JP2006511463A - ナイセリアNspAタンパク質をリフォールディングする方法 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、NspAタンパク質、すなわちナイセリア・メニンジティディス(Neisseria meningitidis)菌の外膜タンパク質を、リフォールディングする方法、そのようにリフォールディングされたタンパク質、それらを含んでなる医薬組成物、ならびにナイセリア菌感染、とりわけ、限定されるものではないが、ナイセリア・メニンジティディス(Neisseria meningitidis)および/またはナイセリア・ゴノレア(Neisseria gonorrhoeae)などの細菌感染の治療、予防および診断におけるそれらの使用に関する。
ナイセリア細菌株は多くのヒト病理の病原因子であり、それらに対して有効なワクチンを開発する必要性がある。特に、Neisseria gonorrhoeaeおよびNeisseria meningitidisが病変を引き起こすが、これらの病変はワクチン接種により治療することができる。
本発明は、NspAタンパク質をリフォールディングするための改善された方法を提供する。今や、本発明者らによって、部分精製された封入体からの活性タンパク質の回収を、さらなる精製を行う必要なく最大100%までの量に増加させることが可能であることが示された。
本発明の1つの態様によれば、リフォールディングされた単離NspAタンパク質(本明細書においては「NspA」とも呼ぶ)が提供される。
宿主細胞内でNspAを発現させる工程、
その宿主細胞を破壊してNspAを含む封入体を得る工程、
その封入体を洗浄する工程、
NspAおよび/またはその封入体を可溶化する工程、
その可溶化されたNspAをリフォールディングバッファーと接触させる工程、および
NspAからリフォールディングバッファーを除去する工程、
のうちの任意の1以上(好ましくは、全て)の工程を含む方法が提供される。
FhaB、Hsf、NadA、PilC、Hap、MafA、MafB、Omp26、NMB0315、NMB0995およびNMB1119からなる群から選択される少なくとも1種のナイセリア菌付着因子、
Hsf、Hap、IgAプロテアーゼ、AspAおよびNadAからなる群から選択される少なくとも1種のナイセリア菌自己輸送体、
FrpA、FrpC、FrpA/C、VapD、NM-ADPRT、ならびにLPS免疫型 L2およびLPS免疫型 L3のいずれか一方またはその両方からなる群から選択される少なくとも1種のナイセリア菌毒素、
TbpA 高、TbpA 低、TbpB 高、TbpB 低、LbpA、LbpB、P2086、HpuA、HpuB、Lipo28、Sibp、FbpA、BfrA、BfrB、Bcp、NMB0964およびNMB0293からなる群から選択される少なくとも1種のナイセリア菌鉄獲得タンパク質、ならびに
PldA、TspA、FhaC、NspA、TbpA(高)、TbpA(低)、LbpA、HpuB、TdfH、PorB、HimD、HisD、GNA1870、OstA、HlpA、MltA、NMB 1124、NMB 1162、NMB 1220、NMB 1313、NMB 1953、HtrA、TspB、PilQおよびOMP85からなる群から選択される少なくとも1種のナイセリア菌膜結合タンパク質、好ましくは、外膜タンパク質。
FhaB、HsfおよびNadAからなる群から選択される少なくとも1種のナイセリア菌付着因子、
HsfおよびHapからなる群から選択される少なくとも1種のナイセリア菌自己輸送体、
FrpA、FrpC、ならびにLPS免疫型 L2およびLPS免疫型 L3のいずれか一方またはその両方からなる群から選択される少なくとも1種のナイセリア菌毒素、
TbpA、TbpB、LbpAおよびLbpBからなる群から選択される少なくとも1種のナイセリア菌鉄獲得タンパク質、ならびに
PldA、TspA、TspB、PilQおよびOMP85からなる群から選択される少なくとも1種のナイセリア菌外膜タンパク質(またはその断片)。
以下、添付の図面を参照し、限定されない実施例によって本発明の種々の好ましい特徴および実施形態を説明する。
本発明は、NspAタンパク質の正確なフォールディング/リフォールディングを促進する方法であって、アルカリ性リフォールディングバッファーにおける界面活性剤SB-12の使用を伴う方法を提供する。
