JP2006523683A - タンパク質及び/またはポリペプチド及びコロイド粒子を含む医薬組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
1.1 材料及び方法
表面プラズモン共鳴分析:結合研究をBiacore TM2000バイオセンサー器具(スウェーデン国ウプサラに所在のBiacore AB)を用いて実施した。以下のタンパク質を業者が指示するアミンカップリングキットによりCM5−センサーチップ(スウェーデン国ウプサラに所在のBiacore AB)上に1500RU(〜1.5ng/mm2)で固定した:FVIII(米国カリフォルニア州バークリーに所在のBayer社のKogenate−FS)、FIX(米国マサチューセッツ州ケンブリッジに所在のGenetics Institute社のBenefix)、G−CSF、GM−CSF、IFN−γ、エリスロポエチン、ヒト成長ホルミン、インターフェロンα2a、インターフェロンα2b(イスラエル国ネスジオナに所在のProSpec−Tany TechnoGene Ltd)、GLP−1、インスリン(Sigma)、コパキソン(イスラエル国のTeva Pharma)、IgG及びHSA(イスラエル国テルアビブに所在のOmrix)。SPR分析は、PEG化リポソームまたは対照リポソームを0.2〜2mMの最終濃度で用いて50mM クエン酸ナトリウム緩衝液(pH7.0)中25℃で10μl/分の流速で4分間評価した。センサーチップ表面は、チップを1mM NaOHで10μl/分の流速で1分間洗浄することにより再生させた。会合定数、解離定数及び親和性定数についてのSPRデータの分析をBIA評価ソフトウェア(スウェーデン国ウプサラに所在のBiacore AB)を用いて実施した。
多重配列アラインメントをMUSCAソフトウェア(http://cbcsrv.watson.ibm.com)を用いて実施した。多重アラインメントのために以下のSwiss−Protデータベース受託番号を使用した:ヒト(h)FVIII(P00451)、hFIX(P00740)、hG−CSF(P09919)、hGM−CSF(P04141)、hIFN−γ(P01579)及びhGLP−1(P01275)
タンパク質/ペプチドのPEG化リポソームに対する結合:
タンパク質及びペプチドのPEG化リポソームに対する結合をBiacore器具(スウェーデン国ウプサラに所在のBiacoe)を用いる表面プラズモン共鳴(SPR)測定により分析した。タンパク質/ペプチドをCM5センサーチップ(スウェーデン国ウプサラに所在のBiacoe)上に固定化した後、同一のサイズ(80〜110nm)および濃度のPEG化リポソームまたは対照リポソームを注入し、タンパク質/ペプチドの流動摂取リポソームへの結合を測定および分析した。
アミノ酸配列分析は、8アミノ酸(S/T−X−L/I/V−I/V/Q/S−S/T−X−X−E)のコンセンサス配列がPEG化リポソームに結合するタンパク質内にある(図8a)が、PEG化リポソームに結合しないタンパク質中には存在しないことを示している。コンセンサス配列及びFVIII上の同定結合部位を試験するために、FVIIIのアミ酸1783−1796から誘導されるペプチドを合成し、そのPEG化リポソームに対する結合を調べた。このペプチドは2.25nMのKdでPEG化リポソームに結合したが、対照POPCリポソームには結合しなかった(図8c)。このKdは前に調べたFVIII及びPEG化リポソームのKd値と同等である(表1)。
しかしながら、4アミノ酸(L−ala、L−glu、L−lys及びL−tyr)の反復単位からなる合成ランダムコポリマーであるコパキソン(イスラエル国のテバ社)はコンセンサス配列を含まないが、PEG化リポソームに結合する(図9)。
2.1 材料及び方法
リポソーム調合タンパク質のマウスにおける薬物動態:
遊離及びリポソーム調合のFIX及びG−CSFの薬物動態パラメーターをマウスにおいて調べた。表2〜3に示す結果は、PEG化リポソームと調合したタンパク質の半減期及び曲線下面積は遊離タンパク質より高かったこと示している。
3.1 血友病マウスにおけるインビボでPEG化リポソームと調合したFVIIIの薬物動態及び生物学的活性
未調合第VIII因子を注射してから1時間後にリポソームを注射することによりインビボでPEG化リポソームと調合した第VIII因子の薬物動態及び生物学的活性を血友病マウスにおいて調べた。血友病マウスにa)遊離(未調合)FVIIIを注射し、b)遊離FVIIIを注射し、1時間後にPEG化リポソームの第2回注射をした。注射後の異なる時点にマウスから放血させた。FVIII活性を凝固アッセイにより測定した。リポソーム調合FVIIIのインビボ止血効果を試験し、遊離FVIIIの効果と比較するために、注射したマウスの尾を注射後の異なる時間に切断し、注射したマウスの生存数を調べた。
