JP2006518993A - 分化する胚性幹細胞を使用する三次元組織構造の設計 - Google Patents
分化する胚性幹細胞を使用する三次元組織構造の設計 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2006518993A JP2006518993A JP2005511760A JP2005511760A JP2006518993A JP 2006518993 A JP2006518993 A JP 2006518993A JP 2005511760 A JP2005511760 A JP 2005511760A JP 2005511760 A JP2005511760 A JP 2005511760A JP 2006518993 A JP2006518993 A JP 2006518993A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- stem cells
- poly
- embryonic stem
- cell
- growth factor
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
- A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
- A61L27/3804—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells characterised by specific cells or progenitors thereof, e.g. fibroblasts, connective tissue cells, kidney cells
- A61L27/3834—Cells able to produce different cell types, e.g. hematopoietic stem cells, mesenchymal stem cells, marrow stromal cells, embryonic stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/14—Macromolecular materials
- A61L27/18—Macromolecular materials obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/14—Macromolecular materials
- A61L27/22—Polypeptides or derivatives thereof, e.g. degradation products
- A61L27/227—Other specific proteins or polypeptides not covered by A61L27/222, A61L27/225 or A61L27/24
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
- A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
- A61L27/3839—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells characterised by the site of application in the body
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
- A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
- A61L27/3895—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells using specific culture conditions, e.g. stimulating differentiation of stem cells, pulsatile flow conditions
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/0068—General culture methods using substrates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0603—Embryonic cells ; Embryoid bodies
- C12N5/0606—Pluripotent embryonic cells, e.g. embryonic stem cells [ES]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
- C12N2533/30—Synthetic polymers
- C12N2533/40—Polyhydroxyacids, e.g. polymers of glycolic or lactic acid (PGA, PLA, PLGA); Bioresorbable polymers
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Botany (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
Abstract
Description
本発明は分化する胚性幹細胞を使用する3次元の組織構造の製造に関する。
ヒトES(hES)細胞をはじめとする胚性幹(ES)細胞は、これらの細胞を分化させると全ての体細胞系列を生じるそのユニークな能力により細胞移植のための有望な供給源である1−3、4。支持細胞層からこの細胞を除去し、懸濁液中で成長させることにより、その中で連続的分化工程が起こり、細胞性凝集および胚様体(EB)が形成され、ESの分化を誘発させることができる5。いくつかの研究により、直接的には成長因子により、間接的には支持細胞により、特定の系列へのES細胞分化を誘発することができる化学的なきっかけが提供されることが分かった6−9。しかしながら、複合組織を形成するようにES細胞の分化を制御することに成功した研究は存在しない。ある細胞系列では、表面相互作用、剪断応力、および機械的応力を含む物理的なきっかけが分化を誘発した10−13。
一局面において、本発明は、胚性幹細胞、幹細胞により生じた収縮力に抵抗性のある3次元細胞支持基質、および所定の細胞系列に沿って、あるいは特定の細胞型に幹細胞の分化を促進するために選択された少なくとも1つの成長因子を含む組織工学構築物を提供する。この幹細胞は、例えばヒトの胚性幹細胞などの哺乳動物の胚性幹細胞でもよい。細胞支持基質は、例えば、ポリ(L−乳酸)およびポリ(乳酸−co−グリコール酸)の50/50混合物などのポリ(乳酸)−ポリ(乳酸−co−グリコール酸)混合物がある。
「生体分子」:本明細書に使用される用語「生体分子」は、細胞または組織で一般に認められる天然あるいは人工の(例えば、合成、または組換え法によって)いずれかの分子類(例えば、タンパク質、アミノ酸、ペプチド、ポリヌクレオチド、ヌクレオチド、炭水化物、糖、脂質、核タンパク質、糖タンパク質、リポタンパク質、ステロイドなど)を指す。特定のクラスの生体分子としては、酵素、受容体、神経伝達物質、ホルモン、サイトカイン、成長因子および走化因子などの細胞応答修飾因子、抗体、ワクチン、ハプテン、毒素、インターフェロン、リボザイム、アンチセンス薬剤、プラスミド、DNA、およびRNAなどがあるがこれに限定されない。
