JP2006527364A - 相互作用の特性決定のための方法および装置 - Google Patents
相互作用の特性決定のための方法および装置 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2006527364A JP2006527364A JP2006508576A JP2006508576A JP2006527364A JP 2006527364 A JP2006527364 A JP 2006527364A JP 2006508576 A JP2006508576 A JP 2006508576A JP 2006508576 A JP2006508576 A JP 2006508576A JP 2006527364 A JP2006527364 A JP 2006527364A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- liquid
- flow
- species
- chemical species
- interaction
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 84
- 230000003993 interaction Effects 0.000 title claims abstract description 34
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 title description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 63
- 239000013626 chemical specie Substances 0.000 claims abstract description 28
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims abstract description 17
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 63
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 36
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 14
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 claims description 14
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 14
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 claims description 12
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 claims description 11
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 7
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims description 6
- 238000004590 computer program Methods 0.000 claims description 5
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 85
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 52
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 52
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 30
- 230000004044 response Effects 0.000 description 26
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 17
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 12
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 7
- PJVWKTKQMONHTI-UHFFFAOYSA-N warfarin Chemical compound OC=1C2=CC=CC=C2OC(=O)C=1C(CC(=O)C)C1=CC=CC=C1 PJVWKTKQMONHTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 229960005080 warfarin Drugs 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 6
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- WDJUZGPOPHTGOT-OAXVISGBSA-N Digitoxin Natural products O([C@H]1[C@@H](C)O[C@@H](O[C@@H]2C[C@@H]3[C@@](C)([C@@H]4[C@H]([C@]5(O)[C@@](C)([C@H](C6=CC(=O)OC6)CC5)CC4)CC3)CC2)C[C@H]1O)[C@H]1O[C@@H](C)[C@H](O[C@H]2O[C@@H](C)[C@@H](O)[C@@H](O)C2)[C@@H](O)C1 WDJUZGPOPHTGOT-OAXVISGBSA-N 0.000 description 5
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 5
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 5
- WDJUZGPOPHTGOT-XUDUSOBPSA-N digitoxin Chemical compound C1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](C)O[C@@H](O[C@@H]2[C@H](O[C@@H](O[C@@H]3C[C@@H]4[C@]([C@@H]5[C@H]([C@]6(CC[C@@H]([C@@]6(C)CC5)C=5COC(=O)C=5)O)CC4)(C)CC3)C[C@@H]2O)C)C[C@@H]1O WDJUZGPOPHTGOT-XUDUSOBPSA-N 0.000 description 5
- 229960000648 digitoxin Drugs 0.000 description 5
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 5
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 5
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 5
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 241000282836 Camelus dromedarius Species 0.000 description 4
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 4
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 4
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 4
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 4
