JP2007524360A5

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Publication number: JP2007524360A5
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Filing date: 2004-02-09
Publication date: 2009-09-03

Description

核酸配列をコードするヒトＮＥＬＬ１ｃＤＮＡ（配列番号１）である。核酸配列をコードするヒトＮＥＬＬ１ｃＤＮＡ（配列番号１）である。核酸配列をコードするヒトＮＥＬＬ１ｃＤＮＡ（配列番号１）である。核酸配列をコードするヒトＮＥＬＬ１ｃＤＮＡ（配列番号１）である。アミノ酸配列をコードするヒトＮＥＬＬ１（配列番号２）である。アミノ酸配列をコードするヒトＮＥＬＬ１（配列番号２）である。核酸配列をコードするラットＮＥＬＬ１ｃＤＮＡ（配列番号３）である。核酸配列をコードするラットＮＥＬＬ１ｃＤＮＡ（配列番号３）である。核酸配列をコードするラットＮＥＬＬ１ｃＤＮＡ（配列番号３）である。核酸配列をコードするラットＮＥＬＬ１ｃＤＮＡ（配列番号３）である。アミノ酸配列をコードするラットＮＥＬＬ１（配列番号４）である。アミノ酸配列をコードするラットＮＥＬＬ１（配列番号４）である。核酸配列をコードするマウスＮＥＬＬ１ｃＤＮＡ（配列番号５）である。核酸配列をコードするマウスＮＥＬＬ１ｃＤＮＡ（配列番号５）である。核酸配列をコードするマウスＮＥＬＬ１ｃＤＮＡ（配列番号５）である。アミノ酸配列をコードするマウスＮＥＬＬ１（配列番号６）である。アミノ酸配列をコードするマウスＮＥＬＬ１（配列番号６）である。アミノ酸配列をコードするマウスＮＥＬＬ１（配列番号６）である。核酸配列をコードするヒトＮＥＬＬ２ｃＤＮＡ（配列番号７）である。核酸配列をコードするヒトＮＥＬＬ２ｃＤＮＡ（配列番号７）である。核酸配列をコードするヒトＮＥＬＬ２ｃＤＮＡ（配列番号７）である。核酸配列をコードするヒトＮＥＬＬ２ｃＤＮＡ（配列番号７）である。アミノ酸配列をコードするヒトＮＥＬＬ２（配列番号８）である。アミノ酸配列をコードするヒトＮＥＬＬ２（配列番号８）である。核酸配列をコードするラットＮＥＬＬ２ｃＤＮＡ（配列番号９）である。核酸配列をコードするラットＮＥＬＬ２ｃＤＮＡ（配列番号９）である。核酸配列をコードするラットＮＥＬＬ２ｃＤＮＡ（配列番号９）である。核酸配列をコードするラットＮＥＬＬ２ｃＤＮＡ（配列番号９）である。アミノ酸配列をコードするラットＮＥＬＬ２（配列番号１０）である。アミノ酸配列をコードするラットＮＥＬＬ２（配列番号１０）である。核酸配列をコードするマウスＮＥＬＬ２ｃＤＮＡ（配列番号１１）である。核酸配列をコードするマウスＮＥＬＬ２ｃＤＮＡ（配列番号１１）である。核酸配列をコードするマウスＮＥＬＬ２ｃＤＮＡ（配列番号１１）である。核酸配列をコードするマウスＮＥＬＬ２ｃＤＮＡ（配列番号１１）である。アミノ酸配列をコードするマウスＮＥＬＬ２（配列番号１２）である。アミノ酸配列をコードするマウスＮＥＬＬ２（配列番号１２）である。核酸配列をコードするニワトリＮＥＬＬ２（配列番号１３）である。核酸配列をコードするニワトリＮＥＬＬ２（配列番号１３）である。核酸配列をコードするニワトリＮＥＬＬ２（配列番号１３）である。核酸配列をコードするニワトリＮＥＬＬ２（配列番号１３）である。アミノ酸配列をコードするニワトリＮＥＬＬ２（配列番号１４）である。アミノ酸配列をコードするニワトリＮＥＬＬ２（配列番号１４）である。機能的ＮＥＬＬペプチドを産生させる方法の１つのフローチャートである。機能的ＮＥＬＬペプチドを産生させる方法の１つのフローチャートである。シグナルペプチド−ＮＥＬＬ１−ＦＬＡＧの核酸構築物（配列番号１５）の説明である。下線のアミノ酸配列はメリチンのシグナルペプチドに由来する。アラニンとプロリンとの間の結合は、ハイファイブ細胞による分泌のための推定上の切断部位である。ＲＴＶＬＧＦＧの残基（配列番号１６の３８〜４４残基）は、ラット／ヒトＮＥＬＬ１タンパク質の成熟タンパク質に由来する。