JP2007175067A - 共役リノール酸異性体の精製方法およびその用途 - Google Patents
共役リノール酸異性体の精製方法およびその用途 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2007175067A JP2007175067A JP2007092849A JP2007092849A JP2007175067A JP 2007175067 A JP2007175067 A JP 2007175067A JP 2007092849 A JP2007092849 A JP 2007092849A JP 2007092849 A JP2007092849 A JP 2007092849A JP 2007175067 A JP2007175067 A JP 2007175067A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cla
- linoleic acid
- conjugated linoleic
- reaction
- fatty acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- JBYXPOFIGCOSSB-GOJKSUSPSA-N 9-cis,11-trans-octadecadienoic acid Chemical class CCCCCC\C=C\C=C/CCCCCCCC(O)=O JBYXPOFIGCOSSB-GOJKSUSPSA-N 0.000 title claims abstract description 124
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 98
- 238000000746 purification Methods 0.000 title abstract description 26
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 100
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 claims abstract description 92
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 claims abstract description 92
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 claims abstract description 92
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 claims abstract description 92
- OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N linoleic acid Natural products CCCCC\C=C/C\C=C\CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N 0.000 claims abstract description 84
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims abstract description 32
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims abstract description 12
- 229940108924 conjugated linoleic acid Drugs 0.000 claims description 77
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 73
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 claims description 69
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 claims description 69
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 claims description 69
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 claims description 68
- 241000222175 Diutina rugosa Species 0.000 claims description 43
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 claims description 43
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 claims description 43
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 claims description 41
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 claims description 16
- 235000017388 Geotrichum candidum Nutrition 0.000 claims description 9
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims description 6
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 claims description 4
- SYSQUGFVNFXIIT-UHFFFAOYSA-N n-[4-(1,3-benzoxazol-2-yl)phenyl]-4-nitrobenzenesulfonamide Chemical class C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1S(=O)(=O)NC1=CC=C(C=2OC3=CC=CC=C3N=2)C=C1 SYSQUGFVNFXIIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 241000453701 Galactomyces candidum Species 0.000 claims 1
- 241000051616 Ulmus minor Species 0.000 claims 1
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 abstract description 100
- 125000005456 glyceride group Chemical group 0.000 abstract description 97
- 230000032050 esterification Effects 0.000 abstract description 75
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 abstract description 75
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 abstract description 66
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 abstract description 61
- -1 glyceride esters Chemical class 0.000 abstract description 18
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 abstract description 13
- OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N linoleic acid group Chemical class C(CCCCCCC\C=C/C\C=C/CCCCC)(=O)O OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N 0.000 abstract description 7
- 230000036541 health Effects 0.000 abstract description 5
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 abstract description 2
- 235000013310 margarine Nutrition 0.000 abstract description 2
- 239000003264 margarine Substances 0.000 abstract description 2
- GKJZMAHZJGSBKD-NMMTYZSQSA-N (10E,12Z)-octadecadienoic acid Chemical class CCCCC\C=C/C=C/CCCCCCCCC(O)=O GKJZMAHZJGSBKD-NMMTYZSQSA-N 0.000 abstract 2
- 235000021588 free fatty acids Nutrition 0.000 description 117
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 93
- 229940040461 lipase Drugs 0.000 description 84
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 50
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 50
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 49