一実施形態において、本発明は組織工学構築物を産生する方法である。所望の分化経路を刺激する薬剤にさらされる前後に、支持基質上にhES細胞の集団が播種される。支持基質は、細胞により作用する収縮力の下で崩壊しないように十分高い弾性率を有する。
これが正しい場合、単細胞(A細胞)の断面積で上記断面積(細胞の面積)を割ることにより、断面積における細胞の数を評価することができる。上述の式は、以下のように書き直すことができる。
横断面内の細胞の直径がおよそ6μmであると仮定すると、Acellは約(環状横断面を想定して)28μmである。これらの既知の値を上式と代入すると、次の結果が得られる。すなわち、細胞は骨格におよそ110Paの応力を及ぼす。これは非常に概略的なおおざっぱな評価である。
(細胞培養)
5に記載されるように、ES細胞のために最適化されたDulbeco改質イーグル培地の修正版であるノックアウト培地(Gibco−BRL、Gaithersburg、MD)中のマウス胚性線維芽細胞(Cell Essential,ボストン,MA)上でhES細胞(H9クローン)を培養した。EBの形成を誘発するために、hES細胞群体を1mg/mlコラゲナーゼIV型で解離させ、ペトリ皿内のLIFおよびbFGFを含まない分化培地中に懸濁した5。
骨格は、ポリ(乳酸−co−グリコール酸)(Boeringer Ingelheim Resomer 503H、インゲルハイム、ドイツ、Mn〜25,000)およびポリ(L−乳酸)(Polysciences、Warrington、PA、Mn〜300,000)の50/50ブレンドで構成された。15に記載されるように、スポンジは塩浸出プロセスによって製作された。細胞分化実験では、このスポンジをおよそ5×4×1mm3の複数の長方形片にカットした。細胞播種に先立って、これらを70%(vol/vol)エタノールで一晩滅菌し、PBS中で3回洗浄した。
スポンジ単独の張力試験では、乾燥したスポンジを0.4mm×5mm×11mmにトリムし、Instron 5542装置を使用して、破損するまで0.05mm/秒のひずみ速度で試験を行った。Instron5542装置を使用して、平行なプレートロードセル内で、スポンジ単独および成長因子低減MATRIGELTM)とともに圧迫試験を行った。スポンジは、厚さ0.8mm、直径17mmの多孔質のディスクとした。0.1mm/mm/秒のひずみ速度で同じひずみ速度で試験する前に、5%ひずみまで試料をはじめに同じひずみ速度で1回プレサイクルさせた。
基質ゲル中の播種では、8〜9日経過のEBをトリプシン処理し、0.8×106細胞を25μLの50%(vol/vol)培地および基質ゲル中に混合した(成長因子を減少させたもの、BD Biosciences、Bedford、MA)。EB培地は次の成長因子を補充した。TGF−b1(2ng/mL)、アクチビン−A(20ng/mL)およびIGF−I(10ng/mL)(R&D Systems、Minneapolis、MN)、およびRA(300ng/ml)(Sigma)。この混合物を37℃で6ウェルペトリ皿中で凝固させ、続いて滅菌済みブレードでペトリ皿から剥がした。それぞれを4mLのEB培地に加えた。骨格上の播種では、0.8×106細胞を、50%(vol/vol)の成長因子低減MATRIGELTM)およびそれぞれのEB培地を含む25μLの混合物を使用してそれぞれの骨格内に播種した。細胞を播種後、それぞれの培地中の6ウェルペトリ皿に骨格を懸濁させた。いくつかの実験では、骨格を50のμg/mLのフィブロネクチン(Sigma)の中に1時間浸漬し、25μLのEB培地での細胞播種(基質ゲルなし)を行う前に、PBSの中で洗浄した。
組織構成物を10%中性緩衝ホルマリン中で6時間固定し、常法により処理し、パラフィン中に包埋した。5−μm厚の横断切片を免疫組織化学用のシラン処理されたスライド上に置き、ヘマトキシリン‐エオジン(H&E)、トリクローム、またはサフラニン0で染色した。ReVeal緩衝液(Biocare Medical)中で事前の90℃、20分間のエピトープ回復のための加熱処理と共に、Biocare Medical Universal HRP−DABキット(Biocare Medical,Walnut Creek,CA)を使用し、製造者の指示に従って免疫組織化学的染色を行った。主要抗体は、マウス抗ヒト:デスミン(1:150)、アルファ胎児性タンパク質(1:2500)、サイトケラチン7(1:25)、CD31(1:20)、アルブミン(1:100)、ビメンチン(1:50)、S100(1:100)(全てDakoより)、抗ヒトのβIII―チューブリン(Sigma、1:500)、ネスチン(Transduction Laboratories、サンディエゴ、カリフォルニア州、1:1000)、CD34(Labvision、フリーモント、カリフォルニア州、1:20)、SSEA4(Hybridoma Bank、アイオワ大学、エイムス、1:4)。およびTra1−60(Peter Andrewsより贈与、シェフィールド大学、シェフィールド、英国、1:10)であった。対照群としてヒトおよびマウス組織(Daks)を使用し、抗体特異性(図1)を確保した。増殖試験では、固定前に10μmの5’−ブロモ−2’−デオキシウリジン(BrdUrd)(Sigma)とともに、培地を3時間インキュベートした。マウス抗−BrdUrd抗体(1:1000)を使用して組織切片を染色した。
コントロール培地またはIGFまたはRAの存在下で2週間成長させた構成物を処理し、上述のように抗サイトケラチン抗体で染色させた。細管嚢胞状構造をカウントし、管腔直径を測定し、グループ化した(大>200μm、中>40μm、小<40μm、閉鎖および多層状管腔)。結果、すなわち2回行った2つの異なる実験で得られた試料の平均値(±SD)を各試料中の管腔の総数から各群中の管腔パーセントとして記録した。
全RNAをRNEasyミニ・キット(Qiagen、Chatsworth、カリフォルニア州)によって単離した。10単位のRNase阻害薬(ギブコ)および40ngRNA含むQiagen OneStep RT−PCRキットを使用してRT−PCRを行った。プライマーシーケンス、反応条件、およびサイクル数は記述されたように行った7、15。臭化エチジウム(B−Gel、Invitrogen、Gaithersburg、MA)を含む1.2%アガロースゲル上で増幅生成物を分離した。GADPHプライマーを使用して増幅されたRNAを含むいくつかのゲルについて、各バンドの平均画素強度の測定、およびGADPHバンドの平均画素強度に対する測定強度の規準化により半定量的分析を行った。
4週齡SCUDマウス(CB.17.SCID、Taconic Farms)の背側領域の皮下に、インビトロで2週間骨格上で成長させた分化しつつあるhES細胞を移植した。細胞なしで移植された骨格を対照群として使用した。移植14日後に、移植片を回収し、4℃で10%の緩衝化ホルマリン中に一晩固定し、パラフィンに包埋し、組織学的検査のために切片を作成した。
(基質ゲルのみでは、3次元hES細胞分化のための十分なサポートを提供しない)
ES細胞分化別を誘発することが知られた代表的な成長因子補給物、すなわち、レチノイン酸(RA)、アクチビン−A、トランスフォーミング増殖因子β(TGF−b)、およびインシュリン成長因子(IGF)の存在下に、以前に細胞組織化をサポートすることが示された14、15基質ゲル中で、分化しているhES細胞(EB8日)を培養した。最初に、細胞−基質ゲル混合物をディスク状に成形するが、懸濁液中で2週間培養した後に、この構造を細胞による基質ゲルの収縮を示唆する「球」状に変形させた。アクチビン−AあるいはRA(さらにある程度TGF−bを含む)のいずれかで処理された試料では、小型の濃縮された球が形成されたが、一方、IGFまたは成長因子を含まないコントロール培地で処理された試料では、より大きく濃縮が少なかった(図2A)。
