JP2007291003A - ＳＡＲＳ−ＣｏＶ増殖抑制剤 - Google Patents

Abstract

【課題】
ＳＡＲＳの治療剤及びＳＡＲＳ−ＣｏＶ増殖抑制剤を提供すること。
【解決手段】
本発明は、チオールプロテアーゼ阻害剤、たとえばＥ−６４、ロイペプチン又はＮＣＯ−７００（Ｂｉｓ［ｅｔｈｙｌ （２Ｒ，３Ｒ）−３−［（Ｓ）−３−ｍｅｔｈｙｌ−１−［４−（２，３，４−ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌｍｅｔｈｙｌ）ｐｉｐｅｒａｚｉｎ−１−ｙｌｃａｒｂｏｎｙｌ］ｂｕｔｙｌｃａｒｂａｍｏｙｌ］ｏｘｉｒａｎｅ−２−ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ］ ｓｕｌｆａｔｅ）等を有効成分として含有する医薬製剤をＳＡＲＳの治療剤及びＳＡＲＳ−ＣｏＶ増殖抑制剤として使用する。
【選択図】 なし

Description

本発明はチオールプロテアーゼ阻害剤を有効成分として含有するＳＡＲＳ−ＣｏＶ増殖抑制剤に関する。

重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）の最初の報告は２００３年２月、中国河西省とされており、ＳＡＲＳウイルスによる呼吸器系疾患で死を伴う典型的な肺炎である。２００３年７月の世界保健機構（ＷＨＯ）の統計では８，０９８人が感染し、７７４人が死亡したとされている。ＳＡＲＳの原因ウイルスの遺伝子解析は患者検体からウイルスが分離されるのと並行して進められ、類縁性はないがウシ、ブタ、マウスのコロナウイルスと同様の遺伝子構成が明らかとなり、ＳＡＲＳ−ＣｏＶと呼ばれ独立したコロナウイルスとして分類されている。

ＳＡＲＳの感染症予防薬として、ポビドンヨードの使用（特許文献１），プロアントシアニジン、カテキン、ブドウ抽出物の使用（特許文献２）、チオスルファト銀錯塩の使用（特許文献３）等が報告されている。
一方、ＳＡＲＳ−ＣｏＶの複製過程がかなり明らかにされてきていることから、これらの各段階をターゲットとしたＳＡＲＳ−ＣｏＶ増殖抑制薬の開発が考えられる。その中で、ＳＡＲＳ−ＣｏＶはＥＲ（Ｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃ ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ）上で増殖するので種々の細胞内プロテアーゼによる修飾を受けることが予想され、Ｆｕｒｉｎ阻害剤によるウイルス増殖の阻害も報告されている。
また２００３年７月にエイズ治療に使われている抗ウイルス薬のネルフィナビルにより、ＳＡＲＳ−ＣｏＶの増殖が抑制されることが明らかにされた。
しかしながら、これまで効果的な治療薬は実用化されていない。

一方、チオールプロテアーゼ阻害剤として知られているＮＣＯ−７００：Ｂｉｓ［ｅｔｈｙｌ （２Ｒ，３Ｒ）−３−［（Ｓ）−３−ｍｅｔｈｙｌ−１−［４−（２，３，４−ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌｍｅｔｈｙｌ）ｐｉｐｅｒａｚｉｎ−１−ｙｌｃａｒｂｏｎｙｌ］ｂｕｔｙｌｃａｒｂａｍｏｙｌ］ｏｘｉｒａｎｅ−２−ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ］ ｓｕｌｆａｔｅ、Ｅ−６４：（２Ｓ，３Ｓ）−３−（Ｎ−（（Ｓ）−１−（Ｎ−（４−ｇｕａｎｉｄｉｎｏｂｕｔｙｌ）ｃａｒｂａｍｏｙｌ）−３−ｍｅｔｈｙｌｂｕｔｙｌ）ｃａｒｂａｍｏｙｌ）ｏｘｉｒａｎｅ−２−ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ ａｃｉｄ及びロイペプチン（Ｌｅｕｐｅｐｔｉｎ）：Ａｃｅｔｙｌ−Ｌｅｕｃｙｌ−Ｌｅｕｃｙｌ−Ａｒｇｉｎａｌが、ＳＡＲＳ−ＣｏＶ増殖抑制剤として有用である旨の報告はなされていない。（特許文献４）