本発明では、少なくともNspAタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクター、本発明のベクターを用いて遺伝子操作される宿主細胞、および組換え技術によるNspAタンパク質の生産を使用してもよい。DNA構築物から誘導されるRNAを用いて無細胞翻訳系を使用してもこのようなタンパク質を生産することができる。
本発明は、リフォールディングされた単離NspAタンパク質を提供する。本明細書において「タンパク質」とは、「ポリペプチド」を包含する。「単離」とは、NspAタンパク質が、それが通常関連している他のタンパク質を含んでいないことを意味する。NspAタンパク質は組換えタンパク質であってもよい。「組換え」とは、タンパク質が分子生物学の適用により得られたものであることを意味する。しかしながら、その方法は、リフォールディング、または脱フォールディングとリフォールディングによる精製を必要とする天然または合成タンパク質にも適用できる。好ましくは、本発明のリフォールディングされた単離NspAは、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、または99%を超える純度であるように精製されている。最も好ましくは、本発明のNspAが、他のナイセリア菌タンパク質および/またはそれが作製された宿主細胞の他のタンパク質を40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、または99%を超えて含まないという点において生物学的に純粋である。
野生型NspAを認識する抗体の産生を誘導する能力(本発明のNspAタンパク質が担体に結合される場合、必要に応じて);
実験感染から防御することができる抗体の産生を誘導する能力;および
動物に投与した場合にNeisseria meningitidis感染および/またはNeisseria gonorrhoeae感染などのナイセリア菌感染から防御することができる免疫学的応答の生起を誘導する能力。
本発明のタンパク質を用いて抗NspA抗体を作製すること、
患者から生体サンプルを単離すること、
抗NspA抗体またはそのフラグメントをその生体サンプルとともにインキュベートすること、および
結合した抗体または結合したフラグメントを検出すること、
を含む方法を提供する。
患者から生体サンプルを単離すること、
本発明のNspAタンパク質をその生体サンプルとともにインキュベートすること、および
結合した抗原を検出すること、
を含む方法も提供する。
本発明のタンパク質を免疫原として用い、このようなタンパク質に対して免疫特異的な抗体を産生させることができる。
本発明のリフォールディングされたタンパク質はまた、例えば、無細胞調製物、化学ライブラリー、および天然物混合物中の小分子基質およびリガンドの結合の評価にも使用し得る。これらの基質およびリガンドは天然の基質およびリガンドであってもよいし、または構造類似物または機能類似物であってもよい。例えば、Coliganら, Current Protocols in Immunology 1(2): 5章 (1991)を参照。
本発明のもう1つの態様は、ある個体、特に、哺乳類、好ましくは、ヒトにおいて免疫学的応答を誘導する方法であって、その個体に、抗体を産生し、および/またはT細胞免疫応答を起こして、該個体を感染、特に、細菌感染、最も特に、Neisseria meningitidis感染から防御する(または感染を治療する)のに十分な、本発明のNspAタンパク質、またはその断片もしくは変異体を接種することを含む方法に関する。また、このような免疫学的応答によって細菌複製を遅らせる方法もまた提供される。
本発明の組成物は、サブユニット組成物の形態であることが好ましい。サブユニット組成物は、抗原性組成物を構成する成分を混合する前の、その成分が単離され、少なくとも50%、好ましくは、少なくとも60%、70%、80%、90%純度に精製されている組成物である。
・FhaB、PilC、Hsf、Hap、MafA、MafB、Omp26、NMB 0315、NMB 0995、NMB 1119およびNadAからなる群から選択される少なくとも1種のナイセリア菌付着因子;
・Hsf、Hap、IgAプロテアーゼ、AspA、およびNadAからなる群から選択される少なくとも1種のナイセリア菌自己輸送体;