シグナルペプチド−ＮＥＬＬ１−ＦＬＡＧの核酸構築物（配列番号１５）の説明である。シグナルペプチド−ＮＥＬＬ１−ＦＬＡＧの核酸構築物（配列番号１５）の説明である。シグナルペプチド−ＮＥＬＬ１−ＦＬＡＧの核酸構築物（配列番号１５）の説明である。ＮＥＬＬ１−ＦＬＡＧの細胞外発現の生成物の説明である。図１７Ａは、無血清培地においてハイファイブ細胞により産生された精製ＮＥＬＬ１ペプチド（生産性：３ｍｇ／Ｌ培地）を含有するＵｎｏＱ溶出物のＣＢＢ染色したＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルである。図１７Ｂは、抗ＦＬＡＧ抗体を用いたウエスタンブロットである。ＮＥＬＬ１−ＦＬＡＧの細胞外発現の生成物の説明である。図１７Ｃは、無血清培地においてＣＯＳ７細胞により産生された精製ＮＥＬＬ１ペプチド（生産性：＜０．１ｍｇ／Ｌ培地）を含有するＵｎｏＱ溶出物のＣＢＢ染色したＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルである。図１７Ｄは、抗ＦＬＡＧ抗体を用いたウエスタンブロットである。無血清培地における昆虫細胞によるＮＥＬＬ２−ＦＬＡＧペプチドの細胞外の発現を説明するウエスタンブロットである。２種類の無血清培地（ファイブＳＦＭ及びＥＳＦ９２１における発現）におけるハイファイブ細胞によるＮＥＬＬ−１及びＮＥＬＬ２−ＦＬＡＧペプチドの細胞外の発現を説明するウエスタンブロットである。ＮＥＬＬ−１（１ｎｇ、１０ｎｇ、１００ｎｇ／ｍＬ）及びＢＭＰ４（１００ｎｇ／ｍＬ）に暴露したラット胎児の頭蓋冠細胞におけるアルカリホスファターゼの誘導を示す棒グラフである。ＮＥＬＬ１（Ａ及びＢ：５ｎｇ／ｍＬ；Ｃ及びＤ：５０ｎｇ／ｍＬ）で処理した骨芽細胞の顕微鏡写真である。アスコルビン酸非存在下で微小小体を形成するＮＥＬＬ１ＭＣ３Ｔ３微小小体の顕微鏡写真である。Ｂはアルカリホスファターゼの染色である。Ａ〜Ｃは、（Ａ）抗ＮＥＬＬ、（Ｂ）β−Ｇａｌ及び（Ｃ）ＮＥＬＬアデノウイルス構築物における石灰化を示す顕微鏡写真である。Ｄ及びＥは各群のオステオカルシン及びオステオポニンの経時的レベルを表す棒グラフである。は、頭蓋冠の過剰増殖を示す石灰化を表すように染色されたＮＥＬＬ１を過剰発現するトランスジェニックマウスの顕微鏡写真である。（Ａ）ＮＥＬＬ１過剰発現のトランスジェニックマウス及び（Ｂ）正常な同腹仔において石灰化について染色された頭蓋冠の顕微鏡写真である。（Ａ）Ｃｂｆａ１で処理した又は（Ｂ）対照のラット胎児の頭蓋冠細胞においてＮＥＬＬ１遺伝子の発現を示す逆転写ポリメラーゼ鎖反応のブロットである。（Ａ）野生型、（Ｂ）Ｃｂｆａ１^＋／−、及び（Ｃ）Ｃｂｆａ１^＋／−＋ＮＥＬＬ１^過剰発現のマウスの頭蓋(上）、鎖骨（中）の骨格染色及び頭蓋のマイクロＣＴの写真である。（Ａ）ＢＭＰ処理した、及び（Ｂ）ＮＥＬＬ１処理した頭蓋冠欠損の処理(右）及び対照（左）のマイクロＣＴの写真である。頭蓋冠欠損におけるＮＥＬＬ１処理（右）及びＢＭＰ処理（左）のマイクロＣＴの写真である。口蓋欠損におけるＮＥＬＬ１処理（左）及び対照（右）のマイクロＣＴの写真である。（Ａ）ＮＥＬＬ１^過剰発現のマウス及び（Ｂ）野生型マウスにおけるＴＵＮＥＬ染色した軟骨組織の顕微鏡写真である。選択された位置において骨を形成するために患者を治療する方法の１つのフローチャートである。Ａはインプラントの実施態様の１つを模式的に表し、Ｂは、選択された位置において骨を形成するために患者を治療する実施態様の１つを模式的に表す。

Claims

昆虫細胞において機能的ペプチドを発現する方法であって、
昆虫の分泌型シグナルペプチドをコードする核酸と共に少なくともＮＥＬＬ１ペプチドをコードする少なくとも核酸をフレーム内に包含する核酸構築物を提供すること；
前記核酸構築物により昆虫細胞に形質移入を行なうこと；
ＮＥＬＬ１ペプチドを発現できるような条件下で前記昆虫細胞を培養すること；
任意選択で、細胞株から分泌されたＮＥＬＬ１ペプチドを回収すること；
任意選択で、ＮＥＬＬ１ペプチドを実質的に精製すること；及び
任意選択で、ＮＥＬＬ１ペプチドの活性を調べること、
を含む方法。