リアルタイム相互作用分析により、POPC及びカルバメート結合非帯電リポポリマーからなるリポソームに対するFVIIIの結合をPOPC及びDSPE−PEGからなるリポソームに対するFVIIIの結合と比較した。カルバメート結合非帯電リポポリマー、すなわちmPEGアミノプロパンジオールジステアロイル(DS−c−PEG)及び1,2−ジステアロイル−sn−グリセロ−3−ホスファチジルエタノールアミン−N−メトキシポリエチレングリコール(DSPE−PEG)の概略構造を以下に示す。
凝固第VIIa因子は通常、阻害剤を有する血友病患者を治療するため及び外傷性出血(例えば、戦争負傷、自動車事故)を止めるために使用されている。PEG化リポソームと調合した第VIIa因子の薬物動態をラットにおいて調べた。Sprague Dawley(SD)ラット(180g)に遊離(未調合)FVIIa(Nova Nordisk)またはPEG化リポソームと調合したFVIIaを36μg/ラット注射した。注射後の異なる時間にラットから放血させ、FVIIa活性を凝固アッセイ(Stago)により測定した。表5及び6の結果は、インビボでPEG化リポソームと調合した第VIIa因子の半減期及び曲線下面積は遊離FVIIaよりも高かったこと示している。
Claims (27)
- 治療有効量のタンパク質またはポリペプチド及びコロイド粒子を含む非経口投与用医薬組成物であって、
前記粒子は生体親和性親水性ポリマーで誘導体化された両親媒性脂質を約1〜20モル%含み、
前記タンパク質またはポリペプチドは(a)前記コロイド粒子に外部結合し得るタンパク質またはポリペプチド、(b)ポリアルキルエーテル、ポリ乳酸及びポリグリコール酸ファミリーのポリマーに結合し得るタンパク質またはポリペプチド及び(c)S/T−X−L/I/V−I/V/Q/S−S/T−X−X−E(ここで、Xは任意のアミノ酸であり得、S、T、L、I、V、E及びQは一般的意味を有する)のコンセンサス配列を含むタンパク質またはポリペプチドからなる群から選択され、
前記タンパク質またはポリペプチドは第VIII因子(FVIII)でなく、
前記タンパク質またはポリペプチドはコロイド粒子中に封入されていない前記医薬組成物。 - 前記コロイド粒子は実質的に中性であり、前記ポリマーは実質的に実効電荷を持たない、請求項1に記載の医薬組成物。
- 前記コロイド粒子は約0.03〜約0.4ミクロンの平均粒径を有する、請求項1に記載の医薬組成物。
- 前記コロイド粒子は約0.1ミクロンの平均粒径を有する、請求項3に記載の医薬組成物。
- 前記両親媒性脂質は天然または合成起源のリン脂質である、請求項1〜4のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 前記両親媒性脂質はホスファチジルエタノールアミン(PE)である、請求項5に記載の医薬組成物。
- 前記両親媒性脂質はカルバメート結合非帯電リポポリマーである、請求項1〜4のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 前記両親媒性脂質はアミノプロパンジオールジステアロイル(DS)である、請求項7に記載の医薬組成物。
- 前記コロイド粒子は更に天然または合成起源から得られる第2の両親媒性脂質を含む、請求項1に記載の医薬組成物。
- 前記第2の両親媒性脂質はホスファチジルコリンである、請求項9に記載の医薬組成物。
- コレステロールが前記組成物に補充されている、請求項9に記載の医薬組成物。
- 前記生体親和性親水性ポリマーはポリアルキルエーテル、ポリ乳酸及びポリグリコール酸ファミリーからなる群から選択される、請求項1に記載の医薬組成物。
- 前記生体親和性親水性ポリマーはポリエチレングリコールである、請求項12に記載の医薬組成物。
- 前記ポリエチレングリコールは約500〜約5000ダルトンの分子量を有する、請求項13に記載の医薬組成物。
- 前記ポリエチレングリコールは約2000ダルトンの分子量を有する、請求項14に記載の医薬組成物。
- タンパク質またはポリペプチドはプロトロンビン、第VIIa因子、第X因子、第V因子、第IX因子(FIX)、顆粒球コロニー刺激因子(G−CSF)、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(GM−CSF)、インターフェロンγ、グルカゴン様ペプチド(GLP−1)及びコパキソンからなる群から選択される、請求項1に記載の医薬組成物。
- 前記ポリペプチドはコパキソンであり、前記組成物は多発性硬化症、糖尿病性神経障害、老人性認知症、アルツハイマー病、パーキンソン病、顔面神経(ベル)麻痺、緑内障、ハンチントン舞踏病、筋萎縮性側索硬化症、てんかん重積持続状態、非動脈炎性視神経異常症、及びビタミン欠乏症から選択される疾患の治療のために使用される、請求項16に記載の医薬組成物。