・FrpA、FrpC、FrpA/C、VapD、NM-ADPRT、ならびにLPS免疫型 L2およびLPS免疫型 L3のいずれか一方またはその両方からなる群から選択される少なくとも1種のナイセリア菌毒素;
・TbpA、TbpB、LbpA、LbpB、HpuA、HpuB、Lipo28(GNA2132)、Sibp、NMB0964、NMB0293、FbpA、Bcp、BfrA、BfrBおよびP2086(XthA)からなる群から選択される少なくとも1種のナイセリア菌鉄(Fe)獲得タンパク質;および
・PilQ、OMP85、FhaC、TbpA、LbpA、TspA、TspB、TdfH、PorB、MltA、HpuB、HimD、HisD、GNA1870、OstA、HlpA(GNA1946)、NMB 1124、NMB 1162、NMB 1220、NMB 1313、NMB 1953、HtrA、およびPldA(Omp1A)からなる群から選択される少なくとも1種のナイセリア菌膜結合タンパク質、好ましくは、外膜タンパク質、とりわけ、内在性外膜タンパク質。
FhaB、HsfおよびNadAからなる群から選択される少なくとも1種のナイセリア菌付着因子;
Hsf、HapおよびNadAからなる群から選択される少なくとも1種のナイセリア菌自己輸送体;
FrpA、FrpC、ならびにLPS免疫型 L2およびLPS免疫型 L3のいずれか一方またはその両方からなる群から選択される少なくとも1種のナイセリア菌毒素;
TbpA、TbpB、LbpAおよびLbpBからなる群から選択される少なくとも1種のナイセリア菌鉄(Fe)獲得タンパク質;および
TspA、TspB、PilQ、OMP85、およびPldAからなる群から選択される少なくとも1種のナイセリア菌外膜タンパク質。
NMBの番号は、www.neisseria.orgからアクセス可能な配列の参照番号を示している。
付着因子としては、FhaB(WO98/02547)、NadA(J. Exp.Med (2002) 195: 1445; NMB 1994)、NhhAとしても知られているHsf(NMB 0992)(WO99/31132)、Hap(NMB 1985)(WO99/55873)、NspA(WO96/29412)、MafA(NMB 0652)およびMafB(NMB 0643)(Annu Rev Cell Dev Biol. 16; 423-457 (2000); Nature Biotech 20; 914-921 (2002))、Omp26(NMB 0181)、NMB 0315、NMB 0995、NMB 1119およびPilC(Mol. Microbiol.1997、23; 879-892)が挙げられる。これらは宿主細胞表面へのナイセリア菌の結合に関与するタンパク質である。Hsfは付着因子の一例であると同時に、自己輸送体タンパク質でもある。そのため、本発明の免疫原性組成物は、Hsfが付着因子としてのその能力で寄与する場合にはHsfと他の自己輸送体タンパク質との組合せを含んでよい。これらの付着因子はNeisseria meningitidisもしくはNeisseria gonorrhoeaeまたは他のナイセリア菌株由来のものであってよい。本発明はまた、ナイセリア菌由来の他の付着因子も含む。
この抗原はWO98/02547の配列番号38(ヌクレオチド 3083〜9025)に記載されている−NMB0497も参照。本発明者らは、FhaBが、抗接着性抗体単独の誘導、特に、本発明の他の抗原を併用した誘導において特に有効であることを見出した。全長FhaBを用いてもよいが、本発明者らは、驚くべきことに、特定のC末端末端切断型が少なくとも有効であり、好ましくは、株横断的効果という観点から見るとさらに効果的であることを見出した。また、有利なことに、このような末端切断型はクローニングがかなり容易であることも証明されている。本発明のFhaB末端切断型は、通常、FhaB分子のN末端側3分の2に相当し、好ましくは、1200〜1600位に、より好ましくは、1300〜1500位に、最も好ましくは、1430〜1440位に位置している新たなC末端に相当する。特定の実施形態は、1433または1436位置のC末端を有している。従って、本発明のこのようなFhaB末端切断型およびこのような末端切断型を含んでなるワクチンが、本発明の組合せ免疫原性組成物の好ましい成分である。また、N末端を、最大10個、20個、30個、40個または50個のアミノ酸だけ末端切断したものでもよい。