前記昆虫細胞がハイファイブ細胞である請求項１の方法。
前記昆虫の分泌型シグナルペプチドがメリチンのシグナル配列である請求項１の方法。
ＮＥＬＬ１をコードする核酸が、配列番号１、配列番号３又は配列番号５を含む群から選択される請求項１の方法。
ＮＥＬＬ１ペプチドが、配列番号２、配列番号４又は配列番号６を含む群から選択される請求項１の方法。
昆虫細胞においてＮＥＬＬ１ペプチドを発現するための核酸構築物であって、昆虫の分泌型シグナルペプチドをコードする核酸と共に少なくともＮＥＬＬ１ペプチドをコードする少なくとも核酸をフレーム内に含む核酸構築物。
前記昆虫の分泌型シグナルペプチドがメリチンのシグナル配列である請求項６の核酸。
ＮＥＬＬ１をコードする核酸が、配列番号１、配列番号３又は配列番号５を含む群から選択される請求項６の核酸。
ＮＥＬＬ１ペプチドが、配列番号２、配列番号４又は配列番号６を含む群から選択される請求項６の核酸。
機能的ＮＥＬＬ１ペプチドを発現する細胞株であって、昆虫の分泌型シグナルペプチドをコードする核酸と共に少なくともＮＥＬＬ１ペプチドをコードする少なくとも核酸をフレーム内に含む核酸構築物を包含する前記細胞株。
前記細胞が昆虫細胞である請求項１０の細胞。
前記細胞がハイファイブ細胞である請求項１１の細胞。
前記細胞がＮＥＬＬ１ペプチドを分泌する請求項１０の細胞。
前記分泌型シグナルペプチドがメリチンのシグナル配列である請求項１０の細胞。
ＮＥＬＬ１をコードする核酸が、配列番号１、配列番号３又は配列番号５を含む群から選択される請求項１０の細胞。
ＮＥＬＬ１ペプチドが、配列番号２、配列番号４又は配列番号６を含む群から選択される請求項１０の細胞。
ＮＥＬＬ１ペプチド及び昆虫の分泌型シグナルペプチドを含むポリペプチド。
ＮＥＬＬ１ペプチドが、配列番号２、配列番号４又は配列番号６を含む群から選択される請求項１７のポリペプチド。
前記分泌型シグナルペプチドがメリチンのシグナル配列である請求項１７のポリペプチド。
哺乳類細胞において機能的ペプチドを発現する方法であって、
分泌型シグナルペプチドをコードする核酸と共に少なくともＮＥＬＬ１ペプチドをコードする少なくとも核酸をフレーム内に包含する核酸構築物を提供すること；
前記核酸構築物により哺乳類細胞に形質移入を行なうこと；
ＮＥＬＬ１ペプチドを発現できるような条件下で前記哺乳類細胞を培養すること；
任意選択で、細胞株から分泌されたＮＥＬＬ１ペプチドを回収すること；
任意選択で、ＮＥＬＬ１ペプチドを実質的に精製すること；及び
任意選択で、骨形成を誘導するＮＥＬＬ１ペプチドの活性を調べること、
を含む方法。
前記哺乳類細胞がＣＯＳ７細胞である請求項２０の方法。
前記哺乳類の分泌型シグナルペプチドがＮＥＬＬペプチドのシグナル配列である請求項２０の方法。
ＮＥＬＬ１をコードする核酸が、配列番号１、配列番号３又は配列番号５を含む群から選択される請求項２０の方法。
ＮＥＬＬ１ペプチドが、配列番号２、配列番号４又は配列番号６を含む群から選択される請求項２０の方法。
哺乳類細胞においてＮＥＬＬ１ペプチドを発現するための核酸構築物であって、分泌型シグナルペプチドをコードする核酸と共に少なくともＮＥＬＬ１ペプチドをコードする少なくとも核酸をフレーム内に含む前記核酸構築物。
前記哺乳類の分泌型シグナルペプチドがＮＥＬＬペプチドのシグナル配列である請求項２５の核酸。
ＮＥＬＬ１をコードする核酸が、配列番号１、配列番号３又は配列番号５を含む群から選択される請求項２５の核酸。
ＮＥＬＬ１ペプチドが、配列番号２、配列番号４又は配列番号６を含む群から選択される請求項２５の核酸。
機能的ＮＥＬＬ１ペプチドを発現する細胞株であって、分泌型シグナルペプチドをコードする核酸と共に少なくともＮＥＬＬ１ペプチドをコードする少なくとも核酸をフレーム内に含む核酸構築物を包含する細胞株。
前記細胞が哺乳類細胞である請求項２９の細胞。
前記細胞がＣＯＳ７細胞である請求項３０の細胞。
前記細胞がＮＥＬＬ１ペプチドを分泌する請求項２９の細胞。
前記分泌型シグナルペプチドがＮＥＬＬペプチドのシグナル配列である請求項２９の細胞。
ＮＥＬＬ１をコードする核酸が、配列番号１、配列番号３又は配列番号５を含む群から選択される請求項２９の細胞。
