JP2007001924A - Skin care preparation - Google Patents

Skin care preparation Download PDF

Info

Publication number
JP2007001924A
JP2007001924A JP2005183631A JP2005183631A JP2007001924A JP 2007001924 A JP2007001924 A JP 2007001924A JP 2005183631 A JP2005183631 A JP 2005183631A JP 2005183631 A JP2005183631 A JP 2005183631A JP 2007001924 A JP2007001924 A JP 2007001924A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
extract
skin
hyaluronic acid
collagen
synthesis promoter
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
JP2005183631A
Other languages
Japanese (ja)
Other versions
JP4167247B2 (en
Inventor
Akinori Tabata
明徳 田畑
Kaname Nakagawa
要 中川
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
OPPEN KESHOHIN KK
Original Assignee
OPPEN KESHOHIN KK
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by OPPEN KESHOHIN KK filed Critical OPPEN KESHOHIN KK
Priority to JP2005183631A priority Critical patent/JP4167247B2/en
Publication of JP2007001924A publication Critical patent/JP2007001924A/en
Application granted granted Critical
Publication of JP4167247B2 publication Critical patent/JP4167247B2/en
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide an anti-aging agent, a cell activator, a collagen synthesis promoter, a hyaluronic acid synthesis promoter and a skin care preparation, each capable of preventing and ameliorating wrinkles, fleckles, somberness, skin texture vanishment, skin resilience decline, etc., associated with skin aging by activating fibroblast constituting the dermis and thereby promoting the synthesis of collagen and hyaluronic acid. <P>SOLUTION: The anti-aging agent, the cell activator, the collagen synthesis promoter, the hyaluronic acid synthesis promoter and the skin care preparation, each containing, as active ingredient, Commelinaceae communis var. hortensis extract, are provided, respectively. <P>COPYRIGHT: (C)2007,JPO&INPIT

Description

本発明は、ツユクサ科(Commelinaceae)の植物であるオウボウシバナ(C.communis var. hortensis)の抽出物を有効成分として含む抗老化剤、細胞賦活剤、コラーゲン合成促進剤、ヒアルロン酸合成促進剤および皮膚外用剤に関する。   The present invention relates to an anti-aging agent, a cell activator, a collagen synthesis promoter, a hyaluronic acid synthesis promoter, and a skin containing an extract of C. communis var. Hortensis, which is a plant of the Commelinaceae family It relates to an external preparation.

皮膚を構成する真皮は主に線維芽細胞およびマトリックス成分からなっている。線維芽細胞はコラーゲンなどのタンパク質およびヒアルロン酸などのグリコサミノグリカンを産生して、結合組織を形成し、皮膚に重要な役割を果たしている。そのため、コラーゲンやヒアルロン酸などが減少すると、皮膚が老化し、シワ、しみ、くすみ、きめの消失、弾力性の低下などが起こることになる。   The dermis that constitutes the skin is mainly composed of fibroblasts and matrix components. Fibroblasts produce proteins such as collagen and glycosaminoglycans such as hyaluronic acid to form connective tissue and play an important role in the skin. Therefore, when collagen, hyaluronic acid, etc. decrease, the skin ages and wrinkles, spots, dullness, disappearance of texture, loss of elasticity, etc. occur.

このようなコラーゲンやヒアルロン酸の機能に着目して、従来より、ニワトリのトサカなどに含まれるヒアルロン酸が化粧料に配合されている。しかし、ヒアルロン酸は高分子であるため、それを配合した化粧料を皮膚に直接塗布しても吸収されにくいという問題があった。そこで、これまで、線維芽細胞を活性化することで、細胞自らのコラーゲンやヒアルロン酸の合成を促進させることができる皮膚外用剤が模索されてきた。   Focusing on the functions of such collagen and hyaluronic acid, hyaluronic acid contained in chicken tosaka and the like has been conventionally blended in cosmetics. However, since hyaluronic acid is a polymer, there is a problem that it is difficult to absorb even if a cosmetic containing the hyaluronic acid is directly applied to the skin. Thus, an external preparation for skin that can activate synthesis of collagen and hyaluronic acid by activating fibroblasts has been sought.

ところで、これまでに多くの植物抽出物が種々の生理作用を有することが知られている。たとえば、オウボウシバナの場合、その抽出物が血糖上昇抑制作用を有することが知られている(特許文献1参照)。しかし、オウボウシバナ抽出物を皮膚に塗布することで線維芽細胞が活性化され、細胞によるコラーゲンやヒアルロン酸の合成が促進されることについては知られていなかった。   By the way, it has been known that many plant extracts have various physiological effects. For example, in the case of the long-bellied beetle, it is known that the extract has a blood glucose rise inhibitory action (see Patent Document 1). However, it has not been known that fibroblasts are activated by applying an extract of the burrow extract to the skin and the synthesis of collagen and hyaluronic acid by the cells is promoted.

特開2002−316935号公報JP 2002-316935 A

本発明は、真皮を構成している線維芽細胞を活性化させ、細胞によるコラーゲンおよびヒアルロン酸の合成を促進させることで、老化に伴うシワ、しみ、くすみ、きめの消失、弾力性の低下などを予防、改善できる抗老化剤、細胞賦活剤、コラーゲン合成促進剤、ヒアルロン酸合成促進剤および皮膚外用剤を提供することを目的とする。   The present invention activates fibroblasts constituting the dermis and promotes the synthesis of collagen and hyaluronic acid by the cells, thereby causing wrinkles, spots, dullness, disappearance of texture, loss of elasticity, etc. accompanying aging An object of the present invention is to provide an anti-aging agent, a cell activator, a collagen synthesis promoter, a hyaluronic acid synthesis promoter, and a skin external preparation that can prevent and improve the above.

前記課題を解決するために鋭意検討した結果、オウボウシバナ抽出物を皮膚に塗布することで線維芽細胞を活性化させることができ、その結果、細胞によるコラーゲンおよびヒアルロン酸の合成を促進させることができることを見出し、本発明を完成するに至った。   As a result of intensive studies to solve the above-mentioned problems, it is possible to activate fibroblasts by applying an extract of sorghum on the skin, and as a result, it is possible to promote the synthesis of collagen and hyaluronic acid by the cells. As a result, the present invention has been completed.