自己輸送体タンパク質は、通常、シグナル配列、パッセンジャードメインおよび外膜と結合するためのアンカードメインで構成されている。自己輸送体タンパク質の例としては、Hsf(WO99/31132)(NMB 0992)、HMW、Hia(van Ulsenら Immunol. Med. Microbiol. 2001 32; 53-64)、Hap(NMB 1985)(WO99/55873; van Ulsenら Immunol. Med. Microbiol. 2001 32; 53-64)、UspA、UspA2、NadA(NMB 1994)(Comanducciら J. Exp. Med. 2002 195; 1445-1454)、AspA(Infection and Immunity 2002, 70(8); 4447-4461; NMB 1029)、Aida-1様タンパク質、SSh-2およびTshが挙げられる。NadA(J. Exp.Med (2002) 195:1445)は自己輸送体タンパク質の別の例であり、また、これは付着因子でもある。そのため、本発明の免疫原性組成物は、NadAが自己輸送体タンパク質としてのその能力で寄与する場合にはNadAと付着因子との組合せを含んでよい。これらのタンパク質はNeisseria meningitidisまたはNeisseria gonorrhoeaeもしくは他のナイセリア株由来のものであってよい。本発明はまた、ナイセリア菌由来の他の自己輸送体タンパク質も含む。
Hsfは、自己輸送体タンパク質に共通した構造を有している。例えば、N. meningitidis株H44/76由来のHsfは、アミノ酸1〜51で構成されているシグナル配列、表面に露出されており、可変領域(アミノ酸52〜106、121〜124、191〜210および230〜234)を含む成熟タンパク質(アミノ酸52〜479)のアミノ末端にあるヘッド領域、ネック領域(アミノ酸480〜509)、疎水性α-ヘリックス領域(アミノ酸518〜529)および4回膜貫通鎖が外膜を横切るアンカードメイン(アミノ酸539〜591)で構成される。
Neisseria meningitidis由来のHap様タンパク質のコンピューター解析では、少なくとも3つの構造ドメインが示される。株H44/76由来のHap様配列を対照として検討すると、アミノ酸1〜42を含んでなるドメイン1が、自己輸送体ファミリーの特徴であるsec依存性シグナルペプチドをコードし、アミノ酸43〜950を含んでなるドメイン2が、表面に露出され、免疫系に接近可能と思われるパッセンジャードメインをコードし、残基951〜C末端(1457)を含んでなるドメイン3が、バレル様構造に組み立てられる可能性が高いβ鎖をコードし、外膜に固定されると予想される。ドメイン2は、表面に露出され、十分に保存されている(調べた全ての株において80%を上回る)可能性が高く、大腸菌においてはサブユニット抗原として産生され得ることから、このドメインは興味深いワクチン候補となる。ドメイン2および3は、表面に露出され、十分に保存される可能性が高い(Pizzaら (2000), Science 287: 1816-1820)ことから、これらのドメインは興味深いワクチン候補となる。ドメイン2はパッセンジャードメインとしても知られている。
鉄獲得タンパク質としては、TbpA(NMB 0461)(WO92/03467、US5912336、WO93/06861およびEP586266)、TbpB(NMB 0460)(WO93/06861およびEP586266)、LbpA(NMB 1540)(Med Microbiol (1999) 32: 1117)、LbpB(NMB 1541)(WO/99/09176)、HpuA(U73112.2)(Mol Microbiol. 1997, 23; 737-749)、HpuB(NC_003116.1)(Mol Microbiol. 