生分解性骨格を使用して、hES細胞の分化および組織化を組織様構造に割り当てるために3D支持的環境を構築した。50%ポリ(乳酸−co−グリコール酸)(PLGA)および50%ポリ(L−乳酸)(PLLA)のブレンドから骨格を製造した。細胞性内殖を促進するために、PLGAは急速(およそ3週間)に分解するように選択されたが、一方、PLLAは細胞の収縮力に抵抗するために機械的剛性を提供するように選択された。細胞の播種および内殖を促進するために250−500μmの細孔径が選択された。
骨格がhES細胞分化および3D組織化に有効であるか否かを判定するため、フィブロネクチンをコートした骨格に対して、フィブロネクチンをコートしたシャーレで培養した分化しているhES細胞の2週間インキュベーション、ならびに骨格を含む基質ゲルに対する基質ゲルのみにおける分化を比較した。2次元的にフィブロネクチンをコートしたシャーレは、ある細胞分化をサポートしたが(図3)、3D構造形成をサポートすることができなかった。基質ゲル単独では3D環境を形成することができたが、hES細胞増殖および3D組織化(図2)のサポートは困難であった。1つの可能性は、基質ゲル単独および基質ゲルを含む骨格の間の相違が、細胞収縮力に抵抗するために必要である骨格の機械的剛性により部分的に引き起こされる場合があることである。
本発明者らは、特定の中胚葉性、外胚葉性、および内皮性由来の組織構造に分化することを促進する物理的手がかりと結合した化学的手がかりに関する役割をさらに検討した。EBモデルおよび単層におけるマウスおよびヒトES細胞の分化に関する研究に基づいて6−8、特定の(複数の)胚葉に分化を誘発することが知られた成長因子を選択した。
血管が複合組織構造20−22の形成を促進するので、骨格に形成された組織構造内で血管内において、hES細胞が分化し組織化することができるかどうかを分析した。CD34およびCD31に対する抗体による染色では、骨格との2週間の培養期間の後、細胞は内皮細胞へ分化し、さらに組織の全体にわたり血管様の構造に組織化されることが分かった。細胞の3D培養株は、周囲の組織と密接に相互作用した大量の3D血管ネットワークの形成を促進した(図10)。基質ゲルの存在下および非存在下における骨格内の血管新生の比較では、フィブロネクチンコート骨格(基質ゲルなし)上に播種された試料は、高度の内皮性分化および血管新生を生じたので、基質ゲルは不要であることが分かった(図10)。興味深いことに、RNA分析で示されるように(図9および10)、RAで処理された試料は、(CD34およびCD31で免疫染色することにより示唆された)血管形成も、CD34またはCD31遺伝子の発現も認められなかった。伸長された平滑筋様細胞も検出された。これらは組織内のいくつかの管腔のまわりで組織化されたが、RAで処理された試料中では組織化されなかった(図10)。これらの結果は、ポリマー骨格上で成長した分化しているhES細胞は分化し、血管新生化された複合組織構造を形成することができることを示す。更に、骨格の物理的ガイダンスにより提供されたこのインビトロの血管新生プロセスは、培地へ成長因子を添加することによってコントロールすることができる。
hES派生ポリマー骨格構成物の治療可能性を分析するために、SCIDマウスの皮下組織に2週齡の構成物を外科的に移植した。移植片回収時(移植後14日)では、構成物内の細胞は生存可能であり、感染の徴候は検出されなかった。移植片は、緩い線維肉芽腫性の結合組織により不完全に被包化され、宿主血管が浸透していた。ヒト特異性CD31抗体を使用する免疫組織化学的染色により、構成物全体にわたり免疫反応性(構成物、図11、矢印)および非免疫反応性(宿主、図11、矢じり)血管の両方の存在が明らかとなった。さらに、構成物派生血管は腔内赤血球を含み、宿主血管性anastamosisが示唆された。サイトケラチン、βIII−チューブリン、およびAFP抗体による免疫染色では、移植された構成物は、骨格領域(図11)内の限定構造中のこれらのヒトタンパク質を発現し続けていることが示唆された(図11)。ある場合には、移植後の構成物の分化および組織化が継続していると考えられ、これは移植前の特定のサイトカイン処置によって影響された。
物理的環境および適切な成長因子補充の両者は、ヒト組織様3D構造の形成において重要である。本発明者らは、ポリマー骨格上で成長させたhES細胞を使用して、インビトロでヒト軟骨、肝臓、神経、および血管の発生と一致する形態学的および生化学的の特徴を有する組織の形成をインビトロで実証した。骨格は分化された組織の形成を促進することが分かった。線維芽細胞の収縮力を使用して、骨格上の細胞性挙動をモデル化すると、細胞性応力は110Paと見積もられた。この応力下では、基質ゲルは700パーセント収縮するが、一方骨格はわずか0.2パーセント収縮するのみと予想され、本質的に骨格は収縮しないことを意味している。しかしながら、細胞型に依存して、細胞は異なる収縮力を表示する場合がある。さらに、化学的環境は細胞の機械的挙動にも影響を及ぼす。成長因子が幹細胞などの細胞の機械的挙動に影響を及ぼすことが示された23−26。これは同じ成長因子条件(IGF、あるいはコントロール培地)下でなぜ基質ゲルが収縮しなかったのかを説明しているが、他の条件下では完全に崩壊した(アクチビン−A、RA)(図2)。同じ成長因子補充により細胞を骨格で成長させた場合、3D組織構造(血管ネットワーク、神経管状構造などの)への組織化とともに多様な特定の細胞系列(内皮、神経、肝細胞など)への一層の分化が誘発された(図8−10)。これらの所見は、化学的および物理的手がかり(例えば、骨格によって提供された機械的サポート)がES細胞の複合組織への分化に影響を及ぼすことを示唆している。
Claims (70)
- 組織工学構築物であって、以下:
胚性幹細胞;
3次元細胞支持基質であって、該幹細胞によって生じた収縮力に抵抗性である其質;および
所定の細胞系列に沿って、または特定の細胞型への幹細胞分化を促進するために選択された、少なくとも1つの成長因子、
を含む、組織工学構築物。 - 前記幹細胞が、哺乳動物胚性幹細胞である、請求項1に記載の組織工学構築物。
- 前記細胞が、ヒト胚性幹細胞である、請求項2に記載の組織工学構築物。
- 前記細胞支持基質が、ポリ(乳酸)−ポリ(乳酸−co−グリコール酸)混合物を含む、請求項1に記載の組織工学構築物。
- 前記細胞支持基質が、ポリ(L−乳酸)およびポリ(乳酸−co−グリコール酸)の50/50混合物を含む、請求項4に記載の組織工学構築物。
- 前記胚性幹細胞によって生じた収縮力の下で、前記基質の断面積が50%をこえて減少しない、請求項1に記載の組織工学構築物。
- 前記胚性幹細胞によって生じた収縮力の下で、前記基質の断面積が40%をこえて減少しない、請求項6に記載の組織工学構築物。
- 前記胚性幹細胞によって生じた収縮力の下で、前記基質の断面積が30%をこえて減少しない、請求項7に記載の組織工学構築物。
- 前記胚性幹細胞によって生じた収縮力の下で、前記基質の断面積が20%をこえて減少しない、請求項8に記載の組織工学構築物。
- 前記胚性幹細胞によって生じた収縮力の下で、前記基質の断面積が10%をこえて減少しない、請求項9に記載の組織工学構築物。
- 前記胚性幹細胞によって生じた収縮力の下で、前記基質の断面積が1%をこえて減少しない、請求項10に記載の組織工学構築物。
- 前記細胞支持基質が、細胞接着を促進する薬剤を含むコーティングをさらに有する、請求項1に記載の組織工学構築物。
- 細胞接着を促進する前記薬剤が、細胞接着を促進するフィブロネクチン、インテグリン、およびオリゴヌクレオチドから選択される、請求項12に記載の組織工学構築物。
- 前記細胞支持基質が生分解性、または非生物分解性である、請求項1に記載の組織工学構築物。