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 42
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 31
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 30
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 26
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 26
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 23
- NOOLISFMXDJSKH-KXUCPTDWSA-N (-)-Menthol Chemical compound CC(C)[C@@H]1CC[C@@H](C)C[C@H]1O NOOLISFMXDJSKH-KXUCPTDWSA-N 0.000 description 22
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 20
- NOOLISFMXDJSKH-UHFFFAOYSA-N DL-menthol Natural products CC(C)C1CCC(C)CC1O NOOLISFMXDJSKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 229940041616 menthol Drugs 0.000 description 13
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 13
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 12
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 12
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 12
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 12
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 11
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000000199 molecular distillation Methods 0.000 description 9
- 244000168141 Geotrichum candidum Species 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108010093096 Immobilized Enzymes Proteins 0.000 description 6
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 6
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 6
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 6
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 235000020778 linoleic acid Nutrition 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 6
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 5
- LDVVTQMJQSCDMK-UHFFFAOYSA-N 1,3-dihydroxypropan-2-yl formate Chemical compound OCC(CO)OC=O LDVVTQMJQSCDMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241001453380 Burkholderia Species 0.000 description 4
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 4
- 235000019485 Safflower oil Nutrition 0.000 description 4
- 241000030538 Thecla Species 0.000 description 4
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 239000003813 safflower oil Substances 0.000 description 4
- 235000005713 safflower oil Nutrition 0.000 description 4
- 238000007127 saponification reaction Methods 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KBPLFHHGFOOTCA-UHFFFAOYSA-N 1-Octanol Chemical compound CCCCCCCCO KBPLFHHGFOOTCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 3
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000021314 Palmitic acid Nutrition 0.000 description 3
- 241000235403 Rhizomucor miehei Species 0.000 description 3
- 241000235527 Rhizopus Species 0.000 description 3
- 240000005384 Rhizopus oryzae Species 0.000 description 3
- 235000013752 Rhizopus oryzae Nutrition 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 241000223257 Thermomyces Species 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 235000013350 formula milk Nutrition 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 3
- WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N n-Pentadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 3
- 235000021313 oleic acid Nutrition 0.000 description 3
- 239000000344 soap Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 3
- 238000005809 transesterification reaction Methods 0.000 description 3
- OYHQOLUKZRVURQ-NTGFUMLPSA-N (9Z,12Z)-9,10,12,13-tetratritiooctadeca-9,12-dienoic acid Chemical compound C(CCCCCCC\C(=C(/C\C(=C(/CCCCC)\[3H])\[3H])\[3H])\[3H])(=O)O OYHQOLUKZRVURQ-NTGFUMLPSA-N 0.000 description 2
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000588810 Alcaligenes sp. Species 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 2
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 2
- 101710098556 Lipase A Proteins 0.000 description 2
- 101710099648 Lysosomal acid lipase/cholesteryl ester hydrolase Proteins 0.000 description 2
- 102100026001 Lysosomal acid lipase/cholesteryl ester hydrolase Human genes 0.000 description 2
- 241001661345 Moesziomyces antarcticus Species 0.000 description 2
- 241000235402 Rhizomucor Species 0.000 description 2
- 241000235545 Rhizopus niveus Species 0.000 description 2
- 241000223258 Thermomyces lanuginosus Species 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 2
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 2
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 2
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 2