すなわち、本発明は、オウボウシバナ抽出物を有効成分として含む抗老化剤、細胞賦活剤、コラーゲン合成促進剤、ヒアルロン酸合成促進剤および皮膚外用剤に関する。   That is, the present invention relates to an anti-aging agent, a cell activator, a collagen synthesis promoter, a hyaluronic acid synthesis promoter, and an external preparation for skin, which contain a warbler extract as an active ingredient.

本発明によれば、真皮を構成している線維芽細胞を活性化させ、細胞によるコラーゲンおよびヒアルロン酸の合成を促進させることで、老化に伴うシワ、しみ、くすみ、きめの消失、弾力性の低下などを予防、改善できる。   According to the present invention, by activating the fibroblasts constituting the dermis and promoting the synthesis of collagen and hyaluronic acid by the cells, wrinkles, spots, dullness, disappearance of texture, elasticity of aging Can prevent and improve the decline.

本発明は、オウボウシバナ抽出物を有効成分として含有する抗老化防止剤、細胞賦活剤、コラーゲン合成促進剤、ヒアルロン酸合成促進剤、皮膚外用剤に関する。   The present invention relates to an anti-aging agent, a cell activator, a collagen synthesis promoter, a hyaluronic acid synthesis promoter, and an external preparation for skin, which contains an extract of Syringa as an active ingredient.

オウボウシバナ(Commelinaceae communis var. hortensis)は、従来より染物や食用にも用いられている安全性の高いツユクサ科の植物である。本発明においては、植物体の全草(茎、葉、根、花などの各種部位)または一部をそのままか、その乾燥物からオウボウシバナ抽出物を得ることができる。   The long-horned beetle (Commelinaceae communis var. Hortensis) is a highly safe camellia plant that has been used for dyeing and food. In the present invention, an extract of burdock can be obtained from the whole plant (various parts such as stems, leaves, roots, flowers, etc.) or a part thereof, or a dried product thereof.

抽出に用いる溶媒としては、とくに限定されないが、たとえば、水;メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、イソプロパノール、イソブタノール、n−ヘキサノール、メチルアミルアルコール、2−エチルブタノール、n−オクチルアルコールなどのアルコール類;グリセリン、エチレングリコール、エチレングリコールモノメチルエーテル、エチレングリコールモノエチルエーテル、プロピレングリコール、プロピレングリコールモノメチルエーテル、プロピレングリコールモノエチルエーテル、トリエチレングリコール、1,3−ブチレングリコール、ヘキシレングリコールなどの多価アルコール;酢酸エチル、酢酸ブチル、プロピオン酸メチル、ギ酸メチルなどのエステル類;アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン類;エチルエーテル、イソプロピルエーテル、テトラヒドロフランなどのエーテル類;ヘキサン、トルエン、クロロホルム、塩化メチレンなどの炭化水素系溶媒などがあげられる。これらは単独または2種以上を組み合わせて用いることができる。これらのなかでも、安全性、皮膚外用剤としての利便性という点から水およびアルコール類が好ましく、水およびエタノールがより好ましい。   Although it does not specifically limit as a solvent used for extraction, For example, water; Alcohols, such as methanol, ethanol, propanol, butanol, isopropanol, isobutanol, n-hexanol, methyl amyl alcohol, 2-ethyl butanol, n-octyl alcohol Polyhydric alcohols such as glycerin, ethylene glycol, ethylene glycol monomethyl ether, ethylene glycol monoethyl ether, propylene glycol, propylene glycol monomethyl ether, propylene glycol monoethyl ether, triethylene glycol, 1,3-butylene glycol, hexylene glycol Esters such as ethyl acetate, butyl acetate, methyl propionate and methyl formate; keto such as acetone and methyl ethyl ketone S; ethyl ether, ethers such as isopropyl ether, tetrahydrofuran; hexane, toluene, chloroform, hydrocarbon solvents such as methylene chloride. These can be used alone or in combination of two or more. Among these, water and alcohols are preferable from the viewpoint of safety and convenience as a skin external preparation, and water and ethanol are more preferable.

たとえば、溶媒として水とエタノールを併用する場合、両者の割合は任意であっても良好にオウボウシバナ抽出物を得ることができるが、なかでも、細胞賦活剤として用いる場合は、抽出溶媒はエタノール濃度が0〜100容量%であることが好ましく、0〜50容量%であることがより好ましい。また、コラーゲン合成促進剤として用いる場合は、抽出溶媒はエタノール濃度が0〜100容量%であるのが好ましく、0〜50容量%であることがより好ましい。さらに、ヒアルロン酸合成促進剤として用いる場合は、抽出溶媒はエタノール濃度20〜100容量%であることが好ましく、50〜100容量%であることがより好ましい。   For example, when water and ethanol are used in combination as a solvent, an extract of S. aureus can be obtained satisfactorily even if the ratio of the two is arbitrary. Especially, when used as a cell activator, the extraction solvent has an ethanol concentration. It is preferably 0 to 100% by volume, and more preferably 0 to 50% by volume. When used as a collagen synthesis promoter, the extraction solvent preferably has an ethanol concentration of 0 to 100% by volume, more preferably 0 to 50% by volume. Furthermore, when used as a hyaluronic acid synthesis promoter, the extraction solvent preferably has an ethanol concentration of 20 to 100% by volume, more preferably 50 to 100% by volume.