- 前記細胞支持基質が、PLA、PGA、PLGA、ポリ(無水物)、ポリ(ヒドロキシ酸)、ポリ(オルトエステル)、ポリ(プロピルフメレート)、ポリ(カプロラクトン)、ポリアミド、ポリアミノ酸、ポリアセタール、生分解性ポリシアノアクリレート、生分解性ポリウレタン、多糖類、ポリピロール、ポリアニリン、ポリチオフェン、ポリスチレン、ポリエステル、非生物分解性ポリウレタン、ポリ尿素、ポリ(エチレン酢酸ビニル)、ポリプロピレン、ポリメタクリレート、ポリエチレン、ポリカーボネート、ポリ(エチレンオキシド)、上記のうちの任意のコポリマー、上記のうちの任意の付加物、および上記のうちの任意のポリマーの混合物、コポリマー、および相互の付加物から選択される、請求項14に記載の組織工学構築物。
- 前記細胞支持基質内に配置された生体分子、低分子、または生理活性薬剤を1つ以上さらに含む、請求項1に記載の組織工学構築物。
- 前記細胞支持基質の内面および外面をコートするゲルをさらに含む、請求項1に記載の組織工学構築物。
- 前記ゲルが、コラーゲンゲル、アルギン酸塩、寒天、および成長因子低減MATRIGELTMから選択される、請求項17に記載の組織工学構築物。
- 前記ゲルが、ラミニン、フィブリン、フィブロネクチン、プロテオグリカン、糖タンパク質、グリコサミノグリカン、走化性薬剤、または成長因子の1つ以上をさらに含む、請求項18に記載の組織工学構築物。
- 前記成長因子が、サイトカイン、エイコサノイド、および分化因子から選択される、請求項1に記載の組織工学構築物。
- 前記成長因子が、アクチビン−A(ACT)、レチノイン酸(RA)、上皮細胞成長因子、骨形態形成タンパク質、TGF−β、肝細胞増殖因子、血小板由来成長因子、TGF−α、IGF−IおよびIGF−II、造血成長因子、ヘパリン結合性増殖因子、ペプチド成長因子、エリスロポエチン、インターロイキン、腫瘍壊死因子、インターフェロン、コロニー刺激因子、繊維芽細胞成長因子、神経成長因子(NGF)、および筋肉形態発生因子(MMF)から選択される、請求項20に記載の組織工学構築物。
- 前記細胞支持基質が、粒子、管、スポンジ、球、鎖、巻かれた鎖、毛細管網、フィルム、線維、メッシュ、およびシートから選択される形状を有する、請求項1に記載の組織工学構築物。
- 組織工学構築物を製造する方法であって、該方法は、以下:
胚性幹細胞の集団を提供する工程;
細胞支持基質上に胚性幹細胞を播種する工程;および
所定の細胞系列に沿って、または特定の細胞型に幹細胞の分化を促進するために選択された少なくとも1つの薬剤に胚性幹細胞を暴露する工程を包含し、
ここで、該曝露工程を該播種工程の前もしくは後、またはその両方で行い得る、
方法。 - 前記胚性幹細胞が、哺乳動物の胚性幹細胞である、請求項23に記載の方法。
- 前記胚性幹細胞が、ヒト胚性幹細胞である、請求項24に記載の方法。
- 前記細胞支持基質が、3次元である、請求項23に記載の方法。
- 前記胚性幹細胞によって生じた収縮力の下で、前記基質の断面積が50%をこえて減少しない、請求項23に記載の方法。
- 前記胚性幹細胞によって生じた収縮力の下で、前記基質の断面積が40%をこえて減少しない、請求項27に記載の方法。
- 前記胚性幹細胞によって生じた収縮力の下で、前記基質の断面積が30%をこえて減少しない、請求項28に記載の方法。
- 前記胚性幹細胞によって生じた収縮力の下で、前記基質の断面積が20%をこえて減少しない、請求項29に記載の方法。
- 前記胚性幹細胞によって生じた収縮力の下で、前記基質の断面積が10%をこえて減少しない、請求項30に記載の方法。
- 前記胚性幹細胞によって生じた収縮力の下で、前記基質の断面積が1%をこえて減少しない、請求項31に記載の方法。
- 前記細胞支持基質が、ポリ(乳酸)−ポリ(乳酸−co−グリコール酸)混合物を含む、請求項23に記載の方法。
- 前記細胞支持基質が、ポリ(L−乳酸)およびポリ(乳酸−co−グリコール酸)の50/50混合物を含む、請求項33に記載の方法。
- 細胞接着を促進する薬剤で細胞支持基質をコーティングする工程をさらに包含する、請求項23に記載の方法。
- 細胞接着を促進する前記薬剤は、細胞接着を促進するフィブロネクチン、インテグリン、およびオリゴヌクレオチドから選択される、請求項35に記載の方法。
- 前記細胞支持基質が生分解性または非生物分解性である、請求項23に記載の方法。
- 前記細胞支持基質が、PLA、PGA、PLGA、ポリ(無水物)、ポリ(ヒドロキシ酸)、ポリ(オルトエステル)、ポリ(プロピルフメレート)、ポリ(カプロラクトン)、ポリアミド、ポリアミノ酸、ポリアセタール、生分解性ポリシアノアクリレート、生分解性ポリウレタン、多糖類、ポリピロール、ポリアニリン、ポリチオフェン、ポリスチレン、ポリエステル、非生物分解性ポリウレタン、ポリ尿素、ポリ(エチレン酢酸ビニル)、ポリプロピレン、ポリメタクリレート、ポリエチレン、ポリカーボネート、ポリ(エチレンオキシド)、上記のうちの任意のコポリマー、上記のうちの任意の付加物、および上記のうちの任意のポリマーの混合物、コポリマー、および相互の付加物から選択される、請求項23に記載の方法。
- 1つ以上の生体分子、低分子、および生理活性薬剤を前記細胞支持基質へ添加する工程をさらに包含する、請求項23に記載の方法。
- 請求項23に記載の方法であって、該方法は、ゲル内に前記胚性幹細胞を配置する工程をさらに包含し、ここで、前記細胞支持基質上に該胚性幹細胞を播種する工程は、該ゲルを該細胞支持基質の内面および外面上に配置する工程を包含する、方法。
- 前記ゲルが、コラーゲンゲル、アルギン酸塩、寒天、および成長因子低減MATRIGELTMから選択される、請求項40に記載の方法。
- 前記ゲルが、1つ以上のラミニン、フィブリン、フィブロネクチン、プロテオグリカン、糖タンパク質、グリコサミノグリカン、走化性薬剤、および成長因子をさらに含む、請求項41に記載の方法。
- 培養工程が、無血清培地中で行なわれる、請求項23に記載の方法。
- 前記薬剤が、成長因子、機械力、電圧、生理活性薬剤、生体分子、および低分子から選択される、請求項23に記載の方法。
- 前記成長因子が、サイトカイン、エイコサノイド、および分化因子から選択される、請求項44に記載の方法。
- 前記成長因子が、アクチビン−A(ACT)、レチノイン酸(RA)、上皮細胞成長因子、骨形態形成タンパク質、TGF−β、肝細胞増殖因子、血小板由来成長因子、TGF−α、IGF−IおよびIGF−II、造血成長因子、ヘパリン結合性増殖因子、ペプチド成長因子、エリスロポエチン、インターロイキン、腫瘍壊死因子、インターフェロン、コロニー刺激因子、繊維芽細胞成長因子、神経成長因子(NGF)、および筋肉形態発生因子(MMF)から選択される、請求項45に記載の方法。
- 前記機械力が、フープ応力、剪断応力、静水圧応力、圧縮応力、引張り応力、および上記の組み合わせから選択される、請求項44に記載の方法。
- 前記細胞支持基質が、粒子、管、スポンジ、球、鎖、巻かれた鎖、毛細管網、フィルム、線維、メッシュおよびシートからから選択される形状を有する、請求項23に記載の方法。
- 提供する工程が、成長因子の存在下で胚性幹細胞を培養する工程を包含する、請求項23に記載の方法。
- 培養する工程が、無血清培地中で行なわれる、請求項49に記載の方法。
- 組織工学構築物であって、以下:
胚性幹細胞;
ポリ(L−乳酸)およびポリ(乳酸−co−グリコール酸)の50/50混合物を含む3次元細胞支持基質;ならびに、
TGF−β、
を含む、組織工学構築物。 - 組織工学構築物であって、以下:
胚性幹細胞;
ポリ(L−乳酸)およびポリ(乳酸−co−グリコール酸)の50/50混合物を含む3次元細胞支持基質;ならびに、
アクチビンA、IGF、および上記の任意の組み合わせのメンバー、
を含む、組織工学構築物。 - 組織工学構築物であって、以下:
胚性幹細胞;
