JP2007530058A

JP2007530058A - 識別のための試金は混合するｍＲＮＡの安定性に影響を与える

Info

Publication number: JP2007530058A
Application number: JP2007505349A
Authority: JP
Inventors: キャステリック、タニア; シェネバル、ドミニク
Original assignee: ノベーションファーマシューティカルズインク．
Priority date: 2004-04-01
Filing date: 2005-04-01
Publication date: 2007-11-01
Also published as: US20090068654A1; WO2005095615A1; US20040231007A1; US7598079B2; EP1774000A4; US20070190532A1; EP1774000A1; AU2005229165A1; CA2603585A1

Abstract

【解決手段】本発明は生物学的活性化合物を同定するためのアッセイに関するものであり、特にｍＲＮＡの安定性への作用を有する化合物を同定するためのレポーター遺伝子アッセイに関する。より具体的には、本発明は、リポーター遺伝子発現系及び前記発現系を有する細胞株に関するものである。本発明は更に、不安定化ｍＲＮＡ化合物に関するものである。
【選択図】図３Ａ

Description

現在の発明は生物的試金の分野と特にｍＲＮＡの安定性に効果をもたらす生物学的に活動的な混合物の同一証明のための試金に関連している。

ｍａｍｍａｌｉａｎ細胞のメッセンジャーＲＮＡの表現は非常に調整される。伝統的に、重点は遺伝子がｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌのレベルで調整されるメカニズムを明瞭にすることに置かれた；し、ｍＲＮＡの定常レベルは半減期または低下率にまた依存している。ｍＲＮＡの安定性の変更は多くのｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ遺伝子の表現のレベルの調整の重要な役割を担い、異なったメカニズムはｍＲＮＡの転換の規則のために提案された（ＣｌｅｖｅｌａｎｄａｎｄＹｅｎ，１９８９，ＮｅｗＢｉｏｌ．１：１２１；ＭｉｔｃｈｅｌｌａｎｄＴｏｌｌｅｒｖｅｙ，２０００，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｇｅｎｅｔ．Ｄｅｖ．１０：１９３；ＭｉｔｃｈｅｌｌａｎｄＴｏｌｌｅｒｖｅｙ，２００１，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１３：３２０；Ｒｏｓｓ，Ｊ．１９９５，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．５９：４２３；Ｓａｃｈｓ，Ａ．Ｂ．，１９９３，Ｃｅｌｌ７４：４１３；Ｓｔａｔｏｎｅｔａｌ．２０００，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ２５：１７；Ｗｉｌｕｓｚｅｔａｌ．２００１，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．ＣｅｌｌＢｉｏｌ．２：２３７）。但し、ｍＲＮＡの安定性の規則は複雑である。規則は最終的にｍＲＮＡの安定性順序の決定要因の処理の要因の相互作用に影響を及ぼす複雑な信号のｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎの細道の介入と同様、ｍＲＮＡで順序の要素自体をのｎｕｃｌｅａｓｅｓの活発化、含むことができる。

最近、それはＲＮＡの半分の生命の規則が遺伝子発現の堅い制御の重大な役割を担うこと、そしてｍＲＮＡの低下が非常に管理されたプロセスであることますます明白になった。ＲＮＡの不安定はトランスクリプション率の変更に急流をｍＲＮＡのコピーのレベルの規則または可能にする。いくつかの重大な細胞要因、例えばトランスクリプションはｃのｍｙｃのような考慮する、正規関数を行うためにまたはｃｙｔｏｋｉｎｅｓのようなホストの免疫反応にかかわる遺伝子プロダクトは、あるように一時的だけ要求される。これらの要因のためにコードするｍＲＮＡｓの一時的な安定は要求されたときこれらのメッセージの蓄積そして翻訳が望ましい細胞要因を表現するようにする；、これらのｍＲＮＡｓの急速な回転率が効果的におよび限るｎｏｎｓｔａｂｉｌｉｓｅｄ、通常状態の下で一方「細胞要因のｏｆｆの表現を転換しなさい。従って、異常なｍＲＮＡの転換は通常劇的に細胞特性を変更できる変えられた蛋白質のレベルをもたらす。

ｍＲＮＡの安定は炎症性ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ、成長因子およびある特定の原始ｏｎｃｏｇｅｎｅｓの表現にかかわる主要な規定するメカニズムのようである。病気にかかった州では、病気関係した要因のｍＲＮＡの半減期そしてレベルはｍＲＮＡ安定のためにかなり増加する（Ｒｏｓｓ，Ｊ．１９９５，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．５９：４２３；Ｓａｃｈｓ，Ａ．Ｂ．，１９９３，Ｃｅｌｌ７４：４１３；Ｓｔａｔｏｎｅｔａｌ．２０００，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ２５：１７；Ｗｉｌｕｓｚｅｔａｌ．２００１，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．ＣｅｌｌＢｉｏｌ．２：２３７）．トランスクリプション率およびｍＲＮＡの安定性はｃ−ｍｙｃおよびｃＦＯＳのような一時的に表現された遺伝子、およびＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ３、ＴＮＦのおよびＧＭ−ＣＳＦのようなｃｙｔｏｋｉｎｅｓのために頻繁に堅くそして同等に調整される。さらに、ｍＲＮＡ安定の異常な規則は望ましくない細胞の変形、炎症性応答を損なう例えば腫瘍の形成を、か不適当もたらす細胞要因の不必要な蓄積をおよびティッシュもたらすことができる。

ｍＲＮＡの安定性を制御するメカニズムが理解される様子はまったくないが、順序の地域は不安定それらを含んでいるｍＲＮＡｓで相談するようであるいくつかのｍＲＮＡｓで識別された。これらの順序の地域は「ｍＲＮＡ不安定順序」のとここに言われる。例えば、いくつかの即時の早い遺伝子を含むある特定の遺伝子および炎症性ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ、例えばＩＬ１のおよびＴＮＦののためにコードする遺伝子の３ ’ ＵＴＲ（３ ’未翻訳の地域）にある典型的なｍＲＮＡの不安定順序はＡＲＥｓ（ａｄｅｎｙｌａｔｅ／ｕｒｉｄｙｌａｔｅ（ＡＵの）豊富な要素）である。最もよく特徴付けられたＡＵ豊富な要素はショウＫａｍｅｎいわゆる箱またはであるＡＵＵＵＡｍｏｔｉｆ（ＳｈａｗａｎｄＫａｍｅｎ，１９８６，Ｃｅｌｌ４６：６５９）．多数ＡＵＵＵＡ順序（の近似性またはタンデム）またはＡＵ豊富な地域はｍＲＮＡの不安定で関係した。例えば、次に識別される文献の参照で記述されているｍＲＮＡの不安定順序は順序のモチーフの１つ以上のコピーを、例えばから選ばれて含んでいる：ＡＵＵＵＡ；ＵＡＵＵＵＡＵ；ＵＵＡＵＵＵＡ（Ｕ／Ａ）（Ｕ／Ａ），ａｎｄＡＵＵＵＡＵＵＵＡ．普通、不安定の決定要因として作用するために、ＡＵＵＵＡのモチーフは少なくとも１つを形作るタンデムで整理されるべきであるＵＵＡＵＵＵＡＵ／ＡＵ／Ａｅｌｅｍｅｎｔ（Ｌａｇｎａｄｏｅｔａｌ．，１９９４，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１４：７９８４）。

次の出版物はｍＲＮＡの不安定順序およびＡＲＥｓの含み、（最低）いくつかのｍＲＮＡの不安定順序の識別と同様、ｍＲＮＡの不安定化のための条件を、および配列しなさい順序のモチーフの広汎な議論を含んでいる、
それらを含んでいる遺伝子。

ＳｈａｗａｎｄＫａｍｅｎ，Ｃｅｌｌ，１９８６，４６：６５９-６６７（ＧＭ-ＣＳＦ）；
Ｓｈｙｕｅｔａｌ．，Ｇｅｎｅｓ & Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，１９９１，１５：２２１-２３１（ｃ-ｆｏｓ）；
Ｓａｃｈｓ，Ｃｅｌｌ，１９９３，７４：４１３-４２１（Ｒｅｖｉｅｗ． ”ＭｅｓｓｅｎｇｅｒＲＮＡＤｅｇｒａｄａｔｉｏｎｉｎ
Ｅｕｋａｒｙｏｔｅｓ”）；
Ｃｈｅｎｅｔａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９４，１４：４１６-４２６（ｃ-ｆｏｓ）；
Ａｋａｓｈｉｅｔａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１９９４，８３：３１８２-３１８７（ＧＭ-ＣＳＦｅｔｃ．）；
Ｎａｎｂｕｅｔａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９４，１４：４９２０-４９２０（ｕＰＡ）；
Ｓｔｏｅｃｋｌｉｎｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９４，２６９：２８５９１-２８５９７（ＩＬ-３）；
Ｌａｇｎａｄｏｅｔａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９４，１４：７９８４-７９９５（ｇｅｎｅｒａｌ）；
Ｚｈａｎｇｅｔａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９５，１５：２２３１-２２４４（ｙｅａｓｔ）；
Ｚｕｂｉａｇａｅｔａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９５，１５：２２１９-２２３０（ｇｅｎｅｒａｌ）；
Ｗｉｎｓｔａｌｌｅｔａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９５，１５：３７９６-３８０４（ｃ-ｆｏｓ，ＧＭ-ＣＳＦ）；
Ｃｈｅｎｅｔａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９５，１５：５７７７-５７８８（ｃ-ｆｏｓ，ＧＭ-ＣＳＦ）；
Ｃｈｅｎｅｔａｌ．，ＴＩＢＳ，１９９５，２０：４６５-４７０（ｒｅｖｉｅｗ）；
Ｌｅｖｙｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９６，２７１：２７４６-２７５３（ＶＥＧＦ）；
Ｋａｓｔｅｌｉｃｅｔａｌ．，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ，１９９６，８：７５１-７６１；
Ｃｒａｗｆｏｒｄｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９７，２７２：２１１２０-２１１２７（ＴＮＦ(）；
Ｘｕｅｔａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９７，１８：４６１１-４６２１（ｇｅｎｅｒａｌ）；
Ｄａｎｎｅｒｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９８，２７３：３２２３-３２２９（ｈｕｍａｎ (２-ＡｄｒｅｎｅｒｇｉｃＲｅｃｅｐｔｏｒ）；
Ｌｅｗｉｓｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９８，２７３：１３７８１-１３７８６（ＴＮＦ(）；
Ｃｈｅｎ，Ｃ．-Ｙ．ａｎｄＳｈｙｕ，Ａ．-Ｂ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９４，１４：８４７１-８４８２；および
Ｋｌａｕｓｎｅｒ，Ｒ．ｅｔａｌ．，Ｃｅｌｌ，１９９３，７２：１９-２８。

この基礎的な情報は現在の発明への可能な関連性であると志願者が信じる情報を発表するために提供される。先行する情報のうちのどれかが現在の発明に対して前芸術を構成する入場は必ずしも意図されていない、解釈されるべきである。

現在の発明の目的はｍＲＮＡの安定性に影響を与える混合物を識別するために試金を提供することである。現在の発明の面に従って、そこにＤＮＡの表現のベクトル構成提供される：最初のＤＮＡ順序１つ以上の探索可能な信号を持っている蛋白質のためのコード配列から成り立つ；１つ以上の３’ＵＴＲ順序は前述のコード配列と１つ以上表現の制御シーケンス有効に、関連付け、１つ以上に対応する第２ＤＮＡ順序から成り立つ前述の３’ＵＴＲ順序に挿入された異種不安定順序のＤＮＡは１つ以上の自然発生する遺伝子からｍＲＮＡの不安定順序得た。

発明の別の面に従う、提供されたａが固定してｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ細胞構成ライン構成をある：探索可能な信号を持っている最初の蛋白質を符号化する最初のＤＮＡ順序から成り立つＤＮＡの表現のベクトルは言われた最初ＤＮＡ順序と１つ以上の３ ′ ＵＴＲ順序１つ以上表現の制御シーケンス有効に関連付け、異種不安定順序のＤＮＡは３つの′ ＵＴＲ順序、１つ以上に対応する第２ＤＮＡ順序から成り立つ言われた不安定順序のＤＮＡ言われるに１つ以上の自然発生する遺伝子から得られたｍＲＮＡの不安定順序挿入した；そして探索可能な信号を持っている第２蛋白質を符号化する制御ＤＮＡ順序から成り立つ制御ＤＮＡの表現のベクトルおよび１つ以上の３ ′ ＵＴＲ順序は前述の制御ＤＮＡ順序とおよび１つ以上表現の制御シーケンス有効に関連付けた。

発明の別の面に従って、そこにステップから成り立つｍＲＮＡの安定性に影響を与えなさい１つ以上に混合物を選別する方法提供される：
ｉ）蛋白質は異種ｍＲＮＡの不安定順序で少なくとも１枚のコピーを構成することを言われた表現のベクトルから転写され、符号化する言われるかｍＲＮＡテスト混合物がない時探索可能な信号を持っている蛋白質を表現することができるＤＮＡの表現のベクトルを提供する
ｉｉ）テスト混合物がない時、言われたＤＮＡの表現システムが探索可能な信号を持っている言われた蛋白質を表現することができるという条件の下の少なくとも１つのテスト混合物との言われたＤＮＡの表現のベクトルの連絡
ｉｉｉ）測定の言われた探索可能な信号；および
ｉｖ）制御と測定された探索可能な信号を比較すること
言われた制御と比較される測定された探索可能な信号の減少が示すか言われた制御と比較される測定された探索可能な信号のｍＲＮＡの安定性そして増加を減らす混合物はｍＲＮＡの安定性を高める混合物を示す。

発明の別の面に従って、そこにステップをで構成する２つ以上の混合物によって引き起こされるｍＲＮＡの低下の範囲を比較するために方法提供される：
ｉ）蛋白質は異種ｍＲＮＡの不安定順序で少なくとも１枚のコピーを構成することを言われた表現のベクトルから転写され、符号化する言われるかｍＲＮＡテスト混合物がない時探索可能な信号を持っている蛋白質を表現することができるＤＮＡの表現のベクトルを提供する、
ｉｉ）テスト混合物がない時、言われたＤＮＡの表現システムが探索可能な信号を持っている言われた蛋白質を表現することができるという言われたＤＮＡの表現のベクトルに別に２つ以上と連絡して条件の下で混合物をテストしなさい
ｉｉｉ）各テスト混合物の前の測定の言われた探索可能な信号；および
ｉｖ）手段探索可能な信号の比較；より低い手段探索可能な信号がｍＲＮＡの低下のすばらしい範囲を示すか。

発明の別の面に従って、そこにｍＲＮＡの構成を不安定にする混合物のための選別に試金システム提供される：
ｉ）探索可能な信号、一つ以上の３’ ＵＴＲ順序を持っている最初の蛋白質を符号化する最初のＤＮＡ順序から成り立つＤＮＡの表現のベクトルは一つ以上の自然に起こる遺伝子から一つ以上有効に前述のＤＮＡ順序と、及び前述の３’ ＵＴＲ順序に挿入された異種不安定順序のＤＮＡ関連付けられた表現の制御シーケンス一つ以上に対応する第２ＤＮＡ順序から成り立つ前述の不安定順序のＤＮＡｍＲＮＡの不安定順序得；および
ｉｉ）探索可能な信号を持っている制御蛋白質を符号化する制御ＤＮＡ順序から成り立つ制御ＤＮＡの表現のベクトル及び一つ以上の３’ ＵＴＲ順序は前述の制御ＤＮＡ順序と及び一つ以上表現の制御シーケンス有効に関連付けた。

発明の別の面に従って、ｍＲＮＡの構成の安定性に影響を与える混合物を識別するためにそこに混合物の図書館を選別する為に高い効率方法提供される：
ｉ）ａを提供することは固定して蛋白質は異種ｍＲＮＡの不安定順序で少なくとも１枚のコピーを構成することを言われた表現のベクトルから転写され、符号化する言われるかｍＲＮＡテスト混合物がない時探索可能な信号を持っている蛋白質を表現することができるＤＮＡの表現のベクトルから成り立つ細胞ラインをｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ；
ｉｉ）前述の細胞との成長媒体から成り立つ一つ以上のｍｕｌｔｉ−ｗｅｌｌの版の井戸を再接種して並べなさい；
ｉｉｉ）維持は前述の細胞ラインの細胞が探索可能な信号を持っている前述の蛋白質を育て、表現するようにする条件の下で一つ以上のｍｕｌｔｉ−ｗｅｌｌの版を言った；
ｉｖ）連絡して一つ以上の細胞は混合物をテストする；
ｖ）手段の前述の探索可能な信号；および
ｖｉ）制御と手段探索可能な信号を比較すること；
前述の制御と比較される手段探索可能な信号の減少が示すか前述の制御と比較される手段探索可能な信号のｍＲＮＡの安定性そして増加を減らす混合物はｍＲＮＡの安定性を高める混合物を示す。

発明の別の面に従って、そこに、前述の試金システム構成にキット試金システムから成り立つｍＲＮＡを不安定にする混合物のための選別提供される：
ｉ）一つ以上探索可能な信号、一つ以上の３’ ＵＴＲ順序を持っている蛋白質を符号化する最初のＤＮＡ順序から成り立つＤＮＡの表現のベクトルは一つ以上の自然に起こる遺伝子から一つ以上有効に前述の最初ＤＮＡ順序と、及び前述の３’ ＵＴＲ順序に挿入された異種不安定順序のＤＮＡ関連付けられた表現の制御シーケンス一つ以上に対応する第２ＤＮＡ順序から成り立つ前述の不安定順序のＤＮＡｍＲＮＡの不安定順序得；および
ｉｉ）探索可能な信号を持っている第２蛋白質を符号化する制御ＤＮＡ順序から成り立つ制御ＤＮＡの表現のベクトルは前述の制御ＤＮＡ順序と一つ以上の３’ＵＴＲ順序一つ以上表現の制御シーケンス有効に関連付け；そして任意に
ｉｉｉ）使用説明。