抽出方法としては、とくに限定されないが、浸漬または加熱還流などの方法があげられる。溶媒の量は、粉砕したオウボウシバナ100重量部に対して、100〜100000重量部であることが好ましく、500〜10000重量部であることがより好ましい。溶媒が100重量部未満であると、抽出効率が悪くなる傾向があり、また100000重量部をこえて添加してもさらなる抽出効率の向上が望めないうえに、濃縮・精製工程に時間がかかり製造効率が劣る傾向がある。また、温度については、浸漬させる場合には、温度は室温で行うこともできるが、0〜95℃が好ましく、また、1〜7日間浸漬することが好ましい。これらの抽出操作は単回、または2〜数回繰り返すこともできる。   Although it does not specifically limit as an extraction method, Methods, such as immersion or heating reflux, are mention | raise | lifted. The amount of the solvent is preferably 100 to 100,000 parts by weight, and more preferably 500 to 10,000 parts by weight with respect to 100 parts by weight of the pulverized warbler. If the solvent is less than 100 parts by weight, the extraction efficiency tends to deteriorate, and even if added over 100,000 parts by weight, further improvement in the extraction efficiency cannot be expected, and the concentration and purification process takes time. It tends to be inefficient. Moreover, about temperature, when making it immerse, although temperature can also be performed at room temperature, 0-95 degreeC is preferable and it is preferable to immerse for 1 to 7 days. These extraction operations can be repeated once or two to several times.

得られた抽出物は、そのまま使用してもよいが、不純物の除去や脱臭、脱色、濃縮などの精製を、ろ過、ゲルろ過、遠心分離、クロマトグラフィー、蒸留、分配法などにより行ってもよい。また、スプレードライ法や凍結乾燥法などにより溶媒を除去して乾固物の形態とすることもでき、さらに精製水などの溶媒に可溶化した形態や乳剤の形態とすることもできる。   The obtained extract may be used as it is, but may be purified by removal of impurities, deodorization, decolorization, concentration, etc. by filtration, gel filtration, centrifugation, chromatography, distillation, distribution method, etc. . Further, the solvent can be removed by a spray drying method or a freeze drying method to obtain a dry solid form, or a form solubilized in a solvent such as purified water or an emulsion form.

本発明の抗老化剤、細胞賦活剤、コラーゲン合成促進剤、ヒアルロン酸合成促進剤および皮膚外用剤は、前記オウボウシバナ抽出物を有効成分として配合することで製造される。オウボウシバナ抽出物は、それ自体で細胞賦活、コラーゲン合成促進、ヒアルロン酸合成促進などの作用を有するので、抽出物を単独で使用することもできるが、たとえば、外用剤基剤に通常用いられる油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、低級アルコール類、高級アルコール類、多価アルコール類、エステル類、水溶性高分子、界面活性剤、保湿剤、抗炎症剤、紫外線吸収剤、防腐剤、防カビ剤、香料、顔料、賦形剤、酸化防止剤、美容成分、化粧料安定化剤などを含有させてもよい。また、前記オウボウシバナ抽出物以外にも、その他の細胞賦活剤、抗老化防止剤、コラーゲン合成促進剤、ヒアルロン酸合成促進剤などを併用することができる。   The anti-aging agent, cell activator, collagen synthesis promoter, hyaluronic acid synthesis promoter, and external preparation for skin of the present invention are produced by blending the above-mentioned extract of scallop as an active ingredient. As for the extract of burdock, it itself has cell activation, collagen synthesis promotion, hyaluronic acid synthesis promotion, etc., so the extract can be used alone, but for example, fats and oils that are usually used for bases for external use Waxes, hydrocarbons, fatty acids, lower alcohols, higher alcohols, polyhydric alcohols, esters, water-soluble polymers, surfactants, moisturizers, anti-inflammatory agents, UV absorbers, preservatives, An antifungal agent, a fragrance, a pigment, an excipient, an antioxidant, a cosmetic ingredient, a cosmetic stabilizer, and the like may be contained. Further, in addition to the above-mentioned extract of the scabbard, other cell activators, anti-aging agents, collagen synthesis promoters, hyaluronic acid synthesis promoters, and the like can be used in combination.

本発明の皮膚外用剤としては、たとえば、シワ予防改善用外用剤、皮膚老化防止用化粧料、日焼け止め化粧料、皮膚保護用化粧料、美白化粧料、ファンデーションやその他の医薬部外品などがあげられる。   Examples of the external preparation for skin of the present invention include an external preparation for improving wrinkle prevention, a cosmetic for skin aging prevention, a sunscreen cosmetic, a cosmetic for skin protection, a whitening cosmetic, a foundation and other quasi drugs. can give.

本発明において、前記オウボウシバナ抽出物の配合量は、とくに限定されないが、好ましくは0.00001〜10重量%であり、より好ましくは0.001〜1重量%である。配合量が0.00001重量%未満であると、抗老化効果、細胞賦活効果、コラーゲン合成促進効果、ヒアルロン酸合成促進効果を充分に発現させることができない傾向があり、また、10重量%をこえても、それに応じた効果の発現が望めない傾向がある。   In the present invention, the blending amount of the above-mentioned extract is not particularly limited, but is preferably 0.00001 to 10% by weight, more preferably 0.001 to 1% by weight. If the blending amount is less than 0.00001% by weight, the anti-aging effect, the cell activation effect, the collagen synthesis promoting effect, and the hyaluronic acid synthesis promoting effect tend not to be sufficiently expressed, and more than 10% by weight. However, there is a tendency that an effect corresponding to that cannot be expected.

本発明の抗老化剤、細胞賦活剤、コラーゲン合成促進剤、ヒアルロン酸合成促進剤および皮膚外用剤は、ローション剤、乳剤、ゲル剤、ゾル剤、クリーム、軟膏、パウダー、スプレーなどの種々の形態とすることができる。また、皮膚外用剤として、とくに化粧料の形態で用いる場合は、化粧水、乳液、クリーム、美容液、パック剤、洗顔料などの皮膚用化粧料、メイクアップベースローション、メイクアップベースクリーム、ファンデーション、リキッドファンデーション、口紅などのメイクアップ化粧料、ハンドクリーム、レッグクリーム、ボディローション、ボディソープ、石鹸などの身体用化粧料、シャンプー、リンス、養毛剤などの頭髪用化粧料とすることができる。   The anti-aging agent, cell activator, collagen synthesis promoter, hyaluronic acid synthesis promoter and skin external preparation of the present invention are in various forms such as lotion, emulsion, gel, sol, cream, ointment, powder, spray and the like. It can be. In addition, when used as a skin external preparation, especially in the form of cosmetics, skin cosmetics such as lotions, emulsions, creams, cosmetics, packs, face wash, makeup base lotions, makeup base creams, foundations Makeup cosmetics such as liquid foundation and lipstick, body cosmetics such as hand cream, leg cream, body lotion, body soap and soap, and cosmetics for hair such as shampoo, rinse and hair nourishing agent.