ポリ(L−乳酸)およびポリ(乳酸−co−グリコール酸)の50/50混合物を含む3次元細胞支持基質;ならびに、
レチノイン酸、
を含む、組織工学構築物。 - 前記細胞支持基質が、フィブロネクチンまたは成長因子低減MATRIGELTMの1つ以上をさらに含む、請求項51、52、または53に記載の組織工学構築物。
- 組織発生を促進する方法であって、以下;
胚性幹細胞の集団を提供する工程;
ポリ(L−乳酸)およびポリ(乳酸−co−グリコール酸)の50/50混合物を含む細胞支持基質上に胚性幹細胞を播種する工程;ならびに、
TGF−βに胚性幹細胞を曝露する工程を包含し、
ここで、該細胞は、軟骨組織を産生する、方法。 - 組織発生を促進する方法であって、以下:
胚性幹細胞の集団を提供する工程;
ポリ(L−乳酸)およびポリ(乳酸−co−グリコール酸)の50/50混合物を含む細胞支持基質上に胚性幹細胞を播種する工程;ならびに、
該胚性幹細胞を1つ以上のアクチビンAおよびIGFに曝露する工程を包含し、、
ここで、該細胞は、α胎児性タンパク質およびアルブミンを産生する、方法。 - 組織発生を促進する方法であって、以下:
胚性幹細胞の集団を提供する工程;
ポリ(L−乳酸)およびポリ(乳酸−co−グリコール酸)の50/50混合物を含む細胞支持基質上に胚性幹細胞を播種する工程;ならびに、
該胚性幹細胞をレチノイン酸に曝露する工程を包含し、
ここで、該細胞は、神経組織構造を発生する、方法。 - 前記細胞支持基質が、1つ以上のフィブロネクチンまたは成長因子低減MATRIGELTMをさらに含む、請求項55、56または57に記載の方法。
- 曝露工程は、2週間インビトロで播種された細胞支持基質を培養する工程を包含し、前記方法は、播種された細胞支持基質を、動物に移植する工程をさらに包含する、請求項55、56または57に記載の方法。
- 組織発生を促進する方法であって、以下:
胚性幹細胞の集団を提供する工程;
細胞支持基質上に該胚性幹細胞を播種する工程;
所定時間の間、成長因子の存在下で、該播種された細胞支持基質を培養する工程、および
動物に前記培養細胞支持基質を移植する工程、
を包含する、方法。 - 前記細胞支持基質が、PLA、PGA、PLGA、ポリ(無水物)、ポリ(ヒドロキシ酸)、ポリ(オルトエステル)、ポリ(プロピルフメレート)、ポリ(カプロラクトン)、ポリアミド、ポリアミノ酸、ポリアセタール、生分解性ポリシアノアクリレート、生分解性ポリウレタン、多糖類、ポリピロール、ポリアニリン、ポリチオフェン、ポリスチレン、ポリエステル、非生物分解性ポリウレタン、ポリ尿素、ポリ(エチレン酢酸ビニル)、ポリプロピレン、ポリメタクリレート、ポリエチレン、ポリカーボネート、ポリ(エチレンオキシド)、上記のうちの任意のコポリマー、上記のうちの任意の付加物、および上記のうちの任意のポリマーの混合物、コポリマー、および相互の付加物から選択される、請求項60に記載の方法。
- 前記3次元細胞支持基質が、ポリ(L−乳酸)およびポリ(乳酸−co−グリコール酸)の50/50混合物を含む、請求項60に記載の方法。
- 細胞接着を促進する薬剤で前記細胞支持基質をコーティングする工程をさらに包含する、請求項60に記載の方法。
- 細胞接着を促進する薬剤が、細胞接着を促進するフィブロネクチン、インテグリン、およびオリゴヌクレオチドから選択される、請求項63に記載の方法。
- 請求項60に記載の方法であって、ゲル内に前記胚性幹細胞を配置する工程をさらに包含し、前記細胞支持基質上に該胚性幹細胞を播種する工程が、該ゲルを該細胞支持基質の内面および外面上に配置する工程を包含する、方法。
- 前記ゲルが、コラーゲンゲル、アルギン酸塩、寒天、および成長因子低減MATRIGELTMから選択される、請求項65に記載の方法。
- 前記ゲルが、1つ以上のラミニン、フィブリン、フィブロネクチン、プロテオグリカン、糖タンパク質、グリコサミノグリカン、走化性薬剤、および成長因子をさらに含む、請求項65に記載の方法。
- 前記成長因子が、アクチビン−A(ACT)、レチノイン酸(RA)、上皮細胞成長因子、骨形態形成タンパク質、TGF−β、肝細胞増殖因子、血小板由来成長因子、TGF−α、IGF−IおよびIGF−II、造血成長因子、ヘパリン結合性増殖因子、ペプチド成長因子、エリスロポエチン、インターロイキン、腫瘍壊死因子、インターフェロン、コロニー刺激因子、繊維芽細胞成長因子、神経成長因子(NGF)、および筋肉形態発生因子(MMF)から選択される、請求項60に記載の方法。
- 前記所定の期間が、2週間である、請求項60に記載の方法。
- 培養が、無血清培地中で行なわれる、請求項60に記載の方法。
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US43222802P | 2002-12-10 | 2002-12-10 | |
US44392603P | 2003-01-31 | 2003-01-31 | |
US10/731,672 US20050031598A1 (en) | 2002-12-10 | 2003-12-09 | Engineering three-dimensional tissue structures using differentiating embryonic stem cells |
PCT/US2003/039301 WO2004053096A2 (en) | 2002-12-10 | 2003-12-10 | Engineering three-dimensional tissue structures using differentiating embryonic stem cells |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2006518993A true JP2006518993A (ja) | 2006-08-24 |
JP2006518993A5 JP2006518993A5 (ja) | 2007-03-22 |
Family
ID=32512335
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2005511760A Pending JP2006518993A (ja) | 2002-12-10 | 2003-12-10 | 分化する胚性幹細胞を使用する三次元組織構造の設計 |
Country Status (11)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20050031598A1 (ja) |
JP (1) | JP2006518993A (ja) |
KR (1) | KR20050103270A (ja) |
AU (1) | AU2003297839A1 (ja) |
CA (1) | CA2508850A1 (ja) |
CZ (1) | CZ2005753A3 (ja) |
GB (1) | GB0519352D0 (ja) |
HU (1) | HUP0500979A3 (ja) |
IL (1) | IL169100A (ja) |
SK (1) | SK51102005A3 (ja) |
WO (1) | WO2004053096A2 (ja) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2017006029A (ja) * | 2015-06-18 | 2017-01-12 | 株式会社ジーシー | 細胞工学用支持体の製造方法 |
JP2017166898A (ja) * | 2016-03-15 | 2017-09-21 | 国立大学法人山梨大学 | 染色方法および観察方法 |
JP2018506988A (ja) * | 2015-03-03 | 2018-03-15 | プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバード カレッジ | 機能的ヒト組織の作製方法 |