ＮＥＬＬ１ペプチドが、配列番号２、配列番号４又は配列番号６を含む群から選択される請求項２９の細胞。
ＮＥＬＬ１ペプチド及び分泌型シグナルペプチドを含むポリペプチド。
ＮＥＬＬ１ペプチドが、配列番号２、配列番号４又は配列番号６を含む群から選択される請求項３６のポリペプチド。
前記分泌型シグナルペプチドがＮＥＬＬペプチドのシグナル配列である請求項３６のポリペプチド。
昆虫細胞において機能的ペプチドを発現する方法であって、
少なくともＮＥＬＬ２ペプチド及び昆虫の分泌型シグナルペプチドををコードする少なくとも核酸をＮＥＬＬ２ペプチドのフレーム内に包含する核酸構築物を提供すること；
前記核酸構築物により昆虫細胞に形質移入を行なうこと；
ＮＥＬＬ２ペプチドを発現できるような条件下で前記昆虫細胞を培養すること；
任意選択で、細胞株から分泌されたＮＥＬＬ２ペプチドを回収すること；
任意選択で、ＮＥＬＬ２ペプチドを実質的に精製すること；及び
任意選択で、ＮＥＬＬ２ペプチドの活性を調べること、
を含む方法。
前記昆虫細胞がハイファイブ細胞である請求項３９の方法。
前記昆虫の分泌型シグナルペプチドがメリチンのシグナル配列である請求項３９の方法。
ＮＥＬＬ２をコードする核酸が、配列番号７、配列番号９、配列番号１１又は配列番号１３を含む群から選択される請求項３９の方法。
ＮＥＬＬ２ペプチドが、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２又は配列番号１４を含む群から選択される請求項３９の方法。
昆虫細胞においてＮＥＬＬ２ペプチドを発現するための核酸構築物であって、昆虫の分泌型シグナルペプチドをコードする核酸と共に少なくともＮＥＬＬ２ペプチドをコードする少なくとも核酸をフレーム内に含む前記核酸構築物。
前記昆虫の分泌型シグナルペプチドがメリチンのシグナル配列である請求項４４の核酸。
ＮＥＬＬ２をコードする核酸が、配列番号７、配列番号９、配列番号１１又は配列番号１３を含む群から選択される請求項４４の核酸。
ＮＥＬＬ２ペプチドが、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２又は配列番号１４を含む群から選択される請求項４４の核酸。
機能的ＮＥＬＬ２ペプチドを発現する細胞株であって、昆虫の分泌型シグナルペプチドをコードする核酸と共に少なくともＮＥＬＬ２ペプチドをコードする少なくとも核酸をフレーム内に含む核酸構築物を包含する前記細胞株。
前記細胞が昆虫細胞である請求項４８の細胞。
前記細胞がハイファイブ細胞である請求項４９の細胞。
前記細胞がＮＥＬＬ２ペプチドを分泌する請求項４８の細胞。
前記分泌型シグナルペプチドがメリチンのシグナル配列である請求項４８の細胞。
ＮＥＬＬ２をコードする核酸が、配列番号７、配列番号９、配列番号１１又は配列番号１３を含む群から選択される請求項４８の細胞。
ＮＥＬＬ２ペプチドが、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２又は配列番号１４を含む群から選択される請求項４８の細胞。
ＮＥＬＬ２ペプチド及び昆虫の分泌型シグナルペプチドを含むポリペプチド。
ＮＥＬＬ２ペプチドが、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２又は配列番号１４を含む群から選択される請求項５５のポリペプチド。
前記分泌型シグナルペプチドがメリチンのシグナル配列である請求項５５のポリペプチド。
哺乳類細胞において機能的ペプチドを発現する方法であって、
少なくともＮＥＬＬ２ペプチドをコードする少なくとも核酸及び分泌型シグナルペプチドをコードする核酸をＮＥＬＬ２ペプチドのフレーム内に包含する核酸構築物を提供すること；
前記核酸構築物により哺乳類細胞に形質移入を行なうこと；
ＮＥＬＬ２ペプチドを発現できるような条件下で前記哺乳類細胞を培養すること；
任意選択で、細胞株から分泌されたＮＥＬＬ２ペプチドを回収すること；
任意選択で、ＮＥＬＬ２ペプチドを実質的に精製すること；及び
任意選択で、神経細胞の生き残りを促進するＮＥＬＬ２ペプチドの活性を調べること、を含む方法。