つぎに、実施例にもとづいて、本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらによって何ら限定されるものではない。   Next, the present invention will be described in more detail based on examples, but the present invention is not limited thereto.

製造例1
乾燥させたオウボウシバナ(C. communis var. hortensis)の全草を適当な大きさに切断した。切断した全草1g(乾燥重量)に対して、抽出溶媒として精製水50mlを加えて、冷蔵庫(4℃)で5日間静置して抽出した。抽出液を1/10に濃縮し、凍結乾燥させた。乾燥粉末として147.5mgのオウボウシバナ抽出物を得た。
Production Example 1
The dried whole plant of C. communis var. Hortensis was cut to an appropriate size. To 1 g (dry weight) of the whole cut grass, 50 ml of purified water was added as an extraction solvent, and the mixture was left to stand in a refrigerator (4 ° C.) for 5 days for extraction. The extract was concentrated to 1/10 and lyophilized. As a dry powder, 147.5 mg of Scutella napus extract was obtained.

製造例2
抽出溶媒として精製水の代わりに5%エタノール水溶液を用いた以外は、製造例1と同様にオウボウシバナ抽出物を得た。乾燥粉末として145.5mgのオウボウシバナ抽出物を得た。
Production Example 2
As the extraction solvent, an extract of Oboushibana was obtained in the same manner as in Production Example 1, except that 5% ethanol aqueous solution was used instead of purified water. As a dry powder, 145.5 mg of Scutella napus extract was obtained.

製造例3
抽出溶媒として精製水の代わりに10%エタノール水溶液を用いた以外は、製造例1と同様にオウボウシバナ抽出物を得た。乾燥粉末として145.0mgのオウボウシバナ抽出物を得た。
Production Example 3
As the extraction solvent, an extract of Oboushibana was obtained in the same manner as in Production Example 1, except that 10% ethanol aqueous solution was used instead of purified water. As a dry powder, 145.0 mg of Scutella napus extract was obtained.

製造例4
抽出溶媒として精製水の代わりに20%エタノール水溶液を用いた以外は、製造例1と同様にオウボウシバナ抽出物を得た。乾燥粉末として142.5mgのオウボウシバナ抽出物を得た。
Production Example 4
As the extraction solvent, an extract of Obobushi bana was obtained in the same manner as in Production Example 1 except that 20% ethanol aqueous solution was used instead of purified water. As a dry powder, 142.5 mg of Scutella napus extract was obtained.

製造例5
抽出溶媒として精製水の代わりに50%エタノール水溶液を用いた以外は、製造例1と同様にオウボウシバナ抽出物を得た。乾燥粉末として119.5mgのオウボウシバナ抽出物を得た。
Production Example 5
As the extraction solvent, an extract of burdock was obtained in the same manner as in Production Example 1, except that 50% ethanol aqueous solution was used instead of purified water. As a dry powder, 119.5 mg of Scutella napus extract was obtained.

製造例6
抽出溶媒として精製水の代わりに80%エタノール水溶液を用いた以外は、製造例1と同様にオウボウシバナ抽出物を得た。乾燥粉末として65.0mgのオウボウシバナ抽出物を得た。
Production Example 6
As the extraction solvent, an extract of Oboushibana was obtained in the same manner as in Production Example 1, except that 80% ethanol aqueous solution was used instead of purified water. As a dry powder, 65.0 mg of Scutella napus extract was obtained.

製造例7
抽出溶媒として精製水の代わりにエタノール(100%)を用いた以外は、製造例1と同様にオウボウシバナ抽出物を得た。乾燥粉末として23.0mgのオウボウシバナ抽出物を得た。
Production Example 7
As a manufacturing solvent, an extract was obtained in the same manner as in Production Example 1 except that ethanol (100%) was used instead of purified water as an extraction solvent. As a dry powder, 23.0 mg of Scutella napus extract was obtained.

試験例1(細胞賦活作用試験)
正常ヒト線維芽細胞(NHDF:倉敷紡績(株)製)を10%FBSを含むダルベッコ変法イーグル培地で前培養した(細胞培養条件:CO2インキュベーター 5%CO2、95%空気(以下、細胞培養条件はすべて同じ))。培養後、細胞を回収し、1%FBSを含むダルベッコ変法イーグル培地で細胞数を2.5×105個/mlに調整し、35mmシャーレに2mlずつ播種した。24時間後、表1に示した濃度の製造例1〜7で得られたオウボウシバナ抽出物を含む、1%FBSを含むダルベッコ変法培地(2ml)に交換して、48時間培養した。培養終了後、2−(4,5−ジメチル−2−チアゾリル)−3,5−ジフェニルテトラゾリウムブロミド(MTT)を0.2mg/mlの濃度で含む1%FBSを含むダルベッコ変法培地(2ml)に交換して、2時間培養した。2時間後、テトラゾリウム環の開環によるフォルマザンを2−プロパノール(2ml)で抽出した。抽出液の吸光度(550−650nm)を測定し、細胞活性量とした。オウボウシバナ抽出物を含まない培地で培養したときの抽出液の細胞活性量を基準(100)として、製造例1〜7で得られたオウボウシバナ抽出物を用いて得られた値を指数表示した。結果を表1に示す。表1に示す結果より、製造例1〜7のオウボウシバナ抽出物が細胞賦活作用を有することが確認できた。
Test Example 1 (Cell activation test)
Normal human fibroblasts (NHDF: Kurashiki Boseki Co., Ltd.) were pre-cultured in Dulbecco's modified Eagle medium containing 10% FBS (cell culture conditions: CO 2 incubator 5% CO 2 , 95% air (hereinafter, cells) All culture conditions are the same)). After culturing, the cells were collected, the number of cells was adjusted to 2.5 × 10 5 cells / ml with Dulbecco's modified Eagle medium containing 1% FBS, and 2 ml each was seeded on a 35 mm dish. After 24 hours, the culture medium was replaced with Dulbecco's modified medium (2 ml) containing 1% FBS, which contained the sorghum extract obtained in Production Examples 1 to 7 having the concentrations shown in Table 1, and cultured for 48 hours. After completion of the culture, Dulbecco's modified medium (2 ml) containing 1% FBS containing 2- (4,5-dimethyl-2-thiazolyl) -3,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) at a concentration of 0.2 mg / ml. And cultured for 2 hours. After 2 hours, the formazan resulting from the opening of the tetrazolium ring was extracted with 2-propanol (2 ml). The absorbance (550-650 nm) of the extract was measured and used as the amount of cell activity. The value obtained by using the A. niger extract obtained in Production Examples 1 to 7 was expressed as an index using the cell activity amount of the extract when cultured in a medium not containing the A. niger extract as a reference (100). The results are shown in Table 1. From the results shown in Table 1, it was confirmed that the extract of the scabbard of Production Examples 1 to 7 has a cell activation effect.