Families Citing this family (35)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPWO2004084967A1 (ja) * | 2003-03-25 | 2006-06-29 | 真一郎 林 | 三次元マトリゲル層上における胚性幹細胞から血管特異的器官形成 |
TW200506345A (en) * | 2003-08-14 | 2005-02-16 | Au Optronics Corp | Water quality analysis method using potassium permanganate |
AU2005272681B2 (en) * | 2004-08-13 | 2009-11-19 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Compositions and methods for self-renewal and differentiation in human embryonic stem cells |
EP1784481A1 (en) * | 2004-08-25 | 2007-05-16 | Technion Research And Development Foundation, Ltd. | Methods of generating embryoid bodies using three dimensional scaffolds |
US20070020243A1 (en) * | 2005-01-12 | 2007-01-25 | Massachusetts Institute Of Technology | Methods and compositions related to modulating the extracellular stem cell environment |
WO2006104901A2 (en) * | 2005-03-28 | 2006-10-05 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Materials and methods for improved tissue engineering |
KR101529317B1 (ko) | 2005-06-22 | 2015-06-16 | 아스테리아스 바이오세라퓨틱스, 인크. | 영장류 다능성 줄기 세포의 심근세포 계통 세포로의 분화 |
US8979921B2 (en) * | 2006-02-07 | 2015-03-17 | Tepha, Inc. | Polymeric, degradable drug-eluting stents and coatings |
US9592325B2 (en) * | 2006-02-07 | 2017-03-14 | Tepha, Inc. | Polymeric, degradable drug-eluting stents and coatings |
DK2420565T3 (en) * | 2006-02-23 | 2017-12-04 | Viacyte Inc | APPLICABLE COMPOSITIONS AND METHODS FOR CULTIVATING DIFFERENTIBLE CELLS |
US20090061517A1 (en) * | 2007-05-31 | 2009-03-05 | Kisaalita William S | Cell culture apparatus and methods of making and using same |
WO2008152640A2 (en) * | 2007-06-13 | 2008-12-18 | Pluristem Ltd. | Three dimensional biocompatible scaffolds for ex-vivo expansion and transplantation of stem cells |
US8642333B2 (en) * | 2008-02-04 | 2014-02-04 | Massachusetts Institute Of Technology | Particulate delivery vehicles for embryoid bodies |
AU2009228215B2 (en) | 2008-03-27 | 2015-12-10 | Asterias Biotherapeutics, Inc. | Differentiation of primate pluripotent stem cells to hematopoietic lineage cells |
US8648170B2 (en) | 2008-09-19 | 2014-02-11 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Peptide-presenting surfaces for long-term culture of pluripotent cells |
US20100143313A1 (en) * | 2008-12-10 | 2010-06-10 | The General Hospital Corporation | Homogeneous differentiation of hepatocyte-like cells from embryonic stem cells |
US20120195862A1 (en) * | 2009-04-17 | 2012-08-02 | Children's Medical Center Corporation | Biomechanical induction of hematopoiesis |
US8895291B2 (en) | 2010-10-08 | 2014-11-25 | Terumo Bct, Inc. | Methods and systems of growing and harvesting cells in a hollow fiber bioreactor system with control conditions |
US8673323B2 (en) | 2011-01-07 | 2014-03-18 | Washington University | Polymer nanofiber scaffold for a heparin / fibrin based growth factor delivery system |
US11045500B2 (en) | 2011-02-14 | 2021-06-29 | Technion Research Development Foundation Ltd. | Tissue engineering construct comprising fibrin |
US20140329314A1 (en) | 2011-03-29 | 2014-11-06 | Christopher O'Sullivan | Enriched populations of cardiomyocyte lineage cells from pluripotent stem cells |
EP2743345A1 (en) | 2012-12-13 | 2014-06-18 | IMBA-Institut für Molekulare Biotechnologie GmbH | Three dimensional heterogeneously differentiated tissue culture |