前記哺乳類細胞がＣＯＳ７細胞である請求項５８の方法。
前記哺乳類の分泌型シグナルペプチドがＮＥＬＬペプチドのシグナル配列である請求項５８の方法。
ＮＥＬＬ２をコードする核酸が、配列番号７、配列番号９、配列番号１１又は配列番号１３を含む群から選択される請求項５８の方法。
ＮＥＬＬ２ペプチドが、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２又は配列番号１４を含む群から選択される請求項５８の方法。
哺乳類細胞においてＮＥＬＬ２ペプチドを発現するための核酸構築物であって、分泌型シグナルペプチドをコードする核酸と共に少なくともＮＥＬＬ２ペプチドをコードする少なくとも核酸をフレーム内に含む前記核酸構築物。
前記哺乳類の分泌型シグナルペプチドがＮＥＬＬペプチドのシグナル配列である請求項６３の核酸。
ＮＥＬＬ２をコードする核酸が、配列番号７、配列番号９、配列番号１１又は配列番号１３を含む群から選択される請求項６３の核酸。
ＮＥＬＬ２ペプチドが、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２又は配列番号１４を含む群から選択される請求項６３の核酸。
機能的ＮＥＬＬ２ペプチドを発現する細胞株であって、分泌型シグナルペプチドをコードする核酸と共に少なくともＮＥＬＬ２ペプチドをコードする少なくとも核酸をフレーム内に含む核酸構築物を包含する前記細胞株。
前記細胞が哺乳類細胞である請求項６７の細胞。
前記細胞がＣＯＳ７細胞である請求項６８の細胞。
前記細胞がＮＥＬＬ２ペプチドを分泌する請求項６７の細胞。
前記分泌型シグナルペプチドがＮＥＬＬペプチドのシグナル配列である請求項６７の細胞。
ＮＥＬＬ２ペプチドをコードする核酸が、配列番号７、配列番号９、配列番号１１又は配列番号１３を含む群から選択される請求項６７の細胞。
ＮＥＬＬ２ペプチドが、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２又は配列番号１４を含む群から選択される請求項６７の細胞。
骨形成細胞の分化を増大させる方法であって、
骨形成細胞においてＮＥＬＬ１遺伝子産物の濃度を高めること；
任意選択で、第２の骨形成剤を添加すること；及び
骨芽細胞分化の細胞性マーカーの発現を誘導すること、
を含む方法。
ＮＥＬＬ１遺伝子産物の濃度を高めることが、骨形成細胞にＮＥＬＬ１ペプチドを適用することを含む請求項７４の方法。
ＮＥＬＬ１ペプチドが、配列番号２、配列番号４又は配列番号６を含む群から選択される請求項７４の方法。
ＮＥＬＬ１遺伝子産物の濃度を高めることが、内因性ＮＥＬＬ１遺伝子の発現を誘導することを含む請求項７４の方法。
ＮＥＬＬ１遺伝子産物の濃度を高めることが、Ｃｂｆａ１の細胞性レベルを高めることを含む請求項７７の方法。
ＮＥＬＬ１遺伝子産物の濃度を高めることが、ＮＥＬＬ１ペプチドをコードする核酸構築物により骨形成細胞に形質移入することを含む請求項７４の方法。
ＮＥＬＬ１ペプチドをコードする核酸構築物が、群：配列番号１、配列番号３又は配列番号５から選択される少なくとも１つを含む請求項７４の方法。
骨形成細胞が、骨芽細胞、間葉細胞、線維芽細胞、胎児性胚細胞、幹細胞(単数）、骨
髄細胞、硬膜細胞、軟骨細胞、軟骨芽細胞、一次頭蓋冠細胞、幹細胞（複数）、脂肪幹細胞を含む群から選択される請求項７４の方法。
第２の骨形成ペプチドが、ＴＧＦ−β、ＢＭＰ２、ＢＭＰ４、ＢＭＰ７、ｂＦＧＦ、コラーゲンを含む群から選択される請求項７４の方法。
骨芽細胞分化の誘導される細胞性マーカーが、アルカリホスファターゼ活性、オステオカルシンｍＲＮＡの発現、オステオポニンｍＲＮＡの発現、デコリンの発現及びラミニンＢの発現を含む群から選択される請求項７４の方法。
骨芽細胞の石灰化を高める方法であって、
骨形成細胞においてＮＥＬＬ１遺伝子産物の濃度を高めること；
任意選択で、骨形成細胞に作用剤を適用すること；及び
石灰化の細胞性マーカーの発現を誘導すること、
を含む方法。
ＮＥＬＬ１遺伝子産物の濃度を高めることが、骨形成細胞にＮＥＬＬ１ペプチドを適用することを含む請求項８４の方法。