1997, 23; 737-749)、XthAとしても知られるP2086(NMB 0399)(13th International Pathogenic Neisseria Conference 2002)、FbpA(NMB 0634)、FbpB、BfrA(NMB 1207)、BfrB(NMB 1206)、GNA2132としても知られるLipo28(NMB 2132)、Sibp(NMB 1882)、HmbR、HemH、Bcp(NMB 0750)、鉄(III)ABC輸送体−パーミアーゼタンパク質(Tettelinら Science 287; 1809-1815 2000)、鉄(III)ABC輸送体−細胞周辺質(Tettelinら Science 287; 1809-1815 2000)、TonB依存性受容体(NMB 0964およびNMB 0293)(Tettelinら Science 287; 1809-1815 2000)およびトランスフェリン結合タンパク質関連タンパク質(Tettelinら Science 287; 1809-1815 2000)が挙げられる。これらのタンパク質はNeisseria meningitidis、Neisseria gonorrhoeaeまたは他のナイセリア菌株由来のものであってよい。本発明はまた、ナイセリア菌由来の他の鉄獲得タンパク質も含む。
TbpAはTbpBと相互作用してナイセリア菌の外膜上にタンパク質複合体を形成し、その複合体がトランスフェリンと結合する。構造上、TbpAは、TonBボックスおよびプラグドメイン、短い細胞内ループとより長い細胞外ループとにより連結された多数回膜貫通型β鎖とともに細胞内N末端ドメインを含む。
毒素としては、FrpA(NMB 0585; NMB 1405)、FrpA/C(定義については以下を参照)、FrpC(NMB 1415; NMB 1405)(WO92/01460)、NM-ADPRT(NMB 1343)(13th International Pathogenic Neisseria Conference 2002 Masignaniら 135頁)、VapD(NMB 1753)、リポ多糖(LPS; リポオリゴ糖またはLOSとも呼ばれる)免疫型 L2およびLPS免疫型 L3が挙げられる。FrpAおよびFrpCはこれら2つのタンパク質間で保存されている領域を含んでおり、これらのタンパク質の好ましい断片は、この保存される断片を含む、好ましくは、FrpA/Cの配列のアミノ酸227〜1004を含んでなるポリペプチドである。これらの抗原は、Neisseria meningitidisもしくはNeisseria gonorrhoeaeまたは他のナイセリア菌株由来のものであってよい。本発明はまた、ナイセリア菌由来の他の毒素も含む。
Neisseria meningitidisは、鉄制限時に分泌されるFrpAおよびFrpCと呼ばれる2つのRTXタンパク質をコードする(Thompsonら, (1993) J. Bacteriol. 175: 811-818; Thompsonら, (1993) Infect. Immun.. 61: 2906-2911)。RTX(Repeat ToXin)タンパク質ファミリーは、共通して、それらのC末端付近に、コンセンサス: Leu Xaa Gly Gly Xaa Gly (Asn/Asp) Asp Xaa (LXGGXGN/DDX)を有する一連の9アミノ酸繰り返し配列を有する。大腸菌HlyAの繰り返し配列は、Ca2+が結合する部位であると考えられる。図4に示すように、株FAM20で同定された髄膜炎菌FrpAおよびFrpCタンパク質は、それらの中央部およびC末端領域において広範囲に及ぶアミノ酸類似性を共有するが、N末端においてはその類似度(あるとしても)はごく限定されている。さらに、FrpAとFrpCとの間で保存された領域は、9アミノ酸モチーフの繰り返しによる(FrpAでは13回およびFrpCでは43回)多型を示す。
LPS(リポ多糖、LOS−リポオリゴ糖としても知られる)はナイセリア菌の外膜上の内毒素である。LPSの多糖部分が殺菌抗体を誘導することが知られている。