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 4
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 4
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 229960002895 phenylbutazone Drugs 0.000 description 4
- VYMDGNCVAMGZFE-UHFFFAOYSA-N phenylbutazonum Chemical compound O=C1C(CCCC)C(=O)N(C=2C=CC=CC=2)N1C1=CC=CC=C1 VYMDGNCVAMGZFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 2-[[2-[[6-amino-2-[[2-[[2-[[5-amino-2-[[2-[[1-[2-[[6-amino-2-[(2,5-diamino-5-oxopentanoyl)amino]hexanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)p Chemical compound C1CCN(C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(N)CCC(N)=O)C1C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C(=O)NC(CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 3
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 238000004416 surface enhanced Raman spectroscopy Methods 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000047918 Myelin Basic Human genes 0.000 description 2
- 101710107068 Myelin basic protein Proteins 0.000 description 2
- 108010062374 Myoglobin Proteins 0.000 description 2
- 102000036675 Myoglobin Human genes 0.000 description 2
- 238000004630 atomic force microscopy Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000000572 ellipsometry Methods 0.000 description 2
- 239000008240 homogeneous mixture Substances 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 2
- 238000010897 surface acoustic wave method Methods 0.000 description 2
- 125000003396 thiol group Chemical class [H]S* 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012935 Averaging Methods 0.000 description 1
- 101100283604 Caenorhabditis elegans pigk-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- 101001052493 Homo sapiens Mitogen-activated protein kinase 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 1
- 102100024193 Mitogen-activated protein kinase 1 Human genes 0.000 description 1
- 101001022802 Ovis aries Myoglobin Proteins 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 1
- 230000001745 anti-biotin effect Effects 0.000 description 1
- 230000001130 anti-lysozyme effect Effects 0.000 description 1
- 238000005102 attenuated total reflection Methods 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 125000002057 carboxymethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[*] 0.000 description 1
- 229940096384 chicken egg white lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 230000006957 competitive inhibition Effects 0.000 description 1
- 238000005094 computer simulation Methods 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 125000002228 disulfide group Chemical group 0.000 description 1
- 229940000406 drug candidate Drugs 0.000 description 1
- 238000012912 drug discovery process Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000002848 electrochemical method Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000105 evaporative light scattering detection Methods 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N heavy water Substances [2H]O[2H] XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N 0.000 description 1
- 238000002847 impedance measurement Methods 0.000 description 1
- 238000005305 interferometry Methods 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 238000012933 kinetic analysis Methods 0.000 description 1
- 238000011898 label-free detection Methods 0.000 description 1
- 238000012923 label-free technique Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 230000036963 noncompetitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001208 nuclear magnetic resonance pulse sequence Methods 0.000 description 1