Figure 2007001924
Figure 2007001924

試験例2(コラーゲン合成促進作用試験)
正常ヒト線維芽細胞(NHDF:倉敷紡績(株)製)を10%FBSを含むダルベッコ変法イーグル培地で前培養した。培養後、細胞を回収し、1%FBSを含むダルベッコ変法イーグル培地で細胞数を2.5×105個/mlに調整し、35mmシャーレに2mlずつ播種した。24時間後、表2に示した濃度の製造例1〜7で得られたオウボウシバナ抽出物を含む、1%FBSを含むダルベッコ変法イーグル培地(2ml)に交換して、72時間培養した。培養終了後、培養上清中のI型プロコラーゲン量をProcollagen type I C-peptide EIA Kit(タカラバイオ(株)製)を用いてELISA法にて測定した。I型プロコラーゲンは、I型コラーゲンの前駆体であることから、I型プロコラーゲン量を測定することによってコラーゲン合成量の生化学的指標とした。オウボウシバナ抽出物を含まない培地で培養したときの培養上清中のI型プロコラーゲン量を基準(100)として、製造例1〜7で得られたオウボウシバナ抽出物を用いて得られた値を指数表示した。結果を表2に示す。表2に示す結果より、製造例1〜7のオウボウシバナ抽出物がコラーゲン合成促進作用を有することが確認できた。特に、製造例1〜5のオウボウシバナ抽出物が高いコラーゲン合成促進作用を有することが確認できた。
Test Example 2 (Collagen synthesis promoting action test)
Normal human fibroblasts (NHDF: Kurashiki Boseki Co., Ltd.) were pre-cultured in Dulbecco's modified Eagle medium containing 10% FBS. After culturing, the cells were collected, the number of cells was adjusted to 2.5 × 10 5 cells / ml with Dulbecco's modified Eagle medium containing 1% FBS, and 2 ml each was seeded on a 35 mm dish. After 24 hours, the culture medium was replaced with Dulbecco's modified Eagle's medium (2 ml) containing 1% FBS, which was obtained in Preparation Examples 1 to 7 having the concentrations shown in Table 2, and cultured for 72 hours. After completion of the culture, the amount of type I procollagen in the culture supernatant was measured by ELISA using Procollagen type I C-peptide EIA Kit (manufactured by Takara Bio Inc.). Since type I procollagen is a precursor of type I collagen, the amount of type I procollagen was measured and used as a biochemical indicator of the amount of collagen synthesis. Based on the amount of type I procollagen in the culture supernatant when cultivated in a medium not containing the extract of Aspergillus niger, the value obtained using the Aspergillus extract obtained in Production Examples 1 to 7 is used as an index. displayed. The results are shown in Table 2. From the results shown in Table 2, it was confirmed that the extract of the scabbard of Production Examples 1 to 7 has a collagen synthesis promoting action. In particular, it could be confirmed that the warbler extract of Production Examples 1 to 5 has a high collagen synthesis promoting action.

Figure 2007001924
Figure 2007001924

試験例3(ヒアルロン酸合成促進作用試験)
正常ヒト線維芽細胞(NHDF:倉敷紡績(株)製)を10%FBSを含むダルベッコ変法イーグル培地で前培養した。培養後、細胞を回収し、1%FBSを含むダルベッコ変法イーグル培地で細胞数を2.5×105個/mlに調整し、35mmシャーレに2mlずつ播種した。24時間後、表3に示した濃度の製造例1〜7で得られたオウボウシバナ抽出物を含む、1%FBSを含むダルベッコ変法イーグル培地(2ml)に交換して、72時間培養した。培養終了後、培養上清中のヒアルロン酸量をヒアルロン酸測定キット(生化学工業(株)製)を用いてELISA法にて測定した。オウボウシバナ抽出物を含まない培地で培養したときの培養上清中のヒアルロン酸量を基準(100)として、製造例1〜7で得られたオウボウシバナ抽出物を用いて得られた値を指数表示した。結果を表3に示す。表3に示す結果より、製造例5〜7のオウボウシバナ抽出物が高いヒアルロン酸合成促進作用を有することが確認できた。
Test Example 3 (hyaluronic acid synthesis promoting action test)
Normal human fibroblasts (NHDF: Kurashiki Boseki Co., Ltd.) were pre-cultured in Dulbecco's modified Eagle medium containing 10% FBS. After culturing, the cells were collected, the number of cells was adjusted to 2.5 × 10 5 cells / ml with Dulbecco's modified Eagle medium containing 1% FBS, and 2 ml each was seeded on a 35 mm dish. After 24 hours, the culture medium was replaced with Dulbecco's modified Eagle's medium (2 ml) containing 1% FBS, which was obtained in Production Examples 1 to 7 having the concentrations shown in Table 3, and cultured for 72 hours. After completion of the culture, the amount of hyaluronic acid in the culture supernatant was measured by ELISA using a hyaluronic acid measurement kit (Seikagaku Corporation). Based on the amount of hyaluronic acid in the culture supernatant when cultivated in a medium not containing the extract of Syringa as a standard (100), the values obtained using the Syringa extract of Production Examples 1 to 7 were displayed as indices. . The results are shown in Table 3. From the results shown in Table 3, it was confirmed that the scab extract of Production Examples 5 to 7 has a high hyaluronic acid synthesis promoting action.