Ｔ彼は少なくとも１つのｍＲＮＡの不安定順序および任意に順序に対応するＤＮＡと共同してレポーターの遺伝子を構成する不安定のｍＲＮＡを並べるＤＮＡの表現システムを発明を提供する示す。このＤＮＡは”不安定順序ＤＮＡ” のとか”ｉｓＤＮＡ” 言われ、普通ある自然に起こる遺伝子（”源遺伝子” の）の３’ＵＴＲかコーディングの地域にある源の遺伝子から転写されるｍＲＮＡの安定性に影響を与えると知られ、ヌクレオチド順序から成り立つ。従って、発明の表現システムに組み込まれるｉｓＤＮＡは３’ ＵＴＲまたは一つ以上で３’ ＵＴＲの片源の遺伝子の全体の３’ＵＴＲに対応する順序か相当な部分を構成できる。ｉｓＤＮＡは一つ以上単一の源の遺伝子、または源の遺伝子の大多数から得られる不安定順序（及び任意に並ぶ地域）から成り立つかもしれない。現在の発明の表現システムは５’ 及び３’ 未翻訳の地域を含む適切な３’ａｎｄ５’ 遺伝子の並ぶ順序とともに普通レポーターの遺伝子を、構成する（ＵＴＲｓ）。現在の発明の表現システムでは、ｉｓＤＮＡはレポーターの遺伝子と関連付けられる３’ ＵＴＲに挿入される。従って、ｉｓＤＮＡはレポーターの遺伝子と関連付けられる３’ＵＴＲのＤＮＡに異種である。

ｍＲＮＡの安定性に影響を与える混合物を識別するそれ以上の発明は試金のＤＮＡの表現システムの使用を提供する。それに応じて、現在の発明はテスト混合物がない時探索可能な信号を持っている蛋白質を表現することができるＤＮＡの表現システムがテスト混合物の前でテスト混合物および探索可能な信号と測定され、制御と比較される連絡されるｍＲＮＡの安定性に影響を与える混合物の同一証明に方法を提供する。

発明の方法はｍＲＮＡの不安定順序を含んでいるｍＲＮＡｓの不安定を促進する混合物の同一証明のために合わせられる。組合わせの混合の図書館を含む混合物の個々の混合物そして図書館を、選別するのにレポーターの遺伝子の試金が使用されるかもしれない。鉛混合物を識別するのに最初のラインスクリーニングの試金としてレポーターの遺伝子の試金が使用され、例えば薬効がある化学鉛の最適化のｄｅｒｉｖａｔｉｓａｔｉｏｎプログラムから作り出される混合物を比較するために混合物の活動を促進するｍＲＮＡの不安定を比較するか、または量を示すのに使用されるかもしれない。

従ってｍＲＮＡの不安定順序を含んでいるｍＲＮＡｓの不安定を促進する混合物が主題のそのようなｍＲＮＡｓの低下を使用することができ、防ぎか、または不適当なｍＲＮＡの蓄積を逆転させ、そしてそれにより不必要な蛋白質の表現引き起こすのに、例えば不必要なｃｙｔｏｋｉｎｅの表現を減らすか、または防ぐ。そのような混合物に不適当なｍＲＮＡ安定および蓄積および結果として生じる望ましくない蛋白質の表現含む病状か病気の予防法で潜在的な薬物の適用がや処置ある。

他では定義されて、技術的な、科学的な言葉すべてはこの発明が属する芸術で通常の技術の１つによって一般に理解されるとここに持っている同じ意味を使用しなかった。一般に、専門語は細胞培養、分子生物学、選別法、および核酸化学で実験室のプロシージャここに使用し、後で記述されている混合の同一証明はそれらの有名及び芸術で一般に雇われてである。標準的な技術はベクトル、組換えの核酸方法、細胞培養および変形の準備のために普通使用される。

技術およびプロシージャは芸術および様々な一般参照で従来の方法に従って一般に行われる（一般に見なさい，Ｓａｍｂｒｏｏｋｅｔａｌ．ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，２ｄｅｄ．（１９８９）ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，ａｎｄＬａｋｏｗｉｃｚ，Ｊ．Ｒ．ＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓｏｆＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅＳｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ，ＮｅｗＹｏｒｋ：ＰｌｅｎｕｍＰｒｅｓｓ（１９８３）蛍光性の技術のため）．標準的な技術は化学統合、化学分析、および生物的試金のために使用される。次の意味があるために、次の言葉に発表中雇われるように、特記されない場合は、理解される。

定義
ここに使用されるように言葉”オリゴヌクレオチド、” はリボ核酸（ＲＮＡ）またはデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）のどれである場合もあるヌクレオチドの順序を、示す。

ここに使用されるように言葉”レポーター遺伝子、” は探索可能な蛋白質を符号化する遺伝子を、示す。レポーターの遺伝子によって符号化される探索可能な蛋白質はそうかもしれない例えば、蛍光蛋白質か探索可能な信号を与える適切な基質か他の物質と反応することができるかもしれない。

ここに使用されるように言葉”探索可能な信号、” は直接または間接的に検出することができる信号を、示す。普通、探索可能な信号は分光、光化学、生化学的な、ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ、または化学薬品の平均によって検出することができる。探索可能な信号は直接作り出されるかもしれないか、または適した”共役” との反作用か相互作用によって間接的に作り出されるかもしれない（例えば、基質、抗体、ｌｉｇａｎｄ、および同類）。

ここに使用されるように言葉”テスト混合物、” は発明の試金そして方法に従ってテストし、含むことができる限られないために、有機金属混合物、ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ、オリゴヌクレオチド、ペプチッド、蛋白質、有機化合物、金属、過渡的な金属の複合体、および小さい分子を、示す混合物（例えば、ｎｏｎ−ｐｅｐｔｉｄｉｃ及び非ｎｏｎ−ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃ混合物）。

言葉”不安定順序” はｍＲＮＡの安定性を調整することができるヌクレオチド順序を示す。現在の発明の文脈では、”不安定順序” は不安定正常な生理学的な条件、不安定生理学に異常の下でｍＲＮＡで相談する相談するが、または少しがある、または否、正常な生理学的な条件の下のｍＲＮＡの安定性に対する効果に重点を置いたりある圧力の条件の下でｍＲＮＡの安定性を高めるヌクレオチド順序と同様、条件、ヌクレオチド順序の下でｍＲＮＡでヌクレオチド順序を含める。生理学に異常、または、条件圧力一般に制御の要因相関的で正常な生理学的な状態の存在、不在または転位を含みなさい。

言葉”制御の要因” は（に限られなくて）酸素、温度、およびライトを含む変更可能な要因を示す。

言葉は”に” ”対応し、に対応する、ＤＮＡ順序がＲＮＡ順序の直接同等及び逆にであるか” ＤＮＡ順序とＲＮＡ順序間の関係を記述するのにここに使用されている、すなわち”Ｔ” の基盤がＤＮＡ順序に起こるとき２つの順序はＲＮＡの同等順序の”Ｕ” の基盤と同一但し例外としてそれ取り替えられるである。実例のために、ＲＮＡ順序”ＵＡＵＡＣ” はＤＮＡ順序”ＴＡＴＡＣに対応する。” 同様に、ＤＮＡ順序”ＧＴＴＣＡ” はＲＮＡ順序”ＧＵＵＣＡに対応する。”
遺伝子についてここに使用されるように”自然に” 起こることは遺伝子が性質で見つけることができるという事実を、示す。例えば、隔離することができる性質の源から実験室の人によって計画的に変更されないし、有機体にある遺伝子は（を含むウイルス）自然に起こっている。

ここに使用されるように、言葉は”についての” をａ＋１０％わずかな値からの変化参照する。それはとりわけを参照されるかどうかそのような変化が常にここに提供されるある特定の価値で含められること理解されるべきである。

ここの他の化学言葉は参照によってここに組み込まれる化学言葉（ＥＤＰａｒｋｅｒ、Ｓ．１９８５年、ＭｃＧｒａｗ？Ｈｉｌｌ、サンフランシスコ）のＭｃＧｒａｗＨｉｌｌ辞書によって例証されるように芸術で慣習的な使用法に従って、使用される。

１．ＤＮＡの表現システム
現在の発明のＤＮＡの表現システムは少なくとも１つのｍＲＮＡの不安定順序に対応するＤＮＡ（ｉｓＤＮＡ）すなわち不安定順序のＤＮＡと関連付けられるレポーターの遺伝子から成り立つ。レポーターの遺伝子および準のｉｓＤＮＡは適切な細胞ラインを変形させるのにレポーターの遺伝子によって符号化される蛋白質を表現する為に平均を提供するために使用に適したベクトルの内で普通構成される。ｓｉｎｇｌｅ．ｃｅｌｌラインは１つのベクトルと変形させることができるか、またはベクトルの組合せと変形するかもしれない。後の場合では、各ベクトルはｍＲＮＡｓの多様性の安定性の混合物の効果を識別するのに細胞ラインが試金で続いて使用することができることそのような物別のレポーターの遺伝子およびｉｓＤＮＡを組み込むことができる。

１．１ｉｓＤＮＡ順序
発明の表現システムで含められるｉｓＤＮＡは一つ以上から得られる少なくとも１つのｍＲＮＡの不安定順序に対応するＤＮＡ源の遺伝子から成り立つ。ｉｓＤＮＡは更にそれから転写されるｎａｔｕｒａｌｌｙ−ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ源の遺伝子またはｍＲＮＡの不安定順序を並べる地域に対応するＤＮＡから成り立つかもしれない。従って、発明の１具体化にｉｓＤＮＡは約１０から長さ約１５００のヌクレオチドにある。

１．１．１源の遺伝子
現在の発明に従って、ｉｓＤＮＡは一つ以上に対応するＤＮＡを一つ以上から源の遺伝子得られるｍＲＮＡの不安定順序、遺伝子から転写されるｍＲＮＡの安定性に影響を与える順序を含むと知られているすなわち遺伝子構成する。上示されるように、ｍＲＮＡの不安定順序はＵＴＲｓの特に多数の一時的に表現された遺伝子の３’ＵＴＲｓ、を含む、ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ、ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ、核トランスクリプション要因、原始ｐｒｏｔｏ−ｏｎｃｏｇｅｎｅｓ、即時の早い遺伝子、細胞周期の制御の遺伝子、オキシゲナーゼおよび遺伝子含まれるおよび制御のａｐｏｐｔｏｓｉｓで識別された。従ってそのような遺伝子は現在の発明の目的のための源の遺伝子として役立つことができる。ｍＲＮＡの不安定が配列する特定の源の遺伝子の例を非限ることは含んでいるＡＰＰ、ＶＥＧＦ、ｂｃｌ−２．ａ、ＧＭ−ＣＳＦ、ｃＦＯＳのｃ−ｍｙｃ、ｃ６月、ｋｒｏｘ−２０、ｎｕｒ−７７、ｚｉｆ２６８、ｂｃｌ−２のｂＩＦＮ、ｕＰＡ、ＩＬ１のためにコードする遺伝子をか。得ることができる、ＩＬ１ｂ、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３、ＴＮＦａのｓｙｎｌ、ｂ２−ＡＲ、Ｅ−ｓｅｌｅｃｔｉｎ、ＶＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１、刺激の活動のアルファ）、Ｇｒｏ−ｂ（ＭＩＰ−２Ｇｒｏ−ａ（ｍｅｌａｎｏｍａの成長のか。）、グログ（ＭＩＰ−２はか。）、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２のコラゲナーゼ、Ｐ糖蛋白質（ＭＤＲ）、ＭＲＰｓ、ｍｄｒ）、ＣＯＸＩＩのｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌリパーゼ、ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｙｌｅｓｔｅｒの移動蛋白質、ｂｂ−ａｄｒｅｎｅｒｇｉｃ受容器、ＭＩＰ１ａ、ＭＩＰ１ｂ、ＭＣＰ−１、ＭＣＰ−２のＢ細胞の抑制剤のアルファ（ＮＦＫＢＩＡ）のｋａｐｐａライトポリペプチドの遺伝子の増強物の核要因Ｐ？ｈ１（ｐｆの、ＩＦＮか。誘引可能な蛋白質１０のｋＤ（ＩＰ−１０）、ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎＦ、ＩＬ−１０受容器アルファ、ＡＵＦ１、ｔｒｉｓｔｅｔｒａｐｒｏｌｉｎｅ、およびｕｂｉｑｕｉｔｉｎの特定のプロテアーゼ１８。

さらに、不安定順序はある遺伝子のコーディングの地域の内で識別された。例えば、ｃ−ｍｙｃのｍＲＮＡの安定性に影響を与える２つの不安定順序の地域はあった；１つは３’−ＵＴＲで見つけられるＡＵ−ｒｉｃｈの要素であり、他はコーディングの地域の内で見つけられ、コーディングの地域の不安定の決定要因（ＣＲＤ）と言われるおよそ２５０のヌクレオチドの地域である（、Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ等の遺伝子Ｄｅｖ．、１９９２年、６：６４２−６５４見なさい）。従って、現在の発明の目的のために、ｃ−ｍｙｃの遺伝子は少なくとも２つの不安定順序の源として役立つ。

現在の発明の１具体化では、一つ以上のｍＲＮＡの不安定順序の構成をＡＵ？ｒｉｃｈの要素含んでいる、またはＡＲＥｓ選ばれる源の遺伝子は。ＡＲＥｓの例は含んでいるが、に、ＡＵＵＵＡ限られない；ＵＡＵＵＵＡＵ；ＵＵＡＵＵＵＡ（Ｕ／Ａ）（Ｕ／Ａ）およびＡＵＵＵＡＵＵＵＡ。現在の発明の目的のために適したＡＲＥｓを含んでいる源の遺伝子の例を非限って表１で提供される。ＡＲＥｓは表１で示されるように基本的なＡＵＵＵＡのｐｅｎｔａｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅの一致順序の整理そして数によって互いとこれらの遺伝子で異なる見つけた。

別の具体化では、コーディングの地域の決定要因から成り立つ源の遺伝子は選ばれる（またはＣＲＤ）。この具体化に従って、源の遺伝子はまたある一つ以上を構成するかもしれない。

Ａ興味の病気で関係する蛋白質のためにコードする源の遺伝子は選ばれるかもしれない。従って、例えば、特定の病気プロセスの病因学にかかわるｃｙｔｏｋｉｎｅかｏｎｃｏｇｅｎｅのためにコードする源の遺伝子から得られるｍＲＮＡの不安定順序は選ぶことができる。これらのｍＲＮＡの不安定順序に対応するｉｓＤＮＡから成り立つ表現システムはｃｙｔｏｋｉｎｅまたはｏｎｃｏｇｅｎｅのｍＲＮＡを不安定にするこうして、あり、混合物を検出するために有用である準の病気プロセスの処置に有用。例えば、ＩＬ−１の処置のための鉛混合物は慢性関節リウマチのような病気を、仲介したまたは骨関節炎はＩＬ−１ｍＲＮＡの不安定順序から成り立つＤＮＡの表現システムを使用して、検出されるかもしれない。ある特定の源の遺伝子からのｍＲＮＡｓの高められた安定性と関連付けられる病気はまた表１で示される。

１．１．２ｍＲＮＡの不安定順序
ｉｓＤＮＡは１つのｍＲＮＡの不安定順序に対応するＤＮＡから成り立つことができるかまたは２つまたはより多くの不安定順序に対応するＤＮＡから成り立つことができる。現在の発明の１具体化に従って、ｉｓＤＮＡは１そして約１２のｍＲＮＡの不安定順序の間でに対応するＤＮＡを構成する。不安定順序はタンデム繰り返しとして、または他の例えばのヌクレオチド順序と普通一緒にあり、または適切な並置のそれから部分（例えば普通金豊富なモチーフからの少なくとも４つの連続したヌクレオチドを含んでいる）、例えば介入であるかもしれ。代わりに、不安定順序はＣＲＤである場合もあるまたはそれから分解しなさい。なお、ｉｓＤＮＡ順序はあるそれぞれの並ぶ順序のまたはのない一つ以上のＣＲＤ、一つ以上から成り立ち。１具体化では、ｉｓＤＮＡはを伴ってである符号化の不安定順序一つ以上をＣＲＤの片、構成できる。

発明の別の具体化では、ｍＲＮＡの不安定順序は少なくとも１つをある含んでいる。発明のそれ以上の具体化では、ｍＲＮＡの不安定順序は少なくとも２つＡＲＥｓを含んでいる。発明のそれ以上の具体化では、ｍＲＮＡの不安定順序は少なくとも３つＡＲＥｓを含んでいる。発明のそれ以上の具体化では、ｍＲＮＡの不安定順序は少なくとも４つＡＲＥｓを含んでいる。発明のそれ以上の具体化では、ｍＲＮＡの不安定順序は少なくとも５つＡＲＥｓを含んでいる。発明のそれ以上の具体化では、ｍＲＮＡの不安定順序は少なくとも６つＡＲＥｓを含んでいる。発明のそれ以上の具体化では、ｍＲＮＡの不安定順序は少なくとも７つＡＲＥｓを含んでいる。発明のそれ以上の具体化では、ｍＲＮＡの不安定順序は少なくとも８つＡＲＥｓを含んでいる。発明のそれ以上の具体化では、ｍＲＮＡの不安定順序は少なくとも９つＡＲＥｓを含んでいる。発明のそれ以上の具体化では、ｍＲＮＡの不安定順序は少なくとも１０ＡＲＥｓを含んでいる。発明のそれ以上の具体化では、ｍＲＮＡの不安定順序は少なくとも１１ＡＲＥｓを含んでいる。発明のそれ以上の具体化では、ｍＲＮＡの不安定順序は１２ＡＲＥｓ多数を含んでいる。

発明の代わりとなる具体化では、不安定順序は関連した並ぶ地域とともに源の遺伝子で少なくとも１ＣＲＤを、構成する。発明の別の具体化では、不安定順序は並ぶ地域のない少なくとも１ＣＲＤを構成するかもしれない。更に別の具体化では、不安定順序はＣＲＤの、または並ぶ順序ののない片一つ以上を構成するかもしれない。