- LQZZUXJYWNFBMV-UHFFFAOYSA-N dodecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCO LQZZUXJYWNFBMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000013345 egg yolk Nutrition 0.000 description 2
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000002044 hexane fraction Substances 0.000 description 2
- 235000015243 ice cream Nutrition 0.000 description 2
- 239000003262 industrial enzyme Substances 0.000 description 2
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 2
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 2
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 2
- 235000010746 mayonnaise Nutrition 0.000 description 2
- 239000008268 mayonnaise Substances 0.000 description 2
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 2
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 239000000052 vinegar Substances 0.000 description 2
- 235000021419 vinegar Nutrition 0.000 description 2
- GKJZMAHZJGSBKD-ANYPYVPJSA-N 10-trans-12-cis-linoleic acid Natural products CCCCCC=C\C=C\CCCCCCCCC(O)=O GKJZMAHZJGSBKD-ANYPYVPJSA-N 0.000 description 1
- CHHHXKFHOYLYRE-UHFFFAOYSA-M 2,4-Hexadienoic acid, potassium salt (1:1), (2E,4E)- Chemical compound [K+].CC=CC=CC([O-])=O CHHHXKFHOYLYRE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000588986 Alcaligenes Species 0.000 description 1
- 244000300657 Alchornea rugosa Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 1
- 240000002791 Brassica napus Species 0.000 description 1
- 235000004977 Brassica sinapistrum Nutrition 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 241000159512 Geotrichum Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 101000578774 Homo sapiens MAP kinase-activated protein kinase 5 Proteins 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 102100028396 MAP kinase-activated protein kinase 5 Human genes 0.000 description 1
- 239000005913 Maltodextrin Substances 0.000 description 1
- 229920002774 Maltodextrin Polymers 0.000 description 1
- 241000729876 Niveus Species 0.000 description 1
- 108010084311 Novozyme 435 Proteins 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 108050006759 Pancreatic lipases Proteins 0.000 description 1
- 102000019280 Pancreatic lipases Human genes 0.000 description 1
- 241000228143 Penicillium Species 0.000 description 1
- 101000968489 Rhizomucor miehei Lipase Proteins 0.000 description 1
- 235000004443 Ricinus communis Nutrition 0.000 description 1
- 241000698291 Rugosa Species 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 235000019486 Sunflower oil Nutrition 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- WUOACPNHFRMFPN-UHFFFAOYSA-N alpha-terpineol Chemical compound CC1=CCC(C(C)(C)O)CC1 WUOACPNHFRMFPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940089206 anhydrous dextrose Drugs 0.000 description 1
- 230000003266 anti-allergic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 235000008452 baby food Nutrition 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 229940076810 beta sitosterol Drugs 0.000 description 1
- LGJMUZUPVCAVPU-UHFFFAOYSA-N beta-Sitostanol Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)CCC(CC)C(C)C)C1(C)CC2 LGJMUZUPVCAVPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NJKOMDUNNDKEAI-UHFFFAOYSA-N beta-sitosterol Natural products CCC(CCC(C)C1CCC2(C)C3CC=C4CC(O)CCC4C3CCC12C)C(C)C NJKOMDUNNDKEAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000019219 chocolate Nutrition 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Natural products OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 235000021551 crystal sugar Nutrition 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 235000015071 dressings Nutrition 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010931 ester hydrolysis Methods 0.000 description 1
- 238000010701 ester synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010932 ethanolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 229940093915 gynecological organic acid Drugs 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 229940035034 maltodextrin Drugs 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000014593 oils and fats Nutrition 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229940116369 pancreatic lipase Drugs 0.000 description 1
- 238000005192 partition Methods 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 235000010241 potassium sorbate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004302 potassium sorbate Substances 0.000 description 1
- 229940069338 potassium sorbate Drugs 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 235000015067 sauces Nutrition 0.000 description 1
- 229930004725 sesquiterpene Natural products 0.000 description 1
