または誘導体、または変異体の懸濁液を複数の容器に加える;
(ii)前記結合についてスクリーニングされる、検出可能な、特に蛍光標識される化合物、または検出可能な、特に蛍光標識される複数の化合物を前記複数の容器に加える;
(iii)前記配列番号1および/または配列番号4を持つKCNC1タンパク質、またはその前記断片、または誘導体、または変異体、および前記検出可能な、特に蛍光標識される化合物または検出可能な、特に蛍光標識される複数の化合物をインキュベートする;
(iv)前記配列番号1および/または配列番号4を持つKCNC1タンパク質、またはその前記断片、または誘導体、または変異体と相関する好ましくは蛍光量を測定する;および
(v)一種類以上の前記化合物による前記配列番号1および/または配列番号4を持つKCNC1タンパク質、またはその前記断片、または誘導体、または変異体への結合の程度を判定する
段階を含む分析法。 - 配列番号1および/または配列番号4を持つタンパク質分子をコードする核酸分子で形質転換された細胞であって、細菌細胞、酵母細胞、哺乳細胞または昆虫細胞である細胞。
- 配列番号1を持つ単離されたタンパク質分子。
- アルツハイマー病を検出するための診断標的としての、前記配列番号1および/または配列番号4を持つKCNC1をコードする遺伝子、またはその断片、または誘導体、または変異体であるタンパク質分子の使用。
- アルツハイマー病を予防する、または治療する、または改善する試薬または化合物についてのスクリーニング標的としての使用のための、配列番号1および/または配列番号4を持つKCNC1をコードする遺伝子のタンパク質分子の使用。
- 被験者由来の試料中の細胞の病理状態を検出するための、免疫原と特異的に免疫反応性である抗体の使用であって、前記免疫原が前記配列番号1および/または配列番号4を持つKCNC1タンパク質をコードする遺伝子の翻訳産物、またはその断片、または誘導体、または変異体であり、前記抗体を用いた前記細胞の免疫細胞化学染色を含み、ここで既知の健康状態を表す細胞と比較した前記細胞における染色の程度の変化、または染色パターンの変化がアルツハイマー病と関係する前記細胞の病理状態を示す前記使用。
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