普通ｉｓＤＮＡが得られるｍＲＮＡの不安定順序は少なくとも約５０の連続的なヌクレオチドまで少なくとも約１０を構成し。従って、発明の１具体化で、ｍＲＮＡの不安定順序は少なくとも１０の連続的なヌクレオチドを構成する。発明の別の具体化では、ｍＲＮＡの不安定順序は少なくとも２０の連続的なヌクレオチドを構成する。発明のそれ以上の具体化では、ｍＲＮＡの不安定順序は少なくとも３０の連続的なヌクレオチドを構成する。発明のそれ以上の具体化では、ｍＲＮＡの不安定順序は少なくとも４０の連続的なヌクレオチドを構成する。発明のそれ以上の具体化では、ｍＲＮＡの不安定順序は少なくとも５０の連続的なヌクレオチドを構成する。

前に述べられるように、ｉｓＤＮＡは一つ以上から得られる少なくとも１つのｍＲＮＡの不安定順序に対応するＤＮＡを源の遺伝子構成し、長さ約１０のヌクレオチドから長さ約１５００のヌクレオチドにある場合もある。発明の１具体化では、ｉｓＤＮＡは約２０から長さ約１２００のヌクレオチドにある。それはｉｓＤＮＡの長さがどの並ぶ地域でも含まれているべきであるどうか、また構成する不安定順序の数そしてタイプに左右されること芸術で巧みな１つに容易に明白である。従って、発明の別の具体化に、ｉｓＤＮＡは約２０から長さ約２００のヌクレオチドにある。発明の更に別の具体化では、ｉｓＤＮＡは約２０から長さ約５００のヌクレオチドにある。代わりとなる具体化では、ｉｓＤＮＡは約５００から長さ約１５００のヌクレオチドにある。それ以上の具体化では、ｉｓＤＮＡは約５００から長さ約１２００のヌクレオチドにある。

現在の発明の別の具体化では、ｍＲＮＡの不安定順序は同一のモチーフの整理かグループからの選ばれる異なったモチーフの組合せを含んでいる：ＡＵＵＵＡ；ＵＡＵＵＵＡＵ；ＵＵＡＵＵＵＡ（Ｕ／Ａ）（Ｕ／Ａ）およびＡＵＵＵＡＵＵＵＡ。

上示されるように、現在の発明によって熟視される不安定順序は少しがある、または否、正常な生理学的な条件の下のｍＲＮＡの安定性に対する効果に含んでいるが、ある圧力の条件の下でｍＲＮＡの安定性を高めるヌクレオチド順序。例えば、減少された酸素の前でＶＥＧＦのｍＲＮＡの安定性を高める人間のＶＥＧＦの遺伝子の３’ ＵＴＲで見つけられるＶＥＧＦの低酸素症の範囲はありであり、ｍＲＮＡを安定させるために機能する（ｓｅｅ，Ｃｌａｆｆｅｙｅｔａｌ．，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｃｅｌｌ，１９９８，９：４６９−４８１）．現在の発明の１具体化では、ｉｓＤＮＡはＶＥＧＦの低酸素症の範囲ですべて、または部品を、構成する。

現在の発明のｉｓＤＮＡは制限の片、またはｄｅｎｏｖｏによっての総合されるヌクレオチド順序として３’ ＵＴＲか適切な源の遺伝子のコーディングの地域から、例えば、構成するＰＣＲかＲＴ−ＰＣＲによって発生させる順序として一つ以上をｍＲＮＡの不安定順序得られるかもしれない。ｉｓＤＮＡはｍＲＮＡの不安定順序を関連した並ぶ地域とともに一つ以上含んでいる、または源の遺伝子または一つ以上の３’ ＵＴＲで源の遺伝子の３’ ＵＴＲの片相当な部分を構成できる適切な源の遺伝子順序のｅｎｔｉｒｅ／ｗｈｏｌｅ３’ ＵＴＲに対応する順序から成り立つことができるか。ｉｓＤＮＡが源の遺伝子からの一つ以上のＣＲＤから成り立つとき同様に、ｉｓＤＮＡは関連した並ぶ順序の一つ以上のＣＲＤを含んでいる、または全体のＣＲＤ、とまたは関連した並ぶ順序のないから成り立つか、またはとまたは並ぶ順序のないＣＲＤで片を、構成するコーディングの地域で部分を構成できるコーディングの地域でより小さい部分を構成できるコーディング順序で相当な部分を構成できるか。

現在の発明の１具体化では、表現システムは一つ以上の３’ＵＴＲかコーディングの地域からグループから選ばれる源の遺伝子得られる一つ以上に対応するｉｓＤＮＡ順序をｍＲＮＡの不安定順序構成する：ＡＰＰ，ｂｃｌ−２α，ｃ−ｍｙｃ，ＴＮＦα，ＩＬ−１βそしてＶＥＧＦｍＲＮＡｓ．別の具体化では、一つ以上は上示される源の遺伝子人間の遺伝子である。人間の３’ＵＴＲｓの部分に対応する代表的な順序ＡＰＰ，ｂｃｌ−２α，ｃ−ｍｙｃ，ＴＮＦα，ＩＬ−１β，ＶＥＧＦ，そして人間のＶＥＧＦの低酸素症の範囲はＳＥＱＩＤＮｏ．として表２で、提供される：１，２、３、４、５、６、７および８。従って、発明の別の具体化で表現システムで含められるｉｓＤＮＡ順序はＳＥＱＩＤＮｏ．のどれでもで述べられるように全体の順序を構成する：１，２、３、４、５、６、７か８。発明のそれ以上の具体化で表現システムで含められるｉｓＤＮＡ順序はＳＥＱＩＤＮｏ．のどれでもで述べられるように順序で片を構成する：１，２、３、４、５、６、７か８。現在の発明のそれ以上の具体化では、表現システムで含められるｉｓＤＮＡ順序はＳＥＱＩＤＮｏ．のどれでもで述べられるように少なくとも１０の連続したヌクレオチドを構成する：１，２、３、４、５、６、７か８。

１．１．３並ぶ順序
独自性の考慮によって行えばＣＲＤの並ぶ順序は別の不安定順序の結合蛋白質の存在によって、金豊富なモチーフを含む細胞プロセスのための選択率の達成の１つのアプローチあるかもしれない。ＡＲＥｓと相互に作用している細胞質ｍＲＮＡ結合蛋白質は規定するＴＲＡＮＳ要因として機能すると考えられる。ｍＲＮＡへの結合は安定するか、または不安定にする効果を示す。

上記に基づかせていて、巧みな職人は不安定順序の長さと同様、いくつかのモチーフがｍＲＮＡの安定性に影響を与える混合物の同一証明のためのＤＮＡの表現システムの準備で考慮されるかもしれないことを理解する。１つは更に並ぶ順序が並べる順序の性質によってコーディングまたは非コーディング順序を構成するかもしれないことを理解する。現在の発明はこうして自然に起こる源の遺伝子またはｍＲＮＡのｍＲＮＡを並べる順序とともに一つ以上にｍＲＮＡの不安定順序対応するＤＮＡから成り立つｉｓＤＮＡを熟視する。ｉｓＤＮＡから成り立つこれらの並ぶ順序を含んでいる表現システムが不安定順序および並ぶ順序が得られた源ｇｅｎｅ／ｍＲＮＡのための特定性の混合物のために選別するのに使用することができる。

並ぶ順序は発明の表現システムで源の遺伝子の全体の３’ＵＴＲ順序、または３’ＵＴＲ順序の相当な部分からｉｓＤＮＡの順序を得ることによって含めることができる。なお、ｉｓＤＮＡは、全体か相当な３’ＵＴＲに加えて、同じか別の源の遺伝子のコーディングの地域からのそれから一つ以上のＣＲＤ、か片を、含むためにかもしれない。ｅｎｔｉｒｅ／ｗｈｏｌｅ３’ＵＴＲ順序が停止ｃｏｄｏｎからの地域を普通まで約示すかまたは含んでいることが順序をｐｏｌｙａｄｅｎｙｌａｔｅｄ間、３’ＵＴＲの相当な部分は長さで含む、に、約６００のヌクレオチドまで約１０から構成する順序限られるかもしれない。従って、発明の他の具体化で３’ＵＴＲの相当な部分は約１０約１００までまたは約１０約２００まで、または約２０約１００まで、または約２０から約２００まで構成する順序を含めるまたは約２０から約停止ｃｏｄｏｎまでのまたは含んでいることからの地域の長さ約６００のヌクレオチドへの、順序をｐｏｌｙａｄｅｎｙｌａｔｅｄ。

同様に、ｉｓＤＮＡは一つ以上のＣＲＤとともにコーディングの地域で”相当な部分” を構成できる。コーディングの地域はように遺伝子の開始と停止ｃｏｄｏｎ間の地域定義される。コーディングの地域の相当な部分は長さで含み、に、少なくとも１ＣＲＤを組み込む約６００のヌクレオチドまで約１０から構成する順序限らないことができるが。発明の１具体化では、コーディングの地域の相当な部分は約１０から少なくとも１のＣＲＤを組み込む約１００つのヌクレオチドに構成する順序を含める。他の具体化では、コーディングの地域の相当な部分は約１０約２００まで、または約２０約１００まで、または約２０約２００まで、または約２０からの少なくとも１ＣＲＤを組み込む約６００のヌクレオチドに順序を含んでいる。

上記述されている発明の規模の内に３’ＵＴＲ及びコーディング順序の片はまたある。従って、現在の発明の１具体化で、片は少なくとも８つの連続的なヌクレオチドを構成する。発明の他の具体化では、片は少なくとも１０、か少なくとも１５、か少なくとも２０、か少なくとも２５、か少なくとも３０、か少なくとも３５、か少なくとも４０、か少なくとも４５、か少なくとも５０の連続的なヌクレオチドを構成する。

芸術で巧みな１つはそれをまだ特定性ｍＲＮＡの不安定のｓｅｑｕｅｎｃｅ（ｓ）で自然に起こる遺伝子で見つけられるそれらと大幅に同一相談するかもしれないである並ぶ順序認める。従って現在の発明は片が少なくとも１つのｍＲＮＡの不安定順序から成り立てば源の遺伝子の３’ＵＴＲの地域と大幅に同一である３’ＵＴＲ片を熟視する。従って、発明の１具体化で、現在の発明のヌクレオチドの片は片が少なくとも１のｍＲＮＡの不安定順序を含んでいれば少なくとも１０％へ源の遺伝子の３’ＵＴＲの少なくとも９０％である順序の長さを含める。発明の別の具体化では、現在の発明のヌクレオチドの片は源の遺伝子の３’ＵＴＲの長さの少なくとも１０％である順序の長さを構成する。発明のそれ以上の具体化では、現在の発明のヌクレオチドの片は源の遺伝子の３’ＵＴＲの長さの少なくとも２０％である順序の長さを構成する。発明のそれ以上の具体化では、現在の発明のヌクレオチドの片は源の遺伝子の３’ＵＴＲの長さの少なくとも３０％である順序の長さを構成する。発明のそれ以上の具体化では、現在の発明のヌクレオチドの片は源の遺伝子の３’ＵＴＲの長さの少なくとも４０％である順序の長さを構成する。発明のそれ以上の具体化では、現在の発明のヌクレオチドの片は源の遺伝子の３’ＵＴＲの長さの少なくとも５０％である順序の長さを構成する。発明のそれ以上の具体化では、現在の発明のヌクレオチドの片は源の遺伝子の３’ＵＴＲの長さの少なくとも６０％である順序の長さを構成する。発明のそれ以上の具体化では、現在の発明のヌクレオチドの片は源の遺伝子の３’ＵＴＲの長さの少なくとも７０％である順序の長さを構成する。発明のそれ以上の具体化では、現在の発明のヌクレオチドの片は源の遺伝子の３’ＵＴＲの長さの少なくとも８０％である順序の長さを構成する。発明のそれ以上の具体化では、現在の発明のヌクレオチドの片は源の遺伝子の３’ＵＴＲの長さの少なくとも９０％である順序の長さを構成する。

発明の他の具体化では、片が不安定順序を並べる順序とともに少なくとも１つの不安定順序を含んでいれば、発明の片に少なくとも６０％、か少なくとも７０％、か少なくとも７５％、か少なくとも８０％、か少なくとも８５％、か少なくとも９０％、か少なくとも９５％、か少なくとも９７．５％、か３’ＵＴＲまたはコーディングの地域のそれの少なくとも９９％順序のアイデンティティがある。

１．２不安定順序の効力
上記の記述を提供されて、巧みな職人は不安定にする混合物を識別する為の発明のＤＮＡの表現のベクトルの使用の容易に特定の３’ＵＴＲ不安定順序を設計できる。そのような不安定順序は、順序適切な場合には混合結合の特定性ｍＲＮＡの不安定順序を並べる相談するおよび少なくとも１つのｍＲＮＡの不安定順序から成り立つ。

発明の３’ＵＴＲ不安定順序の効力をテストするためには、遺伝子表現の調査を含む分析は熟視される。さらに、他人は芸術で巧みな労働者に親友を理解される分析する、例えば、ＲＴ−ＰＣＲ、実時間ＲＴ−ＰＣＲの北のしみの分析、ＲＮａｓｅの保護は、しみの分析およびｍｉｃｒｏａｒｒａｙ基づかせていた技術に点しみを付けるか、または細長い穴をつける。他の分析は知られている混合物とテストすることを更にｍＲＮＡの不安定をもたらす機能のために含むかもしれない。例えば発明の３’ＵＴＲｓの側面図を描くために、異常なｍＲＮＡの不安定をもたらすと知られている混合物は遺伝子表現（賢人）の調査の連続分析で使用することができる。ｍＲＮＡの安定性に影響を及ぼすことができる混合物はｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ、トコフェロール、ｒｅｔｉｎｏｉｃ酸、サリドマイド、ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎＡ、およびｒａｄｉｃｉｃｏｌのアナログＡ（ＲＡＡ）を含んでいる。ＲＡＡは３’ＵＴＲｓでショウＫａｍｅｎ箱かＡＵＵＵＡのモチーフを含んでいる原始ｐｒｏｔｏ−ｏｎｃｏｇｅｎｅｓを含むいくつかのｍＲＮＡｓの低下を、促進するようである。

１．３レポーターの遺伝子
色々なレポーターの遺伝子は現在の発明の表現システムで遺伝子が探索可能な蛋白質を符号化すれば使用することができる。現在の発明に従って、探索可能な蛋白質は探索可能な信号を直接作り出すことが（例えば、吸光度の蛍光信号、変更、燐光性信号、薬剤の抵抗または感受性、ａｕｘｏｔｒｏｐｈｉｓｍ、および同類）または適した”共役” との反作用か相互作用によって可能の１である（例えば、基質、抗体、ｌｉｇａｎｄ、および同類）。検出を許可するために必要ならば共役は分類することができる。

様々なレポーターの遺伝子は芸術で知られている（、例えば、分子クローニングを見なさい：実験室マニュアル，２ｎｄＥｄ．，ｅｄ．ｂｙＳａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔａｌ．，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ：１９８９；ｖａｒｉｏｕｓｖｏｌｕｍｅｓｏｆＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｎ．Ｙ．；Ａｕｓｕｂｅｌｅｔａｌ．ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ & Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮｅｗＹｏｒｋ，１９９９ａｎｄｕｐｄａｔｅｓ）．適したレポーターの遺伝子の例は含みが、に限られないし、符号化の酵素、キナーゼのようなそれら、（を含むアルカリホスファターゼ（ＡＰ及び分泌されたアルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ））ホスファターゼ、それから緑の蛍光蛋白質または派生物のような符号化の蛍光か燐光性蛋白質、ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅｓ、か。ガラクトシダーゼ、ｒｅｄｕｃｔａｓｅｓ、ｓｙｎｔｈａｓｅｓ、ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈの過酸化酵素、クロロアムフェニコールのトランスフェラーゼ、ブドウ糖オキシダーゼ、シンセターゼ、そしてそれら（赤い蛍光蛋白質、礁の珊瑚の蛍光蛋白質、高められた蛍光蛋白質および不安定にされた蛍光蛋白質のような）。

レポーターの遺伝子が酵素を符号化するとき、酵素自体は探索可能かもしれないまたは間接的に酵素のレベルを測定するのに酵素の活動が使用されるかもしれない。現在の発明の１具体化では、レポーターの遺伝子は酵素を符号化する。発明の別の具体化では、レポーターの遺伝子はｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ蛋白質かか。

ガラクトシダーゼ蛋白質を符号化する。Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅｓは芸術で知られ、北アメリカのホタルのような有機体、Ｐｈｏｔｉｎｕｓのｐｙｒａｌｉｓから得ることができる；海のパンジー、Ｒｅｎｉｌｌａのｒｅｎｉｆｏｒｍｉｓ；そして細菌、ビブリオのｆｉｓｃｈｅｒｉ。

１．４表現のベクトル
分子生物学の分野で巧みなそれらは色々表現のベクトルが発明のＤＮＡの表現システムを提供するのに使用することができることを理解する。例えば、細胞の安定したｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎのために適したいくつかのベクトルは公衆に利用できる、会う、例えば、Ｐｏｕｗｅｌｓ等に；そのような細胞ラインを組み立てる為の方法はＡｕｓｕｂｅｌ等でまた利用できる、例えば、公に。ベクトルはプラスミッド、ウイルスの粒子、バクテリオファージ、等の形に、例えば、あるかもしれない。そのようなベクトルは含んでいるが、に、染色体、ｎｏｎｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌそして総合的なＤＮＡ順序、ＳＶ４０の例えば、派生物限られない；細菌のプラスミッド；ｐｈａｇｅＤＮＡ；イーストプラスミッド；ベクトルはｖａｃｃｉｎｉａのようなプラスミッドおよびｐｈａｇｅＤＮＡ、ウイルスのＤＮＡ、アデノウィルス、家禽のｐｏｘのウイルス、およびｐｓｅｕｄｏｒａｂｉｅｓの組合せから得た。但しホストでｒｅｐｌｉｃａｂｌｅそして実行可能である限り、他のベクトルかプラスミッドは使用されるかもしれない。