- 230000000269 nucleophilic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000010287 polarization Effects 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001028 reflection method Methods 0.000 description 1
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 229910052723 transition metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000003624 transition metals Chemical class 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/01—Arrangements or apparatus for facilitating the optical investigation
- G01N21/03—Cuvette constructions
- G01N21/05—Flow-through cuvettes
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
- G01N21/55—Specular reflectivity
- G01N21/552—Attenuated total reflection
- G01N21/553—Attenuated total reflection and using surface plasmons
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N35/00—Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor
- G01N35/08—Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor using a stream of discrete samples flowing along a tube system, e.g. flow injection analysis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/01—Arrangements or apparatus for facilitating the optical investigation
- G01N2021/0162—Arrangements or apparatus for facilitating the optical investigation using microprocessors for control of a sequence of operations, e.g. test, powering, switching, processing
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
- G01N21/1717—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated with a modulation of one or more physical properties of the sample during the optical investigation, e.g. electro-reflectance
- G01N2021/1723—Fluid modulation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N35/00—Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor
- G01N35/00584—Control arrangements for automatic analysers
- G01N2035/0097—Control arrangements for automatic analysers monitoring reactions as a function of time
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2201/00—Features of devices classified in G01N21/00
- G01N2201/12—Circuits of general importance; Signal processing
- G01N2201/122—Kinetic analysis; determining reaction rate
Landscapes
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Automatic Analysis And Handling Materials Therefor (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Description
本発明は一般に、多成分系におけるさまざまな相互作用に関する特性たとえば速度論的性質または親和性を決定することが所望される場合の分析方法に関する。特に本発明は、液体環境中の化学種間たとえば化合物と標的間の相互作用を分析するための方法に関する。本発明はまた、化学種間たとえば化合物と標的間の部位特異結合の分析にも関する。より詳細には本発明は、当該の化合物を含んだ試料のパルス勾配を供することにより速度論的性質または親和性を決定するための方法と装置とに関するものであり、この場合、標的分子はそれが相互作用し得る化合物の勾配に曝露され、この相互作用の結果が検出される。
新薬の候補の研究(スクリーニング)において、弱い結合を示し、急速な事象に達して、小さな時定数を示す物質に遭遇する場合がしばしばある。表面プラズモン共鳴(SPR)は基質と標的との間の親和性の研究にとって強力な技法であるが、一般に緩慢な事象向けに設計されている。SPRの原理を使用した計測器(たとえば、本発明の出願人、Biacore AB,Uppsala,Swedenによって供給される計測器)は、表面での質量濃度の変化から生ずる、センサチップに隣接した媒質の屈折率の変化を計測する。
従来の技法の短所は、本発明により、請求項1に記載した、液体環境中における少なくとも2化学種間の相互作用 ― たとえば親和性および/または速度論的性質および/またはアッセイ条件 ― の特性決定のための方法によって克服される。
本発明の目的にとって、以下の用語及び表現は以下に記載する意味を有すると解されることとする。
dR/dt=kaC(Rmax−R)−kdR (1)
平衡時に、応答は
Req=kaCRmax/(kaC+kd) (2)
として得られ、解離の間は
dR/dt=−kdR0 (3)
として得られる。式中、Rは任意の時間tにおける応答を表し、Reqは平衡時の応答を表し、R0はインジェクション終了時の応答を表し、Rmaxは表面の最大結合能力をRUで表している。Cは当該の化合物のモル濃度である。
(計装およびソフトウェア)
一貫して使用されたセンサチップはCM−5表面(Biacore AB,Uppsala,Sweden)であった。すべての相互作用研究はBIACORE(登録商標)3000バイオセンサ(Biacore AB,Uppsala,Sweden)を用いて実施された。データはBIACORE(登録商標)3000制御ソフトウェアによりセンサグラムとして提示され、BIA評価ソフトウェア、バージョン3.1(Biacore AB,Uppsala,Sweden)、Matlabバージョン5.3(The MathWorks,Inc.,Natick,MA)およびExcel97(Microsoft Corp.,Redmond,WA)を使用して評価された。