Figure 2007001924
Figure 2007001924

実施例1(クリーム)
表4に示す成分(A)および(B)をそれぞれ85℃に加温溶解し、成分(A)および(B)を混合、分散させた。そこに、成分(C)を加えて、撹拌しながら30℃まで徐冷し、均一なクリームを得た。
Example 1 (cream)
Components (A) and (B) shown in Table 4 were dissolved by heating at 85 ° C., and components (A) and (B) were mixed and dispersed. The component (C) was added thereto, and gradually cooled to 30 ° C. with stirring to obtain a uniform cream.

Figure 2007001924
Figure 2007001924

実施例2(リキッドファンデーション)
表5に示す成分(A)および(B)をそれぞれ85℃に加温溶解し、成分(A)および(B)を混合、分散させた。そこに、成分(C)を加えて、撹拌しながら30℃まで徐冷し、均一なリキッドファンデーションを得た。
Example 2 (Liquid Foundation)
Components (A) and (B) shown in Table 5 were dissolved by heating at 85 ° C., and components (A) and (B) were mixed and dispersed. The component (C) was added thereto, and the mixture was gradually cooled to 30 ° C. with stirring to obtain a uniform liquid foundation.

Figure 2007001924
Figure 2007001924

比較例1(クリーム)
製造例5で得られたオウボウシバナ抽出物の代わりに精製水を用いた以外は、実施例1と同様にクリームを得た。
Comparative Example 1 (cream)
A cream was obtained in the same manner as in Example 1 except that purified water was used in place of the sorghum extract obtained in Production Example 5.

比較例2(リキッドファンデーション)
製造例5で得られたオウボウシバナ抽出物の代わりに精製水を用いた以外は、実施例1と同様にリキッドファンデーションを得た。
Comparative Example 2 (Liquid Foundation)
A liquid foundation was obtained in the same manner as in Example 1 except that purified water was used in place of the sorghum extract obtained in Production Example 5.

試験例3(皮膚化粧料のモニター試験)
無作為に抽出した20歳代、30歳代および40歳代の健常な成人それぞれ20名(合計60名)を被験者とし、実施例1および2ならびに比較例1および2の皮膚化粧料を通常の方法で連日2ヵ月使用してもらった。
Test Example 3 (Skin Cosmetics Monitor Test)
Twenty healthy adults in their 20s, 30s and 40s (60 people in total) were randomly selected as subjects, and the skin cosmetics of Examples 1 and 2 and Comparative Examples 1 and 2 were treated as usual. The method was used for 2 months every day.

2ヵ月経過した後、皮膚の状態としてシワに対する改善効果と、はり、たるみに対する改善効果を以下の基準で評価した。結果を表6に示す。   After 2 months, the skin condition was evaluated for the improvement effect on wrinkles, and the improvement effect on tension and sagging according to the following criteria. The results are shown in Table 6.

なお、このモニター試験で皮膚に異常が生じた被験者は1名もいなかった。また、2ヵ月にわたってそれぞれの皮膚化粧料はその状態に変化が生じることなく安定していた。   In this monitoring test, no subject had an abnormality on the skin. Moreover, each skin cosmetic was stable without change in the state over two months.

[シワに対する改善効果]
目じりの状態を目視で観察して、以下の評価基準にもとづいて評価した。
A:非常に改善された。
B:改善された。
C:やや改善された。
D:改善効果がなかった。
E:悪化した。
[Improvement effect on wrinkles]
The condition of the eyes was visually observed and evaluated based on the following evaluation criteria.
A: It was greatly improved.
B: Improved.
C: Slightly improved.
D: There was no improvement effect.
E: Deteriorated.

[はり、たるみに対する改善効果]
顔全体の皮膚の状態を目視にて観察して、以下の評価基準にもとづいて評価した。
A:非常に改善された。
B:改善された。
C:やや改善された。
D:改善効果がなかった。
E:悪化した。
[Improvement effect on beam and sagging]
The state of the skin of the entire face was visually observed and evaluated based on the following evaluation criteria.
A: It was greatly improved.
B: Improved.
C: Slightly improved.
D: There was no improvement effect.
E: Deteriorated.

Figure 2007001924
Figure 2007001924

表6に示す結果より、実施例1および2の皮膚外用剤を用いた場合には、比較例1および2の皮膚外用剤を用いた場合と比較して、目じりのシワおよびはり、たるみが改善されたことがわかる。すなわち、本発明により、オウボウシバナ抽出物を含む皮膚外用剤がシワ、はりおよびたるみを予防、改善し、総じて老化防止作用を発現することがわかる。   From the results shown in Table 6, when the skin external preparations of Examples 1 and 2 were used, the wrinkles and swelling of the eyes and the sagging were improved as compared with the case of using the skin external preparations of Comparative Examples 1 and 2. You can see that In other words, according to the present invention, it can be seen that the topical skin preparation containing the extract of Syringa prevents and improves wrinkles, burrs and sagging, and generally exhibits an anti-aging effect.

以下、本発明の皮膚外用剤の処方例を示す。なお、含有量は重量%である。   Hereinafter, the formulation example of the external preparation for skin of this invention is shown. The content is% by weight.