特開２００４−３５２６４２ 特開２００５−３１４３１６ 特開２００５−２９８３９０ 特公平１−５４３４９

本発明の目的はチオールプロテアーゼ阻害剤を有効成分として含有するＳＡＲＳ−ＣｏＶ増殖抑制剤を提供することにある。

即ち、本発明は、チオールプロテアーゼ阻害剤を有効成分として含有するＳＡＲＳの治療剤に関する。
また、本発明は、カテプシン阻害剤を有効成分として含有するＳＡＲＳの治療剤に関する。
また、本発明は、チオールプロテアーゼ阻害剤を有効成分として含有するＳＡＲＳ−ＣｏＶ増殖抑制剤に関する。
更にまた、本発明は、カテプシン阻害剤を有効成分として含有するＳＡＲＳ−ＣｏＶ増殖抑制剤に関する。

本発明のＳＡＲＳの治療剤及びＳＡＲＳ−ＣｏＶ増殖抑制剤の有効成分であるチオールプロテアーゼ阻害剤及びカテプシン阻害剤としては、好ましくはＥ−６４、ロイペプチン又はＮＣＯ−７００が挙げられ、更に好ましくはＮＣＯ−７００が挙げられる。
なおＥ−６４及びロイペプチンは試薬として購入可能で（コスモ・バイオ株式会社）、またＮＣＯ−７００は上記特許文献４記載の製法により得ることができる。

次に薬理試験について述べる。
被検物質の抗ＳＡＲＳコロナウイルス活性は、ＦＦＭ−１株を用い、培養細胞はＶｅｒｏ細胞及びＨｕｈ−７細胞を用いて試験を行った。
ウイルス感染と同時に被検物質（ＮＣＯ−７００，Ｅ６４及びロイペプチン）を加え、２４及び４８時間後、培養液を回収し、ウイルス量を測定した。
ウイルス力価の測定は、Ｖｅｒｏ細胞を用いてプラーク形成法で行った。（後記実施例１）
表１から明らかなようにＮＣＯ−７００、Ｅ６４及びロイペプチンはＶｅｒｏ細胞及びＨｕｈ−７細胞におけるＳＡＲＳ−ＣｏＶの増殖を濃度依存的に阻害した。
従って、ＮＣＯ−７００、Ｅ６４及びロイペプチンなどのチオールプロテアーゼ阻害剤及びカテプシン阻害剤は、ＳＡＲＳの治療剤及びＳＡＲＳ−ＣｏＶ増殖抑制剤として期待される。

本発明の有効成分であるチオールプロテアーゼ阻害剤及びカテプシン阻害剤は、ヒトに対して経口投与又は非経口投与のような適当な投与方法により投与することができる。また、他のＳＡＲＳの治療剤及びＳＡＲＳ−ＣｏＶ増殖抑制剤と併用することも可能である。
製剤化するためには、製剤の技術分野における通常の方法で錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤、懸濁剤、注射剤、坐薬等の剤型に製造することができる。
これらの調製には、例えば錠剤の場合、通常の賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、色素などが用いられる。ここで、賦形剤としては、乳糖、Ｄ−マンニトール、結晶セルロース、ブドウ糖などが、崩壊剤としては、デンプン、カルボキシメチルセルロースカルシウム（ＣＭＣ−Ｃａ）などが、滑沢剤としては、ステアリン酸マグネシウム、タルクなどが、結合剤としては、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、ゼラチン、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）などが挙げられる。注射剤の調製には溶剤、安定化剤、溶解補助剤、懸濁剤、乳化剤、無痛化剤、緩衝剤、保存剤などが用いられる。

投与量は通常成人においては、注射剤で有効成分であるチオールプロテアーゼ阻害剤及びカテプシン阻害剤を１日約０．０１ｍｇ〜１００ｍｇ，経口投与で１日１ｍｇ〜２０００ｍｇであるが、年齢、症状等により増減することができる。