別段の記載がないかぎり、BIA認証HBS−EP(0.01MのHepes,pH7.4,0.15MのNaCl,3mMのEDTA,0.005%のTween20;Biacore AB,Uppsala,Sweden)が流れバッファとして使用された。
(緩慢な速度論的相互作用)
モノクローナル抗ミオグロビン抗体が、20℃にて標準アミン結合方式により、ほぼ2070および930 RU(それぞれ図1のフローセル2および4)のレベルに固定化された。EDC−NHSによる7分間の賦活に続いて、抗ミオグロビン(10μg/10mMの酢酸ナトリウム1ml当たり,pH5.0)が5分間にわたって表面にインジェクションされた。次いで、反応しなかったエステルは1Mのエタノールアミン、pH8.5、の7分間のインジェクションによって脱活された。チャンネル1と3は参照セルとして使用され、上記のようにして賦活/脱活された。流量は5μl/分であった。
(相互作用速度定数の評価)
リゾチームに結合するラクダ抗体の三重変異体(SGS)の速度論が本発明によるパルスインジェクション法を用いて研究された。すべての実験は30℃にて実施された。190RU(チップ1)と280RU(チップ2)のリゾチームが実施例1に述べたアミン結合方式を使用して固定化された。2分間におよぶ賦活の直後に、リゾチーム(8μg/10mMのNa2HPO4 1ml当たり,pH7.0)が3分間(チップ1)と4分30秒間(チップ2)にわたってインジェクションされた。10mMのNa2HPO4,pH7.0(流量5μl/分)が、固定化中、流れバッファとして使用された。SGSは異なった初期濃度(0.5,1.0および2.0μM,HBS−EP)でインジェクションされた。結果は図3に示されている。
(親和性の評価)
ほぼ15000RUの抗マルトース抗体が4フローセルの1つに固定化された。おおよそ同量のもう一つの抗体、抗AFPが、高い固定化レベルに起因する参照減算誤差を最小化するために、参照フローセルに固定化された。これらの2タンパク質は以下のように“アミン結合”を使用して固定化された: HBS−EPが、定流量5μl/分の流れバッファとして使用された。EDCで12分間にわたって賦活した後、標的(抗マルトースまたは抗AFP,50μg/10mMの酢酸ナトリウム1ml当たり、pH5.0)が7分間にわたってインジェクションされ、続いて12分間の脱活が行われた。表面への固定化とすべての測定は25℃にて実施された。
Ci=Req(i)/Req(1)・C1 (4)
センサグラムからのデータは、ラクダ抗体パルスの場合と同様にして、BIACORE(登録商標)結果ファイルから抽出された。応答レベルは平衡時における10データポイントの平均を取ることによって得られた。評価はBIA評価ソフトウェアを用いて実施された。親和定数KAは線形フィットされたReq/C 対 Req−プロット(スキャッチャードプロット解析に類似)で負の傾きとして得られた。KDは1/KAとして得られた。Rmaxはx軸との交点から見出された。コンスタントな多濃度パルスシリーズは非線形フィットされたReq 対 C−プロットで評価され、その際、KA,KDおよびRmaxは直接にソフトウェアから得られた。
(HSAに結合する薬物の部位アベイラビリティ)
HSA(15μg/酢酸ナトリウム1ml当たり、pH5.2)が、標準アミン結合方式(Frostell−Karlsson et al,J.Med.Chem.2000,43:1986−2000)を使用して、ほぼ12200RUのレベルに固定化された。隣接するフローセルは賦活および脱活され、参照セルとして使用された。新たに固定化された表面は50mMのNaOHの連続した3〜30秒インジェクションでコンディショニングされた。表面への固定化とすべての測定は25℃で実施された。
(最適再生条件の決定)
SPR分析においてしばしば遭遇する問題は最適再生条件の決定である。再生が弱すぎれば、センサチップは十分な程度まで回復せず、再生が強すぎれば、センサチップは破壊されるであろう。したがって、信頼性の高い速やかな手順で再生を最適化し得ることが望ましい。これは本発明によるパルスインジェクション法で行うことができる。
(酵素と基質の相互作用)
図1に示したものと類似のシステム構成が採用されるが、試料ラインは酵素MAPK2の勾配を供するために使用され、バッファは酵素基質としてのミエリン塩基性タンパク質を含んだ溶液に代えられる。BIACORE(登録商標)センサまたは分光光度計が、酵素作用の生成物(リン酸化ミエリン塩基性タンパク質)の検出またはミエリン塩基性タンパク質濃度の減少の検出に使用される。
Claims (28)
- 液体環境中における少なくとも2化学種間の相互作用の特性決定のための方法であって、前記化学種の少なくとも一方を含んだ液体がフローとして測定システムを通過させられて、前記測定システム内で相互作用が生じ、該方法は、以下のステップ:
前記液体フローに前記化学種の少なくとも一方の濃度勾配を与えるステップと、
前記化学種の少なくとも一方を含んだ前記液体フローをセンサデバイスに通過させるステップと、
前記の少なくとも2化学種間の相互作用の結果を前記センサデバイスによって検出するステップと、
を包含し、該方法は、
前記濃度勾配を含む液体フローは、該フローが前記センサを通過させられる前に、少なくとも一回、さらなる液体と交差させられて、濃度勾配を形成する前記化学種の濃度の異なる分離された少なくとも2液体セグメントが作製されることを特徴とする、方法。 - 相互作用に関する、親和性および/または速度論および/またはアッセイ条件が決定される、請求項1に記載の方法。
- アッセイ条件が決定され、前記化学種の一方はアッセイ関数と結びついた薬剤を含む、請求項2に記載の方法。
- アッセイ関数と結びついた前記薬剤は再生剤を含む、請求項3に記載の方法。
- アッセイ関数と結びついた前記薬剤は相互作用効率に影響を及ぼす薬剤を含む、請求項3に記載の方法。
- 液体フローは一回より多く交差させられて、分離された液体セグメントが作製される、請求項1〜5のいずれか1項に記載の方法。
- 分離された前記セグメントの少なくとも1セグメントは前記センサを通過しないように廃棄される、請求項6に記載の方法。
- 相互作用は前記化学種とフローセル内の表面に固定化された標的との間に生ずる、請求項1〜7のいずれか1項に記載の方法。
- さらなる液体はバッファおよび溶剤からなる群より選択される、請求項1〜8のいずれか1項に記載の方法。
- 液体フローは複数回にわたって、たとえば5〜40回、適切には15〜30回、好ましくはほぼ20回にわたって交差させられる、請求項1〜9のいずれか1項に記載の方法。
- 流れバッファによる望ましくない分散がセンサデバイス内で生じることを防止するために、空気と試料との連続したセグメントがセンサデバイスにインジェクションされる、請求項1〜10のいずれか1項に記載の方法。
- 前記さらなる液体は、前記溶液がセンサデバイスを通過している間も、低下された流量で、好ましくは正規流量の5%未満、最も好ましくは1%未満の流量でシステムを通過することができる、請求項1〜11のいずれか1項に記載の方法。
- 異なった化学種を含んだ異なった2種の溶液の混合によって二重勾配がつくり出され、これによって、一方の化学種には正(漸増)勾配が形成され、他方の化学種には負(漸減)勾配が形成される、請求項1〜12のいずれか1項に記載の方法。
- 溶液の各々のセグメントの長さは8〜20秒、好ましくは約10〜15秒、適切には12秒である、請求項2〜13のいずれか1項に記載の方法。
- 各々のセグメントは1〜40μl、好ましくは10〜40μl、より好ましくは15〜25μl、適切には約20μlの体積を有する、請求項14に記載の方法。
- フローセルを通過する液体の流量は50〜200μl/分、好ましくは80〜120μl/分、適切には約100μl/分である、請求項1〜15のいずれか一項に記載の方法。
- 前記液体フローの1または複数のアリコートは該フローが前記さらなる液体によって交差させられる前に廃棄される、請求項1〜16のいずれか1項に記載の方法。