他のカテゴリーのナイセリア菌タンパク質もまた、本発明のナイセリア菌ワクチンに含有させるための候補物質であり、驚くほど有効に他の抗原と組み合わせることができる。本発明の組成物に、膜結合タンパク質、特に、内在性膜タンパク質、最も有利には、外膜タンパク質、特に、内在性外膜タンパク質を用いることができる。このようなタンパク質の一例がOmp1Aとしても知られる、ナイセリア菌ホスホリパーゼ外膜タンパク質であるPldA(NMB 0464)(WO00/15801)である。さらなる例としては、TspA(NMB 0341)(Infect. Immun. 1999, 67; 3533-3541)およびTspB(T細胞刺激性タンパク質)(WO 00/03003; NMB 1548、NMB 1628またはNMB 1747)がある。さらなる例としては、PilQ(NMB 1812)(WO99/61620)、D15としても知られるOMP85(NMB 0182)(WO00/23593)、NspA(U52066)(WO96/29412)、FhaC(NMB 0496またはNMB 1780)、PorB(NMB 2039)(Mol. Biol. Evol. 12; 363-370, 1995)、HpuB(NC_003116.1)、TdfH(NMB 1497)(Microbiology 2001, 147; 1277-1290)、OstA(NMB 0280)、GNA33およびLipo30としても知られるMltA(NMB0033)、HtrA(NMB 0532; WO 99/55872)、HimD(NMB 1302)、HisD(NMB 1581)、GNA 1870(NMB 1870)、HlpA(NMB 1946)、NMB 1124、NMB 1162、NMB 1220、NMB 1313、NMB 1953、HtrA、TbpA(NMB 0461)(WO92/03467)(鉄獲得タンパク質についての上記も参照)およびLbpA (NMB 1541)が挙げられる。
OMP85/D15は、シグナル配列、N末端表面露出ドメインおよび外膜に付着するための内在性膜ドメインを有する外膜タンパク質である。また、本発明の免疫原性組成物は全長OMP85を、好ましくは、OMV調製物の一部として含んでもよい。また、OMP85の断片を本発明の免疫原性組成物において用いてもよく、特に、アミノ酸残基1〜475または50〜475で構成されているOMP85のN末端表面露出ドメインを本発明の免疫原性組成物のサブユニット成分に組み入れることが好ましい。OMP85のN末端表面露出ドメインの上記配列を、NまたはC末端のいずれか一方またはその両方において、最大1個、3個、5個、7個、10個、15個、20個、25個または30個のアミノ酸だけ、延長または末端切断してもよい。シグナル配列はOMP85断片から除かれることが好ましい。
OstAはリポ多糖の合成において機能し、毒性のレギュレーターであると考えられている。あるいは、OstAを、毒素カテゴリーを毒素だけでなく毒性のレギュレーターまで含むように拡張した毒素カテゴリーに含めてもよい。
本発明の免疫原性組成物は、細菌莢膜多糖またはオリゴ糖をさらに含んでもよい。莢膜多糖またはオリゴ糖は、Neisseria meningitidis血清型A、C、Y、および/またはW-135、インフルエンザ菌b型、肺炎連鎖球菌、A群連鎖球菌、B群連鎖球菌、黄色ブドウ球菌および表皮ブドウ球菌のうち1種以上に由来するものであってよい。
先に述べたように、本発明は、細胞または多細胞生物への投与のためのNspAタンパク質を含んでなる組成物を提供する。
Quiagenゲノム調製キットを用いて、Neisseria meningitidis株H44/76のゲノムDNAを調製した。H44/76 ゲノムDNAから、プライマー対5’gctacatatggaaggcgcatccggcttttacgおよび5’gctaggatcctcagaatttgacgcgcacaccggを用いて、成熟NspAタンパク質(すなわち、19アミノ酸のシグナルペプチドを含まない)をコードするNspA遺伝子の一部をPCR増幅した。
リフォールディングされたNspAが、ナイセリア菌膜から単離される天然のNspAと同じようにゲル上で移動したという上記の確証に加え、正確なリフォールディングの2つのさらなる指標が示された。
PorAの発現と莢膜多糖の合成がスイッチオフされたN. meningitidis株H66/76(WO 01/09350を参照)を、WO 01/09350に記載の手順を利用したTbpAおよびHsfの発現またはNspAの発現のアップレギュレーションに対するバックグラウンド株として用いた。その株から外膜小胞を調製した。TbpAは遺伝子的にアップレギュレートしてもよいし、または低鉄条件で産生株を増殖させることによりアップレギュレートしてもよい。
以下の表に結果を示している。同種H44/76株を用いたアッセイでは、NspAに対する抗体を添加してもTbpAおよびHsfに対する抗体を単独で用いてもたらされる血清殺菌力価より高い力価は得られなかった。