ＮＥＬＬ１ペプチドが、配列番号２、配列番号４又は配列番号６を含む群から選択される請求項８４の方法。
ＮＥＬＬ１遺伝子産物の濃度を高めることが、内因性ＮＥＬＬ１遺伝子の発現を誘導することを含む請求項８４の方法。
ＮＥＬＬ１遺伝子産物の濃度を高めることが、Ｃｂｆａ１の細胞性レベルを高めることを含む請求項８７の方法。
ＮＥＬＬ１遺伝子産物の濃度を高めることが、ＮＥＬＬペプチドをコードする核酸構築物により骨形成細胞に形質移入することを含む請求項８４の方法。
ＮＥＬＬ１をコードする核酸構築物が、群：配列番号１、配列番号３又は配列番号５から選択される少なくとも１つを含む請求項８４の方法。
骨形成細胞が、骨芽細胞、間葉細胞、線維芽細胞、胎児性胚細胞、幹細胞（単数）、骨髄細胞、硬膜細胞、軟骨細胞、軟骨芽細胞、一次頭蓋冠細胞、幹細胞(複数）、脂肪幹細
胞を含む群から選択される請求項８４の方法。
第２の骨形成剤が、ＴＧＦ−β、ＢＭＰ２、ＢＭＰ４、ＢＭＰ７、ｂＦＧＦ、コラーゲンを含む群から選択される請求項８４の方法。
石灰化の誘導される細胞性マーカーがカルシウムの取り込みを含む群から選択される請求項８４の方法。
膜内骨形成を増大させる方法であって、
骨形成が所望される領域におけるＮＥＬＬ１遺伝子産物の濃度を高めること；
任意選択で、骨形成が所望されるほぼ同一領域に第２の作用剤を適用すること；及び
膜内骨形成の形成を誘導すること、
を含む方法。
ＮＥＬＬ１遺伝子産物の濃度を高めることが、骨形成が所望される領域にＮＥＬＬ１ペプチドを適用することを含む請求項９４の方法。
ＮＥＬＬ１ペプチドが、配列番号２、配列番号４又は配列番号６を含む群から選択される請求項９４の方法。
ＮＥＬＬ１遺伝子産物の濃度を高めることが、内因性ＮＥＬＬ１遺伝子の発現を誘導することを含む請求項９４の方法。
ＮＥＬＬ１遺伝子産物の濃度を高めることが、ＮＥＬＬペプチドをコードする核酸構築物により細胞に形質移入すること、及び該細胞を骨形成が所望される領域の近傍に適用することを含む請求項９４の方法。
ＮＥＬＬ１をコードする核酸構築物が、群：配列番号１、配列番号３又は配列番号５から選択される少なくとも１つを含む請求項９４の方法。
作用剤が、ＴＧＦ−β、ＢＭＰ２、ＢＭＰ４、ＢＭＰ７、ｂＦＧＦ、コラーゲン、骨、基質、靭帯基質、腱基質、骨形成細胞又は骨芽細胞を含む群から選択される請求項９４の方法。
膜内骨の形成が、ＣＴ、遺伝子発現、組織学、機械的試験によって評価される請求項９４の方法。
軟骨内の骨形成を増大させる方法であって、
骨形成、及び／又は骨の治癒又は骨の再生が所望される領域でＮＥＬＬ１遺伝子産物の濃度を高めること；
任意選択で、骨形成が所望される領域に作用剤を適用すること；及び
骨形成が所望される領域で少なくとも軟骨芽細胞の肥大を誘導すること、
を含む方法。
骨形成が骨の治癒又は骨の再生を含む請求項１０２の方法。
ＮＥＬＬ１遺伝子産物の濃度を高めることが、骨形成が所望される領域にＮＥＬＬ１ペプチドを適用することを含む請求項１０２の方法。
ＮＥＬＬ１ペプチドが、配列番号２、配列番号４又は配列番号６を含む群から選択される請求項１０２の方法。
ＮＥＬＬ１遺伝子産物の濃度を高めることが、内因性ＮＥＬＬ１遺伝子の発現を誘導することを含む請求項１０２の方法。
ＮＥＬＬ１遺伝子産物の濃度を高めることが、ＮＥＬＬペプチドをコードする核酸構築物により細胞に形質移入すること、及び該細胞を骨形成が所望される領域の近傍に適用することを含む請求項１０２の方法。
ＮＥＬＬ１ペプチドをコードする核酸構築物が、群：配列番号１、配列番号３又は配列番号５から選択される少なくとも１つを含む請求項１０７の方法。
ＮＥＬＬ１ペプチドが、配列番号２、配列番号４又は配列番号６を含む群から選択される請求項１０７の方法。
作用剤が、ＴＧＦ−β、ＢＭＰ２、ＢＭＰ４、ＢＭＰ７、ｂＦＧＦ、コラーゲン、骨、基質、靭帯基質、腱基質、骨形成細胞又は骨芽細胞を含む群から選択される請求項１０２の方法。
軟骨芽細胞の肥大を誘導することがアポトーシスの軟骨芽細胞の増加を起こす請求項１０２の方法。
椎骨の近傍で骨形成を増大させる方法であって
脊椎固定が所望される椎骨の最も近くでのＮＥＬＬ１遺伝子産物の濃度を高めること；任意選択で、脊椎固定が所望される椎骨の最も近くに追加の活性剤を適用すること；及び