- 前記セグメントの大半は前記化学種に関して異なった濃度を有すると考えられる、請求項10〜17のいずれか1項に記載の方法。
- 相互作用は溶液中の化学種と前記測定システム内の表面に固定化された化学種との間で生ずる、請求項1〜18のいずれか1項に記載の方法。
- 固定された化学種は抗体であり、溶液中の化学種は前記抗体に対する抗原である、請求項19に記載の方法。
- 固定化された化学種は抗原であり、溶液中の化学種は前記抗原に対する抗体である、請求項19に記載の方法。
- 相互作用は溶液中の2化学種の間で生じる、請求項1〜18のいずれか1項に記載の方法。
- 一方の化学種は酵素であり、他方の化学種は前記酵素に対する基質である、請求項22に記載の方法。
- 複数の試料および/またはその他の液体が所定の順序で交互に前記測定システムを通過させられる、請求項1〜23のいずれか1項に記載の方法。
- 第一の液体はセンサデバイス上の標的に結合する化合物を含有し、第二の液体は再生液であり、第三の液体はバッファを含み、検出された相互作用の結果は前記センサデバイスの適切な再生レベルを決定するために使用される、請求項24に記載の方法。
- 液体環境中における少なくとも2化学種の相互作用の特性決定のための装置であって、前記化学種の少なくとも一方を含んだ液体がフローとして測定システムを通過させられて、前記測定システム内で相互作用が生じ、該装置は:
前記化学種の少なくとも一方の第一の化学種の濃度勾配または、相互作用または被相互作用成分に影響を及ぼす他の少なくとも1化学種の濃度勾配をつくり出すための手段と、
前記フローをセンサデバイスに通過させるための手段と、
前記センサデバイスによって前記の少なくとも2化学種間の相互作用の結果を検出するための手段と、
を備え、該装置は、
前記濃度勾配を含む液体フローを、該フローが前記センサを通過させられる前に、少なくとも一回、さらなる液体と交差させ、前記化学種の濃度の異なる分離された少なくとも2液体セグメントを作製する手段を特徴とする、装置。 - 請求項1〜25のいずれか1項に記載のステップを実施するためのソフトウェアコード手段を備える、請求項26に記載の装置と組み合わされた処理手段の内部記憶装置へ直接にロードし得るコンピュータプログラム製品。
- 請求項26に記載の装置と組み合わされた処理手段が請求項1〜25のいずれか1項に記載のステップの実施を制御し得るようにするための読取り可能プログラムを備える、コンピュータ使用可能な媒体上に記憶されたコンピュータプログラム製品。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SE0301639A SE0301639D0 (sv) | 2003-06-06 | 2003-06-06 | Method and apparatus for characterization of intercations |
US47790903P | 2003-06-12 | 2003-06-12 | |
PCT/SE2004/000867 WO2004109295A1 (en) | 2003-06-06 | 2004-06-04 | Method and apparatus for characterization of interactions |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2006527364A true JP2006527364A (ja) | 2006-11-30 |
JP4495151B2 JP4495151B2 (ja) | 2010-06-30 |
Family
ID=33513467
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2006508576A Expired - Lifetime JP4495151B2 (ja) | 2003-06-06 | 2004-06-04 | 相互作用の特性決定のための方法および装置 |
Country Status (3)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP1631829B1 (ja) |
JP (1) | JP4495151B2 (ja) |
WO (1) | WO2004109295A1 (ja) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2013515260A (ja) * | 2009-12-22 | 2013-05-02 | ジーイー・ヘルスケア・バイオサイエンス・アクチボラグ | 混合の改善された分析方法 |
JP2014521062A (ja) * | 2011-06-30 | 2014-08-25 | ジーイー・ヘルスケア・バイオサイエンス・アクチボラグ | 校正不要分析による活性濃度の決定方法 |
JP2018519527A (ja) * | 2015-07-10 | 2018-07-19 | センシキュー テクノロジーズ インコーポレイテッドSensiQ Technologies, Inc. | 単一注入競合的アッセイ |
Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US8143070B2 (en) | 2007-06-05 | 2012-03-27 | Ecolab Usa Inc. | Optical cell |
JP2010537194A (ja) | 2007-08-20 | 2010-12-02 | ノーマディックス インコーポレイテッド | バイオセンシングのための勾配注入 |
WO2012045325A1 (en) * | 2010-10-04 | 2012-04-12 | Ibis Technologies Bv | Surface plasmon resonance measuring system and a method for surface plasmon resonance measurement |
US9990464B1 (en) | 2012-10-09 | 2018-06-05 | Pall Corporation | Label-free biomolecular interaction analysis using a rapid analyte dispersion injection method |
WO2014191022A1 (en) * | 2013-05-28 | 2014-12-04 | Ibis Technologies B.V. | Measuring system, such as an interaction measuring system and a measuring method |
CN112683857B (zh) * | 2021-01-06 | 2022-10-14 | 上海药明生物医药有限公司 | 一种通过评估分析物的溶剂效应对亲和力实验的影响来指导spr检测前处理的方法 |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US1162455A (en) * | 1915-03-25 | 1915-11-30 | William Elser | Filter. |
IL82492A0 (en) * | 1986-05-21 | 1987-11-30 | Hercules Inc | Apparatus and method for analysis of liquid samples |
US4939924A (en) * | 1988-09-26 | 1990-07-10 | Iowa State University Research Foundation, Inc. | Pulsed coulometric detection with automatic rejection of background signal in surface-oxide catalyzed anodic detections at gold electrodes in flow-through cells |