Claims (36)
- リフォールディングされた単離NspAタンパク質。
- NspAタンパク質をリフォールディングする方法であって、NspAタンパク質を、3-ジメチルドデシルアンモニオプロパンスルホン酸(SB-12)を含んでなるアルカリ性リフォールディングバッファーと接触させることを含む、方法。
- リフォールディングバッファーがエタノールアミンおよびSB-12を含んでなる、請求項2に記載の方法。
- エタノールアミンが約20mMのエタノールアミンである、請求項3に記載の方法。
- リフォールディングバッファーがpH 11である、請求項2〜4のいずれか一項に記載の方法。
- SB-12が0.2% SB-12である、請求項2〜5のいずれか一項に記載の方法。
- SB-12が0.5% SB-12である、請求項2〜5のいずれか一項に記載の方法。
- SB-12が精製されている、請求項2〜7のいずれか一項に記載の方法。
- SB-12が、それをAl2O3カラムに通すことにより精製されている、請求項8に記載の方法。
- 以下の工程:
a. 所望により、宿主細胞内でNspAタンパク質を発現させる工程、
b. 所望により、その宿主細胞を破壊してNspAタンパク質を含む封入体を得る工程、
c. 所望により、該封入体を洗浄する工程、
d. 所望により、該封入体の少なくとも一部およびNspAタンパク質を可溶化する工程、
e. 可溶化されたNspAタンパク質をリフォールディングバッファーと接触させる工程、および
f. 所望により、NspAタンパク質からリフォールディングバッファーを除去する工程、
を含む方法。 - 請求項2〜10のいずれか一項に記載の方法に使用するための、エタノールアミンおよびSB-12を含んでなる、リフォールディングバッファー。
- 請求項2〜10のいずれか一項に記載の方法により得られたか、または得ることが可能な、リフォールディングされた単離NspAタンパク質。
- 請求項1または12に記載の少なくとも1つのリフォールディングされた単離NspAタンパク質および製薬上許容される担体を含んでなる、医薬組成物。
- 前記組成物中に存在するNspAタンパク質の少なくとも30%、50%、70%または90%がリフォールディングされている、請求項13に記載の医薬組成物。
- ワクチン形態である、請求項13または14に記載の医薬組成物。
- ナイセリア・メニンジティディス(Neisseria meningitidis)由来のリフォールディングされた単離NspAタンパク質を含んでなる、請求項13〜15のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- ナイセリア・ゴノレア(Neisseria gonorrhoeae)由来のリフォールディングされた単離NspAタンパク質を含んでなる、請求項13〜16のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 少なくとも1種の他のナイセリア菌抗原を含んでなる、請求項13〜16のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- ナイセリア・ゴノレア(Neisseria gonorrhoeae)由来の少なくとも1種の他のナイセリア菌抗原を含んでなる、請求項18に記載の医薬組成物。
- ナイセリア・メニンジティディス(Neisseria meningitidis)由来の少なくとも1種の他のナイセリア菌抗原を含んでなる、請求項18または19に記載の医薬組成物。
- 以下の分類:
a. FhaB、Hsf、NadA、PilC、Hap、MafA、MafB、Omp26、NMB0315、NMB0995およびNMB1119からなる群から選択される少なくとも1種のナイセリア菌付着因子(Adhesin)、
b. Hsf、Hap、IgAプロテアーゼ、AspAおよびNadAからなる群から選択される少なくとも1種のナイセリア菌自己輸送体、
c. FrpA、FrpC、FrpA/C、VapD、NM-ADPRT、ならびにLPS免疫型 L2およびLPS免疫型 L3のいずれか一方またはその両方からなる群から選択される少なくとも1種のナイセリア菌毒素、