- 前記ポリペプチドは第VIIa因子であり、前記組成物は阻害剤を有している血友病患者において外傷性出血を治療するために使用される、請求項16に記載の医薬組成物。
- 前記タンパク質またはポリペプチドはS/T−X−L/I/V−I/V/Q/S−S/T−X−X−E(ここで、Xは任意のアミノ酸である)のアミノ酸コンセンサス配列を含む、請求項1に記載の医薬組成物。
- 血友病を患っている患者に対して治療有効量の血友病の治療に有効なタンパク質またはポリペプチド及びコロイド粒子を含む非経口投与用医薬組成物を投与することを含む前記患者の治療方法であって、
前記粒子は生体親和性親水性ポリマーで誘導体化された両親媒性脂質を約1〜20モル%含み、
前記タンパク質またはポリペプチドは(a)前記コロイド粒子に外部結合し得るタンパク質またはポリペプチド、(b)ポリアルキルエーテル、ポリ乳酸及びポリグリコール酸ファミリーのポリマーに結合し得るタンパク質またはポリペプチド及び(c)S/T−X−L/I/V−I/V/Q/S−S/T−X−X−E(ここで、Xは任意のアミノ酸であり得、S、T、L、I、V、E及びQは一般的意味を有する)のコンセンサス配列を含むタンパク質またはポリペプチドからなる群から選択され、
前記タンパク質またはポリペプチドは第VIII因子(FVIII)でなく、
前記タンパク質またはポリペプチドは前記コロイド粒子中に封入されていない治療方法。 - 前記患者はタンパク質またはポリペプチドに対する阻害剤抗体を発現している、請求項20に記載の方法。
- 治療有効量のタンパク質またはポリペプチド及びコロイド粒子を含む血友病患者を治療するための非経口投与用医薬組成物の製造におけるコロイド粒子の使用であって、
前記粒子は生体親和性親水性ポリマーで誘導体化された両親媒性脂質を約1〜20モル%含み、
前記タンパク質またはポリペプチドは(a)前記コロイド粒子に外部結合し得るタンパク質またはポリペプチド、(b)ポリアルキルエーテル、ポリ乳酸及びポリグリコール酸ファミリーのポリマーに結合し得るタンパク質またはポリペプチド及び(c)S/T−X−L/I/V−I/V/Q/S−S/T−X−X−E(ここで、Xは任意のアミノ酸であり得、S、T、L、I、V、E及びQは一般的意味を有する)のコンセンサス配列を含むタンパク質またはポリペプチドからなる群から選択され、
前記タンパク質またはポリペプチドは第VIII因子(FVIII)でなく、
前記タンパク質またはポリペプチドは前記コロイド粒子中に封入されていない前記使用。 - 前記患者は前記タンパク質またはポリペプチドに対する阻害剤抗体を発現している、請求項22に記載の使用。
- 治療有効量のタンパク質またはポリペプチド及びコロイド粒子を含む非経口投与用医薬組成物の製造におけるコロイド粒子の使用であって、
前記粒子は生体親和性親水性ポリマーで誘導体化された両親媒性脂質を約1〜20モル%含み、
前記タンパク質またはポリペプチドは(a)前記コロイド粒子に外部結合し得るタンパク質またはポリペプチド、(b)ポリアルキルエーテル、ポリ乳酸及びポリグリコール酸ファミリーのポリマーに結合し得るタンパク質またはポリペプチド及び(c)S/T−X−L/I/V−I/V/Q/S−S/T−X−X−E(ここで、Xは任意のアミノ酸であり得、S、T、L、I、V、E及びQは一般的意味を有する)のコンセンサス配列を含むタンパク質またはポリペプチドからなる群から選択され、
前記タンパク質またはポリペプチドは第VIII因子(FVIII)でなく、
前記タンパク質またはポリペプチドはコロイド粒子中に封入されていない前記使用。 - 病気を患っている患者に対して治療有効量の前記病気の治療に有効なタンパク質またはポリペプチド及びコロイド粒子を含む非経口投与用医薬組成物を投与することを含む前記患者の治療方法であって、
前記粒子は生体親和性親水性ポリマーで誘導体化された両親媒性脂質を約1〜20モル%含み、
前記タンパク質またはポリペプチドは(a)前記コロイド粒子に外部結合し得るタンパク質またはポリペプチド、(b)ポリアルキルエーテル、ポリ乳酸及びポリグリコール酸ファミリーのポリマーに結合し得るタンパク質またはポリペプチド及び(c)S/T−X−L/I/V−I/V/Q/S−S/T−X−X−E(ここで、Xは任意のアミノ酸であり得、S、T、L、I、V、E及びQは一般的意味を有する)のコンセンサス配列を含むタンパク質またはポリペプチドからなる群から選択され、
前記コロイド粒子と前記タンパク質またはポリペプチドを別々に投与し、
前記タンパク質またはポリペプチドは前記コロイド粒子中に封入されていない前記方法。 - 前記タンパク質またはポリペプチドは第VIII因子(FVIII)でない、請求項25に記載の方法。
- 前記コロイド粒子はリポソームであり、前記タンパク質またはポリペプチドは第VIII因子(FVIII)である請求項25に記載の方法。
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