適切なＤＮＡ順序は色々なプロシージャによってベクトルに挿入されるかもしれない。大将では、ＤＮＡ順序は芸術で知られているプロシージャによって適切な制限のｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅの場所に挿入される。そのようなプロシージャおよび他は芸術で巧みなそれらの規模の内であると考えられる。現在の発明の表現のベクトルはｍＲＮＡの統合を指示するために有効に適切な表現制御ｓｅｑｕｅｎｃｅ（ｓ）につながるレポーターの遺伝子から成り立つ。そのような促進者の代表的な例として、そこに述べられるかもしれない：リットルかＳＶ４０促進者、Ｅ．大腸菌のラックまたはｔｒｐ、ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃまたはｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ細胞またはウイルスの遺伝子の表現を制御すると知られているｐｈａｇｅｌａｍｂｄａＰＬの促進者および他の促進者。ベクトルはまた増幅の表現のための適切な順序が含まれるかもしれない。

それ以上の発明は探索可能な信号持っている蛋白質の表現に遺伝子が促進者や増強物の地域を含む適切な表現制御から成り立つ準の５’ 及び３’ ＵＴＲ順序とともに蛋白質のアミノ酸順序のためのＤＮＡのコーディングを構成する及びｉｓＤＮＡ順序を提供するか遺伝子のコーディングから成り立つレポーターの遺伝子のＤＮＡの表現システムを。ｐｒｏｍｏｔｅｒ／ｅｎｈａｎｃｅｒ順序及び他の表現の制御シーケンスの適切な選択は芸術の熟練労働者の範囲の内に問題よく、発明の本質的な一部分にならない。従って例えばｍａｍｍａｌｉａｎ細胞の表現のためにＳＶ４０、ＣＭＶまたはＨＳＶのようなウイルスの促進者か。Ｉ促進者は使用されるかもしれない。

さらにｄｉｈｙｄｒｏｆｏｌａｔｅの還元酵素、ｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎＢまたはｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ細胞培養のためのネオマイシンの抵抗、またはＥ．大腸菌のテトラサイクリンまたはａｍｐｉｃｉｌｌｉｎの抵抗のような変形させた宿主細胞の選択に表現型特性を提供するために、表現のベクトルは遺伝子を含むかもしれない。

ｉｓＤＮＡはレポーターの遺伝子の３’ ＵＴＲに普通挿入される。従って例えば、ｉｓＤＮＡ順序は天然レポーターの遺伝子の３’ ＵＴＲの適した制限の場所に挿入される。適切な制限の酵素の場所はレポーターの遺伝子３’ＵＴＲにｉｓＤＮＡの挿入を許可するために芸術で知られている標準的な技術を使用して３’ＵＴＲ順序やｉｓＤＮＡ順序に導入されるかもしれない。

１．５宿主細胞
宿主細胞はこの発明の表現のベクトルと遺伝的に（ｔｒａｎｓｄｕｃｅｄか、または変形させるまたはｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ）設計されるかもしれない。設計された宿主細胞は活動化の促進者、かｔｒａｎｓｆｏｒｍａｎｔｓを選ぶ為に適切ように変更される慣習的な栄養媒体で培養することができる。文化条件は、温度、ｐＨおよび同類のような、前にに選ばれる宿主細胞と使用されるそれら通常巧みな職人に明白である。ＤＮＡの表現システムは固定して変形させた細胞ラインのような適切に変形させた細胞ラインの形に細胞によって基づかせている表現システム、便利に、であるかもしれない。宿主細胞はｅｕｋａｒｙｏｔｉｃまたはｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ宿主細胞であるかもしれない。

適切なホストの代表的な例として、そこに述べられるかもしれない：細菌の細胞、Ｅ．大腸菌のような、ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍサルモネラストレプトミセス；イーストのようなｆｕｎｇａｌ細胞；ショウジョウバエＳ２及びＳｐｏｄｏｐｔｅｒａＳｆ９のような昆虫の細胞；ＣＨＯ、ＣＯＳまたはＢｏｗｅｓのｍｅｌａｎｏｍａのような動物の細胞；アデノウィルス；植物の細胞、等。適切なホストの選択は教授からの芸術で巧みなそれらの規模の内であるとここに考えられる。

宿主細胞は不安定にすることを望むｍＲＮＡによってのためにコードされる蛋白質を表現する細胞と同じ一般的な細胞のタイプであるかもしれない。従って例えば発明の試金がｃｙｔｏｋｉｎｅのためのｍＲＮＡのコーディングを不安定にする混合物の同一証明に使用するべきなら、使用される宿主細胞は普通質問のｃｙｔｏｋｉｎｅを作り出す細胞へ同じであるまたは同じような細胞のタイプかもしれない細胞または細胞ラインである。例えば、ｍｏｎｏｃｙｔｅかｍｏｎｏｃｙｔｅ？ｌｉｋｅの細胞ラインはｃｙｔｏｋｉｎｅを不安定にする混合物、例えばＩＬのために試金のために宿主細胞として（ＴＨＰ−１のような）使用されるかもしれないか。１ｓｓのｍＲＮＡ。ｏｎｃｏｇｅｎｅのために有用な細胞ライン及び他の癌関連遺伝子のｍＲＮＡの不安定の試金は、例えばＣＯＬＯ２０５、ＫＢ−３１、ＫＢ−８５１１、ＤＵ１４５、ＨＣＴ１１６、ＭＣＦ７、ＭＣＦ７／ＡＤＲ、ＭＤＡ？ＭＢ？２３１、ＭＤＡ？ＭＢ？４３５およびＭＤＡ？ＭＢ？４３５／ＴＯある。細胞はｃｙｔｏｋｉｎｅを不安定にする混合物の同一証明のための発明の試金の宿主細胞として使用のために、例えばＩＬ並ぶか。１ｓｓのｍＲＮＡはＴＨＰであるか。ＡｕｗｅｒｘＪ．著記述されている１つの細胞ライン（例えば、１９９１型の、Ｅｘｐｅｒｉｅｎｔｉａ、４７：２２？３０）及び同じようなｍｏｎｏｃｙｔｉｃの例えば人間の白血病、細胞並ぶ。

ｍＲＮＡの不安定化のメカニズム、およびこれに於いてのｍＲＮＡの不安定順序の役割は、十分に理解されないが、不安定にする混合物のほかの他の要因の存在およびｍＲＮＡの不安定順序がｍＲＮＡの不安定化に起こるように要求されること明確である；例えば前に識別された文献の参照で論議される。従って現在の発明の１具体化ではそのような他の要因および補足物を提供するか、またはｍＲＮＡの不安定化をもたらすために混合物およびｍＲＮＡの不安定順序の相互作用を完了する宿主細胞は選ばれる。ｍＲＮＡの不安定化に必要な細胞要因の提供された高められたレベルにｍＲＮＡの不安定化を、例えば高めるように変形させた宿主細胞は刺激されるか、または別の方法で活動化させるかもしれない。例えば、増進された結果は発明の試金で区別された変形させた宿主細胞が使用されれば得られるかもしれない。例えば、変形させたＴＨＰ？１細胞の場合には、よい結果は変形させたＴＨＰ得ることができるか。１細胞は？ＩＦＮ及びＬＰとＴＨＰのために正常なように育ち、区別され、そして刺激されるか。例で以下記述されている１細胞、例えば。

２．ｍＲＮＡの安定性に影響を与える混合物を識別する為の試金そして方法
発明の別の具体化ｍＲＮＡの構成を不安定にする混合物の同一証明のための試金システム；上定義されるレポーターの遺伝子のＤＮＡの表現システム、および構成する制御ＤＮＡの表現システム；遺伝子が適切な表現の制御要素から成り立つ機能ｍＲＮＡの不安定順序に欠けている準の５’ 及び３’ ＵＴＲ順序とともに蛋白質のアミノ酸順序のためのＤＮＡのコーディングを構成するが、か探索可能な信号を持っている蛋白質の表現のための遺伝子のコーディングはに提供される。

レポーターの遺伝子のＤＮＡの表現システムおよび制御ＤＮＡの表現システムは両方固定しての形にｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ細胞ラインをあるかもしれない。
代わりに、レポーターの遺伝子表現システムはｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌとして使用されるテスト混合物がない時テストするテスト混合物の存在そして不在でテストされるかもしれない。発明の別の具体化に制御ＤＮＡの表現システムはまたレポーターの遺伝子のＤＮＡの表現システムと同じ細胞ラインにあるかもしれない。制御ＤＮＡの表現システムはレポーターの遺伝子表現システムによってのためにコードされる蛋白質と異なっているコードし探索可能な蛋白質のためにこの場合の前にように、制御ＤＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎシステムが機能ｍＲＮＡの不安定順序に欠けている。

発明の試金でｍＲＮＡを不安定にする混合物の存在は制御と比較して混合物の前で表現システムから作り出される蛋白質によって与えられる探索可能な信号の大きさの減少によって示される；混合物によるレポーターの遺伝子のｍＲＮＡの不安定化は蛋白質の表現の減少およびこうして信号の大きさの減少をもたらす。発明の試金の使用のための適した制御は対応するＤＮＡの表現システム、すなわち含んでいる探索可能な蛋白質の表現のための順序のコーディングをから成り立つが、レポーターの遺伝子のＤＮＡの表現システムにｍＲＮＡの不安定順序に対応する順序を含んでいない。制御ＤＮＡの表現のレポーターの遺伝子表現システムと同一であるｍＲＮＡの不安定順序に対応するＤＮＡはｍＲＮＡの不安定順序として取除かれるか、削除されるか、または他では不具になった。制御ＤＮＡの表現システムはまた変形させた細胞ライン、普通同じ宿主細胞ライン、例えばＴＨＰから得られる固定して変形させた細胞ラインの形にあるかもしれないか。レポーターの遺伝子として１つの細胞ラインは、細胞ラインを変形させた。

現在の発明のＤＮＡの表現システムはｍＲＮＡを不安定にすることができるスクリーニングの混合物に使用することができる。従って、発明の１具体化でそこにｍＲＮＡの低下の構成を引き起こす混合物の同一証明そしてスクリーニングに方法提供される：コードする蛋白質のために表現システムから転写され、ｍＲＮＡがｍＲＮＡの不安定順序の最少の１枚のコピーで構成するか混合物の不在で探索可能な信号を持っている蛋白質を表現することができるテスト混合物の存在の探索可能な信号を測定し、得られる制御と結果を比較するＤＮＡの表現システムが付いている混合物に連絡する。

例えば、ｍＲＮＡを不安定にすることができる混合物はｍｕｌｔｉｗｅｌｌのフォーマットの発明のＤＮＡの表現のベクトルと培養細胞によって固定してｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ識別することができる。夜通しの孵化の後で、ｍＲＮＡを不安定にする機能のために選別される混合物は適切な集中の井戸、か集中および適した期間のｃｏｍｐｏｕｎｄ（ｓ）の前でｉｎｃｕｂａｔｅｄ扱われた細胞の範囲に加えることができる（例えば、約４のそして約１６時間間で）。孵化の後で、ＤＮＡの表現システムのレポーターの遺伝子によって作り出される信号を検出するために必要などの試薬でも井戸に加えられ、それぞれで発生する信号の量はよく測定される（例えば、適切な探知器と共の多版の読者の使用によって）。信号の量は制御、制御についてテスト混合物の効力を定めるために単独で溶質か培養基と扱われる例えば、細胞とそれから比較される。

それらの表現のためにある圧力の条件の下で正常な生理学的な条件増加の下でｍＲＮＡの安定性に安定性影響を与えない不安定、表現システムから成り立つ細胞服従しなければならない配列するから成り立つシステムがテストｃｏｍｐｏｕｎｄ（ｓ）の付加前の圧力の条件にことが芸術で巧みな労働者によって理解される。従って、例えば、ＶＥＧＦの低酸素症の範囲から成り立つ表現システムのために細胞はテスト混合物の付加前の低い酸素の条件に服従しなければならないすなわち制御の要因（酸素）はｍＲＮＡを不安定にする機能のために混合物をテストする前に減らなければならない。

発明の別の具体化ではコードする蛋白質のために表現システムから転写され、ｍＲＮＡが各テスト混合物の存在の探索可能な信号を測定し、得られる信号を比較するｍＲＮＡの不安定順序の最少の１枚のコピーで構成するか別に混合物の不在で探索可能な信号を持っている蛋白質を表現することができるＤＮＡの表現システムが付いている混合物に連絡するから成り立つｍＲＮＡの低下を引き起こす混合物の比較のための方法はに提供される。この方法は存在がｍＲＮＡの低下のすばらしい範囲を引き起こすより低い手段探索可能な信号で起因する混合物と２つまたはより多くの混合物によって引き起こされるｍＲＮＡの低下の範囲を比較する。

レポーターの遺伝子によって作り出される探索可能な信号を検出するおよび／または測定する方法は芸術で有名、関連した文献で広く記述されている。用いられた方法は選ばれたレポーターの遺伝子に依存して、適切な方法の選択は芸術の労働者の通常の技術の内にある。上示されるように、探索可能な信号はレポーターの遺伝子によって符号化される蛋白質によって直接作り出されるかもしれないか、または間接的に作り出されるかもしれない。

芸術で巧みな１つは直接探索可能な信号が付加的な部品を、信号の検出を可能にするために試薬、ライト、および同類を誘発する基質のような要求するかもしれないことを理解する。間接的に探索可能な信号は探索可能な蛋白質に普通その”共役” の使用をとりわけ結合する含む直接探索可能なラベルに付すか、またはつながれ。そのような共役を総合する為の連結化学は芸術で有名である。探索可能な蛋白質と共役の間の不良部分は普通化学または性質の身体検査である。そのような結合の組の例は含んでいるが、に、抗原及び抗体限られない；ａｖｉｄｉｎ／ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ及びビオチン；ｈａｐｔｅｎｓのために特定のｈａｐｔｅｎｓ及び抗体；受容器及び受容器の基質；酵素および酵素の補足因子／基質、および同類。お好みであれば共役は知られていた技術を使用して類縁のマトリックスに更に付すかもしれない。

共役と使用されるかもしれない直接探索可能なラベルの例は含んでいるが、に、蛍光一部分（フルオレスセインを含む蛍光染料のようなおよび派生物、テキサスの赤、ローダミンおよび派生物、ｄａｎｓｙｌ、ｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｏｎｅ、または蛍光染料を含んでいるビードまたはｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ）、電子密な一部分、探傷、ｉｎｔｅｒｃａｌａｔｏｒｓｒａｄｉｏｌａｂｅｌｓ化学ルミネセンスの一部分（ｌｕｍｉｎｏｌを含むｌｕｃｉｆｅｒｉｎそして２，３−ｄｉｈｙｄｒｏｐｈｔｈａｌａｚｉｎｅｄｉｏｎｅｓのような、）、磁気（３Ｈ、１２５．Ｉ、３５Ｓ、１４Ｃ、３２Ｐまたは３３Ｐのような）、熱量測定ラベル、核酸の（ｅｔｈｉｄｉｕｍ臭化物、ＳＹＢＲの緑のような）限られない（コロイド金のようなまたはガラスかプラスチック着色されるビード）。

信号検出は色々知られていた方法の１つによって、分光、ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃ、光化学、生化学的な、ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ、電気の、光学上昇温暖気流を含んで進むことができるまたは化学平均、目視検差、または色に基づく分子を追跡する他の方法は、充満か類縁大きさで分類する。従って信号が蛍光一部分のためにそうなったものであるところで、例えば、検出はライトの適切な波長および生じる蛍光性の検出の螢光色素の刺激によって顕微鏡検査、目視検差、写真フィルムによって、使用、電荷結合素子（ＣＣＤｓ）または光電子増倍管および光電管、および同類、デジタルカメラのような電子探知器の例えば行う、場合もある。シンチレーションカウントを含む冷光を、検出するために同じような方法は用いることができる。信号がｒａｄｉｏｌａｂｅｌのためにある一方、検出のための平均はシンチレーション計数装置及び放射線写真法を含んでいる。

２．１ｍＲＮＡの低下を引き起こすことができる混合物
ｍＲＮＡの不安定順序を含んでいる、ｍＲＮＡｓの不安定を促進する混合物は現在の発明の試金を使用して識別することができる。従ってそのような混合物がｍＲＮＡｓの低下を使用されるかもしれ、防ぎか、または不適当なｍＲＮＡの蓄積を逆転させ、そしてそれにより減るか、または不必要な蛋白質引き起こすのに、例えばｃｙｔｏｋｉｎｅ、表現を防ぐ。そのような混合物は不適当なｍＲＮＡ安定および蓄積および結果として生じる望ましくない蛋白質の表現含む病状である、か病気の予防法のために調剤上可能性としては有用か処置。

従って即刻の発明は現在の発明に従って現在の発明の方法、またはＤＮＡの表現システムまたは試金システムの使用によって確認可能なｍＲＮＡを不安定にする混合物を提供する。

３．ＤＮＡの表現システムの適用
３．１高効率の分析
芸術で巧みな１つはスクリーニングのステップで使用される技術が高効率の分析の容易に合わせることができることを認める。高効率スクリーンは大多数のサンプルを同時に処理する利点を提供し、かなり多数のサンプルを選別するために必要な時間を減らす。従ってｍＲＮＡの安定性に影響を与える混合物を識別するために現在の発明は混合物の図書館を選別する為の高効率方法の使用を熟視する。

高効率のスクリーニングのために、反作用の部品は通常多容器のキャリアかプラットホームで、同時に監視されるべき別のテストサンプルを含んでいる反作用の大多数を可能にするそれぞれｍｕｌｔｉ−ｗｅｌｌのｍｉｃｒｏｔｉｔｒｅの版のような収容される。スクリーニング工程の効率を高めるために現在の発明はまた非常に自動化された高効率スクリーンを熟視する。多くの高効率のスクリーニングまたは試金システムは大いにより速い効率の時間に終ってｍｉｃｒｏａｒｒａｙｓにサンプル、適切な探知器のｍｉｃｒｏｐｌａｔｅのｔｈｅｒｍｏｃｙｃｌｉｎｇおよびｍｉｃｒｏｐｌａｔｅの読書を、書式作成する液体の分配の、時限孵化ピペットで移すサンプル及び試薬のような多くのプロシージャのためのオートメーションの機能があるように、今利用できる商業的に。