- 150000004354 sesquiterpene derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000001577 simple distillation Methods 0.000 description 1
- KZJWDPNRJALLNS-VJSFXXLFSA-N sitosterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CC[C@@H](CC)C(C)C)[C@@]1(C)CC2 KZJWDPNRJALLNS-VJSFXXLFSA-N 0.000 description 1
- 229950005143 sitosterol Drugs 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 235000014347 soups Nutrition 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 235000013599 spices Nutrition 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000002600 sunflower oil Substances 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 108010042582 tosylarginine methyl ester hydrolase Proteins 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- 239000000230 xanthan gum Substances 0.000 description 1
- 229920001285 xanthan gum Polymers 0.000 description 1
- 229940082509 xanthan gum Drugs 0.000 description 1
- 235000010493 xanthan gum Nutrition 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
【解決手段】リパーゼの存在下、共役リノール酸の異性体混合物を構成成分とする脂肪酸混合物またはそのグリセリドエステル混合物を、有機溶媒を含まない反応系で共役リノール酸異性体に対する選択反応(加水分解またはエステル化反応)に付すことを特徴とする、共役リノール酸異性体の精製方法。
上記の方法により得られるエステル中のc9,tl1-共役リノール酸またはt10,c12-共役リノール酸の両異性体の合計含量に対して70%以上含まれるグリセリド。
脂肪および健康成分を含む食品(マーガリン、チーズ、ソースなど)であって、健康成分が上記の共役リノール酸異性体(遊離体およびグリセリドエステル体)の1種以上である、食品。
【選択図】なし
Description
前者の公報では、共役リノール酸とエステル化またはエステル交換するために用いられる水酸基またはエステル結合を1個以上有する有機化合物として、リン脂質、コレステロール、β-シトステロール等のステロール、ショ糖、乳糖等の糖類、アスコルビン酸等の有機酸が挙げられているが、このエステルを使用して共役リノール酸異性体を精製する方法に関しては記載がない。
(2)リパーゼの存在下、共役リノール酸の異性体混合物を構成成分とするグリセリドを、有機溶媒を含まない反応系で加水分解することを特徴とする、上記(1)の精製方法。
(3)リパーゼの存在下、共役リノール酸の異性体混合物を構成成分とするグリセリドを、有機溶媒を含まない反応系で加水分解し、得られたグリセリドを、前記リパーゼの存在下で更に1回以上、加水分解することを特徴とする、上記(2)の精製方法。
(4)c9,tll-共役リノール酸を遊離脂肪酸画分中に濃縮し、t10,c12-共役リノール酸をグリセリド画分中に濃縮することを特微とする、上記(2)または(3)の精製方法。
(5)上記(4)の方法より得た遊離脂肪酸画分をグリセリンとエステル化することにより、c9,t11-共役リノール酸高含有グリセリドを得ることを特徴とする、上記(2)〜(4)のいずれかの精製方法。
(6)上記(4)の方法より得たグリセリド画分を加水分解することによって、t10,c12-共役リノール酸高含有脂肪酸を得ることを特徴とする、上記(2)〜(4)のいずれかの精製方法。
(7)リパーゼの存在下、共役リノール酸の異性体混合物を、有機溶媒を含まない反応系で、食品加工に利用できるアルコールと選択的エステル化することを特徴とする、上記(1)の精製方法。
(8)リパーゼの存在下、共役リノール酸の異性体混合物を、有機溶媒を含まない反応系で、食品加工に利用できるアルコールと選択的エステル化し、得られた遊離脂肪酸を、前記リパーゼの存在下で更に1回以上、食品加工に利用できるアルコールと選択的エステル化反応し、t10,c12-共役リノール酸を遊離脂肪酸画分中に濃縮することを特徴とする、上記(7)の精製方法。
(9)c9,tll-共役リノール酸を濃縮させたアルコールエステル画分を非選択的または選択的加水分解することによって、c9,t11-共役リノール酸高含有脂肪酸を得ることを特徴とする、上記(7)または(8)の精製方法。
(10)上記(8)または(9)の方法より得た遊離脂肪酸をグリセリンとエステル化することにより、t10,c12-共役リノール酸高含有グリセリドまたはc9,tll-共役リノール酸高含有グリセリドを得ることを特徴とする、共役リノール酸異性体の精製方法。
本発明はまた、上記の共役リノール酸異性体またはグリセリドを健康成分として含む脂肪含有食品にも関する。
また、共役リノール酸異性体(遊離体またはグリセリド)の製造において、反応条件を適宜変えることにより、特にc9,t11-共役リノール酸とt10,c12-共役リノール酸の含有割合を所望に調節することができる。
すなわち、本発明は、好ましい態様において下記の二つの方法を提供するものである。
本発明で用いる共役リノール酸異性体混合物とは、遊離脂肪酸もしくはグリセリド(通常トリグリセリドを主成分とし、ジグリセリド、モノグリセリドも含む)の形態で、c9,tll-共役リノール酸およびt10,c12-共役リノール酸を主体的に含むものであればいずれの起源のものでも使用できるが、好ましくは共役リノール酸(またはグリセリド中の共役リノール酸)を脂肪酸混合物(またはグリセリド混合物中の脂肪酸)の全量に対して50%以上、より好ましくは60%以上、更に好ましくは70%以上含むものである。
なお、本明細書において、%表示は特に断りのない限り、あるいは%表示のみで明確な場合(加水分解率、エステル化率など)を除き重量%を意味する。
上述のようにして得られる脂肪酸混合物中の共役リノール酸異性体含量は、一般的に10〜95%、好ましくは50〜95%、より好ましくは60〜95%、さらに好ましくは70〜95%程度であり、より実用的には50〜85%程度であり(両異性体の相互含量はほぼ等量)、残りの成分は他の脂肪酸(オレイン酸等)、未転化(非共役)リノール酸等である。
使用することもできる。
<選択的加水分解反応を利用したc9,tll-CLAとtlO,c12-CLAの精製>
選択的加水分解に用いるリパーゼは、2つの異性体(c9,t11-CLAとt10,c12-CLA)に対する活性に大きな差を有する酵素であれぱ、微生物、動物、植物いずれの起源であっても良い。好ましくはCandida rugosaのリパーゼ(リパーゼOF,名糖産業;リパーゼAY,天野エンザイムなど)、Geotrichum candidumのリパーゼ、Pseudomonas属やBurkholderia属のリパーゼなどが好ましい。リパーゼの使用形態等は遊離型のままでもよいが、固定化剤(イオン交換樹脂、多孔性樹脂、セラミックス、炭酸カルシウムなど)に固定したものを用いてもよい。なお遊離型酵素を使用するときは、一旦酵素を水に溶かし、酵素水溶液を所定の酵素量になるように反応液中に添加するのが好ましい。
リパーゼによるグリセリドの加水分解率は、次式によって算出することができる。加水分解率(%)=(B/A)×100
(A:基質として用いたグリセリドを構成している脂肪酸のモル量
B:反応によって遊離してきた遊離脂肪酸のモル量)
上述した方法で得たt10,c12-CLAを高含有するグリセリドを加水分解することによりt10,c12-CLAを高含有する遊離脂肪酸を製造することができる。加水分解は、エタノールの存在下での通常のケン化分解を採用してもよいし、リパーゼを触媒とした加水分解法を採用してもよい。リパーゼを使用するときには、c9,tll-CLAよりt10,c12-CLAに対して高い活性を示す酵素(例えばPseudomonas属、Burkholderia属など)、あるいはc9,tll-CLAとt1O,c12-CLAに対して選択性を示さない酵素(例えばRhizomucor属、Rhizopus属、Thermomyces属など)の使用が好ましいが、高い加水分解率(80%以上、好ましくは90%以上)が得られる反応系を構築する場合には(例えば大過剰の酵素を使用したり、反応時間を延長する等の条件で反応を行う)、酵素の脂肪酸異性体特異性にこだわる必要はなく非選択的に加水分解を行うことができる。従って、リパーゼは微生物、動物、植物起源のいずれの産業用酵素でもこの反応に使用することができ、遊離型酵素でもよいし、固定化した酵素を使用してもよい。また、この加水分解反応の条件は、基本的に前述した選択的加水分解反応と同様の条件を用いることができる。
前述した方法で得たc9,t11-CLAを高含有する遊離脂肪酸とグリセリンをエステル化することによりc9,t11-CLA高含有のグリセリドを製造することができる。エステル化は、一般的に採用されているアルカリ触媒を用いた化学法を採用することもできるが、CLAの不安定性を考慮すると、温和な条件下、窒素気流下でも反応が効率よく進行する酵素法が好ましい。このエステル化反応には微生物、動物、植物起源のいずれの産業用酵素も利用することができるが、高いエステル化率が得られ、かつc9,t11-CLAを基質としてよく認識するRhizopus oryzae、Rhizopus niveus、Rhizomucor miehei、Thermomyces 1anuginosa、Candida antarctica、Alcaligenes sp.由来のリパーゼなどが好ましい。また、反応系中の水を除去するとエステル化は効率よく進行するため、窒素の吹き込み、あるいは減圧下(通常0.1〜100mmHg程度)で脱水しながら行う反応が有効である。従って、このエステル化反応には遊離型酵素、固定化酔素のいずれも使用できるが、固定化酵素を用いた方がより好ましい。