<処方例1:クリーム>
オウボウシバナ抽出物 0.05
ヒアルロン酸ナトリウム 0.01
グリセリルモノステアレート 3.0
ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノステアレート 3.0
セタノール 2.0
スクワラン 3.0
2−エチルヘキサン酸グリセリル 10.0
グリセリン 7.0
エチルパラベン 0.1
精製水 残部
合計 100
<Prescription Example 1: Cream>
Paramecium extract 0.05
Sodium hyaluronate 0.01
Glyceryl monostearate 3.0
Polyoxyethylene (20) sorbitan monostearate 3.0
Cetanol 2.0
Squalane 3.0
Glyceryl 2-ethylhexanoate 10.0
Glycerin 7.0
Ethylparaben 0.1
Purified water balance 100

<処方例2:クリーム>
オウボウシバナ抽出物 0.1
ステアリン酸 10.0
セタノール 2.0
ラノリン 1.0
ミリスチン酸イソプロピル 3.0
モノステアリン酸ポリエチレングリコール 1.5
トリエタノールアミン 0.8
ソルビトール(70%) 4.0
メチルパラベン 0.1
香料 0.01
精製水 残部
合計 100
<Prescription Example 2: Cream>
Oboushibana extract 0.1
Stearic acid 10.0
Cetanol 2.0
Lanolin 1.0
Isopropyl myristate 3.0
Polyethylene glycol monostearate 1.5
Triethanolamine 0.8
Sorbitol (70%) 4.0
Methylparaben 0.1
Fragrance 0.01
Purified water balance 100

<処方例3:リキッドファンデーション>
オウボウシバナ抽出物 0.01
ヒアルロン酸 0.01
グリセリルモノステアレート 2.0
ポリオキシエチレン(4)ラウリルエーテルリン酸ナトリウム 0.5
ステアリン酸 5.0
ベヘニルアルコール 1.0
ラノリン 2.0
スクワラン 5.0
2−エチルヘキサン酸グリセリル 4.0
顔料 10.0
プロピレングリコール 7.0
トリエタノールアミン 1.0
エチルパラベン 0.1
精製水 残部
合計 100
<Prescription Example 3: Liquid Foundation>
Oboushibana extract 0.01
Hyaluronic acid 0.01
Glyceryl monostearate 2.0
Polyoxyethylene (4) sodium lauryl ether phosphate 0.5
Stearic acid 5.0
Behenyl alcohol 1.0
Lanolin 2.0
Squalane 5.0
Glyceryl 2-ethylhexanoate 4.0
Pigment 10.0
Propylene glycol 7.0
Triethanolamine 1.0
Ethylparaben 0.1
Purified water balance 100

<処方例4:リキッドファンデーション>
オウボウシバナ抽出物 0.05
ラノリン 2.0
流動パラフィン 5.0
ステアリン酸 2.0
セタノール 1.0
グリセリン 2.0
スクワラン 5.0
2−エチルヘキサン酸グリセリル 4.0
顔料 10.0
プロピレングリコール 7.0
トリエタノールアミン 1.0
エチルパラベン 0.1
香料 0.01
精製水 残部
合計 100
<Prescription Example 4: Liquid Foundation>
Paramecium extract 0.05
Lanolin 2.0
Liquid paraffin 5.0
Stearic acid 2.0
Cetanol 1.0
Glycerin 2.0
Squalane 5.0
Glyceryl 2-ethylhexanoate 4.0
Pigment 10.0
Propylene glycol 7.0
Triethanolamine 1.0
Ethylparaben 0.1
Fragrance 0.01
Purified water balance 100

<処方例5:乳液>
オウボウシバナ抽出物 0.02
ヒアルロン酸 0.01
ステアリン酸 2.0
エタノール 0.5
流動パラフィン 10.0
ラノリン脂肪酸イソプロピル 3.0
ラノリン 4.0
スクワラン 5.0
セスキイソステアリン酸ソルビタン 1.0
プロピレングリコール 5.0
トリエタノールアミン 0.6
エチルパラベン 0.1
香料 0.01
精製水 残部
合計 100
<Prescription Example 5: Latex>
Paramecium extract 0.02
Hyaluronic acid 0.01
Stearic acid 2.0
Ethanol 0.5
Liquid paraffin 10.0
Lanolin Fatty Acid Isopropyl 3.0
Lanolin 4.0
Squalane 5.0
Sorbitan sesquiisostearate 1.0
Propylene glycol 5.0
Triethanolamine 0.6
Ethylparaben 0.1
Fragrance 0.01
Purified water balance 100

<処方例6:乳液>
オウボウシバナ抽出物 0.1
ステアリン酸 3.5
エタノール 0.5
流動パラフィン 3.0
ラノリン 0.5
スクワラン 2.0
プロピレングリコール 3.0
トリエタノールアミン 0.8
エチルパラベン 0.1
カルボキシビニルポリマー1%液(アルカリ中和) 8.0
香料 0.01
精製水 残部
合計 100
<Prescription Example 6: Latex>
Oboushibana extract 0.1
Stearic acid 3.5
Ethanol 0.5
Liquid paraffin 3.0
Lanolin 0.5
Squalane 2.0
Propylene glycol 3.0
Triethanolamine 0.8
Ethylparaben 0.1
Carboxyvinyl polymer 1% liquid (alkali neutralization) 8.0
Fragrance 0.01
Purified water balance 100

<処方例7:化粧水>
オウボウシバナ抽出物 0.02
ヒアルロン酸ナトリウム 0.01
モノラウリン酸ポリオキシエチレン(20)ソルビタン 1.0
1,3−ブチレングリコール 3.0
ソルビトール(70%) 2.0
ピロリドンカルボン酸ナトリウム液 3.0
エタノール 15.0
アスコルビン酸 0.1
メチルパラベン 0.1
香料 0.01
精製水 残部
合計 100
<Formulation example 7: lotion>
Paramecium extract 0.02
Sodium hyaluronate 0.01
Polyoxyethylene (20) sorbitan monolaurate 1.0
1,3-butylene glycol 3.0
Sorbitol (70%) 2.0
Sodium pyrrolidonecarboxylate solution 3.0
Ethanol 15.0
Ascorbic acid 0.1
Methylparaben 0.1
Fragrance 0.01
Purified water balance 100

<処方例8:化粧水>
オウボウシバナ抽出物 0.05
モノラウリン酸ポリオキシエチレン(20)ソルビタン 1.0
1,3−ブチレングリコール 5.0
ソルビトール(70%) 2.0
ピロリドンカルボン酸ナトリウム液 3.0
エタノール 15.0
アスコルビン酸 0.1
メチルパラベン 0.1
色素 0.01
香料 0.01
精製水 残部
合計 100
<Prescription Example 8: Lotion>
Paramecium extract 0.05
Polyoxyethylene (20) sorbitan monolaurate 1.0
1,3-butylene glycol 5.0
Sorbitol (70%) 2.0
Sodium pyrrolidonecarboxylate solution 3.0
Ethanol 15.0
Ascorbic acid 0.1
Methylparaben 0.1
Dye 0.01
Fragrance 0.01
Purified water balance 100