次に、実施例を挙げ、本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。

（試験方法）
被検物質の抗ＳＡＲＳコロナウイルス活性は、以下の方法により測定した。ＳＡＲＳコロナウイルス（以下、「ＳＡＲＳ−ＣｏＶ」と略記）は、ＦＦＭ−１株（Ｄｒ．ＨＷ． Ｄｏｅｒｒ，Ｆｒａｎｋｆｒｕｔ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ， Ｇｅｒｍａｎｙより分与）を用いた。培養細胞はＶｅｒｏ細胞及びＨｕｈ−７細胞を用い、培地はダルベッコの最小必須 （ＤＭＥＭ）培地に１０％ウシ胎児血清を添加したものを用い、５％ＣＯ_２存在下において３７℃で培養した。
ウイルス感染は、９０％単層が形成された培養細胞に、細胞１個当たりのウイルス量が０．１（ＭＯＩ＝０．１， Ｍｕｌｔｉｐｌｉｃｉｔｙ ｏｆ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）となる条件で行い（Ｔｕｋｅｒ，Ｐ．Ｃ．ら， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ． ７１： ６１０６， １９９７）、感染と同時に被検物質（ＮＣＯ−７００， Ｅ６４或いはＬｅｕｐｅｐｔｉｎ）をそれぞれ０、０．２、０．６、２、６、及び２０μｍｏｌ／Ｌとなるように加え、２４及び４８時間後に培養液を回収しウイルス量を測定した。

ウイルス力価の測定は、Ｖｅｒｏ細胞を用いて以下のようなプラーク形成法で行った。回収した培養上清を１％ ウシ血清アルブミンを加えたＰＢＳ（−）（Ｍｇ^２＋，Ｃａ^２＋を含まない０．０５ｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝液、０．１５ｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌ、ｐＨ７．０）で１０倍階段希釈し、各０．２ｍＬずつをそれぞれのウエル（６ウエルプレート）に接種した。２５℃で６０分間感染させた後、１．０％ メチルセルロースを加えたＤＭＥＭ（５％ウシ胎児血清含有）で４日間培養した。培養後、メチルセルロースを取り除き、細胞を２．５％ クリスタルバイオレット（３０％ エチルアルコール、１％ シュウ酸アンモニウム中）で染色し、ＰＢＳ（−）で３回洗浄／脱色後、プラーク数の平均値（３個のウエル）から１ｍＬ中のウイルス量をＰＦＵ （Ｐｌａｑｕｅ Ｆｏｒｍｉｎｇ Ｕｎｉｔ）／ｍＬとして算出した（Ｔｕｋｅｒ， Ｐ．Ｃ．ら， Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７１：６１０６， １９９７）。
以上の方法を用いて被検物質のＩＣ_５０値〔ＳＡＲＳ−ＣｏＶの増殖を５０％阻害する濃度（Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ、（μｍｏｌ／Ｌ））を求め、その結果を表１に示す。
（結果）

表１から明らかなようにＮＣＯ−７００、Ｅ６４及びＬｅｕｐｅｐｔｉｎはＶｅｒｏ細胞及びＨｕｈ−７細胞におけるＳＡＲＳ−ＣｏＶの増殖を濃度依存的に阻害した。

Claims (8)

1. チオールプロテアーゼ阻害剤を有効成分として含有するＳＡＲＳの治療剤。
2. カテプシン阻害剤を有効成分として含有するＳＡＲＳの治療剤。
3. Ｅ−６４、ロイペプチン又はＮＣＯ−７００を有効成分として含有するＳＡＲＳの治療剤。
4. ＮＣＯ−７００を有効成分として含有するＳＡＲＳの治療剤。
5. チオールプロテアーゼ阻害剤を有効成分として含有するＳＡＲＳ−ＣｏＶ増殖抑制剤。
6. カテプシン阻害剤を有効成分として含有するＳＡＲＳ−ＣｏＶ増殖抑制剤。
7. Ｅ−６４、ロイペプチン又はＮＣＯ−７００を有効成分として含有するＳＡＲＳ−ＣｏＶ増殖抑制剤。
8. ＮＣＯ−７００を有効成分として含有するＳＡＲＳ−ＣｏＶ増殖抑制剤。