なお本発明において、エステル化率は次式によって算出することができる。
エステル化率(%)=[(A−B)/A]×100
(A:反応前の反応混液中に存在する遊離脂肪酸のモル量
B:反応後の反応混液中に存在する遊離脂肪酸のモル量)
アルコールは食品に使用可能なものであれば制限されるものではないが、メントール、ステロール、グリセリンなどが好ましい例としてあげられる。
エステル合成反応(基質が遊離脂肪酸)またはエステル交換反応(基質がグリセリド)を行うための反応混液中のアルコール(好ましくはL-メントールまたはステロール)と共役リノール酸混合物のモル比は、通常1:10〜10:1、好ましくは1:5〜5:1であるが、原料の種類や反応性の程度に応じて上記以外のモル比も使用し得る。
遊離脂肪酸画分中のt10,c12-CLA純度をさらに高めたいときには、エステル化の反応液から回収した遊離脂肪酸を原料としてもう一度選択的エステル化反応を繰り返せばよい。
アルコール(L-メントールあるいはステロールなど)に結合した脂肪酸はメタノールあるいはエタノール存在下でのケン化分解、あるいはリパーゼを触媒とした加水分解により遊離脂肪酸に戻すことができる。特に、ステロールに結合した脂肪酸はリパーゼで容易に加水分解される。なお、t10,c12-CLAよりc9,t11-CLAに対して強い加水分解活性を有するリパーゼ(Candida rugosa、Geotrichum candidumのリパーゼなど)を選択すると、加水分解前のエステル(メンチル、ステリルエステルなど)中のc9,t11-CLA含量より高い純度の遊離脂肪酸(c9,tll-CLA)を調製することもできる。この酵素法による加水分解の条件は、基本的に前記第1の方法(加水分解)で述べた条件を採用することができる。
エステル化反応とエステル(メンチルまたはステリルエステルなど)の加水分解によって得られた遊離脂肪酸を原料として、選択的エステル化反応を1回以上繰り返すことにより、c9,tll-CLAの純度をさらに高めることも可能である。
この様にして得られた各CLA異性体を高濃度含有する脂肪酸は食品に応用することができる。
上述の方法で精製した高純度CLA異性体とグリセリンをエステル化すると、各異性体を高濃度に含有するグリセリド、すなわち、c9,t11-CLAまたはt10,c12-CLAのいずれかの含量が相対的に高い食品用のグリセリドを製造することができる。なお、グリセリドの製造は、基本的に[0027]、[0031]〜[0033]のグリセリドの調製およびエステル化の方法に準じて行うことができる。
以下の実施例において、グリセリド組成の分析・測定は、n-ヘキサン:酢酸エチル:酢酸(=90:10:1,容量比)で展開した後、イヤトロスキャンMK-5(ヤトロン)で分析した。脂肪酸組成はDB-23キャピラリーカラム(0.25mm×30m;J&W Scientific)を用いたガスクロマトグラフィーにより分析した。
[調製例1] 共役リノール酸の異性体を構成成分とするトリグリセリドの調製
c9,t11-およびt10,c12-共役リノール酸の混合物(c9,t11-CLA含量,33.1%;t10,cl2-CLA含量,33.9%;(残りは他の脂肪酸(パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸)、未転化リノール酸)等)CLA-80;リノール油脂)1352g、グリセリン148g、および固定化Rhizomucor mieheiリパーゼ(Novozyme 435;ノボザイムズ)75gを3L容量の4つロフラスコに入れ、5mmHgの減圧下、50℃で48時間撹伴しながらインキュベートした(エステル化率,92.3%)。得られた反応液を200℃、0.02mmHgで分子蒸留(Wiprene Type 2-03;神鋼パンテック)し未反応脂肪酸を留分として除去した。残渣画分になお残存していた脂肪酸を除去するために、この残渣を250℃、0.001mmHgで再度分子蒸留して1209gの蒸留残渣を得た。この残渣画分中には86.8 wt%のトリグリセリドと13.2wt%のジグリセリドが含まれ、モノグリセリドと遊離脂肪酸の含量は検出できなかった(O.2wt%以下)。得られたグリセリド標品(以下Gly-CLAと略す)は33.5 wt%のc9,t11-CLAと34.4wt%のt10,c12-CLAを含んでいた。
Gly-CLA3g、水3g、および種々の量のCandida rugosaリパーゼ(リパーゼOF;名糖産業)からなる反応液を30℃で16時間攪拌しながらインキュベートした。反応後、アルカリ条件下でヘキサン抽出し、未分解グリセリドをヘキサン層に回収した。また水層画分に存在した脂肪酸石鹸は塩酸で酸性に戻して遊離体とし、これをヘキサンで抽出した。グリセリドおよび遊離脂肪酸画分の脂肪酸組成を表1に示す。Gly-CLAの加水分解率が低いほど、遊離脂肪酸画分中のc9,t11-CLAの純度は高くなり、また加水分解率が約60%に達したときにグリセリド画分のt10,cl2-CLAの純度は最大値を示した。
酵素量a 加水分解率 画分 CLA含量(wt%) 異性体純度 b (%)
(U/g) (%) c9,tll tlO,c12 c9,tll tlO,c12
0.8 10.1 遊離脂肪酸 51.8 14.2 75.7
グリセリド 30.9 36.7 54.3
1.5 31.5 遊離脂肪酸 50.5 17.2 74.6
グリセリド 24.3 43.6 64.2
3 41.0 遊離脂肪酸 45.3 21.2 68.1
グリセリド 23.8 44.9 65.3
6 61.5 遊離脂肪酸 40.6 24.1 62.7
グリセリド 19.2 52.5 73.2
10 67.7 遊離脂肪酸 36.5 28.2 56.4
グリセリド 19.6 52.6 72.9
30 82.5 遊離脂肪酸 34.0 32.1 51.5
グリセリド 26.1 44.5 63.1
a: リパーゼ1単位(U)とはオリーブ油を基質として用いた30℃での加水分解反応において1分間に1μmolの脂肪酸を遊離する活性である。
b: c9,t11-CLAとtlO,c12-CLAの合計含量に対するc9,t11-CLAあるいはtlO,cl2-CLAの含量をパーセントで表示した。
Candida rugosaリパーゼを触媒とし、酵素量を制限した反応系を用いた選択的加水分解反応および過剰量の酵素を用いた非選択的加水分解を利用したCLA異性体分画の概略を図1に示し、操作の各段階における物質収支を表2に示す。
調製例1に記載した反応を繰り返して調製したGly-CLAを原料として使用した。第1工程の選択的加水分解はc9,t11-CLA含量の高い遊離脂肪酸を調製する工程である。Gly-CLAを2000g、水を2000g、およびCandida rugosaリパーゼ1.5U/gをリアクター(MDL1OO1;丸菱バイオエンジ)に入れ、30℃、200rpmで16時間攪拌しながらインキュベートした(加水分解率,31.9%)。反応後、静置して得た油層を160℃、0.2mmHgで分子蒸留(Wiprene Type 2-03;神鋼パンテック)し、原料由来のパルミチン酸を多く含む留分1-1(83g)を除去した。次いで残渣画分を190℃、0.05mmHgで分子蒸留し、炭素数18の脂肪酸を多く含む留分1-2(423g)を回収した。留分2-1の酸価は200mgKOH/gでグリセリドの混在は検出できなかった。また、この画分中のc9,tll-CLAおよびt10,c12-CLAの含量はそれぞれ49.3%と18.3%であった(c9,tl1-CLAの純度,73.0%)。
工程 重量 CLA含量(wt%) 異性体純度(%)
(g) c9,tll tlO,c12 c9,tll tlO,c12
原料(Gly-CLA) 2000 33.7 34.5 49.5 50.6
留分1-1 83 39.7 14.5 73.2 −
留分1-2 423 49.3 18.3 73.0 −
留分1-3 141 − − − −
残渣1-3 1145 23.4 43.5 35.0 65.0
留分2-1 544 28.2 34.4 45.1 54.9
留分2-2 52 − − − −
残渣2-2 343 14.0 57.3 − 80.4
留分3-1 220 13.2 58.3 − 81.5
留分3-2 40 − − − −
残渣3-2 221 − − − −
[実施例3] Candida rugosaリパーゼによるCLA異性体混合物のエステル化
CLA異性体混合物とL-メントールを等モルになるように調製した基質4g、水1mL、および種々の量のCandida rugosaリパーゼからなる反応混液を30℃で、16、40、70時間攪拌しながら反応させた。反応後、アルカリ条件下でヘキサン抽出し、メントールとメンチルエステルをヘキサン層に回収した。また水層画分に存在した脂肪酸石鹸は塩酸で酸性に戻して遊離体とし、これをヘキサンで抽出した。エステルを含む画分と遊離脂肪酸画分の脂肪酸組成を表3に示す。Candida rugosaのリパーゼはt10,cl2-CLAよりc9,t11-CLAをよく認識し、c9,t11-CLAはエステル化率が低いほどエステル画分に効率よく濃縮された。一方、t10,c12-CLAは、約45%のエステル化率で最も効率よく未反応遊離脂肪酸画分に濃縮することができた。
この濃縮効果は、既に報告されている同じ酵素を触媒としラウリルアルコールを基質とした選択的エステル化反応(2文献(McNailら(J.Am.Oil Chem.Soc.,76,1265-1268(1999))および本発明者らの論文(J.Am.Oil Chem.Soc.,79,303-308(2002))とほぼ同じであった。L-メントールは食品として利用されていることを考慮すると、食品として利用できるCLA異性体を分画する目的にL-メントールを活用することは非常に有効であることが分かった。
酵素量 反応時間 エステル化率 画分 CLA含量(wt%) 異性体純度(%)
(U/g) (h) (%) c9,tll tlO,c12 c9,tll tlO,c12