Claims (5)

オウボウシバナ抽出物を有効成分として含む抗老化剤。 An anti-aging agent containing an extract of Aspergillus oryzae as an active ingredient. オウボウシバナ抽出物を有効成分として含む細胞賦活剤。 A cell activator comprising an extract of Aspergillus oryzae as an active ingredient. オウボウシバナ抽出物を有効成分として含むコラーゲン合成促進剤。 Collagen synthesis promoter containing an Oboushibana extract as an active ingredient. オウボウシバナ抽出物を有効成分として含むヒアルロン酸合成促進剤。 A hyaluronic acid synthesis promoter containing an extract of Aspergillus oryzae as an active ingredient. オウボウシバナ抽出物を有効成分として含む皮膚外用剤。 An external preparation for skin containing an extract of sorghum as an active ingredient.
JP2005183631A 2005-06-23 2005-06-23 Skin preparation Active JP4167247B2 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2005183631A JP4167247B2 (en) 2005-06-23 2005-06-23 Skin preparation

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2005183631A JP4167247B2 (en) 2005-06-23 2005-06-23 Skin preparation

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2008144867A Division JP2008273983A (en) 2008-06-02 2008-06-02 Cosmetic

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2007001924A true JP2007001924A (en) 2007-01-11
JP4167247B2 JP4167247B2 (en) 2008-10-15

Family

ID=37687849

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2005183631A Active JP4167247B2 (en) 2005-06-23 2005-06-23 Skin preparation

Country Status (1)

Country Link
JP (1) JP4167247B2 (en)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2007145739A (en) * 2005-11-25 2007-06-14 Maruzen Pharmaceut Co Ltd Hair-restoring agent and hair cosmetic
JP2007145751A (en) * 2005-11-28 2007-06-14 Maruzen Pharmaceut Co Ltd Anti-ageing agent, slimming agent, and humectant, and skin cosmetic
CN102973425A (en) * 2011-09-05 2013-03-20 张弘 Whitening anti-aging nanoscale skin-care agent
JP2016088939A (en) * 2014-11-06 2016-05-23 エルジー ハウスホールド アンド ヘルスケア リミテッド Composition for promoting generation of hyaluronic acid containing dandelion extract, and use thereof
JP2017057159A (en) * 2015-09-16 2017-03-23 オッペン化粧品株式会社 Degradation inhibitors, anti-aging agents, and skin external preparations

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2007145739A (en) * 2005-11-25 2007-06-14 Maruzen Pharmaceut Co Ltd Hair-restoring agent and hair cosmetic
JP2007145751A (en) * 2005-11-28 2007-06-14 Maruzen Pharmaceut Co Ltd Anti-ageing agent, slimming agent, and humectant, and skin cosmetic
CN102973425A (en) * 2011-09-05 2013-03-20 张弘 Whitening anti-aging nanoscale skin-care agent
JP2016088939A (en) * 2014-11-06 2016-05-23 エルジー ハウスホールド アンド ヘルスケア リミテッド Composition for promoting generation of hyaluronic acid containing dandelion extract, and use thereof
JP2017057159A (en) * 2015-09-16 2017-03-23 オッペン化粧品株式会社 Degradation inhibitors, anti-aging agents, and skin external preparations

Also Published As

Publication number Publication date
JP4167247B2 (en) 2008-10-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR20130069512A (en) Skin external composition comprising tangeretin
JP4167247B2 (en) Skin preparation
JP2009149562A (en) External preparation for skin
KR101425708B1 (en) Preparation method of cosmetic composition comprising saponin from sea slug and the cosmetic composition thereby
JP2014129267A (en) DNA damage inhibitor
JP2014122183A (en) Dna damage inhibitor
JP5226200B2 (en) Sulfated glycosaminoglycan production promoter and skin external preparation containing the same
JP2008094792A (en) Hyaluronic acid synthesis promoter, anti-aging agent and skin care preparation each containing commelina communis var. hortensis-derived flavonoid
JP2013184942A (en) Antioxidant and dna damage inhibitor
KR20130094043A (en) A cosmetic composition comprising subcritical water extracts of laminaria japonica
JP2011195539A (en) Elastase activity inhibitor
JP2000344653A (en) Eraser for active oxygen and skin cosmetic
JP2012201615A (en) Elastase activity inhibitor
JP2014125429A (en) Dna damage inhibitor
JP2009234976A (en) Cell activator and external preparation for skin for antiaging
JP2004307437A (en) Skin care preparation for external use for preventing aging
JP2009249366A (en) Collagen production promotor and anti-aging skin preparation for external use
JP5155543B2 (en) Endothelin-1 production inhibitor, hexosaminidase release inhibitor, anti-inflammatory / whitening skin preparation, endothelin-1 production inhibition method, and hexosaminidase release inhibition method
KR20200073523A (en) Cosmetic Composition for Improving Skin Wrinkle Contaning the Extract of Lithospermum Erythrorhizon
JP2008273983A (en) Cosmetic
KR102598627B1 (en) Manufacturing method of astaxanthin solution with improved stability and cosmetic composition comprising the same
JP2009249365A (en) Cell activator and anti-aging skin preparation for external use
JP3754025B2 (en) Cell activator, antioxidant, and skin external preparation
JP2004137166A (en) Skin care preparation for external use, cell activator and antioxidant
JP5313524B2 (en) Anti-inflammatory agent and anti-inflammatory skin external preparation

Legal Events

Date Code Title Description
A977 Report on retrieval

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007

Effective date: 20080319

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20080401

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20080602

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821

Effective date: 20080602

TRDD Decision of grant or rejection written
A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20080715

A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20080731

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Ref document number: 4167247

Country of ref document: JP

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110808

Year of fee payment: 3

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140808

Year of fee payment: 6

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250