CN105992816B (zh) | 2013-11-16 | 2018-04-17 | 泰尔茂比司特公司 | 生物反应器中的细胞扩增 |
EP3613841B1 (en) | 2014-03-25 | 2022-04-20 | Terumo BCT, Inc. | Passive replacement of media |
JP6830059B2 (ja) | 2014-09-26 | 2021-02-17 | テルモ ビーシーティー、インコーポレーテッド | スケジュール化された細胞フィーディング |
WO2017004592A1 (en) | 2015-07-02 | 2017-01-05 | Terumo Bct, Inc. | Cell growth with mechanical stimuli |
EP3436567A4 (en) | 2016-03-30 | 2019-10-30 | Asterias Biotherapeutics, Inc. | OLIGODENDROCYTE PROGENITOR CELL COMPOSITIONS |
WO2017205667A1 (en) | 2016-05-25 | 2017-11-30 | Terumo Bct, Inc. | Cell expansion |
US11685883B2 (en) | 2016-06-07 | 2023-06-27 | Terumo Bct, Inc. | Methods and systems for coating a cell growth surface |
US11104874B2 (en) | 2016-06-07 | 2021-08-31 | Terumo Bct, Inc. | Coating a bioreactor |
CN109913402B (zh) * | 2016-09-14 | 2023-02-21 | 四川蓝光英诺生物科技股份有限公司 | 人工组织前体及制备其的方法 |
US10767164B2 (en) | 2017-03-30 | 2020-09-08 | The Research Foundation For The State University Of New York | Microenvironments for self-assembly of islet organoids from stem cells differentiation |
US11624046B2 (en) | 2017-03-31 | 2023-04-11 | Terumo Bct, Inc. | Cell expansion |
CN117247899A (zh) | 2017-03-31 | 2023-12-19 | 泰尔茂比司特公司 | 细胞扩增 |
SG11202107732XA (en) | 2019-01-23 | 2021-08-30 | Asterias Biotherapeutics Inc | Dorsally-derived oligodendrocyte progenitor cells from human pluripotent stem cells |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2001012785A1 (en) * | 1999-08-13 | 2001-02-22 | University Of Rochester | Ex vivo generation of functional osteoclasts from bone marrow in a three-dimensional bioreactor |
JP2002502226A (ja) * | 1994-06-06 | 2002-01-22 | アドバンスト ティシュー サイエンシズ,インコーポレーテッド | 三次元軟骨培養物 |
US20020110544A1 (en) * | 1998-05-13 | 2002-08-15 | Victor M. Goldberg | Osteoarthritis cartilage regeneration |
US20020146678A1 (en) * | 2000-08-01 | 2002-10-10 | Nissim Benvenisty | Directed differentiation of embryonic cells |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU2002239810A1 (en) * | 2001-01-02 | 2002-07-16 | The Charles Stark Draper Laboratory, Inc. | Tissue engineering of three-dimensional vascularized using microfabricated polymer assembly technology |
CN1543500B (zh) * | 2001-07-12 | 2014-04-09 | 杰龙公司 | 从人多能干细胞产生心肌细胞系细胞 |
NZ536564A (en) * | 2002-05-02 | 2008-05-30 | Purdue Research Foundation | Vascularization enhanced graft constructs which comprise a matrix composition consisting of liver basement membrane |
-
2003
- 2003-12-09 US US10/731,672 patent/US20050031598A1/en not_active Abandoned
- 2003-12-10 CA CA002508850A patent/CA2508850A1/en not_active Abandoned
- 2003-12-10 JP JP2005511760A patent/JP2006518993A/ja active Pending
- 2003-12-10 CZ CZ20050753A patent/CZ2005753A3/cs unknown
- 2003-12-10 WO PCT/US2003/039301 patent/WO2004053096A2/en active Application Filing
- 2003-12-10 AU AU2003297839A patent/AU2003297839A1/en not_active Abandoned
- 2003-12-10 SK SK5110-2005A patent/SK51102005A3/sk not_active Application Discontinuation
- 2003-12-10 KR KR1020057010407A patent/KR20050103270A/ko not_active Application Discontinuation
- 2003-12-10 HU HU0500979A patent/HUP0500979A3/hu unknown
-
2005
- 2005-06-09 IL IL169100A patent/IL169100A/en active IP Right Grant
- 2005-09-22 GB GBGB0519352.9A patent/GB0519352D0/en not_active Ceased
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002502226A (ja) * | 1994-06-06 | 2002-01-22 | アドバンスト ティシュー サイエンシズ,インコーポレーテッド | 三次元軟骨培養物 |