３．２公式／キット
現在の発明のＤＮＡの表現システムか試金を含んでいるＦｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ／ｋｉｔｓは芸術の知られていた技術によって準備することができる。現在の発明はｍＲＮＡを不安定にする混合物の識別で使用のためのレポーターの遺伝子の試金を含んでいるキットをその上に提供する。キットの内容はｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄ、キットはその上にｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄ部品の再構成のための適した溶媒を含むことができる。キットの個々の部品は別の容器で包まれ、そのような容器によって関連付けられて、指示のリストである場合もある。

３．３薬物の構成
現在の発明の、または現在の発明に従ってＤＮＡの表現システムを用いて方法によってか試金システム識別される混合物は不適当なｍＲＮＡ安定および結果として生じる望ましくない蛋白質の表現または蓄積含む病状である、か病気の予防法のための可能性としては有用な医薬品か処置。従って現在の発明は識別された混合物で１つ以上を構成する薬物の構成を提供する。

現在の発明の薬物の構成そして薬物は口頭で、原則的に、非経口的に、吸入かスプレーによってまたは直腸に慣習的で無毒な受諾可能なキャリア、アジェバントおよび車を調剤上含んでいる適量の単位の公式で管理されるかもしれない。ここに使用されるように非経口的な言葉はｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ注入、ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ、筋肉内、ｉｎｔｒａｓｔｅｒｎａｌの注入または注入の技術を含んでいる。調剤上活動的な混合物か塩はそれから受諾可能なキャリアや希釈剤やアジェバントおよび、お好みであれば、他の有効成分と共同して調剤上１つ以上の無毒かもしれない。

現在の発明に従って現在の発明の方法、またはＤＮＡの表現システムまたは試金システムの使用によって識別される混合物は不適当なｍＲＮＡ安定および結果として生じる望ましくない蛋白質ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ／ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎを含む病状である、または病気の予防法または処置のための可能性としては有用なｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ。従って現在の発明は識別された混合物で一つ以上を構成する薬物の構成を提供する。現在の発明の薬物の構成そして薬物は口頭で、原則的に、非経口的に、吸入かスプレーによってまたは直腸に慣習的で無毒な受諾可能なキャリア、アジェバントおよび車を調剤上含んでいる適量の単位の公式で管理されるかもしれない。ここに使用されるように非経口的な言葉はｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ注入、ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ、筋肉内、ｉｎｔｒａｓｔｅｒｎａｌの注入または注入の技術を含んでいる。調剤上活動的な混合物か塩はそれから受諾可能なキャリアと共同して一つ以上の無毒な調剤上あるかもしれないおよび／または希釈剤やアジェバントおよび、お好みであれば、他の有効成分は、タブレットとして、口頭使用のために、例えばトローチ適したである、形態に薬物の構成菱形、水様か油性懸濁液、分散性の粉または微粒、乳剤堅くか柔らかいカプセル、またはシロップまたはエリクシルかもしれない。口頭使用のために意図されている構成は薬物の構成の製造のために芸術に知られている方法に従って準備され、優雅で、美味しい準備を調剤上提供するために維持の代理店甘くなる代理人、ｆｌａｖｏｕｒｉｎｇ代理人、着色の代理人のグループから選ばれる一つ以上の代理店を含むかもしれない。タブレットは適した無毒な受諾可能な結合剤が付いている混和で有効成分をを含む、カルシウム炭酸塩、炭酸ナトリウム、ラクトーゼ、カルシウム隣酸塩またはナトリウム隣酸塩のような例えば、不活性の希釈剤、調剤上含んでいる；粒状になること及び崩壊の、トウモロコシ澱粉のような代理人、またはアルギン酸；澱粉、ゼラチンまたはアカシア、およびマグネシウムのステアリン酸塩、ステアリン酸またはタルクのような代理店に、油を差すことのような結合代理店。タブレットは光沢が無い場合もあるかまたは胃腸地域の崩壊そして吸収を遅らせ、長期にわたる支えられた行為を提供するためにそれにより知られていた技術によって塗られるかもしれない。例えば、ｇｌｙｃｅｒｙｌｍｏｎｏｓｔｅｒａｔｅまたはｇｌｙｃｅｒｙｌｄｉｓｔｅａｒａｔｅのような時間の遅れ材料は用いられるかもしれない。

口頭使用のための薬物の構成はまたとして有効成分がピーナッツ油、液体パラフィンまたはオリーブ油のような水かオイル媒体と混合されるか有効成分が不活性の固体希釈剤、例えば、カルシウム炭酸塩と、カルシウム隣酸塩かカオリン混合される、または柔らかいゼラチンカプセルかもしれないか堅いゼラチンカプセルとして示される。

水様の懸濁液は混和で活動的な混合物をとの含んでいる適した結合剤を含む、例えば、中断代理店、ナトリウムカルボキシメチルセルロースのような、メチルのセルロース、ｈｙｄｒｏｐｒｏｐｙｌｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ、ナトリウムのアルジネート、ｐｏｌｙｖｉｎｙｌｐｙｒｒｏｌｉｄｏｎｅ、トラガカントゴムおよびアラビアゴム；自然発生するリン脂質、例えば、レシチン、または脂肪酸、例えば、ｐｏｌｙｏｘｙｅｔｈｙｅｎｅのステアリン酸塩、または長い鎖の脂肪性のエチレン酸化物の縮合生成物が付いているアルキレンの酸化物の縮合生成物のような分散するまたは湿潤剤部分的なエステルが付いているエチレン酸化物のアルコール、例えば、ｈｅｐｔａ−ｄｅｃａｅｔｈｙｌｅｎｅｏｘｙｃｅｔａｎｏｌ、か縮合生成物は脂肪酸およびヘキシット脂肪酸およびヘキシットの無水物の例えば、ポリエチレンのｓｏｒｂｉｔａｎのｍｏｎｏｏｌｅａｔｅから得られた部分的なエステルが付いているエチレン酸化物の例えばから、ポリオキシエチレンのソルビトールのｍｏｎｏｏｌｅａｔｅ、または縮合生成物得た。水様の懸濁液はまた１つ以上の防腐剤、例えばエチル、かｎ−ｐｒｏｐｙｌｐヒドロキシ安息香酸塩の１含むかもしれない、またはより多くの着色の代理人、１つ以上の香料添加剤かサッカロースまたはサッカリンのような１つ以上の甘くなる代理人。

油性懸濁液は植物油、例えば、落花生オイル、オリーブ油、ゴマ油またはココナッツ油、または液体パラフィンのようなミネラルオイルで有効成分を中断することによって作り出すことができる。油性懸濁液は厚化の代理人、例えば、蜜蝋、堅いパラフィンまたはｃｅｔｙｌアルコールを含むかもしれない。美味しい口頭準備を提供するために上述べられるそれらのような甘くなる代理店および／またはｆｌａｖｏｕｒｉｎｇ代理店は加えられるかもしれない。これらの構成はアスコルビン酸のような酸化防止剤の付加によって維持することができる。

水の付加によって水様の懸濁液の準備のために適した分散性の粉および微粒はディスパーシングか湿潤剤、中断代理店および一つ以上の防腐剤を混和の有効成分に与える。適したディスパーシングまたは湿潤剤および中断代理店は上記されるそれらによって既に例証される。付加的な甘く結合剤、例えば、風味を付け、着色の代理店甘くなることは、またあるかもしれない。

発明の薬物の構成はまたｏｉｌ−ｉｎ−ｗａｔｅｒ乳剤の形にあるかもしれない。オイル段階は植物油であるかもしれない例えば、オリーブ油か落花生オイル、またはミネラルオイルは、例えば、液体パラフィン、またはそれこれらのオイルのであるかもしれない混合物。適した乳状になる代理店はｎａｔｕｒａｌｌｙ−ｏｃｃｕｒｒｉｎｇゴム、例えば、アラビアゴムまたはゴムのトラガカントゴムであるかもしれない；ｎａｔｕｒａｌｌｙ−ｏｃｃｕｒｒｉｎｇリン脂質、例えば、大豆の豆、レシチン；またはエステルか部分的なエステルは脂肪酸およびヘキシットの無水物、例えば、ｓｏｒｂｉｔａｎのｍｏｎｏｌｅａｔｅ、およびエチレン酸化物、例えば、ポリオキシエチレンのｓｏｒｂｉｔａｎのｍｏｎｏｌｅａｔｅが付いている前述の部分的なエステルの縮合生成物から得た。乳剤はまた甘く及びｆｌａｖｏｕｒｉｎｇ代理店を含むかもしれない。

シロップ及びエリクシルは甘くなる代理人、例えばグリセロール、プロピレングリコール、ソルビトールまたはサッカロースと作り出されるかもしれない。そのような公式はまたｄｅｍｕｌｃｅｎｔ、防腐剤およびｆｌａｖｏｕｒｉｎｇおよび着色の代理店含むかもしれない。

薬物の構成は生殖不能のｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ水様かｏｌｅａｇｉｎｏｕｓ懸濁液の形にあるかもしれない。この懸濁液は上記されるそれらのような適したディスパーシングまたは湿潤剤そして中断代理店を使用して知られていた芸術に従って作り出されるかもしれない．生殖不能の注射可能な準備はまた１，３ブタンジオールの解決として無毒な親によって受諾可能な希釈剤の生殖不能の注射可能な解決または懸濁液または溶媒、例えば、であるかもしれない。用いられるかもしれない溶媒および受諾可能な車は含んでいるが、に、水、信号器の解決限られなかったり、解決および等張の塩化ナトリウムの解決信号器の泌乳しなかった。他の例は、溶媒として通常または中断媒体用いられる、および色々柔和な固定オイルを含む、例えば、総合的なモノラルかｄｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅｓある生殖不能の、固定オイル。さらに、ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅｓの準備のオレイン酸酸の発見の使用のような脂肪酸。

薬物の構成を準備する他の薬物の構成そして方法は芸術で知られ、例えば、記述されている"Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ" （ｆｏｒｍｅｒｌｙ "Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ"）；Ｇｅｎｎａｒｏ，Ａ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ & Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ（２０００）。

ここに記述されている発明のよりよい理解を得るためには次の例は述べられる。これらの例がイラストラティブ目的だけのためであることが理解されるべきである。従って、それらはどうにかこの発明の規模を限るべきでない。

実施例
Ｋａｓｔｅｌｉｃｅｔａｌ．（Ｃｙｔｏｋｉｎｅ，１９９６，８：７５１-７６１），前にｒａｄｉｃｉｃｏｌのアナログＡが（次に示されている）不安定ＡＵ？ｒｉｃｈの要素を通ってｍＲＮＡの（相談することを混合物）モチーフは遺伝子の３’ 未翻訳の地域にｍＲＮＡの不安定に応じて置いた（３ ’ ＵＴＲ）示される。例のためＡＲＥｓすべてを削除された含んでいるおよび生じるＩＬ？１ｓｓ？ＡＵのＤＮＡは表現のベクトルにｓｕｂｃｌｏｎｅｄだったＩＬ？１ｓｓの３’ ＵＴＲの１−５、区分。固定してＴＨＰをｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄか。この構造物を含んでいる１細胞はＲＮａｓｅの保護方法（Ｋａｓｔｅｌｉｃ等のｉｂｉｄは。）によって分析されたそしてＡＵ？ｌｅｓｓの示されていた抵抗はｒａｄｉｃｉｃｏｌのアナログＡの方のＲＮＡを得た。

ＩＬの３’ＵＴＲか。１ｓｓｍＲＮＡは３によってがタンデムにの合計をある６つのＡＵＵＵＡのモチーフ含んでいる（図１）を見なさい。ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅレポーターの遺伝子の試金の構造の場合、私達は３つのタンデム繰り返しを含んでいるかどれが図１で示されている下線を引かれた順序から成り立つ片しか使用しなかった。

例１：ｐＧＬ２Ｎｅｏ３０及び安定した細胞ラインの構造
安定した統合のためのベクトルをＴＨＰに得るためか。１細胞、ＸｈｏＩか。（ａｍｉｎｏｇｌｙｃｏｓｉｄｅ３’ｐｈｏｓｐｈｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅを表現する）ｐＧＬ２？Ｃｏｎｔｒｏｌ（Ｐｒｏｍｅｇａ）のＳａＩＩの場所にｐＭＣ１ｎｅｏＰｏｌｙＡ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）から得られた新抵抗力がある遺伝子のＳａＩＩの片はｓｕｂｃｌｏｎｅｄあった。この生じるプラスミッドはｐＧＬ２＿Ｎｅｏと呼ばれた。（３つのタンデムＡＵＵＵＡのモチーフを含み、ＩＬ？１ｓｓ３’ＵＴＲ順序を並べる）３０ｂｐ片は２つの補足の総合的なオリゴヌクレオチドの焼きなましによって図２）がＰｆｌＭＩの制限の場所を使用してｐＧＬ２＿Ｎｅｏにｓｕｂｃｌｏｎｅｄあったことを得た（見なさい。これはｌｕｃｉｆｅｒａｓｅの表現のベクトルｐＧＬ２＿Ｎｅｏ３０（図３．Ａ）で起因する。図２はｐＧＬ２＿ＮｅｏのＰｆＩＭＩの場所にｌｉｇａｔｉｏｎに使用する３つのタンデムＡＵＵＵＡのモチーフを含んでいるＩＬ？１ｓｓ３’ＵＴＲ順序を示す。（図３Ｂ）表現のベクトルｐＧＬ２βｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅにｐＧＬ２＿Ｎｅｏ３０及びｐＧＬ２＿Ｎｅｏでｌｕｃｉｆｅｒａｓｅの遺伝子と同じ促進者（ＳＶ４０）が運転するｌａｃＺの遺伝子、プラスミッドｐＧＬ２？ｓｓ？ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅが含んでいないｍＲＮＡの不安定順序をあるが。ｌａｃＺの遺伝子はｐＳＶベータガラクトシダーゼ（Ｐｒｏｍｅｇａ）のＨｉｎｄＩＩＩ／ＢａｍＨＩの制限のダイジェストから得られ、ｐＧＬ２Ｃｏｎｔｒｏｌ（Ｐｒｏｍｅｇａ）のＨｉｎｄＩＩＩ／ＢａｍＨＩの場所にｓｕｂｃｌｏｎｅｄ。

ＴＨＰ−１細胞はｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｉｏｎによってｐＧＬ２＿Ｎｅｏ及びｐＧＬ２ｓｓガラクトシダーゼのベクトルと（制御細胞ラインを発生させるため）またはｐＧＬ２＿Ｎｅｏ３０及びｐＧＬ２ｓｓガラクトシダーゼのベクトルとそれからｃｏｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄあった。１．３ｍＭのＫＨ２ＰＯ４、７．３６ｍＭＮａ２ＨＰＯ４、２．４４ｍＭのＫＣｌ、１２４ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのブドウ糖、９．６４．ＭのＭｇＣｌ２および１６．ＭのＣａＣｌ２ｐＨ７．２の１０７ｃｅｌｌｓ／ｍｌは（２５０Ｖ、６９０．Ｆおよび不明確な抵抗）０．４ｃｍのキュヴェットを使用してＢｉｏラド遺伝子のＤＮＡの２０．ｇとｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄＰｕｌｓｅｒあった。細胞は１０％ＦＢＳ、（Ｌグルタミン）２ｍＭＬ−Ｇｌｎ、Ｇ４１８（ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ）の５０．Ｍの２２−ｍｅｒｃａｐｔｏｅｔｈａｎｏｌおよび６００．ｇ／ｍｌを含んでいるＲＰＭＩ媒体で続いて培養された。

ＴＨＰ−１細胞へのｐＧＬ２＿Ｎｅｏ３０そしてｐＧＬ２＿Ｎｅｏのｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎの後で、Ｇ４１８抵抗力がある安定した細胞ラインはＧ４１８の選択によって得られ、ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅの活動のために試金された。Ｃｏｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄの細胞ラインはまた内部制御として役立つことができるｓｓガラクトシダーゼの活動のために試金された（例５を次に見なさい）。各ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎの１つの細胞ラインはそれ以上の分析のために選ばれた；ｐＧＬ２＿Ｎｅｏ３０／のｐＧＬ２ｓｓガラクトシダーゼの細胞ラインはクローン第５３とクローン第６３として及びｐＧＬ２＿Ｎｅｏ／のｐＧＬ２ｓｓガラクトシダーゼの細胞ライン言われた。内生ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅの活動は正常なＴＨＰ− １の細胞で検出できない。ティッシュの文化及びｌｕｃｉｆｅｒａｓｅの活動の測定は下記に記されているように遂行された。

ティッシュ文化：
人間のｍｏｎｏｃｙｔｉｃ白血病の細胞を並べたり、クローンとして作る第５３をｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ、６３は１１０Ｕ／ｍｌのペニシリン、１００．ｇ／ｍｌのストレプトマイシン、２ミリメートルＬ−Ｇｌｎおよび２ｇ／ｌＮａＨＣＯ３と補われるＲＰＭＩ媒体で育つ。Ｈｅａｔ−ｔｒｅａｔｅｄＦＢＳ（５％）は使用の前に加えられる。細胞は５ｘ１０５／ｍｌの密度に育ち、１００Ｕ／ｍｌ（最終的な集中）とγＩＦＮ区別するために引き起こされる。後で３時間、ＬＰ（５．ｇ／ｍｌ最終的な集中）の１０．ｌは加えられる。今回ポイントは時間０示される。混合物は示されるようにＬＰの付加の後で別々の機会に加えられる。

Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅの活動の測定：
９６の健康な版の使用にシステムを合わせるためには、細胞はＰａｃｋａｒｄの平底のＲＰＭＩの中型の欠乏のフェノール赤（ＡＭＩＭＥＤ）の白いポリスチレンのｍｉｃｒｏｐｌａｔｅｓ（猫第６００５１８０）で育った。細胞は５時ｘ１０４／ｗｅｌｌでめっきされた。細胞の処置の後で、ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅはＰａｃｋａｒｄＬｕｃライトシステムを使用して測定された（１００Ｕ／ｍｌの最終的な集中への５ｘ１０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌ、ｇＩＦＮ（１０００Ｕ／ｍｌ、ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ、第１０５０４９４）およびＬｕｃ０．２５％の（ｖ／ｖ）ライトの増強物の細胞の懸濁液への２０５．ｌ．の最終的な容積の製造業者の指示に従って猫第６０１６９１１）は簡潔に、加えられた。３時間の孵化のＬＰ（５０．ｇ／ｍｌシグマ、Ｌ？８２７４）の後で弾力性５．ｇ／ｍｌの最終の集中に加えられた。細胞は平底の白いポリスチレンのｍｉｃｒｏｐｌａｔｅｓ（Ｐａｃｋａｒｄの猫に５ｘ１０４／１００．ｌ／ｗｅｌｌでそれからめっきされた。第６００５１８０）及び１６時間ｉｎｃｕｂａｔｅｄ。混合の解決または標準車の５．ｌはそれから加えられ、細胞は示されるように更にｉｎｃｕｂａｔｅｄ。ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅの基質の解決の１００．ｌは加えられ、版はＴｏｐＳｅａｌ？Ａのｐｒｅｓｓ？ｏｎの付着力のシーリングフィルム（Ｐａｃｋａｒｄ猫で覆われた。２２．ｏＣのＰａｃｋａｒｄの上の計算のシンチレーション計数装置との冷光を測定する前の第６００５１８５）。ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ信号は少なくとも９０分の間安定していた。

２つの細胞ライン、（ａ）第５３および（ｂ）６３のｌｕｃｉｆｅｒａｓｅの活動の微分のの依存した誘導はテストされ、得られる結果はｆｉｇｓ．４ａおよびｂ．で示されている。両方のクローンではｌｕｃｉｆｅｒａｓｅの表現の明瞭な誘導は、試金の時中の活動の維持のハイレベル観察された。ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅのこの高く、一定した表現はｍＲＮＡの不安定を引き起こす混合物の効果を分析した場合留意されるべきである。ｍＲＮＡの低下が野生タイプＴＨＰ− １の細胞の状態とは違うｄｅｎｏｖｏのトランスクリプションが付いている一定した競争に、ＩＬ−１sのｍＲＮＡの場合には、ハイレベル１６時間得られたＬＰの付加の後のある。１つはｌｕｃｉｆｅｒａｓｅの場合にはｒａｄｉｃｉｃｏｌのアナログａの場合には次に見なさい、トランスクリプションが高く残るのでｍＲＮＡの不安定にする薬剤のより弱い効果を見ると、ように観察された期待する。

例２：ＬｕｃｉｆｅｒａｓｅｍＲＮＡおよび蛋白質の半分の生命
ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ蛋白質の安定性を通って潜在的なｍＲＮＡの不安定にする代理店のための試金のための最適のひとときを定めるためにｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ蛋白質の活動を使用してｍＲＮＡの低下を測定するためにはｌｕｃｉｆｅｒａｓｅの酵素の半減期を知っていることは重要である。可能性はｍＲＮＡが蛋白質の長い半減期のために低下できること高い酵素活動主張できるある。従って私達はｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌの抑制剤のアクチノマイシンＤ（行為ｄ）か翻訳の抑制剤のの付加の後のｌｕｃｉｆｅｒａｓｅの活動をシクロヘキシミド（ＣＨＸ）分析した。図５はことを２０．ｇ／ｍｌ行為の前で示す。２０．Ｍの前のと同様、ＤはＣＨＸのｌｕｃｉｆｅｒａｓｅの活動急速に低下し、孵化の８時間後にｒａｄｉｃｉｃｏｌのアナログＡ（１ｍＭ）によって達成された阻止と対等なレベルに達した。ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅの酵素のこの比較的短い半減期の故に、混合の付加の後の８時間には早くもｍＲＮＡの低下の活動のための物質を査定することは安全である。

例３：ｒａｄｉｃｉｃｏｌのアナログＡの効果
ＴＨＰ？１細胞ライン、クローンＮｏ．。６３及び５３はｇＩＦＮと育ち、区別され、そして正常なＴＨＰ？１細胞と同一のＬＰと刺激される。ＬＰ及び細胞のエキスの付加がそれから後で８時間取られたまたは加えられた１６時間後ＲａｄｉｃｉｃｏｌのアナログＡは示されるように。Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅの活動は５０％＋／？１７％の時として阻止による平均の１つのＭのｒａｄｉｃｉｃｏｌのアナログＡによってｒａｄｉｃｉｃｏｌのアナログＡの５ｘ１０？６Ｍまで制御クローン第５３に効果をもたらさなかった一方９３％大きかった、図６禁じられた（固体棒はクローン第５３、開いた棒クローン第６３を示す）。

１ミリメートルのｒａｄｉｃｉｃｏｌのアナログと扱われたとき興味深く、（開いた棒）ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅのより低い表現のためにそうなったものまたはＡＵ？ｒｉｃｈの要素によって仲介されるｍＲＮＡの低下プロセスの特異的に表現されたか、または変更された部品の介入を表している画一的なクローン第６３はＡはｌｕｃｉｆｅｒａｓｅの活動（図７の固体棒クローン第５３を）の限られた減少しか示さなかった示す。全く、ゲルの遅滞はＩＬ？１ｓｓのＡＵ？ｒｉｃｈ３’ ＵＴＲの２４１ｂｐを使用してｒｉｂｏｐｒｏｂｅが示されていないｇＩＦＮによって引き起こされた微分または修正を用いる付加的な蛋白質の結合を示したように実験する（）。

区別されたクローン第６３のｌｕｃｉｆｅｒａｓｅの活動の集中の依存した阻止は図８で、示されている。ｒａｄｉｃｉｃｏｌのアナログＡの集中はまたトランスクリプションの細胞毒性か抑制的な活動のために５ｘ１０？６Ｍより高く制御クローン（第５３）を禁じた。

例４：選択された多数の化合物に対するアッセイの適用
いくつかの指定物質への試金の適用いくつかの指定物質は例３で記述されているように発明の試金の活動のために大幅にテストされた（区別された細胞のために）。得られる結果は表３で次に与えられる。Ｒａｄｉｃｉｃｏｌ（方式ＩＩを次に見なさい）及びｒａｄｉｃｉｃｏｌのアナログＡはｍＲＮＡの安定性に対する明確な効果を示した；テストされた他の混合物は使用された試金で活動を示さなかった。

例５：単一セルラインを使用して試金の適用
前の例では、テスト混合物は２つの別々の細胞ライン（クローンＮｏ．の活動の比較によって試金された。５３及び６３）。但し、クローン６３は２個の別々のプラスミッドとｃｏｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄあった：１個のプラスミッド（ｐＧＬ２＿Ｎｅｏ３０）はＳＶ４０促進者および他のプラスミッド（ｐＧＬ２？ｓｓ？ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅの図３Ｂ）によって運転された３０のｂｐの不安定順序のｌｕｃｉｆｅｒａｓｅの遺伝子を含んでいたりＳＶ４０促進者が運転したｌａｃＺの遺伝子を含んでいたｍＲＮＡの不安定順序を含んでいなかったが。この細胞ラインのｓｓ？ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅの活動はｍＲＮＡの不安定順序によるｍＲＮＡの不安定を促進する混合物への細胞の露出によって影響されるべきでない。その結果、１つは刺激された細胞対刺激されない細胞でｌｕｃｉｆｅｒａｓｅの活動を単に比較し、これらの同じ細胞でｓｓ？ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅの活動を比較することによってｍＲＮＡの不安定の活動を持っている混合物のために選別べきである。従って、クローン６３の（刺激され、刺激されない細胞）のｌｕｃｉｆｅｒａｓｅの活動そしてｓｓ？ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅの活動のｒａｄｉｃｉｃｏｌのアナログＡの効果はクローン６３及びクローン５３の刺激され、刺激されない細胞のｒａｄｉｃｉｃｏｌのアナログＡの効果と比較された。
試金は前の例で記述されているように行われた。表４ショークローン６３及び５３の？ＩＦＮ／ＬＰＳの刺激され、刺激されない細胞のｒａｄｉｃｉｃｏｌのアナログＡの様々な集中のｌｕｃｉｆｅｒａｓｅの活動。活動は制御の％で与えられ、細胞数のために制御される３つの独立した実験の平均に基づいていた。表５はクローン６３及び５３の刺激され、刺激されない細胞でｓｓ？ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅの活動を示したものだ。活動は制御の％で与えられ、細胞数のために制御される３つの独立した実験の平均に基づいていた。それは表５の活動的な混合物としてｒａｄｉｃｉｃｏｌのアナログＡを識別しようことデータから明確こと表４の試金、そしてである。

例６：ｐＧＬ２ＮｅｏＮ／ＮＬｕｃｉｆｅｒａｓｅの表現のベクトルの構造
例にある様々な不安定順序のクローニングを促進するために付加的な制限の酵素の場所を含むようにプラスミッドｐＧＬ２＿Ｎｅｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ）は７−１４次の通り変更された（次に）。

２つのｕｎｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄのオリゴヌクレオチド、Ｎ／Ｎ−ＴＫ５Ｐ：

及びＮ／Ｎ−ＴＫ３Ｐ：

は、アニールされ、ＰｆｌＭ１にｌｉｇａｔｅｄｐＧＬ２＿Ｎｅｏを一直線に並べた。アニールされたオリゴヌクレオチドは（大胆及びイタリック体で示されている）ＮｏｔＩ及び（大胆、イタリック体および下線で示されている）ＮｄｅＩのための制限の酵素の場所を形作った含んでいる小さい多数のクローニング場所を。付加的で独特な制限の場所を含むためにこの小さい多数のクローニング場所が拡大することができることが注意されるべきである。ＮｏｔＩ／ＮｄｅＩの生じるプラスミッドの多数のクローニングのオリエンテーションはＤＮＡの配列によって場所、ｐＧＬ２ＮｅｏＮ／Ｎ、確認された。

例７：人間のＡＰＰの不安定順序の構造
この例で使用されたＡＰＰ順序はＡｌｚｈｅｉｍｅｒの病気（ＧｅｎＢａｎｋの受入番号に対応するａｍｙｌｏｉｄＡ４前駆物質のための人間のｍＲＮＡから得られた：Ｙ００２６４の位置：ＨＳＡＦＰＡ４）。アミロイドＡ４の前駆物質順序の３’ ＵＴＲは５つのＡＵＵＵＡのモチーフを含んでいる。人間の多数のティッシュのＤＮＡ（ＣｌｏｎｔｅｃｈのＭＴＣのパネルＩ、Ｋ１４２０−１の源：頭脳は）３ ’ プライマー、ＴＫ−ＡＰＰ−３Ｐ、５ ’ プライマー、ＴＫ−ＡＰＰ−５ＰおよびプラチナＰｆｘのＤＮＡのポリメラーゼ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して増幅されたＰＣＲだった。

ＴＫ−ＡＰＰ−３Ｐ：

は、ＮｏｔＩの制限の場所を含む付加的な５’ 順序を含んでいる。３３０９から３３３１まで人間のＡＰＰ順序と同一の順序は大胆で示されている。潜在的なｐｏｌｙＡ信号順序は３０８１．．３０８６及び３０９０．．３０９５にある。

ＴＫ−ＡＰＰ−５Ｐ：

は、ＮｏｔＩの制限の場所を含む付加的な５’ 順序を含んでいる。２２４０から２２６４まで人間のＡＰＰ順序と同一の順序は大胆で示されている。

生じるＤＮＡの片は図９（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）で示され、位置２２４０からの人間のアミロイドＡ４の前駆物質蛋白質の遺伝子の３’ ＵＴＲの１０９３のヌクレオチドを（停止ｃｏｄｏｎは２２３５にあり）、及び表しまで、第３推定のｐｏｌｙＡ信号順序（３３３２．．３３３７）の公正上流にである位置３３３１含んでいる。片は５つのＡＵＵＵＡのモチーフを含んでいる。この片はシャトルのベクトルとして使用されたｐＣＲ鈍いＩＩ−ＴＯＰＯ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にクローンとして作られた鈍終りだった。ＮｏｔＩの片はシャトルのベクトルから消化され、ＮｏｔＩによって一直線に並べられたｐＧＬ２ＮｅｏＮ／Ｎのｌｕｃｉｆｅｒａｓｅの表現のベクトルにｓｕｂｃｌｏｎｅｄ。生じるＤＮＡの表現のベクトルは人間のアミロイドＡ４の前駆物質蛋白質の遺伝子でｐＧＬ２ＮｅｏＮ／Ｎで使用されるｌｕｃｉｆｅｒａｓｅの遺伝子の３’ＵＴＲに挿入される５つのＡＵＵＵＡのモチーフを含んでいる３’ＵＴＲを構成する。

例８：人間のｂｃｌ−２の構造か。長い不安定順序
この例で使用されたｂｃｌ２アルファ順序はｌｅｕｋａｅｍｉａ／ｌｙｍｐｈｏｍａの病気（ＧｅｎＢａｎｋの受入番号に対応するＢ細胞２の（ｂｃｌ−２）原始ｐｒｏｔｏ−ｏｎｃｏｇｅｎｅのための人間のｍＲＮＡから得られた：Ｍ１３９９４の位置：ＨＵＭＢＣＬ２．Ａ）。ｂｃｌ２アルファ順序の３’ ＵＴＲは３つがタンデムにある８つのＡＵＵＵＡのモチーフを含んでいる。人間のＨＬ−６０細胞からの総ＲＮＡは（激しいｐｒｏｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃ白血病）３’ プライマー、ｈｂｃｌ２．ａ−ＴＫ３ＰＬおよび指数ＩＩのＲＮａｓｅＨ− の逆のｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して転写された逆だった。生じる最初繊維によって総合されたＤＮＡはそれから３’ プライマー、ｈｂｃｌ２．ａ−ＴＫ３ＰＬ、５’ プライマー、ｈｂｃｌ２．ａ−ＴＫ５Ｐ、およびプラチナＰｆｘのＤＮＡのポリメラーゼ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して増幅されたＰＣＲだった。

ｈｂｃｌ２．ａ−ＴＫ３ＰＬ：

は、ＮｏｔＩの制限の場所を含む付加的な５’ 順序を含んでいる。３０４１から３０６１まで人間のｂｃｌ２アルファ順序と同一の順序は大胆で示されている。このｍＲＮＡの３’ＵＴＲは非常に長く、位置５０８６に伸びる。

ｈｂｃｌ２．ａ−ＴＫ５Ｐ：

は、ＮｏｔＩの制限の場所を含む付加的な５’ 順序を含んでいる。２１７６から２１９４まで人間のｂｃｌ２アルファ順序と同一の順序は大胆で示されている。停止ｃｏｄｏｎは位置２１７６にある。

生じるＤＮＡの片は図１０（ＳＥＱＩＤＮＯ：２）で示され、位置２１７６からのｂｃｌ２アルファ蛋白質の遺伝子の３’ ＵＴＲの８８９のヌクレオチドを（停止ｃｏｄｏｎは２１７６にあり）、及び表しまで、位置３０６１含んでいる。片は６つのＡＵＵＵＡのモチーフを含んでいる。この片は拡大の高い忠誠ＰＣＲシステム（Ｒｏｃｈｅ）と増幅された。３’ Ａの突出部分があるプロダクトはｐＣＲＸＬＴＯＰＯ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にクローンとして作られ、シャトルのベクトルとして使用した。ＮｏｔＩの片はシャトルのベクトルから消化され、ＮｏｔＩによって一直線に並べられたｐＧＬ２ＮｅｏＮ／Ｎのｌｕｃｉｆｅｒａｓｅの表現のベクトルにｓｕｂｃｌｏｎｅｄ。生じるＤＮＡの表現のベクトルはｐＧＬ２ＮｅｏＮ／Ｎで使用されるｌｕｃｉｆｅｒａｓｅの遺伝子の３’ＵＴＲに挿入される最初の６つのＡＵＵＵＡのモチーフを含んでいる人間のｂｃｌ２アルファ蛋白質の遺伝子で３’ＵＴＲを構成する。

例９：人間のｂｃｌ−２．ａｌｐｈａの構造は不安定順序をショートさせる
例９：この例で使用されたｌｅｕｋａｅｍｉａ／ｌｙｍｐｈｏｍａの病気（ＧｅｎＢａｎｋの受入番号に対応するＢ細胞２の（ｂｃｌ−２）原始ｐｒｏｔｏ−ｏｎｃｏｇｅｎｅのための人間のｍＲＮＡから人間のｂｃｌ−２．ａｌｐｈａの短い不安定のＳｅｑｕｅｎｃｅＴｈｅのｂｃｌ２アルファ順序の構造は得られた：Ｍ１３９９４の位置：ＨＵＭＢＣＬ２．Ａ）。ｂｃｌ２アルファ順序の３’ ＵＴＲは３つがタンデムにある８つのＡＵＵＵＡのモチーフを含んでいる。人間のＨＬ−６０細胞からの総ＲＮＡは（激しいｐｒｏｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃ白血病）３’ プライマー、ｈｂｃｌ２．ａ−ＴＫ３ＰＳおよび指数ＩＩのＲＮａｓｅＨ− の逆のｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して転写された逆だった。生じる最初繊維によって総合されたＤＮＡはそれから３’ プライマー、ｈｂｃｌ２．ａ−ＴＫ３ＰＳ、５’ プライマー、ｈｂｃｌ２．ａ−ＴＫ５Ｐ、およびプラチナＰｆｘのＤＮＡのポリメラーゼ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して増幅されたＰＣＲだった。