d. TbpA 高、TbpA 低、TbpB 高、TbpB 低、LbpA、LbpB、P2086、HpuA、HpuB、Lipo28、Sibp、FbpA、BfrA、BfrB、Bcp、NMB0964およびNMB0293からなる群から選択される少なくとも1種のナイセリア菌鉄獲得タンパク質、ならびに
e. PldA、TspA、FhaC、NspA、TbpA(高)、TbpA(低)、LbpA、HpuB、TdfH、PorB、HimD、HisD、GNA1870、OstA、HlpA、MltA、NMB 1124、NMB 1162、NMB 1220、NMB 1313、NMB 1953、HtrA、TspB、PilQおよびOMP85からなる群から選択される少なくとも1種のナイセリア菌膜結合タンパク質、好ましくは、外膜タンパク質、
のうちの1以上から選択される少なくとも1種の他のナイセリア菌抗原をさらに含んでなる、請求項18〜20のいずれか一項に記載の医薬組成物。 - 1種以上の細菌莢膜多糖またはオリゴ糖をさらに含んでなる、請求項13〜21のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 1種以上の莢膜多糖またはオリゴ糖が、ナイセリア・メニンジティディス(Neisseria meningitidis)血清型A、C、Y、および/またはW-135、インフルエンザ菌b型、肺炎連鎖球菌、A群連鎖球菌、B群連鎖球菌、黄色ブドウ球菌ならびに表皮ブドウ球菌からなる群から選択される細菌由来であり、かつ、好ましくは、T-ヘルパーエピトープの供給源とコンジュゲートされている、請求項22に記載の医薬組成物。
- 動物での免疫応答の惹起に使用するための医薬の製造における、請求項1および12のいずれか一項に記載のNspAタンパク質(または請求項13〜23のいずれか一項に記載の医薬組成物)の使用。
- ナイセリア菌感染の予防治療のための医薬の製造における、請求項1および12のいずれか一項に記載のNspAタンパク質(または請求項13〜23のいずれか一項に記載の医薬組成物)の使用。
- それを必要とする患者に、請求項1および12のいずれか一項に記載のNspAタンパク質(または請求項13〜23のいずれか一項に記載の医薬組成物)を投与することにより、ナイセリア菌感染を予防または治療する方法。
- ナイセリア・メニンジティディス(Neisseria meningitidis)感染が予防または治療される、請求項25または26に記載の使用または方法。
- ナイセリア・ゴノレア(Neisseria gonorrhoeae)感染が予防または治療される、請求項25〜27のいずれか一項に記載の使用または方法。
- 請求項1および12のいずれか一項に記載のNspAタンパク質に対して免疫特異的である抗体。
- 請求項29に記載の少なくとも1種の抗体および好適な医薬担体を含んでなる、ナイセリア菌疾患を有するヒトを治療するのに有用な医薬組成物。
- ナイセリア菌疾患の治療または予防のための医薬の製造における、請求項29に記載の抗体の使用。
- ナイセリア・メニンジティディス(Neisseria meningitidis)感染が予防または治療される、請求項31に記載の使用。
- ナイセリア・ゴノレア(Neisseria gonorrhoeae)感染が予防または治療される、請求項31または32に記載の使用。
- ナイセリア菌感染を診断する方法であって、そのような感染の疑いがある動物由来の生体サンプル中のNspAタンパク質またはそれに対する抗体を、請求項1および12のいずれか一項に記載のNspAタンパク質、または請求項29に記載の抗体を利用して同定する工程を含む、方法。
- ナイセリア・メニンジティディス(Neisseria meningitidis)感染が診断される、請求項34に記載の方法。
- ナイセリア・ゴノレア(Neisseria gonorrhoeae)感染が診断される、請求項34または35に記載の方法。
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WO2000071725A2 (en) * | 1999-05-19 | 2000-11-30 | Chiron S.P.A. | Combination neisserial compositions |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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