脊椎固定が所望される領域で軟骨芽細胞の肥大又は骨芽細胞の分化を誘導すること、
を含む方法。
骨芽細胞の分化を増大させることをさらに含む請求項１１２の方法。
骨芽細胞の石灰化を増大させることをさらに含む請求項１１２の方法。
膜の骨形成を誘導することをさらに含む請求項１１２の方法。
ＮＥＬＬ１遺伝子産物の濃度を高めることが、脊椎固定が所望される領域にＮＥＬＬ１ペプチドを適用することを含む請求項１１２の方法。
ＮＥＬＬ１ペプチドが、配列番号２、配列番号４又は配列番号６を含む群から選択される請求項１１２の方法。
ＮＥＬＬ１遺伝子産物の濃度を高めることが、内因性ＮＥＬＬ１遺伝子の発現を誘導することを含む請求項１１２の方法。
ＮＥＬＬ１遺伝子産物の濃度を高めることが、ＮＥＬＬペプチドをコードする核酸構築物により細胞に形質移入すること、及び該細胞を脊椎固定が所望される領域の近傍に適用することを含む請求項１１２の方法。
ＮＥＬＬ１をコードする核酸構築物が、群：配列番号１、配列番号３又は配列番号５から選択される少なくとも１つを含む請求項１１９の方法。
ＮＥＬＬ１ペプチドが、配列番号２、配列番号４又は配列番号６を含む群から選択される請求項１１９の方法。
作用剤が、ＴＧＦ−β、ＢＭＰ２、ＢＭＰ４、ＢＭＰ７、ｂＦＧＦ、コラーゲン、骨、基質、靭帯基質、腱基質、骨形成細胞又は骨芽細胞を含む群から選択される請求項１１２の方法。
骨形成を誘導するための組成物であって、
ＮＥＬＬ１ペプチド、及びＮＥＬＬ１ペプチドの発現を変化させる作用剤、又はＮＥＬＬ１ペプチドの活性を変化させる作用剤を含む群から選択される、骨形成を誘導するための、有効量の第１の作用剤、並びに任意選択でキャリアを含む組成物。
ＮＥＬＬ１ペプチドが、配列番号２、配列番号４又は配列番号６を含む群から選択される請求項１２３の組成物。
作用剤が、ＴＧＦ−β、ＢＭＰ２、ＢＭＰ４、ＢＭＰ７、ｂＦＧＦ、コラーゲンを含む群から選択される請求項１２３の組成物。
作用剤が、骨基質、腱基質又は靭帯基質、骨形成細胞又は骨芽細胞を含む群から選択される請求項１２３の組成物。
前記キャリアが酵素的メカニズム又は加水分解のメカニズムで分解可能である請求項１２３の組成物。
前記キャリアが、ポリ（Ｌ−ラクチド）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）、ポリグリコリド、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、ポリ（カプロラクトン）、ポリ（トリメチレンカーボネート）、ポリ（ｐ−ジオキサノン）、ポリ（カプロラクトン−コ−グリコリド）、ポリ（グリコリド−コ−トリメチレンカーボネート）ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−トリメチレンカーボネート）のようなポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリアリーレート類、ポリヒドロキシブチラート、ポリ無水物、ポリ（無水物−コ−イミド）、プロピレン−コ−フマレート類、ポリラクトン類、ポリエステル類、ポリカーボネート類、ポリアニオン系ポリマー類、ポリエステルアミド類、ポリ（アミノ酸）、ホモポリペプチド類、ポリ（ホスファゼン類）、ポリ（グラクサノン）、多糖類、及びポリ（オルソエステル類）、ポリグラチン、ポリグラチン酸、ポリアルドン酸、ポリアクリル酸、ポリアルカノエート類を含む群から選択される合成ポリマーから構成される請求項１２３の組成物。
前記キャリアが、アルキルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピル−メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース及びそれらのカチオン系塩から構成される請求項１２３の組成物。
前記キャリアが、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、アパタイト、生体活性ガラス材料、及びサンゴ由来のアパタイトを含む群から選択される合成の又は天然のバイオセラミックから構成される請求項１２３の組成物。