25 16 8.3 遊離脂肪酸 26.4 37.6 58.8
エステル 75.5 5.9 92.8
40 19.1 遊離脂肪酸 19.4 42.3 68.5
エステル 74.7 6.1 92.5
70 28.7 遊離脂肪酸 14.2 48.3 77.3
エステル 71.9 6.4 91.9
50 16 18.1 遊離脂肪酸 22.9 40.8 64.0
エステル 74.9 6.1 92.5
40 32.8 遊離脂肪酸 12.3 49.5 80.1
エステル 69.8 6.2 91.8
70 38.3 遊離脂肪酸 11.0 52.9 82.8
エステル 63.7 7.1 90.0
100 40 40.2 遊離脂肪酸 10.9 54.2 83.3
エステル 62.0 7.4 89.4
70 45.6 遊離脂肪酸 11.1 58.3 84.0
エステル 55.9 9.7 85.2
200 40 46.0 遊離脂肪酸 11.2 58.6 84.0
エステル 55.0 10.4 84.1
70 53.0 遊離脂肪酸 13.5 60.2 81.7
エステル 49.2 13.8 78.1
工程 重量 CLA含量(wt%) 異性体純度(%)
(g) c9,tll tlO,c12 c9,tll tlO,c12
原料(Gly-CLA) 800 33.7 34.5 49.5 50.6
第1工程のエステル
化反応液の分画
蒸留留分 66 39.7 14.5 73.2 −
へキサン抽出
遊離脂肪酸画分 224 11.8 60.0 − 83.6
エステル画分 296 59.4 9.6 86.1 −
第2工程のケン化
分解物の分画
へキサン抽出
遊離脂肪酸画分 178 58.9 9.6 86.1 −
実施例4の第2工程で得られた遊離脂肪酸画分(メンチルエステルの加水分解により得られたc9,t11-CLA含量の高い画分)とメントールを合わせて2.4 g(脂肪酸とメントールのモル比=1:1)、水0.6 g、および反応混液1 gに対して100 U のCandida rugosaリパーゼからなる反応混液を30℃で攪拌しながら40時間反応させた。反応後の油層の酸価から、エステル化率は61.2%であった。また油層のヘキサン抽出によりメンチルエステル画分を回収し、その脂肪酸組成を調べたところ、c9,t11-CLA含量は76.7%、t10,c12-CLA含量は2.3%であり、c9,t11-CLAの純度は97%であった。このようにCandida rugosaリパーゼによる選択的エステル化を2回繰り返すことにより、c9,t11-CLAの純度を上げることができる。
実施例4の第1工程で得られた遊離脂肪酸画分(t10,c12-CLA含量の高い画分)とメントールを合わせて2.4 g(脂肪酸とメントールのモル比=1:1)、水0.6 g、および反応混液1 gに対して100 U のCandida rugosaリパーゼからなる反応混液を30℃で攪拌しながら40時間反応させた。反応後の油層の酸価から、エステル化率は18.6%であった。また油層のヘキサン抽出により未反応の遊離脂肪酸画分を回収し、その脂肪酸組成を調べたところ、c9,t11-CLA含量は7.9%、t10,c12-CLA含量は68.3%であり、t10,c12-CLAの純度は90%であった。このようにCandida rugosaリパーゼによる選択的エステル化を2回繰り返すことにより、t10,c12-CLAの純度を上げることができる。
[実施例7]
ステロールを基質とした選択的エステル化と合成されたステリルエステルの選択的加水分解を組み合わせたCLA異性体分画プロセスの概略を図3に示し、操作の各段階における物質収支とCLA異性体の組成を表5に示す。
ステロール16.2gと共役リノール酸の異性体混合物55.8gを混合し(ステロールに対して5倍モル量の遊離脂肪酸)、さらに水48mLと反応液lg当たり500UのCandida rugosaリパーゼを加えて40℃で24時間攪拌しながらインキュベートした(ステロールに対するエステル化率,70.3%;脂肪酸に対するエステル化率,14.1%)。反応後、ヘキサン分画によりFFAとステリルエステルをそれぞれ43.2gと20.3g回収した。エステル画分には61.3%のc9,tll-CLAと9.4%のt10,cl2-CLAが含まれており、c9,t11-CLAの純度は1回のエステル化反応で49.5%から86.7%まで上昇した。一方遊離脂肪酸画分には27.0%のc9,t11-CLAと37.2%のt10,c12-CLAが含まれており、tlO,c12-CLAの純度は57.9%まで高めることができた。
遊離脂肪酸画分のtlO,cl2-CLAの純度を高めるために1回反応によって得られた遊離脂肪酸(43.2g)に等モル量のステロール(63.3g)を加え、さらに11.8 mlの水(10%)と反応液1g当たりIOOOUのCandida rugosaリパーゼを含む反応液を調製し、40℃で12時間攪拌しながらインキュベートした(エステル化率,17.5%)。エステル化率を高めるために5mm Hgで脱水しながらさらに24時間反応を続けた結果、エステル化率は46.3%まで上昇した。反応後、ヘキサン分画によりFFAとステリルエステルをそれぞれ14.3gと29.5g回収した。遊離脂肪酸画分は11.2%のc9,t11-CLAと58.3%のtl0,c12-CLAを含んでいた(tl0,c12-CLAの純度,83.9%)。
1回目のエステル化反応によって得られたステリルエステル(20.3g)に等量の水と反応液lgに対して200UのCandida rugosaリパーゼを加え、30℃で40時間攪拌しながらインキュベートした(加水分解率,65.6%)。反応後、ヘキサン分画により4.39gの遊離脂肪酸が回収でき、c9,t11-CLAとtlO,cl2-CLAの含量はそれぞれ71.2%と5.9%であった(c9,tll-CLAの純度,92.3%)。Candida rugosaリパーゼはt10,cl2-CLAよりc9,t11-CLAを基質として認識しやすい性質を持っている。この加水分解においても脂肪酸に対する選択性を引き出すことができc9,t11-CLAの純度を86.7%から92.3%まで高めることができた。
操作 画分 重量 CLA含量(wt%) 異性体純度(%)
(g) c9,tll tlO,c12 c9,tll tlO,c12
原料CLA − 55.8 33.7 34.5 49.5 50.6
エステル化 FFA 43.2 27.0 37.2 57.9
(1回目) エステル 20.3 61.3 9.4 86.7
エステル化
(2回目) FFA 14.3 11.2 58.3 83.9
1回目のエステル
化で得たステリル
エステルの加水分解 FFA 5.0 71.2 5.9 92.3
(1) CLA異性体混合物(CLA-80)とステロール(純度97%、タマセ生化学株式会社)の混合物3.0 g(CLAとステロールのモル比=2:1)、水0.2 ml、および反応混液1 gに対して150 または1000 UのCandida rugosaリパーゼからなる反応混液を40℃、20 mm Hgで攪拌しながら20時間反応させた。(2) CLA異性体混合物(CLA-80)とステロール、水を合計3.0 g(CLAとステロールのモル比=2:1、水分1, 10, 30, 50 wt%)、および反応混液1 gに対して150 または1000 UのC. rugosaリパーゼからなる反応混液を40℃、760 mm Hgで攪拌しながら20時間反応させた。反応後、油層の酸価およびガスクロマトグラフィー分析によりエステル化率を求めた(表6)。
表6
ステロールに対するエステル化率(%)
反応系 150U/g 1000U/g
20mmHgで反応 74.2 96.3
760mmHgで反応,水分量 1wt% 16.5 30.7
760mmHgで反応,水分量10wt% 23.9 35.2
760mmHgで反応,水分量30wt% 37.9 51.1
760mmHgで反応,水分量50wt% 35.7 52.4
常圧下(760 mm Hg)ではステロールに対するエステル化率は最大で50%程度であったが、減圧下で反応させることによりエステル化率を96%にまで高めることができた。エステル化反応の初期には水が必要であるが、エステル化の進行と共に初めから存在していた水、およびエステル化に伴って生成する水を取り除くことによってエステル化率が向上する。
CLA異性体混合物(CLA-80)とステロールの混合物3.0 g(CLAとステロールのモル比=5:1, 3:1, 2:1, 1.5:1, 1:1)、水0.2 ml、および反応混液1 gに対して1000 UのCandida rugosaリパーゼからなる反応混液を40℃、20 mm Hgで攪拌しながら20時間反応させた。反応後、油層の酸価およびガスクロマトグラフィー分析によりエステル化率を求めた(表7)。
表7
モル比(CLA:ステロール) ステロールに対するエステル化率(%)
5 : 1 96.4
3 : 1 96.8
2 : 1 96.3
1.5 : 1 90.9
1 : 1 37.9
ステロールに対して2倍モル以上のCLAを加えることにより、ステロールに対するエステル化率が96%以上になった。
CLA異性体混合物(CLA-80)とステロールの混合物3.0 g(CLAとステロールのモル比=2:1)、水0.2 ml、および反応混液1 gに対して50〜400 UのCandida rugosaリパーゼからなる反応混液を40℃、20 mm Hgで攪拌しながら20時間反応させた。反応後、油層の酸価およびガスクロマトグラフィー分析によりエステル化率を求めた。また反応液をアルカリ条件下でヘキサン抽出し、ステロールとステリルエステルをヘキサン層に回収した。水層画分に存在した脂肪酸石鹸は塩酸で酸性に戻して遊離脂肪酸とし、これをヘキサンで抽出した。反応後のエステル化率、エステルを含む画分と遊離脂肪酸画分の脂肪酸組成を表8に示す。
表8
酵素量 脂肪酸に ステロール 画分 CLA含量(wt%) 異性体純度(%)
対するエス に対する
テル化率 エステル化率
(U/g) (%) (%) c9,t11 t10,c12 c9,t11 t10,c12
50 14.7 29.4 遊離脂肪酸 28.7 39.4 57.8
エステル 64.7 14.9 81.2
100 21.4 42.8 遊離脂肪酸 25.4 42.4 62.6
エステル 62.5 15.4 80.2
150 32.1 64.1 遊離脂肪酸 20.7 46.3 69.1
エステル 59.7 17.0 77.9