ｈｂｃｌ２．ａ−ＴＫ３ＰＳ：

は、ＮｏｔＩの制限の場所を含む付加的な５’ 順序を含んでいる。２８４８から２８７８まで人間のｂｃｌ２アルファ順序と同一の順序は大胆で示されている。

このｍＲＮＡの３’ＵＴＲは非常に長く、位置５０８６に伸びる。ｈｂｃｌ２．ａ−ＴＫ５Ｐ：

生じるＤＮＡの片は図１１（ＳＥＱＩＤＮＯ：３）で示され、位置２１７６からのｂｃｌ２アルファ蛋白質の遺伝子の３’ ＵＴＲの６９６のヌクレオチドを（停止ｃｏｄｏｎは２１７６にあり）、及び表しまで、位置２８７８含んでいる。片は５つのＡＵＵＵＡのモチーフを含んでいる。この片は拡大の高い忠誠ＰＣＲシステム（Ｒｏｃｈｅ）と増幅された。３’ Ａの突出部分があるプロダクトはｐＣＲＸＬＴＯＰＯ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にクローンとして作られ、シャトルのベクトルとして使用した。ＮｏｔＩの片はシャトルのベクトルから消化され、ＮｏｔＩによって一直線に並べられたｐＧＬ２ＮｅｏＮ／Ｎのｌｕｃｉｆｅｒａｓｅの表現のベクトルにｓｕｂｃｌｏｎｅｄ。生じるＤＮＡの表現のベクトルはｐＧＬ２ＮｅｏＮ／Ｎで使用されるｌｕｃｉｆｅｒａｓｅの遺伝子の３’ＵＴＲに挿入される最初の５つのＡＵＵＵＡのモチーフを含んでいる人間のｂｃｌ２アルファ蛋白質の遺伝子で３’ＵＴＲを構成する。

例１０：人間のｃ−ｍｙｃの不安定順序の構造
この例で使用されたｃ−ｍｙｃ順序はｐ６７及びｐ６４ｍｙｃ蛋白質（ＧｅｎＢａｎｋの受入番号のための人間のｃ−ｍｙｃの遺伝子から得られた：Ｄ１０４９３及びＤ９０４６７の位置：ＨＵＭＭＹＣＫＯＢ）。人間のｃ−ｍｙｃのｇｅｎｏｍｉｃ構成はｐ６７に及びｐ６４に共通の３’ＵＴＲが４つを含んでいることをあることを隔離されたＡＵＵＵＡ順序示す。両方の蛋白質（ヌクレオチド６６２８−７１９０）の末端のｅｘｏｎはＢｅｒｎｓｔｅｉｎ等が記述しているコーディングの地域の不安定の決定要因（ｃｒｄ）として知られている６０アミノ酸の範囲を含んでいる。（Ｇｅｎｅｓ及びＤｅｖ．、１９９２年、６、６４２−６５２）７００８から停止ｃｏｄｏｎ（７１９０）への。人間のＨＬ−６０細胞からの総ＲＮＡは（激しいｐｒｏｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃ白血病）３’ プライマー、ｈｃｍｙｃ−ＴＫ３Ｐおよび指数ＩＩのＲＮａｓｅＨ− の逆のｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して転写された逆だった。生じる最初繊維によって総合されたＤＮＡはそれから３’ プライマー、ｈｃｍｙｃ−ＴＫ３Ｐ、５’ プライマー、ｈｃｍｙｃ−ＴＫ５Ｐ、およびプラチナＰｆｘのＤＮＡのポリメラーゼ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して増幅されたＰＣＲだった。

ｈｃｍｙｃ−ＴＫ３Ｐ：

は、ＮｄｅＩの制限の場所を含む付加的な５’ 順序を含んでいる。７６３６から７６５８まで人間のｃ−ｍｙｃ順序と同一の順序は大胆で示されている。２つのｐｏｌｙＡ信号順序は７４８５．．．７４９０そして７６２６．．．７６３１にある。

ｈｃｍｙｃ−ＴＫ５Ｐ：

は、ＮｏｔＩの制限の場所を含む付加的な５’ 順序を含んでいる。６９８４から７００５までｃｍｙｃ順序と同一の順序は大胆で示されている。

生じるＤＮＡの片は図１２（ＳＥＱＩＤＮＯ：４）で示され、位置６９８４からの人間のｃ−ｍｙｃ蛋白質の遺伝子の３’ ＵＴＲの６７５のヌクレオチドを、及び表しまで、位置７６５８含んでいる。片は４つのＡＵＵＵＡのモチーフを含んでいる。片は拡大の高い忠誠ＰＣＲシステム（Ｒｏｃｈｅ）と増幅された。３’ Ａの突出部分があるプロダクトはｐＣＲＸＬＴＯＰＯ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にクローンとして作られ、シャトルのベクトルとして使用した。ＮｏｔＩ／ＮｄｅＩの片はシャトルのベクトルから消化され、ＮｏｔＩ／ＮｄｅＩによって一直線に並べられたｐＧＬ２ＮｅｏＮ／Ｎのｌｕｃｉｆｅｒａｓｅの表現のベクトルにｓｕｂｃｌｏｎｅｄ。生じるＤＮＡの表現のベクトルはｐＧＬ２ＮｅｏＮ／Ｎで使用されるｌｕｃｉｆｅｒａｓｅの遺伝子の３’ＵＴＲに挿入される４つのＡＵＵＵＡのモチーフを含んでいる人間のｃ−ｍｙｃ蛋白質の遺伝子で３’ＵＴＲを構成する。

例１１：人間のＴＮＦａの不安定順序の構造
この例で使用されたＴＮＦａのｍＲＮＡ順序は人間の腫瘍壊死要因（ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙＴＮＦ、メンバー２）の（ＴＮＦ）からｍＲＮＡ（ＧｅｎＢａｎｋの受入番号得られた：ＮＭ＿０００５９４の位置：ＴＮＦ）。このｍＲＮＡの３’ ＵＴＲに９つのＡＵＵＵＡのモチーフがある。（？ＩＦＮ／ＬＰＳと区別される）人間のＴＨＰ−１細胞からの総ＲＮＡは隔離され、逆は３’ プライマー、ＴＫＨＴ３Ｐおよび指数ＩＩのＲＮａｓｅＨ− の逆のｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して転写された。生じる最初繊維によって総合されたＤＮＡはそれから３’ プライマー、ＴＫＨＴ３Ｐ、５’ プライマー、ＴＫＨＴ５Ｐ、およびプラチナＰｆｘのＤＮＡのポリメラーゼ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して増幅されたＰＣＲだった。

ＴＫＨＴ３Ｐ：

は、ＮｄｅＩの制限の場所を含む付加的な５’ 順序を含んでいる。１６４０年から１６６０年までＴＮＦａｌｐｈａ人間の順序と同一の順序は大胆で示されている。潜在的なｐｏｌｙＡ信号順序は１６４７．．１６５２にある。ｐｏｌｙＡの尾の付加は１６６６年か１６６９年に起こる。

ＴＫＨＴ５Ｐ：

は、ＮｏｔＩの制限の場所を含む付加的な５’ 順序を含んでいる。８６９から８９０までＴＮＦａ人間の順序と同一の順序は大胆で示されている。

生じるＤＮＡの片は図１３（ＳＥＱＩＤＮＯ：５）で示され、位置８６９からの人間のＴＮＦａ蛋白質の遺伝子の３’ ＵＴＲの７９２のヌクレオチドをに、及び表し、位置１６６０年含んでいる。片は９つのＡＵＵＵＡのモチーフを含んでいる。片はシャトルのベクトルとして使用されたｐＣＲ鈍いＩＩ−ＴＯＰＯ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にクローンとして作られた鈍終りだった。ＮｏｔＩ／ＮｄｅＩの片はシャトルのベクトルから消化され、ＮｏｔＩ／ＮｄｅＩによって一直線に並べられたｐＧＬ２ＮｅｏＮ／Ｎのｌｕｃｉｆｅｒａｓｅの表現のベクトルにｓｕｂｃｌｏｎｅｄ。生じるＤＮＡの表現のベクトルはｐＧＬ２ＮｅｏＮ／Ｎで使用されるｌｕｃｉｆｅｒａｓｅの遺伝子の３’ＵＴＲに挿入される９つのＡＵＵＵＡのモチーフを含んでいる人間のＴＮＦａ蛋白質の遺伝子で３’ＵＴＲを構成する。

例１２：人間のＩＬ１ｂ不安定順序の構造
この例で使用されたＩＬ１ｂｍＲＮＡ順序はベータｐｒｏｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ１のための人間の遺伝子から得られた（ＧｅｎＢａｎｋの受入番号：Ｘ０４５００，の位置：ＨＳＩＬ１Ｂ）。このｍＲＮＡの３’ ＵＴＲに６つのＡＵＵＵＡのモチーフがある。（？ＩＦＮ／ＬＰＳと区別される）人間のＴＨＰ−１細胞からの総ＲＮＡは隔離され、逆は３’ プライマー、ＨＩＬ１Ｂ３および指数ＩＩのＲＮａｓｅＨ− の逆のｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して転写された。生じる最初繊維によって総合されたＤＮＡはそれから３’ プライマー、ＨＩＬ１Ｂ３、５’ プライマー、ＨＩＬ１Ｂ５、およびプラチナＰｆｘのＤＮＡのポリメラーゼ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して増幅されたＰＣＲだった。

ＨＩＬ１Ｂ３：

は、ＮｄｅＩの制限の場所を含む付加的な５’ 順序を含んでいる。人間のＩＬ−１と同一の順序は大胆で示されているか。８９１７から８９３６まで順序。潜在的なｐｏｌｙＡ信号順序は８９２５．．．８９３０にある。

ＨＩＬ１Ｂ５：

は、ＮｏｔＩの制限の場所を含む付加的な５’ 順序を含んでいる。人間のＩＬ−１と同一の順序は大胆で示されているか。８３３７から８３５７まで順序。

生じるＤＮＡの片は図１４（ＳＥＱＩＤＮＯ：６）で示され、位置８３３７からの人間のＩＬ１ｂ蛋白質の遺伝子の３’ ＵＴＲの６００のヌクレオチドを、及び表しまで、位置８９３６含んでいる。片は６つのＡＵＵＵＡのモチーフを含んでいる。片はシャトルのベクトルとして使用されたｐＣＲ鈍いＩＩ−ＴＯＰＯ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にクローンとして作られた鈍終りだった。ＮｏｔＩ／ＮｄｅＩの片はシャトルのベクトルから消化され、ＮｏｔＩ／ＮｄｅＩによって一直線に並べられたｐＧＬ２ＮｅｏＮ／Ｎのｌｕｃｉｆｅｒａｓｅの表現のベクトルにｓｕｂｃｌｏｎｅｄ。生じるＤＮＡの表現のベクトルはｐＧＬ２ＮｅｏＮ／Ｎで使用されるｌｕｃｉｆｅｒａｓｅの遺伝子の３’ＵＴＲに挿入される６つのＡＵＵＵＡのモチーフを含んでいる人間のＩＬ１ｂ蛋白質の遺伝子で３’ ＵＴＲを構成する。

例１３：人間のＶＥＧＦの不安定順序の構造
この例で使用された管のｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ成長因子（ＶＥＧＦ）のｍＲＮＡ順序はＶＥＧＦ（ＧｅｎＢａｎｋの受入番号のための人間の遺伝子から得られた：ＡＦ０２２３７５）。このｍＲＮＡの３’ ＵＴＲに８つのＡＵＵＵＡのモチーフ、単一コピーのすべての現在がある。ＶＥＧＦのｍＲＮＡにまた３’ＵＴＲ（Ｃｌａｆｆｅｙ等１９９８年、Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌにある報告された低酸素症引き起こされたｍＲＮＡの安定性の地域がある。細胞９：４６９−４８１）。人間の多数のティッシュのＤＮＡ（ＣｌｏｎｔｅｃｈのＭＴＣのパネルＩ、Ｋ１４２０−１の源：胎盤は）３ ’ プライマー、ＴＫ−ＶＡＵ−３Ｐ、５ ’ プライマー、ＴＫ−ＶＡＵ−５ＰおよびプラチナＰｆｘのＤＮＡのポリメラーゼ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して増幅されたＰＣＲだった。

ＴＫ−ＶＡＵ−３Ｐ：

は、ＮｄｅＩの制限の場所を含む付加的な５’ 順序を含んでいる。３１２４から３１４６までＶＥＧＦ順序と同一の順序は大胆で示されている。このｍＲＮＡの３’ＵＴＲは非常に長く、位置３１６６に伸びる。潜在性のｐｏｌｙＡの付加順序であるかもしれないか何が３１３９．．３１４４にそこに位置３１５５で始まるｐｏｌｙＡの尾のようで。

ＴＫ−ＶＡＵ−５Ｐ：

は、ＮｏｔＩの制限の場所を含む付加的な５’ 順序を含んでいる。２０６２年から２０８５年までＶＥＧＦ順序と同一の順序は大胆で示されている。停止ｃｏｄｏｎは位置１２７５年にある。

生じるＤＮＡの片は図１５（ＳＥＱＩＤＮＯ：７）で示され、位置２０６２年からの人間のＶＥＧＦ蛋白質の遺伝子の３’ ＵＴＲの１０８７のヌクレオチドを（停止ｃｏｄｏｎは１２７５年にあり）、及び表しまで、位置３１４６含んでいる。片は７つのＡＵＵＵＡのモチーフを含んでいる。片はシャトルのベクトルとして使用されたｐＣＲ鈍いＩＩ−ＴＯＰＯ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にクローンとして作られた鈍終りだった。ＮｏｔＩ／ＮｄｅＩの片はシャトルのベクトルから消化され、ＮｏｔＩ／ＮｄｅＩによって一直線に並べられたｐＧＬ２ＮｅｏＮ／Ｎのｌｕｃｉｆｅｒａｓｅの表現のベクトルにｓｕｂｃｌｏｎｅｄ。生じるＤＮＡの表現のベクトルはｐＧＬ２ＮｅｏＮ／Ｎで使用されるｌｕｃｉｆｅｒａｓｅの遺伝子の３’ＵＴＲに挿入される７つのＡＵＵＵＡのモチーフを含んでいる人間のＶＥＧＦ蛋白質の遺伝子で３’ＵＴＲを構成する。

例１４：人間のＶＥＧＦの低酸素症の範囲の不安定順序の構造
この例で使用された管のｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ成長因子（ＶＥＧＦ）のｍＲＮＡ順序はＶＥＧＦ（ＧｅｎＢａｎｋの受入番号のための人間の遺伝子から得られた：ＡＦ０２２３７５）。このｍＲＮＡの３’ ＵＴＲに８つのＡＵＵＵＡのモチーフ、単一コピーのすべての現在がある。ＶＥＧＦのｍＲＮＡにまた３’ＵＴＲ（Ｃｌａｆｆｅｙ等１９９８年、Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌにある報告された低酸素症引き起こされたｍＲＮＡの安定性の地域がある。細胞９：４６９−４８１）。人間の多数のティッシュのＤＮＡ（ＣｌｏｎｔｅｃｈのＭＴＣのパネルＩ、Ｋ１４２０−１の源：胎盤は）３ ’ プライマー、ＴＫ−Ｖ−３Ｐ、５ ’ プライマー、ＴＫ−Ｖ−５ＰおよびプラチナＰｆｘのＤＮＡのポリメラーゼ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して増幅されたＰＣＲだった。

ＴＫ−Ｖ−３Ｐ：

は、ＮｄｅＩの制限の場所を含む付加的な５’ 順序を含んでいる。１７３０年から１７５２年までＶＥＧＦ順序と同一の順序は大胆で示されている。このｍＲＮＡの３’ＵＴＲは非常に長く、位置３１６６に伸びる。潜在性のｐｏｌｙＡの付加順序であるかもしれないか何が３１３９．．３１４４にそこに位置３１５５で始まるｐｏｌｙＡの尾のようで。

ＴＫ−Ｖ−５Ｐ：

は、ＮｏｔＩの制限の場所を含む付加的な５’ 順序を含んでいる。１６０１年から１６２２年までＶＥＧＦ順序と同一の順序は大胆で示されている。停止ｃｏｄｏｎは位置１２７５年にある。

生じるＤＮＡの片は図１６（ＳＥＱＩＤＮＯ：８）で示され、位置１６０１年からの人間のＶＥＧＦ蛋白質の遺伝子の３’ ＵＴＲの１５２のヌクレオチドを（停止ｃｏｄｏｎは１２７５年にあり）、及び表しまで、位置１７５２年含んでいる。片は報告された低酸素症の範囲を含んでいる。片はシャトルのベクトルとして使用されたｐＣＲ鈍いＩＩ−ＴＯＰＯ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にクローンとして作られた鈍終りだった。ＮｏｔＩ／ＮｄｅＩの片はシャトルのベクトルから消化され、ＮｏｔＩ／ＮｄｅＩによって一直線に並べられたｐＧＬ２ＮｅｏＮ／Ｎのｌｕｃｉｆｅｒａｓｅの表現のベクトルにｓｕｂｃｌｏｎｅｄ。生じるＤＮＡの表現のベクトルはｐＧＬ２ＮｅｏＮ／Ｎで使用されるｌｕｃｉｆｅｒａｓｅの遺伝子の３’ＵＴＲに挿入される報告された低酸素症の範囲を含んでいる人間のＶＥＧＦ蛋白質の遺伝子で３’ＵＴＲを構成する。

例１５：か。ガラクトシダーゼのＨｙｇｒｏｍｙｃｉｎＢ相談制御プラスミッドの構造
制御プラスミッドを準備するため、ｐＴＫ−Ｈｙｇのプラスミッド（ＧｅｎＢａｎｋの受入番号：ＢＤのＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから得られたＵ４０３９８は）Ｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎの抵抗の相談の遺伝子および規定する要素を並べる独特な制限の場所を導入するために変更された。Ｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎこのカセットが第２プラスミッドのＳａｌＩの場所にクローンとして作られるので、ＴＫのｐｏｌｙＡ信号を含んでいるＨｙｇｒのＨＳＶ−ＴＫの促進者、遺伝子およびＨＳＶの片を並べるためにｐＧＬ２か。ガラクトシダーゼ、ＳａｌＩ及びＸｈｏＩの制限は場所選ばれた。２プライマー、ＴＫＳＦおよびＴＫＳＲはアニールされ、ＰｆｌＭＩにｌｉｇａｔｅｄｐＴＫ−Ｈｙｇ（２８７９及び２９２８にあるＰｆｌＭＩの場所）を一直線に並べた。