前記キャリアが、コラーゲン、ヒアルロナン、フィブリン、キトサン、アルギネート及びゼラチンを含む群から選択される請求項１２３の組成物。
デキストラン硫酸、コンドロイチン硫酸、硫酸ヘパリン、フカン、アルギネートを含む群から選択されるヘパリン結合剤をさらに含む請求項１２３の組成物。
前記キャリアが流動性ゲルの形態である請求項１２３の組成物。
前記キャリアが光重合性である請求項１２３の組成物。
前記キャリアが温度感受性である請求項１２３の組成物。
組成物が、コラーゲン、ゼラチン、ヒアルロン酸、アルギネート、ポリ（エチレングリコール）、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピル−メチルセルロース及びカルボキシメチルセルロースを含むアルキルセルロース（ヒドロキシアルキルセルロースを含む）、血液、フィブリン、ポリオキシエチレンオキシド、硫酸カルシウム半水化物、アパタイト類、カルボキシビニルポリマー、又はポリ（ビニルアルコール）を含む群から選択される金属イオン封鎖剤をさらに含む請求項１２３の組成物。
組成物が、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０又はプルロニックＦ−６８を含む群から選択される界面活性剤をさらに含む請求項１２３の組成物。
組成物が、グリシン、グルタミン酸塩酸塩、塩化ナトリウム、グアニジン、ヘパリン、酢酸、コハク酸、ポリソルベート、デキストラン硫酸、スクロース及びアミノ酸を含む群から選択される緩衝剤をさらに含む請求項１２３の組成物。
膜内の骨形成を増大させるために患者を治療する方法であって、骨形成を増すために選択された間隔で、有効な投与形態で、治療上有用な用量にてＮＥＬＬペプチドを投与することを含む方法。
骨形成が所望される領域に、ＴＧＦ−β、ＢＭＰ２、ＢＭＰ４、ＢＭＰ７、ｂＦＧＦ、コラーゲン、骨基質、腱基質又は靭帯基質を含む群から選択される少なくとも１種の作用剤を投与することをさらに含む請求項１３９の方法。
骨形成を誘導するために患者を治療する方法であって、哺乳類の骨形成細胞を回収すること；該骨形成細胞に接触するＮＥＬＬ１ペプチドの濃度を高めること；骨形成が所望される領域に該骨形成細胞を投与することを含む方法。
骨形成細胞に接触するＮＥＬＬ１ペプチドの発現の濃度を高めることが、ＮＥＬＬ１ペプチドを含む組成物を骨形成細胞に適用することを含む請求項１４１の方法。
骨形成細胞に接触するＮＥＬＬ１ペプチドの発現の濃度を高めることが、ＮＥＬＬ１ペプチドの内因性の発現を誘導することを含む請求項１４１の方法。
骨形成細胞に接触するＮＥＬＬ１ペプチドの発現の濃度を高めることが、ＮＥＬＬ１ペプチドをコードする核酸構築物により細胞に形質移入することを含む請求項１４１の方法。
ＮＥＬＬ１ペプチドが、配列番号２、配列番号４又は配列番号６を含む群から選択される請求項１４２、１４３又は１４４の方法。
骨形成が所望される領域に、ＴＧＦ−β、ＢＭＰ２、ＢＭＰ４、ＢＭＰ７、ｂＦＧＦ、コラーゲン、骨、基質、靭帯基質、腱基質、骨形成細胞又は骨芽細胞を含む群から選択される少なくとも１種の作用剤を投与することをさらに含む請求項１４２、１４３又は１４４の方法。
人体で使用するためのインプラントであって、基材がインプラントの近傍で骨形成を誘導するのに十分な量のＮＥＬＬ１を含む基材を含むインプラント。
人体で使用するためのインプラントであって、表面の少なくとも一部がインプラントの近傍で骨形成を誘導するのに十分な量のＮＥＬＬ１を含む表面を有する基材を含むインプラント。
人体で使用するためのインプラントであって、表面の少なくとも一部が骨形成細胞を含む表面を有する基材を含み、該基材が骨形成を誘導するのに十分な量のＮＥＬＬ１を含むインプラント。
前記基材がメッシュ、ピン、ネジ、プレート又は人工装具の継ぎ目の形状に形成される請求項１４２、１４３又は１４４のインプラント。
前記基材が吸収性である請求項１４２、１４３又は１４４のインプラント。
前記基材がコラーゲンを含む請求項１４２、１４３又は１４４のインプラント。