200 43.3 86.6 遊離脂肪酸 16.8 50.6 75.0
エステル 55.5 19.1 74.4
300 45.5 91.0 遊離脂肪酸 16.3 51.8 76.0
エステル 55.1 19.8 73.6
400 48.3 96.5 遊離脂肪酸 17.5 51.3 74.5
エステル 51.9 22.0 74.4
c9,t11-CLAはエステル化率が低いほどエステル画分に効率よく濃縮された。一方、t10,c12-CLAは脂肪酸に対するエステル化率45.5%の時に最も効率よく未反応遊離脂肪酸画分に濃縮することができた。
エステル画分におけるc9,t11-CLAの純度は本発明の実施例7(1回目のエステル化反応)に比べて低かったが、未反応の遊離脂肪酸画分のt10,c12-CLAの純度は高かった。実施例7では常圧下で水を含む反応であり、エステル化が進行しにくいので脂肪酸を過剰量添加している。そのため、脂肪酸に対するエステル化率が非常に低いところで反応を停止させなければならないので、c9,t11-CLAの純度が高く、t10,c12-CLAの純度が低くなるのである。一方、本実施例のように減圧下で反応させるとエステル化が進行しやすくなるため、反応系に添加する脂肪酸量を実施例7よりも減らすことができる。その結果、脂肪酸に対するエステル化率が上昇し、t10,c12-CLAの純度を高めることができた。
ステロールの選択的エステル化反応を利用したときのCLA異性体の分画効率は、ラウリルアルコールを基質とした選択的エステル化反応(J. Am. Oil Chem. Soc., 79, 303-308(2002))およびメントールを基質とした選択的エステル化反応(本発明の実施例3)よりも悪いが、CLAトリグリセリドを基質とした選択的加水分解反応(本発明の実施例1,2)よりも良い。
CLA異性体混合物(CLA-HG)とステロールの混合物2000 g(CLAとステロールのモル比=2:1)、水50 ml、および反応混液1 gに対して300 U/gのCandida rugosaリパーゼからなる反応混液を40℃、20 mm Hgで攪拌しながら26時間反応させた。このときの脂肪酸に対するエステル化率は40.3%であった。反応後の油層のセライト濾過と脱水を行った後、190℃, 0.2 mm Hgで分子蒸留し、脂肪酸を含む留分1を除去した。次いで残渣を230℃, 0.03 mm Hgで分子蒸留し、留分2と残渣2を得た。これらの工程における物質収支を表9に、脂肪酸組成を表10に示す。
表9
酸価 全重量 遊離脂肪酸 ステロール エステル
(mgKOH/g) (g) (g) (g) (g)
反応前 115.4 2100 1212 888 0
反応後 65.5 2004 690 155 1159
脱水後 65.7 1919 654 145 1120
蒸留
留分1 202.1 346 342 4 0
留分2 144.0 368 276 88 4
残渣2 1.5 1147 9 50 1088
表10
CLA含量(wt%) 異性体純度(%)
c9,t11 t10,c12 c9,t11 t10,c12
反応前 37.0 38.7 48.9 51.1
反応後 遊離脂肪酸画分 21.5 52.2 70.8
エステル画分 61.0 21.9 73.6
蒸留
留分1 21.1 49.4 70.8
留分2 21.8 53.5 71.0
残渣2 60.9 23.5 72.1
選択的エステル化反応と蒸留を組み合わせることにより、c9,t11-CLA含量の高いステリルエステル(残渣2)、およびt10,c12-CLA含量の高い遊離脂肪酸(留分1と2)が得られた。なお、未反応のステロールは留分2と残渣2の両方に移行した。
実施例11で得た残渣2(c9,t11-CLA含量の高いエステル画分) 2.4 g、水0.6 g、および反応混液1 gに対して25から1600U のCandida rugosaリパーゼからなる反応混液を760 mm Hg、40℃で攪拌しながら20時間反応させた。反応後、油層の酸価およびガスクロマトグラフィー分析により加水分解率を推定した。また油層のヘキサン抽出により遊離脂肪酸画分を回収した。表11に結果を示す。
表11
遊離脂肪酸画分における
酵素量 加水分解率 c9,t11含量 t10,c12含量 c9,t11純度 c9,t11収率
(U/g) (%) (wt%) (wt%) (%) (%)
反応前(残渣2) − 60.9 23.5 72.1 −
25 8.1 82.5 6.5 92.7 11.0
50 17.8 82.8 6.5 92.7 24.3
75 29.0 80.8 6.2 92.9 38.5
100 39.6 75.7 7.4 91.1 49.2
150 44.4 73.0 8.7 89.4 53.3
200 46.6 70.5 9.8 87.8 54.0
400 50.9 66.5 12.3 84.4 55.6
800 54.6 63.8 16.3 79.7 57.2
1600 56.6 62.2 16.8 78.8 57.8
c9,t11-CLAに作用性の高いCandida rugosaリパーゼ(Lipase-OF)を用いて、c9,t11-CLA含量の高いステリルエステルを加水分解すれば、ステリルエステルに結合しているCLAよりもさらにc9,t11-CLA含量の高い遊離脂肪酸を得ることができる。この時、加水分解率が低いほどc9,t11-CLAの純度は高い。
従来技術であるc9,t11-CLA含量の高いラウリルエステル、c9,t11-CLA含量の高いメントールエステル(本発明の実施例3,4)をそれぞれ遊離脂肪酸に変換するとき、効率の良い加水分解には化学法を採用しなければならい。化学法では反応容器が大きくなりCLAの変性の危険がある。またCLA異性体の選択性がないため、加水分解によりc9,t11-CLAの純度を上げることができない。しかし本方法では、穏和な条件下での酵素を用いたステリルエステルの選択的加水分解が可能であり、かつc9,t11-CLAの純度を上げることができる。
なお反応混液からの遊離脂肪酸の回収には、蒸留、溶媒分画(ヘキサン、メタノール、エタノールなど)、クロマトグラフィーなどの方法が使用できる。
実施例11で得た留分1と2の混合物(t10,c12-CLA含量の高い遊離脂肪酸画分)とステロールをあわせて3.0 g(CLAとステロールのモル比=2:1)、水0.2 g、および反応混液1 gに対して25から1000U のCandida rugosaリパーゼからなる反応混液を20 mm Hg、40℃で攪拌しながら20時間反応させた。反応後、油層の酸価およびガスクロマトグラフィー分析によりエステル化率を推定した。また油層のヘキサン抽出により未反応の遊離脂肪酸画分を回収した。表12に結果を示す。
表12
脂肪酸に対する 遊離脂肪酸画分における
酵素量 エステル化率 c9,t11含量 t10,c12含量 t10,c12純度 t10,c12収率
(U/g) (%) (wt%) (wt%) (%) (%)
反応前(残渣2) − 21.5 51.4 70.5 −
50 12.3 17.7 54.6 75.5 13.1
100 28.9 10.7 62.7 85.4 35.3
200 34.6 10.0 63.9 86.5 43.0
300 43.3 8.6 65.3 88.4 55.0
400 47.1 6.9 65.2 90.4 59.8
500 48.3 11.1 65.8 85.6 61.8
1000 49.3 18.2 57.9 76.1 55.5
Candida rugosaリパーゼを用いてt10,c12-CLA含量の高い遊離脂肪酸画分(留分1と2の混合物)をステロールでエステル化し、反応混液から未反応の遊離脂肪酸を回収すれば、t10,c12-CLA含量をより高めた遊離脂肪酸画分を得ることができる。この時、脂肪酸に対するエステル化率が47%の時、t10,c12-CLAの純度が最大になった。
なお反応混液からの遊離脂肪酸の回収には、蒸留、溶媒分画(ヘキサン、メタノール、エタノールなど)、クロマトグラフィーなどの方法が使用できる。
例1 (重量%)
脂肪食品(スプレッド) 100g
脂肪相
CLAグリセリド 10
サフラワー油 30
ハイモノ7804 0.3
着色料 0.02
水相
水 56.44
スキムミルクパウダー 1.5
ゼラチン 1.5
ソルビン酸カリウム 0.15%
クエン酸粉末 0.07%
例2 (重量%)
脂肪食品(ドレッシング) 100g
CLAグリセリド 15.0
サフラワー油 10.0
マルトデキストリン 20.0
乾燥卵黄 0.8
キサンタンガム 0.4
ビネガー 5.0
水 48.8
例3 (重量%)
脂肪食品(アイスクリーム) 100g
CLAグリセリド 10.0
脂肪粉乳 10.0
結晶砂糖 12.0
透明シロップ 4.0
無水デキストロース 2.0
水 62.0
例4 (重量%)
脂肪食品(マヨネーズ) 100g
CLAグリセリド 20
サフラワー油 60
卵黄 8.0
食酢 3.0
砂糖 1.5
食塩 1.0
香辛料 2.0
水 4.5
Claims (2)
- リパーゼの存在下、共役リノール酸の異性体混合物を、有機溶媒を含まない反応系で、食品加工に利用できるステロールと選択的エステル化し、得られたc9,tll-共役リノール酸を濃縮させたステリルエステル画分を選択的に加水分解することによって、c9,t11-共役リノール酸高含有脂肪酸を得ることを特徴とする、共役リノール酸異性体の精製方法。
- 共役リノール酸異性体分画用のリパーゼが、Candida rugosaまたはGeotrichum candidumが産生するリパーゼであることを特微とする、請求項1に記載の方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2007092849A JP4510045B2 (ja) | 2003-01-31 | 2007-03-30 | 共役リノール酸異性体の精製方法およびその用途 |
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2003024345 | 2003-01-31 | ||