US20020110544A1 (en) * | 1998-05-13 | 2002-08-15 | Victor M. Goldberg | Osteoarthritis cartilage regeneration |
WO2001012785A1 (en) * | 1999-08-13 | 2001-02-22 | University Of Rochester | Ex vivo generation of functional osteoclasts from bone marrow in a three-dimensional bioreactor |
US20020146678A1 (en) * | 2000-08-01 | 2002-10-10 | Nissim Benvenisty | Directed differentiation of embryonic cells |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2018506988A (ja) * | 2015-03-03 | 2018-03-15 | プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバード カレッジ | 機能的ヒト組織の作製方法 |
JP2017006029A (ja) * | 2015-06-18 | 2017-01-12 | 株式会社ジーシー | 細胞工学用支持体の製造方法 |
JP2017166898A (ja) * | 2016-03-15 | 2017-09-21 | 国立大学法人山梨大学 | 染色方法および観察方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2004053096A2 (en) | 2004-06-24 |
HUP0500979A2 (en) | 2007-07-30 |
US20050031598A1 (en) | 2005-02-10 |
IL169100A (en) | 2011-11-30 |
WO2004053096A3 (en) | 2004-09-10 |
CA2508850A1 (en) | 2004-06-24 |
CZ2005753A3 (cs) | 2006-05-17 |
SK51102005A3 (sk) | 2006-06-01 |
HUP0500979A3 (en) | 2010-01-28 |
KR20050103270A (ko) | 2005-10-28 |
AU2003297839A1 (en) | 2004-06-30 |
GB0519352D0 (en) | 2005-11-02 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2006518993A (ja) | 分化する胚性幹細胞を使用する三次元組織構造の設計 | |
JP2006518993A5 (ja) | ||
JP6882391B2 (ja) | 肺臓の組織工学 | |
Meinel et al. | Engineering cartilage‐like tissue using human mesenchymal stem cells and silk protein scaffolds | |
EP1456357B1 (en) | Pluripotent embryonic-like stem cells derived from teeth and uses thereof | |
US20060198827A1 (en) | Engineering vascularized muscle tissue | |
AU2002227425B2 (en) | Tissue-engineered vascular structures | |
US20080026461A1 (en) | Tissue-like organization of cells and macroscopic tissue-like constructs, generated by macromass culture of cells and the method of macromass culture | |
JP6491187B2 (ja) | 脱細胞化された臓器及び組織を伴うマイクロ粒子及び内皮細胞の使用 | |
TW200813225A (en) | Biocompatible scaffolds and adipose-derived stem cells | |
JP2008504933A (ja) | 幹細胞による柔組織移植片の形態と大きさの維持 | |
JP2005521402A (ja) | ヒト胚性幹細胞に由来する内皮細胞 | |
EP2268326A2 (en) | Tissue engineered blood vessel | |
US20230098674A1 (en) | Engineered tissue constructs | |
WO2007140340A2 (en) | Formation of vascular networks using embryonic stem cells | |
Hsieh et al. | High‐efficiency cell seeding method by relatively hydrophobic culture strategy | |
US11471565B2 (en) | Engineered tissue constructs | |
CA2566374A1 (en) | Tissue-like organization of cells and macroscopic tissue-like constructs, generated by macromass culture of cells, and the method of macromass culture | |
CN1744823A (zh) | 使用分化胚胎干细胞构建三维组织结构 | |
Arnal‐Pastor et al. | Influence of scaffold morphology on co‐cultures of human endothelial and adipose tissue‐derived stem cells | |
Kenar | 3D patterned cardiac tissue construct formation using biodegradable materials | |
Shkumatov | Extracellular matrix stiffness and geometry: the impact on static and dynamic cellular systems in vitro and the treatment of tissue ischemia | |
Datta et al. | Role of tissue engineering in organ regeneration |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20061211 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20061211 |
|
A524 | Written submission of copy of amendment under article 19 pct |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A524 Effective date: 20070202 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20091228 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20100531 |