US4988447A (en) * | 1989-12-22 | 1991-01-29 | Spectra Physics, Inc. | Reference flow liquid chromatography system with stable baseline |
EP0444441B1 (en) * | 1990-03-01 | 1996-09-25 | Hewlett-Packard Company | Minimizing eluate band widths in liquid chromatography |
DE60041331D1 (de) * | 1999-04-23 | 2009-02-26 | Advion Biosystems Inc | Parallel ausgeführte flüssigkeitschromatographievorrichtung mit hohem durchsatz |
-
2004
- 2004-06-04 JP JP2006508576A patent/JP4495151B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2004-06-04 EP EP04736157.1A patent/EP1631829B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-06-04 WO PCT/SE2004/000867 patent/WO2004109295A1/en active Application Filing
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2013515260A (ja) * | 2009-12-22 | 2013-05-02 | ジーイー・ヘルスケア・バイオサイエンス・アクチボラグ | 混合の改善された分析方法 |
JP2014521062A (ja) * | 2011-06-30 | 2014-08-25 | ジーイー・ヘルスケア・バイオサイエンス・アクチボラグ | 校正不要分析による活性濃度の決定方法 |
JP2018519527A (ja) * | 2015-07-10 | 2018-07-19 | センシキュー テクノロジーズ インコーポレイテッドSensiQ Technologies, Inc. | 単一注入競合的アッセイ |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP1631829A1 (en) | 2006-03-08 |
WO2004109295A1 (en) | 2004-12-16 |
JP4495151B2 (ja) | 2010-06-30 |
EP1631829B1 (en) | 2016-04-13 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US7642058B2 (en) | Method and apparatus for characterization of interactions | |
US10444230B2 (en) | Method and system for determination of molecular interaction parameters | |
JP5670975B2 (ja) | 分子相互作用パラメータの決定のための方法及びシステム | |
EP1766398B1 (en) | Method for detecting molecular surface interactions | |
US20120264233A1 (en) | Method of analysis with improved mixing | |
JP5855246B2 (ja) | 校正不要分析による活性濃度の決定方法 | |
US11796536B2 (en) | Method for determining analyte-ligand binding on a sensor surface | |
JP4495151B2 (ja) | 相互作用の特性決定のための方法および装置 | |
JP4751387B2 (ja) | 分子表面相互作用を検出する方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20070601 |
|
RD02 | Notification of acceptance of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7422 Effective date: 20070823 |
|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20070906 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A712 Effective date: 20080618 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20090730 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20090811 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20091111 |
|
RD02 | Notification of acceptance of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7422 Effective date: 20091111 |
|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20091111 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20091118 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20091211 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20091218 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20100108 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20100118 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20100210 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20100309 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20100408 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 4495151 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130416 Year of fee payment: 3 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130416 Year of fee payment: 3 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140416 Year of fee payment: 4 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
S533 | Written request for registration of change of name |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
EXPY | Cancellation because of completion of term |