JP2007092849A JP4510045B2 (ja) | 2003-01-31 | 2007-03-30 | 共役リノール酸異性体の精製方法およびその用途 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2004023810A Division JP2004248671A (ja) | 2003-01-31 | 2004-01-30 | 共役リノール酸異性体の精製方法およびその用途 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2007175067A true JP2007175067A (ja) | 2007-07-12 |
JP4510045B2 JP4510045B2 (ja) | 2010-07-21 |
Family
ID=38300870
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2007092849A Expired - Lifetime JP4510045B2 (ja) | 2003-01-31 | 2007-03-30 | 共役リノール酸異性体の精製方法およびその用途 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP4510045B2 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106795540A (zh) * | 2014-08-11 | 2017-05-31 | 斯蒂潘公司 | 富含瘤胃酸的共轭亚油酸 |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1999056781A1 (en) * | 1998-05-04 | 1999-11-11 | Conlinco, Inc. | Methods of using isomer enriched conjugated linoleic acid compositions |
JPH11514887A (ja) * | 1995-11-14 | 1999-12-21 | ロダース・クロックラーン・ビー・ブイ | 長鎖多不飽和脂肪酸の含有量が高い材料の調製方法 |
JP2000023689A (ja) * | 1998-05-12 | 2000-01-25 | Loders Croklaan Bv | トランス―10異性体中の化合物の濃縮方法 |
JP2000247965A (ja) * | 1999-03-01 | 2000-09-12 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | 共役リノール酸エステル、その製造法及びその利用 |
JP2001169794A (ja) * | 1999-12-15 | 2001-06-26 | Asahi Denka Kogyo Kk | 共役リノール酸異性体の精製方法 |
JP2002060372A (ja) * | 2000-06-19 | 2002-02-26 | Loders Croklaan Bv | 共役リノール酸エステル |
-
2007
- 2007-03-30 JP JP2007092849A patent/JP4510045B2/ja not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH11514887A (ja) * | 1995-11-14 | 1999-12-21 | ロダース・クロックラーン・ビー・ブイ | 長鎖多不飽和脂肪酸の含有量が高い材料の調製方法 |
WO1999056781A1 (en) * | 1998-05-04 | 1999-11-11 | Conlinco, Inc. | Methods of using isomer enriched conjugated linoleic acid compositions |
JP2000023689A (ja) * | 1998-05-12 | 2000-01-25 | Loders Croklaan Bv | トランス―10異性体中の化合物の濃縮方法 |
JP2000247965A (ja) * | 1999-03-01 | 2000-09-12 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | 共役リノール酸エステル、その製造法及びその利用 |
JP2001169794A (ja) * | 1999-12-15 | 2001-06-26 | Asahi Denka Kogyo Kk | 共役リノール酸異性体の精製方法 |
JP2002060372A (ja) * | 2000-06-19 | 2002-02-26 | Loders Croklaan Bv | 共役リノール酸エステル |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106795540A (zh) * | 2014-08-11 | 2017-05-31 | 斯蒂潘公司 | 富含瘤胃酸的共轭亚油酸 |
EP3180439A4 (en) * | 2014-08-11 | 2018-01-03 | Stepan Company | Rumenic acid rich conjugated linoleic acid |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP4510045B2 (ja) | 2010-07-21 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
KR100684642B1 (ko) | 어유 유래 글리세라이드 유지 조성물 및 이의 제조방법 | |
JP4530311B2 (ja) | リパーゼを用いたグリセライドの製造方法 | |
EP1966387B1 (en) | Process for the production of diacylglycerol | |
US7538238B2 (en) | Production method of oil or fat containing polyunsaturated fatty acid-containing triglyceride | |
KR20130111233A (ko) | 리파아제에 의한 고도 불포화 지방산 함유 유지의 제조 방법 | |
JP3970669B2 (ja) | 共役脂肪酸含有モノグリセリドおよびその製造方法 | |
JPWO2012118173A1 (ja) | リパーゼによる高度不飽和脂肪酸含有油脂の製造方法 | |
EP1792999A2 (de) | Verfahren zur enzymatischen Synthese von Triglyceriden | |
JP3840459B2 (ja) | グリセリドおよびその製造方法 | |
JP2004248671A (ja) | 共役リノール酸異性体の精製方法およびその用途 | |
JP2007070486A (ja) | グリセリド及びその製造方法 | |
JP4510045B2 (ja) | 共役リノール酸異性体の精製方法およびその用途 | |
JP3853767B2 (ja) | 共役脂肪酸メントールエステルおよびその製造方法 | |
JP4335196B2 (ja) | 共役脂肪酸含有モノグリセリドおよびその製造方法 | |
JPH08214892A (ja) | 高度不飽和脂肪酸含有部分グリセリドの製造方法 | |
JP4310387B2 (ja) | ω−3系高度不飽和脂肪酸含有部分グリセリド組成物及びその製造方法 | |
JPH11263750A (ja) | 長鎖不飽和脂肪酸メントールエステルおよび酵素法によるその製造方法 | |
JP7382942B2 (ja) | リパーゼ加水分解反応を用いるドコサヘキサエン酸含有グリセリドの製造方法 | |
JPS6115692A (ja) | 長鎖高度不飽和脂肪酸グリセリドの濃縮法 | |
JP2001245686A (ja) | 脂肪酸低級アルコールエステルの製造方法 | |
KR101034458B1 (ko) | 피놀레닌산 고함유 δ5-지방산의 제조방법 | |
JP2004331607A (ja) | 共役脂肪酸のポリグリセリンエステルおよびその製造方法 | |
JP5648783B2 (ja) | 新規リパーゼ及びこれを用いた機能性脂質の合成方法 | |
JPH01215286A (ja) | 酵素の改質方法および油脂の加水分解方法 | |
KR20150111257A (ko) | 에키움 오일로부터 농축된 스테아리돈산을 회수하는 방법 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20070419 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20081006 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20081007 |
|
RD03 | Notification of appointment of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7423 Effective date: 20090331 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20100115 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20100316 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20100402 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20100428 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130514 Year of fee payment: 3 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 4510045 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313115 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
EXPY | Cancellation because of completion of term |