ＴＫＳＦ：

は大胆で、識別されるＳａｌＩの認識部位を含んでいる。

ＴＫＳＲ：

は大胆で、識別されるＳａｌＩの認識部位を含んでいる。

生じるｐＴＫ−Ｈｙｇ−ＳａｌＩのプラスミッドはＨｉｎｄＩＩＩと、一直線に並べられ、子牛の腸のホスファターゼ（ＣＩＰ）とｄｅｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄ。２プライマー、ＴＫＸＦ３

およびＴＫＸＲ３

はＨｉｎｄＩＩＩに一直線に並べたｐＴＫ−Ｈｙｇ／ＳａｌＩ（元のｐＴＫ−Ｈｙｇのベクトルの１０３７年にあるＨｉｎｄＩＩＩの場所）をアニールされ、ｌｉｇａｔｅｄ。生じるプラスミッドはｐＴＫ−Ｈｙｇ−ＳａｌＩ／ＸｈｏＩとして識別された。

ＴＫＸＦ３：

は大胆で、識別されるＸｈｏＩの認識部位を含んでいる。

ＴＫＸＲ３：

は大胆で、識別されるＸｈｏＩの認識部位を含んでいる。

ｐＧＬ２か。ガラクトシダーゼのプラスミッドを準備するためには（図３Ｂを見なさい）、ｐＳＶか。ガラクトシダーゼのベクトル（Ｐｒｏｍｅｇａ）のＨｉｎｄＩＩＩ／ＢａｍＨＩの制限のダイジェストから得られたか。
ガラクトシダーゼ相談カセット（３７３１ｂｐ）はＣＩＰ扱われるの背骨のプラスミッドおよびＡｍｐｒ、ｆ１ｏｒｉおよびＳＶ４０促進者順序含んでいるｐＧＬ２制御ベクトル（Ｐｒｏｍｅｇａ）からの〜３１０４ｂｐＨｉｎｄＩＩＩ／ＢａｍＨＩのＤＮＡの片にクローンとして作られた。

ｐＴＫ−Ｈｙｇ−ＳａｌＩ／ＸｈｏＩのプラスミッドはＳａｌＩ及びＸｈｏＩと一直線に並べられた。一直線に並べられたＨｙｇｒｏｍｙｃｉｎ相談カセットを、含んでいる〜１８４０ｂｐＳａｌＩ／ＸｈｏＩの片はｌｉｇａｔｅｄ、ＳａｌＩにｐＧＬ２か。ガラクトシダーゼのプラスミッドをｄｅｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄ。ｐＧＬ？ｇａｌ−ＴＫｈｙｇＳＸ（８６８３ｂｐ）として識別された生じる制御プラスミッド（図１７）は制限のダイジェスト及びＤＮＡの配列によって確認された。

すべてのパテント、出版された特許出願およびこの指定で参照される同じ範囲への全体の参照によってデータベースの記入項目を含む出版物の発表は、とりわけ各々のそのような個々のパテント、出版物、およびデータベースの記入項目がとりわけそしてそれぞれ参照によって組み込まれるために示されたように組み込まれる。

こうして記述されている発明それはの具体化同じが多くの方法で変わるかもしれないこと明らかである。そのような変化は芸術で巧みな１つに明らかが次の要求の規模の内に含まれているように意図されているありなさいのような及びすべての修正発明の精神そして規模からの出発とみなされるべきでない。

図１はＩＬ−１ｓｓ３’ ＵＴＲのＤＮＡ順序を示す。図２は例１でｍＲＮＡの不安定順序として使用される３０のｂｐの片を示す。図３ＡはｐＧＬ２＿Ｎｅｏ３０及びｐＧＬ２？Ｃｏｎｔｒｏｌのためのプラスミッドの図表を示す。図３ＢはｐＧＬ２か。ガラクトシダーゼのためのプラスミッドの図表を示す。図４はクローン第５３及び（ｂ）クローン第６３のための（ａ）微分の時にわたるｌｕｃｉｆｅｒａｓｅの活動のグラフを示す。図５示すｌｕｃｉｆｅｒａｓｅの半分の生命のグラフを、４およびクローン第５３及び６３のための混合物の付加がｒａｄｉｃｉｃｏｌのアナログＡ（ＲＡＡ）と扱った８時間後、アクチノマイシン行為ＤはＤは（。）そしてｃｙｃｌｏｈｅｘａｍｉｄｅ（ＣＨＸ）。図６クローン第５３（固体棒）及び６３からのｌｕｃｉｆｅｒａｓｅの活動のショーグラフはｒａｄｉｃｉｃｏｌのアナログＡ（ＲＡＡ）の様々な集中と（開いた棒）扱った。図７画一的な、区別されたクローン第５３および（開いた棒）１？ＭのｒａｄｉｃｉｃｏｌのアナログＡ（ＲＡＡ）の８時間の処置のクローン第６３のための（固体棒）ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅの活動のショーグラフ。図８ショーｒａｄｉｃｉｃｏｌのアナログＡ（ＲＡＡの８時間の処置の後の区別されたクローン第６３のｌｕｃｉｆｅｒａｓｅの活動の集中の依存した阻止のグラフ）。図９はＤＮＡの構造物が人間のＡＰＰ３’ＵＴＲから得たョー。図１０はＤＮＡの構造物が人間のｂｃｌ−２．ａ長い３’ＵＴＲから得たョー。図１１はシＤＮＡの構造物が人間のｂｃｌ−２．ａ短い３’ＵＴＲから得たョー。ＤＮＡの構造物が人間のｃ−ｍｙｃ３’ＵＴＲから得た図１２ショー。ＤＮＡの構造物が人間のＴＮＦａ３’ＵＴＲから得た図１３ショー。ＤＮＡの構造物が人間のＩＬ１ｂ３’ＵＴＲから得た図１４ショー。ＤＮＡの構造物が人間のＶＥＧＦ３’ＵＴＲから得た図１５ショー。ＤＮＡの構造物が人間のＶＥＧＦの低酸素症の範囲３’ ＵＴＲから得た図１６ショー。図１７はｐＧＬｂｇａｌ制御プラスミッドを− ＴＫｈｙｇＳＸ示す。

Claims

ＤＮＡ発現ベクターであって、
ｉ）検出可能シグナルを有する１若しくはそれ以上のタンパク質のコード配列を有する第１のＤＮＡ配列と、
ｉｉ）動作可能なように前記コード配列と結合した１若しくはそれ以上の３’ＵＴＲ配列及び１若しくはそれ以上の発現制御配列と、
ｉｉｉ）１若しくはそれ以上の天然発生遺伝子に由来する１若しくはそれ以上のｍＲＮＡ不安定配列に相当する第２のＤＮＡ配列を有する前記３’ＵＴＲ配列を挿入した異種不安定配列ＤＮＡと
を有するＤＮＡ発現ベクター。
請求項１のＤＮＡ発現ベクターにおいて、前記異種不安定配列ＤＮＡは、前記天然発生遺伝子の前記ｍＲＮＡ不安定配列に隣接する配列に相当するＤＮＡをさらに有するものである。
請求項１のＤＮＡ発現ベクターにおいて、前記異種不安定配列ＤＮＡは、約１０〜約１５００ヌクレオチドの長さである。
請求項２のＤＮＡ発現ベクターにおいて、前記異種不安定配列ＤＮＡは、前記天然発生遺伝子から得られる前記３’ＵＴＲの全体或いは実質的に一部に相当するＤＮＡを有するものである。
請求項２のＤＮＡ発現ベクターにおいて、前記異種不安定配列ＤＮＡは、前記天然発生遺伝子のコード領域からの１若しくはそれ以上のＣＲＤに相当するＤＮＡを有するものである。
請求項１のＤＮＡ発現ベクターであって、前記１若しくはそれ以上の天然発生遺伝子は、サイトカインコード化遺伝子、ケモカインコード化遺伝子、核転写因子コード化遺伝子、オキシゲナーゼコード化遺伝子、プロトオンコジーン、前初期遺伝子、細胞周期制御遺伝子、及びアポトーシスに関与した遺伝子の群から選択されるものである。
請求項１のＤＮＡ発現ベクターであって、前記１若しくはそれ以上の天然発生遺伝子は、ＡＰＰコード化遺伝子、ＶＥＧＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ｃ−ｆｏｓ、ｃ−ｍｙｃ、ｃ−ｊｕｎ、ｋｒｏｘ−２０、ｎｕｒ−７７、ｚｉｆ２６８、ｂｃｌ−２、Ｂ−ＩＦＮ、ｕＰＡ、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、Ｉｌ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＴＮＦα、ｓｙｎｌ、β２−ＡＲ、Ｅ−セレクチン、ＶＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１、Ｇｒｏ−α、Ｇｒｏ−β、ＭＩＰ−２α、Ｇｒｏ−γ、ＭＩＰ−２β、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、コラゲナーゼ、Ｐ−グリコプロテイン、ＭＤＲ、ＭＲＰｓ、Ｐγｈｌ、ｐｆｍｄｒ、ＣＯＸＩＩ、内皮リパーゼ、コレステリルエステル転送タンパク質、β−アドレナリン受容体、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＭＣＰ−１、ＭＣＰ−２、Ｂ細胞阻害アルファにおけるカッパ光ポリペプチド遺伝子エンハンサーの核因子、ＩＦＮ−γ誘導タンパク質１０ｋＤ、シクロフィリンＦ、ＩＬ−１０受容体アルファ、ＡＵＦ１、トリステトラプロリン、及びユビキチン特異的プロテアーゼ１８の群から選択されるものである。
請求項１のＤＮＡ発現ベクターを有する宿主細胞。
安定に導入された細胞株であって、
ｉ）検出可能シグナルを有する第１のタンパク質をコード化した第１のＤＮＡ配列、１若しくはそれ以上の３’ＵＴＲ配列及び前記第１のＤＮＡ配列に動作可能であるように結合した１若しくはそれ以上の発現制御配列、及び前記３’ＵＴＲ配列を挿入した異種不安定配列ＤＮＡを有するＤＮＡ発現ベクターであって、前記不安定配列ＤＮＡは１若しくはそれ以上の天然発生遺伝子由来の１若しくはそれ以上のｍＲＮＡ不安定配列に相当する第２のＤＮＡ配列を有するＤＮＡ発現ベクターと、、
ｉｉ）検出可能シグナルを有する第２のタンパク質をコード化した制御ＤＮＡ配列を有する制御ＤＮＡ発現ベクターと、操作可能であるように前記制御ＤＮＡ配列に結合した１若しくはそれ以上の３’ＵＴＲ配列及び１若しくはそれ以上の発現制御配列と
を有する安定に導入された細胞株。
ｍＲＮＡの安定性に作用する１若しくはそれ以上の化合物のスクリーニング方法であって、
ｉ）試験化合物の不在下で検出可能シグナルを有するタンパク質を発現することが可能なＤＮＡ発現ベクターを提供する工程であって、前記発現ベクター及び前記タンパク質のコードから転写されたｍＲＮＡは、異種ｍＲＮＡ不安定化配列の少なくとも１つの複製を有するものである、前記ＤＮＡ発現ベクターを提供する工程と、
ｉｉ）前記ＤＮＡ発現ベクターを少なくとも１つの試験化合物と接触させる工程であって、この工程は、試験化合物の不在下で前記ＤＮＡ発現系が検出可能シグナルを有する前記タンパク質を発現することが可能なものである前記接触させる工程と、
ｉｉｉ）前記検出可能シグナルを測定する工程と、
ｉｖ）前記測定された検出可能シグナルをコントロールと比較する工程であって、
前記コントロールとの比較において前記測定された検出可能シグナルの減少は、ｍＲＮＡの安定性が減少した化合物を示し、更に前記コントロールとの比較において前記測定された検出可能シグナルの増加は、ｍＲＮＡの安定性が増加した化合物を示すものである前記測定された検出可能シグナルをコントロールと比較する工程と
を有するスクリーニング方法。
請求項１０の方法において、前記コントロールは、前記試験化合物の不在下において前記ＤＮＡ発現ベクターからの前記検出可能シグナルを測定する工程を有するものである。
請求項１０の方法において、前記コントロールは、第２の検出可能シグナルを有する第２のタンパク質を発現することが可能なコントロール発現ベクターを前記試験化合物と接触させる工程と、前記第２の検出可能シグナルを測定する工程とを有するものである。
請求項１０の方法において、前記化合物は、該化合物のｍＲＮＡ分解誘導能力に関してスクリーニングされているものであり、前記コントロールとの比較において前記測定された検出可能シグナルの減少は、ｍＲＮＡの分解を誘導する化合物を示しているものである。
２若しくはそれ以上の化合物によって誘導されたｍＲＮＡの分解度の比較方法であって、
（ｉ）試験化合物の不在下において検出可能シグナルを有するタンパク質を発現することが可能なＤＮＡ発現ベクターを提供する工程であって、前記発現ベクター及び前記タンパク質のコードから転写された前記ｍＲＮＡは、異種ｍＲＮＡ不安定配列の少なくとも１つの複製を有するものである前記提供する工程と、
（ｉｉ）試験化合物不在の条件下において、前記ＤＮＡ発現ベクターを個別に２若しくはそれ以上の試験化合物と接触させる工程であって、前記ＤＮＡ発現系は前記検出可能シグナルを有するタンパク質の発現が可能なものである、前記接触させる工程と、
（ｉｉｉ）各試験化合物の存在下において前記検可能シグナルを測定する工程と、
（ｉｖ）前記測定された検出可能シグナルを比較する工程であって、低く測定された検出可能シグナルはｍＲＮＡのより大きな分解度を示すものである前記比較する工程と
を有する比較方法。
不安定化ｍＲＮＡの化合物をスクリーニングする定量法であって、
（ｉ）検出可能シグナルを有する第１のタンパク質をコード化した第１のＤＮＡ配列と、操作可能であるように前記ＤＮＡ配列及び結合した１若しくはそれ以上の３’ＵＴＲ配列及び１若しくはそれ以上の発現制御配列と、前記３’ＵＴＲ配列に挿入された異種不安定配列ＤＮＡを有するＤＮＡ発現ベクターとであって、前記不安定配列ＤＮＡは１若しくはそれ以上の天然発生遺伝子から誘導される１若しくはそれ以上のｍＲＮＡ不安定配列に相当する第２のＤＮＡ配列を有するものである、前記ＤＮＡ発現ベクターと、
（ｉｉ）検出可能シグナルを有する制御タンパク質をコード化した制御ＤＮＡ配列と、１若しくはそれ以上の３’ＵＴＲ配列及び操作可能であるように前記制御ＤＮＡ配列と結合した１若しくはそれ以上の発現制御配列とを有する制御ＤＮＡ発現ベクターと、
を有する測定系。
請求項１５の測定系において、前記ＤＮＡ発現ベクター及び前記制御ＤＮＡ発現ベクターは、安定に導入された異なる細胞株において提供されるものである。
請求項１５の測定系において、前記ＤＮＡ発現ベクター及び前記制御ＤＮＡ発現ベクターは、安定に導入された同じ細胞株において提供されるものである。
ｍＲＮＡの安定性に影響を及ぼす化合物を同定するために化合物のライブラリーをスクリーニングする高度スループット方法であって、
（ｉ）試験化合物の不在下において検出可能シグナルを有するタンパク質を発現することが可能なＤＮＡ発現ベクターを有する安定に導入された細胞株を提供する工程であって、前記発現ベクター及び善意タンパク質のコードから転写された前記ｍＲＮＡは異種ｍＲＮＡ不安定配列の少なくとも１つの複製を有するものである、前記提供する工程と、
（ｉｉ）前記細胞株と成長培地とを含む１若しくはそれ以上の多ウェルプレートのウェルを播種する工程と、
（ｉｉｉ）前記細胞株の細胞が成長し、検出可能シグナルを有する前記タンパク質を発現することが可能である条件下において、１若しくはそれ以上の前記多ウェルプレートを維持する工程と、
（ｉｖ）前記細胞を１若しくはそれ以上の試験化合物と接触させる工程と、
（ｖ）前記検出可能シグナルを測定する工程と、更に
（ｖｉ）前記測定可能シグナルをコントロールと比較する工程であって、
前記コントロールとの比較において前記測定された検出可能シグナルの減少は、ｍＲＮＡの安定性が減少した化合物を示し、前記コントロールとの比較において前記測定された検出可能シグナルの増加は、ｍＲＮＡの安定性が増加した化合物を示すものである、前記比較する工程と
を有する高度スループット方法。
不安定化ｍＲＮＡの化合物をスクリーニングする測定系を含むキットであって、
（ｉ）検出可能シグナルを有するタンパク質をコード化した第１のＤＮＡ配列と、操作可能であるように前記第１のＤＮＡ配列と結合した１若しくはそれ以上の３’ＵＴＲ配列及び１若しくはそれ以上の発現制御配列と、３’ＵＴＲ配列に挿入された異種不安定配列ＤＮＡとを有する１若しくはそれ以上のＤＮＡ発現ベクターであって、前記不安定配列ＤＮＡは１若しくはそれ以上の天然発生遺伝子由来の１若しくはそれ以上のｍＲＮＡ不安定化配列に相当する第２のＤＮＡ配列を有するものである、前記１若しくはそれ以上のＤＮＡ発現ベクターと、
（ｉｉ）検出可能シグナルを有する第２のタンパク質をコード化した制御ＤＮＡ配列と、操作可能であるように前記制御ＤＮＡ配列と結合した１若しくはそれ以上の３’ＵＴＲ配列及び１若しくはそれ以上の発現制御配列とを有する制御ＤＮＡ発現ベクターと、選択的に、
（ｉｉｉ）使用方法説明書と
を有するキット。
請求項１９のキットであって、このキットは、更に
１若しくはそれ以上の細胞株を有するものである。
請求項１９のキットであって、前記ＤＮＡ発現ベクター及び前記制御ＤＮＡ発現ベクターは、安定に導入された異なる細胞株において提供されるものである。
請求項１９のキットにおいて、前記ＤＮＡ発現ベクター及び前記制御ＤＮＡ発現ベクターは、安定に導入された同じ細胞株において提供されるものである。